JPS58222029A - フイコシアニンのイミドエステル架橋体およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、分子量が１．５Ｘ１０’〜４．５Ｘ１０’の
範囲にある蛋白質に１〜２分子のフィコシアノビリンが
共有結合した色素蛋白質であるフィコシアニンサブユニ
ットが基礎単位とされ、該サブユニットの２〜１２単位
がイミドエステル残基により架橋された新規物質に関す
るものであり、該新規物質は、可視光領域における特性
吸収波長が６２０±２０ｎｍで、少くともドデシルスル
ホン酸ナトリウムを含む水溶液に対して溶解性を有する
ことにより特徴付けられた、フィコシアニンのイミドエ
ステル架橋体とでも呼ぶべき物質である。

本発明に係る新規物質は、基礎となるフィコシアニンサ
ブユニットの分子量に基づく後述する成る特定の分子量
を有する水溶性のポリペプチドであり、しかも可視光領
域における特性吸収波長が６２０±２０ｎｍの青色物質
であるから、生化学の分野で生体に由来する各種高分子
物質、特に蛋白質をゲル電気泳動法またはゲルｆ過法等
により分画し、その分子量を推定する場合に用〜・られ
る標準物質（分子量マーカーと呼ばれる）として特に有
用性を有するものである。

以下に本発明を更に詳細に説明する。

生物体内に含有される酵素またはその他の各種蛋白質の
分子量を推定するに当りゲル電気泳動法またはゲルｆ過
法を利用する場合には、分子量と共にその化学構造や各
種性質が既知の標準蛋白質が必要とされる。この両方法
のうちゲル電気泳動法とりわけ５ＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル　　　　　　　５゛電気泳動法（Ｓｏｄｉｕｍ
　ｄｏｄａｃｌ　１５ｕｌｆａｔｅ　−Ｐｏｌｙａｃｒ
ｙｌａｍｉｄｅＥｌｅｃｔｒｏ−ｐｈｏｒｅｓｉｓ、以
下５ＤＳ−ＰＡＧＥ法と略称する）は、供試試料が少く
て済み、処理操作が簡便、所要費用が安価でありながら
、分画能力が高く、分子量推定手段として有力であるこ
とから、生化学を中心とした広範な分野の研究者によっ
て利用されている。この方法は、ドデシル硫酸す）　Ｉ
Ｊウム（以下、ＳＤＳと略称する）と蛋白質のポリペプ
チド鎖との間に形成される複合体が、′１場から受ける
駆動力によりポリアクリルアミドのゲル中を移動すると
きの挙動の特性を判断材料として分子量を推定する方法
である。具体的には、測定した（・試料を分子量マーカ
ー即ち分子量既知のポリペプチドと共に泳動し、その相
対移動度と分子量のプロットから試料の分子量を推定す
るものである。この除用℃・られる分子量マーカーは、
試料の予想分子量を中心として±５Ｘ１０’程度の範囲
内で異る分子量を持つ５種類程度を必要とし、各分子量
マーカーは、ゲル中で安定した移動性とその再現性を有
すること、ならびに移動した試料のバンドの識別および
移動度の測定の簡便性が要求される。

従って従来利用されて〜・る分子量マーカーとしては、
血清アルブミン（分子ｉ６．８　Ｘ　１　［］’　）、
卵白アルブミン（同４．３Ｘ１０”）、アルドラーゼ（
同４．０Ｘ１０’）、キモト１」プシノーゲン（同２．
５７　Ｘ　１０’）、　リゾチーム（同１．４３Ｘ１ｏ
’　）、’シトクロームＣ（同１．１７ｘ１ｏ’）等の
天然の蛋白質が使用されて〜・る。

然しなから、これらの分子量マーカーは、測定可能な分
子量範囲が自ずと限られて〜・ること、展開後のゲルカ
ラムにおけるバンド位置が識別し得る様ノくンドの染色
処理を必要とし、通常クーマシーブリリアントブルー、
アミドフ゛ラック１０Ｂ等の染料による染色およ′び非
ノ（ンド部分の脱色処理を行わねばならず、その処理が
極めて煩瑣であるという欠点を有する。またこれらの分
子量マーカーは、互に異種蛋白質であって、別々に供給
されるため、１本のゲルカラムで１種類を泳動させるこ
とが多く、その結果処理回数が多く、この点からも煩瑣
である。

本発明に係る新規物質は、冒頭に述べた如く、フィコシ
アニンサブユニットをイミドエステル残基により複数架
橋したものである。このフィコシアニンサブユニットは
、分子針１．５Ｘ１０’〜４．５Ｘ１０’の範囲にある
蛋白質に、１〜２分子のフィコシアノビリン分子が下図
＊の位置で蛋白質のシスティンおよびセリン残基によっ
て共有結合した色素蛋白質である。フィコシアノビリン
は、藍藻たとえばスピルリナ属の各種螺旋環やアナベナ
属の渫類のチラコイド膜外表面に由来する色素蛋白質の
発色団で、次の如き化学式で示されるテトラピロール構
造を有する分子１ｉ１５８６．７の化合物であり、６２
０ｎｍの波長を最大吸収位置とする青色色素である。

スピルリナ属藻に含まれこのフィコシアノビリンの結合
した色素蛋白質は、Ｃ−フィコシアニンまたは単にフィ
コシアニンと呼ばれ、その分子量は大略１０Ｘ１０’〜
２０×１０４と言われて〜・るが、複数の蛋白質分子が
疎水結合等で会合したものであり、共有結合のみＫより
形成された最小単位に分けることができ、その最小単位
となる色素蛋白質はフィコシアニンサブユニットと呼ば
れる。このフィコシアニンサブユニットは、一般的には
その起源となる生物により蛋白質部分のアミノ酸組成に
よって分子量に幅があるが、スピルリナ属藻に由来する
ものは１．７Ｘ１０’の分子量を有する（その詳細は後
述の通り）。

本発明にお−・て最も好適には、この天然のフィコシア
ニンサブユニットを各種のイミドエステルで架橋させ、
架橋体とする。これは、フィコシアニンサブユニット分
子に含まれる例えばリジンに由来するアミン末端がイミ
ドエステル（例えばジメチルスベロイミデートの塩酸塩
）と次の如く反応し、イミドエステル残基を仲立ちとし
て２個以上のサブユニットが互に２次元的または３次元
的に結合するかイミドエステルの結合比率は、フィコシ
アニンサブユニットの１単位当り大略６単位前後であり
、これより少〜・とサブユニット単位数３以上の分子種
の生成が少く、多〜・と架橋体の溶解性が低下する。

本発明に係る架橋体はこの様な構造を有するもので、フ
ィコシアニンサブユニットが２〜１２個結合したもので
ある。

サブユニットが２〜１２個の範囲のものは、その分子量
が大略３．５Ｘ１０’〜３５Ｘ１０’程度の値を有し、
蛋白質粒子とほぼ同様な性状を有する。即ち、本発明に
係る架橋体を丁それ自体水溶性を有するか、または分子
量が大き〜・ために難溶性のものでも、少くとも前記Ｓ
ＤＳの水溶液に対しては水溶性を有する。

また、本発明に係る架橋体は、その分子中にフィコシア
ノビリンに由来する発色団が多数結合されて℃・るから
、可視光領域における特性吸収を有する。その波長は６
２０±２０ｎｍで、その色は青色を呈する。この特性吸
収波長は、架橋体の分子量の大小によって、または窟白
賀部分のアミノ酸構成の相違や架橋部分を構成するイミ
ドエステル残基の相違等によって±２０ｎｍの範囲でシ
フトする。

本発明に係る架橋体は以上の如きものであるから、ゲル
電気泳動法またはゲル濾過法により蛋白質の未知分子量
を推定する場合の標準蛋白質な〜・し分子量マーカーと
して適当な分子量を有すると共に、展開した際のカラム
中のバンドが青色を呈し、その位置が展開開始から終始
視認できる特長を有する。従って未知蛋白質と分子量マ
ーカーを一緒に泳動させ、未知蛋白質につ℃・では２８
０ｎｎｎの吸光度に着目し、デンシトメーターを利用し
得るから、煩雑なバンド染色の操作を要することなく、
簡便かつ正確に未知蛋白質の分子量を決定することがで
きる。（尚所望に応じて染色し得るのは勿論である。）
即ち、本発明の架橋体は、分析機器、測定機器の発達と
相俟って、未知蛋白質の分子量測定の精密化及び簡便化
をもたらすものである。

本発明の架橋体は、フィコシアニンサブユニットの単位
数によってほぼ一定の範囲の分子量を持つがサブユニッ
トの種類、イミドエステルの種類および結合数が場合に
よって異なるため、特定の数値を有するものではなり・
。従ってその分子量は前記の大略３．５ＸｉＯ’〜３５
Ｘ１０’の範囲で様々な数値となる可能性がある。

このため、この架橋体を分子量マーカーとして利用する
場合に所望の分子量のものを選択することが可能とされ
、またもとのサブユニットそのものも含め異る分子１°
のマーカーを多種類混合して利用することが容易であり
、しかも異る分子量のマーカー相互の特性が、分子量を
除いて、極１゜ めで共通性の高℃・ものとなされ得るので、分子量測定
操作が極めて容易である。

本発明におけるフィコシアニンサブユニットとじてヲ丁
、既述のスピルリナ属藻に由来するものが好適なものと
して挙げられる。これ以外にもアナペナ属、ネンジュモ
属、アナキスナス属等の藍藻類が利用可能であり、また
これら天然のものに限らず、適宜な蛋白質のサブユニッ
トにフィコシアノビ９フ１ル２分子結合した人工のもの
も利用し得る。

本発明にお〜・て利用されるイミドエステルとしでは、
前に例示したジメチルスベロイミデートの他に、ジメチ
ルアジボイミデート、ジエチルマロンイミデート等／ｌ
’＋ｌＪ用可會ヒであり、それらは好適には塩酸塩とし
て利用される。それらを化学式で示すと、順にＣ１゜Ｈ
２２Ｃ６ｆｆｉＮ２０□、Ｃ，Ｈ，、Ｃｌ２Ｎ２０２．
　Ｃ，Ｈ，、Ｃ７１２Ｎ２０２である。

本発明の架橋体を製造するには大別してフィコシアニン
−サブユニットの調製、架橋処理、架橋体の分別の各工
程を経る。

フィコシアニンサブユニットの調製に当っては、例エバ
スピルリナ属藍藻の生藻体またはその乾燥粉末をまずリ
ン酸緩衝液に懸濁し、細胞を破砕してフィコシアニンの
抽出を行〜・、遠心分離と硫酸アンモニウムを用〜・た
分画操作により粗フィコシアニンを得る。得られた粗フ
ィコシアニンは、極めて有利な方法としてジエチルアミ
ノエチルセルロースイオン交換クロマトグラフィーによ
り精製される。

この他一般的には、透析、カラムクロマトグラフィー、
ゲル１過法、電気泳動法、沈澱−再溶解抽出法、界面活
性剤抽出法またはそれらを適宜組合せた精製法が採用可
能である。

フィコシアニンサブユニットは、この様にして精製され
たフィコシアニンを前記ＳＤＳ水溶液中に溶解させると
、フィコシアニンが解離することによって得られる。

この様にして得られるフィコシアニンおよびチ＋；亭芋
’；ズ＄ヨがフィコシアニンサブユニットは、ゲルｆ過
法および５ＤＳ−ＰＡＧＥ法によりそれらの分子量が夫
々４Ｘ１０’ｆ４Ｘ１０’および１．７Ｘ１０’−１＝
３Ｘ１０”であることが分り、このフィコシアニンは、
２分子のサブユニットにより構成されて（・ることか意
味される。

次℃・で架橋処理を行うに当っては、サブユニットに解
離されたフィコシアニンを、ｐＨ８，Ｄ付近のリン酸緩
衝液に蛋白質濃度１〜１０η／ｌｌｌ１となる様に溶解
し、これにイミドエステルを固体状または別途リン酸緩
衝液に溶解して添加し、遮光下、温度４〜２５℃の範囲
およびｐＨ８，０付近で１〜２４時間弱〜・攪拌下に反
応させれば良℃・。イミドエステルの添加量は、フィコ
シアニンサブユニット１１ｉに対して６〜３０ｍｍｏｌ
ｅ（１００〜５６０倍ｍｏｌｅ　）程度が好ましく・。

反応は、リジンを加えることにより停止するか、反応混
合物をｐＨ６，５付近の緩衝液で透析するかまたはゲル
ｆ過を行って残存するイミドエステルを除くことによっ
て停止する。

得られたイミドエステル架橋体は、脱塩後ゲル濾過また
は５ＤＳ−ＰＡＧＥ法により、分子量の異る多種の架橋
体に分画される。各両分は、この例では５ＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ法によりその分子量が５．６Ｘ１０’（サブユニット
２単位）、５．８Ｘ１０’（同３単位）、８．２Ｘ１０
’（同４単位）、１ｏ、ａｘ１ｏ’（同５単位）であり
、以下同様に増加し、サブユニット単位１２の場合に大
略３．５Ｘ１０’を示す。

これらの架橋体は、凍結乾燥品またはグリセリン溶液と
して保存することができ、その分子量を予め明らかにし
ておくことにより分子量マーカーとして極めて有用性が
高い。

勿論これらの各両分は、サブユニットも含めて適宜組合
せた分子量マーカーとすることも可能であり、その場合
には予め各画分に分けることを要さな（・場合もあり得
る。また架橋体の各画分の分子量は、前記の量に限られ
ず、フィコシアニンサブユニットの起源、イミドエステ
ルの種類、架橋反応の条件等により相異する。

以上の如き本発明に係るフィコシアニンのイミドエステ
ル架橋体は、分子量マーカーとして有用であるばかりで
なく、イミドエステル架橋体はフィコシアニンよりも耐
熱性が増加して℃・るので、フィコシアニンを食用色素
として用〜・る場合の耐熱性色素としても利用し得る。

以下に本発明を実施例によって更に具体的に説明する。

実施例１ ｆｉｌ　　フィコシアニンの調製 スピルリナ生藻体を０．９％Ｎ　ａ　Ｃｌ水溶液で洗滌
後、０、０３　Ｍ　ＩＪン酸緩衛液（ｐＨ６，０）に懸
濁して超音波処理を数分間行うか、または石英砂と藻体
をペースト状に混合して乳鉢ですりつぶし、細胞を破砕
する。この様に処理された藻体１００Ｍ乾燥重量）の前
記リン酸緩衝液による懸濁液１４５１を数時間４℃にで
攪拌しながらフィコシアニンの抽出を行う。次〜・でこ
の懸濁液を遠心分離機で１刈０’Ｇで３０分間処理して
固形分を除去し、得られた上清に硫酸アンモニウムを２
０％飽和になる様に加える。次〜・でこれを数時間静置
し、その後再度遠心分離処理を行〜・上清両分を得る。

この上清両分に硫酸アンモニウムを５０％飽和になる様
に加え、数時間静置後遠心分離処理し粗フィコシアニン
画分を沈澱として得る。

更に粗フィコシアニンを前記リン酸緩衝液に溶解し透析
膜を用（・て限外ｆ過し、得られた水溶液を凍結乾燥し
、１５Ｉのフィコシアニンを得る。

この様にして得られたフィコシアニンを、ＤＥＡＥ−セ
ルロースカラムを用（・たイオン交換クロマトグラフィ
ーにより更に精製すると、こ′ＦｕＬ言ディスク電気泳
動で単一バンドを示すに至る。（尚、以上の操作は全て
４℃以下で行った。） また、凍結乾燥して得られるフィコシアニン粉末はｆ色
を呈しており、ＳＯＳや尿素の水溶液に易溶、５０１１
１９／ｍｌ程度までは室温で水に易溶である。

分子量： セファデックスＧ　　２００　（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社
製架橋デキストランの商品名）を充填したカラム（２，
４ｃｍ〆Ｘ１１０ｃｍＬ）を用も・たゲルクロマトグラ
フィーにより測定したところ、このものの分子量は、４
Ｘ１０’±４Ｘ１０”であり、より高分子量の会合体の
存在も僅かに認められた。

組成：　　　　　　　　　　　　　・・。

フィコシアニン中の蛋白質の割合は、Ｌｏｗｒｙ法によ
り測定したところ９０１脩％以上であり、フィコシアノ
ビリンの割合は吸光度法により測定したところ、蛋白質
ｉｏ’、ｐ当り０．５〜１．０　ｍｏｌｅである。

可視光吸収スペクトル： 可視光領域の吸収スペクトルは５５０〜６５０ｎｍの波
長範囲に極大曲線を示し、ピークは６２０ｎｍに位置す
る。

この吸収スペクトルを第１図に示す。

ケイ光スペクトル： フィコシアニンは、波長５７０ｎｍの励起光により、６
００〜７００ｎｍの波長範囲に極大曲線を成すスペクト
ルを示す。そのスペクトルを第２図に示す。

（２）　　フィコシアニンサブユニットの調製フィコシ
アニンをＳＯ８水溶液に溶解するとフイコシアニンサブ
ユニツ）Ｋ解離する。　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　１、分子量： サブユニットの分子量を知るために５ＤＳ−ＰＡｉ法で
測定した。測定に当り、０１％ＳＤＳの存在下、１０％
ポリアクリルアミドゲル、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，０）を用℃・、５ｍＡ／ゲル１本の電流で行った。

バンドパターンは移動度０，６５〜０７５の単一のもの
であり、他の標準蛋白質の相対移動度から、分子量は１
．７×１０４±、１ＳＸ１０”と測定された。

組成： ５ＤＳ−ＰＡＧＥ法にお（・て、試料溶液へ２−メルカ
プトエタノールの添加の有無は、バンドの移動度に変化
を与えな（・ことから、サブユニット間にジスルフィド
結合は存在しな℃・。また、分子量より判断してサブユ
ニット２単位によりフィコシアニンが構成されて（・る
ことか分る。

可視光吸収スペクトルおよび蛍光スペクトルはフィコシ
アニンとほぼ同様である。

（３）フィコシアニンのイミドエステル架橋体の製造３
ｔｎｙ／ａｔ濃度のフィコシア＝ｙ水溶液１００ｄをｐ
Ｈ８，２に調製し、これにジメチルスベロイミデート塩
酸塩を５０〜２００ｍ　ｍｏｌｅとなる様に加え、２５
℃で５時間反応させ、サブユニットの結合数の異る種々
の架橋体の混合物を得た。次（・でそれらの架橋体を０
．０３Ｍ　ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ６，０）に１２時間透
析して残存イミドエステルを除去し、架橋反応を終止さ
せる。

この混合物を５ＤＳ−ＰＡＧＥ法により測定した。測定
に当り、ポリアクリルアミドゲル濃度８％のゲルを用℃
・Ｗｅｂｅｒ　＆　０ｓｂｏｒｎの方法に従った。その
結果の泳動パターンは第３図の通りであり、これらのバ
ンドの位置と既知蛋白質の分子量と相対移動度のプロッ
ト（第４図）から、各架橋体の分子量が判明する。

既知蛋白質としてはシトクロムＣ、キモトリプシノーゲ
ン、卵白アルブミン、カタラーゼ、血清アルブミン、Ｒ
ＮＡポリメラーゼ等の１０種を採用し、第４図の通りプ
ロットした。分子ｉ１０’〜７Ｘ１０’付近までのポリ
ペプチドのプロットは直線性を示し、分子量１０Ｘ１０
’以上のポリペプチドはゆるやかな曲線を示す。本発明
の架橋体はバンド１〜５に分画されその移動位置を上記
プロットと重ねると第３図の通りで、その分子！１′ハ
、１．７ＸＩＤ’、３６ｘｉｏ’、５．８Ｘ１０’、８
．２Ｘ１０’および１０．８Ｘ１０’と求められた。尚
、前記Ｗｅｂｅｒ　＆　０ａｂｏｒｎによると測定誤差
は±１０％以内であると言われる。

得られた架橋体は、所望によりゲル１過法または上記５
ＤＳ−ＰＡＧＥ法によって各分子量画分に分別すること
ができる。

存在状態および溶解特性： イミドエステル架橋体は、凍結乾燥品および水溶液共に
青色を呈し、水に対する溶解性はフィコシアニンより低
く。

フィコシアニンサブユニットの単位数が増えるに従って
水難溶性を呈するが、丈プユニットの単位数が１２以下
であれば少くともＳＤＳ水溶液には易溶性を有す。また
水溶液に対して硫酸アンモニウムが添加されると沈澱と
なる。

イミドエステル残基結合数： イミドエステル架橋体は、その蛋白質のりジン残基を定
量することによりイミドエステル残基の結合数が求めら
れる。本実施例で得られたイミドエステル架橋体の混合
物を試料として０，１％の水溶液１ａｌに１ｄづつの４
％炭酸水素ナトリウム水溶液および０．１％２．４．６
−）リニトロベンゼンスルホン酸ナトリウム水溶液を加
え、４０℃で２時間反応させ、１０％ＳＤＳ水溶液１−
を加えた後、ＩＮＨＣＪをＱ、　５　ｙｌ加える。得ら
れた水溶液を３３５ｎｍ　の波長光で比色定量し、その
結合数は、蛋白質１０４ｇ当り１〜４ｍｏｊｅと求めら
れた。

可視光吸収スペクトル： 可視光領域の吸収スペクトルは、フィコシアニンサブユ
ニットと同様に５５０〜６５Ｄｎｍの波長範囲に極大曲
線を示し、そのピークは、丈プユニットの単位数により
多少異り、６２０±２０ｎｍの範囲に位置した。

蛍光スペクトル： 蛍光スペクトルは、フィコシアニンサブユニットと同様
に波長５７０ｎｍの励起光により６０ｏ〜７０Ｄｒｕｎ
の波長節ＦＭＫ極大曲線を示す。

実施例２ 分子量未知蛋白質の分子量測定 フィコシアニンサブユニット及びそのイミドエステル架
橋体を分子量マーカーとして用（・た分子量未知蛋白質
の分子を測定のシュミレーションとして、分子量既知の
アルドラーゼにつ〜・て測定した。

実施例１で調製した反応生成物（フィコシアニンサブユ
ニットのとその単位数２〜５のイミドエステル架橋体の
混合物）１００＃を測定に供し、アルドラーゼと共に５
ＤＳ−ＰＡＧＥ法を実施した。分子量−相対移動度のプ
ロットを第５図に示す。この結果未知蛋白質（アルドラ
ーゼ）の分子量は４Ｘ１０’と求められた。

この値は、グアニジン塩酸中での超遠心分析法、浸透工
法、化学的分析等によって既知の値と一致しており、こ
の分子量マーカーの有効性ｂ′−示された。

【図面の簡単な説明】

第１図は、スピルリナ属藍味に由来のフィコシアニンの
可視光領域における吸収スペクトル図、第２図は、その
蛍光スペクトル図、第３図は、フィコシアニンサブユニ
ットおよびそのイミドエステル架橋体の混合物の５ＤＳ
−ポリアクリルアミドゲル電気泳動における泳動パター
ン、第４図および第５図は、分子量と相対移動度の関係
を示すグラフである。 特許出願人 大日本インキ化学工業株式会社 結４図 、潴動崖 （ｉ　β′傾

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　分子量が１．５Ｘ１［）’〜４．５Ｘ１０’の範囲
   にある蛋白質に１〜２分子のフィコシアノビリンが共有
   結合した色素蛋白質で、可視光領域における特性吸収波
   長が６２０±２Ｑｎｍであるフィコシアニンサブユニッ
   トを基礎単位とし、該サブユニット１単位に対して１〜
   ８単位のイミドエステル残基で架橋されて該サブユニッ
   トが２〜１２単位互に結合され、サブユニットと同様に
   特性吸収波長が６２０±２　Ｑｎｍで、少くともドデシ
   ルスルホン酸ナトリウムを含む水溶液に対して溶解性を
   有することを特徴とするフィコシアニンのイミドエステ
   ル架橋体。 ２　フィコシアニンサブユニットが藍藻に由来するもの
   である特許請求の範囲第１項記載のフィコシアニンのイ
   ミドエステル架橋体。 ６　架橋部分を構成するイミドエステル残基が、ジメチ
   ルスペロイミデート、ジメチ々アジボイミデートおよび
   ジエチルマロンイミデートの各残基の少くとも１種であ
   る特許請求の範囲第１または２項記載のフィコシアニン
   のイミドエステル架橋体。 ４　分子量が１．５Ｘ１０’〜４．５Ｘ１０’の範囲に
   ある蛋白質に、１〜２分子のフィコシアノビリンが共有
   結合した色素蛋白質で、可視光領域における特性吸収波
   長が６２０±２０ｎｍであるフィコシアニンサブユニッ
   トを基礎単位とし、該サブユニット１単位に対して１〜
   ８単位のイミドエステル残基で架橋されて該サブユニッ
   トが２〜１２単位互に結合され、サブユニットと同様に
   特性吸収波長が６２０±２０ｎｍで、少（ともドデシル
   スルホン酸ナトリウムを含む水溶液に対して溶解性を有
   する、フィコシアニンのイミドエステル架橋体の少くと
   も１種を含むことを特徴とする蛋白質の分子量測定用標
   準蛋白質。