【発明の詳細な説明】
本発明は鎮痛作用を有するテトラペプチドに関する。
従来、脳内直接投与によってモルフアン様作用を示すエ
ンケフエリン（ｅｎｋｅｐｈａｌｌｎ ）と呼ばれるペ
ンタペプチドが知られているが、この物質は静脈内投与
では鎮痛作用を示さない。一方、３１個のアミノ酸から
成るβ−エンドルフィン（ｅｎｄｏｒｐｈｉｎ ）は静
脈内投与によっても鎮痛作用を示すことが知られている
が、その製造は困難であり、医薬として大量に供給する
ことは困難である。このため、製造が容易な低分子であ
って、静脈内投与や皮下投与でも充分な鎮痛作用を有す
る化合物を得るべく種々の検討が成されているが、末だ
満足すべきものは見られない。
さらに１カエルの皮膚から単離されたデルモルフィン（
ｄｅｒｍｏｒｐｈｉｎ）と呼ばれるヘグタベブチドは脳
内投与および末梢投与において強力な鎮痛作用を有し、
その構造中テトラペプチドが作用発現のための最小構造
であると言われている。
上記技術状況ＫｆＩＭみ、本発明者らは種々検討を重ね
たところ、テトラペプチドの特定の化合物が上記の目的
に適合することを知見し、この知見に基づいてさらに研
究を行った結果、本発明を完成するに到った。
すなわち、本発明は一般式（ｒ）
Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−（Ｔｔｚ）（）ｌｙ
−（ＩＲｍ （１）（式中、Ｒ１およびＲ２は水素原子
または低級アルキル基を示す）で表わされるテトラペプ
チドに関するものである。
なお、本明細書中において使用されるアミノ酸残基およ
びその誘導体の略号は、当該分野の慣用にならったもの
であるが、それぞれ次のアミノ酸残基を意味する。
’ｒｙｒ ：チロシン
Ａｒｇ：アルギニン
Ｐｈｅ ：フェニルアラニン
Ｇｌｙ ニゲリシン
Ｓａｒ ：サルコシン（Ｎ−メチルグリシン）従って、
本発明の一般式（Ｔ）で示されるテトラペプチドは下記
の化学式で表わしてもよい。
（式中、Ｒ１およびＲ２は前記定義と同“）なお、本明
細書中でアミノ酸またはその残基゛を上記略記法で表示
する場合、特に明記しない限りＬ一体を意味し、■）一
体については■〕を明記′する。・
また、本文中で常用される化合物、保護基。
試薬等を下記の略号で表示する。
ＤＣＣ二Ｎ、Ｎ′−ジシクロへキシルカルボジイミドＨ
ＯＢｔ：１−ヒドロキシベンツトリアゾールＢＯＣ：ｔ
−ブトギシ力ルボニル
Ｔｏｓニドシル
ＤＭＦニジメチル、ホルムアミド
Ｍｅ エステル
Ｅｔ ：エチル
Ｐｒ ：プロビル
上記一般式（ｒ）中の）（１およびＲ１で示される低級
アルキル基は炭素数１ないし６のアルキル基であり、そ
の具体的な例と１．では、メチル基。
エチル基、ｎ−または１−プロピル基、ｎ−１１’−、
ａθＣ−またはｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基
などのアルキル基が皐げられ、なかでもメチル基、エチ
ル基、プロピル基である場合が好ま１．い。
従って、本発明のテトラペプチドとしては、カルボン酸
末端（Ｃ−末端）が遊離であるものおよびその低級アル
キルエステルであるものの両者が含まれ、それらの具体
例を示せば、以下の様である。
■Ｈ−Ｔ７ｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ７Ｇ１ｙ−ＯＨ■Ｈ
−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−○Ｅｔ■Ｈ−
Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ｆｌｌｙ−０−ｎ−Ｐｒ
■Ｈ−Ｔ’ｙｒ −Ｄ ＝Ａｒｇ −Ｐｈｅ −Ｓａｒ
−ＯＨ■Ｈ−Ｔｙｒ −Ｄ −Ａｒｇ −Ｐｂｅ −
Ｓａｒ −ＯＭｅ■Ｈ−Ｔｙｒ −Ｄ −Ａｒｇ −、
、Ｐｈｅ −Ｓａｒ ７０Ｅｔさらに、本発明のテトラ
ペプチドとしては、アミノ基、カルボキシル基が遊離で
あるものの他に、それらの薬理的に、許容される塩も本
発明に包含される。該塩は抽出や精製条件により酸との
塩、塩基との塩として存在する。このような塩基との塩
としては、ナトリウム、カリウム等のアルカリ族元素お
よびマグネシウム、カルシウム等のアルカリ土族元素と
の塩、アンモニアやアルキルアミン（メチルアミン等）
との塩の如き無機ない１．有機塩基との塩が挙げられる
。
また、酸との塩と１〜ては、塩酸、硫酸、臭化水素酸、
硝酸、リン酸等の無機酸の塩、および酢酸、乳酸、酒石
酸、コハク酸、マレイン酸、マロン酸、フマール酸、メ
タンスルホン酸、フタール酸等の有機酸の塩が挙げられ
る。
本発明の一般式（Ｉ）の化学構造を有するテトラペプチ
ドを製造するには、目的化合物（Ｔ）を構成するアミノ
酸またはそのペプチドとその残部を構成し得る化合物を
ペプチド合成手段によって縮合させることに９しって行
う。核合成手段は、任意の公知方法に従って行うことが
でき、例えば泉屋信夫著「ペプチド合成」丸善■（１９
７５年） 、 Ｍ、 ＢｏｄａｎｓｋｙおＪ゛びＭ、
Ａ、 ０ｎｄｅｔｔｉ著「ペプチド・シンセシスｊ （
Ｐｅｐｔｉｄｅ ５ｙｎｔｈｏｓｉｓ ）Ｉｎｔｅ’ｒ
５ｃｉｅｎｃｅ社（１９６６年）等圧記載された方法
１例えばり１ｊライド法、ｒｆ１無水無水物理合酸無水
物法、ＤＣＣ法、カルボジイミダゾール法、アジド法、
ＨｏＢｔを用いる方法、活性エステル法、ＮＣＡ法な
どが挙げられる。
本縮合反応を行う前に１それ自体公知の手段によって原
料の反応に関与しないカルボニル基、アミン基を保護し
たり、また反応に関与するカルボキシル基、アミノ基を
活性化してもよい。
このような保護および活性化の態様としては次のものが
例示される。
まず、原料のカルボキシル基は、エステル（アルキル、
ベンジル、ｐ−、ニトロベンジル等のエステル）、金属
塩（ナトリウム、カリウム塩等）、ｔ−アルキルアミン
塩（トリ、エチルアミン塩等）の形で保護することがで
きる。また、原料のアミノ基の保護基としては、ベンジ
ルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ト
シル基、ベンジル基等が挙げられる。
さらに、チロシンの水酸基の保護基としては、上記アミ
ノ基の保護基の他にベンジル、ｔ−ブチル等のエーテル
が例示される。
次に、原料のカルボキシル基の活性化されたものとして
は、酸ハライド、酸無水物、活性エステル（ｔｒｏｓｉ
、 、ｔｑ−ヒドロキシサクシンイミド、Ｎ−ヒドロキ
シフタールイミド、ｐ−二トロフェノール等のアルコー
ル類とのエステル）などが挙げられる。また、原料のア
ミン基の活性化されたものとしては、対応するリン酸ア
ミドなどが例示される。
本縮合反応は、溶媒の存在下に行うことができる。かか
る溶媒としては、ペプチド縮合反応に使用し得る溶媒の
なかから選択され、例えば、ＤＭＦ 、ジメチルスルホ
キシド（ＤＭＳＯ）、クロロホルム、ジクロロメタン、
テトラヒドロフラン、ジオキサン、ピリジン、酢酸エチ
ルあるいはこれらの混合物等が挙げられる。反応は通常
−２０Ｃ〜＋５０ｃ程度であり、反応時間は通常３０分
〜４８時間程度である。
上記縮合反応によって得られた化合物は必要に応じて保
護基の脱離反応に付される。この脱離反応においては、
ペプチド縮合に影響を与えない手段としてペプチド合成
化学の分野における脱離手段を採用できるが、該手段は
脱離すべき保護基の種類に応じて酸分解、アルカリ分解
、接触還元による方法が適宜選択される。
例えば、酸分解によっては、塩酸、儲酸等の無機酸およ
び酢酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、トリフ
ルオロメタンスルホンＨ等の有機酸が採用され、ｔ−ブ
トキシカルボニル基、トシル基、カルボベンゾキシ基等
の保護基を脱離することができる。この際、チオアニソ
ール、アニソール、フェノール等の如きカチオン補１足
剤の添加が有効である。また、アルカリ分解忙よっては
、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの強塩基が採
用され、アルキルエステル、ベンジルエステル等のエス
テル残基を脱離することができる。接触還元は、パラジ
ウム黒、パラジウム炭素、白金等を触媒として用い、主
としてカルボベンゾキシ基、ベンジル基を脱離する目的
で採用される。また、これらの方法の他に、アンモニア
中ナトリウムによる還元も挙げられる。
かくして製造されたテトラペプチドは反応路了後、自体
公知のペプチド分離手段（抽出１分配、再結晶、再沈殿
、カラムクロマトグラフィー等）ＶＣよって採ｙ１ｙさ
れる。さらに、採取したテトラペプチド（Ｔ）は常法に
従テ）゛〔前述の如き有機酸、無機酸、有機塩基または
無機塩基を作用させることによって、塩の形として得る
ことができる。
次に、本発明のテトラペプチド°（１）の薬理実験例を
挙げる。使用薬物とＩ、てけ下記化合物をリンゲル液に
溶解したものを使用した。
本発明の化合物
■ Ｈ−Ｔ’ｙｒ−Ｄ−、Ａｒ）（−１〕ｈｅｆ−Ｇｌ
ｙ−Ｏｎ （化合物Ｉ）■ ）ｉ−Ｔｙｒ −Ｄ−Ａｒ
ｇ−Ｐｈｅ −Ｇ］、ｙ−ＯＦｔ （化合物■）■ＩＩ
−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−円）ｅ−＋１１．Ｙ−０−ｊ−
１ノｒ（化合物ＩＩＩ）
■ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−８ａｒ−０１１
（化合物ＩＶ）■ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ＝Ｐｈｅ−
８ａｒ”ＯＭｅ （化合物■）■ Ｈ−’Ｉｌ’ｙｒ
−１）−Ａｒｇ −Ｐｂｅ−Ｇａ、ｒ −０Ｅｔ （化
合物ｖｒ’）対照化合物
塩酸モルフイン（ｍｏｒｐｈｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃ＋１
．１．ｏｒｊｄｅ）］ ０
また、実験動物は、体重２０〜２４ｇのｄｄＹ系雄性マ
ウス（静岡系実験動物農業協同組合）を用いた。
１１１ Ｔａ１ｌ −ｐｒｅｓｓｕｒｅ法Ｇｒｅｅｎら
の方法に基づき、薬物皮下投与後マウスの尾根部に１０
ｍＷｇ／ｓｅａの速度で圧刺激を加え、もがき、刺激部
位への咬みつきなどの仮性疼痛反応を示す圧力を投与１
８０分後まで測定し、仮性疼痛反応閾値（ｍｌ１ｇ ）
とした。
この閾値をもとに対照群に対する薬物投与群の仮性疼痛
反応抑制率をめた。各薬物の５０％抑制率（ＥＤ５０値
）はＬｉｔｃｈｆｉｅｌｄ−Ｗｉｌｃｏｘｏｎ法により
算出したＣ表１参照）。
本発明の化合物は上記実験において塩酸モルフインより
２．６〜１１．３倍強力な鎮痛活性を示し、かつ活性の
持続は塩酸モルフインをしのぎ、投与１８０分後におい
ても消失しなかった。
＋２） Ｔａ１ｌ −ｆｌｉｃｋ法
薬物の法王物与後、マウスの尾矢部に輻射１
熱を照射し、熱を照射してから尾を動かすまでの逃避反
応時間（秒）を薬物投与１８０分後まで測定し、仮性疼
痛反応閾値とした。
この閾値をもとに対照群に対する薬物投与群の仮性疼痛
反応抑制率をめた。各薬物の５０％抑制率（ＫＤｓｏ値
）はＬｉ ｔｃｈｆｉｅｌｄ−Ｗｊ １．ｃｏｘｏｎ法
により算出した（表１参照）。
本発明の化合物は上記実験において、塩酸モルフインと
比較し２．９８〜１５．７倍の鎮痛活性を示した。
（３１Ｐｈｅｎｙｌｑｕｉｎｏｎｏ Ｗｒｌ、ｔｈｉｎ
ｇ法Ｐｈｅｎｙｌｑｕｉｎｏｎｅを０．５％エタノール
溶液にとかし０．０２％Ｐｂｏｎｙｌｑｕ１ｎｏｎｏ溶
液を調整した０このＰｈｅｎｙｌｑｕｉｎｏｎｅ溶液０
．１ｍ／Ｌｏｇを薬物皮下投与３０分後忙マウスの腹腔
内に投与し、投与直後から２０分間のＷｒｉｔｈｉｎｇ
数を測定し、このＷｒｉｔｈｉｎｇ回数について対照群
に対する抑制率をめた。各薬物の５０％抑制率（ＥＤｓ
ｏ値）はＬｉｔｃｂｆｉ、ｅｌｄ−Ｗｉｌｃｏｘｏｎ法
忙より算出した（表１参照）。
２
本発明の化合物は上記実験において、塩酸モルフインよ
り４〜３０．６倍強い鎮痛活性を示した。
さら釦、比較のため化合物■を経口投与した場合につい
て、上記実験（Ｔａｉｌ −ｆｌｉｃｋ法およびＰｈｅ
ｎｙｑｕｉｎｏｎｅ Ｗｒｉｔｈｉｎｇ法）を行いＥＤ
ｓ。
値をめた（表２参照）。
表１ 皮下投与におけるＥＤａｏ値（■Ａ１〕 ３
表２ 経口投与におけるＩ＋３Ｄｍｏ値（ｒａｇ、７ｋ
ｇ）本発明の化合物は、上記した様にマウスを使用する
Ｔａ１ｌ ｐｒｅｓａｕｒｅ法、 Ｔａ１１．−ｆｌｉ
ｃｋ法およびＰｈｅｎｙｌｑｕｉｎｏｎｅ ｗｒｉｔｈ
ｉｎｇ法のいずれにおいても塩酸モルフインよりも強力
な鎮痛活性を示すことから、鎮痛薬として有用なもので
ある。従って、本発明の化合物はヒト、サル、イヌ、ウ
サギ、ラット、マウス等の哺乳動物における痛み（殊に
ガン性疼痛等の激痛）に対して鎮痛剤として有用である
。また、本発明の化合物の毒性は低く、薬効発現量をは
るかＫ」：まわるものである。
本発明の化合物の投与量は、一般に０．０５〜ｌＯｊ／
ｋｇが適量である。本発明の化合物は主として非経口的
に投与（例、静脈内投与、皮下段］ ４
与、直腸投与）されるが、場合によって経口投与も可能
である。従って本発明の化合物を鎮痛剤として用いる場
合の剤型としては、注射剤。
点滴用剤、坐剤等の非経口剤が最も好ましい剤型である
が、これらの他に、バッカル剤、トローチ剤等の粘膜投
与のための剤型あるいは錠剤、散剤等の経口投与のため
の剤型であってもよい。この様な剤型を有する製剤は、
製剤学的分野における自体公知の手段を用いて製造され
る。
例えば、注射剤の製造にあたっては、生理食塩水単独あ
るいは適宜の溶解剤（例、多価アルコール類）を併用し
た溶剤に本発明の化合物の濃度が１〜３ ｏ ａｙ／＋
ｎ＋となる様に溶解したものをアンプルに封入した後、
加熱滅菌処理を施こすという方法が採用される。
以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。なお、本発明の化合物の純度を確認するための薄層ク
ロマトグラフィーにおいては、Ｋｉｅｓｅｌ ｇｅｌ
ＧＦ２５４ （メルク社１に！りを用い、各Ｖ値（ｌ／
１およびＲｆ＋１）についての展開溶媒５
は次の通りである。
＋Ｉ／ｌ：プタノール：酢酸：水（４：１：５）実施例
Ｉ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇ１．ｙ−ＯＨ
の製造１） Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ｐｈｅ−
Ｇｌｙ−Ｏｇｔの製造Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＥｔ
（３，１５ｇ ）を４Ｎ−塩酸／ジオキサン溶液（１
５ｍ）Ｋ溶解したものを室温に３０分放置後減圧濃縮し
た。この残渣を無水エーテルで処理して得た不溶物を水
酸化カリウムデシケータ中で減圧乾燥した。本物質なり
ＭＦ（８ｍｌ ） Ｉｃ溶解し、＋３ｎｃ −１）−Ａ
ｒｇ （Ｔｏｓ ’） −ｏｒＴ （３，４ｇ）および
ＨｏＢｔ（］、２２ ｇ ）を加え、ＯＣに氷冷したの
ち、さらにトリエチルアミン（］、、４ ｍｌ ）およ
びＤｃｅ（１，７６ｇ）を加えた。この混合物を５Ｃで
一昼夜攪拌後生じたジシクロへキシルウレアをｒ別、Ｐ
液を水（５０＋ｍｌ ）で希釈後酢酸エチルで２回抽出
した。抽出液を］Ｎ−クエン酸、水、ＩＮ−重盲、水で
順次３回ずつ洗浄後硫酸マグネシウムで乾燥した。減Ｉ
Ｅ濃縮に ６
よって得られた残留物を酢酸エチルから再結晶し、融点
１１０°〜１１２Ｃの無色粉末４．５ｇ（８６％）を得
た。
比旋光度： 〔α”］） ２ Ｑ、 ４５°（ｃ＝１．
メタノール）元素分析： Ｃ３ｘＨ４４ＮａＯｓＳ
計算値： Ｃ，５６，３５：Ｈ０６，７１；Ｎ、１２．
７２（％）実験値： Ｃ，５６，５６：Ｈ，６，６５：
Ｎ、１２．６６（％）ｆｆ） Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａ
ｒｇ（’ｒｏｓ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＥｔの製造上記
１）で得たＢｏＣ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｙ−ＯＥｔ。
（］、、 ］５２ ｇ ）を、上記１）と同様の方法で
４Ｎ−塩酸／ジオキサン溶液で処理した。得られたＴ（
ＣＩ ａＨ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｐｂｅ−Ｇｌｙ−
ＯＥｔをＤＭＦ（６ｍｌ）に溶解し、これにｎｏｃ−Ｔ
ｙｒ −ＯＨ（６２０ｑ）およびＨｏＢ１ （２９７ｍ
ｇ）を加えＯＣに冷却後、トリエチルアミン（０，３２
ｍｔ）およびＤＣＣ（４６５■）を加え５Ｃで一昼夜攪
拌した。反応後、生成したジシクロへキシルウレアをＰ
別後、上記１）忙おける場合と同様に処理し、無色固体
を得た。
水晶を２−プロパツールから再結晶し、融点 ７
１６６°〜］６９Ｃの粉末１．、’ｉ’１ｇ（９５％）
を得た。
比旋光度： 〔α］％’−７．５３°（Ｃ−１，、メタ
ノール）元素分析： ＣａｏＨａｓＮｖＯ１ａＳ計算値
： Ｃ，５Ｂ、３１；Ｈ，６，４８；Ｎ、１１．．９０
（％）実験値：Ｃ，５Ｂ、２９：Ｈ，６，６１，；Ｎ、
１１．４３（％）１） Ｂｏａ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ（
’ｒｏ８）−Ｐｈｅ−（）ｌｙ−０７４の製造上記Ｉ）
で得たＢｏｃ−’ｒｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｐｈ
ｅ−Ｇ］、ｙ−ｏＥｉ （５５３■）をメタノール（３
謙Ｉ）および水（ｏ、５ｍ１）に溶解し、これに２Ｎ−
水酸化ナトリウム０．３５ ＋ｕｌを加え室温で４０分
攪拌した。
反応後、水（２０１１１）で希釈後酢酸エチルで２回洗
浄し、水層ｅこ氷冷下クエン酸を加え、釣用３に調整し
た。この時の析出物を酢酸エチルで２回抽出し、抽出液
を水で５回洗浄接硫酸マグネシウムで乾燥した。酢酸エ
チルを減圧留去し、その残留物を酢酸エチル−石油エー
テルから再沈殿し、融点１３５°〜１４．０ ［の無色
粉末４６０Ｉｖ（８６％）を得た。
１ 日
比旋光度：〔α］’、’−３．６０°（Ｃｍ１．メタノ
ール）元素分析： Ｃｓ＠Ｈ４ｏＮ？０ｘｏＳ計算値：
Ｃ，５７，３４：Ｈ，６，２１；Ｎ、１２．３２（％
）実験値：Ｃ，５６，９６：Ｈ，６，２０：Ｎ、１１．
９２（％）Ｉｖ） ！（−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ
−Ｇｌｙ−ＯＨの製造上記＋ｕ）で得たＢｏｃ−Ｔｙｒ
−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ ） −Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨ
（１５０■）を０−クレゾール（５０■）。
チオアニソール（０，５＋ｎｔ ）とともにトリフルオ
ロ酢酸（２ｍｌ）に溶解し、室温に６０分間放置した。
反応後、トリフルオロ酢酸を減圧留去後残留物を無水エ
ーテルで処理した。無水エーテル不溶物を減圧乾燥後、
水（５ｍｌ ） Ｉ／Ｃ溶解し、Ｄｏｗｅｘ Ｉ Ｘ
２樹脂（酢酸型、約３ｇ）を加え室温で３０分間攪拌後
ｒ過した。ｒ液を凍結乾燥したものを水（１ｍｌ ）に
溶解し、カルボキシメチルセファロース樹脂充填カラム
（２Ｘ １２ ｄｌｌ ）に充填した。次いで、水（３
００ｍｔ 、混合槽）から始めて最終濃度０．１２モル
−ピリジン・酢酸緩衝液（Ｆｌ（５，１、３００ｍ 、
補給槽）となる］ ９
まで直線型勾配法によって溶出した。溶出液の６ｍｌず
つを分取した各フラクションについて２８０ｎｍの吸光
度を測定するととＫよって目的物の溶出位置を検査した
。かく１−て、フラクション番号６０−６８を合１．た
ものを凍結乾燥ｊ７、無色粉末５６■（４３％）を得た
。本物質はニンヒドリン反応、パクリ反応、坂口反応、
クロル−０−トリジン反応がそれぞれ陽性。
Ｒ／ｌ Ｏ，８２Ｒ／ｌ Ｏ，５７
比旋光度： ［１’ｌツ（弓３５．９７°（Ｃｍ１．水
）元素分析： Ｃｍ５ＨａｓＮｔＯ６拳２０ｍ）ＴａＯ
ｍ ・２ＨｓＯ計算値：Ｃ，５１，６４，；Ｈ，６，７
９；Ｎ、１４．０！’＋（％）実験値：ｃ、５］、、３
４；ｔＴ、６゜ｔｖｙ；１ｑ、１４．Ｇ５（％）酸加水
分解（６Ｎ−ｏＣｌ、 、 １１．０°、２４時間）後
のアミノ酸比： Ｇａｙ １ 、’Ｉ’ｙｒ Ｏ，Ｉ’
３３．Ｐｈｅ ０−９８Ｄ−、Ａ、ｒｇ、０．４＞２
実施例２ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａ、ｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇ１．
ｙ−ＯＥｔの製造上記実施例１で得たＴ３ｏｃ−Ｔ’ｙ
ｒ−１）−Ａｒｇ（’Ｉ’ｏｓ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｏ
Ｅｔ （４３０Ｎ ） 、 ｏ−クレゾール（１０００
呵）、チオアニソール（３ｍｌ ）およびトリフルオロ
酢酸（］、 Ｏｍｌ ）の混合物に、トリフルオロメタ
ンスルホン酸（０，６ｍｔ ）を加え、室温に１時間放
置した。反応後、トリフルオロ酢酸を減圧留去し、残留
物を無水エーテルで処理した。
無水エーテル不溶物を乾燥後、水（５ｍｌ）に溶解して
得られた溶液にＤｏｗｅｘＩ Ｘ ２酢酸型（約３ｇ）
樹脂を加え室温で３０分間攪拌後沢過し、そのＰ液を凍
結乾燥した。さらに、水（１ｍｌ）に溶解し、カルボキ
シメチルセファロース樹脂を充填したカラム（２Ｘ１３
ｃｎ＋）に充填し、先ず水（６０１１１１）および０．
１モル・ピリジン・酢酸緩衝液（＋’ｌ（５，１０・１
００ ｍｌ ）で溶出し、次Ｋ Ｏ，１モル（３００ｍ
ｌ、混合槽）の濃度から始めて最終濃度０．３５モル（
３００ｍｌ 、補給槽）となるピリジン酢酸緩衝液（Ｆ
１１５．１０）を用いて直線型勾配法によって溶出した
。各フラクション（６ｍｌ）の２８０ ｎｍにおける吸
光度を測定し目的物の溶出位置を検査した。かくして、
フラクション番号６５− ’ｌ’ ５を合したものを凍
結 １
乾燥し、さらに２％酢酸（ｌ ｍｌ ） Ｋ溶解し、’
ｒｏｙｏ Ｐｅａｒｌ ＨＷ−４０樹脂を充填したカラ
ム（２，６Ｘ ４５ ｃｍ ）に充填した。次いで、２
％酢酸で溶出し、溶出液の６．２ｍｌずつを分取した。
溶出後、フラクション番号３２−３５を合せ“凍結乾燥
し、無色粉末２００■（５６％）を得た。
本物質はニンヒドリン反応、パクリ反応、坂］１反応お
よびクロル−０−トリジン反応がそれぞれ陽性。
Ｒｆ’ ０．５２ Ｒ／” （１，７４比旋光度：〔α
）”、’ −ｔ−３１，、９３°（Ｃ−１，、水）元素
分析： ＣｊｓＨｓ参Ｎテ０６・２Ｃ日１１４０寓・Ｈ
ｍＯ計算値： Ｃ，５４，３０；Ｈ，６，９８；Ｎ、１
３．８５（％）実験値：Ｃ，５ｉｔ、２７：）（，７，
２５；Ｎ、１３．３７（％）酸加水分解（６Ｎ−ＩＴＣ
ｌ、 、 １ ］、 ＯＣ、２０時間）後のアミノ酸比
： （Ｈｙ １． 、 ’１．’ｙｒ Ｏ，８６。
Ｐ↑＋ｅ Ｏ，９４、’ｒｌ−Ａｒｇ １．０５実施例
３Ｈ−甲ｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｂｅ−ｆｌｌ、ｙ−０−
ｎ−Ｐｒの製造１） Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−ｒ）−Ａｒｇ（
Ｔｏｓ）−Ｐｈｅ−（１４ｙ−０−ｎ−Ｐｒの ２
製造
上記実施例１で得たＢｏｃ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏ
ｓ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨ（１’ｉ’ Ｏ■）および
フッ化カリウム（３０■）をＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解し
、これにｎ−プロピルプロミド（０，０３６１１１１）
を加え室温で一昼夜攪拌した。次いで、反応液を水（２
０＋１１１）で希釈後酢酸エチルで２回抽出し、抽出液
をｌＮ−重曹で５回、次いで水で３回洗浄後硫酸マグネ
シウムで乾燥した。酢酸エチルを減圧留去し、残留物を
酢酸エチル−無水エーテルから再沈殿し、融点１６８°
〜１６９Ｃの無色粉末１１０■（６１％）を得た。
比旋光度： Ｃａ〕、’−８，３ｓｏ（Ｃ＝ｌ 、ｙ’
ｊｌ、／−＃）元素分析： ＣａｘＨａｓＮｙＯ１ｏ８
計算値：Ｃ，５Ｂ、７６；Ｈ，６，６２；Ｎ、１１．７
０（％）実験値：Ｃ，５Ｂ、５９；Ｈ，６，４５；Ｎ、
１１．５１（％）Ｉｔ） Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐ
ｈｅ−Ｇｌｙ−０−ｎ−Ｐｒの製造上記１）で得たＢｏ
ａ −Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ ） −Ｐｈｅ −
Ｇｕｙ−ｎ−Ｐｒ （７３ｍｙ： ）を、前記実施例２
におけるＨ−３
Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ｆ’Ｊ１ｙ−ＯＥｔの製
造の場合と全く同様に、０−クレゾール、チオアニソー
ル、トリフルオロメタンスルホン酸およびトリフルオロ
酢酸の混液で処理した。得られた粗生成物を、更に上記
の場合と同様に、カルボキシメチルセファロースカラム
クロマトグラフィーおよびＴｏｙｏ Ｐｅａｒｌ ＩＴ
Ｗ−４０カラムクロマトグラフイーによって精製し、目
的物３５■（５６％）を得た。本物質はニンヒドリン反
応、パクリ反応。
坂口反応およびクロル−ｏ−）！Ｊジン反応はそれぞれ
陽性。
ＦｌｆｌＯ，５’ｉ’ Ｒ／” ０．７４比旋光度：〔
α］”、；＋２６．２ｏ°（ｃ＝１．水）元素分析：
Ｃｓ＊ＨａｎＮ？ＯＬ＋・２ＣｍＨａＯ＊ −Ｈ露０計
算値：ｃ、５４．９１；Ｈ，７，１ｚ；Ｎ、ｌｓ、５ｓ
（％）実験値： ｃ 、 ５４．９７ ；Ｉ＋、 ７．
１６ ；Ｎ、 ］、ｓ、ｓ７（％）酸加水分解（ａＮ−
ＨＣｌ、 １１０°、２０時間）後のアミノ酸比： Ｇ
ｌｙ １．Ｔｙｒ Ｏ，８２゜Ｐｈｅ １．００ 、
Ｄ−Ａｒｇ Ｏ，９２４
実施例４ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−８ａｒ−
ＯＨの製造＋） Ｈ−ｅａｒ−ＯＥｔ−Ｉ（Ｃ１の製造
サルコシン（ｓ、９ｇ）をエタノール（６ｏ ｍｌ ）
に懸濁したものを氷−食塩浴で冷却下、チオニルクロリ
ド（２５ｍｌ）を徐々に滴下した後、ＯＣで３時間、更
に室温で３日間攪拌した。得られた澄明な反応液を減圧
上濃縮し、その残留物に無水エーテルを加えた。析出し
た結晶なｆ取、これを無水エーテルでよく洗浄後、水酸
化カリウムデシケータ−中で乾燥し、無色板状晶１４．
５ｇ（９５％）を得た。
融 点：１１５°〜１１７Ｃ
元素分析： Ｃ５ＨｘｚＮＯ＊ ａＨｃ１計算値：Ｃ，
３９゜０８；）（，７，８７；Ｎ、９．１２６）実験値
： Ｃ，３８，５８；Ｈ，７，８４；Ｎ、 ９．ｏｔ（
％）１） Ｈ−Ｐｈｅ−８ａｒ−ＯＥｔ＠ＨＣＩの製造
上記１）で得たＨ−８ａ、ｒ−ＯＥｔ −ＨＣｌ （０
，９２ｇ） 。
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ（１，５９ｇ）および）ＴＯＢｔ
（０，８１ｇ ）をＤＭＦ（６ｍ）に溶解し、これを
氷−食塩浴で ５
冷却下トリエチルアミン（０，９］、 ｆｆ１ｌ ）
、 次いでＤｃｃ（１，３４ｇ）を加え、５Ｃで一昼夜
攪拌した。反応接、数滴の酢酸を加え、更に］５分攪拌
後析出したジシクロへギシルウレアを／’ 別した。こ
のｒ液を水（５０ｍｌ ）で希釈後酢酸エチルで２回抽
出し、抽出液を］Ｎ−クエン酸・水・ＩＮ−重曹・水で
１１次洗浄後硫酸マグネシウムで乾燥した。酢酸エチル
を減圧留去し、残留物６４Ｎ−塩酸／ジオキサン溶液（
３０ｍｌ ）に溶解し室温に３０分間放置後減圧濃縮し
残留液に無水エーテルを加えた。生成した油状物を水酸
化カリウムデシケータ−中で減圧乾燥し、無色不定品物
１．．７ （１ｇ （９４％）な慣１だ。
融 点：４０°〜４６ｔｒ
比ｋ 光ＢＥ ： （α：］’＋） −１−３９，ｅ
’ （ｃ−１，メｐ）ｔｖ）元素分析： Ｃ１ａＨｉ
０ＮＩＯ＋１１１ＨＣ１゜計算値： ｃ、５５．Ｂ９：
１（、７，ｏｔ；ｒＪ、 ９３１（％）実験値：Ｃ，５
５，４ｏ；■（，７］３；Ｎ、９．４５ｅ％）ｉｉ）
Ｂｏｃ−ｐ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ｐｈｅ−ｓａｒ−ｏＥ
ｔの製造 ６
上記ｌ）で得たＩ（−Ｐｈｅ−８ａｒ−ＯＥｔ −ＨＣ
ｌ （１，８０ｇ、 ）、 Ｂａｃ−ｐ−Ａｒｇ（Ｔｏ
ｓ）−ａ）■（２，５７ｇ ）およびＨＯＢ ｔ（０８
１ｇ）をＤＭＦ（８ｍｌ）に溶解し、これを氷−食塩浴
で冷却下トリエチルアミン（０，９１１１１１）および
Ｄｅｃ（１，３ｔｇ）を加え５Ｃで一昼夜攪拌した。反
応後、上記量）の場合と同様に処理した。すなわち、酢
酸エチル抽出液を洗浄、減圧留去し、得られた残留物に
石油エーテルを加え、析出した沈殿をＰ取し、次いで酢
酸エチル−石油エーテルから再沈殿することＫよって無
色粉末ｓ、１ｇ（７７％）を得た。
融 点ニア６°〜８１Ｃ
比旋光度：〔α）％’−０．４７°（Ｃｍ１．メタノー
ル）元素分析： Ｃｓ＊ＨａａｔＪ＋＋ＯｅＳ計算値：
Ｃ，５６，９５；Ｈ，６，８７；Ｎ、１２．４６（％
）実験値：Ｃ，５６，４５；Ｈ，７，１８；Ｎ、１１．
９５（％）ｌｖ） Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏ
ｓ）−、Ｐｈｅ−８ａｒ−ＯＥｉの製造上記−）で得た
Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ） −Ｐｈｅ −ｅａｒ
−０Ｅｔ（１，ｅ５ｇ）を４Ｎ−塩酸／ジオキサン（ｌ
ｏａｌ）に ７
溶解し、これを３０分間放置後減圧濃縮した。
残留物に無水エーテルを加え、析出した結晶を水酸化カ
リウムデシクー−ター中で減圧乾燥した。
得られた物質をＤ Ｍ ｌｉ’ （５ｍｌ ）に溶解し
、トリエチルアミン（０，４５１１１１）で中和後、Ｂ
ｏｃ −Ｔｙｒ −０Ｈ（７７１■）およびＴＴＯＩ３
ｔ （３７ｓ■）を加えた。
この混合物をＯＣに冷却下ＤＣＣ（６２０■）を加えた
後５Ｃで一昼夜攪拌した。反応後、上記■）と同様に処
理し、無色粉末１．．９９ｇ（８７％）を得た。
融 点＝１０６°〜］］ＯＣ
比旋光度：〔α）’、、’十’ｉ’、３８°（Ｃ二］、
メタノール）元素分析： ＣａｘＨｉａＮ７０ｎｏＳ計
算値： ｃ、５ｅ、ｙ６；■（、６，６２；Ｎ、１１．
ｔｏ（％）実験値： Ｃ、５Ｂ、５９ ；Ｈ、６，５９
；Ｎ 、 １１．３４（％）ｖ） Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−Ｄ
−、Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｐｈｅ−８ａｒ−０１４の製造
上記Ｉｖ）で得たＢｏｃ −Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏ
ｓ ） −Ｐｈｅ−８ａｒ−ＯＥｔ （５］、 Ｏ■）
をメタノール（２ｍｌ）および水（０，３１１１）の混
液ＫＭ解し、これに２Ｎ−水 ８
酸化ナトリウム（０゜３２ｍ１）を加え室温で６０分間
攪拌した。次いで、反応液を前記実施例１におけるＢｏ
ｃ−Ｔｙｒ−ｒ＋−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ｐｈｅ−Ｇｌｙ
−ｏＨの製造の場合と同様に処理し、無色粉末２４５■
（５１％）を得た。
融 点＝１２８°〜１３２Ｃ
比旋光度：〔α）％’＋７．９ ’７°（Ｃｍ１．メタ
ノール）元素分析： Ｃ＋＋ｏＴ（ａｘＮ）ｏｘｏｓ計
算値：Ｃ，５７，８３：Ｈ，６，３５；Ｎ、１２．１１
（％）実験値：Ｃ，５７，９１：Ｈ，６，１１；Ｎ、１
１．８コ（％）Ｖｌ） Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈ
ｅ−８ａｒ−ＯＨの製造上記Ｖ）で得たＢｏｃ−Ｔｙｒ
−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｐｂｅ−８ａｒ−ＯＴ（（１
３０■）を、前記実施例１におけるＨ−Ｔｙｒ −Ｄ−
Ａｒｇ −ｐｈｅ ＝Ｇ１ｙ−ＯＨの製造の場合と全く
同様に、０−クレゾール、チオアニソール、トリフルオ
ロメタンスルホン酸およびトリフルオロ酢酸の混液で処
理し、得られた粗生成物を更に上記の場合と同様に、先
ずカルボキシメチルセファロースカラムクロマトグラフ
ィーによっ ９
て、次いでＴｏｙｏ ＰｅＰｌ、ｒ］−ＨＷ −４０カ
ラムクロマドグ２フイーによって精製した。なお、後者
のカラムクロマトグラフィーにおいては、溶出液を５、
３ Ｉｌｌずつ分取し、フラクション番号３１−３６を
集め凍結乾燥すること圧よって目的物４５■（４０％）
を得た。本物質はニンヒドリン反応、パクリ反応、坂口
反応およびクロル−ｏ −） リジン反応はそれぞれ陽
性。
′Ｖ１ ０．３０ ８１３０．５９
比旋光Ｗｅ ： ［α）”、；−＋−ａ ５．２１ （
Ｃ＝＝１ 、水）元素分析： ＣｍｙＨａｙＮｙＯ＊
ａ２ｃｍ）１４０ｍ ＊２ＨｓＯ計算値：Ｃ，５２，３
］；Ｈ，６，９４；Ｎ、１３．７８（％）実験値：Ｃ，
５２，４３；ＩＦ（，７゜０１；Ｎ、１４．２２（％）
酸加水分解（６Ｎ−Ｔ−＋ｃ１． 、 ］、 ］、 Ｏ
’ 、 ２２時間）後のアミノ酸比： Ｓａｒ １．Ｔ
ｙｒ Ｏ，８３゜Ｐｈｅ ］、、０９ 、 Ｄ−Ａ、ｒ
ｇＯ，９３実施例５ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ
−８ａｒ−ＯＭｅの製造１） Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａ
ｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｐｈｅ−８ａｒ−ＯＭｅの製造前記実
施例４で得たＢｏｃ−’Ｉ’ｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ
）−０
Ｐｈｅ−８ａｒ−ＯＨ（２４３ｍｇ ）およびフッ化カ
リウム（５８■）をＤＭＦ（２１１１１）に溶解し、ヨ
ウ化メチル（０，０４ｍｔ）を加え、室温で一昼夜攪拌
した。
反応後、前記実施例３におけるＢｏｃ −Ｔｙｒ −Ｄ
−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−０−ｎ−Ｐｒの
製造の場合と同様に処理し、無色粉末２ｏｏｑ（ｓｏ％
）を得た。
融 点＝１０９°〜１１６ｒ
比旋光度：〔α）”、’＋９．５４°（ｃ＝１．メタノ
ール）元素分析： Ｃ４ｔＨａｓＮｙＯｘｏＳ計算値：
Ｃ’、５Ｂ、７６；Ｈ，６，６２；Ｎ、１１．７０（
％）実験値：Ｃ，５８，２６；Ｈ，６，６９；Ｎ、１１
．２８（％）層） Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−
８ａｒ−○Ｍｅの製造上記１）で得たＢｏ ｃ −Ｔｙ
ｒ −Ｄ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ ） −Ｐｈｅ −８ａｒ
−０Ｍ１３ （１３ｚｍｇ）を前記実施例２におけるＨ
−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＥｔの製造
の場合と同様に、０−クレゾール、チオアニソール、ト
リフルオロメタンスルホン酸およびトリフルオロ酢酸の
混液で処理した。得られた粗生成物を更に上記の場合と
同様に、カルボキシメチルセファロース１
カラムクロマトグラフィーおよびＴｏｙｏ Ｐｅａｒｌ
Ｔ（Ｗ−４０カラムクロマトグラフイーによって精製し
、目的物５１■（４４％）を得た。本物質はニンヒドリ
ン反応、パクリ反応、坂ロ反応およびクロル−０−）
リジン反応はそれぞれ陽性。
Ｂｆ” ０．４ ］、 Ｒ，７８０，７２比旋光度：〔
α）’１；＋３８．２０°（Ｃｍ１−、水）元素分析：
Ｃｍ５Ｔ（ＩＩｏｈ＋〒０６・３ Ｈｍ Ｏ計算値；
ｃ、５３．９２；Ｈ，ｙ、ｏｅ；Ｎ、１５．７２（％）
実験値： Ｃ，５３，５５；Ｈ，６，８９；Ｎ、１５．
２０（％）酸加水分解（６Ｎ−’ＨＣＩ 、 １１０
ｒ’ 、 ２２時間）後のアミノ酸比： Ｓａｒ Ｏ，
９４，Ｔｙｒ Ｏ，８９゜Ｐｈｅ １ 、 Ｄ −Ａｒ
ｇ １．０９実施例６ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｉ：ｌ−Ａ、ｒｇ
−Ｐｈｅ−ｆ３ａｒ−ＯＥｔの製造前記実施例４で得た
Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｐｈｅ−８ａ
ｒ−ＯＥｔ （９２１Ｋ ）を前記実施例２におけるＨ
−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−０４，ｙ−ＯＦｉｉｔ
、の製造の場合と同様に、０−クレゾール、チオアニソ
ール、トリフルオロメタンスルホン酸およびトリフルオ
ロ ２
酢酸の混液で処理し、得られた粗生成物を上記の場合と
同様カルボキシメチルセファロースオよびＴｏｙｏ Ｐ
ｅａ、ｒｌ ＨＷ−４０カラムクロマトグラフイーによ
って精製し、目的物２７■（３３％）を得た。本物質は
ニンヒドリン反応、パクリ反応、坂ロ反応およびクロル
−０−トリジン反応はそれぞれ陽性。
Ｒ７１０，４８Ｒ７２０，７３
比旋光度：〔α）’、；＋ａ１．ｏ１°（Ｃｍ１ 、水
）元素分析： Ｃ＋＋ｏＨｔｘＮ？Ｏａ・３ＮｇＯ計算
値： Ｃ，５４，６２；Ｈ，７，４３；Ｎ、１５．３７
（％）実験値： Ｃ’、５３ｙ９４；Ｈ，７，３４；Ｎ
、１５．５５（％）酸加水分解（６Ｎ−ＨＣｌ、 −１
１０ｔｌ’ 、 ２２時間）後のアミノ酸比： Ｓａｒ
１．０１．Ｔｙｒ Ｏ，９１゜Ｐｈｅ １ 、 Ｄ−
Ａｒｇ １．１１特許出願人 グレラン製薬株式会社
代理人柊木峯治
３
９１３DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to a tetrapeptide having analgesic activity. A pentapeptide called enkephalin that exhibits a morphan-like effect when administered directly into the brain has been known, but this substance does not exhibit analgesic effect when administered intravenously. On the other hand, β-endorphin, which consists of 31 amino acids, is known to exhibit analgesic effects even when administered intravenously, but its production is difficult and it is difficult to supply it in large quantities as a medicine. . For this reason, various studies have been made to obtain a compound that is a low molecule that is easy to produce and has sufficient analgesic effects even when administered intravenously or subcutaneously, but so far nothing has been found to be satisfactory. In addition, dermorphin isolated from the skin of one frog (
Hegutabebutide, also known as dermorphin, has strong analgesic effects when administered intracerebrally and peripherally.
It is said that the tetrapeptide in its structure is the minimum structure for exerting its action. In view of the above technical situation KfIM, the present inventors have conducted various studies and found that a specific compound of tetrapeptide is suitable for the above purpose.As a result of further research based on this knowledge, the present inventors have developed the present invention. I have reached the point where I have completed the . That is, the present invention relates to the general formula (r) H-Tyr-D-Arg-Phe-(Ttz)()ly
-(IRm (1) (in the formula, R1 and R2 represent a hydrogen atom or a lower alkyl group). The abbreviations follow the common usage in the field and refer to the following amino acid residues: 'ryr: tyrosine Arg: arginine Phe: phenylalanine Gly nigericine Sar: sarcosine (N-methylglycine)
The tetrapeptide represented by general formula (T) of the present invention may be represented by the following chemical formula. (In the formula, R1 and R2 are the same as defined above.) In this specification, when an amino acid or its residue is expressed using the above abbreviation, unless otherwise specified, it means L-unit;・ In addition, compounds and protecting groups commonly used in the text. Reagents, etc. are indicated with the following abbreviations: DCC2N,N'-dicyclohexylcarbodiimide H
OBt: 1-hydroxybenztriazole BOC: t
-Butoxycarbonyl Tos Nidocyl DMF Nidimethyl, Formamide Me Ester Et: Ethyl Pr: Provil In the above general formula (r), the lower alkyl group represented by 1 and R1 is an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms; In specific examples and 1., methyl group, ethyl group, n- or 1-propyl group, n-11'-,
1. Alkyl groups such as aθC- or t-butyl, pentyl, and hexyl are preferred, with methyl, ethyl, and propyl groups being preferred. stomach. Therefore, the tetrapeptide of the present invention includes both those in which the carboxylic acid terminal (C-terminus) is free and those in which the carboxylic acid terminal (C-terminus) is a lower alkyl ester thereof, and specific examples thereof are as follows. ■H-T7r-D-Arg-Phe7G1y-OH■H
-Tyr-D-Arg-Phe-Gly-○Et■H-
Tyr-D-Arg-Phe-flly-0-n-Pr
■H-T'yr -D =Arg -Phe -Sar
-OH■H-Tyr -D -Arg -Pbe -
Sar-OMe■H-Tyr-D-Arg-,
, Phe-Sar 70Et Furthermore, as the tetrapeptide of the present invention, in addition to those having free amino groups and carboxyl groups, the present invention also includes pharmacologically acceptable salts thereof. The salt exists as a salt with an acid or a salt with a base depending on extraction and purification conditions. Salts with such bases include salts with alkali group elements such as sodium and potassium, and alkaline earth group elements such as magnesium and calcium, ammonia and alkylamines (methylamine, etc.).
Inorganic substances such as salt 1. Salts with organic bases may be mentioned. In addition, salts with acids include hydrochloric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid,
Examples include salts of inorganic acids such as nitric acid and phosphoric acid, and salts of organic acids such as acetic acid, lactic acid, tartaric acid, succinic acid, maleic acid, malonic acid, fumaric acid, methanesulfonic acid, and phthalic acid. In order to produce the tetrapeptide having the chemical structure of general formula (I) of the present invention, the amino acid constituting the target compound (T) or the peptide and the compound that can constitute the remainder thereof are condensed by peptide synthesis means. 9 and do it. Nucleus synthesis means can be carried out according to any known method, for example, "Peptide Synthesis" by Nobuo Izumiya, Maruzen ■ (19
1975), M. Bodansky, M.
A. “Peptide Synthesis” by Onndetti (
Peptide 5 synthesis ) Inter'r
5science Inc. (1966) isobaric methods 1 such as 1j ride method, rf1 anhydrous anhydride physical synthesis acid anhydride method, DCC method, carbodiimidazole method, azide method,
Examples include a method using HoBt, an active ester method, and an NCA method. Before carrying out this condensation reaction, 1. Carbonyl groups and amine groups that do not participate in the reaction of the raw materials may be protected by means known per se, or carboxyl groups and amino groups that participate in the reaction may be activated. Examples of such protection and activation modes include the following. First, the carboxyl group of the raw material is ester (alkyl,
It can be protected in the form of esters such as benzyl, p-, nitrobenzyl, etc.), metal salts (sodium, potassium salts, etc.), and t-alkylamine salts (tri, ethylamine salts, etc.). Further, examples of the protecting group for the amino group of the raw material include a benzyloxycarbonyl group, a t-butoxycarbonyl group, a tosyl group, a benzyl group, and the like. Furthermore, as the protecting group for the hydroxyl group of tyrosine, in addition to the above-mentioned protecting group for the amino group, ethers such as benzyl and t-butyl are exemplified. Next, raw materials with activated carboxyl groups include acid halides, acid anhydrides, and activated esters (trosi
, tq-hydroxysuccinimide, N-hydroxyphthalimide, esters with alcohols such as p-nitrophenol), and the like. Furthermore, examples of raw materials with activated amine groups include corresponding phosphoric acid amides and the like. This condensation reaction can be carried out in the presence of a solvent. Such a solvent is selected from solvents that can be used in the peptide condensation reaction, such as DMF, dimethyl sulfoxide (DMSO), chloroform, dichloromethane,
Examples include tetrahydrofuran, dioxane, pyridine, ethyl acetate, and mixtures thereof. The reaction is usually about -20C to +50C, and the reaction time is usually about 30 minutes to 48 hours. The compound obtained by the above condensation reaction is subjected to a protective group elimination reaction, if necessary. In this elimination reaction,
As a means that does not affect the peptide condensation, elimination means in the field of peptide synthetic chemistry can be adopted, but methods such as acid decomposition, alkaline decomposition, and catalytic reduction are selected as appropriate depending on the type of protecting group to be eliminated. Ru. For example, depending on the acid decomposition, inorganic acids such as hydrochloric acid and acidic acid and organic acids such as acetic acid, trifluoroacetic acid, methanesulfonic acid, and trifluoromethanesulfone H are used, and t-butoxycarbonyl group, tosyl group, carbobenzoxy It is possible to remove protective groups such as groups. At this time, it is effective to add cation supplements such as thioanisole, anisole, phenol, and the like. Further, depending on the alkali decomposition, a strong base such as sodium hydroxide or potassium hydroxide may be used to eliminate ester residues such as alkyl esters and benzyl esters. Catalytic reduction uses palladium black, palladium on carbon, platinum, or the like as a catalyst, and is employed mainly for the purpose of eliminating carbobenzoxy groups and benzyl groups. In addition to these methods, reduction with sodium in ammonia may also be mentioned. After the reaction process is completed, the tetrapeptide thus produced is collected by a peptide separation method known per se (extraction/distribution, recrystallization, reprecipitation, column chromatography, etc.). Furthermore, the collected tetrapeptide (T) can be obtained in the form of a salt by reacting with an organic acid, an inorganic acid, an organic base, or an inorganic base according to a conventional method. Next, an example of a pharmacological experiment using the tetrapeptide (1) of the present invention will be given. The drugs used and the following compounds were dissolved in Ringer's solution. Compound of the present invention ■ H-T'yr-D-, Ar) (-1] hef-Gl
y-On (Compound I)■)i-Tyr-D-Ar
g-Phe -G], y-OFt (compound ■) ■II
-Tyr-D-Arg-yen)e-+11. Y-0-j-
1 nor (Compound III) ■ H-Tyr-D-Arg-Phe-8ar-011
(Compound IV) ■ H-Tyr-D-Arg=Phe-
8ar”OMe (compound ■)■ H-'Il'yr
-1) -Arg -Pbe-Ga, r -0Et (compound vr') Control compound morphine hydrochloride (morphine hydroc+1
．． 1. orjde) ] 0 In addition, ddY male mice (Shizuoka Experimental Animal Agricultural Cooperative Association) weighing 20 to 24 g were used as experimental animals. 111 Ta1l-pressure method Based on the method of Green et al., after subcutaneous administration of the drug, 10
Pressure stimulation was applied at a rate of mWg/sea, and a pressure that caused a pseudo-pain response such as writhing or biting at the stimulated site was administered 1.
Measured until 80 minutes later, pseudo pain response threshold (ml/g)
And so. Based on this threshold, the pseudo-pain response suppression rate of the drug-administered group relative to the control group was calculated. The 50% inhibition rate (ED50 value) of each drug was calculated by the Litchfield-Wilcoxon method (see Table 1). In the above experiments, the compound of the present invention exhibited analgesic activity that was 2.6 to 11.3 times more potent than morphine hydrochloride, and the duration of the activity exceeded that of morphine hydrochloride, and did not disappear even 180 minutes after administration. +2) Ta1l-flick method After administering the drug, radiant heat was irradiated to the tail of the mouse, and the escape reaction time (seconds) from the time the heat was irradiated until the tail moved was measured until 180 minutes after drug administration. This was used as the pseudo pain response threshold. Based on this threshold, the pseudo-pain response suppression rate of the drug-administered group relative to the control group was calculated. The 50% inhibition rate (KDso value) of each drug is determined by Litchfield-Wj 1. Calculated by coxon method (see Table 1). The compound of the present invention showed 2.98 to 15.7 times more analgesic activity than morphine hydrochloride in the above experiments. (31Phenylquinono Wrl, thin
Method g Phenylquinone was dissolved in 0.5% ethanol solution to prepare 0.02% Pbonylquinone solution.0 This Phenylquinone solution0
．． 1 m/Log was administered intraperitoneally to busy mice 30 minutes after subcutaneous administration of the drug, and writing was performed for 20 minutes immediately after administration.
The number of writings was measured, and the inhibition rate was calculated relative to the control group for this number of writings. 50% inhibition rate (EDs) of each drug
o value) was calculated from the Litcbfi and eld-Wilcoxon method (see Table 1). 2 The compounds of the present invention showed analgesic activity 4 to 30.6 times stronger than morphine hydrochloride in the above experiments. For comparison, the above experiment (Tail-flick method and Phe
(nyquinone writing method) and ED
s. The values were calculated (see Table 2). Table 1 EDao value in subcutaneous administration (■A1) 3 Table 2 I+3Dmo value in oral administration (rag, 7k
g) The compound of the present invention can be prepared by the Ta11 presaure method using mice as described above, Ta11. -fli
ck method and Phenylquinone with
In any of the ing methods, morphine hydrochloride exhibits stronger analgesic activity than morphine hydrochloride, so it is useful as an analgesic. Therefore, the compounds of the present invention are useful as analgesics for pain (especially severe pain such as cancer pain) in mammals such as humans, monkeys, dogs, rabbits, rats, and mice. Furthermore, the toxicity of the compounds of the present invention is low, far exceeding the drug efficacy. The dosage of the compounds of the invention is generally between 0.05 and 1Oj/
kg is an appropriate amount. The compounds of the present invention are mainly administered parenterally (eg, intravenous administration, subcutaneous administration, rectal administration), but oral administration is also possible in some cases. Therefore, when the compound of the present invention is used as an analgesic, the dosage form is an injection. Parenteral preparations such as infusions and suppositories are the most preferred dosage forms, but in addition to these, there are also dosage forms for mucosal administration such as buccal preparations and troches, and dosage forms for oral administration such as tablets and powders. It may be in a dosage form. Preparations with such a dosage form are
It is manufactured using means known per se in the pharmaceutical field. For example, when manufacturing an injection, the concentration of the compound of the present invention is 1 to 3 o ay/+ in a solvent containing physiological saline alone or in combination with an appropriate solubilizer (e.g., polyhydric alcohol).
After sealing the dissolved material in an ampoule so that it becomes n+,
A method of heat sterilization is adopted. The present invention will be explained in more detail with reference to Examples below. In addition, in thin layer chromatography for confirming the purity of the compound of the present invention, Kiesel gel
Using GF254 (Merck Company 1!), each V value (l/
1 and Rf+1), the developing solvent 5 is as follows. +I/l: Butanol: Acetic acid: Water (4:1:5) Example I H-Tyr-D-Arg-Phe-G1. y-OH
Production 1) Boc-D-Arg(Tos)-phe-
Production of Gly-Ogt Boc-Phe-Gly-OEt
(3.15 g) in 4N-hydrochloric acid/dioxane solution (1
The 5m) K solution was left at room temperature for 30 minutes and then concentrated under reduced pressure. This residue was treated with anhydrous ether, and the resulting insoluble material was dried under reduced pressure in a potassium hydroxide desiccator. Dissolve this substance in MF (8 ml) Ic, +3nc -1) -A
rg(Tos')-orT (3,4 g) and HoBt (], 22 g) were added, and after ice-cooling in OC, triethylamine (], , 4 ml) and Dce (1,76 g) were added. After stirring this mixture at 5C for a day and night, the resulting dicyclohexylurea was separated by r and P
The solution was diluted with water (50+ml) and extracted twice with ethyl acetate. The extract was washed successively three times with N-citric acid, water, IN-blind, and water, and then dried over magnesium sulfate. Reduced I
The residue obtained by E concentration 6 was recrystallized from ethyl acetate to obtain 4.5 g (86%) of a colorless powder with a melting point of 110° to 112C. Specific optical rotation: [α”]) 2 Q, 45° (c=1.
Methanol) Elemental analysis: C3xH44NaOsS Calculated value: C,56,35:H06,71;N,12.
72 (%) Experimental value: C, 56,56: H, 6,65:
N, 12.66 (%) ff) Boc-Tyr-D-A
Production of rg('ros)-Phe-Gly-OEt BoC-D-Arg(Tos)-Phe-G obtained in 1) above
ly-OEt. (], , ]52 g) was treated with a 4N-hydrochloric acid/dioxane solution in the same manner as in 1) above. The obtained T(
CI aH-D-Arg(Tos)-Pbe-Gly-
Dissolve OEt in DMF (6 ml) and add noc-T to this.
yr -OH (620q) and HoB1 (297m
g) and cooled to OC, triethylamine (0,32
mt) and DCC (465 ml) were added, and the mixture was stirred at 5C all day and night. After the reaction, the generated dicyclohexylurea is converted to P
After separation, the mixture was treated in the same manner as in 1) above to obtain a colorless solid. Quartz was recrystallized from 2-propertool and powdered with a melting point of 7166°~]69C 1. ,'i'1g (95%)
I got it. Specific optical rotation: [α]%'-7.53° (C-1, methanol) Elemental analysis: CaoHasNvO1aS calculated value: C, 5B, 31; H, 6, 48; N, 11. ．． 90
(%) Experimental value: C, 5B, 29:H, 6, 61,;N,
11.43(%)1) Boa-Tyr-D-Arg(
Preparation of 'ro8)-Phe-()ly-074 I) above
Boc-'ryr-D-Arg(Tos)-Ph obtained with
e-G], y-oEi (553■) in methanol (3
Ken I) and water (o, 5ml), and 2N-
0.35+ul of sodium hydroxide was added and stirred at room temperature for 40 minutes. After the reaction, the mixture was diluted with water (20111), washed twice with ethyl acetate, and citric acid was added to the aqueous layer while cooling on ice to adjust the concentration to 3 for fishing. The precipitate at this time was extracted twice with ethyl acetate, and the extract was washed five times with water and dried over magnesium sulfate. Ethyl acetate was distilled off under reduced pressure, and the residue was reprecipitated from ethyl acetate-petroleum ether to give 460 Iv (86%) of a colorless powder with a melting point of 135° to 14.0°. 1 Daily optical rotation: [α]','-3.60° (Cm1.methanol) Elemental analysis: Cs@H4oN? 0xoS calculation value:
C, 57,34: H, 6,21; N, 12.32 (%
) Experimental values: C, 56, 96: H, 6, 20: N, 11.
92 (%) Iv)! (-Tyr-D-Arg-Phe
-Production of Gly-OH Boc-Tyr obtained in +u) above
-D-Arg(Tos)-Phe-Gly-OH
(150 ■) to 0-cresol (50 ■). It was dissolved in trifluoroacetic acid (2 ml) together with thioanisole (0,5+nt) and left at room temperature for 60 minutes. After the reaction, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and the residue was treated with anhydrous ether. After drying the anhydrous ether insoluble material under reduced pressure,
Water (5ml) Dissolve I/C, Dowex IX
2 resin (acetic acid form, about 3 g) was added, stirred at room temperature for 30 minutes, and then filtered. The lyophilized R solution was dissolved in water (1 ml) and packed into a column packed with carboxymethyl Sepharose resin (2 x 12 dll). Next, water (3
00 mt, mixing tank) and a final concentration of 0.12 molar pyridine acetate buffer (Fl (5,1, 300 m,
9) was eluted by the linear gradient method. The absorbance at 280 nm was measured for each fraction of 6 ml of the eluate, and the elution position of the target product was then determined. Thus, fraction numbers 60-68 were combined 1. The product was freeze-dried to obtain 56 ml (43%) of a colorless powder. This substance reacts with ninhydrin reaction, plagiarism reaction, Sakaguchi reaction,
The chlor-0-tolidine reaction was positive. R/l O, 82R/l O, 57 Specific rotation: [1'l tsu (bow 35.97° (Cm 1. water) elemental analysis: Cm5HasNtO6 fist 20m) TaO
m ・2HsO calculation value: C, 51, 64,; H, 6, 7
9;N, 14.0! '+(%) Experimental value: c, 5], 3
4; tT, 6°tvy; 1q, 14. G5 (%) Amino acid ratio after acid hydrolysis (6N-oCl, , 11.0°, 24 hours): Gay 1 , 'I'yr O,I'
33. Phe 0-98D-, A, rg, 0.4>2 Example 2 H-Tyr-D-A, rg-Phe-G1.
Production of y-OEt T3oc-T'y obtained in Example 1 above
r-1)-Arg('I'os)-Phe-Gly-O
Trifluoromethanesulfonic acid (0.6 mt) was added to a mixture of Et (430 N), o-cresol (1000 m), thioanisole (3 ml) and trifluoroacetic acid (Oml), and the mixture was left at room temperature for 1 hour. After the reaction, trifluoroacetic acid was distilled off under reduced pressure, and the residue was treated with anhydrous ether. After drying the anhydrous ether insoluble matter, dissolve it in water (5 ml) and add Dowex I X diacetic acid form (about 3 g) to the resulting solution.
The resin was added, stirred at room temperature for 30 minutes, filtered, and the P solution was freeze-dried. Furthermore, a column (2X13
cn+), first add water (601111) and 0.
1M pyridine acetate buffer (+'l(5,10・1
00 ml) and then KO, 1 mol (300 ml).
l, mixing tank) to a final concentration of 0.35 molar (
Pyridine acetate buffer (F
115.10) using a linear gradient method. The absorbance at 280 nm of each fraction (6 ml) was measured to examine the elution position of the target product. Thus,
Fraction No. 65 - 'l' Freeze the combined 5. 1 Dry, further dissolve in 2% acetic acid (l ml) and '
A column (2,6X 45 cm) packed with royo Pearl HW-40 resin was packed. Then 2
% acetic acid, and 6.2 ml portions of the eluate were collected. After elution, fraction numbers 32-35 were combined and lyophilized to obtain 200 μm (56%) of a colorless powder. . Rf' 0.52 R/" (1,74 specific optical rotation: [α
)",' -t-31,,93°(C-1,,Water)Elemental analysis:
mO calculation: C, 54,30; H, 6,98; N, 1
3.85(%) Experimental value: C,5it,27:)(,7,
25; N, 13.37 (%) acid hydrolysis (6N-ITC
Amino acid ratio after (Hy 1., '1.'yr O,86. P↑+e O,94, 'rl-Arg 1.05 Example 3H-Kyr -D-Arg-Pbe-fll,y-0-
Production of n-Pr 1) Boc-Tyr-r)-Arg(
2 Preparation of Boc-Tyr-D-Arg(Tos)-Phe-(14y-0-n-Pr obtained in Example 1 above)
s) -Phe-Gly-OH (1'i' O ■) and potassium fluoride (30 ■) were dissolved in DMF (2 ml), and n-propylbromide (0,0361111) was dissolved in this.
was added and stirred at room temperature overnight. Next, the reaction solution was diluted with water (2
After diluting with 0+111) and extracting twice with ethyl acetate, the extract was washed with 1N sodium bicarbonate five times, then with water three times, and then dried over magnesium sulfate. Ethyl acetate was distilled off under reduced pressure, and the residue was reprecipitated from ethyl acetate-anhydrous ether, melting point 168°.
110 cm (61%) of a colorless powder of ~169C was obtained. Specific optical rotation: Ca],'-8,3so(C=l,y'
jl, /-#) Elemental analysis: CaxHasNyO1o8
Calculated value: C, 5B, 76; H, 6, 62; N, 11.7
0 (%) Experimental value: C, 5B, 59; H, 6, 45; N,
11.51 (%) It) H-Tyr-D-Arg-P
Production of he-Gly-0-n-Pr Bo obtained in 1) above
a-Tyr-D-Arg(Tos)-Phe-
Guy-n-Pr (73my: ) was added to Example 2.
was treated with a mixture of 0-cresol, thioanisole, trifluoromethanesulfonic acid and trifluoroacetic acid exactly as in the preparation of H-3 Tyr-D-Arg-Phe-f'J1y-OEt. The obtained crude product was further subjected to carboxymethyl Sepharose column chromatography and Toyo Pearl IT in the same manner as above.
The product was purified by W-40 column chromatography to obtain the desired product, 35.mu. (56%). This substance has a ninhydrin reaction and a plagiarism reaction. Sakaguchi reaction and Chlor-o-)! J-jin reaction was positive. FlflO, 5'i' R/” 0.74 Specific optical rotation: [
α]”; +26.2o° (c=1.water) Elemental analysis:
Cs*HanN? OL+・2CmHaO* -H dew 0 calculated value: c, 54.91; H, 7, 1z; N, ls, 5s
(%) Experimental value: c, 54.97; I+, 7.
16 ;N, ], s, s7 (%) acid hydrolysis (aN-
Amino acid ratio after (HCl, 110°, 20 hours): G
ly 1. Tyr O, 82°Phe 1.00,
D-Arg O,924 Example 4 H-Tyr-D-Arg-Phe-8ar-
Production of OH+) H-ear-OEt-I (Production of C1 Sarcosine (s, 9g) was added to ethanol (6o ml)
While cooling the suspension in an ice-salt bath, thionyl chloride (25 ml) was gradually added dropwise, followed by stirring at OC for 3 hours and then at room temperature for 3 days. The resulting clear reaction solution was concentrated under reduced pressure, and anhydrous ether was added to the residue. The precipitated crystals were collected, thoroughly washed with anhydrous ether, and dried in a potassium hydroxide dessicator to give colorless plate-like crystals 14.
5g (95%) was obtained. Melting point: 115° ~ 117C Elemental analysis: C5HxzNO* aHc1 calculated value: C,
39°08; ) (,7,87; N, 9.126) Experimental value: C, 38,58; H, 7,84; N, 9. ot(
%) 1) Production of H-Phe-8ar-OEt@HCI H-8a obtained in 1) above, r-OEt -HCl (0
, 92g). Boc-Phe-OH (1,59g) and )TOBt
(0,81 g) was dissolved in DMF (6 m), and this was cooled in an ice-salt bath. Triethylamine (0,9], ff1l)
Then, Dcc (1.34 g) was added and stirred at 5C overnight. After the reaction, several drops of acetic acid were added, and after further stirring for 5 minutes, the precipitated dicyclohegycylurea was separated. This r solution was diluted with water (50 ml) and extracted twice with ethyl acetate, and the extract was washed 11 times with N-citric acid/water/IN-baking carbonate/water and then dried over magnesium sulfate. Ethyl acetate was distilled off under reduced pressure, and the residue 64N-hydrochloric acid/dioxane solution (
The solution was dissolved in 30 ml of water, left at room temperature for 30 minutes, concentrated under reduced pressure, and anhydrous ether was added to the residual solution. The produced oil was dried under reduced pressure in a potassium hydroxide desiccator to obtain a colorless, indeterminate product. ．． 7 (1g (94%)). Melting point: 40°~46tr Ratio k Light BE: (α:]'+) -1-39,e
' (c-1, mep) tv) Elemental analysis: C1aHi
0NIO+111HC1° Calculated value: c, 55. B9:
1(,7,ot;rJ, 931(%) Experimental value: C,5
5,4o;■(,7]3;N,9.45e%)ii)
Boc-p-Arg(Tos)-phe-sar-oE
Production of t 6 I(-Phe-8ar-OEt -HC obtained in l) above
l (1,80g, ), Bac-p-Arg(To
s)-a)■ (2,57g) and HOB t(08
1g) was dissolved in DMF (8ml), triethylamine (0,911111) and Dec (1,3tg) were added to the solution under cooling in an ice-salt bath, and the mixture was stirred at 5C overnight. After the reaction, it was treated in the same manner as in the case of the above amount). That is, the ethyl acetate extract was washed and evaporated under reduced pressure, petroleum ether was added to the resulting residue, the precipitate was collected, and then reprecipitated from ethyl acetate-petroleum ether to form a colorless powder. 1 g (77%) was obtained. Melting point near 6°~81C Specific rotation: [α)%'-0.47° (Cm1.methanol) Elemental analysis: Cs*HaatJ++OeS calculated value:
C, 56,95; H, 6,87; N, 12.46 (%
) Experimental values: C, 56,45; H, 7,18; N, 11.
95(%) lv) Boc-Tyr-D-Arg(To
s)-, Phe-8ar-OEi Boc-D-Arg(Tos)-Phe-ear obtained in the above-)
-0Et (1,e5g) in 4N-hydrochloric acid/dioxane (l
oal) and concentrated under reduced pressure after being allowed to stand for 30 minutes. Anhydrous ether was added to the residue, and the precipitated crystals were dried under reduced pressure in a potassium hydroxide desiccator. The obtained substance was dissolved in D M li' (5 ml), and after neutralization with triethylamine (0,451111), B
oc -Tyr -0H (771■) and TTOI3
t (37 s) was added. DCC (620 ml) was added to this mixture under cooling to OC, and the mixture was stirred at 5 C overnight. After the reaction, the same process as above (①) was carried out to obtain colorless powder 1. ．． 99g (87%) was obtained. Melting point = 106°~]]OC Specific optical rotation: [α)', ,'10'i', 38° (C2],
methanol) elemental analysis: CaxHiaN70noS calculated values: c, 5e, y6; ■(, 6, 62; N, 11.
to (%) Experimental value: C, 5B, 59; H, 6,59
;N, 11.34(%)v) Boc-Tyr-D
-, Arg(Tos)-Phe-8ar-014 Boc-Tyr-D-Arg(Tos) obtained in Iv) above
s) -Phe-8ar-OEt (5], O■)
was dissolved in a mixture of methanol (2 ml) and water (0.3111), and 2N-water 8 sodium oxide (0°32 ml) was added thereto, followed by stirring at room temperature for 60 minutes. Next, the reaction solution was mixed with Bo in Example 1.
c-Tyr-r+-Arg(Tos)-phe-Gly
-Processed in the same manner as in the production of oH, colorless powder 245■
(51%). Melting point = 128° ~ 132C Specific optical rotation: [α)%'+7.9'7° (Cm1.methanol) Elemental analysis: C++ oT (axN) oxos calculated value: C, 57, 83: H, 6, 35; N, 12.11
(%) Experimental value: C, 57,91: H, 6,11; N, 1
1.8 co(%)Vl) H-Tyr-D-Arg-Ph
Production of e-8ar-OH Boc-Tyr obtained in V) above
-D-Arg(Tos)-Pbe-8ar-OT((1
30■) in Example 1 above, H-Tyr-D-
Treated with a mixture of 0-cresol, thioanisole, trifluoromethanesulfonic acid and trifluoroacetic acid exactly as in the preparation of Arg -phe =G1y-OH, and the crude product obtained further treated as above. It was first purified by carboxymethyl Sepharose column chromatography 9 and then by Toyo PePl,r]-HW-40 column chromatography. In addition, in the latter column chromatography, the eluate was
3 Ill fractions were collected, and fraction numbers 31-36 were collected and freeze-dried.
I got it. This substance was positive in the ninhydrin reaction, plagiarism reaction, Sakaguchi reaction, and chlor-o-lysine reaction. 'V1 0.30 8130.59 Specific rotation We: [α)'',;-+-a 5.21 (
C==1, water) Elemental analysis: CmyHayNyO*
a2cm) 140m *2HsO calculation value: C, 52, 3
]; H, 6,94; N, 13.78 (%) Experimental value: C,
52,43;IF(,7゜01;N,14.22(%)
Acid hydrolysis (6N-T-+c1., ], ], O
Amino acid ratio after 22 hours): Sar 1. T
yr O,83゜Phe],,09,DA,r
gO,93 Example 5 H-Tyr-D-Arg-Phe
-8ar-OMe production 1) Boc-Tyr-D-A
Preparation of rg(Tos)-Phe-8ar-OMe Boc-'I'yr-D-Arg(Tos) obtained in Example 4 above
)-0 Phe-8ar-OH (243 mg) and potassium fluoride (58 ml) were dissolved in DMF (21111), methyl iodide (0.04 mt) was added, and the mixture was stirred at room temperature overnight. After the reaction, Boc-Tyr-D in Example 3
-Arg(Tos)-Phe-Gly-0-n-Pr, 2 ooq (so%
) was obtained. Melting point = 109° ~ 116r Specific optical rotation: [α)'', '+9.54° (c = 1. methanol) Elemental analysis: C4tHasNyOxoS calculated value:
C', 5B, 76; H, 6, 62; N, 11.70 (
%) Experimental value: C, 58,26; H, 6,69; N, 11
．． 28 (%) layer) H-Tyr-D-Arg-Phe-
Production of 8ar-○Me Boc-Ty obtained in 1) above
r-D-Arg(Tos)-Phe-8ar
-0M13 (13zmg) was added to H in Example 2.
-Tyr-D-Arg-Phe-Gly-OEt was treated with a mixture of 0-cresol, thioanisole, trifluoromethanesulfonic acid and trifluoroacetic acid. The obtained crude product was further subjected to carboxymethyl Sepharose 1 column chromatography and Toyo Pearl column chromatography in the same manner as above.
T (purified by W-40 column chromatography to obtain the target product 51 (44%). This substance was reacted with ninhydrin reaction, plagiarism reaction, Sakaro reaction and chlor-0-)
Lysine reaction was positive. Bf" 0.4], R, 780, 72 Specific optical rotation: [
α)'1; +38.20° (Cm1-, water) Elemental analysis:
Cm5T (IIoh+〒06.3 Hm O calculated value;
c, 53.92; H, y, oe; N, 15.72 (%)
Experimental values: C, 53,55; H, 6,89; N, 15.
20(%) acid hydrolysis (6N-'HCI, 110
r', amino acid ratio after 22 hours): Sar O,
94,Tyr O,89゜Phe1, D-Ar
g 1.09 Example 6 H-Tyr-I: l-A, rg
-Preparation of Phe-f3ar-OEt Boc-Tyr-D-Arg(Tos)-Phe-8a obtained in Example 4 above
r-OEt (921K) in Example 2
-Tyr-D-Arg-Phe-04,y-OFiit
The crude product obtained was treated with a mixture of 0-cresol, thioanisole, trifluoromethanesulfonic acid and trifluoro 2 acetic acid as in the case of the preparation of
The product was purified by ea, rl HW-40 column chromatography to obtain the desired product 27 (33%). This substance was positive in the ninhydrin reaction, plagiarism reaction, Sakaro reaction, and chlor-0-tolidine reaction. R710,48R720,73 Specific rotation: [α)',;+a1. o1° (Cm1, water) elemental analysis: C++oHtxN? Oa・3NgO calculation value: C, 54,62; H, 7,43; N, 15.37
(%) Experimental value: C', 53y94; H, 7,34; N
, 15.55 (%) acid hydrolysis (6N-HCl, -1
Amino acid ratio after 10tl', 22 hours: Sar
1.01. Tyr O, 91°Phe 1, D-
Arg 1.11 Patent applicant: Mineji Hiiragi, agent of Grelan Pharmaceutical Co., Ltd. 3 913