JPS58135459A - エンドトキシンの定量法 - Google Patents
エンドトキシンの定量法Info
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- JPS58135459A JPS58135459A JP1721382A JP1721382A JPS58135459A JP S58135459 A JPS58135459 A JP S58135459A JP 1721382 A JP1721382 A JP 1721382A JP 1721382 A JP1721382 A JP 1721382A JP S58135459 A JPS58135459 A JP S58135459A
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- JP
- Japan
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- endotoxin
- chassis
- solution
- concentration
- red blood
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/579—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving limulus lysate
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はいわゆる発熱性物質の代表的物質であるエンド
トキシンの簡易定犀法呻関、するものである。
トキシンの簡易定犀法呻関、するものである。
エンドトキシンの定量に関しては、カブトガニの血球抽
出成分（ライモート）とエンドトキシンの反応によるゲ
ル形成に伴う濁度の増加を光度針で測定する比濁法５２
合成基質を用いてエンドトキシンの酵素活性を測定する
合成基質法などがあり、簡易定量法にはゲル化肉眼判定
法トシテ知られている試験管法とスライドグラス法があ
る。
出成分（ライモート）とエンドトキシンの反応によるゲ
ル形成に伴う濁度の増加を光度針で測定する比濁法５２
合成基質を用いてエンドトキシンの酵素活性を測定する
合成基質法などがあり、簡易定量法にはゲル化肉眼判定
法トシテ知られている試験管法とスライドグラス法があ
る。
試験管法は通常試験管内でエンドトキシン溶液０．１〜
０．２−とライセード液０．１〜ＯＪ−を反応させて、
８７℃で１時間静置した後、試験管を４５”Ｃもしくは
１８０℃傾斜、倒立させてゲルの固さを判定し、ゲル形
成の最大希釈倍数とライ七−Ｆの感度から、検体のエン
ドトキシン濃度を算出する方法であり、スライドグラス
法（後藤、渡辺、中村：医学のあゆみＬＱＪ（１０）７
５９昭和５２年）は、エンドトキシン溶液０、ＯＬｇＬ
ｔとライセード液Ｑ、Ｑｇｓｔをシリコン処理スライド
グラス上で反応させ、これを水蒸気で飽和させた箱に収
めて８？°Ｃで８０分間静置して、ゲル化を肉眼的に判
定し、試験管法と同一方法でエンドトキシン濃度を算出
する方法である。
０．２−とライセード液０．１〜ＯＪ−を反応させて、
８７℃で１時間静置した後、試験管を４５”Ｃもしくは
１８０℃傾斜、倒立させてゲルの固さを判定し、ゲル形
成の最大希釈倍数とライ七−Ｆの感度から、検体のエン
ドトキシン濃度を算出する方法であり、スライドグラス
法（後藤、渡辺、中村：医学のあゆみＬＱＪ（１０）７
５９昭和５２年）は、エンドトキシン溶液０、ＯＬｇＬ
ｔとライセード液Ｑ、Ｑｇｓｔをシリコン処理スライド
グラス上で反応させ、これを水蒸気で飽和させた箱に収
めて８？°Ｃで８０分間静置して、ゲル化を肉眼的に判
定し、試験管法と同一方法でエンドトキシン濃度を算出
する方法である。
スライドグラス法は検出感度が試験管法に劣らず、かつ
、ライセードの量が試験管法の＾で測定できる長所を有
しているが、一般には市販されていないシリコン処理ス
ライドグラスを使用しなければならないこと、水蒸気を
飽和さゼた箱に収めて反応液の蒸発を防がなくてはなら
ないなどの点で不便であり、余り実用されていない。
、ライセードの量が試験管法の＾で測定できる長所を有
しているが、一般には市販されていないシリコン処理ス
ライドグラスを使用しなければならないこと、水蒸気を
飽和さゼた箱に収めて反応液の蒸発を防がなくてはなら
ないなどの点で不便であり、余り実用されていない。
本発明者は少量のライセードで感度がよく。
かつ簡便にエンドトキシン濃度を測定できる簡易定量法
を開発した。
を開発した。
すなわち１本発明は、カブトガニの血球抽出成分とエン
ドトキシンを含む溶液をプラスチック製シャーレ内で反
応させ、ゲル形成によりエンドトキシンを定量する方法
である。
ドトキシンを含む溶液をプラスチック製シャーレ内で反
応させ、ゲル形成によりエンドトキシンを定量する方法
である。
本発明により定量を行なうには、まずエンドトキシンを
エンドトキシン７す〜の生理食塩水または蒸留水に溶解
し９表１に示したような希釈系列の標準溶液を調製する
。この標準溶液または検液０．０２−をプラスチック製
シャーレ内に滴下した後、ライセード０．０２−を滴下
して両者を接触反応させる。ンヤーレはふたをした後、
ふたがずれない様にセロハンテープ等で固定して８７°
Ｃの恒温器に入れる。５分間隔でシャーレを指で軽くは
じいて、液面の振動状態を肉眼的に観察し１反応液がゲ
ル化するまでの時間を測定する。エンドトキシン濃度と
ゲル化時間は比例関係を示すので、これに基づいて検液
中のエンド）キシン量を求めることができる。
エンドトキシン７す〜の生理食塩水または蒸留水に溶解
し９表１に示したような希釈系列の標準溶液を調製する
。この標準溶液または検液０．０２−をプラスチック製
シャーレ内に滴下した後、ライセード０．０２−を滴下
して両者を接触反応させる。ンヤーレはふたをした後、
ふたがずれない様にセロハンテープ等で固定して８７°
Ｃの恒温器に入れる。５分間隔でシャーレを指で軽くは
じいて、液面の振動状態を肉眼的に観察し１反応液がゲ
ル化するまでの時間を測定する。エンドトキシン濃度と
ゲル化時間は比例関係を示すので、これに基づいて検液
中のエンド）キシン量を求めることができる。
ライセード及びエンドトキシンは数社から市販されてお
り、これらを用いることができる。
り、これらを用いることができる。
エンドポイント（ゲル化限界濃度）一定のライセードと
エンドトキシンを用いて、同一実験系で測定を行なう限
り、ゲル化時間は一定なので測定の都度標準溶液のゲル
化時間を測定する必要はない。
エンドトキシンを用いて、同一実験系で測定を行なう限
り、ゲル化時間は一定なので測定の都度標準溶液のゲル
化時間を測定する必要はない。
プラスチック製シャーレとしては、ライセードおよびエ
ンドトキシン溶液を滴下したとき。
ンドトキシン溶液を滴下したとき。
なるべく盛り上った半球状になるものが適しており、ふ
たは観察に便利なように、透明度の高いものが好ましい
。材質としてはポリスチレン。
たは観察に便利なように、透明度の高いものが好ましい
。材質としてはポリスチレン。
ポリプロピレン、メタクリル樹脂等のプラスチックがあ
り、市販のものを入手使用することができる。なお、大
きさは直径９ＣＩ！程度のものが取扱いに便利である。
り、市販のものを入手使用することができる。なお、大
きさは直径９ＣＩ！程度のものが取扱いに便利である。
この方法によれば医薬品ｌＩ造耐用水中パイロジエン濃
度を試験管法の古量のライセードを用いて簡便に定量す
ることができるが、レービンらによるクロロホルム法や
加熱希釈法などの適当な前処理を行なうことにより、血
液中や尿中のエンドトキシンの定量にも応用が可能であ
る。
度を試験管法の古量のライセードを用いて簡便に定量す
ることができるが、レービンらによるクロロホルム法や
加熱希釈法などの適当な前処理を行なうことにより、血
液中や尿中のエンドトキシンの定量にも応用が可能であ
る。
実施例
実験室精製水中のエンドトキシン濃度を２本発明法と合
成基質沫で測定して比較した。エンドトキシンの溶解希
釈には局方生理食塩液を用い２表１に示した希釈系列の
標準液とゲル化時間の関係を示す表から得られた精製水
中のエンドトキシン濃度は１表２の如くであった。
成基質沫で測定して比較した。エンドトキシンの溶解希
釈には局方生理食塩液を用い２表１に示した希釈系列の
標準液とゲル化時間の関係を示す表から得られた精製水
中のエンドトキシン濃度は１表２の如くであった。
Claims (1)
- カブトガニのｍ球ｍ出成分とエンドトキシンを含む溶液
をプラスチ、り製シャーレ内で反応させ、ゲル形成によ
りエンドトキシンを検出することを特徴とするエンドト
キシンの定量法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1721382A JPS58135459A (ja) | 1982-02-05 | 1982-02-05 | エンドトキシンの定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1721382A JPS58135459A (ja) | 1982-02-05 | 1982-02-05 | エンドトキシンの定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58135459A true JPS58135459A (ja) | 1983-08-12 |
| JPH0161184B2 JPH0161184B2 (ja) | 1989-12-27 |
Family
ID=11937661
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1721382A Granted JPS58135459A (ja) | 1982-02-05 | 1982-02-05 | エンドトキシンの定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58135459A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0173021A2 (en) * | 1984-06-27 | 1986-03-05 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for measuring endotoxin |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52104292A (en) * | 1976-02-25 | 1977-09-01 | Puribenteibu Shisuteimuzu Inc | Test tube method for detection of endotoxin in biological fluids |
-
1982
- 1982-02-05 JP JP1721382A patent/JPS58135459A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS52104292A (en) * | 1976-02-25 | 1977-09-01 | Puribenteibu Shisuteimuzu Inc | Test tube method for detection of endotoxin in biological fluids |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0173021A2 (en) * | 1984-06-27 | 1986-03-05 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for measuring endotoxin |
| EP0347951A2 (en) * | 1984-06-27 | 1989-12-27 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Apparatus for measuring endotoxin |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0161184B2 (ja) | 1989-12-27 |
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