JPS61167699A - Monoclonal antibody - Google Patents
Monoclonal antibodyInfo
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- JPS61167699A JPS61167699A JP60008129A JP812985A JPS61167699A JP S61167699 A JPS61167699 A JP S61167699A JP 60008129 A JP60008129 A JP 60008129A JP 812985 A JP812985 A JP 812985A JP S61167699 A JPS61167699 A JP S61167699A
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Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
〔技術分野〕
本発明は、胃低分化型腺癌由来細胞株(MKN=45)
を免疫原として作成されたハイブリドーマの産生ずる特
定の特性を持つモノクローナル抗体に関する。[Detailed Description of the Invention] [Technical Field] The present invention relates to a cell line derived from gastric poorly differentiated adenocarcinoma (MKN=45).
relates to the production of hybridomas created as immunogens to produce monoclonal antibodies with specific properties.
癌研究の究極の目標は、抗癌、制癌作用を示す物質の探
索と、癌の早期発見、即ち早期診断法の確立にあるとい
える。従来、癌に関して種々の薬剤、治療法、試薬が開
発されているが、これらはいずれも癌細胞ばかりでなく
、正常組織、正常細胞にも影響を与え、如何に有効な薬
剤とはいえ、その副作用のために使用が著しく制限され
ているのが現状である。It can be said that the ultimate goals of cancer research are the search for substances that exhibit anticancer and anticancer effects and the early detection of cancer, that is, the establishment of early diagnostic methods. To date, various drugs, treatments, and reagents have been developed for cancer, but all of these affect not only cancer cells but also normal tissues and cells, and no matter how effective they are, they At present, its use is severely restricted due to side effects.
免疫反応(抗原−抗体反応)は、非常に特異性が高いも
のであるが、従来のポリクローナル抗体ではいかに吸収
操作を操り返しても、例えばリンパ球間のサブセットの
ような、非常にマイナーな抗原決定基によって区別され
るものを認識することは困難であった。Milstei
nらによって開発されたモノクローナル抗体(Ki;h
ler、 G、 and Mtlstein、 C,:
Nature、 256.495 (1975))は
、この壁を打ち破るものであり、癌細胞上の癌特異抗原
、あるいは癌関連抗原を特異的に認識するモノクローナ
ル抗体を得ることにより、正常mmへのダメ−ジを与え
ずに癌細胞のみを特異的に排除できるものと期待される
。また、モノクローナル抗体を用いた診断薬あるいは検
査試薬は、正常血清成分に対する交差反応がなく、感度
良く、癌関連抗原、癌特異抗原を検出できるものと思わ
れる。Immune reactions (antigen-antibody reactions) are highly specific, but with conventional polyclonal antibodies, no matter how much you manipulate the absorption procedure, they can only detect very minor antigens, such as a subset of lymphocytes. It was difficult to recognize what was distinguished by determinants. Milstei
The monoclonal antibody (Ki; h
ler, G. and Mtlstein, C.:
Nature, 256.495 (1975)) aims to break through this barrier by obtaining monoclonal antibodies that specifically recognize cancer-specific antigens on cancer cells or cancer-related antigens, thereby preventing damage to normal mm. It is expected that cancer cells can be specifically eliminated without causing damage. Furthermore, diagnostic agents or test reagents using monoclonal antibodies are thought to be capable of detecting cancer-related antigens and cancer-specific antigens with high sensitivity without cross-reactivity with normal serum components.
本発明は、特定の癌抗原に対して特異的に反応するモノ
クローナル抗体を提供するものである。The present invention provides monoclonal antibodies that specifically react with specific cancer antigens.
さらに本発明は、上記特定癌に対する抗原検出用試薬を
提供するものである。Furthermore, the present invention provides a reagent for detecting an antigen against the above-mentioned specific cancer.
本発明は、胃癌、特に胃癌の細胞膜抗原に対して特異的
に反応するモノクローナル抗体よりなるものである。The present invention consists of a monoclonal antibody that specifically reacts with gastric cancer, particularly gastric cancer cell membrane antigens.
本発明のモノクローナル抗体は、いわゆる細胞融合によ
って製造される。すなわち、抗体産生細胞と骨髄腫細胞
との間に、融合ハイブリッドを形成させ、該ハイブリッ
ドをクローン化し、上記癌細胞(即ち、上記特性を有す
る特定抗原)に対し特異性を示す抗体を産生ずるクロー
ンを選択することによって製造される。その操作は、免
疫用細胞として下記細胞を使用する以外は、従来既知の
方法に準ずればよい。The monoclonal antibody of the present invention is produced by so-called cell fusion. That is, a fusion hybrid is formed between an antibody-producing cell and a myeloma cell, and the hybrid is cloned to produce an antibody specific to the cancer cell (i.e., a specific antigen having the above characteristics). Manufactured by selecting. The operation may be carried out in accordance with conventionally known methods, except for using the following cells as immunization cells.
抗体産生細胞は、例えば株化癌細胞より得られる抗原に
よって免疫させた動物からの肺細胞、リンパ節細胞、B
−リンパ球である。株化癌細胞としては、背低分化型腺
癌由来の株化癌細胞(MKN−45)が例示される。Antibody-producing cells include, for example, lung cells, lymph node cells, and B cells from animals immunized with antigens obtained from established cancer cell lines.
-They are lymphocytes. An example of the cancer cell line is a cancer cell line derived from poorly differentiated adenocarcinoma (MKN-45).
免疫させる動物としてはマウス、ラット、馬、ヤギ、ウ
サギなどが例示される。Examples of animals to be immunized include mice, rats, horses, goats, and rabbits.
抗体産生細胞は、例えば次のようにして製造される。即
ち、胃癌由来細胞株MKN−45(低分化型腺癌)を超
音波処理等で破壊し、遠心分離(例、10,000〜2
0.000G、 10〜60分)を行って細胞抽出液を
得、この上清を分子量10万〜200万の物質の分離が
可能なゲル濾過担体(例、セファデックス、セファクリ
ル、セファコース、バイオゲル等)を使用して分子篩し
、高分子画分と低分子画分とに分離する。か(して得ら
れた分子量が約70万〜150万の高分子画分は、例え
ばFreund Complete adjuvari
tと混和後、動物の免疫用として使用する。免疫は動物
の皮下、筋肉内あるいは腹腔内に約1.5 X 10’
〜10” cell相当分/回を週1〜2回、3〜7
週間投与することによって行われる。最終免疫より約3
〜5日後、免疫動物から抗体産生細胞を分取する。Antibody-producing cells are produced, for example, as follows. That is, the gastric cancer-derived cell line MKN-45 (poorly differentiated adenocarcinoma) was destroyed by ultrasonication, etc., and centrifuged (e.g., 10,000 to 2
0.000 G for 10 to 60 minutes) to obtain a cell extract, and transfer this supernatant to a gel filtration carrier capable of separating substances with a molecular weight of 100,000 to 2,000,000 (e.g., Sephadex, Sephacryl, Sephacose, Biogel). etc.) to separate into a high molecular fraction and a low molecular fraction. The polymer fraction with a molecular weight of about 700,000 to 1,500,000 obtained by
After mixing with T, it is used for animal immunization. For immunization, administer approximately 1.5 x 10' subcutaneously, intramuscularly, or intraperitoneally to the animal.
~10" cell equivalent/time 1-2 times a week, 3-7
It is carried out by weekly administration. Approximately 3 times more than the final immunization
~5 days later, antibody-producing cells are collected from the immunized animal.
骨髄腫細胞としては、マウス、ラット、ヒト等由来のも
のが使用される。抗体産生細胞と骨髄細胞とは同種動物
由来のものであることが好ましい。As myeloma cells, those derived from mice, rats, humans, etc. are used. Preferably, the antibody-producing cells and bone marrow cells are derived from animals of the same species.
細胞融合は、例えばG、 K5hler (Natur
e 256+495 (1975))に記載の方法又は
これに準する方法によって行われる。この際、30〜5
0%ポリエチレングリコール(平均分子量1,000〜
4,000)を用いて30〜40℃の温度下、約1〜3
分間程度反応させることによって行われる。Cell fusion can be carried out using e.g. G, K5hler (Natur
e 256+495 (1975)) or a method analogous thereto. At this time, 30 to 5
0% polyethylene glycol (average molecular weight 1,000~
4,000) at a temperature of 30 to 40°C, about 1 to 3
This is done by allowing the reaction to take place for about a minute.
細胞融合によって得られた細胞はクローニングに付され
る。すなわち、当該細胞を、例えばマイクロプレート中
で培養し、増殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価
を、例えば酵素抗体法などてクローニングを行ってクロ
ーンを得る。このクローンは、例えばあらかじめプリス
タンを投与したB A L B/Cマウスの腹腔内へ移
植し、10〜14日後にモノクローナル抗体を高濃度に
含む腹水を採取し、検定する。得られたクローンは、次
いで、目的とするモノクローナル抗体を産生ずるクロー
ンのスクリーニングに付される。スクリーニングは、酵
素抗体法などによって追跡される。Cells obtained by cell fusion are subjected to cloning. That is, the cells are cultured in, for example, a microplate, and the antibody titer in the culture supernatant of wells in which proliferation is observed is subjected to cloning using, for example, an enzyme antibody method to obtain clones. This clone is transplanted intraperitoneally, for example, into a BALB/C mouse that has been previously administered pristane, and 10 to 14 days later, ascites containing a high concentration of monoclonal antibodies is collected and assayed. The obtained clones are then subjected to screening for clones that produce the desired monoclonal antibody. Screening is followed up by enzyme-linked immunosorbent assays and the like.
選ばれたクローンの産生ずるモノクローナル抗体の回収
は、IgGの精製法として従来既知の硫安分画法、PE
G分画法、エタノール分画法、陰イオン変換体を応用す
ることで、容易に達成される。The monoclonal antibodies produced by the selected clones can be collected using ammonium sulfate fractionation and PE, which are conventionally known methods for purifying IgG.
This can be easily achieved by applying G fractionation, ethanol fractionation, and anion converters.
本発明によって得られたモノクロール抗体は、腺癌系に
特異的と考えられ、細胞膜表在型抗原を認識し、かつ正
常組織由来培養細胞、赤血球、白血球及び正常組織とは
反応せず、癌特異的な抗原を認識するものと推測される
。すなわち、本発明からなるモノクローナル抗体は腫瘍
のイメージング乃び湘1瘍’JRI 、L conju
gateさせtartetins+theraov(タ
ーゲティングセラピイ)等への臨床応用が期待される。The monoclonal antibody obtained by the present invention is thought to be specific for adenocarcinoma, recognizes cell membrane superficial antigens, and does not react with cultured cells derived from normal tissues, red blood cells, white blood cells, or normal tissues, and does not react with cancer cells. It is presumed that it recognizes a specific antigen. That is, the monoclonal antibody according to the present invention can be used for tumor imaging and tumor imaging.
Clinical applications such as tartetins+theraov (targeting therapy) are expected.
実施例
(1)免疫用癌関連抗原の調製:
株化胃癌細胞(MKN−45株)を超音波処理法で破壊
し、遠心分離(15,0OOG、30分)を行い細胞抽
出液を得た。この上清をセファロース4Bのカラムを用
い、ゲル濾過し、高分子画分と低分子画分とに分離した
。Example (1) Preparation of cancer-related antigen for immunization: Gastric cancer cell line (MKN-45 strain) was disrupted by ultrasonication and centrifuged (15.0 OOG, 30 minutes) to obtain a cell extract. . This supernatant was gel-filtered using a Sepharose 4B column and separated into a high molecular fraction and a low molecular fraction.
分子量が約70万〜150万の高分子画分を、Freu
nd Complete Adjuvantと混和後、
マウスへ週1回、5週間免疫した。The polymer fraction with a molecular weight of about 700,000 to 1,500,000 was
After mixing with nd Complete Adjuvant,
Mice were immunized once a week for 5 weeks.
最終免疫より4日後にマウス肺臓を取り出し、以下の細
胞融合に用いた。Four days after the final immunization, mouse lungs were removed and used for the following cell fusion.
(2)細胞融合およびクローニング:
上記のマウス牌細胞と、マウスミエローマP3U 1
(Curr、 Top、 Microbiol、 I
mmunol、+ 81+ 1(1970) )とを4
:1の割合で混合し、K15h fenらの方法(Im
munologlcal Method (Acade
nic Press) 、 New York、 39
1. (1979) )を一部改変して、42.6%ポ
リエチレングリコール(平均分子量1.000)を用い
て2分間反応させることにより細胞融合を行った。(2) Cell fusion and cloning: The above mouse tile cells and mouse myeloma P3U 1
(Curr, Top, Microbiol, I
mmunol, +81+1 (1970)) and 4
: 1 and followed the method of K15h fen et al. (Im
Munologcal Method (Acade
nic Press), New York, 39
1. (1979)) was partially modified, and cell fusion was performed by reacting for 2 minutes using 42.6% polyethylene glycol (average molecular weight 1.000).
本細胞を96ウエルマイクロプレートに植え込み、HA
T培地(表1)で19〜14日間培養後、HT培地(表
1)に移行し、さらにフラスコ(25cIA)に培養で
きるようになってからD−MEM培地(表1)で培養し
た。増殖の見られたウェルの培養上清中の抗体価を酵素
抗体法により測定し、適切なウェルから限界希釈法によ
り、求めるノ\イブリドーマのクローニングを行った。These cells were implanted into a 96-well microplate, and HA
After culturing in T medium (Table 1) for 19 to 14 days, the cells were transferred to HT medium (Table 1), and when they could be cultured in flasks (25cIA), they were cultured in D-MEM medium (Table 1). The antibody titer in the culture supernatant of wells in which proliferation was observed was measured by enzyme antibody method, and the desired hybridoma was cloned from appropriate wells by limiting dilution method.
すなわち、マイクロタイタープレートにウェル当たり2
5.000個のマウス腹腔浸出細胞を植え込み、次にD
−MEM培地で、10.5.2.5.1個10.1ml
となるようにハイプリドーマを希釈し、これをマイクロ
クイタープレートに0.1mlずつ植え込み培養した。i.e. 2 per well in a microtiter plate.
5.000 mouse peritoneal exudate cells were implanted and then D
-MEM medium, 10.5.2.5.1 pieces 10.1ml
The hybridoma was diluted so that 0.1 ml of this was inoculated into a microquiter plate and cultured.
4日後にD−MEM培地を0.11111加え、以後4
〜7日に1度培地の半量交換を行った。培養開始後10
〜20日で肉眼で認められるコロニーが形成され、クロ
ーン株を得た。After 4 days, 0.11111 of D-MEM medium was added, and thereafter 4
Half of the medium was replaced once every 7 days. 10 after starting culture
Colonies visible to the naked eye were formed in ~20 days, and a clone strain was obtained.
表1
(3) スクリーニング法
得られたハイブリドーマについて目的とするモノクロー
ナル抗体を産生ずるクローンのスクリーニングを次のよ
うに行った。Table 1 (3) Screening method The obtained hybridomas were screened for clones producing the desired monoclonal antibody as follows.
(イ)方法の説明 以下のようにて酵素抗体法を行った。(b) Explanation of the method Enzyme antibody method was performed as follows.
抗原(各種株化癌細胞または部分精製癌関連抗原または
正常細胞をコートしたマイクロプレートに検体を加え、
37℃で1時間反応させ、洗浄後ペルオキシダーゼ標識
抗マウス免疫グロブリン(I gG+ I gA+ I
gM)ウサギ抗体を加え、さらに37℃で1時間反応
させた。未反応の標識抗体を洗浄後、0−フェニレンジ
アミン液を加え、室温にて300分間反応せた後、2M
硫酸を加えて反応を停止させ、490n+11の吸光度
を測定した。Add the specimen to a microplate coated with antigen (various cancer cell lines or partially purified cancer-related antigens or normal cells,
After reacting at 37°C for 1 hour and washing, peroxidase-labeled anti-mouse immunoglobulin (IgG + I gA + I
gM) Rabbit antibody was added, and the mixture was further reacted at 37°C for 1 hour. After washing the unreacted labeled antibody, 0-phenylenediamine solution was added, and after reacting at room temperature for 300 minutes, 2M
The reaction was stopped by adding sulfuric acid, and the absorbance at 490n+11 was measured.
この方法で各種細胞との反応性を調べた。なお白血球と
の交叉反応性はB−Galactosidase標識抗
体を用いた。その他、ヒト赤血球との交叉反応性は、ヒ
)A、B、0型赤血球を混合し、PHA法で検討した。Using this method, the reactivity with various cells was investigated. Note that a B-Galactosidase-labeled antibody was used for cross-reactivity with leukocytes. In addition, cross-reactivity with human red blood cells was investigated using the PHA method using a mixture of human type A, B, and 0 red blood cells.
Carcinoembryonic antigen
(CE A)との交叉反応性は、CEA感作血球を用い
PHA法で行った。Carcinoembryonic antigen
Cross-reactivity with (CE A) was determined by the PHA method using CEA-sensitized blood cells.
モノクローナル抗体がMKN−45の分泌物抗原か或い
は細胞膜抗原のどちらを認識しているかの検討のために
、MKN−45の培養上清でモノクローナル抗体とMK
N−45細胞そのものとの反応性が阻害されるかどうか
を調べた。In order to investigate whether the monoclonal antibody recognizes the MKN-45 secreted antigen or the cell membrane antigen, the monoclonal antibody and MK
It was investigated whether reactivity with N-45 cells themselves was inhibited.
酵素抗体法を用いたInhibitior+ Te5
tの具体的な方法は、以下の通りである。即ち、ハイブ
リドーマの上清を酵素抗体法でHtrationを行い
、それより判断して適当な希釈倍率を決める。次にMK
N−45培養上清を5〜25倍濃縮したものを原液とし
てt’s、t’s” ・・・・1 : 5”希釈した
ものを、適当に希釈したハイブリドーマ上清にそれぞれ
等量加え、1時間37℃で1ncubationする。Inhibitior+ Te5 using enzyme antibody method
The specific method for determining t is as follows. That is, the supernatant of the hybridoma is subjected to Htration using an enzyme antibody method, and an appropriate dilution rate is determined based on the results. Next, M.K.
N-45 culture supernatant was concentrated 5 to 25 times and used as a stock solution, diluted with t's, t's''...1:5'' and added in equal amounts to appropriately diluted hybridoma supernatant. , incubation for 1 hour at 37°C.
そして、通常の酵素抗体法(target :MKN−
45)の系でassayを行った。Then, the usual enzyme antibody method (target: MKN-
The assay was performed using the system of 45).
(ロ)スクリーニングの流れ
1次スクリーニング: Target cell
(MKN−45)及び正常由来細胞(Plow 200
0 )を用いた酵素抗体法で、MKN−45に対して陽
性でFlow 2000に対して陰性な%1ellを選
抜。(b) Screening flow Primary screening: Target cell
(MKN-45) and normal-derived cells (Plow 200
%1ell that was positive for MKN-45 and negative for Flow 2000 was selected by enzyme antibody method using 0 ).
2次スクリーニング:さらに他の正常由来細胞株及び赤
血球、白血球を用いたassay系ですべてに陰性のw
ellを選抜。Secondary screening: In addition, all assay systems using other normal cell lines, red blood cells, and white blood cells were negative.
Select ell.
3次スクリーニング:以上で選抜された細胞株を2〜3
回クローニングし、その培養上清を多くの癌由来のce
ll 1ineとの反応性を検討するとともに、分泌型
或いは細胞膜型抗原のどちらを認識するかを、酵素抗体
法を用いたInhibition Te5tで同定する
。Tertiary screening: 2 to 3 cell lines selected above
The culture supernatant was cloned twice and the culture supernatant was used to clone many cancer-derived cells.
In addition to examining the reactivity with ll 1ine, whether the antigen is recognized as a secreted type or a cell membrane type is identified using Inhibition Te5t using an enzyme antibody method.
(4)モノクローナル抗体の回収、精製(イ)上記のス
クリーニングによって得られたクローン株を予め0.5
+al/匹プリスタンを投与した4週令以後のBALB
/Cマウス(雄)の腹腔内へ2.0〜3.0 X 10
’ cell/匹移植し、10〜14日後にモノクロー
ナル抗体を高濃度に含む腹水を採取した。(4) Collection and purification of monoclonal antibodies (a) The clone strain obtained by the above screening was preliminarily
+al/mouse BALB after 4 weeks of age when pristane was administered
/C into the abdominal cavity of a mouse (male) 2.0-3.0 x 10
' cells/mouse were transplanted, and 10 to 14 days later, ascites containing a high concentration of monoclonal antibodies was collected.
この腹水を0.9%NaC#液を加え5〜10倍希釈し
た後、硫酸アンモニウムを40%濃度となるように加え
、沈澱画分を分取した。この沈澱画分をなるべく少量の
0.9%Na(1!液で溶解させた後、0.9%NaC
1液を外液として透析した。This ascites was diluted 5 to 10 times by adding 0.9% NaC# solution, then ammonium sulfate was added to a concentration of 40%, and the precipitate fraction was collected. This precipitated fraction was dissolved in as small a amount of 0.9% Na (1! solution as possible, then 0.9% NaC
The first solution was dialyzed as an external solution.
透析終了後、高速液体クロマトグラフィー(TSK−G
ell G−3000511)を行い、IgG画分を得
、精製モノクローナル抗体とした。After dialysis, high performance liquid chromatography (TSK-G
ELL G-3000511) to obtain an IgG fraction, which was used as a purified monoclonal antibody.
(ロ)本りローン株は、BSA含無血清培地中でも増殖
させることができる。すなわち、0.5%BSA含無血
清培地(RITC55−9培地)中で増殖させ、培養上
清を集めた。この上清に硫酸アンモニウムを40%濃度
となるように加え、沈澱画分を分取し、これに0.9%
NaC1液を加え、溶解させた後、さらに硫酸アンモニ
ウムを40%濃度となるように加え沈澱画分を分取した
。この沈澱画分をなるべく少量の0.9%NaCJ液で
溶解させた後、0.02M生理的リン酸緩衝液を外液と
して透析した。透析終了後、この溶液を再び抗生胎児血
清抗体(ウサギ)を結合した5epharose4Bカ
ラムに通した後DEAE−Cellulofineカラ
ムにDEAE−Cel 1ulof ineクロマトグ
ラフィーの最初のピーク部分を精製モノクローナル抗体
とした。(b) This Lorne strain can be grown in a BSA-containing serum-free medium. That is, the cells were grown in a serum-free medium containing 0.5% BSA (RITC55-9 medium), and the culture supernatant was collected. Add ammonium sulfate to this supernatant to a concentration of 40%, separate the precipitate fraction, and add 0.9%
After adding NaCl solution and dissolving it, ammonium sulfate was further added to a concentration of 40% and the precipitate fraction was collected. This precipitated fraction was dissolved in as small a volume of 0.9% NaCJ solution as possible, and then dialyzed against 0.02M physiological phosphate buffer as an external solution. After the dialysis, this solution was again passed through a 5epharose 4B column bound with an antibiotic fetal serum antibody (rabbit) and then transferred to a DEAE-Cellulofine column.The first peak of DEAE-Cellulofine chromatography was used as a purified monoclonal antibody.
(5)モノクローナル抗体の特性
かくしてスクリーニングされたクローンの産生するモノ
クローナル抗体の性状は、表2及び表3のとおりである
。免疫グロブリンのクラスはオフタロニー法で検定した
。(5) Properties of monoclonal antibodies The properties of the monoclonal antibodies produced by the clones thus screened are as shown in Tables 2 and 3. Immunoglobulin classes were assayed by the Ophthalony method.
表2 ※CD、は1nbitionがかからなかった。Table 2 *The CD didn't cost 1nbition.
表3 : RP)IA試薬と各種ヒト由来株化癌細胞培
養上清と特許出願人 株式会社 ミドリ十字
手続補正書印釦
昭和60年5月20日
昭和60年特許願第8129号
2、発明の名称
モノクローナル抗体
3、補正をする者
事件との関係 特許出願人
氏名(名称) 株式会社 ミドリ十字
4、代理人■541
住所 大阪市東区平野町4丁目53番地3ニューライフ
平野町406号
電話(06) 227−1156
明細書の「発明の詳細な説明」の欄
6、補正の内容
(3)同書第9頁、表1の「ソディウム ピバレート」
を「ソディウム ピルベート」に訂訂正する。Table 3: RP) IA reagent and various human-derived cancer cell line culture supernatants and patent applicant Midori Juji Co., Ltd. Procedural amendment stamp button May 20, 1985 Patent Application No. 8129 2 of 1985, Invention Name Monoclonal Antibody 3, Relationship with the person making the amendment Patent applicant name Midori Juji Co., Ltd. 4, Agent ■541 Address New Life Hirano-cho 406, 4-53-3 Hirano-cho, Higashi-ku, Osaka Telephone (06) ) 227-1156 "Sodium pivalate" in Column 6 of "Detailed Description of the Invention" of the specification, contents of amendment (3) Table 1, page 9 of the same book
is corrected to "sodium pyruvate".
(4)同書第11頁、第10行の「上清」の前に「培養
」を加入する。(4) Add "culture" before "supernatant" on page 11, line 10 of the same book.
(5)回書第11頁、第15行の「上清」の前に「培養
」を加入する。(5) Add "culture" before "supernatant" on page 11, line 15 of the circular.
(6)同書第12頁、第8行の「検討する」の次に「〔
測定はCEL I SA法(ア ニ二一ディメンション
イン バイオロジカルアナリシス、第376頁、ブレ
ナム プレス。(6) On page 12 of the same book, line 8, after “consider”, “[
Measurement was performed using the CELISA method (Ani21 Dimensions in Biological Analysis, p. 376, Blenheim Press).
ニューヨーク、ロンドン、 1980年:ANewDi
n+ension in Biological An
alysis+ p、376+Plenum Pres
s+ New York+ London+ 1980
)によった。〕」を加入する。New York, London, 1980: ANewDi
n+ension in Biological An
lysis+ p, 376+Plenum Pres
s+ New York+ London+ 1980
) according to ]” is added.
(7)同書第14頁、下から第2行のrRPHA試薬と
各種ヒト由来株化癌細胞培養上清と」を「各種ヒト由来
株化癌細胞と」に訂正する。(7) On page 14 of the same book, in the second line from the bottom, "rRPHA reagent and culture supernatant of various human-derived cancer cell lines" is corrected to "various human-derived cancer cell lines."
(8)同書第11頁全文を別紙の通りに訂正する。(8) The entire text on page 11 of the same book is corrected as shown in the attached sheet.
以上
(別紙)
特許出願人 株式会社 ミドリ十字
手 続 ネ甫 正 書(方式)
%式%
■、事件の表示
昭和60年特許願第8129号
2、発明の名称
モノクローナル抗体
3、補正をする者
事件との関係 特許出願人
氏名(名称) 株式会社 ミドリ十字
4、代理人■541
住所 大阪市東区平野町4丁目53番地3ニューライフ
平野町406号
電話(06) 227−1156
b、悄止卵賃の日1丁
6、補正の対象
明細書の「発明の詳細な説明」の欄
7、補正の内容
(1)明細書第2頁、第15行のr Milstein
Jを「ミルスティン(Milstein) jに訂正
する。Above (Attachment) Patent Applicant: Midori Juji Shisho Co., Ltd. Neho Official Book (Method) % Formula % ■, Indication of the Case Patent Application No. 8129 of 1985 2, Title of Invention Monoclonal Antibody 3, Person Making Amendment Case Relationship with Patent Applicant Name Midori Juji Co., Ltd. 4, Agent 541 Address 406 New Life Hirano-cho, 4-53-3 Hirano-cho, Higashi-ku, Osaka Telephone: (06) 227-1156 b, Tetsuto Egg Ren Day 1-6, "Detailed Description of the Invention" column 7 of the specification to be amended, Contents of the amendment (1) r Milstein on page 2, line 15 of the specification
Correct J to "Milstein j.
(2)回書第2頁、第16〜17行のr (K6hle
r、 G。(2) Circular page 2, lines 16-17 r (K6hle
r, G.
and M目5tein+ C,: Naturelを
「〔ケーラー。and Mth 5tein + C,: Naturel as “[Kohler.
ジーおよびミルスティン、シー:ネーチャー(K5hl
er、 c、 and Milstein、 C,:
Nature )Jに訂正する。Gee and Milstein, C: Nature (K5hl
er, c, and Milstein, c:
Nature) Correct to J.
(3)同書第5頁、第1行のr Freund Com
pleteadjuvantJを「完全フロインドアジ
ュバント(Freund Complete Adju
vant)Jに訂正する。(3) r Freund Com on page 5, line 1 of the same book.
pleteadjuvantJ is called ``Freund Complete Adjuvant''.
vant) Corrected to J.
(4)同書第5頁、第10行のr G、 K5hler
(Nature Jを「ジー、ケーラー(G、に5h
ler) (ネーチャー (Nature) Jに訂正
する。(4) r G, K5hler on page 5, line 10 of the same book
(Nature J is ``G, Köhler (G, 5h
ler) (Nature) Correct to J.
(5)回書第6頁、最終行〜第7頁、第1行のr co
njugateさせtargetingtherapy
(ターゲティングセラピイ)」を「コンジュゲートさせ
、ターゲティングセラピイ(targeting th
erapy)Jに訂正する。(5) Circular page 6, last line - page 7, first line r co
njugate targeting therapy
(targeting therapy)" to "conjugate, targeting therapy
erapy) Correct to J.
(6)同書第7頁、第11行のr Freund Co
+wplete^djuvantJ ヲr完全フロイン
ドアジュバント」に訂正する。(6) r Freund Co, page 7, line 11 of the same book.
+wplete^djuvantJ worr complete Freund's adjuvant" is corrected.
(7)同書第7頁、第17行のr (Curr、 To
p、 Microbiol、 Immunol、+ J
を「〔カレント トビカルマイクロバイオロジカル イ
ムノロジー(Curr 。(7) r (Curr, To
p, Microbiol, Immunol, +J
``Current Tobical Microbiological Immunology (Curr.
Top、 Microbiol、 Immunol、)
+Jに訂正する。Top, Microbiol, Immunol,)
Correct to +J.
(8)同書第7頁、第18行のrK5hlenJを「ケ
ーラー(K6hler) Jに訂正する。(8) On page 7, line 18 of the same book, rK5hlenJ is corrected to "K6hler J.
(9)同書第7頁、第19〜20行のr (Immun
ologtcal Method (Acadenic
Press)+ New York、Jを「〔イムノ
ロジカル メソッド(アカデミツク プレス)、ニュー
ヨーク (Immunological Method
(^caden+ic Press)、 New Y
ork)+ Jに訂正する。(9) r (Immun
ologtcal Method (Acadenic
Press) + New York, J.
(^caden+ic Press), New Y
ork) + J.
(10)同書第10頁、第17行のrB−Galact
osidaseJを「B−ガラクトシダーゼ(B−Ga
lactosidase) Jに訂正する。(10) rB-Galact on page 10, line 17 of the same book
osidaseJ as “B-galactosidase (B-Ga
lactosidase) Corrected to J.
(11)回書第10頁、最終行のr Carcinoe
mbryonicantigen Jを「癌胎児性抗原
(Carcinoembryonicantigen)
Jに訂正する。(11) Circular page 10, last line r Carcinoe
Carcinoembryonic antigen J
Correct to J.
(12)回書第11頁、第8行のrlnhibitto
n Te5tjを「インヒビジョン テスト(Inhi
bition Te5t) jに訂正する。(12) Circular page 11, line 8 rlnhibitto
n Te5tj as “inhibition test”
bition Te5t) Correct to j.
(13)同書第11頁、第10行のrtitratio
n Jを「タイトレージョン」に訂正する。(13) rtitratio on page 11, line 10 of the same book.
n Correct J to "tight region".
(14)回書第11頁、第15〜16行のr 1ncu
bationJを「インキュベーション」に訂正する。(14) Circular page 11, lines 15-16 r 1ncu
Correct bationJ to "incubation".
(15)回書第11頁、第16行のr targetJ
を「ターゲット」に訂正する。(15) r targetJ on page 11, line 16 of the circular
is corrected to "target".
(16)同書第11頁、第17行のrassay Jを
[アッセイ (assay) Jに訂正する。(16) In the same book, page 11, line 17, rassay J is corrected to [assay J].
(17)同書第11頁、第19行のrTarget c
ell Jを「ターゲットセル」に訂正する。(17) rTarget c on page 11, line 19 of the same book
Correct ell J to "target cell".
(18)同書第12頁、第2行のr well Jを「
ウェル」に訂正する。(18) r well J on page 12, line 2 of the same book as “
Corrected to "Well."
(19)回書第12頁、第4行のrassay jを「
アッセイ」に訂正する。(19) Change rassay j on page 12, line 4 of the circular to “
Correct to "assay".
(20)回書第12頁、第5行のr well Jを「
ウニ(21)回書第12頁、第8行のr cell l
1neJを「セルライン」に訂正する。(20) Change r well J on page 12, line 5 of the circular to “
Uni (21) circular page 12, line 8 r cell l
Correct 1neJ to "cell line".
(22)回書第12頁、第10行のrlnhibiti
on Te5tJを「インヒビジョン テスト」に訂正
する。(22) Circular page 12, line 10 rlnhibiti
Correct on Te5tJ to "inhibition test".
(23)同書第13頁、第18行のrSepharos
e Jを「セファロース」に訂正する。(23) rSepharos on page 13, line 18 of the same book
e Correct J to "Sepharose".
(24)同書第13頁、第19行のrDE^E−Cel
lulofineJt−rDEAE−セルロファイン」
に訂正する。(24) rDE^E-Cel on page 13, line 19 of the same book
lulofineJt-rDEAE-Cellulofine”
Correct.
(25)同書第14頁、第1行のr DEAR−Cel
lulofineJG rDEAE−セルロファイン」
に訂正する。(25) r DEAR-Cel on page 14, line 1 of the same book
lulofineJG rDEAE-Cellulofine”
Correct.
(26)同書第14頁、下から第3行の「※CD、は1
nbi tionがかからなかった。」を「※:インヒ
ビション テストにおいて、インヒビジョンがかがらな
かった。」に訂正する。(26) On page 14 of the same book, in the third line from the bottom, “*CD” is 1
nbi tion did not apply. " should be corrected to "*: In the inhibition test, inhibition did not occur."
以上 手 続 争甫 正 書1発) 昭和60年6月20日that's all 1 copy of the original text) June 20, 1985
Claims (1)
して作成されたハイブリドーマの産生する以下の特性を
持つモノクローナル抗体; (1)Igクラス(Light鎖):IgG_1(K)
(2)認識抗原タイプ:細胞表面抗原 (3)癌細胞との反応性:次の癌細胞に対して陽性を示
す。 食道癌(TE−3)、肺癌(PC−3)、胃癌(MKN
−45)、胃癌(KATO−III)、肝癌(HEK)。[Scope of Claims] A monoclonal antibody produced by a hybridoma prepared using a poorly differentiated gastric adenocarcinoma-derived cell line (MKN-45) as an immunogen and having the following characteristics: (1) Ig class (light chain): IgG_1 (K)
(2) Recognized antigen type: Cell surface antigen (3) Reactivity with cancer cells: Shows positivity for the following cancer cells. Esophageal cancer (TE-3), lung cancer (PC-3), gastric cancer (MKN)
-45), gastric cancer (KATO-III), and liver cancer (HEK).
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60008129A JPS61167699A (en) | 1985-01-19 | 1985-01-19 | Monoclonal antibody |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP60008129A JPS61167699A (en) | 1985-01-19 | 1985-01-19 | Monoclonal antibody |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS61167699A true JPS61167699A (en) | 1986-07-29 |
JPH046358B2 JPH046358B2 (en) | 1992-02-05 |
Family
ID=11684675
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP60008129A Granted JPS61167699A (en) | 1985-01-19 | 1985-01-19 | Monoclonal antibody |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS61167699A (en) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61250000A (en) * | 1985-04-27 | 1986-11-07 | Green Cross Corp:The | Monoclonal antibody |
JPS6236398A (en) * | 1985-08-12 | 1987-02-17 | Green Cross Corp:The | Monoclonal antibody |
US6461824B1 (en) * | 1988-09-06 | 2002-10-08 | Xoma Technology Ltd. | Production of chimeric antibodies with specificity to human tumor antigens |
-
1985
- 1985-01-19 JP JP60008129A patent/JPS61167699A/en active Granted
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61250000A (en) * | 1985-04-27 | 1986-11-07 | Green Cross Corp:The | Monoclonal antibody |
JPS6236398A (en) * | 1985-08-12 | 1987-02-17 | Green Cross Corp:The | Monoclonal antibody |
US6461824B1 (en) * | 1988-09-06 | 2002-10-08 | Xoma Technology Ltd. | Production of chimeric antibodies with specificity to human tumor antigens |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH046358B2 (en) | 1992-02-05 |
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