JPS5948477A

JPS5948477A - Antibiotic om-173beta1 substance and its preparation

Info

Publication number: JPS5948477A
Application number: JP57158793A
Authority: JP
Inventors: Satoshi Omura; 智大村; Yuzuru Iwai; 譲岩井; Haruo Tanaka; 晴雄田中; Akira Nakagawa; 彰中川; Yoko Takahashi; 洋子高橋; Seisen Chiyouzawa; 丁沢　清泉; Hideki Shimizu; 志水　秀樹
Original assignee: Kitasato Institute
Current assignee: Kitasato Institute
Priority date: 1982-09-14
Filing date: 1982-09-14
Publication date: 1984-03-19

Abstract

NEW MATERIAL:The OM-173beta1 substance of formula. USE:An antimicrobial agent. It is active against true fungi and mycoplasma, and is useful for the prevention and remedy of human, animal and plant diseases caused by microorganisms. PROCESS:A bacterial strain belonging to Streptomyces genus and capable of producing OM-173beta1 substance, e.g. Streptomyces sp. OM-173 (FERM-P No.6509), is cultured, and the produced and accumulated objective compound is separated. The cultivation is carried out in a conventional medium under aerobic condition under shaking or in an aerated and agitated deep-tank fermentor usually at 20- 35 deg.C for 100-150hr. After the completion of culture, the product is filtered to separate the microbial cells, and the filtrate is extracted with an organic solvent and subjected to silica-gel chromatography, etc. to separate the purified substance of formula.

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、抗生物質として有用な新規化合物０Ｍ−１７
３１，物質ならひにその製造法に関するものである、本発明の式で示される０Ｍ−１７３β、物質は、次に示すような理
化学的および生物学的性質を有する新規な化合物である
、（１）元素分析炭素、水素、酸素からなり、次の元素分析値を与える、Ｃ６６，６５％、　Ｈ６，０１％、ＮＯ係（２）分子量質量分析（ＥＩ　−ｍａｓｓ　）で、分子イオンビーク
（Ｍ＋）　　ｍ／ｚ　　２８８．０９　ｑｐ与える。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention provides a novel compound 0M-17 useful as an antibiotic.
31. If it is a substance, it relates to its production method. The substance 0M-173β represented by the formula of the present invention is a novel compound having the following physicochemical and biological properties. (1 ) Elemental analysis Consisting of carbon, hydrogen, and oxygen, giving the following elemental analysis values: C66, 65%, H6, 01%, NO ratio (2) Molecular weight mass spectrometry (EI-mass), molecular ion beak (M+) Gives m/z 288.09 qp.

（３）分子式元素分析値および質量分析（ｉＮより、ＯＭ−１７３β
１物質に対し分子式Ｃ＋　、ｉ■＋　ｎ　Ｏ，が力えら
れる。(3) Molecular formula elemental analysis value and mass spectrometry (from iN, OM-173β
For one substance, the molecular formula C+, i■+ n O, is given.

（４）紫外線吸収スペクトル０Ｍ−１７３β、物質をメタノール溶液中で迎１足した
紫外線吸収スペクトルは、第１図に示すとおりである、（５）赤外線吸収スペクトル０Ｍ−１７３β、物ツｌをＫＢｒ法で測定した赤外線吸
収スペクトルは、第２図に示すとおりである。(4) Ultraviolet absorption spectrum 0M-173β, the ultraviolet absorption spectrum obtained by adding 1 to the substance in a methanol solution is as shown in Figure 1. (5) Infrared absorption spectrum 0M-173β, the substance was measured using the KBr method. The infrared absorption spectrum measured in is as shown in FIG.

（６）抗微生物活性０Ｍ−１７３β１物質の寒天希釈法（よる抗微生物活性
（最小発育阻止濃度、ＭＩＣ）’（ｉ＝表１に示した。(6) Antimicrobial activity Antimicrobial activity (minimum inhibitory concentration, MIC)' (i=shown in Table 1) by the agar dilution method of 0M-173β1 substance.

以上のような本化合物の性儀に最も類似する既知の化合
物として、ナナオマイシンＡ（ジャープールｅオプ・ア
ンチビオティクス、２７巻、３６３頁、１９７４年）が
あげらねる、しかし、ナナオマイシンＡの分子式はＣｕ
ＨｕＯ６であり、０Ｍ−１７３β１物質の分子式と明ら
かに正別でき、０Ｍ−１７６β１物質はル「親杭生物質
と’Ｆｌｌ冗づれる、また、表１により明らかなように
、０Ｍ−１７３β、物質は真菌、マイコプラズマに活性
を示すことから、これらの微生物に起因するヒト、動物
、または植物の疾病の予防あるいは治療に用いられるこ
とが期待される。Nanaomycin A (Japur Eop Antibiotics, Vol. 27, p. 363, 1974) is the known compound that is most similar to the properties of this compound. The molecular formula of is Cu
HuO6, and can clearly be distinguished from the molecular formula of the 0M-173β1 substance. Since it shows activity against fungi and mycoplasma, it is expected to be used for the prevention or treatment of human, animal, or plant diseases caused by these microorganisms.

表　　１抗生物質　０Ｍ−１７３β、物ｆｉ！１の抗微生物活性
（ＭＩＣ，μり乃ρ）本発明の抗生物質ＯＭ−１７３β
１物質全生産するために使用される菌株としては、１例
として、発明り」者らによって、ｔ’ｈＩＴｙ、県米子
市の土壌から新たに分離されたストレプトミセス・エス
ピー・０Ｍ−１７３株が準けらｆする。Table 1 Antibiotic 0M-173β, thing fi! Antimicrobial activity (MIC, μRinoρ) of No. 1 of the antibiotic OM-173β of the present invention
As an example of a bacterial strain used to produce a single substance, Streptomyces sp. Semi-Kera f.

本菌株の蘭学的性状を示すと仄のとおりである。The orchidological properties of this strain are as follows.

（Ｉｌ形態的性質栄養菌糸は各ａｔ寒天培地上でよく発達し、適格は隔壁
ケ有しない。気菌糸はイースト・麦芽寒天、スターチ無
磯塩寒天等で中程度あるいは豊富にＦｌｒ生し、ビロー
ド状金星フーる。顕微鏡下の観察でｖ、１２、気菌糸は
ら旋形金星し、１０ケ以」二の胞子のう！、　ｔ：ｎが
認められる。胞子の大きさは１゜ＤＸｊ。３７１ｙｌで
円筒形である。胞子の表面は平滑である。菌核、胞子の
りおよび遊走子は見出されない。(Il Morphological characteristics) Vegetative hyphae are well developed on each AT agar medium and do not have septa.Aerial hyphae grow moderately or abundantly on yeast/malt agar, starch-free salt agar, etc., and velvet Observation under a microscope shows v, 12, aerial hyphae spiral-shaped, 10 or more spores, t:n. The size of the spores is 1°DXj. 371yl It is cylindrical in shape. The surface of the spore is smooth. No sclerotia, spore glue or zoospores are found.

…）各種培地上での性状イー・ビー・シャーリング（Ｅ、！１．Ｓｈｉｒｌｉｎ
ｇ　）とデー・ゴツトリープ（Ｄ、Ｇｏｔｔｌｊｅｂ　
）　（７）方法（インターナショナル中ジャーナル・オ
プ・システィマチイックＯバクテリオロジー、１６巻、
３１３頁、　１９６６年）によってＷ、′４べた本生産
菌の培づ′ｌｌ′−性秋を次表に示す。色調ｔ」−標準
色として、カラー畳ハーモニー心マニュアル第４版（コ
ンテナー−コーポレーション・オプ・アメリカ・ノヵゴ
。…) Properties on various media E.B. Shirlin (E,!1.Shirlin)
G) and Gottljeb (D.
) (7) Methods (International Journal of Systematic O Bacteriology, Volume 16,
313, p. 313, 1966), the following table shows the 'll'-sexuality cultivated by W,'4betamoto-producing bacteria. Color tone t” - as a standard color, Color Tatami Harmony Shinko Manual 4th Edition (Container - Corporation of America Nokago.

１９５８年）を用いて決定し、色票名とともに括孤内に
そのコードを併せて記した。、す、下は特記しない限り
、２７ｔｒ、２過曲目の各培地におｒ７る観察の結果で
ある。(1958), and the code is written in parentheses along with the color chart name. Unless otherwise specified, the following are the results of observations made on each culture medium at the 27tr, 2nd passage.

（ＩＩＩ）生理的諸性質（１１メラニン色素の形成何）チロシン寒天　　　　　　　　　　陽性（ロ）ペプ
トン・イースト鉄寒天　　　　陰性（ハ）グルコース・
ペプトン・ゼラチン培地穿刺（２１〜２３Ｃ）陰性（ニ
）トリプトン・イースト液　　　　　　　　　　　　　
　陰性（２１チロシナ一ゼ反応　　　　　　　　　陽性
（３１硫化水素の生産　　　　　　　　　　陰性（４１
硝酸塩の還元　　　　　　　　　　　陽性（５）ゼラチ
ンの液化（２１〜２３Ｃ）　　　　　　　　　　　　陽
性（クルコースのペプトン働ゼラチンｊ麹１ｌ−ｔ）（
６１スターチの加水分解　　　　　　　　陽性に（７１
脱脂乳の凝固（３７ｒ）　　　　　　　　陰性（８）脱
脂乳のペプトン化（３７Ｃ）　　　　陽性（９）炭素源
の利用性（ブリドハム・ゴドリープ寒天培地）利用する
；Ｄ−グルコ一ス、Ｌ−アラビノ−人り−キシロース、
Ｄ−マンニトール、ラムノースや−セ利用する；　ラフ
ィノース、シュークロース利用しない　；　Ｄ−フラク
ト−人　　ｌ−イノシトール（１０）セルロースの分解
　　　　　　　　凝陽性（ＩＶ）　ｆｆ１ｌ胞壁絹成ディアミノピメリン酸はＬＬ−型であり、アラビノース
、ガラクトースは認めらノ１、ない。(III) Physiological properties (11 Formation of melanin pigment) Tyrosine agar Positive (B) Peptone Yeast Iron agar Negative (C) Glucose
Peptone gelatin medium puncture (21-23C) Negative (d) Tryptone yeast solution
Negative (21 Tyrosinase reaction Positive (31 Production of hydrogen sulfide Negative (41
Reduction of nitrates Positive (5) Liquefaction of gelatin (21-23C) Positive (Peptone action of crucose Gelatin j Koji 1l-t) (
61 starch hydrolysis positive (71
Coagulation of skim milk (37r) Negative (8) Peptonization of skimmed milk (37C) Positive (9) Utilization of carbon source availability (Bridham-Godliep agar); D-glucose, L-arabino-hydrogen - xylose,
Uses D-mannitol, rhamnose and -se; Does not use raffinose and sucrose; D-fructo-human l-inositol (10) Decomposition of cellulose Coagulation positive (IV) ff1l Cell wall silk formation Diaminopimelic acid is LL- type, and there is no arabinose or galactose.

以上、本菌の菌学的竹状を、要約すると次のとおりにな
る。、Ｎ１１Ｉ胞壁糸Ｉ成はＬ　Ｌ−ディアミノピメリ
ン酸を有する。甘た形態的には、ら旋状の胞子鎖を形成
し、胞子の表面は平滑である。培養状の諸性質としては
、栄養菌糸はブラウンあるいはオリーブの色調ヲ呈し、
気菌糸はｌ１ｌｔとんどがオリーブグレイの色調を呈す
る。可溶性色素はオリーブあるいはブラウン系の色素を
生産し、チロシン寒天培地上ではメラニン色素の生産が
認められる。The mycological characteristics of this fungus can be summarized as follows. , the N11I cell wall filament has L L-diaminopimelic acid. Morphologically, it forms spiral spore chains and the surface of the spores is smooth. As for the properties of the culture, the vegetative mycelium exhibits a brown or olive color,
The aerial mycelia exhibit an olive-gray color tone throughout. Soluble pigments produce olive or brown pigments, and melanin pigment production is observed on tyrosine agar media.

こｆｌ、らの結果から、本菌株はストレプトミセス八に
ｒｌする菌種であり、プリドハムとトレスナーノ分炙自
（バージズ・マニュアル・オフ゛・デクミネーテイプｅ
バクテリオロジー、ｕ＜８ＪＵｉ、ｙ４ａ〜８２９頁、
１９７４年）によるグリーンシリーズにハする菌種であ
ると考えられる。From the results of these studies, this strain is a bacterial species related to Streptomyces 8, and is classified as a species of Streptomyces 8.
Bacteriology, u<8JUi, y4a-829 pages,
It is considered to be a bacterial species that belongs to the Green series by (1974).

なお、本菌株はストレプ］・ミセス・エスピー・ＯＭ　
−１７５（Ｓ−ｔ−Ｌ乱用１旦ｍｙｃｅ＋　　ｓｐ、Ｏ
Ｍ−１７３）として、工業技術院微生物研究所に寄託さ
ノ１ている（倣工研菌寄第６５０９号）。In addition, this strain is Strep], Mrs. SP, OM
-175 (S-t-L abuse once myce+ sp, O
M-173), which has been deposited with the Institute of Microbiology, Agency of Industrial Science and Technology (Imitation Technology Research Institute No. 6509).

本発明における使用菌としては、上記したストレプトε
セス・エスピー・ＯＭ−１７３およヒ本菌株を変異処理
した変異株だけでなく、ストレプトミセス属に牌し、０
Ｎ−１７５β１物ｆ４全生産する菌であれはすべて用い
ることができる、本発明において培地に使用される炭素
源、窒素源は、使用菌株の利用可能なものであればいず
れの種ｎでもよい。すなわち、炭素源としては、たトエ
ハ、クルコース、マルトース、ガラクトース、スターチ
、デキストリン、グリセリン、タラ肝油などが使用され
る。その他、リン酸塩、マグネシウム、カリウム、カル
シウム、ナトリウム、鉄、マンガン、コバルトなどの塩
山１１が必要に応じて１ｉＪｌ用される。The bacteria used in the present invention include the above-mentioned streptoε
In addition to the mutant strains obtained by mutating S. sp.
Any strain capable of producing N-175β1 product f4 can be used. The carbon source and nitrogen source used in the culture medium in the present invention may be any species n that can be used by the strain used. That is, as the carbon source, tuna, crucose, maltose, galactose, starch, dextrin, glycerin, cod liver oil, etc. are used. In addition, 1 iJl of salts 11 such as phosphate, magnesium, potassium, calcium, sodium, iron, manganese, and cobalt are used as necessary.

発酵は振盪培養または通気４ｖ作深部培養の好気的条件
で行なわれる。培養基Ｊ皮は普通２Ｏ−３５Ｃである。Fermentation is carried out under aerobic conditions in shaking culture or submerged culture with 4V aeration. Culture medium J skin is usually 2O-35C.

培養期間はコミ１１常１００〜１５０時間程度であって
、本抗生物質が最高に達する＋１．′ｆ（＋３１ｆ見計
って、）■１当なｎ４間に培養を終了する、培イＦ−終
了後は培養物よりＯＭ　−１７３Ａ物質金採取する。た
とえば％　ｊＴ４養物ｌを菌体とＰ液に分別し、Ｐ液か
らｔ’ｒｈ　１１’２エチル、自′１１１つ２フ゛チル
、ベンゼンなどの水と分ＮＩＰ　Ｌ、０Ｍ−１７３βｒ
！ｌｙｌ’Ｅｉを溶解せしめる有機溶媒で抽出した包、
脂浴性物Ｔ」の精製において通常用いられる公知の方法
により、本抗生物質會分際する。たとえは、抽出液を濃
縮した後、シリカゲルクロマトクラフィーにより０Ｍ−
１７３β１４１ｊ質を単駒する。The culture period is usually about 100 to 150 hours, and this antibiotic reaches its maximum +1. 'f (according to +31f) ■ End the culture between 1 and 4 seconds, and after the end of the culture, collect the OM-173A substance from the culture. For example, %jT4 nutrients are separated into bacterial cells and P solution, and from the P solution, t'rh 11'2 ethyl, auto'111 2 methyl, benzene, etc. are separated from NIP L, 0M-173βr.
! packets extracted with an organic solvent that dissolves lyl'Ei;
The present antibiotic is purified by a known method commonly used in the purification of "fat bath substance T". For example, after concentrating the extract, 0M-
173β141j single piece.

次に、本発明の実施例を示すが、とオフ、は単なる一例
を示すものであって、本発明を限定するものではない。Next, embodiments of the present invention will be shown, but these are merely examples and do not limit the present invention.

実施例グルコース１％、スターチ１Ｌ！、、ｆｌ−２母エキス
０．５％）ペプトン０．５％、炭酸カルシウム０．４％
を含有する培地１００ｍ１（ｐ　Ｈ７，０）　ｉ５００
ｍｅ容坂ロフラスコに分注し、１２０Ｃ，１５分間滅菌
した。これＶＣストレプトミセスつエスピー・０Ｍ−１
７３株（微工研菌寄第６５０９号）會接イｔｌ＋−１，
，２７Ｃで４８時１８４１、毎分１１０回転で往（ν振
盪を行なった。この培養物２００ｍｇ１グリセリン２係
、スｐ−チ２％、コーンステーグリカー０．２％、大豆
粉１．０％、肉エキス０．５％、酵母エキス０．３　％
、炭酸力ルンウム０．３％、リン酸第６マグネンウム・
８水塩１゜０％から成る培地２０ｔ（滅菌前のｐ　Ｈ７
，０）を含む５０を容ジャーファーメンタ−に移植し、
２７Ｃ１毎分２５０回・転で、毎分１０ｔの無菌窒気全
送シ、６８時間通気撹拌槁養を行なった後、培養物を遠
心分店１を機にかけ、０Ｍ−１７３β１物質を含有する
培養Ｐ液１５ｔをイｉｔた、この培養Ｐ液’（ｚ２Ｎ塩
酸水でＰＨ２とし、酢酸エチル１０ｔを加えて２０分間
（？〆１拌抽出した後、遠心分離し、酢酸エチル層を得
た。この溶媒層を減圧下で濃縮乾固し、黒褐色の油彷物
勿（６，３Ｆ　）とした後、シリカゲルカラム（メルク
ネ１．キーゼルゲル６０．６３Ｓ’）にのせ、ベンゼン
／酢酸エチル（９：１，３５０ｍ７り、次いで、ベンゼ
ン／酢酸エチル（７：３，３５０＋＋＋６）で溶出し、
１０ｍ１づつ分画した、下記のノリ力ゲル８５層りａ７
１・クラフィーで検出し、０Ｍ−１７３β、物質を含む
分画４５〜６０ケガさめ、濃縮乾固し黒褐色飴状物質　
ｓｏ　　　３　ｍｇ’２　　イ！Ｉ　１ヒ　、黒褐色飴
状物質５０５　ｍ９シリカゲルカラム（メルク社、キー
ゼルゲル６０，１５７）にのせ、ベンゼン／へ′「酸エ
チル（９：１，１５０πＣ）で溶出した。活性分画全濃
縮乾固し、赤橙色の飴状物質１００　ｍｇを・得た。こ
れ全分取薄層クロマトグラフィーにて精製した。すなわ
ち、ンリカゲル薄層クロマトグラフィー（メルク社、キ
ーゼルゲル６０Ｆ　２　！＋　４　、展開溶媒シクロヘ
キサン：アセトン＝７：３）−ｉ行ない、３１Ｓ５０Ｘ
のマナスルランプのもとて黄色のＲｆＯ，２７ｆ示す部
分のシリカゲル’ｉｓめ、クロロホルム／メタノール（
５：１）で溶出し、溶出液全減圧下で濃縮乾固すること
により、０Ｍ−１７３β、物質（１２ｍｇ＞ｋ赤橙色の
粉末として単離した。Example: 1% glucose, 1L starch! , fl-2 mother extract 0.5%) peptone 0.5%, calcium carbonate 0.4%
100 ml of medium containing (pH 7,0) i500
The mixture was dispensed into a medium-sized Sakaro flask and sterilized at 120C for 15 minutes. This is VC Streptomyces Sp. 0M-1
73 strains (Feikoken Bacteria No. 6509) meeting tl+-1,
, 27C for 48 hours and 1841 hours at 110 revolutions per minute (ν shaking).The culture was mixed with 200 mg of 1 part of glycerin, 2% of spate, 0.2% of cornstake liquor, and 1.0% of soybean flour. , meat extract 0.5%, yeast extract 0.3%
, Magnenium carbonate 0.3%, Magnenium 6 phosphate
20 tons of medium consisting of 1°0% octahydrate (pH 7 before sterilization)
, 0) into a jar fermenter,
27C1 was rotated at 250 times per minute, 10 tons of sterile nitrogen was pumped per minute, and the culture was aerated and stirred for 68 hours. 15 t of this culture P solution' (pH was adjusted to 2 with 2N hydrochloric acid water, 10 t of ethyl acetate was added and extracted for 20 minutes (?〆1). After stirring and extraction, centrifugation was performed to obtain an ethyl acetate layer. This solvent The layer was concentrated to dryness under reduced pressure to give a blackish brown oily substance (6,3F), which was then placed on a silica gel column (Merkne 1. Kieselgel 60.63S') and benzene/ethyl acetate (9:1,350m7). and then eluted with benzene/ethyl acetate (7:3,350+++6),
The following Noriyoku Gel 85 layer a7 was fractionated into 10ml portions.
1. Detected with Craphy, fractions 45-60 containing 0M-173β, concentrated and dried to form a blackish brown candy-like substance
so 3 mg'2 I! A dark brown candy-like substance was placed on a 505 m9 silica gel column (Merck & Co., Kieselgel 60,157) and eluted with benzene/ethyl acetate (9:1, 150πC).The active fractions were all concentrated to dryness. , 100 mg of a reddish-orange candy-like substance was obtained. All of this was purified by preparative thin layer chromatography. Namely, Nlicagel thin layer chromatography (Merck, Kieselgel 60F 2!+ 4, developing solvent cyclohexane:acetone) =7:3)-i row, 31S50X
Under the Manaslu lamp, yellow RfO, silica gel's part showing 27f, chloroform/methanol (
0M-173β, material (12 mg>k), was isolated as a reddish-orange powder by elution (5:1) and concentration of the eluate to dryness under total vacuum.

[Brief explanation of drawings]

第１図は抗生物￥’（ＱＭ−１７３β、の紫外線吸収ス
ペクトル（メタノール中で測定）、第２図は抗生管負０
Ｍ−１７３β１の赤外線吸収スペクトル（１（Ｂｒ）を
示す、横浜市旭区中希望ヶ丘１６４サンシャインハイツ２０２０発　明　者　志水秀樹東京都渋谷区代々木５−３１グリーンハイツ３−１０１号Figure 1 shows the ultraviolet absorption spectrum (measured in methanol) of antibiotic \' (QM-173β), Figure 2 shows the antibiotic tube negative 0
Infrared absorption spectrum of M-173β1 (1 (Br)) 202 Sunshine Heights, 164 Nakakibogaoka, Asahi-ku, Yokohama Inventor Hideki Shimizu 3-101 Green Heights, 5-31 Yoyogi, Shibuya-ku, Tokyo

Claims

[Claims] A novel compound represented by the following! 1ilo M-173β, substance. (21, Streptomyce
s) Cultivate a microorganism that has the ability to produce a novel compound 0M-173β1 substance belonging to R and represented by the formula, produce and store the compound, and collect it! +! A method for producing a novel G' compound 0M-173β1 substance having i characteristics,