JPS60500055A

JPS60500055A - グリシン−８−カルシトニン

Info

Publication number: JPS60500055A
Application number: JP58501114A
Authority: JP
Inventors: オーロースキー，ロナルド・シー; セイラー，ジエイ・ケイ
Original assignee: ア−マ−・ファ−マシュ−ティカル・カンパニ−
Priority date: 1983-02-15
Filing date: 1983-02-15
Publication date: 1985-01-17
Also published as: WO1984003280A1; JPS614840B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】グリシン−８−カルシトニン発明の分野本発明は、生物学的活性を有するカルシトニン及び生物学的に活性なカルシトニンに転化可能なＲプテド並びに斯かるはプチド及びカルシトニンを調製する方法に関する。

発明の背景全ての既知天然カルシトニンペプチドは、６２個のアミノ酸の連鎖を含有する。

例えばサケカルシトニンは下記の式を有する米国特許第３，９２６．９３８号、同第４．０６２．８１５号、同第３．９２９，７５８号、同第４．０３６，９４０号及び同第４．２１７，２６８号は、上記のサケカルシトニンを含むカルシトニン類の改善された合成法を開示している。

天然カルシトニンにはサケカルシトニン、ウナギ、ウシ、ブタ及びヒツジのカルシトニン並びにヒトカルシトニンがある。第８番位置にメチオニンを有するヒトカルシトニンを除きこれらは全て館８番位置にバリンを有する。

発明の縦路本発明者等は、既知の同じ型のカルシトニンよりも生物学的活性が犬なる６２アミノ酸の合成カルシトニン４プテドを発見した。著るしい構造の違いは、本発明者等の新規ハソテドのアミノ酸連鎖には、既知のカルシトニンアミノ酸連鎖の第８番位置にバリン又はメチオニン残基が含有されていないことである。この新規ペプチドは第８番位置にグリシンを有しており、４プチド類の合成的変性に四するＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ命名法を用いて、グリシン８カルシトニンと称する。（Ｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｉｏｐｈｙｓ−Ａｃｔａ。

１３３．１−５（１９６７））この新規ペプチドは既知のカルシトニンと較べて良好な効力と品質を有する。

発明の詳細な説明一般に、本発明者等は固相型の合成法を使用し、ベンズヒドリルアミン樹脂（ＢＨＡ樹脂）と称される樹脂から出発する。この樹脂は、スチレンとジビニルベンゼンとの共重合により製造される架橋ポリスチレンビーズ樹脂から誘導される。

この型の樹脂は既知であり、その製法はビニツタ等が詳細に示している。（Ｐｉｅｔｔａ、　Ｐ、　Ｓ。

及びＭａｒｓｈａｌｌ、　Ｇ、　Ｒ、、Ｃｈｅｍ、　Ｃｏｎｎ＋ｕｎ、　、　６５０　（１９７０）　：］この架橋ポリスチレンＢＨＡ樹脂は化学品供給業者から入手可能である。このＢＨＡ樹脂を表わすのに以下の式式中［相］は樹脂のポリスチレン部分である。

本合成では、樹脂上に全Ｒプチド連釦が形成されるまで、不溶性樹脂に１時期に１個のアミノ酸を添加する。

アミノ酸の官能基はブロッキング基で保護される。アミノ酸のα−アミン基は、６級ブチルオキシカルボニル基又はその均等物で保護される。このα−６級ブチルオキシカルボニル基をＢＯＣと称する。セリンとトレオニンの水酸基ははンジル基又はベンジル誘導基例えば４−メトキシベンジル、４−メチルベンジル、３．４−ジメチルベンジル、４−クロルベンジル、２．６−シクロルベンジル、４ −ニトロベンジル、ばンズヒト９リル又はそれらの均等物により保護される。はンジル又はベンジル誘導基を表わすためにＢＺなる用語を用いる。

チロシンの水酸基は未保護のま〜であるか、又は上でＢＺ基と記したはンジル若しくはベンジル誘導基で保護され、或いはベンジルオキシカルボニル若しくはベンジルオキシカルボニル誘導体、例えば２−クロルベンジルオキシカルボニル若しくは２−ブロムベンジルオキシカルボニル基又はそれらの均等物にて保護される。保護基なし、ＢＺ基、ベンジルオキシカルボニル基又はベンジルオキシカルボニル誘導基を表わすのに用語Ｗを用いる。

システィンのチオール基は、前記のＢＺで表わされるインジル又はベンジル保護基、又はｎ−アルキルチオ基４例えばメチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、ｎ−ブチルチオ若しくはそれらの均等物にて保時される。

ｎ−アルキルチオ基又はＢＺを表わすために＝ｂ号Ｒ２をＲ２がｎ−アルキルチオである場合のＢＺ及びＲ２がＢＺである場合のｎ−アルキルチオを表わすために言？号Ｒ工を用いる。その他、Ｒｏは別のシスティン基であってもよく、この場合Ｒ２はＢＺである。アルギニンのグアニジン基は、ニトロ基、トシル基又はそれらの均等物にて保護される。ニトロ基又はトシル基を表わすために記号Ｔを使用する。リジンのε−アミノ基はインジルオキシカルボニル基又ｎ２．−、クロルベンジルオキシカルボニル、Ｓ、４−ジメチルベンジルオキシカルボニル等ベンジルオキシカルボニル誘導体若しくはそれらの均等物により保護される。ベンジルオキシカルボニル基又はベンジルオキシカルボニル誘導基を表わすために記号■を用いる。ヒスチジンのイミダゾール窒素上に用いられる保護基は、リジン用として前記しＶと命名したようなにンジルオキシカルボニル基及びベンジルオキシカルボニル誘導体である。グルタミン酸のγ−カルボン酸基は、セリン及びトレオニンの水酸基の保−用として説明したようなベンジル又はベンジル誘導基により保護される、これらの保護基は記号ＢＺで表わされる。

既知のサケカルシトニンと同種の活性を有する本発明者等の新規Ｃｒ１ｙ８−サケカルシ）ニンの式は、以下の様に記載される。

Ｈ２上記の式かられかるように、３２個のアミノ酸が関与しており、水式での位置は一般に認められている方法に従って番号付げされている。すなわち、鎖の一端上のａｙｓの位置１で始まり、鎖の他端の位置３２　ＰＲＯで終っている。説明をわかりやすくするため１合成のサイクルに関してもこれと同じ番号付与体系に従う。アミノ酸の組立は、プロリンのカップリングに関するサイクル３２から始まり、トレオニンのカップリングに関するサイクル６１に続き、以下同様である。

３２合成サイクルの各々に使用される好適アミノ酸反応物を以下の表１に記載する。

３２　Ｂｏｏ−Ｌ−プロリン５１　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−）レオニン３Ｑ　ＢＯＣｉ−グリシン２９　ＢＯ’Ｇ−０−−！ｙジルーＬ−セＩＪｙ２８　ＢＯＣ−グリシン２７　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−トレオニン２６　ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギン　ｐ−ニトロフェニル　エステル２５　ＢＯＣ−０−、：ンジルーＬ−トレオニン２４　ＢＯＣｉ−〇−二トローＬ−アルギニン　０ｒＢＯＣ−Ω−トシル−Ｌ −アルギニン２３　ＢＯＣ−Ｌ−プロリン２２　ＢＯＣ−０，？ンジルーＬ−テロシイ　ＢＯＣ−Ｌ−シロシ４又はＢＯＣ −０−２臭化ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−チロシン２１　ＢＯＣ；−０ベンジル−Ｌ−）レオニン２０　ＢＯＣ−Ｌ−／ルタミン　ｐ−ニトロフェニル　エステル１９　ＢＯＣ；−Ｌ−ロイシン１８　ＢＯＣ−ε−ＧＢＺ−Ｌ−ＩＪ　シン又ハＢＯＣ−ε−２４化ベンジルオキシカルボニル−し−リジン１７　ＢＯＣ−Ｎ（ｉｍ）−ＣＢＺ−Ｌ−ヒスチジン１６　ＢＯＣ−Ｌ−ｏ　イン：／１５　ＢＯＣ−Ｉ、グルタミン酸　γ−ベンジルエステル１４　ＢＯＣ−Ｌ−／ルタミン　ｐ−ニトロフェニル　エステル１３’　ＢＯＣ−Ｌ−ベンジル−Ｌ− セリン１２　ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン１１ＢＯＣ−Ｅ−ＣＢＺ−Ｌ−ＩＪ　Ｖン又ハＢＯＣ−ε−２４化ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−リジン１０　ＢＯＣ−グリシン９　ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン８　ＢＯＣ−Ｌ−グリシン７　ＢＯＣ−８−エチルチオ−Ｌ−システィ４　ＢＯＣ−８−メチルチオ−Ｌ− システィア、Ｂｏｃ−ｓ−ｎ−プロピルチオ−Ｌ−システィン又はＢＯＣ−８− ｎ−ブチルチオ−し−システィン６　Ｂｏｃ−ｏ−くンジルーＬ−トレオニン５　ＢＯＧ−０−くンジルーＬ−セリン４　ＢｏＣ−Ｌ−ロイシン３　ＢＯＯ−Ｌ−アスパラギン　ｐ−ニトロフェニルエステル２　Ｂｏｏ−０− ＜ｙジル−Ｌ−セリンｉ　Ｂｏｃ−ｓ−ｐ−メトキシはンジルーＬ−システィｙ、ＢＯＣ−８−・ばンジルーＬ−システィン又はＢｏａ−ｓ−３，４−ジメチルベンジル−Ｌ−システィ乙ビスーＢＯＣ−Ｌ、−システィン表Ｉに指摘した各アミノ酸誘導体は市販されている。

サイクル６２ＢＨＡ樹脂へのプロリンのカップリング樹脂はプテド合成の全工程に用いられる反応器は、頂部に原料添加用入口を備え、可溶性反応混合物及び洗浄溶剤な濾過・除去するための焼結ガラス板を底部に備えたガラス容器である。濾過は、真空又は窒素圧使用のいずれかにより行なわれる。容器内容物は、容器全体の振とう又は機械的攪拌装置にて攪拌される。

サイクル６２では、ＢＨＡ樹脂を反応器内に配置し、塩化メチレン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ベンゼン又はそれらの均等物等の溶剤中に、樹脂グラム当り溶剤約６乃至１２ゴの割合で溶剤中に懸濁させる。これに、使用ＢＨＡ樹脂の遊離アミン当量当り約１乃至６８当量のＢＯＣ−Ｌ−プロリンを添加する。５乃至１０分間攪拌後、ジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＯＧ）等のカップリング剤（ＣＡ）又はその他のジイミドカップリング剤が使用されろ。ジイミドカップリング剤の使用量は、使用ＢＯＣ−Ｌ−プロリン当量当り０．５乃至２．０当量である０ＢＯＣ−Ｌ−プロリンは、その活性エステル誘導体、そのアジド誘導体、その対称的無水物誘導体又は適当に選択された無水物誘導体を使用した場合には、カップリング剤無しでもカップリングする。使用可能な活性エステル誘導体は、２− ニトロフェニルエステル、４−ニトロフェニルエステル、Ｒンタフルオルフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシこはく酸イミドエステル又はそれらの均等物である。活性エステルの使用量は、ＢＨＡ樹脂の遊離アミン等量当り１乃至１０当量である。

ＢＨＡ樹脂、溶剤、ＢＯＣ−Ｌ−プロリン及びカップリング剤又はＢＯＣ−Ｌ− プロリン活性エステルからなる反応混合物を、試験試料のニンヒドリン試験〔イー、カイザー（ＪＫａｉｓｅｒ）等−Ａｎａｌ−Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　３４．５９５−８（１９７０）］　が反応の完了を示すまで機械的に攪拌又は振とうする。カップリング反応完了後、塩化メチレン、クロロホルム、メチルアルコール、ベンゼン、ジメチルホルムアミド又は酢酸等の溶剤でＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂を洗浄する。洗浄溶剤量は、最初に使用したＢＨＡ樹脂各グラム当り５乃至２０ｍ１の溶剤が適当である。完了前にカップリング反応を停止したい場合には、洗浄法が使用され、ＢＯＯ−Ｌ−プロリン樹脂上の妙存遊雅アミン基は、過剰のアセチル化剤にてアセチル化することにより更なる反応から保護される。アセチル化は、　Ｂｏｏ−Ｌ−プロリン樹脂をアセチル化剤溶液と共に０．５乃至１２時間の間攪拌することによりなされる。Ｎ−アセチルイミダゾール／塩化メチレン溶液又は無水酢酸とトリエチルアミン／クロロホルム混合物等のアセチル化剤が使用される。アセチル化剤の使用量は、出発ＢＨＡ樹脂の遊離アミンタイターの当量当り０．５乃至５．０当量である。

ＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂を製造するためのカップリング反応は、次式にて記述される。

ＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹、賭の保護基除去前記のように調製されたＢ１０−Ｌ− プロリン樹脂を、前言ｅしたような溶剤で洗浄し、それを塩化メチレン、り０ロロホルム、ベンゼン又はそれらの均等物等の浴剤とトリフルオル酢酸（ＴＦＡ）の混合物等の試薬と共に攪拌して保河基を除去する。・Ｇ剤中のＴＦＡの量は、混合物の１０％から１００％まで変化する、ＴＦＡ−浴剤混合物の量は、最初に用いたＢＨＡ　樹脂ダラム当り、６乃至２０ｍ１の範囲で変化する。反応時酵は約１０分乃至４時間である。保Ｎ５Ｍ除去工程は−ＴＦＡ−浴剤混合物を濾過・除去することにより停止される。残留Ｔ　Ｆ、Ａは、塩化メチレン、クロロホルム、ベンゼン又はそれらの均等物等の溶剤にトリエチルアミンを５乃至５０％溶解させた溶液を、ＢＨＡ樹脂グラム当り、６乃至２０Ｔｎｌ用いて洗浄することにより、Ｌ−プロリン樹脂から除去される。トリエチルアミンの代りにその他の３級又は２級有機アミン、例えばトリメチルアミン、Ｎ−エテルピペリジン、ジイソプロピルアミン又はそれらの均等物を使用することもできる。Ｌ−プロリン樹脂の遊離アミンのタイターは、ドーマン（Ｄｏｒｒｒ：ａｎ）滴定法（ドーマン、エル、シー。

Ｔｅｔ、ｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　＋　１９６９−２３１９−２１　）で測定される。保護基除去反応は１次式にて記述される。

サイクル６１サイクル６２の結果として得られたプロリルＢＨＡ樹脂をカップリング溶剤に懸濁し、ＢＯＣ−０−ＢＺ−Ｌ、）、レオニン誘導体を添加して混合物を同様にして平衡状態に至らしめる。カップリング剤のＤＣＣを添加し、ニンヒドリン試験が反応完結を示したあと１反応原合物を濾過によ１）ＢＯＣ−０−ＢＺ　）レオニルプロリルＢＨＡ樹脂から分離する。このにプチド樹脂を溶剤で洗浄する。反応物及び溶剤の量並びに反応時間は、サイクル６２に盲？載されたものと同様である。サイクル６２に記載した保睡基除去法により、ＢＯＣ基をこのはプチド樹脂から除去する。続いて得られた０−ＢＺ−トレオニルプロリルＢＨＡ樹脂は、サイクル３０用に供される。

サイクル６１の諸反応は、次式にて示される。

１２便宜上、この生成樹脂ペプチドを以下のような略記表示を用いて言ピす。

サイクル３０サイクル６０では、ＢＯＣ−０−ＢＺ−トリレオニンの代りにＢＯＧ−グリシンを用いる点を除き、サイクル３１と同様な方法でカップリング反応及び保護基除去反応を行なう◎カップリング反応及び保護基反応は以下のように記される。

サイクル２９サイクル２９では、アミノ酸誘導体をＢＯＣ−０−ＢＺ−Ｌ−セリンに置き換える以外は、カップリング及び保護基除去反応はサイクル６１と同様になされる。

これは以下のように記されるサイクル２８サイクル２８では、アミノ酸反応物をＢＯＣ−グリシンに置き換える以外は、カップリング及び保護基反応はサイクル３１に記載のようになされる。これらのカップリング及び保護基除去反応は以下のように言ピされる。

４サイクル２７太サイクルのカップリング及び保護基除去反応は、サイクル３１と同じアミノ酸反応物を用いて行なわれ、下、化合物が得られる。

サイクル２６サイクル２６でのカップリング反応は、ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンの活性エステル誘導体を用いてなされる。活性エステル法は、ＤＣＣ，カップリング剤の代りにＢＯＣ−アスパラギン又はＢＯＣ−グルタミンと共に使用される。

反応は、ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンの活性エステル誘導体をＢＨＡ樹脂の遊離アミン当量当り２乃至１０当量使用しジメチルホルムアミド、ジメチルホルムアミｙとベンゼン、塩化メチレン又はクロロホルムの混、金物又はそれらの均等物との混合物中、最初に使用したＢＨＡ樹脂ダラム当り２乃至２０ゴの溶剤量にて行なわれる、反応時間は１乃至７２時間の範囲である。反応混合物は、ニンヒドリン試験で反応完了が示されたあと、ＢＯＣペプチド樹脂から濾過・除去される。

使用される活性エステル誘導体は、２−ニトロフェニルエステル、４−二トルフェニルエステル、ペンタフルオルフェニル又ハソれらの均等物である。誘導体の活性エステル部をＡ［と記す。カップリング反応は以下のように紀される。

ＢＯＣ基を除去するための保護基除去反応は、サイクル３２と同様になされる。

サイクル２５−２１サイクル２５乃至２１の各サイクルでは、方法及び反応物の割合はサイクル６１と同様にし、サイクル２５ではＢＯＣ−ＢＺ−Ｌ−）レオニンを、サイクル２４ではＢＯＣ−０）−Ｔ−Ｌ−ｆルーＪｆ　＝　ｙヲ、　サインｋ　２３　テ！！　ＢＯＣ−Ｌ−プロリンを、サイクル２２ではＢＯＣ−Ｗ−Ｌ−チロシンを、サイクル２１ではＢＯＣ−０−ＢＺ−Ｌ−）レオニンを用いて行なわれる。サイクル２１完了後に得られる化合物は以下のように？される。

サイクル２０サイクル２０では、アミノ酸誘導体としてＢＯＣ−Ｌ−グルタミン活性エステル誘導体を用い、サイクル２６と同様の方法及び反応物割合を用いてカップリング及び保護基除去反応を行なう。生成化合物は下記の通りである。

１６サイクル１９では、アミノ酸誘導体としてＢＯＣ−Ｌ−ロイシンを使用し、サイクル６１と同様に反応を行なった。

サイクル１９の生成化合物は以下の通りである。

サイクル１８では、ＢＯＧ−ε−Ｖ−Ｌ−リジンなるアミノ酸誘導体を使用する、その他の点ではサイクル１８の方法はサイクル３１と同様になされ、下記の生成物が得らサイクル１７乃至１５は、サアクル１７ではＢＯＣ−Ｎ（ｉｍ）−ｖ −Ｌ−ヒスチジンを、サイクル１６では反応物としてＢＯＣ−Ｌ−ロイシンを、サイクル１５では反応物としてＢＯＧ−Ｌ−グルタミン酸Ｂｚエステル（ＢＺはセリン及びトレオニンに対し表わしたものと同じ基を表わす）を使用する以外は、サイクル６１と同様になされ、サイクルｉ５から下記化合物を得る。

サイクル１４は、アミノ酸誘導体としてＢＯＣ−Ｌ−グルタミン−ＡＥを用い、サイクル２０と同様になされる、サイク／Ｉ／１６乃至８は−ｔイクｙｖ　１３　テハＢｏｏ−０−ＢＺ−Ｌ−セリンを、サイクル１２ではＢＯＣ−Ｌ−ロイシンを、サイクル１１でばＢＯＣ−ε−Ｖ−Ｌ−リシンを、サイクル１０ではＢＯＣ−グリシンを、サイクル９ではＢＯＣ−Ｌ−ロイシンを、サイクル８ではＢＯＣ−Ｌ−バリンを用いることを除き、サイクル６１と同様になされ、下記の化合物が得られる。

サイクル７８サイクル７は、アミノ酸誘導体としてＢＯＣ−８−Ｌ−システィンを用いる点を除き、サイクルろ１と同様になされる。サイクル７の結果得られる化合物は次式により記式中Ｒ２はアルキルチオ又はＢＺ基である。

サイクル６−２サイクル６乃至４は、アミノ誘導体としてサイクル６ではＢＯＣ−０−ＢＺ−Ｌ −）レオニンを、サイクル５と２でばＢＯＧ−ＢＺ−Ｌ−セリンを、サイクル４ではＢＯＣ−Ｌ−ロイシンを使用したことを除きサイクル３１と同様になされる。サイクル６はＢＯＣ−Ｌ−アスパラギン活性エステルを用いてサイクル２６と同様になされる、サイクル２から得られる化合物は次式の通りである。

サイクル１このサイクルばＬ　ＢＯＯ−８−Ｈ−ｒ−システィン誘導体を用いてサイクルと同様になされる、システィンに対して選択されるＲグループは、サイクル７で用いられるものと同−又は相異なるものである。例えば、サイクル７に対して選択される誘導体がＢＯＣ−８−エチルチオ−■Ｊ−システィンであるならば、サイクル１の誘導体はＢＯＣ−８−４−メトキシベンジル−４−システィンであり、サイクル７としてＢＯＧ−８”４−メトキシベンジル−Ｌ−メトキシベンジル− Ｌ−システィンが選択されたならば、この誘導体はサイクル１にも使用されるーサイクル１から得られる化合物は次式により示される。

但し式中Ｒ４はＳ−、−アルキル−ＧＹＳ又はＢＺであり、Ｒ２は５−ｎ−アルキル又はＢＺであり、Ｒ□ばＲ２がＢＺならば５−ｎ−アルキルであり、Ｒ２はＲが５−ｎ−アルキル又はＣＹＳならばＢＺである。

サイクル１は樹脂ペプチドの完了を表わし、樹脂４プテドは反応器から除去され、真空で乾燥される。樹脂ペプチドの重量は、合成に最初使用されたＢＨＡ樹脂重量２０の２．０乃至４．０倍であると期待される。

樹脂はプチド開裂ペプチドは、サイクル１から得られる樹脂はプチドから液状フッ化水素（ＨＦ）で処理して開裂される。ＨＦ開裂は、樹脂ペプチドとアニソール（樹脂啄プテド各ダラム当り０．５乃至５−）の混合物を液体ＨＦ（樹脂ペプチド各グラム当り２乃至２０ｍ１）にて−２０℃乃至＋１５℃で０．５乃至２０時間処理してなされる。反応後、過剰のＨＦを蒸発して除去し、残りのはプチドと樹脂ビーズの混合物を酢酸エチル、ジエチルエーテル、ベンゼン又は類似物等の有機溶媒で抽出してアニソールと）（Ｆ残分を除去する。はプチドは、酢酸水溶液中に抽出することにより、樹脂ビーズから分離される。この段階のペプチドは環状でなく、分子中の第１位置と第７位置のシスティン間に環状ジスルフィド結合を有さぬ非環状生成物である。

ＨＦ処理は、第１位置又は第７位置のシスティン残基のチオール基上のＳ−アルキルチオブロッキング基を除いて、全てのブロッキング基をペプチドから除去する。

５−ｎ−アセチルチオ−Ｌ−システィン残基はＨＦ開裂操作に対し安定であり、開裂及び抽出操作中ずつとそのま〜である。５−ＢＺ−Ｌ−システィンはＨＦで開裂され、遊離チオール基を有するシスティン残基を与える。太発明者等の合成では、第１位置及び第７位置に両タイプのブロッキング基を互いに組合せて使用した。

２□特悶ＧＯ−５０００５５（７）斯くて、ＨＦ開裂後に得られるペプチドは、樹脂はプチド合成時に使用されたシスティン誘導体のチオール基樹脂はプチド合成サイクル１でＢｏＣ−８−ＢＺ− Ｌ−システィン誘導体が使用され、サイクル７でＢＯＧ−３−ｎ−アルキルチオ −Ｌ−システィンが使用されたならば、ＨＦ開裂後に得られるペプチドはタイプｌとなり、第１位置に遊離チオール基を有し且つ第７位置のシスティン残基上に５−ｎ−アルキルチオ基を有するであろう。木発明者等はこれをタイプｌはプチドと称し、次式のように表わＬＹＳ　＋　ＬＥＵ　＋　ＳＥＲ，ＧＬＮ−ＧＬＵ −’ＬＥＵ−ＨＩＳ−ＬＹＳ　ｍＬＥＵ　−ＧＬＮ−Ｔｌ−ＴＹＲ＝　ＰＲＯ− ＡＲＧ−ＴＨＲ−ＡＳＮ　＋　ＴＨＲ−ＧＬＹ−５ＥＲ−ＧＬＹ−ＴＨＲ−ＰＲＯ−ＮＨ２逆に、サイクル１でＢＯＣ；−８−、ｎ−アルキルチオ−Ｌ−システィン誘導体を使用し、第７位置でＢＯＣ−３−ＢＺ−Ｌ−システィンを使用したならば、開裂から得られるはプチドはタイプ■となり１次式にて表わされるであろう。

ＬＹＳ−ＬＥＵ−８ＥＲ−ＧＬＮ−ＧＬＵ−ＬＥＵ−ＨＩＳ−ＬＭＳ−ＬＥＵ− ＧＬＮ−罫伍−ＴＹＲ−ＰＲＯ−ＡＲＧ−升正−ＡＳＮ−ＴＨＲ−（、Ｌ￥−８ＥＲ−８Ｌ、ｙ＝ＴＨＲ＝ＰＲＯ−ＮＨ。

２第１位置の保赫基５−ｎ−アルキルの代りに、太発明者等はシスティン基を使用するが（このシスティン基はこの位置でシスティンと共にシスチン基を形成する）、この場合第７位置のシスティンを保辱するためにＢＺ基を用いる。サイクル１の反応物としてビスーＢＯＧ−Ｌ−システィンを使用し、サイクル７の反応物としてＢＯＣ−８−ＢＺ−Ｌ−システィンを使用したならば、開裂から得られるはゾチドはタイプ■となり、次式にて表わされる。

ＬＹＳ　−ＬＥＵ−５ＥＲ−ＧＬＮ−（１，ＬＵ−ＬＥＵ　−ＨＩＳ−ＬＹＳ’ −ＬＥＵ−ＧＬＮ−ＴＨＲ−ＴＹＲ−ＰＲＯ−ＡＲＧ−ＴＨＲ−ＡＳＮ　−ＴＨＲ−ＧＬＹ−５ＥＲ−ＧＬＹ　−ＴＨＲ−ＰＲＯ＝Ｈ２第１位置、第７位置共にＢＯＣ−ＢＺ−Ｌ−システィンを反応物として使用したならば、開裂から得られるペプチドはタイプ■となり１次式にて表わされる。

Ｈ−ｃＹ′Ｓ−８ＥＲ−ＡＳＮ−ＬＥＵ−３ＥＲ−ＴＨＲ−ａｙＳ−ＧＬＹ−ＬＥＵ−ＧＬＹ−ＬＹＳ＋ＬＥＵ−８ＥＲ−ＧＬＮ−ＧＬＵ　−Ｌ　ＥＵ、−ＨＩ　Ｓ−ＬＭＳ−ＬＥＵ−ＧＬＮ−ＴＨＲ−ＴＹＲ−ＰＲＯ−ＡＲ（、−ＴＨＲ− ＡＳＮ−ＴＨＲ−ＧＬＹ−５ＥＲ−ＧＬＹ−ＴＨＲ−ＰＲＯ−ＮＨ２タイプＩ、Ｉ［及び■ペプチドの環状ジスルフィドはプチドへの転化は、ＨＦ開裂からの粗にプチドの酢酸水溶液を蒸留水で、最終容積が開裂される樹脂Ｒブチドグラム当り５０乃至２００ゴとなるまで稀釈することによりなされる。この溶液のｐＨは水酸化アンモニウム溶液の添加により５乃至１０に調整され、混合物は窒素等の不活性ガス流下、密封答器内で約２乃至４８時間攪拌される。反応は、オフガス流がｎ−アルキルメルカプタンを含有しなくなる時点で停止可能である。氷酢酸を添加して反応混合物のｐＨを約６．５乃至５．５に低下させる。

タイプ■ペプチドの環状ジスルフイドベプテ、ト９への転化は、４プチドを酸化して環内に第１位置と第７位置のシスティンを含むような環構造にする既知の古典的方法によりなされる。

中間体ペプチドがタイプＩ、ｎ、ｍ又は■のいずれかであると、第８位置をグリシンで置き換えた点を除き、任意の既知カルシトニンに対応するアミノ酸鎖のペプチドを合成でき、このようにして合成されたはプチドを精製すると、この既知のカルシトニンと同タイプの生物学的活性を有することが判明した。斯く合成されるカルシトニンをＧｌｙ８カルシトニンと命名する。これはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ命名法に従うものである。

粗Ｇ７ｙ８−．Ｓ（：３Ｔの精製前述の合成によるｐＨ５，０の相はプチト９溶液を、イオン交換樹脂法を用いて濃縮する。この濃縮物を、ゲル−濾過法とイオン交換クロマトグラフ法を組合せた方法で精製する。最終精製物は、溶液から凍結乾燥法によりふわふわの白色固体として得られる。この生成物のアミノ酸分析結果は、所望はプｔドに正確に一致スる。

以下は、はプチド調製の特定例である。

２４実施例１樹脂の活性化アミンタイター０．６１ミリ当量／ｇのＢＨＡ樹脂（５ｇ）を、シュバルツ”２７社（Ｓｈｗａｒｚ−Ｍａｎ、Ｉｎｃ、＝ニーヨーク州オレンジバーグ）製のペプチド合成装置の反応容器内に配置した。この樹脂を以下の溶剤２５づで処理し各処理後に濾過した。

クロロホルム２分間処理を２回１０％トリエチルアミン／クロロホルム５分間処理を２回クロロホルム２分間処理塩化メチレン２分間処理を３回サイクル６２カップリング：該ＢＨＡ樹脂、塩化グチレン２５ｍ１及びＢＯＣ−Ｌ−プロリン２−５８９　（０，０１２モル）を１０分間攪拌した。ジシクロへキシルカルボジイミドの塩化メチレン溶液１２．ＯｍＩ！（溶液１ゴ当りＤＣＣＩ　１　ミＩＪ　当世）　ｆｉｒ：反応器に添加し、混合物を６時間攪拌した。反応混合物を濾過して反応器から除去し、　ＢＯＣ−プロリルＢＨＡ樹脂を以下の溶剤で継続的に洗浄しく２５ｍＡ’、２分間）、洗液を各回濾過・除去した。

塩化メチレン　２回メチルアルコール　２回塩化メチレン　６回アセチル：次に該樹月旨をトリエチルアミン（ＴＥＡ）１．５ｍ／−無水酢酸１ゴ及びクロロホルム２５ゴの混合物と共に２時間攪拌した。反応混合物を濾過・除去し、該樹脂を以下の洗浄（２分間、２５ｍＪ）ｘ付した。

クロロホルム　２回メチルアルコール　２回塩化メチレン　３回保諸基除去：　ＢＯＣ保護樹脂を、トリフルオル酢酸（ＴＦＡ）１５ｍＡと塩化メチレン１５ｍ１の混合物と共に５分間攪拌した。この混合物を濾過・除去し、樹脂を、ＴＦＡ１５−と塩化メチレン１５ｍ１の第２のｉ１ス合物と共に３０分間攪拌した。反応混合物を濾過・除去し、樹脂を以下の洗浄（２５ｍＡ’）に付した。

塩化メチレン２回、各２分間メチルアルコール２回、各２分間クロロホルム２回、各２分間１０％ＴＥＡ／クロロホルム２回、各１０分間クロロホルム２回、各２分間塩化メチレン２回、各２分間Ｌ−７’ロリンＢＨＡ樹脂を滴定してアミン又はプロリンのタイターを測定した。この値は、樹脂ダラム当りアミン又はプロリン０．５５ミリ当景であった。

サイクル６１カップリング：該Ｌ−プロリル樹脂、塩化メチレン２５ゴ及びＢＯ（、Ｏ−ベンジル−Ｌ−）レオニン１３．４．９（０，０１１モル）を１０分間攪拌した。次にジシクロへキシルカルボジイミＦの塩化メチレン溶液（溶液１ｄ当りＤＣＣＩ　１ミリ当量）１１．ＯｍＪ（ＤＣＣＩ全０．０１１モル）を反応器に添加し、混合物を２時間攪拌した。反応混合物を反応器から除去し、樹脂を下記溶剤２５ｍ１で２分間継続的に洗浄し、各回毎に洗液な濾過・除去した。

塩化メチレン　２回メチルアルコール　２回塩化メチレン　６回ニンヒドリン試験は陰性であった。

保護基除去：このサイクルに対しても、サイクル３２に記載の保護基除去方法を繰返した。

サイクル６０乃至２７これらのサイクルで用いたカップリング及び保４基除去法は、トレオニン誘導体の代りに下記アミノ酸誘導体を使用した点を除き、サイクル３１と同様であった。

サイクル６０・・・ＢＯＣグリシン１．９２９　（０，０１１モル）サイクル２９・・・ＢＯＧ−０−ベンジル−Ｌ−セリン３．２５．９（０，０１１モル）サイクル２８・・・サイクル６０と同じ反応物を使用サイクル２７・−・サイクル３１と同じ反応物を使用サイクル２６カツプリング；サイクル２７から得られたペプチド樹脂をジメチルホルムアミ） ”（ＤＭＦ）各２５１ｆｆで２回洗浄した。次に該樹脂をＤＭＦ３５１１１７中ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンｐ−ニトロフェニルエステル５．８２　ｇ（０，０１６５モル）の溶液と共に２４時間攪拌した。反応混合物を濾過し。

樹脂ペプチドを下記浴剤各２５ゴで継続的に２回、２分間洗浄した◎ＤＭＦ、塩化メチレン・メタノール、塩化メチレン。各溶剤は濾過・除去され、ニンヒドリン試験は陰性であった。

保護基除去：サイクル３２で用いた保護基除去法を繰カップリング及び保ｆ？を基除去は、サイクル３１と同じ反応物を同量用いて同様な方法で行なわれた。

サイクル２４カップリング：サイクル２５から得られた樹脂はプチドをＤ　Ｍ　Ｆ各２５ｍｊで２回継続して洗浄した。次にこの樹脂６プチドをＢｏｃ−Ｎ−ｙ−トシル−Ｌ −アルギニン７、０６ｍ９　（０，０１６５−ｒ−ル）　、！：、ＤＭＦ　２５ｍ１ｆ）混合物ト共に１０分間攪拌した。続いて塩化メチレンに溶かしたＤＣＣ１１６，５ゴ（ＤＣＣＩ　Ｏ，０１６５モルに相当）を添加し、混合物を６時間攪拌した。反応混合物を沖過・除去した。この樹脂６プチドを下記溶剤各２５− ２回継続して２分間洗浄した。Ｄ　Ｍ　Ｆ−塩化メチレン、メチルアルコール、塩化メチレン。ニンヒドリン試験は陰性であった。

保鯵基除去：サイクルろ２で用いた保護基除去法を繰カップリング：サイクル２４から得られたイプチド樹月旨を、ＢＯＣ−Ｌ−プロリン３．５４　！；Ｉ（０，０１６５モル）及び塩化メチレン２５ｒｎｌと共に１０分間攪拌し、塩化メチレン中のＤＱＣＩ　１６．５ｍ１（ＤＣＣ；Ｉｏ、０１６５モ＃に相当）・除去し、樹脂投プチドを下記溶剤各２５１１１７で２回継続して洗浄した。塩化メチレン、メチルアルコール、塩化メチレン、各洗液は濾過・除去された。ニンヒドリン試験は陰性であった。

保護基除去：サイクル６２で用いた保護基除去法を繰返した。

サイクル２２及び２１これらのサイクルで用いたカップリング及び保護基除去法は、カップリング反応でＢＯＣ−Ｌ−プロリンの代りに以下のアミノ酸誘導体を使用した点を除き、サイクル２３と同様であった。

サイクル２２・・・Ｂｏｏ−Ｗ−Ｌ−チロシン　８．１５ｇ（０，０１６５モル）サイクル２１・・・ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−）レオニン（０，０１６５モル）サイクル２０この方法は、アスパラギン誘導体の代りにＢＯＣ−Ｌ−グルタミンｐ−ニトロフェニルエステルヲ６．５０９（０，０１６５モル）使用した点を除き、サイクル２６と同様であった。

サイクル１９乃至１５トレオニン誘導の代りに下記アミノ酸誘導体を使用した点を除き、サイクル３１と同様な方法を用いた。

サイクル１９・・・ＢＯＣ，Ｌ−ロイシン２５４　（０，０１１モル）サイクル１８・・・ＢＯＣ−ε−２−クロルカルボベンジルオキシ−Ｌ−リジン４．５５ｇ（０，０１１モル）サイクル１７・・・ＢＯＣ−Ｎ（ｉｍ）−カルボベンジルオキシ−し−ヒスチジンサイクル１６−サイクル１９参照のことサイクル１５・・・ＢＯＧ−’Ｌ−グルタミン醪−γ−ベンジルエステルろ、７０．！９（０，０１１モル）サイクル１４サイクル２０と同様サイクル１６カップリング反応に、プロリン誘導体の代りにＢＯＧ−０−ベンジル−Ｌ−セリン４．８６　ｇ（０，０１６５モル）を使用した点を除き、サイクル２６と同様な方法を用いた。

サイクル１２乃至９カップリング反応に、トレオニン誘導体の代りに下記アミノ酸を使用した点を除き、サイクル６１と同様な方法を用いた。

サイクル１２・・・サイクル１９で使用したものと同じ反応物。

サイクル１１・・・反応物はサイクル１８と同じであった。

サイクル１０・・・サイクル６０で使用したものと同じ反応物。

サイクル　９・−・サイクル１９で使用したものと同じ反応物。

サイクル８カップリング：サイクル９からの樹脂はプチト９を、ＢＯＣ−Ｌ−グリシン３．４８！ｊ（０，０１６モル）及び塩化メチレン２５ｄと共に１０分間攪拌した。

次に塩化メチジ０ン中のＤＣＣＩ　１６．５ゴ（ＤＣＣＩ　Ｏ，０１６５モルに相当）を添加し、混合物を１６時間攪拌した。反応混合物を痙過・除去した。樹脂投プチドを、下記溶剤各２５ｍ１にて継続して２回２分間洗浄に付した。塩化メチレン、メチルアルコール、塩化メチレン。洗液は各回沖過・除去した。

保穫基除去：サイクル６１を参照のこと。

カップリング反応に、トレオニン誘導体の代りにＢＯＣ−８−エチルチオ−レージスティン３．０９ｇ（０，０１１モル）を使用した点を除き、サイクル３１と同様の方法を用いた反応物及び方法は、サイクル３１と同様であったＯサイクル５用いた反応物及び方法は、サイク、ル２９と同様であったＯサイクル４用いた反応物及び方法は、サイクル１９と同様であった。

サイクル３用いた反応物及び方法は、サイクル２６と同様であった。

サイクル２用いた反応物及び方法は、サイクル２９と同様であつた。

サイクル１用いた反応物及び方法は、トレオニン誘導体の代りにＢＯ（３−８−ｐ−メトキシはンジルーＬ−システィン６．７５、！９（０，０１１モル）を使用した点を除き、サイクル６１と同様であった。

サイクル１完了後、該樹脂ペプチドを各２５ゴのｎ−ヘキサンで２回継続して洗浄した　はプチド物質を反応器から取り出し、電気式真空乾燥器内４０℃、Ｑ、ｌｉｃｍＨｇにて２４時間乾燥した。

フッ化水素による開裂乾燥した樹脂ペプチド°（２ｇ）とアニソール２−をテフロン製反応容器内に配置した。テフロン＠覆マグネットスターラーを備えた該容器をドライアイス−アセトン浴内に配置し、フッ化水素ガス１０ｒｒＬｌを該容器内に凝縮させた。この混合物を水浴にて０℃で１時間攪拌した。

フッ化水素を減圧下蒸発により除去した。残清な各１０−の酢酸エチルと共に６回砕いた。樹脂ビーズから０．１モル濃度の酢酸水溶液１２０−ではプチドを抽出した。

ペプチドの環化フッ化水素開裂から得るれた酢酸水溶液抽出物に蒸留水８０ｄを添加して０．２リツトルに稀釈した。濃水酸化アンモニウムを添加して、溶液のｐＨを１５に調整した。

この溶液を窒素流下に密封容器内で２４時間攪拌した。

この時点では、出口窒素流にはエチルメルカプタンは検３２出できなかった。窒素流のエチルメルカプタン含量は、該流をエルマンＥ　薬ｆａ　液〔エルマン、シー、エル（Ｅｌｌｍａｎ、Ｇ−Ｌ）　Ａｒｃｈ−Ｂｉｏｃｈｅｍ＋Ｂｉｏｐｈｙｓ−＋　８２゜７Ｏ−７（１９’６９））　に通すことにより測定された。氷酢酸の添加により、反応混合物のｐＨを５．０に調整した。

粗Ｇ１−８−３ＣＴの精製前記合成にて得られたｐＨ５，０の溶液０．２リツトルをＳＰ−セフ７デツクス（Ｓｅｐｈａｄｅ＋ｘ）　Ｇ−２５イオン−交換カラムを用いて濃縮した。０．７モル濃度の塩化ナトリウム溶液と共にカラムから取り出された濃縮物２５ゴを脱塩し、セファデックスＧ−２５（細粒）ゲルー濾過カラムに通して０．０３干ル濃度の酢酸水溶液で溶出させることにより精製した。このカラムからのＧｌｙ −８−８ＯＴ留分のｐＨを、水酸化アンモニウム溶液の添加により６．０に調整した。この溶液を、ホワットマン（Ｗｈａｔ、ｍａｎ）　０Ｍ５２カラムを用いるイオン交換クロマトグラフィーにて酢酸アンモニウム緩衝液で溶出させて更に精製した。このカラムからのＧｌｙ−８−ｓｃ’ｒ留分のｐＨを、氷酢酸の添加により５．０に調整した。この溶液をＳＰ−セファデックスＣ−２５イオン−交換カラムを用いて濃縮した。０．７モル濃度の塩化ナトリウム溶液と共にカラムから取り出された濃縮物６０ｒＩＬｌをセファデックスＧ−２ｓ（細粒）ゲルー濾過カラムで脱塩した、精製ペプチド留分を捕集し凍結乾燥した。生成物はふわふわした白色の固体として得られた。生成物のアミノ酸分析による比は以下の通りであり、カッコ内に理論値を配す。

Ａｓｐ２．０（２）、　Ｔｈｒ５．０（５）、　５ｅｒ３．８（４）、　Ｇ１ｕ３．３（３）。

Ｐｒｏ２．２（２’）、　Ｇｌｙ３．８（１，Ｌｅｕ４．９（５）、　ＨｉｓＯ，９（１”）。

Ｔｙｒｏ、８５（１）、　（３ｙｓ１．９（２）、　Ｌｙｓｌ、９（２）、　ＡｒｇＯ，８（１）この生成物のアッセイはｍｇ当り６２０Ｑ　ＭＲＣ単位であった。

本発明の幾つかの実施態様についてのみ、詳細に説明したが、当業者には１発明の精神及び特許請求の範囲内でその他多数の特定実施態様の実施が可能なること及び多数の変化が可能なることは明らかであろう。

木発明者等の新規Ｇ７ｙ８ウナギカルシトニンの式は以ＬＥＵＬＳ訊−ＧＬＮ− Ｇｒ、ｕ−ＬＥｕ−ＨＩｓ−Ｌｙｓ−ｊｇｕ−ＧＬＮ−ＴＨＲ−ＴｙＲ−ＰＲＯ −ＡＢＣ−ＴＨＲ−ＡＳＰ−ＶＡＬ−Ｃ，ＬＹ−ＡＬＡ−ＧＬＹ−ＴＨＲ−ＰＲＯ−ｈＩＨ２木発明者等の新規ＧＬＹ−３ヒトカルシトニンは以下のように記される。

ＴＹＲ−ＴＨＲ−（、ＬＮ−ＡＳＰ−ＰＨＥ−ＡＳＮ　−ＬＹＳ　−ＰＨＥ　− ＨＩ　Ｓ　−ＴＨＲ−ＰＨＥ−ＰＲＯ−ＧＬＮ　−ＴＨＲ−ＡＬＡ−Ｉ　ＬＥ− （１，ＬＹ、−ＶＡＬ−ＧＬＹ　−ＡＬＡ−ＰＲＯ−ＮＨ２手　続　補　正　書昭和５９年２月７し特許庁長官　若杉和夫　殿１、事件の表示昭和　年特許願第　号ＰＣＴ／［３８３１００２２１、発明の名称）６゜補正をする者事件との関係　特許出願人明細書の〔特許請求の範囲〕と〔発明の詳細な説明〕の欄（側部：）（１）特許請求の範囲を訂正する。

ＧＬＹ−ＬＭＳ−ＬＥＵ−５ＥＲ−ＧＬＮ−ＧＬＵ−ＬＥＵ−ＨＩＳ−ＬＹＳ− ＬＥＵ−ＧＬＮ−ＴＨＲ−ＴＹＲ−ＰＲＯ−ＡＲＧ−ＴＨＲ−ＡＳＮ−ＴＨＲ− ＧＬＹ−３ＥＲ−ＧＬＹ−ＴＨＰ、−ＰＲＯ−ＮＨ３なる構造を有するはプチド。

ＬＭＳ−ＬＥＵ−３ＥＲ−ＧＬＮ−ＧＬＵ−ＬＥＵ−ＨＩＳ−ＬＭＳ−ＬＥＵ− ＧＴ、Ｎ−ＴＨＲ−ＴＹＲ−Ｐ　ＲＯ−ＡＲＧ−ＴＨＲ−ＡＳＮ−ＴＨＲ−ＧＬＹ−５ＥＲ−ＧＬＹ−ＴＨＲ−ＰＲＯ−ＮＨ２なる構造を有ずイ、〆プチド。

但しＲ１は５−ｎ−アルキル、ＣＹＳ又はＨであり且つＲ２は５−ｎ−アルキル又はＨであり　Ｒ２が５−ｎ−アルキルである場合にばＲ１はＨであり、５−ｎ −アルキル基はメチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、ｎ−ブチルチオ及びそれらの均等物からなる群から造択されるものである。

（１）ＧＬＹ−ＬＭＳ−ＬＥＵ−８ＥＲ−ＧＬＮ−ＧＬＵ−ＬＥＵ−ＨＩ５−ＬＹＳ− ＬＥＵ−ＧＬＮ−ＴＨＲ−ＴＹＲ−ＰＲＯ−ＡＲＧ−ＴＨＲ−ＡＳＰ−ｖＡＩ− ＧＬＹ−ＡＩ−Ａ−ＧＬＹ−ＴＨＲ−ＰＲＯ−ＨＩ２なる構造を有する投プチド。

５）　ＣＹＳ−ＧＬＹ−ＡＳＮ−ＬＥＵ−８ＥＲ−ＴＨＲ−ＣＹＳ−ＧＬＹ−ＬＥＵ−ＧＬＹ−ＴＨＲ−ＴＹＲ−ＴＨＲ−ＧＬＮ−ＡＳＰ−ＰＨＥ−ＡＳＮ−ＬＹＳ−ＰＨＥ−ＨＩＳ−ＴＨＲ−ＰＨＥ−ＰＲＯ−ＧＬＮ−ＴＨＲ−ＡＬＡ−工ＬＥ−ＧＬＹ−Ｖ）Ｊ、−ＧＬＹ−ＡＬＡ、−ＰＲＯ−ＨＩ２（ヒト）なる構造を有するＲプチド。

ＴＹＲ−Ｐ　ＲＯ−ＡＲＧ−ＴＨＲ−、ＡＳＰ　−ＶＡＬ−ＧＬＹ−ＡＬＡ−ＧＬＹ−ＴＨＲ−Ｐ　ＲＯ−ＨＩ２なる構造を有するペプチド。

但しＲ１は５−ｎ−アルキル、ＣＹＳ又はＨであり且つＲ２は５−ｎ−アルキル又はＨであり　Ｒ２がＳ−’ｎ−アルキルである場合にはＲ１はＨであり、５− ｎ−アルキル基はメチルチオ、エチルチオ、ニープロピルチオ、ｎ−ブチルチオ及びそれらの均等物からなる群から選択されるものである。

（２・）ＴＨＲ−ＴＹＲ−ＴＨＲ−ＧＬＮ−ＡＳ　Ｐ−ＰＨＥ　−ＡＳＰ１−ＬＹＳ　− ＰＨＥ　−ＨＩ　Ｓ　−’ＴＨＲ−ＰＨＥ　−ＰＲＯ−ＧＬＮ−ＴＨＲ−ＡＬＡ −工ＬＥ−ＧＬＹ−ＶＡＬ−ＧＩ、Ｙ−ＡＬＡ−ＰＲＯ−ＮＨ３なる構造ぞ有する深プチド〇但しＲ□は５−ｎ−アルキル、ＣＹＳ又はＨであり、且つＲ２はＳ　−ｎ−アルキル又はＨであり、Ｒ２カＨの場合にはＲ１は５−ｎ−アルキル、ＣＹＳ又はＨであり且つＲ１がＨの場合にはＲ２は５−ｎ−アルキル又はＨであり且つＲ１が５−ｎ−アルキル又はＣＹＳの場合にはＲ２はＨであり、５−ｎ−アルキル基はメチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、ｎ−ブチルチオ及びそれらの均等物からなる群から辻択されるものである。」（２）明細替を補正する。

頁　行　誤　正６　８　ＢＯＧ−Ｌ−シｏシン　ＢＯＧ−Ｌ−チｏシン（３） ’ｔｌ　、７　１　ｒ５　ＢＯＧ−Ｌ−ｙ’：！Ｊン　、ＢＯｃ−’Ｌ・Ｊｙ” Ｉ）’ｉン２１　１３−１４　３−ｎ−アノｔ４＋■ −ＣＹＳ−ＧＬＹ−ＬＥＵ−ＧＬＵＳ−ｎ−アル六プレ −ＣＹＳＧＬＹ−ＬＥＵ−ＧＬＹ２１　２５　〜５ＬＹ−ＴＨＲ−ＰＲＯ−ＮＨ２−ＧＬＹ−ＴＨＲ−ＰＲＯ−ＨＩ２（４）国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】１）　Ｇｌｙ−カルシトニン。なる構造を有する被プチド。なる構造を有するはプチド、但しＲ１は５−ｎ−アルえル、ＣＹＳ又はＨであり且つＲ２はＳ　−ｒ＋−アルキル又はＨであり　Ｂ、２が５−ｎ−アルキルである場合１てはＲ１はＨであり ’ｌ　Ｓ’−ｎ−アルキル基はメチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、ｎ −ブチルチオ及びそれらの均等物からなる群から選択されるものである。なる構造を有するはプチド。なる構造を有するはプチド。なる構造を有する投プチド。但しＲはＳ−、Ｑ−アルキル、ＣＹＳ又はＨであり且つＲ２は５−ｎ−アルキル又はＨであり、Ｒかρ−ｎ−アルキルである場合にはＲ１はＨであり、Ｓ’−ｎ −アルキル基はメチルチオ、エチルチオ、ｎ−ゾロビルチオ、ｎ−ブチルチオ及びそれらの均等物からなる群から選択されるものである。なる構造を有するパプチド・３６但しＲ１は５−ｎ−アルキル、αＳ〔−〕又はＨであり、且つＲ２は５−ｎ−アルキル又はＨであり、Ｒ２がＨの場合にはＲ工は５−ｎ−アルキル、ＣＹＳ又はＨであり且つＲ□がＨの場合にはＲ２は５−ｎ−アルキル又はＨであり且つ５Ｒ工が５−ｎ−アルキル又はＣＹＳの場合にはＲ２はＨであり、３−ｎ−アルキル基はメチルチオ、エチルチオ−ｎ−プロピルチオ、ｎ−ブチルチオ及びそれらの均等物からなる群から選択されるものである。 □４