JPS5849234B2 - Immobilization method of glucose isomerase - Google Patents
Immobilization method of glucose isomeraseInfo
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- JPS5849234B2 JPS5849234B2 JP4600676A JP4600676A JPS5849234B2 JP S5849234 B2 JPS5849234 B2 JP S5849234B2 JP 4600676 A JP4600676 A JP 4600676A JP 4600676 A JP4600676 A JP 4600676A JP S5849234 B2 JPS5849234 B2 JP S5849234B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はグルコースをフラクトースに異性化するのに有
用なグルコースイソメラーゼの固定化法に関するもので
ある。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention relates to a method for immobilizing glucose isomerase useful for isomerizing glucose to fructose.
フラクトースはグルコースの異性体であって、甘味はグ
ルコースの約2倍であり、糖類の中で最も甘味の強い物
質である。Fructose is an isomer of glucose, and is about twice as sweet as glucose, making it the sweetest substance among sugars.
したがってカロリー摂取をできるだけ抑えながら甘味を
とれることから、肥満防止の低カロリー食に、あるいは
美容食に用いることが最近注目されている。Therefore, since it can provide sweetness while minimizing calorie intake, its use in low-calorie foods to prevent obesity or beauty foods has recently attracted attention.
また、グルコースを異性化した糖液は、シヨ糖よりも約
1.2〜1.4倍の甘味を呈するので、その経済性から
近年、清涼飲料、缶詰、冷菓などの分野に急速に使用さ
れつ\ある。In addition, sugar solution made by isomerizing glucose has a sweetness that is approximately 1.2 to 1.4 times sweeter than sucrose, so it has been rapidly used in fields such as soft drinks, canned goods, and frozen desserts due to its economic efficiency. There is one.
従来からD−フラクトースの製造法としてシヨ糖を加水
分解してわ−フラクトースを分離する方法が行なわれて
いるが、近年グルコースイソメラーゼをグルコースに作
用させて異性化させる方法が工業的な規模で拡まってい
る。Traditionally, D-fructose has been produced by hydrolyzing sucrose to separate W-fructose, but in recent years, the method of isomerizing glucose by allowing glucose isomerase to act on glucose has been expanded on an industrial scale. waiting.
ところで、グルコースからグルコースイソメラーゼを用
いて異性化された液糖を製造するには、一般に約40〜
50重量%のグルコース溶液にグルコースイソメラーゼ
生産菌を投入し、約70℃の濃度で長時間異性化反応を
生じさせた後、濾過、脱色および脱イオンなどの諸工程
を経ることにより異性化された液糖を得ている。By the way, in order to produce isomerized liquid sugar from glucose using glucose isomerase, it generally takes about 40 to
Glucose isomerase-producing bacteria were introduced into a 50% glucose solution, and the isomerization reaction was allowed to occur for a long time at a concentration of about 70°C, followed by isomerization through various steps such as filtration, decolorization, and deionization. I am getting liquid sugar.
しかしながら、上記方法では異性化反応終了後、酵素活
性が反応前に比べて約半分に低下し、新しく異性化反応
を行なうときには損失酵素量を補なわなければならない
という大きな欠点がある。However, the above method has a major drawback in that after the isomerization reaction is completed, the enzyme activity decreases to about half of that before the reaction, and when a new isomerization reaction is performed, the lost amount of enzyme must be compensated for.
このため酵素を固定化することによって酵素の長期使用
および酵素反応の連続化を可能にすることが強く望まれ
ている。Therefore, it is strongly desired to immobilize enzymes to enable long-term use of enzymes and continuous enzymatic reactions.
グルコースイソメラーゼの固定化については遊離酵素と
菌体内酵素を問わず種々の方法が従来から知られている
。Various methods have been known for immobilizing glucose isomerase, regardless of whether it is a free enzyme or an intracellular enzyme.
遊離酵素については、たとえば多孔性ガラスのアミノシ
ラン誘導体を担体として用いる共有結合による担体結合
法、DEAE−セルロースあるいはデュオライトなどの
イオン交換体を担体として用いるイオン結合による担体
結合法、ポリアクリルアミドゲル、コラーゲンあるいは
セルローストリアセテートなどの組材とする包括法など
がある。For free enzymes, for example, a covalent carrier bonding method using a porous glass aminosilane derivative as a carrier, an ionic carrier bonding method using an ion exchanger such as DEAE-cellulose or Duolite as a carrier, polyacrylamide gel, collagen, etc. Alternatively, there is a comprehensive method using a composite material such as cellulose triacetate.
これらの方法では、工業的に使われる固定化酵素として
満足すべきものが得られていない。These methods have not yielded a satisfactory immobilized enzyme for industrial use.
また菌体を55゜C以上、90℃以下の温度に加熱して
グルコースイソメラーゼを菌体内に固定化させる方法も
知られている。Also known is a method in which glucose isomerase is immobilized within the bacterial cells by heating the bacterial cells to a temperature of 55° C. or higher and 90° C. or lower.
この方法では無処理菌体に比べて酵素活性の低下を大幅
に改良させたとはいえ、残活性値は初期の40〜50%
であり、工業的には充分とはいえなかった。Although this method significantly improved the decrease in enzyme activity compared to untreated bacterial cells, the residual activity value was only 40-50% of the initial value.
Therefore, it could not be said to be industrially sufficient.
工業的用途を満足させるグルコースイソメラーゼの固定
化酵素剤には、次の特性を保持することが特に強く望ま
れている。It is particularly strongly desired that an immobilized enzyme agent for glucose isomerase that satisfies industrial applications has the following properties.
(i) 酵素活性が長期間の使用に対し7て充分保持
されていること。(i) Enzyme activity is sufficiently maintained for long-term use.
(i1)不純物を溶出しないこと。(i1) Do not elute impurities.
4ii) カラムに充填したとき目言吉まりしないこ
と。4ii) Do not make any mistakes when filling the column.
4v) 物理的に堅牢であること。4v) Be physically robust.
(■)取扱いが簡単であること。(■) Easy to handle.
(Vl) 酵素剤が安両であること。(Vl) The enzyme agent must be safe.
このような目的に対して本発明者等はグルコースイソメ
ラーゼの菌体内酵素の固定化について種種鋭意検討した
結果、菌体にキトサンを比較的高濃度になるように加え
て混合し、菌体表面にキトサン膜を形成させ、さらにポ
リアルデヒドで処理することによって所期の目的を達或
することを見出し本発明に到達した。For this purpose, the present inventors conducted various studies on the immobilization of intracellular enzyme glucose isomerase, and as a result, chitosan was added to the bacterial cells at a relatively high concentration and mixed, and the mixture was applied to the bacterial surface. The present invention was accomplished by discovering that the desired objective could be achieved by forming a chitosan film and further treating it with polyaldehyde.
すなわち本発明は、グルコースイソメラーゼ生産菌と該
菌体の乾燥物に対して8重量%以上のキトサンとを混合
し、次いでポリアルデヒドで処理することを特徴とする
グルコースイソメラーゼの固定化法である。That is, the present invention is a method for immobilizing glucose isomerase, which is characterized by mixing glucose isomerase-producing bacteria and chitosan in an amount of 8% by weight or more based on the dry matter of the bacteria, and then treating the mixture with polyaldehyde.
キトサンとはキチンを脱アセチル化して得られる白色無
定形粉末であって、グルコサミンからなる塩基性多糖類
である。Chitosan is a white amorphous powder obtained by deacetylating chitin, and is a basic polysaccharide consisting of glucosamine.
本発明におけるキトサンは上記キ1〜サンあるいはその
溶液、たとえば酢酸、蟻酸、燐酸、塩酸等の酸およびこ
れらの酸の酸性溶液に溶解して得られる溶液である。The chitosan in the present invention is the above-mentioned chitosan or a solution thereof, such as an acid such as acetic acid, formic acid, phosphoric acid, or hydrochloric acid, or a solution obtained by dissolving it in an acidic solution of these acids.
この溶液の濃度は0.05〜1.0重量%好咬しくは0
。The concentration of this solution is 0.05 to 1.0% by weight, preferably 0.
.
1〜0.5重量%である。It is 1 to 0.5% by weight.
このキトサンもしくはその溶液と菌体との混合量は、菌
体の乾燥物に対してキトサンが8重量%以上、好ましく
は10.0〜50.0重量%になるような量である。The amount of chitosan or its solution mixed with bacterial cells is such that the amount of chitosan is 8% by weight or more, preferably 10.0 to 50.0% by weight, based on the dry bacterial cells.
キトサンの添加量が菌体に対して8重量%未満であると
、キトサン膜が微弱過ぎて固定化酵素の安定性が悪くな
るという欠点がある。If the amount of chitosan added is less than 8% by weight based on the bacterial cells, there is a drawback that the chitosan film is too weak and the stability of the immobilized enzyme becomes poor.
すなわち、菌体からの酵素の脱離が生じゃすく、また機
械的衝撃による破壊などが生じゃすい。In other words, desorption of the enzyme from the bacterial body is a serious problem, and damage caused by mechanical impact is a serious problem.
グルコースイソメラーゼ生産菌体としては、たとえばス
トレプトマイセス・フェオクロモゲネス( Str5p
tomyces phaeochromgenes
)、ストレプトマイセス・フラジアエ( S, fr
adiae),ストレプトマイセス・ロゼオクロモゲナ
ス(S.ro−s eochromo g en e
s )、ストレプトマイセス・オリバセウス(S, o
l jvaceus)、ストレプトマイセス・カリフオ
ルニカス( S. californicas,)、ス
トレフ1・マイセス・ベヌセウス(S,vanu−ce
us),ストレプトマイセス・バアジニ7(S,vi
rg;niae)などの放線菌、シュードモナス・ハイ
ドロヒイラ( Pseudomonas hydro
−ph r la)などのシュードモナス属菌、バチ
リス・メガテリウム( Baci Ilus mega
terium)などのバチルス属菌、ブレビバクテリア
属菌、ラクトバチルス属菌、アエロバクテリウム属菌の
ようなバクテリアなど広範囲の微生物菌体が挙げられる
。Examples of glucose isomerase-producing bacterial cells include Streptomyces phaeochromogenes (Str5p
tomyces phaeochromgenes
), Streptomyces frasiae (S, fr
adiae), Streptomyces roseochromogenas (S. roseochromogenus)
s), Streptomyces olivaceus (S, o
l jvaceus), Streptomyces californicas, S. vanu-ceus
us), Streptomyces baagini 7 (S, vi
actinomycetes such as Pseudomonas hydrohira (rg; niae),
Pseudomonas bacteria such as -ph r la), Bacillus megaterium
A wide range of microorganisms can be mentioned, including bacteria of the genus Bacillus such as Bacillus terium, bacteria of the genus Brevibacterium, bacteria of the genus Lactobacillus, and bacteria of the genus Aerobacterium.
これらの薗体は窒素源としてコーンステープリカー単独
または脱脂大豆を併用し、炭素源として澱粉、キシロー
ズなどの炭水化物類、無機塩としては燐酸カリウム、塩
化コバルトおよひ塩酸マグネシウムなどを含んだ培地に
培養して取得するものである。These sonotai are grown in a medium containing corn staple liquor alone or in combination with defatted soybeans as a nitrogen source, carbohydrates such as starch and xyrose as a carbon source, and potassium phosphate, cobalt chloride, and magnesium hydrochloride as inorganic salts. It is obtained by culturing.
本発明において用いる菌体は、特に上記菌体を培養後、
培養液から分離した菌体そのままかあるいは加熱処理さ
れた菌体が好ましい。In particular, the bacterial cells used in the present invention are obtained by culturing the above-mentioned bacterial cells,
It is preferable to use the bacterial cells isolated from the culture solution as they are or the bacterial cells that have been heat-treated.
また、この菌体はPH5〜9、特に5〜7.0の緩衝溶
液に分散もしくは懸濁されていてもよい。Further, the bacterial cells may be dispersed or suspended in a buffer solution having a pH of 5 to 9, particularly 5 to 7.0.
菌体の濃度は通常0.1〜50重量%、好ましくは0.
5〜40重量%である。The concentration of bacterial cells is usually 0.1 to 50% by weight, preferably 0.1 to 50% by weight.
It is 5 to 40% by weight.
本発明方法は、まずグルコースイ′ノメラーゼ生産菌と
該菌体に対して8重量%以.上のキトサンを混合する。The method of the present invention first involves using a glucose i'inomerase-producing bacterium and at least 8% by weight of the bacterium. Mix the chitosan above.
菌体とキトサンとを混合する方法には具体的には菌体を
含む液体にキトサンもしくはその溶液を添加し混合する
方法、キトサン溶液に菌体を添加して混合する方法など
がある。Specifically, methods for mixing bacterial cells and chitosan include a method in which chitosan or a solution thereof is added to a liquid containing bacterial cells and mixed, and a method in which bacterial cells are added to a chitosan solution and mixed.
固定化酵素製造の操業性から見て、キトサン溶液に菌体
を添加してよく混合攪拌するか、あるいは混練りして菌
体を上記キトサン溶液に分散させることが好ましい。From the viewpoint of operability in producing the immobilized enzyme, it is preferable to add the microbial cells to the chitosan solution and mix well with stirring or knead to disperse the microbial cells in the chitosan solution.
上記方法により得られた混合物から必要により濾過、遠
心分離などの操作により菌体を分離する。If necessary, bacterial cells are separated from the mixture obtained by the above method by operations such as filtration and centrifugation.
本発明方法では、グルコースイソメラーゼ生産菌とキト
サンとの混合を無機酸または有機酸もしくはその塩の存
在下において行なってもよい。In the method of the present invention, the glucose isomerase producing bacteria and chitosan may be mixed in the presence of an inorganic acid or an organic acid or a salt thereof.
ここでいう無機酸または有機酸もしくはその塩としては
、グルコースインメラーゼを失活させな1い範囲のPH
を有するもの、特にPH4.5〜7. 0であって緩衝
作用を有するものが好ましい。The inorganic acid, organic acid, or salt thereof mentioned here has a pH within a range of 1 to 1, which does not inactivate glucose imerase.
Those having a pH of 4.5 to 7. 0 and has a buffering effect.
このような無機酸としては燐酸、塩酸、硫酸などがあり
、有機酸としてはコハク酸、酒石酸、クエン酸、酢酸、
乳酸、フマール酸、マレイン酸、リンゴ酸などがあり、
これらの酸の塩としてはアンモニウム塩、ナトリウム塩
、カリウム塩、マグネシウム塩などがある。Such inorganic acids include phosphoric acid, hydrochloric acid, and sulfuric acid, while organic acids include succinic acid, tartaric acid, citric acid, acetic acid,
These include lactic acid, fumaric acid, maleic acid, and malic acid.
Salts of these acids include ammonium, sodium, potassium, and magnesium salts.
上記無機酸または有機酸もしくはその塩の濃度はその種
類によって異なるが、一般には1〜10重量%溶液であ
ることが好ましい。The concentration of the inorganic acid or organic acid or its salt varies depending on its type, but is generally preferably a 1 to 10% by weight solution.
また本発明方法では、グルコースイソメラーゼ生産菌と
キトサンとを混合して後、上記無機酸または有機酸もし
くはその塩を混合してもよい。Further, in the method of the present invention, the above-mentioned inorganic acid or organic acid or a salt thereof may be mixed after mixing the glucose isomerase-producing bacteria and chitosan.
本発明方法は、上記方法に従いキトサンもしくはその溶
液と混合して得られるキトサン膜を有する菌体を、ポリ
アルデヒドで処理して架橋反応を生せしめる。In the method of the present invention, bacterial cells having a chitosan film obtained by mixing with chitosan or its solution according to the above method are treated with polyaldehyde to cause a crosslinking reaction.
本発明において用いるポリアルデヒドとしては、クリオ
キザール、マロンアルデヒド、コハク酸アルデヒド、グ
ルタルアルデヒド、アジプアルデヒド、ピメリンジアル
デヒド、スベリンジアルデヒド、マレインアルデヒドな
どが挙げられる。Examples of the polyaldehyde used in the present invention include cryoxal, malonaldehyde, succinic aldehyde, glutaraldehyde, adipaldehyde, pimeline dialdehyde, suberine dialdehyde, malealdehyde, and the like.
特にグルクルアルデヒドが好ましい。Glucuraldehyde is particularly preferred.
ポリアルデヒドの使用量はキトサン膜を有する菌体の乾
燥重量に対して約0.1〜20重量%、特に0.5〜1
0重量%である。The amount of polyaldehyde used is about 0.1 to 20% by weight, especially 0.5 to 1% by weight, based on the dry weight of the bacterial cells having a chitosan membrane.
It is 0% by weight.
ポリアルデヒドは操作性から見て0.01〜5%溶液、
特に0.05〜2.0%溶液として用いることが好まし
い。Polyaldehyde is a 0.01-5% solution from the viewpoint of operability.
It is particularly preferable to use it as a 0.05 to 2.0% solution.
ポリアルデヒ1・゛とキトサンとの反応は室温あるいは
微加温度条件下で行なうことが望ましく、反応時間は極
く低温で行なわない限り通常10〜60分間で充分であ
る。The reaction between polyaldehyde 1.' and chitosan is preferably carried out at room temperature or under slightly elevated temperature conditions, and a reaction time of 10 to 60 minutes is usually sufficient unless carried out at extremely low temperatures.
反応時の初期のPHは約7.0であり、反応終了時は約
6.5程度である。The initial pH during the reaction is about 7.0, and the pH at the end of the reaction is about 6.5.
したがって反応のP Hは酵素の安定性からみて6.0
以下にならないように注意する。Therefore, the pH of the reaction is 6.0 from the viewpoint of enzyme stability.
Be careful not to do the following.
上記方法によりポリアルデヒドで処理された菌体は必要
により水洗を行ない乾燥する。The bacterial cells treated with polyaldehyde by the above method are washed with water and dried if necessary.
乾燥方法としては凍結乾燥、真空乾燥、天日乾燥などい
ずれの方法でもよい。The drying method may be any method such as freeze drying, vacuum drying, and sun drying.
本発明方法に従って得られる菌体には、ポリアルデヒド
によって架橋反応の生じたキトサン膜が形成され、菌体
内にはグルコースイソメラーゼが強固に固定化されてい
る。In the bacterial cells obtained according to the method of the present invention, a chitosan membrane is formed in which a crosslinking reaction occurs with polyaldehyde, and glucose isomerase is firmly immobilized within the bacterial cells.
この固定化酵素をグルコース溶液(グルコース5 0
w/ v%、硫酸マグネシウム0.005M,塩化コバ
ルト0.001M,リン酸塩緩衝溶液0.05M)に加
え攪拌しながら60℃で異性化反応を繰り返すと、異性
化率の低下は緩かであり、かつ攪拌による物理的衝撃に
対して抵抗性があり、固定化酵素は反応初期とほとんど
変らない形状を維持している。This immobilized enzyme was added to a glucose solution (glucose 50
w/v%, magnesium sulfate 0.005M, cobalt chloride 0.001M, phosphate buffer solution 0.05M) and repeating the isomerization reaction at 60°C with stirring, the isomerization rate decreased slowly. It is resistant to physical impact caused by stirring, and the immobilized enzyme maintains its shape almost unchanged from the initial stage of the reaction.
また、本発明により得られる固定化酵素は水に対する膨
潤性が少なく異性化反応時laνKも変形が極めて少な
い0したがって、本発明方法に従って得られる固定化酵
素は工業的にグルコースを異性化するのに有効に利用し
うるものである。In addition, the immobilized enzyme obtained according to the present invention has low swelling property in water and exhibits extremely little deformation of laνK during the isomerization reaction. Therefore, the immobilized enzyme obtained according to the method of the present invention is suitable for industrially isomerizing glucose. It can be used effectively.
以下、実施例を用いて本発明を読明する。The present invention will be explained below using examples.
なお、グルコースイソメラーゼ活性はグルコース溶液(
グルコース濃度0.1M,硫酸マグネシウム0.OIM
、リン酸塩緩衝液0.0 5 M, PH7. 2)を
用い、反応温度70℃、1分間で11n9のグルコース
を異性化し、フラクトースを生戊する酵素活性を1単位
とする。Note that glucose isomerase activity is determined by glucose solution (
Glucose concentration 0.1M, magnesium sulfate 0. OIM
, phosphate buffer 0.05 M, PH7. 2), 11n9 glucose is isomerized in 1 minute at a reaction temperature of 70°C, and the enzyme activity to produce fructose is defined as 1 unit.
実施例 1
ストレプトマイセス・フエオクロモケネス(S−tre
ptomyces phaechromogenes)
( 微工研菌寄第221号)をコーンステープリカー、
キシロース、燐酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化コ
バルトを含む培地で通気培養として後、遠心分離して菌
体を取得した。Example 1 Streptomyces pheochromocennes (S-tre
ptomyces phaechromogenes)
(Feikoken Bibori No. 221) with corn staple liquor,
After aeration culture in a medium containing xylose, potassium phosphate, magnesium sulfate, and cobalt chloride, cells were obtained by centrifugation.
このようにして得た菌体20g(固形分1 8.9 7
%)(活性値8960単位/L)を少量の水で懸濁し8
0℃で10分間加熱処理を施した。20 g of bacterial cells obtained in this way (solid content 1 8.9 7
%) (activity value 8960 units/L) was suspended in a small amount of water.
Heat treatment was performed at 0°C for 10 minutes.
再び遠心分離して菌体を集め、この菌体を水10077
1lに懸濁し、0.05%キトサン溶液1500ml(
菌体に対するキトサンの量19.8%)に攪拌しながら
加えた後、25%グルタールアルデヒド溶液14尻lを
加え、室温で1時間反応させた。Centrifuge again to collect the bacteria, and add the bacteria to water 10077
Suspend in 1 liter and add 1500 ml of 0.05% chitosan solution (
The amount of chitosan (19.8% based on the bacterial cells) was added with stirring, and then 14 liters of a 25% glutaraldehyde solution was added and reacted at room temperature for 1 hour.
反応終了後、遠心分離して菌体を分離し、水洗を2回行
ない減圧乾燥した。After the reaction was completed, the bacterial cells were separated by centrifugation, washed twice with water, and dried under reduced pressure.
菌体の乾燥物重量は4。The dry weight of bacterial cells is 4.
1g(活性値1003単位/g)であった。1 g (activity value 1003 units/g).
(残存活性率45.9%)。上記方法により得られた菌
体の乾燥物を用いてグルコースの異性化反応を繰り返し
行ない、異性化率を測定した。(Residual activity rate 45.9%). The isomerization reaction of glucose was repeatedly performed using the dried bacterial cells obtained by the above method, and the isomerization rate was measured.
その結果を第1表に示す。実施例 2
実施例1と同様の方法で培養したグルコースイソメラー
ゼ生産能を有する菌体20g(固形分18.9%)(活
性値8960単位/g)を少量の水で懸濁し80℃で2
分間加熱処理を施した。The results are shown in Table 1. Example 2 20 g of bacterial cells (solid content 18.9%) (activity value 8960 units/g) having the ability to produce glucose isomerase, which were cultured in the same manner as in Example 1, were suspended in a small amount of water and incubated at 80°C for 2 hours.
Heat treatment was performed for a minute.
遠心分離して菌体を集め、この菌体を水1 0 0yy
tA’に懸濁し、次に0.1%キトサン・酢酸溶液(
PH6.5)IA(菌体当りのキトサンの量26.4%
)にこの懸濁液を攪拌しながら加えた。Collect the bacterial cells by centrifugation, and add the bacterial cells to 100 yy of water.
tA', then 0.1% chitosan/acetic acid solution (
PH6.5) IA (amount of chitosan per bacterial cell 26.4%)
) was added to this suspension with stirring.
再び遠心分離して菌体を集め、この菌体を水i o O
mA’に懸濁し、グルタールアルデヒドを最終濃度0.
2%になるように加え、よく攪拌し、30℃で1時間放
置した。Centrifuge again to collect the bacterial cells, and add the bacterial cells to water i.o.o.
mA' and glutaraldehyde to a final concentration of 0.
The mixture was added to a concentration of 2%, stirred well, and left at 30°C for 1 hour.
次いで遠心分離して菌体を集め、直径2ill!Wの孔
をもつプレートより押し出し成型した後、真空乾燥を行
なう。Next, centrifugation is performed to collect the bacterial cells, which have a diameter of 2ill! After extrusion molding from a plate with W holes, vacuum drying is performed.
得られた乾燥酵素剤は4.1g(活性f直8.90単位
/g)であった。The dry enzyme preparation obtained was 4.1 g (activity f: 8.90 units/g).
(残存活性率44.7%)。上記酵素剤4.17g(総
活性値3700単位)ヲ直径1. 4 cx,長さ10
cIrLのガラス製二重円筒に詰め、外簡に70℃の温
水を循環させ、カラムの下部からグルコース溶液(グル
コース40i量%、リン酸塩緩衝液、硫酸マグネシウム
0. 0 5 M、塩化コバルト0.0 0 1M.
PH8.5 )を流速6ml/時間で流した。(Residual activity rate 44.7%). The above enzyme agent 4.17g (total activity value 3700 units) with a diameter of 1. 4 cx, length 10
It was packed in a cIrL glass double cylinder, 70°C hot water was circulated through the outer shell, and a glucose solution (glucose 40i mass %, phosphate buffer, magnesium sulfate 0.05 M, cobalt chloride 0) was added from the bottom of the column. .0 0 1M.
pH 8.5) was flowed at a flow rate of 6 ml/hour.
生成したフラクトースを経時的に測定し異性化率を測定
した。The generated fructose was measured over time to determine the isomerization rate.
その結果を第1図で示す。The results are shown in FIG.
第1図は操作時間と異性化率との関係を示す。 FIG. 1 shows the relationship between operating time and isomerization rate.
Claims (1)
対して8重量%以上のキトサンとを混合し、次いでポリ
アルデヒドで処理することを特徴とするグルコースイソ
メラーゼの固定化法。1. A method for immobilizing glucose isomerase, which comprises mixing glucose isomerase-producing bacteria and chitosan in an amount of 8% by weight or more based on the dry matter of the bacteria, and then treating with polyaldehyde.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP4600676A JPS5849234B2 (en) | 1976-04-21 | 1976-04-21 | Immobilization method of glucose isomerase |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP4600676A JPS5849234B2 (en) | 1976-04-21 | 1976-04-21 | Immobilization method of glucose isomerase |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS52130979A JPS52130979A (en) | 1977-11-02 |
JPS5849234B2 true JPS5849234B2 (en) | 1983-11-02 |
Family
ID=12734974
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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JP4600676A Expired JPS5849234B2 (en) | 1976-04-21 | 1976-04-21 | Immobilization method of glucose isomerase |
Country Status (1)
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JP (1) | JPS5849234B2 (en) |
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JPS61100620A (en) * | 1984-10-24 | 1986-05-19 | Union Giken:Kk | Multi-wavelength spectrophotometer |
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1976
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