JPS58170499A

JPS58170499A - Analytical element for measuring lap

Info

Publication number: JPS58170499A
Application number: JP5499982A
Authority: JP
Inventors: Kenichiro Okaniwa; 憲一郎岡庭; Masakuni Saruhashi; 猿橋　正邦; Mikio Kamiyama; 幹夫神山
Original assignee: Konica Minolta Inc
Current assignee: Konica Minolta Inc
Priority date: 1982-04-01
Filing date: 1982-04-01
Publication date: 1983-10-07

Abstract

PURPOSE:To obtain an easily usable analytical element useful for measuring the activity of L-leucine aminopeptidase, capable of long-term preservation, by making the analytical element contain a reagent which is reacted with a specimen component to be analyzed to form a dyestuff. CONSTITUTION:An analytical element for measuring the activity of L-leucine aminopeptidase comprising at least one reagent layer and at least one developing layer on any substrate, wherein at least one layer of both the layers contains 1.0-20.0mM substance such as ammonium iodate, iron thiocyanate, etc. having oxidizing action based on 1l coating dispersion, 0.1-10.0mM coupler such as 1- hydroxy-N-dodecyl-2-naphthamide, etc. having diffusion resistance based on 1l coating dispersion, and 5.0-700mM anilide derivative shown by the formula (R1 and R2 are each H, alkyl, etc.; R3-R6 are each H, halogen, hydroxyl group, etc.) or its salt based on 1l coating dispersion.

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、Ｌ−ロイシンア文ノベブチダーゼ（以下ＬＡ
Ｐという）の活性測定に有用な分析素子に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention provides L-leucine aminobutidase (hereinafter referred to as LA
This invention relates to an analytical element useful for measuring the activity of P.

周知の如く、ＬＡＰは一般に胆管酵素と呼ばｎ１胆汁の
流出障害を来たす疾患に特異的であり、従来、臨床的に
用いらｎている酵素測定と共に、その診断学的意義は高
く、このような疾患の診断及び屑線把握に必要な検査と
なっている。As is well known, LAP is generally called a bile duct enzyme and is specific to diseases that cause N1 bile outflow obstruction, and its diagnostic significance is high, along with enzyme measurements conventionally used clinically. This test is necessary for diagnosing diseases and identifying debris.

ＬＡＰは従来より、合成基質を用いて生成するアミン化
合物を定量する方法がいくつか報告されている。For LAP, several methods have been reported for quantifying amine compounds produced using synthetic substrates.

例えは、ＬＡＰにより生成するアニリン誘導体の比色定
販法としてジアゾニウム塩に変換する方法、ｐ−ジメチ
ルアミノ−ケイ皮アルデヒドとのシッフ塩基にする方法
もしくは、キシレノールと醗化紬合を行い呈色する方法
か従来より知られている。しかしながら上記反応は分析
結果を得墨までｍ液を用いるため、取扱がはんざつセあ
り、数回の分注操作が必要な為、測定誤差が生じるとい
う欠点を有している。さらに、一般に上記の如き呈色反
応で生成さｎる色票は親水性であり、疎水性が低いため
に、本発明の如き分析素子に適用した場合、含浸された
水によって自由に層内を移行する状態となっている。こ
の様な好ましくない拡散現象により、生成色素の局部的
な高濃度化即ちリンギングと佇ばｎる現象が生じ、色濃
度の判定を阻害しその定量性を著しく劣下させる事は言
うまでもない。For example, the aniline derivative produced by LAP is converted into a diazonium salt as a colorimetric method, the Schiff base is formed with p-dimethylamino-cinnamic aldehyde, or the aniline derivative is mixed with xylenol to develop color. There are conventionally known methods to do this. However, since the above reaction uses liquid m to obtain the analytical results, it is tedious to handle and requires several dispensing operations, resulting in measurement errors. Furthermore, since the color patch produced by the above color reaction is generally hydrophilic and has low hydrophobicity, when applied to an analytical element such as the present invention, the impregnated water can freely move the inside of the layer. It is in a state of transition. It goes without saying that such an undesirable diffusion phenomenon causes a local increase in the concentration of the produced dye, a phenomenon called ringing, which impedes the determination of color density and significantly deteriorates its quantification.

本発明者は、上記欠点を改良すべく鋭意検討を行った。The present inventor conducted extensive studies to improve the above drawbacks.

即ち本発明の第１の目的は、ＬＡＰ活性を定線する為の
分析素子を提供する拳にある。That is, the first object of the present invention is to provide an analytical element for determining LAP activity.

本発明の第２の目的は、試薬及び生成した色票の移動を
起こさない分析素子を提供する事であるー前記の目的は
、支持体上に、少なくともＩＮｌの試薬層及び少なくと
も１層の展一層を有する分析素子において、該層の少な
くとも１層に酸化作用のある物質、耐拡散性カプラー及
び下記一般式で示されるアニリド誘導体又はその塩を含
有するＬＡＰ個定用分析票子によって達成さｎた。A second object of the invention is to provide an analytical element which does not cause migration of the reagents and the color patches produced - said object consists of a reagent layer of at least INl and at least one layer of spread on a support. In an analytical element having a single layer, at least one of the layers contains an oxidizing substance, a diffusion-resistant coupler, and an anilide derivative or its salt represented by the following general formula. .

一般式式中Ｒ１及びＲ１はそゎぞれ水素原子またはアルキ／Ｉ
−基を表わし、Ｒ３とＲ８は室菓厚子と共に複素環を形
成してもよ＜、ＸいＲ，、Ｒ−及びＲｏはそれぞれ水素
原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、アミノ橘、アルコキ
シ基、アシルアミド橘、アリールスルホンアミド基、ア
リールスルホンアミド基またはアルキル篭を表わす。In the general formula, R1 and R1 are each a hydrogen atom or alkyl/I
- group, and R3 and R8 may form a heterocycle together with Atsuko Muroga. , represents an arylsulfonamide group, an arylsulfonamide group or an alkyl cage.

前記式中、Ｒ３及びＲ２で表わされるアルキル基として
は、炭素原子数１乃至６のものが好ましく、十ケに１乃
至番のものが好ましい。例えはメチル、エチル、ブチル
を挙げることかで門る。これらの１１アルキル基は置換基を有していてもよく置換基としては
、例えばウレイド基、テトラヒドロ７リル、カルボキシ
ル、メタンスルホンアミド、スルホ、メトキシ、エトキ
シ、メトキシエトキシ、メトキシエトキシエトキシ、メ
トキシテトラエトキシ等か挙げられる。ＲいＲ，及びＲ
，とじては水素原子、アルコキシ基及びアルキルスルホ
ン了ミド基、アリールスルホンアミド基が好ましく、さ
らに好ましくは水素原子である。Ｒ，とじては水素原子
、アルキル基、アシルアミド基か好ましく、より好まし
くは脚票原子Ｉｌｌ〜３のアルキル基、特にメチルであ
る。また、前記一般式で示される化合物の塩トシては１
）−）ルエンスルホン酸、スルホン酸、スルフィン拳、
硫酸エステル、スルファミン酸、チオ硫酸８−エステル
、カルボン酸、リン酸エステル、アミドリン酸、リン酸
、亜リン酸エステル、有機ホウ素化合物、塩酸及び硫Ｉ
Ｉ’唖の有機酸又は無機酸の塩を挙げることができ、特
にＩ）−）ルエンスルホン酸塩、墳酸塩及び硫醗壌が好
ましい。In the above formula, the alkyl group represented by R3 and R2 preferably has 1 to 6 carbon atoms, and preferably 1 to 10 carbon atoms. Examples include methyl, ethyl, and butyl. These 11 alkyl groups may have a substituent, and examples of the substituent include a ureido group, tetrahydro-7lyl, carboxyl, methanesulfonamide, sulfo, methoxy, ethoxy, methoxyethoxy, methoxyethoxyethoxy, and methoxytetraethoxy. etc. can be mentioned. R-R, and R
, a hydrogen atom, an alkoxy group, an alkylsulfonamide group, and an arylsulfonamide group are preferable, and a hydrogen atom is more preferable. R is preferably a hydrogen atom, an alkyl group or an acylamido group, more preferably an alkyl group having 1 to 3 foot atoms, especially methyl. In addition, the salt of the compound represented by the above general formula is 1
)-) Luenesulfonic acid, sulfonic acid, sulfinic acid,
Sulfuric acid ester, sulfamic acid, thiosulfuric acid 8-ester, carboxylic acid, phosphoric acid ester, amidophosphoric acid, phosphoric acid, phosphite, organic boron compound, hydrochloric acid and I sulfuric acid
Mention may be made of the salts of organic or inorganic acids, of which I)-) luenesulfonates, sulfates and sulfates are particularly preferred.

以下に本発明に係るアニリド誘導体の代表的具体例を示
すが、本発明はこれに限定されるものではない。Typical specific examples of the anilide derivative according to the present invention are shown below, but the present invention is not limited thereto.

［例示化合物］（１−１）ｌ−（Ｌ〜ロイシル）−４−Ｍ、Ｍ−ジエチ
ル了ミノー２−メチルアニリド（１−２）１−（Ｌ−ロイシルノー４−（Ｎ−カルバミ
ドメチル−Ｎ−テトラヒドロフルフリル）アミノ−２−メチルアニリ　ド（１−３）ｌ−（Ｌ−ロイシル）−４−（ｌＮ−エチル
−Ｎ−力ルボキシメチルノア考ノー２−メチルアニリド（１−４）ｌ−（Ｌ−ロイシル）一番−（Ｍ−カルバミ
Ｆメチルーｙ−エチルンアミノ−２−メチルアニリド（１−５）１−（Ｌ−ロイシル）−４−（Ｍ−エチル−
Ｎ−テトラニトロフルフリル）アミ／−２−メチルアニ
リド（１−６）１−（Ｌ−ロイシルツ一番−（ｍ。[Exemplary Compounds] (1-1) l-(L~leucyl)-4-M, M-diethyl-2-methylanilide (1-2) 1-(L-leucyl-4-(N-carbamidomethyl-N) 2-methylanilide (1-4) -(L-leucyl)-(M-carbamiF-methyl-y-ethylamino-2-methylanilide (1-5) 1-(L-leucyl)-4-(M-ethyl-
N-tetranitrofurfuryl)ami/-2-methylanilide (1-6) 1-(L-Leucilz Ichiban-(m.

Ｈ−ジメチル）アミノ−２−ア七チル了ミノアニリド（１−７）　　１−（ｂ−ロイシル）−４−（１−エチ
ル−Ｎ−β−メタンスルホン了之ドエチル）アミノ−２−メチルアニリド（１−１ｍ）　　１−（Ｌ−ロイシル）−４−（Ｍ−エ
チル−舅−メトキシエチルフ了文ノー２−メチルアニリド（１−９）ｌ−（Ｌ−ロイシル）−４−（Ｍ−エチル−
Ｍ−［２−（２−メトキシエトキシ）エチル］）アミノ−２−メチルアニリド（１−１０）　　ｌ−（：Ｔｌ−０イシｋ）−４−Ｈ，
Ｍ　−ジエチル了ミノー３−メチルアニリド（１−１１）　１−（Ｌ−ロイシルツ一番−［Ｍ−エチ
ルーＭ−４−、ｉ！！−［ｇ　−（２−メトキシエトキ
シ］エトキシ］エチル）］］アミノ−２−メチルアニリド１−１２）　　１−（Ｌ−）イシｋ）−４−（Ｎ。H-dimethyl)amino-2-acetyl-minoanilide (1-7) 1-(b-leucyl)-4-(1-ethyl-N-β-methanesulfone-doethyl)amino-2-methylanilide ( 1-1m) 1-(L-leucyl)-4-(M-ethyl-methoxyethylfurobunno 2-methylanilide (1-9)l-(L-leucyl)-4-(M-ethyl −
M-[2-(2-methoxyethoxy)ethyl])amino-2-methylanilide (1-10) l-(:Tl-0Ik)-4-H,
M-diethylminnow-3-methylanilide (1-11) 1-(L-Leusilz-Ichiban-[M-ethyl-M-4-,i!!-[g-(2-methoxyethoxy]ethoxy]ethyl)] ]Amino-2-methylanilide 1-12) 1-(L-)isok)-4-(N.

Ｎ−ジエチルンアミノー２−メタンスルホンアミドエチルアニリド本発明に係る７二リド誘導体の塩は一般的に水浴性であ
り、水もしくはバッファ水溶液中に容易に溶解して、分
析素子中に添加するが、水に対する溶解度積の小さいも
のは有機溶媒に溶解後添加することも可能である。N-diethylinamino-2-methanesulfonamidoethylanilide The salt of the 72lide derivative according to the present invention is generally water bathable, and is easily dissolved in water or an aqueous buffer solution to be added to an analytical element. , those having a small solubility product in water can be added after being dissolved in an organic solvent.

本発明の分析素子におけるアニリド誘導体又はその塩は
、その測定範囲領域（ダイナミックレンジ）を決める上
で重要であり、通常、塗布分散液ｌｌ中に５．０　ｍＭ
　〜７０００　ｍＭ金含有テイレば良好な測定か口」能
となるが、好ましくは１０．０ｍＭ〜５００ｍＭを使用
する。The anilide derivative or its salt in the analytical element of the present invention is important in determining its measurement range (dynamic range), and is usually contained at 5.0 mM in the coating dispersion.
A gold concentration of ~7000 mM provides good measurement performance, but preferably 10.0 mM to 500 mM is used.

本発明に有用な耐拡散性カプラーは、本発明のアニリド
誘導体より生成されるアニリン誘導体の嘴化物とカップ
リング反応して色素を生成するものであｎば任意である
が、耐拡散性にしておくことができる大きさ及び立体配
置を有する基（以下バラスト基と称す）を有する化合物
であり、特願１ｉ１３５５　１７１８７４号記載の耐拡
散性ナフトール化合物、同５５−１７１８７２号記載の
耐拡散性フェノール化合物、同５５−１７１８７３号記
載の耐拡散性アシルアセトアミド化合物ＭＵｆｒｓｊ　
５５−１７１８７５号記載の耐拡散性ピラゾロン化合物
を用いることが好ましい。Diffusion-resistant couplers useful in the present invention are arbitrary, as long as they produce a dye by coupling reaction with the beaked product of the aniline derivative produced from the anilide derivative of the present invention. It is a compound having a group having a size and steric configuration (hereinafter referred to as a ballast group) that can be used as a ballast group, and is a diffusion-resistant naphthol compound described in Japanese Patent Application No. 1i1355 171874, and a diffusion-resistant phenol compound described in Japanese Patent Application No. 1i1355-171872. , diffusion-resistant acylacetamide compound MUfrsj described in No. 55-171873
It is preferable to use the diffusion-resistant pyrazolone compound described in No. 55-171875.

以下に本発明に係わる耐拡散性カプラーの代表的具体例
を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。Typical specific examples of the diffusion-resistant coupler according to the present invention are shown below, but the present invention is not limited thereto.

［例示力プラーコ（２−１）ｌ−ヒドロキシ−Ｎ−ドデシル−２−ナ７ト
アミド（２−２１１−ヒドロキシ−ｗ−［−一（２゜４−ジ−
ｔ−アミルフェノキシフブチル］−・２−ナフトアミド（２−３）ｌ−ヒドロキシ−４−フェノキシカルボニル
メトキシ−舅−［−一（２゜４−ジ−ｔ−アミルフェノキシフブチル］−２−ナフトアミド（２−４）ｌ−ヒドロキシ−４−（エトキシカルボニル
メトキシ）−Ｎ−［−一（２゜４−ジ−ｔ−アミルフェ
ノキシフブチル］−２−す７ト了ミド（Ｑ−５）ｌ−ヒドロキシ−Ｎ、Ｍ−ジオクタデシル−
２−ナフトアミド（２−６）　　１−（２，４，６−）リクロロ７工二ル
）−３−［ｓ−（２，４−ジ−ｔ −アミルフェノキシアセトアミド）ベンツ了ミドコー５−ピラゾロン（２−７）　　　　１−（２，４，６−）　　リ　り　
ｐ　ロ　７　工　にル）−，５−（２−クロロ−５−オ
クタデシルスクシンイミドアニリ７ノー５−ピラゾロン（２−８Ｊ　　１−（２，４，６−）リクロロフェニル
）−３−（２−クロロ−５−［α −（３−ｔ−ブチル−４−ヒドロキシフェノキジノテトラデカンアミド］アニリノ）−６−ピラゾロン（２−９）　　１−（２，４，６−）リクロロ７工二ル
）−３−（２−クロロ−５−オクタデセニルスクシイミドーアニリノノ −５−ピラゾロン（２−１０）　　１−（２，ｊ、　６−）リクロロフェ
ニル）　−３−（、２−クロロ−５−トリデカン了ミド
ーアニリノ）−６−ピラゾロン（Ｊ！！−１１）２．４−ジクロロ−３−メチル−６−
［α−（ｊ！、４−ジーｔ−アミルフェノキシ］ブチル
アミド］フェノール（２−１２）２−（α、α、β、β−テトラフルオロプ
ロピオン了ミド）−４−β−クロｐエトキシー５−［α−（２，４− ジ−ｔ−アミルフェノキシフブチルアミトコフェノール（２−１３）ｊｉ！−クロロ−３−メチル−４−エチル
カルバモイルメトキシ−６−［α− （８，４−ジーｔ−アミルフェノキリブチルア之ド］フェノール（２−１４ン　２−クロロ−３−メチル一番−メトキシ
カルボニルメトキシ−６−［α− （２，４−ジーｔ−ア：ミルフェノキシノプチルアミド
コフェノール（Ｑ−１５）２−クロロ−３−メチル−４−カルボキシ
メトキシ−６−［α−２，４− ジーｔ−アミルフェノキシ）ブチルアミトコフェノール（２−１６）２−クロロ−３−メチル−４−（ｐ−カル
ボメトキシフェニル　カルバモイルメトキシ）−６−［α−！１．４−ジーｔ−アミル
フェノキシ）ブチルアミトコフェノール（２−１７）２−クロロ−３−メチル−４−トリーエト
キシカルボニルメトキシ−６− ［（２，４−ジーｔ−アミルフェノキジノエチルアミド］フェノール（２−１８７２−クロロ−３−メチル−４−メトキシエ
チルアミ７カルポニルメトキシカルポニルメトキシー６−［α−（２゜４−ジ−ｔ−ア
ルミフェノキシ）ブチルアミトコフェノール（２−１９）２，４−ジクｐロー３−メチル−６−［３
−（４−ドデシルベンゼンスルホンアミドノベンズアミド］フェノール（怠−２０，）２．４−ジクロロ−５−メチル−６−（
ω−モノヒドロ−オクタフルオルペンタノイルアミノ）フェノール（ｇ−１１）ｇ、４−ジブロム−３−メチル−６−（ｎ
−オクタデカノイルアミノ）フェノール（ｇ−ｕ）　　２−（１１−オクチル力ルポニルアミノ
フ一番−クロロー５［（２，４−ジ −ｔ−アミルフェノキシ）エチルアオド］フェノール（Ｊ！−２３）　　２−（ω−モノヒドロ−オクタフル
オルペンタノイルアミノ）−４−クロロ−５−［α−（２，４−ジ−ｔ−アミルフェノキシ」ブチルアミトコフェノール（２−２４）　　！！　−（ω−モノヒドロ−オクタフ
ルオルペンタノイルアミノ）−４−クロａ　−５−［α−（２，４−ジーを一アミルフェノキシ
）アセトアミノコツエノール（２−２５）　　２−１１−オクタフルオロブチル力ル
ホニルアミノ−ｂ−［３−（ｓ−ｎ　−ペンタデカニル
フェノキシ）プロピルカルボニルアミノコフェノール（２−２６）２−ｎ−オクタフルオロブチルカルボニル
アミ／−５−（２−ｎ−ラウリル−２−ヒドロキシカルボニルエチルカルボニルアミノ）フェノール（２−２７）　　２−（ｎ−へブタニル男ル〆ニルアミ
ノ）−５−［α−（２，４−ジーを一アミルフェノキシフブチルアオド］フェノール（２−２８）　　２−（ｎ−オクタフルオロブチルカル
ボニルアミノ）−５−［α−（２゜４−ジーｔ−了しルフエノキシンヘキサノイルア之ノコフェノール（２−２９）　　２−（ｎ−へキサフルオロプロピルカ
ルボニルアミノ）−５−Ｅα−（２゜４−ジーｔ−アえ
ルフェノキシフペンチル力ルポニルアミノ］フェノール（１！　−１０，）　　２−テトラフルオロエチルカル
ボニルアミノ−６−［α−２，４−ジーを一了電ルフェノキシ）ブｐピルカルボニルＴ文ノ］フェノール（２−３１）２−［α−（２，４−ジーを−７ミルフェ
ノキシ）プロピルカルボニルアミノ−６−メチルフェノール（２−ｓｅ）　　２−［α−（８，４−ジーを−７ミル
７工／キシ）プロピルカルボニルアミノフェノール（，２−３３）２−テトラフルオロエチルカルボニルア
ミノ−６−メチルフェノール（２−３４）、２−テトラフルオロエチルカルボニルア
ミノ−６−ｎ−ペンタデカニルフェノール（２−３５）２−ｎ−オクタフルオロブチルカルボニル
アミノ−５−［、（２，４−ジ−ｔ−アミルフェノキシ
ンメチルカルボ −ルアくノコフェノール（ｇ−３６）２−）す〜フルオロメチルー６−ｎ−ウン
デカニル力ルポニル了ミノ−７エノール（２−３７）２−フェニル−ジ−フルオルメチル−４−
クロロ−６−ｎ−ウンデカニルカルゲニルアミノフェノール（２−３８）２−り四ロー３−メチルー４−メタンスル
ホニルオキシ−６−（隠−ｎ− ドデカニルオキシフェニルカルボニル了ミノ〕フェノール（２−３９）２−）リフルオロメチル−４−メタンスル
ホニルア之ドー６−　（！ｌ−ウンデカニルカルボニル
ー菖−メチル−アミノ）フェノール（２−４０７２−クロロ−３−メチル−４−（α−フェ
ニル−α−カルボキシメトキシノー６−［α−（２，４
−ジ−ｔ−ブチルフェノキシ）ブチルアミド］フェノール（２−４１）２−クロロ−３−メチル−４−ｎ　−オク
タデカニルオキシカル〆ニルメトキシー６−フェニルカルボニルアミノフェノール（２−４２）　　α−ベンゾイル−２−クロロ−５−［
ｒ−（２，４−ジーを一了ミルフェノキシンブチルγ電ド］アセトアニリド（２−４３）　　α−ベンゾイル−２−クロロ−６＝［
α−（ドデシルオキシカルボニル）エトキシカルボニル］アセトアニリド（２−４４）　　α−［４−（１−ベンジル−２−７エ
二ルー３，５−ジオキソ−１，２゜１−トリアゾリジニルノコーα−ビバリルー２−りｏ　四−５−［ｒ　−（２１４−ジ−ｔ−
アミルフェノキシ）ブチルアミドコア七トアニリド（１−４１５）　　α−（２，４−ジオキソ−６，５−
ジメチルオキサゾリジン−３−イル） −α−ピバリルー２−クロローａ−［ α−（怠、４−ジ−ｔ−アミルフェノキシ）ブチルアミド］アセトアニリド（２−４６Ｊ　　α−ピバリルーα−［４−（１−メチ
ル−２−フェニル−３，５−ジオキソ−１，２，４−）リアゾリジニル）］−］２−クロロ
ー５−７−（２，４− ジーｔ−ア建ルフェノキシ］ブチルアミトコアセトアニリド（，２−４７）ｌ−ヒドロキシ−４−（メトキシエチル
アミ７カルポニルメトキシ）−Ｎ −［δ−（２，４−ジ−ｔ−アミルフェノキシフブチル］−２−ナフＦアミド（２−４８）　１−ヒドロキシ−４−（メトキシエチル
アミ７カルポニルメトキシ）−Ｎ −（ｎ−へキサデカニル）２−す７トアミド（２−４ソ）　１−ヒドロキシ−４（ヒドロキシカルボ
ニルエチルカルボニルアミノ−Ｐ −フェノキシ）−菫−［δ−（２，４ −ジーｔ−ア々ルフェノキシ］ブチルコ−２−す７トア
ミド本発明の分析素子における耐拡散性カプラー置は、塗布
分散液ｌｌ中０．１〜１０．０　ｍＭ　”ｌ’　ア’ｌ
、好ましくは、０．５〜８、Ｏｍ輩である。[Example Placo (2-1) l-Hydroxy-N-dodecyl-2-na7amide (2-211-hydroxy-w-[-1(2°4-di-
t-amylphenoxyfubutyl]-・2-naphthamide (2-3) l-hydroxy-4-phenoxycarbonylmethoxy-舅-[-1(2゜4-di-t-amylphenoxyfubutyl]-2-naphthamide (2-4) l-Hydroxy-4-(ethoxycarbonylmethoxy)-N-[-1(2゜4-di-t-amylphenoxyfubutyl]-2-su7tolimide (Q-5)l -Hydroxy-N,M-diotadecyl-
2-Naphthamide (2-6) 1-(2,4,6-)lichloro7-enyl)-3-[s-(2,4-di-t-amylphenoxyacetamide)benzomidocor-5-pyrazolone ( 2-7) 1-(2,4,6-) ri
p ro 7 engineering niru)-,5-(2-chloro-5-octadecylsuccinimideanili7-5-pyrazolone(2-8J 1-(2,4,6-)lichlorophenyl)-3-(2-chloro -5-[α-(3-t-butyl-4-hydroxyphenokidinotetradecanamido]anilino)-6-pyrazolone (2-9) 1-(2,4,6-)lichloro7-enyl)-3 -(2-chloro-5-octadecenylsuccinimidoanilinono-5-pyrazolone(2-10) 1-(2,j,6-)lichlorophenyl) -3-(,2-chloro-5- tridecane, midoanilino)-6-pyrazolone (J!!-11)2,4-dichloro-3-methyl-6-
[α-(j!,4-di-t-amylphenoxy]butyramide]phenol (2-12) 2-(α,α,β,β-tetrafluoropropionamide)-4-β-chloropethoxy5- [α-(2,4-di-t-amylphenoxyfubutylamitocophenol (2-13)ji!-chloro-3-methyl-4-ethylcarbamoylmethoxy-6-[α-(8,4-di t-amylphenoxybutylamide]phenol(2-14-2-chloro-3-methyl-1-methoxycarbonylmethoxy-6-[α-(2,4-di-t-a:milphenoxynoptylamide) Cophenol (Q-15) 2-chloro-3-methyl-4-carboxymethoxy-6-[α-2,4-di-t-amylphenoxy)butylamitocophenol (2-16) 2-chloro-3- Methyl-4-(p-carbomethoxyphenyl carbamoylmethoxy)-6-[α-!1,4-di-t-amylphenoxy)butylamitocophenol (2-17) 2-chloro-3-methyl-4-tri Ethoxycarbonylmethoxy-6-[(2,4-di-t-amylphenokidinoethylamide]phenol(2-1872-chloro-3-methyl-4-methoxyethylamide 7carbonylmethoxycarponylmethoxy6-[α-( 2゜4-di-t-alumiphenoxy)butylamitocophenol (2-19)2,4-dichloro-3-methyl-6-[3
-(4-dodecylbenzenesulfonamidonobenzamide)phenol(lazy-20,)2,4-dichloro-5-methyl-6-(
ω-Monohydro-octafluoropentanoylamino)phenol (g-11) g, 4-dibrom-3-methyl-6-(n
-octadecanoylamino)phenol (g-u) 2-(11-octyl-luponylaminof-ichiban-chloro5[(2,4-di-t-amylphenoxy)ethyl aodo]phenol (J!-23) 2-( ω-Monohydro-octafluoropentanoylamino)-4-chloro-5-[α-(2,4-di-t-amylphenoxy”butylamitocophenol (2-24)!!-(ω-Monohydro- octafluoropentanoylamino)-4-chloroa -5-[α-(2,4-di-monoamylphenoxy)acetaminocotzenol (2-25) 2-11-octafluorobutylsulfonylamino-b- [3-(s-n-pentadecanylphenoxy)propylcarbonylaminocophenol (2-26)2-n-octafluorobutylcarbonylamino/-5-(2-n-lauryl-2-hydroxycarbonylethylcarbonylamino ) Phenol (2-27) 2-(n-hebutanylbutylamino)-5-[α-(2,4-di-monoamylphenoxybutylamino) Phenol (2-28) 2-(n -Octafluorobutylcarbonylamino)-5-[α-(2゜4-Dietylphenoxinehexanoylanocophenol (2-29) 2-(n-hexafluoropropylcarbonylamino)- 5-Eα-(2゜4-di-t-alphenoxypentyl-luponylamino]phenol (1!-10,) 2-tetrafluoroethylcarbonylamino-6-[α-2,4-di (2-31) 2-[α-(2,4-di-7-methylphenoxy)propylcarbonylamino-6-methylphenol (2-se) 2- [α-(8,4-Di-7mil7/xy)propylcarbonylaminophenol (,2-33) 2-tetrafluoroethylcarbonylamino-6-methylphenol (2-34), 2-tetrafluoro Ethylcarbonylamino-6-n-pentadecanylphenol (2-35) 2-n-octafluorobutylcarbonylamino-5-[, (2,4-di-t-amylphenoxine methylcarboxylic phenol) (g-36) 2-) Fluoromethyl-6-n-undecanyl-7-enol (2-37) 2-phenyl-di-fluoromethyl-4-
Chloro-6-n-undecanylcargenylaminophenol (2-38) 2-di-4-3-methyl-4-methanesulfonyloxy-6-(hidden-n-dodecanyloxyphenylcarbonylrimino)phenol (2 -39) 2-) Lifluoromethyl-4-methanesulfonyl-6-(!l-undecanylcarbonyl-Iris-methyl-amino)phenol (2-4072-chloro-3-methyl-4-(α -phenyl-α-carboxymethoxyno 6-[α-(2,4
-di-t-butylphenoxy)butylamido]phenol (2-41) 2-chloro-3-methyl-4-n -octadecanyloxycarbonylmethoxy6-phenylcarbonylaminophenol (2-42) α-benzoyl- 2-chloro-5-[
r-(2,4-di-milfenoxinebutylγ-electrode)acetanilide (2-43) α-benzoyl-2-chloro-6=[
α-(dodecyloxycarbonyl) ethoxycarbonyl]acetanilide (2-44) α-[4-(1-benzyl-2-7enyl-3,5-dioxo-1,2°1-triazolidinylnocor α -Beverly Lou 2-ri o 4-5-[r -(214-ji-t-
amylphenoxy)butyramide core heptoanilide (1-415) α-(2,4-dioxo-6,5-
α-pivalyl α-[4-(1-methyl -2-phenyl-3,5-dioxo-1,2,4-)riazolidinyl)]-]2-chloro5-7-(2,4-di-t-alphenoxy]butylamitocoacetanilide (,2 -47) l-Hydroxy-4-(methoxyethylami7carponylmethoxy)-N-[δ-(2,4-di-t-amylphenoxyfubutyl]-2-naphF amide (2-48) 1- Hydroxy-4-(methoxyethylami7carponylmethoxy)-N-(n-hexadecanyl)2-su7tamide(2-4so) 1-Hydroxy-4(hydroxycarbonylethylcarbonylamino-P-phenoxy)-violet -[δ-(2,4-di-t-arlphenoxy]butylco-2-su7tamide The diffusion-resistant coupler in the analytical element of the present invention is 0.1 to 10.0 mM in the coating dispersion. ``l'a'l
, preferably 0.5 to 8 Om.

又、酸化作用を有する物質の使用量は、上記と同様に塗
布分散液ｌｌ中１．０　Ｎｊａ　Ｏ，ＯｍＭ　テアリ１
特に５．０〜１５，０鳳Ｍが好ましい。In addition, the amount of the substance having an oxidizing effect used is 1.0 Nja O, OmM Tearly 1 in 1 l of the coating dispersion, as described above.
Particularly preferred is 5.0 to 15.0 M.

本発明に使用さｎる耐拡散性カプラーは上記のものに限
定されるものではなく、広範囲に選択でき、更に２種以
上を併用することもできる。The diffusion-resistant couplers used in the present invention are not limited to those mentioned above, but can be selected from a wide range, and two or more types can also be used in combination.

本発明の耐拡散性カプラーは一般に油溶性であり、その
添加方法を詳述するならば、１種又は２種以上の本発明
に係る耐拡散性カプラーを必要に応じ、高沸点溶媒及び
／又は低沸点溶媒に溶解し、アニオン系界面活性剤及び
／又はノーオン系界面活性剤を含むゼラチン等の親水性
コロイドヲ含ム水溶液と混合し、高速回転ミキサー、コ
ロイドミルまたは超音波分数装置等で乳化分散（以下オ
イルプロテクト法という〕して用いることができる。The diffusion-resistant coupler of the present invention is generally oil-soluble, and the method for adding the same is as follows: one or more diffusion-resistant couplers of the present invention are added to a high boiling point solvent and/or Dissolved in a low boiling point solvent, mixed with an aqueous solution containing a hydrophilic colloid such as gelatin containing an anionic surfactant and/or non-ionic surfactant, and emulsified and dispersed using a high-speed rotary mixer, colloid mill, ultrasonic fractionator, etc. (hereinafter referred to as oil protection method).

高沸点溶媒としては、例えば有機酸アミド類、カルバメ
ート類、エステル類、ケトン類、尿素鉤導体等、特に、
ジ−ｎ−ブチル７タレート、トリクレジルホスフェート
、トリフェニルホスフェート、ジ−イソオクチルアセテ
ート、ジ−ｎ−ブチルセパケート、トリーｎ−へキシル
ホスフェート、Ｎ、Ｎ−ジ−エチル−カプリルアミドブ
チル、Ｎ、Ｎ−ジエチルラウリルアミド、ニーペンタデ
シルフェニルエーテル、ジ−オクチルフタレート、ｎ−
７ニルフエノール、３−ペンタデシルフェニルエチルエ
ーテル、２，５−ジー友−アミルフェ：−１ｋｌチルエ
ーテル、モノフェニル−ジ−ｏ−クロロフェニルホスフ
ェートあるいは、７ツｌパラフインが挙げらｎる。こｎ
らの中でも、ジアルキル７タレート特に、炭素原子数１
乃至６のアルキル基を有するものが好ましい。Examples of high boiling point solvents include organic acid amides, carbamates, esters, ketones, urea hook conductors, etc.
Di-n-butyl heptatarate, tricresyl phosphate, triphenyl phosphate, di-isooctyl acetate, di-n-butyl sepacate, tri-n-hexyl phosphate, N,N-di-ethyl-caprylamidobutyl, N,N-diethyl laurylamide, neepentadecyl phenyl ether, di-octyl phthalate, n-
Examples include 7-nylphenol, 3-pentadecyl phenylethyl ether, 2,5-di-amyl-1kl thyl ether, monophenyl-di-o-chlorophenyl phosphate, and 7-l paraffin. Kon
Among them, dialkyl 7-talates, especially those having 1 carbon atom,
Those having 6 to 6 alkyl groups are preferred.

低沸点溶媒としては、例えば、酢酸メチル、酢酸エチル
、酢酸プロピル、酢酸ブチル、プロピオン酸ブチル、シ
クロヘキサノール、ジエチレングリコール七ノアセテー
ト、ニトロメタン、ｆｆ１ｍ化伏素、クロロホルム、シ
クロヘキサン、テトラヒドロフラン、メチルアルコール
、アセトニトリル、ジメチルホルム了ミド、ジオキサン
、メチルエチルケトンが挙げられる。Examples of low boiling point solvents include methyl acetate, ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate, butyl propionate, cyclohexanol, diethylene glycol heptanoacetate, nitromethane, ff1m fluoride, chloroform, cyclohexane, tetrahydrofuran, methyl alcohol, acetonitrile, Examples include dimethylformamide, dioxane, and methyl ethyl ketone.

アニオン系界面活性剤としては、例えばアルキルベンゼ
ンスルホン酸およびアルキルナフタレンスルホン酸が、
ノニオン系界面活性剤としては例えば、ソルビタン七ス
キオレイン酸エステルおよびソルビタンモノラウリン酸
エステルが挙げらゎる。Examples of anionic surfactants include alkylbenzenesulfonic acids and alkylnaphthalenesulfonic acids.
Examples of nonionic surfactants include sorbitan heptaschioleate and sorbitan monolaurate.

本発明に係る分析素子は、分析すべき流体試料の成分（
被検出物質）と反応して、色素を生成する試薬として、
前述の耐拡散性プラー、アニリド誘導体又はその塩及び
酸化作用のある物質を含有する。この酸化作用のある物
質の作用により、本発明のアニリド誘導体がら生成した
アニリンｈ導体を酸化する・その結果、生じた酸化体が
本発明に係る耐拡散性カプラーとカップリング反応して
、色素を生成する。The analytical element according to the present invention has a component (
As a reagent that generates a dye by reacting with the target substance (detected substance),
It contains the above-mentioned diffusion-resistant puller, an anilide derivative or its salt, and a substance with an oxidizing effect. Due to the action of this oxidizing substance, the aniline h conductor produced from the anilide derivative of the present invention is oxidized.As a result, the oxidized substance produced undergoes a coupling reaction with the diffusion-resistant coupler of the present invention, and the dye is converted into a dye. generate.

本発明に係る酸化作用のある物質としては、従来知られ
たものを用いることができるが、代表的なものとしては
例えばヨウ素醗アンモニウム、ヨウ素酸カリウム、ヨウ
素酸ナトリウム、メタ過ヨウ素酸ナトリウム、過硫階塩
、チオシアン酸鉄、スズ酸鉄、７エロシアン酸第−鉄、
シリカゲルに吸着させた第二りｐム塩（例えば硫酸り四
ムカリウムノ等が有用である。Conventionally known substances can be used as the oxidizing substance according to the present invention, and typical examples include ammonium iodine, potassium iodate, sodium iodate, sodium metaperiodate, and periodate. Sulfur salt, iron thiocyanate, iron stannate, ferrous 7-erocyanate,
Secondary PM salts (for example, sulfuric acid, etc.) adsorbed on silica gel are useful.

本発明の耐拡散性カプラー、一般式［Ｉ］で示さ１する
アニリド誘導体又はその塩及び酸化作用のある物質から
成る分析素子において、特に耐拡散性カプラーを用いる
ことは、生成される検出可能な色素物質も又、耐拡散性
であることを意味し、一体化された分析素子の各層への
移動を起こさず、又、同一層内での不望の拡散も起こさ
ないことによる検出濃度の信頓性及び正確性を著しく高
める。In an analytical element comprising the diffusion-resistant coupler of the present invention, an anilide derivative represented by general formula [I] or a salt thereof, and a substance with oxidizing action, the use of the diffusion-resistant coupler in particular makes it possible to detect the produced The dye material is also diffusion resistant, meaning that it does not migrate to the layers of the integrated analytical element, nor does it cause undesired diffusion within the same layers, thereby increasing confidence in the detected concentration. Significantly improves quickness and accuracy.

又、本発明の分析素子中に、酸化作用のある物質を共存
含有する際、通常の親水性フェノール及びす７トールで
は、その保存期間中に望ましくない酸化による黄色等の
着色化が起こり正確性な着しく悪化させるが、本発明の
耐拡散性カプラーを用いる場合その保存性は安定してお
り、長期間分析素子の信輻性を維持するのに有効である
。さらに、酸化作用の物質を共存させることにより、検
体中の妨害物質特にアスコルビン酸等の遣元物質に対す
る影響を減少させる効果がある。In addition, when the analytical element of the present invention co-contains a substance with an oxidizing effect, ordinary hydrophilic phenol and 7-thol may undergo coloring such as yellow due to undesirable oxidation during the storage period, resulting in poor accuracy. However, when the diffusion-resistant coupler of the present invention is used, its storage stability is stable, and it is effective in maintaining the reliability of the analytical element for a long period of time. Furthermore, the coexistence of an oxidizing substance has the effect of reducing the influence of interfering substances in the specimen, particularly on source substances such as ascorbic acid.

上記の如く、本発明の分析素子は使用の簡便性、測定値
の正確さ、及び長期保存に耐える優ｎたものであること
が解る。As described above, it is clear that the analytical element of the present invention is easy to use, accurate in measurement values, and durable for long-term storage.

上記各種の試薬は一般に、結合剤として親水性コロイド
を用い、該コロイド中に分散させて用いる。親水性コロ
イドとしては、ゼラチン、蒙処珈ゼラチン、脱イオン化
ゼラチン、アシル化ゼラチン等のゼラチンｍ導体、ポリ
ビニルアルコール等が挙げられる。又、親木性コ田イド
物質中に、合成高分子ラテックスを混合することも可能
である。The various reagents mentioned above generally use a hydrophilic colloid as a binder and are used by being dispersed in the colloid. Examples of the hydrophilic colloid include gelatin conductors such as gelatin, black gelatin, deionized gelatin, and acylated gelatin, and polyvinyl alcohol. It is also possible to mix synthetic polymer latex into the woody cotoid material.

これらのラテックスは総置形分量に対し、約ｌＯ鳴乃至
７０襲を混合することが可能である。These latexes can be mixed in amounts of about 10 to 70 times per total volume.

又、単に親木性コロイドかもなる試薬層だけではなく、
特ｍ昭６６−１５５７８８号紀戟の如き、核殻構成を有
する翼材を用いることも可能であり、酵素の如き蛋白質
の測定には好ましいものである。In addition, it is not just a reagent layer that is a tree-philic colloid.
It is also possible to use a blade material having a core-shell structure, such as the special No. 66-155788 Kigeki, which is preferable for measuring proteins such as enzymes.

本発明の分析素子における支持体としては、液体浸透性
又は吸収性のもの及び液体不浸透性のものか用いられ、
該支持体は光透過性であっても、光非透過性であっても
よい。液体吸収性のものとしては、代表的なものとして
紙が挙げられる。液体吸収性の支持体は、試薬を含浸さ
せることにより所謂、試験片あるいは試験紙とすること
ができるＯ即ち、本発明に係る試薬を例えば水中に分散させた後に
この分散物中に支持体を浸漬して、該試薬を含浸させた
後乾燥して製造できる。このようにして形成された分析
素子は、所望に応じて後述の液体不浸透性支持体上に添
付さｎ、用いることは操作上有利である。The support in the analytical element of the present invention may be liquid-permeable or absorbent, or liquid-impermeable.
The support may be light-transmissive or light-opaque. Paper is a typical example of liquid absorbent materials. A liquid-absorbing support can be made into a so-called test piece or test paper by impregnating it with a reagent. That is, after dispersing the reagent according to the present invention in, for example, water, the support is added to the dispersion. It can be manufactured by immersing it to impregnate it with the reagent and then drying it. It is operationally advantageous to use the analytical element thus formed, if desired, attached on a liquid-impermeable support described below.

支持体として液体不浸透性のものを用いる場合は、一般
に支持体の上に試薬層を設けて分析素子とする。液体不
浸透性支持体としては、金属、ガラス、プラスチックス
等の板状形成体を用いることが可能であるが通常は、プ
ラスチックスが用いらｎる。プラスチックスとしては、
例えば、三酢酸セルロース、ポリエチレンテレフタレー
ト、ポリカーボネート、ポリスチレンのような種々の重
合体材料が挙げられる。支持体の厚さは、任慧に選択で
きるが、代表的には約５０建クロン乃至約ＳＳＯミタ四
ンである。When a liquid-impermeable support is used, a reagent layer is generally provided on the support to form an analytical element. As the liquid-impermeable support, plate-shaped bodies such as metal, glass, and plastics can be used, but plastics are usually used. As for plastics,
Examples include various polymeric materials such as cellulose triacetate, polyethylene terephthalate, polycarbonate, polystyrene. The thickness of the support can be chosen at will, but typically ranges from about 50 mm to about SSO mm.

試薬層は単一の層として、全ての試薬を含有させてもよ
いし、複数層に分割して含有させてもよい。試薬層の膜
厚及びその浸透性の度合は広範囲に可変であり、実際の
使用に依存する。約１０μ乃至Ｗｏｏμの乾燥膜厚が有
用であった。又浸透性の度合の目安として膨腐度で表わ
すと約１５０囁乃至約５００−が有利であり、特に約２
００％乃至約３ｆｉＯ憾が有利である。The reagent layer may contain all the reagents as a single layer, or may be divided into multiple layers and may contain them. The thickness of the reagent layer and its degree of permeability can vary within a wide range and depend on the actual use. Dry film thicknesses of about 10μ to Wooμ have been useful. Also, as a guideline for the degree of permeability, it is advantageous to have a swelling degree of about 150 to about 500, especially about 2
00% to about 3fiO is advantageous.

該支持体と試薬層の間には、該試薬層の接着を改良する
ための種々の処理をすることが可能である。例えば、下
塗り用高分子重合体を補助層として塗布することもその
一つである。Various treatments can be applied between the support and the reagent layer to improve the adhesion of the reagent layer. For example, one example is to apply an undercoat polymer as an auxiliary layer.

本発明の試薬層の上に、必要に応じて反射層、ｒ渦層、
展延層を設けてもよい。展延層は流体試料を展延し横方
向に均一に分布させ、単位Ｉｉｉ檀当り一定容量の流体
試料を試薬層に供給する機能を有する。ｆ渦層は、流体
試料をｆ過し色素生成１反応を妨害する成分を除去する
機能を有する。反射層は生成した色素のバックグラウン
ドとしての分光光層分析を行う際に支持体を通過した光
を反射する機能を有する。これら３つの層を設ける場合
には、支持体側から順に、反射層、ＰＭ層、展延層の順
に設けることが好ましい。又、上記３つの機能のうち２
つの機能をなす孝一層と他の１つの機能を有する別の層
を用いることもできる。３つのｆｈ能を有する単一層を
用いることもできる。On the reagent layer of the present invention, if necessary, a reflective layer, an r-vortex layer,
A spread layer may also be provided. The spreading layer has the function of spreading the fluid sample and uniformly distributing it in the lateral direction, and supplying a constant volume of the fluid sample per unit III to the reagent layer. The vortex layer has the function of filtering the fluid sample and removing components that interfere with the dye-forming reaction. The reflective layer has a function of reflecting light that has passed through the support when performing spectroscopic layer analysis as a background of the produced dye. When these three layers are provided, it is preferable to provide the reflective layer, the PM layer, and the spread layer in this order from the support side. Also, two of the three functions above
It is also possible to use a layer with one function and another layer with one function. A single layer with three fh capabilities can also be used.

展延層としては、例えばケイソー土を酢酸セルロースの
ような結合剤中に分散させた春、天然又は合成の微結晶
コロイド生成物、例えばセルロースからなる層、及び均
一粒径の不活性球形粒子、例えばガラスピーズを含有す
る唐が挙げられる。Spreading layers include, for example, diatomaceous earth dispersed in a binder such as cellulose acetate, layers of natural or synthetic microcrystalline colloidal products, such as cellulose, and inert spherical particles of uniform size. For example, tang containing glass peas can be mentioned.

ｆ過層及び反射層としての機能を有する層としては、例
えば二酸化チタン又は、硫拳バリウムを酢酸セルロース
、ゼラチンの如き結合剤中に分散した階が挙げられる−
０又、上記３つの機能を全て有する層としては、米国特許
゛第３９９２１５ａ号等に開示されている非繊維質多孔
質媒体層と特開昭第５６−ｆｆｉ４５７６号に記載され
ている繊維質多孔質媒体層が挙げられる。Examples of the layer that functions as an overlayer and a reflective layer include a layer in which titanium dioxide or barium sulfate is dispersed in a binder such as cellulose acetate or gelatin.
0 In addition, as a layer having all of the above three functions, there is a non-fibrous porous media layer disclosed in U.S. Pat. Examples include a medium layer.

非繊維質多孔質媒体増の具体例としては、ブラッシュド
ｌリマ一層が知られており、例えばセルロースエステル
を同〆リマーの低沸点の良溶媒と、良溶媒より高沸点の
貧溶媒を適切に組合せた混合−溶媒に溶解し塗布し、相
分離法により多孔性七Ａ１０−ス皮膜を形成することが
できる。又、プラッシュドボリマ一層をＩｋ設する代わ
りに、上記３つの機能を有する微孔性濾過膜の薄層を積
１してもよい。この微孔性ｆ過膜として例えは七ルｐ−
スエステルから作ったプラッシュドボリ！−が挙げらｎ
１市販されている「ミリボア」（商標名文リボア、竜す
ボアコーポレーシ冒ン製）等が用いられる。As a specific example of increasing non-fibrous porous media, brushed limmer is known. For example, cellulose ester is mixed with a good solvent with a low boiling point and a poor solvent with a higher boiling point than the good solvent. A porous 7A10-based film can be formed by dissolving and coating a combined mixed solvent and using a phase separation method. Moreover, instead of providing one layer of plush polymer, thin layers of microporous filtration membranes having the above three functions may be laminated. As an example of this microporous membrane, a seven-layer p-
Plush deboli made from suester! - is listed n
1 Commercially available products such as "Milliboa" (trade name: Riboa, manufactured by Ryusu Boa Corporation) are used.

上記多孔質媒体層空隙率は約２５％以上が好ましく更に
は約５〇−乃至９ａ％が好ましい。又、膜厚は約３０μ
乃至約５００μの間で任意に選ぶことが可能であるが好
ましくは、約６０μ乃至約３００μである。The porosity of the porous medium layer is preferably about 25% or more, and more preferably about 50-9a%. Also, the film thickness is about 30μ
The thickness can be arbitrarily selected between about 500μ and about 60μ to about 300μ, but preferably about 60μ to about 300μ.

一方、特願昭５６−１３２０３号、同５６−６５４４６
号等に記載の繊維質多孔質媒体層も有利に弔いらｎる。On the other hand, Japanese Patent Application No. 56-13203, No. 56-65446
The fibrous porous media layer described in No. 2, etc. is also advantageously used.

ここにＪｉＩＩＩＩｍ質とは、／（９ハ９１７）６１１
、フィラメント又はストランドを意味し、上記のバラバ
ラの繊維が、三次元的にからみあった構造を有するもの
の総称である。それ故、繊維質多孔質媒体における孔と
は繊維の三次元的からみあいによって生起する空隙を意
味する。このような物質の例としては、例えば１紙、天
然又は合成の不織布、合成紙、合成繊維１紙が挙げられ
る。Here, the quality of JiIIIm is /(9ha917)611
, means a filament or strand, and is a general term for a structure in which the above-mentioned separate fibers are intertwined three-dimensionally. Therefore, pores in a fibrous porous medium refer to voids created by three-dimensional entanglement of fibers. Examples of such materials include, for example, paper, natural or synthetic non-woven fabrics, synthetic paper, synthetic paper.

こわら非繊維質又は繊維質多孔質の媒体層中にイオン性
（アニオン性又はカチオン性）又は非イオン性の界面活
性剤を混入することは有効である。It is effective to incorporate ionic (anionic or cationic) or nonionic surfactants into the stiff non-fibrous or fibrous porous media layer.

本発明の分析素子には、所望に応じて更に他の層を組合
わせてもよい。例えば、定置分析反応に好ましくない影
響を及ぼす物質を除去するためのみ析着、及び、水溶性
試薬の展開１ｍへの移行を阻止するためにマイグレーシ
曹ン阻止層はＸＳ層と展開層の間に設けてもよい。透析
層としては、例えば−−４！ロフアン等を用いることが
可能でありマイダレーシロン阻止層としては親水性コワ
イド物質及び四級アンモニウム塩を有する高分子重合体
、例えば、ポリ（ビニルペンジルトリアルキルアンモニ
ラムク四うイド］等の混合物を用いることが可能である
。これらの層又は他の層は必要に応じ前述した各種の層
と種々組合わされるものである。The analytical element of the present invention may be further combined with other layers as desired. For example, in order to remove substances that have an undesirable effect on the stationary analysis reaction, and to prevent the migration of water-soluble reagents to the 1 m deployment layer, a migration carbon blocking layer is placed between the XS layer and the development layer. It may be provided. As a dialysis layer, for example --4! As the maydalesilon blocking layer, a high molecular weight polymer having a hydrophilic cowide substance and a quaternary ammonium salt, such as poly(vinylpenzyltrialkylammonium tetrahydride), etc. can be used. It is possible to use mixtures, these or other layers being combined in various ways with the various layers mentioned above, if desired.

本発明に係る酸化作用のある物質、耐拡散性カプラー及
び一般式で示されるアニリド誘導体又はその塩は、本発
明の分析素子の各層に別々に含有されるか、又一層に含
有されても良く、さらに該分析素子中で接触していても
互いに非接触であっても良い。The oxidizing substance, the diffusion-resistant coupler, and the anilide derivative represented by the general formula or its salt according to the present invention may be contained separately in each layer of the analytical element of the present invention, or may be contained in a single layer. , and may be in contact with each other in the analytical element or may be in non-contact with each other.

本発明の分析素子を用いて、ＬＡＰを検出するにあたっ
ては、分析素子を検体である流体試料中に浸漬するか流
体試料を分析素子上に滴下し、一定時間後に生成した色
素を標準カラーチャート、標準カラースケールと比較す
るか分光光度針を用いて、測定することにより流体試料
中の成分の測定を行うことができる。上記分析素子は主
として定性分析、あるいは牛定量分析の公費において特
に有利である。When detecting LAP using the analytical element of the present invention, the analytical element is immersed in a fluid sample as a specimen, or the fluid sample is dropped onto the analytical element, and the dye produced after a certain period of time is measured using a standard color chart. Determination of components in a fluid sample can be made by measuring them by comparison with a standard color scale or by using a spectrophotometric needle. The analytical element described above is particularly advantageous in public use, primarily for qualitative analysis or quantitative analysis of cattle.

本発明における分析素子に適用される流体試料は生物学
的、非生物学的流体試料であれ、ＬＡＰを含むものであ
れば良く例えば、血清（血漿・血清を含む）が挙げられ
る。又、用いる流体試料の童は、試験片の場合には試薬
を含む吸収性担体に流体試料が十分含浸される量以上で
あれば任意である。−力支持体上に試薬層を設けた分析
要素の場合も任意であるが、好ましくは約ＢＯμ！乃至
６μｌ′であり、更に好ましくは約２０岸！乃至約５μ
！である。通常約１０μノの流体試料を適用することが
好ましい。The fluid sample to be applied to the analytical element of the present invention may be a biological or non-biological fluid sample as long as it contains LAP, such as serum (including plasma and serum). Further, in the case of a test piece, the size of the fluid sample to be used is arbitrary as long as it is at least the amount that allows the absorbent carrier containing the reagent to be sufficiently impregnated with the fluid sample. - An analytical element having a reagent layer on a force support is also optional, but preferably about BOμ! 6 μl to 6 μl′, more preferably about 20 μl! ~about 5μ
! It is. It is usually preferred to apply a fluid sample of about 10 microns.

本発明に係る分析素子は一ムＰ含有の流体試料の測定に
対し、生成した色素が疎水性であるため均一な発色スホ
゛ットか安定に得らｎ１測定値のバラツキが少な−いと
いう長所を有する。The analytical element according to the present invention has the advantage that when measuring a fluid sample containing one molecule of P, a uniform colored shot can be stably obtained because the generated dye is hydrophobic, and there is little variation in the n1 measurement value. .

又、酸化作用のある物質が含有されている為、流体試料
中の還元性物質の影響を受けず正確な測定値が得られる
点でも優れている。Furthermore, since it contains a substance that has an oxidizing effect, it is excellent in that accurate measurement values can be obtained without being affected by reducing substances in the fluid sample.

以下、本発明を更に詳細に説明すべ〈実施例を示すが、
本発明はこｎらにより何ら限定されるものではない。The present invention will be explained in more detail below (Examples will be shown).
The present invention is not limited to these in any way.

実施例−１例示化合物（１−１）、（１−？ン、（１−リ、（１−
１１）、（１−１０）及び（１−ＩＪ！　）　１．３９
　ａＭをそれぞれ０．０５ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ７，
０）に溶解し、基質液とする。Example-1 Exemplified compound (1-1), (1-?n, (1-li, (1-
11), (1-10) and (1-IJ!) 1.39
aM each with 0.05 MIJ acid buffer (pH 7,
0) and use it as a substrate solution.

基質液１１１ｊをとり３７℃恒温槽に約す分間放置する
。次いで血清−１〜ｌｆｆ１清−３０，０２ｄを加えよ
く混合し、３０分間インキエベーションする。Take the substrate solution 111j and leave it in a constant temperature bath at 37° C. for about a minute. Next, serum-1 to lff1 supernatant-30.02d were added, mixed well, and incubated for 30 minutes.

この反応液に０．５Ｍ酢酸緩衝液（ｐｍ　４．１　）　
２．０　ｄを加え混和し、次いでメタクレゾール８７〜
、メタ過ヨウ素酸すＦリウム３２■を水１００ｄに溶解
した呈色液２．０１１ｊを加え、１０分間室温放置後吸
光度を測定する。また上記操作中血清の代わりに水を用
いた以外は同様にしてブランク吸光度を測定する。Add 0.5M acetate buffer (pm 4.1) to this reaction solution.
Add 2.0 d and mix, then add metacresol 87~
, 2.011j of a coloring solution prepared by dissolving 32 ml of Fium metaperiodate in 100 d of water is added, and after standing at room temperature for 10 minutes, the absorbance is measured. In addition, blank absorbance is measured in the same manner except that water is used instead of serum during the above procedure.

このようにして得られた測定値を表−１に示す。The measured values thus obtained are shown in Table-1.

尚血清は血清−１が１３８、血清−２が２５２、血清−
３が３８７のＬＡＰ活性値を示すものを用いた。The serum numbers are 138 for serum-1, 252 for serum-2, and 252 for serum-2.
A sample having a LAP activity value of 387 was used.

表　　−１表−１より本発明の基質は良い相関を示し、ＬＡＰの合
成基質として十分活性であることが解る。Table 1 From Table 1, it can be seen that the substrate of the present invention shows a good correlation and is sufficiently active as a synthetic substrate for LAP.

実施例−２薄い粘着性下塗層を有する透明ポリ（エチレンテレフタ
レートラフイルムを支持体に、耐拡散性カプラー［例示
カプラー（２−４〕）　４．Ｉ　Ｘ　１０モル／ｄゼ、
赤血塩３．１＋１１ｐ／ｌピ及びゼラチン２１５■／ａ
−を含有する試薬層を塗設後、乾燥し、本発明に係る試
薬層を作成した。Example-2 Transparent poly(ethylene terephthalate trifilm as support) having a thin adhesive undercoat layer, diffusion-resistant coupler [Exemplary coupler (2-4)] 4.I x 10 mol/dze,
Red blood salt 3.1 + 11 p/l pi and gelatin 215 ■/a
After applying the reagent layer containing -, it was dried to create a reagent layer according to the present invention.

次いで繊維分散液（特願昭ｌ５６−６５４４６紀載）４
ｚｙｄに本発明のアニリド誘導体［例示化合一（１−４
）、（１−’Ｆ）、（１−８）、（１−９）、（１−ｗ
）及び（１−ｕノコ７．２Ｘ１０％ルを含有する展開層
をそれぞｎ設け、本発明に係るＬＡＰ活性測定用分析素
子の試料１〜６ｆｔ作成した。Next, fiber dispersion (patent application published in 1986-65446) 4
zyd to the anilide derivative of the present invention [Example Compound 1 (1-4
), (1-'F), (1-8), (1-9), (1-w
) and (1-U 7.2 x 10%) were each provided to prepare 1 to 6 ft samples of the analytical element for measuring LAP activity according to the present invention.

又、比較として例示化合物（１−１）のかわりｋＳＬ−
ロイシル−４−Ｎ、Ｍ−ジメチルアミノアニリド（特公
昭５４−３２３５９号記載の化合物）を含有する以外は
、試料−１と同様にして比較試料−１を作成した。Also, for comparison, kSL-
Comparative Sample-1 was prepared in the same manner as Sample-1 except that it contained leucyl-4-N,M-dimethylaminoanilide (a compound described in Japanese Patent Publication No. 54-32359).

さらに、例示カプラー（ＩＡ−４ｅ）のかわりに、フェ
ノールを含有する以外は試料−６と同様にして比較試料
−２を作成した。Furthermore, Comparative Sample-2 was prepared in the same manner as Sample-6 except that phenol was contained instead of the exemplary coupler (IA-4e).

又、比較試料−１の例示カプラー（ｊ！　−４７７のか
わりに、フェノールを含有する以外は比較試料−１と同
様にして比較試料−３を作成した。Further, Comparative Sample-3 was prepared in the same manner as Comparative Sample-1 except that phenol was contained instead of the exemplary coupler (j!-477) of Comparative Sample-1.

なお、耐拡散性カプラーの分散は次の如くして行った。The diffusion-resistant coupler was dispersed as follows.

例示カプラー（２−４’ｌ）を酢酸エチル及びジブチル
フタレートに溶解後アルカノールＩＯ（商品名、デュポ
ン社製）水溶液及びゼラチン水溶液を加え分散した。The exemplary coupler (2-4'l) was dissolved in ethyl acetate and dibutyl phthalate, and then an aqueous solution of Alkanol IO (trade name, manufactured by DuPont) and an aqueous gelatin solution were added and dispersed.

又、繊維分散液はキシレン、水、ポリ（スチレン−コー
グリシジル−メタアクリレ−））（重量比９０　／　１
０　）　、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール
、繊維（ＯＫフロック、山場国策パルプ製）を分散した
ものを用いて作成した。In addition, the fiber dispersion liquid consists of xylene, water, poly(styrene-co-glycidyl-methacrylate)) (weight ratio 90/1
0), octylphenoxypolyethoxyethanol, and fibers (OK Flock, manufactured by Yamaba Kokusaku Pulp) were dispersed therein.

こｎらの試料に実施例−１で用いた血清−１、血清−２
、血清−３を１０．ａ１滴下し、７分間３７℃でインキ
ュベート後、サクラデンシトメーターＰＤＡ−６５（小
西六写真工業■製）を用い、発色スポットの中心部の反
射濃度を測定した。結果を表−２に示す。Serum-1 and serum-2 used in Example-1 for these samples
, serum-3 at 10. After dropping a1, and incubating at 37° C. for 7 minutes, the reflection density at the center of the colored spot was measured using a Sakura densitometer PDA-65 (manufactured by Konishiroku Photo Industry ■). The results are shown in Table-2.

さらに、上記試料及び比較試料に血清−３を１０μ！滴
下後、３７℃１０分間加温し、その発色部をサクラマイ
クロデンシＦメーター（少西六写貞工業製ンを用い測定
した。結果を表−３に示す。Furthermore, 10μ of serum-3 was added to the above sample and comparative sample! After dropping, the mixture was heated at 37° C. for 10 minutes, and the colored area was measured using a Sakura Microdensity F meter (manufactured by Shozai Rokushasei Kogyo Co., Ltd.). The results are shown in Table 3.

表　　−２表　　−３その結果、表−２に示す如く、比較試料は活性値にはと
んど比例しないにもかかわらず、本発明の試料は全て活
性値に正比例した発色濃度を示し、良好な定置性を示し
ていることが解る。Table 2 Table 3 As a result, as shown in Table 2, although the comparison samples were not directly proportional to the activity value, all of the samples of the present invention showed color density that was directly proportional to the activity value, which was good. It can be seen that this shows a good emplacement property.

さらに表−３の如く、本発明の試料における発色部の濃
度均一性は優ｎ１耐拡散性カプラーより生成した色素も
又、耐拡散性を示すことが解り優ｎたちのである。一方
比較試料は、発色濃度も着しく低く、かつ発色部の濃度
のかたより現象が著しく分析紫子５に適用した場合、定
量性が着しく劣ることが解る。Furthermore, as shown in Table 3, the density uniformity of the colored areas in the samples of the present invention was confirmed by the fact that the dyes produced from the diffusion-resistant couplers also exhibited diffusion resistance. On the other hand, in the comparative sample, the coloring density is rather low, and the phenomenon of unevenness of the density of the colored part is remarkable, and when applied to Analytical Shiko 5, it can be seen that the quantitative performance is rather poor.

実施例−５実施例−息における例示カプラー（２−４’Ｆ）を例示
カプラー（怠−６）、（２−７）、（２−１１）　、　
　（怠　−１１）　、　　（Ｑ−１９）、、　　（ｇ−
ｕ）　　、（ｆｆｉ−４ｍ）、（Ｊ！！−４４）、（ｇ
−ｇａ）及び（２−４８）に変えた以外は実施例−２の
試料−１と同様にして試料フル試料１６を作成し、実施
例−２と同様の操作を行った。Example-5 Example-Exemplary coupler (2-4'F) in Breath Example coupler (Last-6), (2-7), (2-11),
(laziness -11), (Q-19),, (g-
u) , (ffi-4m), (J!!-44), (g
-ga) and (2-48), a full sample 16 was prepared in the same manner as Sample-1 of Example-2, and the same operations as in Example-2 were performed.

その結果、実施例−２と同様に、活性値と発色濃度は良
く相関すると共に、定量性を著しくそこなうような濃度
のかたより現象も見られなかった。As a result, as in Example 2, the activity value and the color density were well correlated, and no phenomenon of density shift that would significantly impair quantitative performance was observed.

実施例−４薄い粘着性下塗層を有する透明ＭＩＤ（エチレンテレフ
タレー））フィルム上に特願昭５６−’１５５７８８号
記載の核殻構造を有する重合体粒子である平均粒径約３
ミクロンのゼラチン／コｌす（スチレン：メタアクリル
酸グリシジル＝ｅｅｒｒｓ重蓋比）［重量比１２／ａａ
　］　ｏ、ｓ５９／ａｄ及びｐ−ノニルフェノキシポリ
エチレンオキシド０．０１５１７　ｔｉと実施例−２と
同様にして例示カプラー（２−２８）　２．２１７／ゼ
、赤血塩６．９１１／ゼ、例示化合一（１−７）　８．
７×１０モルから成る試薬層を設け、次いで実施例−２
の繊維分散液のみの層を設け、試料１７を作成した。Example 4 Polymer particles having a core-shell structure as described in Japanese Patent Application No. 155788/1988 were deposited on a transparent MID (ethylene terephthalate) film having an average particle size of about 3 with a thin adhesive undercoat layer.
Micron gelatin/collus (styrene: glycidyl methacrylate = eerrs heavy lid ratio) [weight ratio 12/aa
]o, s59/ad and p-nonylphenoxypolyethylene oxide 0.01517ti and Exemplified coupler (2-28) 2.217/ze, red blood salt 6.911/ze, exemplified compound in the same manner as in Example-2 One (1-7) 8.
A reagent layer consisting of 7 x 10 moles was provided, and then Example-2
Sample 17 was prepared by providing a layer containing only the fiber dispersion liquid.

試料１７における例示化合物（１−））をそれぞれ例示
化合物（１−９）、（１−ＩＪ）に変えた以外は試料１
７と同様にして試料１８．１９を作成した。Sample 1 except that the exemplified compound (1-)) in sample 17 was changed to exemplified compounds (1-9) and (1-IJ), respectively.
Samples 18 and 19 were prepared in the same manner as in Example 7.

試料１７〜１９について実施例−２と同様な操作を行っ
た結果、発色反射浸度とＬＡＰ活性値に比例関係がある
ことが解った。As a result of carrying out the same operation as in Example 2 for Samples 17 to 19, it was found that there was a proportional relationship between the degree of color development reflection and the LAP activity value.

代理人　　桑　原　義　美手続補正書昭和Ｈ集７　ＩＩ　ｌ　＋−＋昭和ｓ７年特許願第　１４Ｓｉｌｌｌ　　４ｊ２　発明
の名称ＬＡＰＩＩ定用分析素子３　補止をする者事件との関係　特許出願人住　所　　東京都新宿区西新宿１丁目２６番２４ノ名　
称　（＋２７）小西六写真工業株式会判代々取締役用本
信彦の欄７、　補正の内容（１）　　明細書第１頁特許請求のｌｌ５４１−別紙のように補正します。Agent Yoshi Kuwahara Beautiful procedural amendment Showa H collection 7 II l +-+ 1939 patent application No. 14Sill 4j2 Title of invention LAPII regular analytical element 3 Relationship with the supplementary case Patent applicant address Tokyo 1-26-24 Nishi-Shinjuku, Shinjuku-ku, Tokyo
Name (+27) Column 7 of Nobuhiko Konishi Roku Photo Industry Co., Ltd.'s successive directors, Contents of the amendment (1) The amendment is made as shown in the appendix No. 1541 of patent claim on page 1 of the specification.

伐）同第４頁嬉Ｗ行回「アルキルスルホンアイド基」とあるな「アルカンスル
ホンアミド基」と訂正し、口）　同第４頁第１１行目「表わす。」とあるな「表わす、またＬ−ロイシリル基は一般的にと訂正し、（４）同第５頁第４行■ 「アル中ルスル本ｙア電ｒ基」とあるを「アルカンスル
ホンアミド基」と訂正し、φ）　同第・頁第市行目「テトラ１ドロ」□と島１を「テトラにド譚」と訂正し、（６）　　同ｇｓａ第８行目「フ０００ｍＭＪとあるを「７００１１ＭＪと訂正し、（イ）同第１２貫第１５行目「アルｉｙｘツキＶ」とあるな「ア擢ルフ鼻ノ中シ」と訂正し１（８）同第５頁第２行目「α−２，４−ジ」とあるな「α−（２，４−ジ」と訂正し、 ―）　同第恥頁厘・行ｌｒ血清」とあるな「血液」と訂正し、００）　　Ｍ　ｇ　３１１［［１７行目「吸光度な＠定
する」とあるなｒ１１光度をそれぞれの吸収極大波長にて一定する」と
訂正し、（１１）同第３１頁＠２Ｄ行目「測定値を表−ＩＫ示す。」とあるな「測定値を、上記例示化合一にそれぞれ対応する４、Ｎ
、Ｎ−ジエチルアンノー雪−メチルア凰リン、４−（Ｎ
−エチル−）ｆ−／−メタンスルホンアミドエチル）ア
イノー意−メチルアニリン、４−（Ｎ−エチル−Ｎ−メ
トキシエチル）アミノ−２−メチルアニリン、４−（Ｎ
−エチル−Ｎ−Ｃ２−Ｃ２−メトキシエチルＶ）エチル
〕）アンノー２−メチルアニリン、４−Ｎ、Ｎ−ジエチ
ルアンノー３−メチルアニリン、および４−Ｎ、Ｎ−ジ
エチルアミノ−２−７−メタンスルホ／アミドエチルア
ニリンを使用して常法て従ってあらかじめ作成した検量
線と対比して、ＬＡＩｉ性値を算出した結果を！１−Ｉ
Ｋ示す。」０２）同ｊ１３２ｊ［ｊｌｌｌ　〜２ｆｆｌ
「血清−１が１３８、血清−意が２５２、血清−３が３
８７」とあるな「血清−１が１３８ＩＶ／’Ｌ、血清−２が２５２１Ｖ
’Ｌ。Page 4, line 11 of the same page, line 11, "express." L-leucylyl group is corrected to be general. (4) Page 5, line 4 of the same document: Corrected "alkanesulfonamido group" to "alkanesulfonamide group," φ) Same page, line 4.・Corrected "Tetra 1 doro" □ and Island 1 in the first line of the page to "Tetra ni dotan" (6) Corrected "F000mMJ" in the eighth line of the same gsa to "70011MJ" (a) In the 12th Kan, line 15, it says "Aru iyx Tsuki V", which is corrected to "A 擢LF なの中し" (8) In the 2nd line of the 5th page of the same, "α-2,4-ji" The sentence is corrected as ``α-(2,4-di'', -) The same sentence is corrected as ``blood,'' and the sentence is corrected as ``blood.'' 00) M g 311 [[Line 17 (11) Page 31 of the same page @ line 2D says, "The measured values are shown in Table-IK." 4 and N corresponding to the above-mentioned exemplified compounds, respectively.
, N-diethylannourin-methylanorin, 4-(N
-ethyl-)f-/-methanesulfonamidoethyl)aino-methylaniline, 4-(N-ethyl-N-methoxyethyl)amino-2-methylaniline, 4-(N
-ethyl-N-C2-C2-methoxyethyl V) ethyl]) annor-2-methylaniline, 4-N,N-diethylamino-2-7-methanesulfonate, and 4-N,N-diethylamino-2-7-methanesulfonate. /Amidoethylaniline was used to calculate the LAIi property value by comparing it with a standard curve prepared in advance according to the usual method! 1-I
Show K. ”02) Same j132j [jllll ~2ffl
“Serum-1 is 138, serum-1 is 252, serum-3 is 3
87" says, "Serum-1 is 138 IV/'L, serum-2 is 2521 V.
'L.

血清−３が３８γＩｖ７ｔＪと訂正し、０３）同第３３
頁嬉４行目「ｔｚ＊ｉｃ本ｌＩ明の」とあるなｒ４１ｔＪＫ）リス（ヒドロキシメチル）アイツメタン
Ｏ，Ｓｆ、塩酸トリス（ヒドロキシメチル）アンノメタ
Ｖ　１．Ｇ　ｔ　１塩化マダネシウム０．１）および本
発明の」と訂正し、ａ４）同第３４１［第５行目「中７レン、水、ポリ」とあるな「中７レン、ポリ」と訂正し、（Ｕり同嬉扁頁１表−２中例示化合物（１１）、（１−３）（１−９）
、（１−１り、（１−１７）Ｊとあるなｒ（１−７）、（１−８）、（１−１）、（１−１０）
　、（１−１２）Ｊと訂正し、（１６）同Ｎ３ｓ頁比較試料２の欄に例示化金物（１−１２）を追加します
。Serum-3 was corrected to 38γIv7tJ, 03) Same No. 33
Page 4 line 4 says ``tz*ic book lI Akino'' r41tJK) Lis(hydroxymethyl) methane O, Sf, Tris(hydroxymethyl) hydrochloride amnometa V 1. G t 1 madanesium chloride 0.1) and of the present invention", a4) No. 341 of the same [Line 5, "Medium 7 ren, water, poly" was corrected to read "Medium 7 ren, poly" , (Exemplified compounds (11), (1-3) (1-9) in Table-2, page 1
, (1-1ri, (1-17)J) (1-7), (1-8), (1-1), (1-10)
, (1-12) will be corrected as J, and (16) Illustrated hardware (1-12) will be added to the comparative sample 2 column on page N3s.

（１７）同第羽貫第６行目「次いで実施例−２の繊維分散液のみの層」とあるな「次いで繊維分散液４２ａｇ中にトリス（ヒドロキシメ
チル）アミツメタン１．０ｔおよび塩化マグネシクム０
．１）を含有する展開層」と訂正特許請求の範囲支持体上に少なくとも１層の試薬層及び少なくとも１層
の展開層を有する分針素子において、該層の少なくとも
１層に酸化作用のある物質１耐拡散性カプラー及び下記
一般式で示されるア＝９ド霞導体又はその塩を含有する
ことを特徴とするＬムＰ測定用分析素子・一般式(17) The 6th line of the same Hanuki says, "Next, a layer containing only the fiber dispersion of Example-2".
．． Amended Claim: A minute hand element having at least one reagent layer and at least one spreading layer on a support, wherein at least one of the layers contains a substance 1 having an oxidizing effect. Analytical element for LmP measurement characterized by containing a diffusion-resistant coupler and an a = 9 dosing haze conductor represented by the following general formula or a salt thereof: General formula

Claims

[Scope of Claims] At least one reagent layer and at least 11 layers on a support.
In an analytical element having a spreading layer of No. 911, the layer contains at least a substance capable of forming Il, a diffusion-resistant coupler, and an anilide derivative represented by the following general formula or a salt thereof. Analytical element for measurement. General formula (wherein RI and R3 each represent a hydrogen atom or an alkyl group, R8 and R1 may form a heterocycle together with a nitrogen atom, R4'l R@ and Ro each represent hydrogen Represents an atom, a halogen atom, a hydroxyl group, an alkoxy group, an arylsulfonamide group, an arylsulfonamide group, an alkylsulfonamide★ or an alkyl cage◇)