JPS62195558A - 血球の標識化方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 欧州特許願１２３５０４はテクノチウム−９９愼トエチ
レンまたはプロピレンのアミンオキシムとの親油性の巨
大環状錯体を記載している。それらの正味電荷がゼロで
あるために、これらの錯体は血液−脳障壁をこえること
ができ、脳の生体内研究にとって興味がもたれる。

欧州特許願１９４８４３には改善された脳内保持（ｂデ
α＝ｓ　ｒａｔ−％Ｈａｓ　）を示すことが発見された
本分野に３ける一連の化合物が記述されている。

この系統の化合物は、一般構造式１をもち各々の星印炭
素原子が１個の水素原子を保持するプロピレンアミンオ
キシムのテクネチワムー９９１１Ｌｓ体から成る。各炭
素原子が水素以外の置換基を持っていてもよいことは当
然であるｅ＊に、化合物２、すなわち、４．８−ジアザ
−３，６，６，９−テトラメチルワンデカン−２，１０
−ジオンビスオキシム、は興味のある脳内保持性質をも
つ、　ｄ、Ｌ一体の化合物２は購入者による標識化２よ
び脳内血流を示す脳走査剤としての使用のために、市販
されている。

ＥＰＡ　１７９６０Ｂにはこの分野の他の類の化合物が
記述されている。これらの化合物は１の一般式で表わさ
れるが、星印の炭素原子のうち１つだけが１個の炭素原
子を持ち、したがって５個の炭素原子について不斉であ
る。

本発明は、構造１の化合物８よび関連化合物のテクネチ
ウム−９９惰緒体が血球標識化に価値のある試薬である
という発見の結果である。この発見は予想外のことであ
った。本分野に２ける従来の文献は一万に８いては脳走
査剤と脳血流剤とを、そして他方では血球標識化剤とを
結びつける理由をほとんど与えていない。

血球標識化についての慣用的技法は血液試料を、（ａ者
から採取し、ｊツｆ望の血球を比較的純粋な形・でとり
出し、その血球に体外で襟Ｒをつけ、そしてその標識化
血球を患者に戻すことを含んでいる。

現在では、好ましい血球標識化剤はインジワムー１１１
、！−オキシン（８−ヒドロキシキノリン）トのＲ体で
ある。しかしこの油体＆エインジワム−１１１の他の錯
体と共に（・くつかの欠点をもっている。すなわち、 一コストと１更利さ。インジグム−１１１は比較的昼価
でありかつ広範囲の応用をも九ず；テクネチウム−９９
漢は安価でありかつ多くの他の目的に有用である。

□患者への照射秤量、同日走査用または翌日走査用とし
て、テクネチウム−９９鴨錯体を工より低い合計照射線
量を生ずる。

□リンパ球への細胞間照射線量。インジウム−１１１は
オージェ電子を発生し、これはリンパ細胞白血病乞１；
ｉｌ始さゼるｍ狂能力に関する関心の原因となっている
ものである。

我々はインジ９ム−１１１を使用する代表的白血球標識
化について、全身、臨界的器官（肝臓と膵臓）Ｓよびリ
ンパ細胞への相対的放射線量を、テクネチウム−９９惰
と対比して計算した。計算は標識化白血球の生体内分布
について容認され□ている仮定に基づいている。

ミリキューリーあた 全身　　　　　　　　　　　　　　０．５　　０．０２
肝１ｉ！Ｉ＋　　　　　　　　　　　　　　　４．０　
　０．１３牌臓　　　　　　　　　　　　　　２７．０
　　０．８７日皿球（１ｍ（ｊ／３．５Ｘ１００細胞）
　　　６０００　　２．８０７’ｃ−９９集を工同日イ
メージングにきわめて好都合であることは明らかである
。しかし、翌日イメージングにも有利である。もし１８
時間後、すなわち３半減期に２いて走査したい場合には
、走査の時点に８いて適当な活性症を得るには８倍のＴ
ｅ−９９ｍを使用することが必要である。しかし、Ｔｅ
ｒ−９９ｍはそれでも実質的により低い照射、Ｗｆを与
える。

テクノチウム−９９惰をベースとする血球標識化剤を求
める必要性がそこにある。

本発明は、血球の懸濁液を一般的構造式ｌをもちその中
で星印炭素原子の一つまたは両方がそれぞれ１個の水素
原子を担持するプロピレンアミンオキシムの中性親油性
テクネチウム−９９偽錯体と一緒にインー＃エベートす
ることによって、血球を標識化する方法を提供する。

プロピレンアミンオキシム猶造式１の中の炭素原子のど
れかあるいは全部が水素以外の１ａ換基を担持してもよ
い０例えば、ここで各ＲはＨ，アルキル、アリール、ア
ラルキル、シクロアルキル、ＣＦｓ、Ｃ０ＮＫ、または
ｃ、Ｈ４ｏｃｇ、；Ｒ１はＨ１アルキル、アリール、ア
ラルキル、シクロアルキルまたはＣＦ、’。

各Ｒ２はアルキル、アリール、アラルキル、シクロアル
キルまたはｃｙ、：またはＲとＲ２とはいっしょになっ
てシクロアルキル環の一部を作っても良い、 各Ｒ”、Ｒ’ＳよびＲ１はＨ，アルキル、アリール、ア
ラルキル、シクロアルキルまたはｃｙ、；および ＸはＨ，ＣＨ，、Ｃ，Ｈ，またはＣ６Ｈ，である。同一
の記号で表わされる２個の置換基は同じまたは異ってい
ても良い。

特に好ましいプロピレンアミンオキシムは上記の化合物
２である０本発明は結果に基づくものであって、理論に
基づくものではないが、我々は現在では、この化合物の
テクネチウム−９９惰錯体は血球内のその場で、その溶
離を遅らせあるいは阻止するような様式で分解する傾向
があり、そして、この性質は構造式１のとおりに星印炭
素原子へ結合した水素をもつ他のプロピレンオキシムの
錯体と分は合ってもよいと信じている。構造式１の中性
の親油性テクネチウム−９９ｇ％錯体は現在は構造式４
をもつと信じられる。

血球Ｒ濁液は上記定義のとおりの錯体とさほど臨界的で
ない条件の下で保温される。インキュベーション温度は
Ｏから５０℃であり、代表的には室温または３７℃であ
るが、好都合な条件下では標識化は１０分以内で実質的
に光子する。この方法によって標識化することができる
血球は赤血球、単核Ｓよび多核の両方の白血球、と血小
板を含む。

この方法の効率は細胞の性質に依存し、一般的には、赤
血球に対するよりも白血球についてより良好であり、血
小板についてよりも赤血球についてより良好である。

懸濁液中の血球の濃度はできるだけ高いことが好ましい
。白血球に関するかぎり、錯体の実質的吸収は１０７血
球／　ｒｎｌまたはそれ以上の濃度において隣察され、
−万、１０６血 いては、不十分な吸収が観察される．類似の効果は他の
種類の血球にもあてはまる。

血漿は標識化を阻止する。例えばヒトの白血球を使用す
る一つの実験に８いては，１６．９％の血プにの最終濃
度により５０％阻止され、３４％の血漿により１００％
阻止される。血球が標識化のために血液から分離される
場合には、血漿は実質的に存在しない秋春にあるべきで
ある。−万、白血球２よび特に血小板は生かして２くた
めには血漿を要求するであろう。血漿濃度は、標識化の
間の血液細胞の生存性を維持するのに十分高く、しかし
ながら効果的な標識化を行うのに十分に低いように選択
しなければならない。実際に、血漿の添加は標識化反応
を停止させる便利な方式である。

混合血球が高Ｑ度で存在する全血標識化の場合について
のみ、許容される実質的割合の血清が存在する。

チク不チワムー９９ｍ錯体はそれらが吸収された血球か
ら溶離するが、しかしその速度は子クネナウムー９９慣
の半城期（６時間）と比べてゆっくりである。その溶離
速度は著しく温度依存性であり、従って標識化血球は室
温またはそれ以下に使用前は貯蔵せねばならない。血球
の性質もまた、以下の数字によって示されると３つに、
重要であり、それらの数字を工全血中で！Ａなる時間の
間貯蔵された異なる種類の標識化血球に関するものであ
る。

以下の実施例は本発明を例証するものである。

実施例１。

化合物２のテクネチクムー９９＋ａ錯体の溶液を矢のと
Ｓりにつくった．ガラス瓶は０．５■の化合物２、０．
００７５ＩＩＩｇの塩化第一錫・二水塩、および４５■
の塩化す）　ＩＪクムを含んでＳす、凍結乾燥され、窒
素下で密封された。これへ５．　Ｏ　ｍｕのナトリウム
・バーテクネテート溶出ｇ．（ａｌｕａｔｅ）を１３５
ｍＣ１　　テクネチウム発生器から添加した。

混合白血球は酸性クエン酸塩凝固防止血液の３４ｉｔか
らデキストラン沈降によって得られた。

これらを２回洗滌し、２．０紅の＠＃塩緩衝食塩水の甲
で再分散させた。この懸濁液を化合物２のテクネチウム
−９９％錯体の溶液の０．２１と一緒にインキュベート
した。インキュベートは室温に２いて行ない、試料は分
析のために間隔を霞いて取出した。２分後、放射能の６
０％が血球と合金して２す２５分後には、８３％；１０
分後には８９％であった。

化合物２のテクネチウム−９９愼錯体の溶液の０、２１
へ各種濃度の洗滌赤血球の１．０１を添加しり．インΦ
ユペーションは室温において１０分間であった。１００
個の赤血球数の場合、放射能の３０％が血球中で吸収さ
れ、１０”個の場合はその吸収は８０％であり、１０１
０個の場合には９０％であった。

実施例３、 実施例２の実験を繰返し、ただし、赤血球の代りに血小
板を使用したが、血球が２Ｘ１０”個／ＩＩＩｔの場合
に、放射能の吸収は３６％であった。

ヘパリンを加えた全血（血漿を含む）の試料１、　０　
ＩＮ（を化合物２のチク不チクムー９９惰錯体の溶液の
１０〜２００マイクロリツトルと一緒にインキュベート
した。標識化幼果Ｇ７１．錯体の愈に比例して増し、１
０マイクロリツトル添加の場合の３５、６％から２００
マイクロリツトル添加の場合の６・８．３％の範囲にあ
った。

これらの本質的に赤血球の調製剤からのテクネチウムの
溶離は、４時間に及ぶ期間にわたって理法からの浸出は
１１％以下であったことを示した。

実施例５゜ 貴施例１の方法によってつくったＴｅ−９９ｍ標識化白
血球を排泄物抽出物で以て含浸したスポンジの挿入によ
って生成された膿瘍をもつねずみの中へ注射した。ｍＭ
吸収は１％−１１１標識化白血球についての吸収と同等
であった。

実施例６４ ヘギサメチルプロピレンアミンオキシム（ＨＭｐＡｏ　
）が９９”Ｔｅ　　と脂質可溶性の中性錯体を形成し、
これはインビトロで白血球中に迅速に組入れられる。擬
似または既昶の炎症性病気をもつ６人の患者の甲で、醒
−クエン酸塩−デキストロースで以て＃固防止された８
５ｍ１の血液から単離した「混合」白血球懸濁液を９”
Ｔａ−ＨＭＰＡＤによって標識化し、平均効率は４７％
であって、そのうち７８％は顆粒球によって吸収された
。放射能ハ顆粒球からよりも他の血球型からより迅速に
インビトロに２いて＃離された。顆粒球はしつかり標識
化されたままであった。標識の平均の初期生体分布と３
０−４０分における血液中の３２％の顆粒球回収は、そ
れらの顆粒球が標識化中に３いて著しくは活性化されな
いことを示した。６人の患者全員が炎症性病気に対して
陽性であり、５人の患者は３０分はどの早さで、そして
、６人目の患者は３時間後においてであり、彼らは全員
が２０−２４時間後に８いて１場性の１まであった。

４人の患者はまた、ＩＩＩ　１九−標識化「純」顆粒球
を受けた。詳細には　９９　ＭＬ　Ｔ、イメージはＩｌ
ｌ　！、イメージと同等であるかまたはすぐれていた。

この実験はＴｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ、　１９８５年１０月
２５日、９４６−９４９頁に３いてより詳しく記述され
ている。

（外５名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、血球懸濁液を、一般構造式（１） ▲数式、化学式、表等があります▼（１） をもち、その中で星印炭素原子の一つまたは両方が１個
   の水素原子を持っているプロピレンアミンオキシムの中
   性親油性テクネチウム−９９ｍ錯体と一緒に、インキュ
   ベートすることによる、血球の標識化方法。 ２、血球懸濁液が血漿を実質的に含まない、特許請求の
   範囲第１項に記載の方法。 ３、血球が白血球である、特許請求の範囲第１項または
   第２項に記載の方法。 ４、白血球懸濁液の血球濃度が少くとも１００血球／ｍ
   ｌである、特許請求の範囲第３項に記載の方法。 ５、血球が赤血球である、特許請求の範囲第１項または
   第２項に記載の方法。 ６、前記プロピレンアミンオキシムが式３ ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔ここで各ＲはＨ、アルキル、アリール、アラルキル、
   シクロアルキル、ＣＦ＿３、ＣＯＮＸ＿２またはＣ＿６
   Ｈ＿４ＯＣＨ＿３； Ｒ＾１はＨ、アルキル、アリール、アラルキル、シクロ
   アルキルまたはＣＦ＿２； 各Ｒ＾２はアルキル、アリール、アラルキル、シクロア
   ルキルまたはＣＦ＿３；またはＲとＲ＾２とはいっしょ
   になってシクロアルキル環の一部を作っても良い、 各Ｒ＾３、Ｒ＾４およびＲ＾５はＨ、アルキル、アリー
   ル；アラルキル、シクロアルキルまたはＣＦ＿３：およ
   び ＸはＨ、ＣＨ＿３、Ｃ＿２Ｈ＿５またはＣ＿６Ｈ＿５で
   ある〕７、プロピレンアミンオキシムが、４，８−ジア
   ザ−３，６，６，９−テトラメチル−ウンデカン−２，
   １０−ジオンビスオキシムである。特許請求の範囲第１
   項から第５項のいずれかに記載の方法。 ８、プロピレンアミンオキシムのｄ、ｌ体を用いる特許
   請求の範囲第７項記載の方法。