JPS61173799A - Method of determining activity of substrate or enzyme - Google Patents
Method of determining activity of substrate or enzymeInfo
- Publication number
- JPS61173799A JPS61173799A JP1623785A JP1623785A JPS61173799A JP S61173799 A JPS61173799 A JP S61173799A JP 1623785 A JP1623785 A JP 1623785A JP 1623785 A JP1623785 A JP 1623785A JP S61173799 A JPS61173799 A JP S61173799A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reagent
- peroxidase
- substrate
- catalase
- enzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は体液中の基質又は酵素活性の定量方法に関する
ものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION (Industrial Field of Application) The present invention relates to a method for quantifying substrate or enzyme activity in body fluids.
体液中の基質又は酵素活性を酵素法を用いて測定するこ
とは臨床診断の場における有用な情報を与えるものとし
て臨床的意義が高い。Measuring substrate or enzyme activity in body fluids using enzymatic methods has great clinical significance as it provides useful information in clinical diagnosis.
(従来の技術) 近年、酵素を周込る基質又は酵素活性の′定量。(Conventional technology) In recent years, quantification of substrates surrounding enzymes or enzyme activity has become increasingly important.
特に酸化酵素を用い生じ九過酸化水素を測定する方法が
盛んに用いられている。In particular, a method of measuring hydrogen peroxide produced using an oxidase is widely used.
ところが最近これらの測定方法を用いた体液中の基質又
は酵素活性の定量において反応系に関与する体液中の内
因性物質が、目的とする基質又は酵素活性の測定に正の
誤差を与えることが問題となってきている。例えばトリ
グリセライドを測定する場合の遊離グリセロール、クレ
アチニンt−測定する場合のクレアチン、ザルコンン、
エステル型コレステロールを測定する場合の遊離コレス
テロール、アミラーゼ活性を測定する場合のグルコース
、GOT、GPT活性を測定する場合のビルビン酸、V
アル酸を測定する場合のピルビン酸。However, recently, when quantifying substrate or enzyme activity in body fluids using these measurement methods, it has become a problem that endogenous substances in body fluids involved in the reaction system give a positive error in the measurement of the target substrate or enzyme activity. It is becoming. For example, free glycerol when measuring triglycerides, creatine when measuring creatinine,
Free cholesterol when measuring ester cholesterol, glucose when measuring amylase activity, GOT, biluvic acid when measuring GPT activity, V
Pyruvic acid when measuring alkaline acid.
グアナーゼ活性を測定する場合の尿酸等々がそれである
。Examples include uric acid when measuring guanase activity.
差引く方法がある。この方法は誤差を防ぐことはできる
が、検体プフンク用の試薬が別に必要になり、更にその
為の測定操作が加わり、@雑な方法で自動分析機等への
適用性が低く実用的でない。There is a way to subtract it. Although this method can prevent errors, it requires a separate reagent for the sample, and additional measurement operations are required, making it cumbersome and impractical as it has low applicability to automatic analyzers.
第2の方法は内因性の物質に直接又は他の酵素との共存
下、酸化l酵素を作用させ、生じ九過酸化水素にペルオ
キシダーゼ存在下、それ自身ペルオキシダーゼ存在下自
己縮合して可視部に吸収をほとんど示さない化合物を作
用させて、過酸化水素を消費してから目的とする基質又
は酵素活性を測定する方法がある。例えば特公昭57−
29159号公報に示される4−アミノアンチピリンや
フェノールをその消去剤(過酸化水素を自己縮合して可
視部に吸収をほとんど示さない化合物)とする方法があ
るが、実際にはべpオキシダーゼ、過酸化水素存在下、
自己縮合した4−アミノアンチピリンの縮合物は可視部
に吸収を少し有する物質(測定波長で影響を与える物質
)であり、目的とする基質又は酵素活性の比色測定に正
の誤差を与える。The second method is to act on endogenous substances directly or in the coexistence of other enzymes with an oxidizing enzyme, and the resulting hydrogen peroxide is self-condensed in the presence of peroxidase and absorbed into the visible region. There is a method in which the target substrate or enzyme activity is measured after hydrogen peroxide is consumed by using a compound that exhibits little to no oxidation. For example, the special public service in 1977-
There is a method of using 4-aminoantipyrine or phenol as a scavenger (a compound that self-condenses hydrogen peroxide and shows almost no absorption in the visible region) as shown in Japanese Patent No. 29159, but in reality, it is In the presence of hydrogen oxide,
The condensate of self-condensed 4-aminoantipyrine is a substance that has a slight absorption in the visible region (a substance that affects the measurement wavelength) and gives a positive error to the colorimetric measurement of the target substrate or enzyme activity.
特に微量の体液中物質を測定する場合には、わずかの可
視部の吸収でも測定値には大きな正誤差を与えることに
なる欠点がある。Particularly when measuring trace amounts of substances in body fluids, there is a drawback that even a small amount of absorption in the visible region can give a large error in the measured value.
又、この方法は可視部の比色定量法としては正誤差を低
減させることが可能であるが、紫外部の定量としては自
己縮合し良化合物自身の吸収が紫外部に存在する為に有
効な方法とはならない。In addition, although this method can reduce the error in colorimetric determination in the visible region, it is not effective in quantifying the ultraviolet region because the absorption of the self-condensing compound itself exists in the ultraviolet region. It is not a method.
(発明の解決しようとする問題点)
本発明の目的は簡便で正確性に優れ、自動分析機への適
用性の良い体液中の基質及び酵素活性を測定する方法を
提供することである。(Problems to be Solved by the Invention) An object of the present invention is to provide a method for measuring substrate and enzyme activity in body fluids that is simple, highly accurate, and has good applicability to automatic analyzers.
(問題点を解決する九めの手段)
従来、ペルオキシダーゼを用いて過酸化水素を定量する
系において、カタラーゼを使用することは過酸化水素の
分解につながり、測定に負誤差を与えるということで1
通常、共存使用することは考えられなかつ九。その為に
ペルオキシダーゼ系でカタラーゼの影響が考えられるよ
うな場合はカタラーゼの阻害剤であるアジ化ナトリウム
等を使用することの方が一般的であった。ところが本発
明者らは鋭意検討し次結果、意外にもべ〃オキシダーゼ
の系でカタラーゼを、共存するべ〃オキシダーゼの10
倍以内で使用することにより、上記目的を達成すること
が出来ることを見出した。つtり、第1試薬に酸化酵素
及びカタラーゼを含有させた試薬を用い、第2試薬に検
出剤を含有させた試薬を用い、試料にまず第1試薬を作
用させた後、続いて第2試薬を作用させて生じた吸光度
の変化を測定することにより、試料中の基質又は酵素活
性を正確かつ簡単に測定でき、しかも自動分析機への適
用性に優れた本発明に到達することができた。(Ninth way to solve the problem) Conventionally, in a system that uses peroxidase to quantify hydrogen peroxide, using catalase leads to the decomposition of hydrogen peroxide and gives a negative error to the measurement.
Normally, it would be unthinkable for them to be used together. For this reason, it has been more common to use catalase inhibitors such as sodium azide when the influence of catalase is considered to be a peroxidase system. However, the present inventors conducted extensive studies and found that, unexpectedly, catalase in a be-oxidase system was
It has been found that the above objective can be achieved by using the amount within twice as much. In other words, a first reagent containing an oxidase and a catalase is used, a second reagent is used containing a detection agent, and the first reagent is first applied to the sample, and then the second reagent is applied to the sample. By measuring the change in absorbance caused by the action of a reagent, it is possible to accurately and easily measure the substrate or enzyme activity in a sample, and the present invention has been achieved which is highly applicable to automatic analyzers. Ta.
すなわち本発明は基質又は酵素反応によシ生成した物質
に酸化酵素を作用させ、生成する過酸化水素をぺ〃オキ
シダーゼ系で測定することによ飢試料中の基質又は酵素
活性を定量する方法において、(+)酸化酵素および(
−)カタラーゼを含む試薬を第1試薬とし、(1)検出
剤を含む試薬を第2試薬とし、さらに(iiV)ペルオ
キシダーゼが第1試薬および/又は第2試薬に含有され
ていて、試料に第1試薬を加え死後、第2試薬を加え、
生じた吸光度を測定することを特徴とする基質又は酵素
活性の定量方法である。That is, the present invention provides a method for quantifying substrate or enzyme activity in a starved sample by allowing an oxidizing enzyme to act on a substrate or a substance produced by an enzymatic reaction, and measuring the produced hydrogen peroxide using a poxidase system. , (+) oxidase and (
-) a reagent containing catalase is used as the first reagent, (1) a reagent containing the detection agent is used as the second reagent, and (iiV) peroxidase is contained in the first reagent and/or the second reagent, and the sample contains peroxidase. Add the first reagent and after death, add the second reagent,
This is a method for quantifying substrate or enzyme activity, which is characterized by measuring the generated absorbance.
本発明において定量する基質及び酵素としては。Substrates and enzymes to be quantified in the present invention include:
試料中に、その基質及び酵素を測定する反応系に関与す
る内因性物質が同時に含まれる試料であれば、何でも適
用が可能である。例えばトリグリセライド、クレアチニ
ン、クレアチン、エステル型コレステロール、シアル酸
、アミラーゼ、GOT。Any sample can be applied as long as it simultaneously contains the substrate and endogenous substances involved in the reaction system for measuring the enzyme. For example, triglyceride, creatinine, creatine, ester cholesterol, sialic acid, amylase, GOT.
GPT、グアナーゼ等がある。There are GPT, guanase, etc.
基質及び酵素活性の測定の妨害となる内因性物質として
は1例えばトリグリセフィトの場合の遊離グリセロール
、クレアチニンの場合のクレアチン、ザルコVン、クレ
アチンの場合のザ〃コV:/。Examples of endogenous substances that interfere with the measurement of substrates and enzyme activities include free glycerol in the case of triglycephyte, creatine in the case of creatinine, sarcoV in the case of creatine, and zacoV in the case of creatine.
エステル型コレステロ−A/(D場合の遊離コレステロ
ール、シアル酸の場合のピルビン酸、アミラーゼの場合
のグルコース、GOT、GPTの場合のピルビン酸、グ
アナーゼの場合の尿酸等がある。Examples include free cholesterol in the case of ester type cholesterol-A/(D), pyruvic acid in the case of sialic acid, glucose in the case of amylase, pyruvic acid in the case of GOT and GPT, uric acid in the case of guanase, etc.
本発明における(1)酸化酵素としては1例えばクリセ
ロールオキシダーゼ、グリセロリン酸オキシダーゼ、ザ
ルコシンオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、
ピルビン酸オキシダーゼ、グルコースオキタダーゼ、ウ
リカーゼ等があり、過酸化水素を発生する酸化酵素であ
れば、いかなる起源のものでもよい。Examples of (1) oxidizing enzymes in the present invention include 1 such as chrycerol oxidase, glycerophosphate oxidase, sarcosine oxidase, cholesterol oxidase,
Examples include pyruvate oxidase, glucose oxidase, uricase, etc., and any oxidizing enzyme that generates hydrogen peroxide may be used.
本発明において使用する(1)カタラーゼとしてはいか
なる起源のものでもよい。例えば肝、赤血球、腎等に含
まれる動物臓器由来のものや、ミクロコツカス属等に含
まれる微生物由来のもの等がある。(1) Catalase used in the present invention may be of any origin. For example, there are those derived from animal organs such as the liver, red blood cells, and kidneys, and those derived from microorganisms such as those belonging to the genus Micrococcus.
本発明における(1)検出剤としてはペルオキVダーゼ
存在下、過酸化水素によって分光学的に吸収の変化を生
じさせるものであればいがなるものでも良い。例えば4
−アミノアンチピリン(4AA)とアニリン誘導体、4
−アミノアンチピリンとフ−!−/ −z’誘導体、
a−メチル−2−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン(MB
TH)とアニリン誘導体又は4−アミノアンチピリン単
独、アニリン誘導体単独、フェノール誘導体単独等が考
えられる。The detection agent (1) in the present invention may be any substance that causes a change in absorption spectroscopically by hydrogen peroxide in the presence of peroxidase. For example 4
-Aminoantipyrine (4AA) and aniline derivatives, 4
-Aminoantipyrine and Fu-! -/-z' derivative,
a-Methyl-2-benzothiazolinone hydrazone (MB
TH) and an aniline derivative or 4-aminoantipyrine alone, an aniline derivative alone, a phenol derivative alone, etc. can be considered.
アニリン誘導体としてはN、N−ジェ□チルーm−トル
イジンCDET)、ジエチルアニリン(DEA)、N−
エチル−N−(3−スルホプロピ/I/)−m−アニシ
ジン(ADPS)などがある。Aniline derivatives include N, N-jetyl-m-toluidine CDET), diethylaniline (DEA), N-
Examples include ethyl-N-(3-sulfopropy/I/)-m-anisidine (ADPS).
71 / −ル誘導体としては、p−クロロフェノ−/
L/、2−スルホキV−4−クロロフェノールなどがあ
る。71 / -ol derivatives include p-chlorophenol /
Examples include L/, 2-sulfo-V-4-chlorophenol, and the like.
本発明において、第1試薬及び第2試薬には前記成分に
加えてペルオキシダーゼ、緩衝剤及び必要により酸化酵
票、ペルオキシダーゼ以外の酵素。In the present invention, in addition to the above-mentioned components, the first reagent and the second reagent contain peroxidase, a buffer, and if necessary, an oxidizing enzyme and an enzyme other than peroxidase.
基質、界面活性剤、安定化剤、各種妨害物質除去剤等を
含んでよい。ペルオキシダーゼは第1試薬、試薬の方が
良い。It may contain a substrate, a surfactant, a stabilizer, various interfering substance removers, and the like. It is better to use peroxidase as the first reagent.
緩衝剤としては特に制限はなく、その反応系に適当なp
Hを保つことができるものならば、いかなる種類のもの
でも良いが1通常5〜10に調製するものが好ましい。There are no particular restrictions on the buffering agent, and it can be used at a pH appropriate for the reaction system.
Any type of material may be used as long as it can maintain H, but it is preferable to adjust the amount to 1 to 5 to 10.
カタラーゼの濃度としては、共存するペルオキシダーゼ
の濃度に支配され、ペルオキシダーゼ濃度の10倍以内
が適当である。それ以上になると検出系の感度の低下に
つながるので適当でない。The concentration of catalase is controlled by the concentration of coexisting peroxidase, and is suitably within 10 times the concentration of peroxidase. If it is more than that, it is not appropriate because it leads to a decrease in the sensitivity of the detection system.
次に具体的な基質又は酵素活性の定量方法および定量試
薬について説明する。Next, a specific method for quantifying substrate or enzyme activity and a quantitative reagent will be explained.
トリグリセライドの定量
試料に下記第1試薬を加えた後、下記筒、2試薬を加え
、生じた吸光度を測定する。After adding the following first reagent to a triglyceride quantitative sample, add the following two reagents and measure the resulting absorbance.
第1試薬
グリセロールキナーゼ
L−α−グリセロールリン酸オキVダーゼベルオキVダ
ーゼ
カタラーゼ
TP
第2試薬
リボプロティンリパーゼ
上記定量方法は下記反応に従う。First Reagent Glycerol Kinase L-α-Glycerol Phosphate Oxidase Catalase TP Second Reagent Riboprotein Lipase The above quantitative method follows the following reaction.
リボプロティンリパーゼ
トリグリセライド グリセロ
ール十脂肪酸
グリセロールキナーゼ
グリセロール+ATP グリ
セロール−3−リン酸+ADP
ジヒドロキシアセトン+H2O2
+4H*0
クレアチニンの定量
試料に下記第1試薬を加えた後、下記第2試薬を加え、
生じた吸光度を測定する。Riboprotein lipase triglyceride Glycerol Deca fatty acid glycerol kinase Glycerol + ATP Glycerol-3-phosphate + ADP Dihydroxyacetone + H2O2 +4H*0 After adding the following first reagent to the creatinine quantitative sample, add the following second reagent,
Measure the resulting absorbance.
第1試薬
クレアチンアミジノヒドロラーゼ
ザルコシンオキシダーゼ
ペルオキシダーゼ
カタラーゼ
第2試薬
クレアチニンアミドヒドロラーゼ
試料に下記第1試薬を加え次後、下記第2試薬を加え、
生じた吸光度を測定する。First reagent Creatine amidinohydrolase Sarcosine oxidase Peroxidase Catalase Second reagent Creatinine amidohydrolase Add the following first reagent to the sample, then add the following second reagent,
Measure the resulting absorbance.
第1試薬 ザルコシンオキシダーゼ ペルオキシダーゼ カタラーゼ 第2試薬 クレアチンアミドヒドロフーゼ 上記定量法は下記反応に従う。First reagent Sarcosine oxidase peroxidase catalase Second reagent Creatinamide hydrofuse The above quantitative method follows the following reaction.
クレアチニンアミドヒドロラーゼ
クレアチニン+H20
クレアチン+尿素
クレアチニアミドヒドロラーゼ
クレアチン+H20
ザルコシン+尿素
ホルムアルデヒド+グリVン+H2O2+4H20
エステル コレステロールの定量
試料に下記第1試薬を加えた後、下記第2試薬を加え、
生じた吸光度を測定する。Creatinine amide hydrolase Creatinine + H20 Creatine + Urea Creatinium amide hydrolase Creatine + H20 Sarcosine + Urea Formaldehyde + Green + H2O2 + 4H20 Ester After adding the following first reagent to the cholesterol quantitative sample, add the following second reagent,
Measure the resulting absorbance.
第1試薬 コレステロールオキシターセ ペルオキシダーゼ カタラーゼ 第2試薬 コレステロールエステラーゼ 上記定量方法は下記反応に従う。First reagent cholesterol oxitase peroxidase catalase Second reagent cholesterol esterase The above quantitative method follows the following reaction.
遊離コレステロール+脂肪酸
コレステノン+H2O2
ペルオキシダーゼ
2Hz02+4AA+DEA キ
ノン色素+4H20
ミフーゼの定量
試料に下記第1試薬を加えた後、下記第2試薬を加え、
生じた吸光度を測定する。Free cholesterol + fatty acid cholestenone + H2O2 peroxidase 2Hz02 + 4AA + DEA quinone dye + 4H20 After adding the following first reagent to the mifuse quantitative sample, add the following second reagent,
Measure the resulting absorbance.
第1試薬 グルコースオキシダーゼ カタラーゼ ペルオキシダーゼ β−グルコVダーゼ 第2試薬 デンプン(基質) 上記定量方法は下記反応に従う。First reagent glucose oxidase catalase peroxidase β-gluco Vdase Second reagent Starch (substrate) The above quantitative method follows the following reaction.
α−アミラーゼ
デンプン マルトース
β−グルコシダーゼ
マルトース 2グルコースグルコ
ースオキシダーゼ
グルコース+02 グルコン
酸+HIQ3
ペルオキシダーゼ
2HzOz+4AA+DEA
キノン色素+4H*0
基質としてはデンプンの他に修飾デンプン、オリゴグル
コピラノサイド等を用いることができる。α-amylase starch maltose β-glucosidase maltose 2 glucose glucose oxidase glucose + 02 gluconic acid + HIQ3 peroxidase 2HzOz + 4AA + DEA
Quinone dye +4H*0 As the substrate, in addition to starch, modified starch, oligoglucopyranoside, etc. can be used.
またβ−グルコVダーゼに代えてα−グルコシダーゼを
用いてもよい。Furthermore, α-glucosidase may be used in place of β-gluco Vdase.
GPTの定量
試料に下記第1試薬を加えた後、下記第2試薬を加え、
生じた吸光度を測定する。After adding the following first reagent to the GPT quantitative sample, add the following second reagent,
Measure the resulting absorbance.
第1試薬 ピルビン酸オキシダーゼ ペルオキシダーゼ カタラーゼ リ ン 酸 DL−アラニン(基質) 第2試薬 α−ケトグルタル酸(基質) 上記定量方法は下記反応に従う。First reagent pyruvate oxidase peroxidase catalase phosphoric acid DL-alanine (substrate) Second reagent α-ketoglutarate (substrate) The above quantitative method follows the following reaction.
PT
DL−アラニン+α−ケトグルタルll−−十ピルピン
酸+L−グルタミン酸
アセチNリン酸+co、 + H,O。PT DL-alanine + α-ketoglutal ll--decapyrupic acid + L-glutamic acid acetyN phosphate + co, + H,O.
+4H20
GOTの定量
試料に下記第1試薬を加えた後、下記第2試薬を加え、
生じた吸光度を測定する。+4H20 After adding the following first reagent to the GOT quantitative sample, add the following second reagent,
Measure the resulting absorbance.
第1試薬 ピルビン酸オキシダーゼ リ ン 酸 ペルオキシダーゼ カタラーゼ アスパラギン酸(基質) オキザロ酢酸デカルボキシラーゼ 第2試薬 d−ケトグルタル酸(基質) 上記定量方法は下記反応に従う。First reagent pyruvate oxidase phosphoric acid peroxidase catalase Aspartic acid (substrate) Oxaloacetate decarboxylase Second reagent d-ketoglutarate (substrate) The above quantitative method follows the following reaction.
オキザロ酢酸+L−グルタミン酸
+C02
ピルビン酸オキシダーゼ
ピルビン酸+02+リン酸
アセチルリン酸十CO2+H2O2
+4H20
シアル酸の定量
試料に下記第1試薬に加えた後、下記第2試薬を加え、
生じた吸光度を測定する。Oxaloacetic acid + L-glutamic acid + C02 Pyruvate oxidase Pyruvate + 02 + Acetyl phosphate deca CO2 + H2O2 + 4H20 After adding the following first reagent to the quantitative sample of sialic acid, add the following second reagent,
Measure the resulting absorbance.
第1試薬
ピルビン酸オキシダーゼ
カタラーゼ
ペルオキシダーゼ
第2試薬
ノイラミンダーゼ
N−アセチルノイラミン酸オキVダーゼ上記定量方法は
下記反応に従う。First reagent pyruvate oxidase catalase peroxidase second reagent neuramindase N-acetylneuraminic acid oxidase The above quantitative method follows the following reaction.
ノイラミンダーゼ
シ7A’1lll N−アセチル
ノイラミン酸N−アセチル−D−マンノサミン+ピルビ
ン酸+C(h+H2(h
グアナーゼの定量
試料に下記第1試薬に加えた後、下記第2試薬を加え、
生じた吸光度を測定する。Neuramindase 7A'1lll N-acetylneuraminic acid N-acetyl-D-mannosamine + pyruvic acid + C (h + H2 (h) After adding the following first reagent to the quantitative sample of guanase, add the following second reagent,
Measure the resulting absorbance.
第1試薬 キサンチンオキシダーゼ ウリカーゼ ペルオキシダーゼ カタラーゼ 第2試薬 グアニン(基質) 上記定量方法は下記反応に従う。First reagent xanthine oxidase uricase peroxidase catalase Second reagent Guanine (substrate) The above quantitative method follows the following reaction.
グアナーゼ
グアニンーーーーー→キサンチン+NH3キサンチンオ
キVダーゼ
キサンチン 尿酸+H2O2
キノン色票
(作 用)
本発明の定量方法は試料中に共存する測定誤差を生じる
物質(内因性物質)の計9込みをなくして、真の基質又
は酵素活性を簡便に正確度高く測定することを可能とし
、更に自動分析機への適用性の良いものを提供すること
が可能となっ九。Guanase guanine → xanthine + NH3 xanthine oki Vdase xanthine uric acid + H2O2
Quinone color chart (effect) The quantitative method of the present invention eliminates the inclusion of substances (endogenous substances) that coexist in the sample and cause measurement errors, and easily measures the true substrate or enzyme activity with high accuracy. Furthermore, it has become possible to provide a product with good applicability to automatic analyzers.
(実施例) 以下1本発明を実施例により詳細に説明する。(Example) The present invention will be explained in detail below using examples.
実施例1
サンプル中のトリグリセライドを下記試薬を用い、下記
方法により測定した。Example 1 Triglyceride in a sample was measured using the following reagent and the following method.
1、 サンプル
グリセリン(104岬/dl)溶液 ■血清:水;9
:l ■血清:グリセリン(104
0キ/dl)溶液=9:1 ■
2、 試 薬
A:第1試薬
トリス緩衝液(pH7,(ii)
グリセロキナーゼ 2.0・単位/
−グリセロリン酸オキシダーゼ 6.0単位/w
lベルオキVダーゼ 10.0単位/d
カタラーゼ 50.0単位/d第
2試薬
トリス緩衝液(pH7,(ii)
リポプロティンリパーゼ 600単位/m1
4−アミノアンチピリン 10MP/d
JN−エチル−N−(3−スルホプロピ/I/)−m−
アニシジン 90”W/djB:Aの
第1試薬よpカタラーゼを抜いたもの。1. Sample glycerin (104 cape/dl) solution ■Serum: water; 9
:l ■Serum: Glycerin (104
0 kg/dl) solution = 9:1 ■ 2. Reagent A: First reagent Tris buffer (pH 7, (ii) Glycerokinase 2.0 units/
- Glycerophosphate oxidase 6.0 units/w
l Veroqui Vdase 10.0 units/d
Catalase 50.0 units/d Second reagent Tris buffer (pH 7, (ii) Lipoprotein lipase 600 units/ml
4-aminoantipyrine 10MP/d
JN-ethyl-N-(3-sulfopropy/I/)-m-
Anisidine 90”W/djB: The first reagent of A, minus p-catalase.
他は人と同じ。Everything else is the same as humans.
C:Aの第1試薬よりカタラーゼを抜いてtX2試薬の
4−アミノアンチピリンを第1試薬に移したもの。他は
Aと同じ。C: Catalase was removed from the first reagent of A and 4-aminoantipyrine of the tX2 reagent was transferred to the first reagent. Others are the same as A.
D二Aの第1試薬よりカタラーゼを抜い九かわシニフェ
ノールを51197dl 添加し九もの。I removed the catalase from the first reagent of D2A and added 51,197 dl of ``Kawashiniphenol''.
3、測定法 各サンプy20μノに第1試薬2 wlを加え。3.Measurement method Add 2 ml of the first reagent to each 20μ sample.
37℃、5分間反応させた後、第2試薬を1d加えて3
7℃にて10分間反応」?波長540nmで測定した。After reacting at 37°C for 5 minutes, add 1 d of the second reagent and
React for 10 minutes at 7℃"? Measurement was performed at a wavelength of 540 nm.
その結果を第1表に示す。The results are shown in Table 1.
第 1 表
試薬Aでは蒸留水とサンプμ■〔グリセリン(1041
1P/dJ )溶液〕の吸光度カ路等シく。Table 1 In reagent A, distilled water and sample μ■ [glycerin (1041
1P/dJ) solution].
サンプル■(血清:水=9 : 1 )およびサンプル
■〔血清:グリセロリン(10411P/ctJ )
溶液−9:1)の吸光度が賂等しいことから、グリセリ
ンの測シ込みがないことが明らかである。Sample ■ (serum: water = 9:1) and sample ■ [serum: glycerolin (10411P/ctJ)
Since the absorbance of the solution 9:1) is equal to that of the solution, it is clear that there is no measurement of glycerin.
実施例2 ′
サンプル中のトリグリセライドを下記試薬を用い、下記
方法によシ測定した。Example 2' Triglycerides in a sample were measured using the following reagents and the following method.
1、 サンプル
実施例1で使用したサンプル■、■、■2、試薬
実施例1で使用した試薬A組成のものでカタラーゼ濃度
を第2表の濃度のものを使用した。1. Samples ■, ■, ■2 used in Sample Example 1, Reagent A used in Reagent Example 1. The catalase concentrations shown in Table 2 were used.
第 2 表 3、測定法 実施例1と同じ方法で測定した結果を第3表に示す。Table 2 3.Measurement method Table 3 shows the results measured using the same method as in Example 1.
第 3 表
第3表からカタラーゼがペルオキシダーゼより10倍よ
り多く含まれる(試薬G)とグリセリンの影響が生じな
いが、感度の低下がみられる(吸光度の低下)ことがわ
かる。10倍以内(試薬A。Table 3 It can be seen from Table 3 that when catalase is contained 10 times more than peroxidase (reagent G), there is no effect of glycerin, but a decrease in sensitivity is observed (decreased absorbance). Within 10 times (Reagent A.
E、F)では感度の低下も与られない。In E and F), there is no reduction in sensitivity.
Claims (3)
を作用させ、生成する過酸化水素をペルオキシダーゼ系
で測定することにより、試料中の基質又は酵素活性を定
量する方法において、(i)酸化酵素および(ii)カ
タラーゼを含む試薬を第1試薬とし、(iii)検出剤
を含む試薬を第2試薬とし、さらに(iv)ペルオキシ
ダーゼが第1試薬および/又は第2試薬に含有されてい
て、試料に第1試薬を加えた後、第2試薬を加え、生じ
た吸光度を測定することを特徴とする基質又は酵素活性
の定量方法。(1) A method for quantifying the substrate or enzyme activity in a sample by causing an oxidase to act on the substrate or a substance produced by an enzymatic reaction, and measuring the produced hydrogen peroxide using a peroxidase system. and (ii) a reagent containing catalase is the first reagent, (iii) a reagent containing the detection agent is the second reagent, and (iv) peroxidase is contained in the first reagent and/or the second reagent, and the sample A method for quantifying substrate or enzyme activity, which comprises adding a first reagent to a liquid, then adding a second reagent, and measuring the resulting absorbance.
ていることを特徴とする特許請求の範囲第1項記載の基
質又は酵素活性の定量方法。(2) The method for quantifying substrate or enzyme activity according to claim 1, wherein the first reagent contains (iv) peroxidase.
、(ii)カタラーゼが(iv)ペルオキシダーゼの1
0倍(活性値)以内であることを特徴とする特許請求の
範囲第1項記載の基質又は酵素活性の定量方法。(3) The first reagent contains (iv) peroxidase, and (ii) catalase is one of (iv) peroxidase.
2. The method for quantifying substrate or enzyme activity according to claim 1, wherein the amount is within 0 times (activity value).
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1623785A JPS61173799A (en) | 1985-01-29 | 1985-01-29 | Method of determining activity of substrate or enzyme |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP1623785A JPS61173799A (en) | 1985-01-29 | 1985-01-29 | Method of determining activity of substrate or enzyme |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS61173799A true JPS61173799A (en) | 1986-08-05 |
JPH0434400B2 JPH0434400B2 (en) | 1992-06-05 |
Family
ID=11910947
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP1623785A Granted JPS61173799A (en) | 1985-01-29 | 1985-01-29 | Method of determining activity of substrate or enzyme |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS61173799A (en) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63246665A (en) * | 1986-12-02 | 1988-10-13 | Shinotesuto Kenkyusho:Kk | Stabilization of reagent for measuring biological component |
US5436133A (en) * | 1989-06-20 | 1995-07-25 | Oriental Yeast Co., Ltd. | Enzyme assay of biochemical substances |
JP4527925B2 (en) * | 2000-02-08 | 2010-08-18 | シスメックス株式会社 | Testing method for kidney damage |
CN102901711A (en) * | 2012-10-31 | 2013-01-30 | 卫生部北京医院 | Sarcosine oxidase method for quantitatively detecting sarcosine and detection kit |
-
1985
- 1985-01-29 JP JP1623785A patent/JPS61173799A/en active Granted
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63246665A (en) * | 1986-12-02 | 1988-10-13 | Shinotesuto Kenkyusho:Kk | Stabilization of reagent for measuring biological component |
US5436133A (en) * | 1989-06-20 | 1995-07-25 | Oriental Yeast Co., Ltd. | Enzyme assay of biochemical substances |
JP4527925B2 (en) * | 2000-02-08 | 2010-08-18 | シスメックス株式会社 | Testing method for kidney damage |
CN102901711A (en) * | 2012-10-31 | 2013-01-30 | 卫生部北京医院 | Sarcosine oxidase method for quantitatively detecting sarcosine and detection kit |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0434400B2 (en) | 1992-06-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPH0577399B2 (en) | ||
JPH02174695A (en) | Method and reagent for colorimetry of analite by means of enzymic oxidation and direct or coloring electron acceptor therefor | |
JPH11504808A (en) | Measurement of glycated protein | |
EP0116307B1 (en) | Composition, analytical element and method for the quantification of creatine kinase | |
EP0121254B1 (en) | Process for determining substrate or enzymatic activity | |
JPS61173799A (en) | Method of determining activity of substrate or enzyme | |
EP0100217A2 (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
US4695539A (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
JPH0571239B2 (en) | ||
CN109541238A (en) | Direct bilirubin detecting method and kit | |
CS227331B2 (en) | Method of glycerol determination | |
JPH07155196A (en) | Method for measuring biological component | |
US5436133A (en) | Enzyme assay of biochemical substances | |
JPH04200396A (en) | High-sensitivity enzymatic determination of hydrogen peroxide and reagent therefor | |
JP4081709B2 (en) | How to avoid the effects of contaminants | |
EP0386237B1 (en) | Enzyme assay of biological substances | |
JPH0249600A (en) | Assay of nad(p)h | |
EP0891554B1 (en) | Method of measuring bilirubin | |
JP2643205B2 (en) | Highly sensitive colorimetric method | |
Maguire | Elimination of the" chromogen oxidase" activity of bilirubin oxidase added to obviate bilirubin interference in hydrogen peroxide/peroxidase detecting systems. | |
JP3034984B2 (en) | Highly sensitive method and composition for quantification of D-galactose | |
JPH01320998A (en) | Determination of 1,5-anhydroglucitol in sample containing glucose | |
JPH04346796A (en) | Highly sensitive quantitative analysis of lactic acid or pyruvic acid and composition used for the same analysis | |
JPS6030696A (en) | Method and reagent for determination of creatinine and creatine | |
JPH03119997A (en) | Method for measuring ingredient |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |