JPH11514998A

JPH11514998A - Treatment of Helicobacter pylori infection

Info

Publication number: JPH11514998A
Application number: JP9514812A
Authority: JP
Inventors: ボウホ
Original assignee: コーテックスインターナショナルリミテッド
Priority date: 1995-10-09
Filing date: 1996-10-08
Publication date: 1999-12-21
Also published as: MX9802809A; AU7141096A; EP0862458A1; NO981594L; KR19990064104A; CN1201395A; WO1997013527A1; NO981594D0; BR9611033A

Abstract

(57)【要約】本発明は、エッチ．ピロリを処置する新規な治療、およびこのような方法で使用される製剤学的処方を提供するものである。 (57) [Summary] The present invention relates to an etch. It provides novel therapies for treating H. pylori and pharmaceutical formulations used in such methods.

Description

【発明の詳細な説明】ヘリコバクターピロリ感染の処置本発明は、エッチ．ピロリ（Ｈ．pylori）の処置方法、このような方法における使用のための製剤学的処方、エッチ．ピロリの培養球菌様型を生存可能にする方法、および球菌様型かららせん型への転換を誘導する方法に関する。エッチ．ピロリは、慢性活動性胃炎や消化性潰瘍疾病に強く関係しているグラム陰性細菌である（Ｍarshall et al,Ｍedical Ｊournal of Ａustralia，142:4 39-444(1985); Ｂuck，Ｇ.Ｅ.，Ｊournal of clinical Ｍicrobiology,3:1-12(1 990)）。インビトロ培養において、エッチ．ピロリは、二つの別個の形態、すなわち培養可能ならせん型と培養できない球菌様型で存在する（Ｍarshall et al, Ｍicrobios letters，25:83-88(1984); Ｋung，Ｊ.Ｓ.Ｌ.，and ＨＯ，Ｂ.，Ｗo rkshop on Ｇastroduodenal Ｐathology and Ｃampylobacter pylori(abstract Ｐ9)，edited by Ｆ．Ｍegraud and Ｈ．Ｌamouliatte，Ｂordeaux，Ｆrance(19 88)）。細菌のらせん型は、空気にさらされると、約２時間を越えて生存しない。好ましくない条件のもとで、らせん型は球菌様型へ分化する（Ｖijayakumari and Ｈo，Ａcta Ｇastro-enterologica Ｂelgica，56:101 (1993)）。今日まで、球菌様型のらせん型へのインビトロでの転換に関する成功はただ一例報告されているだけであり、その実験では再現できないことが証明されている（Ｍai et al，Ｇastroduodenal Ｐathology and Ｃampylobacter pylori，pp28 -33，edited by Ｆ．Ｍegraud and Ｈ．Ｌamo uliatte，Ｅlsevier Ｓcience Ｐublishers(1989)）。球菌様型の形成はインビトロで抗生物質または栄養素の欠乏（Ｎilius et al，Ｚbl．Ｂakt．280:259-27 2(1993)）によって誘導できるが、球菌様型の研究は、この型及びエッチ．ピロリのライフサイクルにおける役割に関する情報やこの型の培養株を得る方法が欠けているため、妨げられていた。今日まで、エッチ．ピロリ球菌様型は「死んだもの」、細菌のライフサイクルにおける役割が不明である生存できない形態と事実上みなされている。現在、球菌様型は生存可能であり、らせん型への転換を誘導できると考えられる。転換を誘導する可能性は、ウレアーゼの投与に関する。ＷＯ９５／２２９８７は、エッチ．ピロリ感染の治療用ウレアーゼをベースとしたワクチンの使用を開示する。しかしながら、ここには、球菌様型かららせん型への転換に働くウレアーゼに基づく一般的化学的な非免疫学的方法は開示されていない。微生物のらせん型は、抗生物質を使用して処置できるため、これらの結果がエッチ．ピロリ感染のより効果的な治療の可能性を与え、胃潰瘍におけるエッチ．ピロリの再出現はそれ自体有意に減少するであろう。このように、第一の概念において、本発明は、エッチ．ピロリの球菌様型かららせん型への転換を誘導できる作用物質を哺乳類へ投与することからなる、哺乳類におけるエッチ．ピロリ感染の治療方法を提供するものである。好ましくは、この作用物質は、ワクチンではなく、即ち、いかなる免疫反応を引き出すために投与されるものではない。一般的に、この作用物質の投与は、１以上の抗生物質の投与を伴う治療法の一部となる。このように、本発明におけるこの概念の一つの実施態様において、この方法は更に少なくとも１つの抗生物質の有効量を哺乳類へ投与する段階を含む。１以上の抗生物質の投与は、この作用物質の投与後に行われることが好ましい。これは、抗生物質の投与前にらせん型へ転換する球菌様型を考慮したものである。もちろん、抗生物質は、らせん型を球菌様型へ戻すよう誘導することが知られている。それゆえ多くの場合、数サイクルの作用物質／抗生物質投与は、エッチ．ピロリの効果的な根絶を保証するために要求される。それゆえ第２の概念において、本発明は、少なくとも２つの治療サイクルを含み、各治療サイクルが、（ｉ）エッチ．ピロリの球菌様型かららせん型への転換を誘導できる作用物質を哺乳類へ投与すること、（ｉｉ）少なくとも１種の抗生物の有効量を哺乳類に投与すること、である哺乳類におけるエッチ．ピロリ感染の治療方法を提供するものである。各治療後に、だんだん少なくなる量のエッチ．ピロリが残る。この治療の終了点は商業的に入手可能なエッチ．ピロリ用診断テストの使用により決定できる。本発明におけるこれらの概念の好ましい態様において、投与された作用物質は一定量のウレアーゼで十分にエッチ．ピロリの球菌様型かららせん型への転換を誘導する。本発明の文脈において、ウレアーゼは全ての形態のウレアーゼを含み、細菌性（例えば、エッチ．ピロリまたはプロテウスミラビチスウレアーゼ (Ｐrotieus mirabitis urease)および非細菌性（例えば、ジャックビーンズウレアーゼ（Ｊackbean urease））、およびウレアーゼ酵素の１以上の別個のサブユニット、またはこのようなサブユニットから生じたペプチドを含むのものとする。ある実施態様において、ウレアーゼサブユニットＣおよびＤのみが投与される。投与された作用物質がウレアーゼである場合、この方法は、哺乳類への尿素の投与を含む。この尿素は、共に投与されても別個に投与されてもよい。エッチ．ピロリ体のライフサイクルを有する本来のものが与えられたとき、らせん型の球菌様型への転換を阻害する方法は、普通のエッチ．ピロリ治療の有効性を増加する点で有効であると考えられる。それゆえ、第３の概念において、本発明は、エッチ．ピロリのらせん型から球菌様型への転換を阻害できる作用物質を哺乳類へ投与することからなる、哺乳類におけるエッチ．ピロリ感染の治療方法を提供するものである。再び、本発明におけるこの概念の実施態様において、この作用物質は、ウレアーゼであり、必要に応じて尿素を併用できる。エッチ．ピロリ感染の可能性のある他の治療方法は、生物体をらせん型と球菌様型との間を切り替えさせることにより生物体を消耗させることである。このように、第４の概念において、本発明は、１以上の治療サイクルを含み、各治療サイクルが、（ｉ）エッチ．ピロリの球菌様型かららせん型への転換を誘導できる作用物質を哺乳類へ投与すること、（ｉｉ）エッチ．ピロリのらせん型から球菌用型への転換を誘導できる作用物質を哺乳類へ投与すること、である哺乳類におけるエッチ．ピロリ感染の治療方法を提供するものである。本発明のこの概念の実施態様において、このらせん型への転換を誘導できる作用物質はウレアーゼであり、かつ球菌様型への転換を誘導できる作用物質は、抗ウレアーゼ、例えばウレアーゼ抑制剤またはウレアーゼ特異抗体である。第５の概念において、本発明は、胃のｐＨを変化させ得る作用物質を哺乳類へ投与することを含む、エッチ．ピロリの治療方法を提供するものである。この実施態様において、ｐＨの低下は、ウレアーゼ産生を増加させるためエッチ．ピロリのらせん型を誘導する。この増加されたウレアーゼレベルは、存在するエッチ．ピロリ球菌様型のらせん型への転換を誘導し、抗生物質治療をより有効なものにする。このように、この方法は、一般的に少なくとも１種の抗生物質を哺乳類へ投与する段階を含む。ｐＨを変化する方法は、食用の酸またはアルカリの投与を含むことができる。ここにおいて述べられた本発明の全ての方法において、哺乳類は好ましくはヒトである。本発明の方法は、一般的に製剤学的処方の形態の作用物質を使用する。このように、第６の概念において、本発明は、エッチ．ピロリの球菌様型かららせん型への転換を誘導できる作用物質と１以上の製剤学上認容可能な担体および／または添加物とを含む製剤学的処方を提供するものである。更に、好ましくは、製剤学的処方は、ワクチンではない。本発明のこの概念の実施態様において、この作用物質は、ウレアーゼであり、必要に応じて製剤学的処方は尿素を含む。本発明の製剤学的処方は、１投与あたりあらかじめ測定された量の作用物質、例えばウレアーゼ（及び任意に尿素）を含む服用形態単位で提供され得る。このような１単位は、例えば、患者の年齢、体重、コンディションに依存しつつ、３７℃で３０分以内に３ｍｇの尿素を転換できる十分量のウレアーゼを含む。本発明の製剤学的処方は、経口投与が可能であり、カプセル、錠剤；散剤、顆粒剤；溶液または水性または非水性の懸濁液；食用のフォームまたはウイップ；水中油型乳液、または油中水型乳液、または通常のまたは一般的でない製剤学的形態等の別個の単位形態で提供され得る。ウレアーゼと尿素は、一緒に投与されるならば、この二つの成分が混合されない形態で投与されることが好ましい。第７の概念において、本発明は、エッチ．ピロリ感染用医薬の製造における、エッチ．ピロリの球菌様型かららせん型への転換を誘導できる作用物質の使用を提供するものである。再び、本発明のこの概念の実施態様において、この作用物質は、ウレアーゼであり、必要に応じて尿素を含む。更に再び、この医薬はワクチンではない。ここで述べられた結果は、インビトロでの適用を見い出す。このように、本発明の他の概念は、（ａ）エッチ．ピロリの球菌様型をらせん型へ転換することを誘導できる作用物質を球菌様型培養基へ添加することを含む、培養基中のエッチ．ピロリの球菌様型をらせん型へ転換する方法；および（ｂ）エッチ．ピロリのらせん型から球菌様型への転換を誘導できる作用物質をらせん型の培養基に添加することを含む、培養基内にあるエッチ．ピロリのらせん型を球菌様型へ転換する方法を提供するものである。（ａ）に関し、作用物質は、エッチ．ピロリのらせん型が生育されるがそこかららせん型が取り除かれていない培養基のかたちをとって与えられる。好ましくは、らせん型は、少なくとも３日間培地内で生育する。代わって、この作用物質はウレアーゼであり、必要に応じて尿素が含まれる。（ｂ）に関して、好ましい作用物質は抗ウレアーゼ例えば、ウレアーゼ抑制剤またはウレアーゼ特異的抗体である。ここに、インビトロでの転換方法は、球菌様型およびらせん型双方の生産に関し抗原源を生産されるままにする。これは、細菌の２つ形態に関する診断テストにおける使用のため、特異的抗原が生産される点で特に有用であろう。本発明の各概念の好ましい特徴は、各他の概念に準ずる。本発明をここに実施例を用いて説明するが、これらは本発明を限定するものではない。実施例１（ａ）細菌株および球菌様型エッチ．ピロリの調製他の野性化株が同様に使用できるが、非潰瘍性消化不良症の患者から単離された局所エッチ．ピロリ株Ｖ₂が用いられた。この株は最初に、その純度を調べるために、チョコレートブロッド寒天培地（ＣＢＡ）において培養された。次いで、平板培養に、接触材料として、３０ｍｌＢＨＩＨ（１０％ウマ血清および０．４％酵母抽出物を追補してなる脳心臓浸出物）を収容する２５０ｍｌスコット( Ｓchott)平底丸瓶を用い、３７℃で７２時間インキュベートした。すなわち、これは次々にケモスタットまたは回分培養のために接種材料として働くものである。５４０ｍｌのＢＨＩＨを収容する１．５リットル発酵槽が、ホウとビジャヤクマリ(Ｈo and Ｖijayakumari)(Ｍicrobios，76:59-66(1993))において述べられるようにして立ち上げられた。培養基に３日令エッチ．ピロリ培養株の２×３０ｍｌを接種し、１：１０（接種材料：培養基）の割合とした。二酸化炭素を１日に２回供給し、羽速度は、３５ｒｐｍに調整された。試料が所定時間間隔毎に引き抜かれ、ウレアーゼ活性、ｐＨ、生存率が検査され、および形態学的変化に関する顕微鏡的試験が行われた。培養菌は、細胞の毎日の観察を続けながらこのような条件下に最長３カ月まで維持された。同質／同調培養株が観察されると、細胞は１００００ｇで４０分間の遠心分離によって回収され、そして１回洗浄された。このペレットが次に、修正グリシン法(Ｈo，Ｂ.，and Ｊiang，Ｂ.，Ｅuropean Ｊournal of Ｇastroent erology and Ｈepatology，７:121-124(1995))を用いて、球菌様型抗原を調製するために使用された。あるいはまた、２７０ｍｌのＢＨＩＨを収容する、きつくはまるゴム栓をはめた、１リットル容スコット(Ｓchott)丸底瓶あるいは１リットル容エレンマイヤー枝付きフラスコが用いられた。７ｍｍ直径の穴が、５０ｍｍ直径を有する０．２２μｍフィルターを有する使い捨てフィルターユニット（例えば、ゲルマン(Ｇelman)）の装着に適応できるように、開けられた。ＢＨＩＨの各２７０ｍｌは３日令エッチ．ピロリ培養株に接種された。二酸化炭素が１日に２回、前記０．２２μｍフィルターを介して供給された。培養菌は、９０ｒｐｍに維持された３７℃振盪インキュベーター（ニューブランスウィック(Ｎew Ｂrunswick)）中で、最大９週間までインキュベートされ、そして細胞はこれに続いて１００００ｇで４０分間の遠心分離によって回収された。このようにして得られた球菌様型はグリセロール−ＢＨＩＨ中で−８０℃で最大２年保存される。要求により、この球菌様型は、１００００ｇで３０分間の遠心分離によって回収され、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で１度洗浄された。誘導ブロス（ＩＢ）の調製エッチ．ピロリのらせん型の３日令が、１．５リットル容のフェルメンター（ fermentor）または１リットル容ネジ式蓋のスコットまたは１リットル容の前記したエレンマイヤーフラスコに接種された。３日後、上清は１００００ｇで１０分間の遠心分離によって回収された。この使用済み培地は、０．２μｍメンブランフィルターを介して２度ろ過された。ろ過物は、これ以降誘導ブロス（ＩＢ）と呼ばれる。二度のろ過物は、ＣＢＡプレートに移され、３７ ℃で加湿された二酸化炭素インキュベータで最大１週間までインキュベートされた。らせん型への球菌様型の誘導エッチ．ピロリ球菌様型は、３０ｍｌの上澄中へ接種され、３７℃、５％二酸化炭素インキュベータで、最終濃度がｍｌあたり１０⁸球菌様型となるようにインキュベートされた。同量の球菌様型がコントロールとして提供された新鮮なＢＨＩＨの３０ｍｌ中に接種された。続いて、新鮮なＢＨＩＨが球菌様型培地にオーバータイムで（２４時間）添加された。透過型電子顕微鏡２４，４８，７２および９６時間の間隔で、各培養液の一定量が遠心分離により集められ、ＰＢＳで２回洗浄された。この細胞は、ＰＢＳ中で再懸濁され透過型電子顕微鏡のためにネガティブ染色で処置された。代わって、この細胞は透過型電子顕微鏡用の細胞は、０．１Ｍカコジレートバッファ（ｐＨ７．０）の２％グルタルアデヒドで２から３時間または４℃一昼夜で固定され、０．１Ｍカコジレートバッファを２つ交換して洗浄された。この細胞は蒸留水中で再懸濁され、上記のようにネガティブ染色された。細胞懸濁液がカーボンで被覆された４００メッシュの銅製グリッド上に１分間おかれた。過剰の液体が吸い取られ、このグリッドは固定のために乾燥された。このグリッドは、１％リンタングステン酸の１滴で１分間ネガティブ染色され、その後余分の色素が吸い取られた。風乾の後、グリッドはフィリップスＣＭ１２０透過型電子顕微鏡を用いて観察された。抗生物質での処理らせん型が球菌様型または殺されたものに誘導されることを確かなものにするため、球菌様型は、更に、ＢＨＩＨ中で、５μｇ／ｍｌアモキシシリンと共に４８時間処理された。続く処置で、球菌様型の懸濁液が２回洗浄され、ＢＨＩＨのオリジナルボリウムで再懸濁された。適当量の１ｍｌ懸濁液が新鮮なＢＨＩＨに接種され、それに応じてインキュベートされた。ＩＢおよびＢＨＩＨへの尿素の添加尿素が、５ｍＭ濃度でＩＢまたはＢＨＩＨ中の球菌様型に添加された。培養サンプルは、顕微鏡試験のために一定間隔で取り出されＣＢＡ上及びＢＨＩＨ中でサブカルチャーされた。結果ＢＨＩＨまたはＣＢＡ単独でサブカルチャーにより生育したものはなかった。同様に、培養エッチ．ピロリをろ過するために用いられた第二フィルターは、ＣＢＡ上およびＢＨＩＨ単独でいかなる生育も示さなかった。３日間以上のＩＢは、３０分以内にウレアーゼ用テストで陽性を示した。球菌様型は位相差顕微鏡によれば密集していた。カウンター染色で効果を得るために３０分要した。ＩＢにおける誘導の２４時間後、球菌様型はばらばらになり始め、らせん型の胎児（Ｆoetal spiral cells）を押し出し始めた。発生期のらせん型は、母親らしい球菌様型の外被に取り付けらているようにみえた。誘導４８時間、誕生の経過はより明確になった。ＢＨＩＨ誘導により、新たならせん型は成熟細胞に変化し運動性のものとなった。らせん型は、２倍のＢＨＩＨでより活動的になった。ＩＢおよびＢＨＩＨへの尿素の添加により、これらの成長はより明らかになり、らせん型はより早く２４時間で出現した。再発生した球菌様型から発生したらせん型は、十分に生存可能であり機能的なものとなった。これらは容易にカトＩＩＩ細胞（ＫＡＴＯ III cell）に付着するようにみえた。この経過は、カトＩＩＩ細胞（ＫＡＴＯ III cell）による正常ならせん型の病原性侵害のそれに似ていた。考察これらの結果は、エッチ．ピロリ球菌様型のらせん型への転換の誘導が可能であることを示す。ＩＢ中のあるファクター（インデューサー）はそれゆえ、この転換に影響を与えているにちがいない。加えて、らせん型の転換／生育は尿素を添加する場合を除いて部分的であった。このインデューサーは球菌様型の厚い多糖類層内かららせん型の外に伸び出たこどもを作り始めた。これにより、栄養／インデューサーがこの外被を通過できることは明らかである。以前得られたデータは、ウレアーゼサブユニットＣとＤとが欠落しおよび球菌様型内に減少したレベルで存在することを示した。前に与えられたこのデータは、ウレアーゼがＩＢ内に存在することを示す。ここに、ウレアーゼ酵素のサブユニットＣとＤとは、事実、インデューサーであると考えられる。新鮮なＢＨＩＨ培地の添加は、必要な栄養が十分な転換を保証するために提供された（ＩＢは除去されまたは使い果たされたけれども）。尿素の生理的水準の供給は、尿素がこの生物体の代謝で重要な役割を演じることを示す。これらの発見のインビボへの外挿は、生物体による胃の付着後、排泄物中に排泄されたらせん型が体外での生存を確保するために球菌様型に転換することを示唆する。口腔内へ入ると、歯肉下プラークの微好気的条件下でこれらが残る。他のウレアーゼ生産細菌または実際他のウレアーゼ源の存在により、らせん型への転換が誘導される。一度そのように転換された細菌は、口に付着し、ここから消化管に入り、胃に付着する。それゆえ、明らかに、通常の抗生物質によるらせん型の除去は十分でない。胃疾患は、存在する球菌様型のらせん型への転換のおかげで再発する。これはそれゆえ、このような再発を防止するために微生物のらせん型と球菌様型との双方を根絶することが必須である。そのため、存在する球菌様型はらせん型に転換するよう作用されなればならず、抗生物質治療は全てのエッチ．ピロリ感染を根絶できるようになる。これはウレアーゼと必要に応じて添加物としての尿素を添加し、らせん型への転換を誘導することで達成できる。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Treatment of Helicobacter pylori Infection Methods of treating H. pylori, pharmaceutical formulations for use in such methods, Etch. The present invention relates to a method for making a cultured cocci-like form of H. pylori viable and a method for inducing the conversion from a cocciform form to a spiral form. Etch. H. pylori is a Gram-negative bacterium strongly associated with chronic active gastritis and peptic ulcer disease (Marshall et al, Medical Journal of Australia, 142: 439-444 (1985); Buck, GE, Journal of clinical Microbiology, 3: 1-12 (1990)). In in vitro culture, the etch. H. pylori exists in two distinct forms, a culturable helical form and a non-culturable cocci-like form (Marshall et al, Microbios letters, 25: 83-88 (1984); Kung, J.S.L., and HO, B., Workshop on Gastroduodenal Pathology and Campylobacter pylori (abstract P9), edited by F. Megaraud and H. Lamouliatte, Bordeaux, France (1988)). Helical forms of bacteria do not survive more than about two hours when exposed to air. Under unfavorable conditions, the helical form differentiates into a cocci-like form (Vijayakumari and Ho, Acta Gastro-enterologica Belgium, 56: 101 (1993)). To date, only one successful case of in vitro conversion of a cocciform to a helical form has been reported and has been shown to be irreproducible in such experiments (Mai et al, Gastroduodenal Pathology and Campylobacter pylori, pp 28-33, edited by F. Megraud and H. Lamo uliatte, Elsevier Science Publishers (1989)). Although the formation of a streptococcus-like form can be induced in vitro by antibiotic or nutrient deficiency (Nilius et al, Zbl. Bakt. 280: 259-272 (1993)), studies of the cocci-like form have been described in this and Etch. Lack of information on the role of H. pylori in its life cycle and how to obtain this type of culture were hindered. Until today, etch. H. pylori-like forms are virtually considered to be "dead", non-viable forms whose role in the bacterial life cycle is unknown. At present, it is believed that the cocci-like form is viable and can induce conversion to the spiral form. The possibility of inducing conversion involves the administration of urease. WO95 / 22987 is an etch. Disclosed is the use of a urease-based vaccine for the treatment of H. pylori infection. However, this document does not disclose a general chemical non-immunological method based on urease that works for conversion from a staphylococcal to helical form. These results indicate that helical forms of microorganisms can be treated using antibiotics. Etch. In gastric ulcers offers the possibility of more effective treatment of H. pylori infection. H. pylori reappearance will itself be significantly reduced. As described above, in the first concept, the present invention relates to an etch. An etch in a mammal comprising administering to the mammal an agent capable of inducing the conversion of H. pylori from a cocciform to a helical form. A method for treating H. pylori infection is provided. Preferably, the agent is not a vaccine, ie, it is not administered to elicit any immune response. Generally, administration of the agent will be part of a treatment that involves the administration of one or more antibiotics. Thus, in one embodiment of this concept in the present invention, the method further comprises the step of administering to the mammal an effective amount of at least one antibiotic. Preferably, the administration of the one or more antibiotics occurs after the administration of the agent. This takes into account the cocci-like form that converts to a spiral form before administration of the antibiotic. Of course, antibiotics are known to induce the spiral form back to a cocciform form. Therefore, in many cases, several cycles of the agent / antibiotic administration will require an etch. Required to ensure effective eradication of H. pylori. Therefore, in a second concept, the present invention comprises at least two treatment cycles, each treatment cycle comprising: Administering to the mammal an agent capable of inducing the conversion of H. pylori from a cocciform to a helical form; (ii) administering to the mammal an effective amount of at least one antibiotic. A method for treating H. pylori infection is provided. After each treatment, a decreasing amount of etch. Pylori remains. The end point of this treatment is a commercially available etch. It can be determined by using a diagnostic test for H. pylori. In a preferred embodiment of these concepts according to the invention, the administered agent is sufficient for a fixed amount of urease to be sufficiently etched. Induces the conversion of H. pylori from a staphylococcal to helical form. In the context of the present invention, urease includes all forms of urease, including bacterial (eg, H. pylori or Proteus mirabitis urease) and non-bacterial (eg, Jackbean urease), and It is intended to include one or more separate subunits of the urease enzyme, or peptides derived from such subunits, hi certain embodiments, only the urease subunits C and D are administered. If Urease is urease, the method involves the administration of urea to the mammal, which may be administered together or separately. The method of inhibiting the conversion of the spiral form into a cocci-like form when used Thus, in a third aspect, the present invention provides an agent capable of inhibiting the conversion of H. pylori from a helical to a cocci-like form. A method of treating H. pylori infection in a mammal, comprising administering to the mammal, again in an embodiment of this concept of the invention, the agent is urease and optionally urea. Another possible treatment for H. pylori infection is to exhaust the organism by switching the organism between a spiral and a cocci-like form. In the concept of 4, the invention comprises one or more treatment cycles, each treatment cycle comprising: (i) an agent capable of inducing the conversion of H. pylori from a cocciform to a helical form; Administering to the mammal an agent capable of inducing the conversion of H. pylori from a spiral form to a cocci form, to a mammal, wherein the method comprises treating the H. pylori infection in a mammal. In an embodiment of this concept of the invention, the agent capable of inducing the conversion to the helical form is urease, and the agent capable of inducing the conversion to the cocci-like form is an anti-urease, for example, urease suppression. In a fifth aspect, the present invention provides a method of treating H. pylori, comprising administering to a mammal an agent capable of altering gastric pH. In embodiments, lowering the pH may increase etch. Induces the helical form of H. pylori. This increased urease level is due to the presence of the existing etch. Induces the conversion of H. pylori into a helical form, making antibiotic treatment more effective. As such, the method generally involves administering at least one antibiotic to the mammal. Methods of changing the pH can include administration of an edible acid or alkali. In all of the methods of the invention described herein, the mammal is preferably a human. The method of the invention generally uses the agent in the form of a pharmaceutical formulation. Thus, in the sixth concept, the present invention provides It is intended to provide a pharmaceutical formulation comprising an agent capable of inducing the conversion of H. pylori from a cocciform to a helical form and one or more pharmaceutically acceptable carriers and / or additives. Further, preferably, the pharmaceutical formulation is not a vaccine. In an embodiment of this concept of the present invention, the agent is urease and optionally the pharmaceutical formulation comprises urea. The pharmaceutical formulations of the present invention may be presented in unit dosage form containing a pre-measured amount of the agent per dose, such as urease (and optionally urea). One such unit contains, for example, sufficient urease to convert 3 mg of urea within 30 minutes at 37 ° C., depending on the age, weight, and condition of the patient. The pharmaceutical formulations of the present invention can be administered orally, in capsules, tablets; powders, granules; solutions or aqueous or non-aqueous suspensions; edible foams or whip; oil-in-water emulsions, or in oils. It may be provided in a separate unit form, such as an aqueous emulsion, or a conventional or unconventional pharmaceutical form. If urease and urea are administered together, it is preferred that the two components be administered in an unmixed form. In a seventh concept, the present invention provides an etch. H. in the manufacture of a medicament for H. pylori infection. It provides the use of an agent capable of inducing the conversion of H. pylori from a cocciform to a helical form. Again, in an embodiment of this concept of the invention, the agent is urease and optionally includes urea. Still again, this drug is not a vaccine. The results described here find in vitro application. Thus, other concepts of the present invention include: (a) etch. An etch in a culture medium, comprising adding an agent capable of inducing the conversion of a H. pylori from a cocciform to a spiral form to the cocciform medium. A method of converting the cocci-like form of H. pylori into a spiral form; and (b) etch. An etch in a culture medium comprising adding an agent capable of inducing the conversion of H. pylori from a spiral form to a cocciform form to the spiral form. It is intended to provide a method for converting a spiral form of H. pylori into a cocci-like form. With regard to (a), the active substance is H.I. It is given in the form of a culture medium in which the spiral form of H. pylori is grown but the spiral form is not removed therefrom. Preferably, the helical form grows in the medium for at least 3 days. Alternatively, the agent is urease, optionally including urea. With respect to (b), preferred agents are anti-ureases, such as urease inhibitors or urease-specific antibodies. Here, the in vitro conversion method leaves the antigen source produced for both cocciform and helical production. This would be particularly useful in that specific antigens would be produced for use in diagnostic tests on two forms of bacteria. Preferred features of each concept of the present invention follow each of the other concepts. The present invention will now be described by way of examples, which do not limit the invention. Example 1 (a) Bacterial strain and cocci-like etch. Preparation of H. pylori Topical etch isolated from patients with non-ulcer dyspepsia, although other wild-type strains can be used as well. Pylori strain V ₂ was used. This strain was first cultured on Chocolate Brod Agar (CBA) to check its purity. The plate culture was then used as a contact material in a 250 ml Scott flat bottom round bottle containing 30 ml BHIH (brain heart leachate supplemented with 10% horse serum and 0.4% yeast extract) at 37 ° C. For 72 hours. That is, it in turn serves as an inoculum for chemostat or batch culture. A 1.5 liter fermenter containing 540 ml of BHIH was set up as described in Ho and Vijayakumari (Microbios, 76: 59-66 (1993)). Three days old etch on culture medium. 2 × 30 ml of H. pylori culture was inoculated to a ratio of 1:10 (inoculum: culture medium). Carbon dioxide was supplied twice a day and the blade speed was adjusted to 35 rpm. Samples were withdrawn at predetermined time intervals, tested for urease activity, pH, viability, and microscopically examined for morphological changes. Cultures were maintained under these conditions for up to three months, with daily observation of the cells. When homozygous / synchronized cultures were observed, cells were harvested by centrifugation at 10,000 g for 40 minutes and washed once. This pellet is then used to prepare a cocci-like antigen using a modified glycine method (Ho, B., and Jiang, B., European Journal of Gastroenterology and Hepatology, 7: 121-124 (1995)). Used for Alternatively, 1 liter Scott round bottom bottles or 1 liter Erlenmeyer side-fitted flasks containing 270 ml of BHIH and fitted with tight rubber stoppers were used. A 7 mm diameter hole was drilled to accommodate a disposable filter unit (eg, Gelman) with a 0.22 μm filter having a 50 mm diameter. Each 270 ml of BHIH is a 3 day old etch. H. pylori cultures were inoculated. Carbon dioxide was supplied twice daily through the 0.22 μm filter. Cultures were incubated in a 37 ° C. shaking incubator (New Brunswick) maintained at 90 rpm for up to 9 weeks, and cells were subsequently collected by centrifugation at 10,000 g for 40 minutes. . The cocci-like form thus obtained is stored in glycerol-BHIH at -80 ° C for up to 2 years. Upon request, this cocci-like form was recovered by centrifugation at 10,000 g for 30 minutes and washed once with PBS (pH 7.2). Preparation of Derivative Broth (IB) Helicoidal 3 day old H. pylori was inoculated into a 1.5 liter fermentor or a 1 liter screw-cap Scott or a 1 liter Erlenmeyer flask as described above. After 3 days, the supernatant was collected by centrifugation at 10,000 g for 10 minutes. This spent medium contains 0. Filtered twice through a 2 μm membrane filter. The filtrate is referred to hereinafter as the induction broth (IB). Duplicate filtrates were transferred to CBA plates and incubated in a humidified carbon dioxide incubator at 37 ° C for up to one week. Induction of a staphylococcal-like form into a helical form. H. pylori-like forms were inoculated into 30 ml of the supernatant and incubated at 37 ° C. in a 5% carbon dioxide incubator to a final concentration of 10 ⁸ cells per ml. An equal amount of the cocci-like form was inoculated into 30 ml of fresh B HIH provided as a control. Subsequently, fresh BHIH was added to the cocci-like medium overtime (24 hours). Transmission Electron Microscopy At 24, 48, 72 and 96 hour intervals, an aliquot of each culture was collected by centrifugation and washed twice with PBS. The cells were resuspended in PBS and treated with negative staining for transmission electron microscopy. Alternatively, the cells were fixed for transmission electron microscopy with 2% glutaraldehyde in 0.1 M cacodylate buffer (pH 7.0) for 2-3 hours or at 4 ° C. overnight and 0.1 M cacodylate. Two buffers were exchanged and washed. The cells were resuspended in distilled water and negatively stained as described above. The cell suspension was placed on a 400 mesh copper grid coated with carbon for 1 minute. Excess liquid was drawn off and the grid was dried for fixation. The grid was negatively stained with one drop of 1% phosphotungstic acid for 1 minute, after which excess dye was blotted. After air drying, the grid was observed using a Philips CM120 transmission electron microscope. Treatment with antibiotics To ensure that the helical form is induced into a cocciform or killed form, the cocciform form was further treated for 48 hours with 5 μg / ml amoxicillin in BHIH. Was. In a subsequent treatment, the cocci-like suspension was washed twice and resuspended in the original volume of BHIH. An appropriate amount of the 1 ml suspension was inoculated into fresh BHIH and incubated accordingly. Addition of urea to IB and BHIH Urea was added at 5 mM concentration to cocci-like forms in IB or BHIH. Culture samples were removed at regular intervals for microscopic examination and subcultured on CBA and in BHIH. Results None of the BHIHs or CBAs grew by subculture alone. Similarly, culture etch. The second filter used to filter H. pylori did not show any growth on CBA and on BHIH alone. IB for 3 days or more showed a positive test for urease within 30 minutes. The cocci-like form was dense by phase contrast microscopy. It took 30 minutes to obtain an effect by counterstaining. Twenty-four hours after induction in the IB, the cocci-like form began to break apart and began to extrude spiral fetal cells (Foetal spiral cells). The nascent spiral appeared to be attached to the maternal, cocci-like envelope. At 48 hours of induction, the course of birth became clearer. Upon BHIH induction, the new helix changed to mature cells and became motile. The helical form became more active at twice the BHIH. With the addition of urea to IB and BHIH, their growth became more apparent and the helical form appeared earlier at 24 hours. Spiral forms arising from the reoccurring cocci-like forms became fully viable and functional. These appeared to readily attach to KATO III cells. This course resembled that of a normal helical form of virulence violation by KATO III cells. Discussion These results are based on the results of Etch. It shows that it is possible to induce the conversion of H. pylori into a spiral form. Certain factors (inducers) in the IB must therefore influence this shift. In addition, helical conversion / growth was partial except when urea was added. This inducer began to create a child that extended out of the spiral form from within a thick polysaccharide layer of the form of a bacterium. It is clear that this allows the nutrition / inducer to pass through this mantle. Previously obtained data indicated that urease subunits C and D were absent and present at reduced levels in the cocciform form. This data, given earlier, indicates that urease is present in the IB. Here, the urease enzyme subunits C and D are in fact considered to be inducers. Addition of fresh BHIH medium was provided to ensure sufficient conversion of the required nutrients (although IB was removed or depleted). The supply of physiological levels of urea indicates that urea plays an important role in the metabolism of this organism. Extrapolation of these findings in vivo suggests that after attachment of the stomach by the organism, the helical form excreted in the faeces converts to a cocci-like form to ensure extracorporeal survival. Once in the mouth, they remain under microaerobic conditions of subgingival plaque. The presence of other urease-producing bacteria, or indeed other urease sources, induces a conversion to a helical form. Once transformed, the bacteria attach to the mouth, enter the digestive tract from here, and attach to the stomach. Clearly, removal of the helical form by conventional antibiotics is therefore not sufficient. Gastric disease recurs due to the conversion of existing cocci-like to helical forms. It is therefore essential to eradicate both the helical and cocci-like forms of microorganisms to prevent such recurrence. Therefore, existing cocci-like forms must be acted upon to convert to helical forms, and antibiotic treatment is required for all etch. H. pylori infection can be eradicated. This can be achieved by adding urease and, if necessary, urea as an additive to induce conversion into a spiral form.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, L U, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF) , CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (KE, LS, MW, SD, S Z, UG), UA (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD , RU, TJ, TM), AL, AM, AT, AU, AZ , BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CU, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB, G E, HU, IL, IS, JP, KE, KG, KP, KR , KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, P L, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK , TJ, TM, TR, TT, UA, UG, US, UZ, VN

Claims

[Claims] 1. Etch. An agent capable of inducing the conversion of H. pylori from a staphylococcal to helical form An etch in a mammal, comprising administering to the mammal. How to treat H. pylori infection . 2. The method of claim 1, wherein the agent is other than a vaccine. 3. Further comprising administering to the mammal an effective amount of at least one antibiotic. 3. The method of claim 1 or claim 2. 4. Including at least two treatment cycles, each treatment cycle comprising: (I) Etch. A product that can induce the conversion of H. pylori from a staphylococcal to helical form Substance to mammals (Ii) administering to the mammal an effective amount of at least one antibiotic. Etch in mammals that are How to treat H. pylori infection. 5. Etch. An agent capable of inhibiting the conversion of H. pylori from a helical type to a cocciform type An etch in a mammal, comprising administering to the mammal. How to treat H. pylori infection . 6. 6. The method according to claim 1, wherein the active substance is urease. Etch in mammals according to claim 1. How to treat H. pylori infection. 7. 7. The method of claim 6, wherein the urease is a non-bacterial urease. 8. Claims wherein the non-bacterial urease is Jack Beans Urease The method of claim 7. 9. Claims wherein only the C and D subunits of urease are administered. 9. The method according to any one of paragraphs 6 to 8. 10. 10. The method of any of claims 6 to 9, wherein urease is also administered to the mammal. Or the method of claim 1. 11.1 or more treatment cycles, each treatment cycle comprising: (I) Etch. A product that can induce the conversion of H. pylori from a staphylococcal to helical form Substance to mammals (Ii) Etch. Can induce the conversion of H. pylori from a spiral type to a type for cocci Administering the agent to the mammal Etch in mammals that are How to treat H. pylori infection. 12. 12. The method of claim 11, wherein the agent of step (i) is urease. . 13. Modification by at least one of the features of any one of claims 7 to 9. 13. The method of claim 12, wherein the method has been corrected. 14． 14. The method according to claim 12, wherein urea is administered together with urease. The described method. 15. 13. The method of claim 12, wherein the agent of step (ii) is an anti-urease. 15. The method according to any one of claims to 14. 16. 16. The method according to claim 15, wherein the anti-urease is a urease inhibitor. Law. 17． An etch comprising administering to a mammal an agent capable of altering gastric pH. . How to treat H. pylori. 18. 18. The mammal according to any one of claims 1 to 17, wherein the mammal is a human. the method of. 19. Etch. An agent capable of inducing the conversion of H. pylori from a staphylococcal to helical form A pharmaceutical formulation comprising one or more pharmaceutically acceptable carriers and / or additives. 20. 20. The pharmaceutical formulation according to claim 19, wherein the active substance is urease. 21. The product according to claim 19 or 20, which is other than a vaccine. Pharmaceutical prescription. 22. Modification by at least one of the features of any one of claims 7 to 9. 22. The pharmacology according to any one of claims 19 to 21, wherein the pharmacology is corrected. Prescription. 23. 23. Any of claims 20 to 22 which also comprises urease. Pharmaceutical formulation as indicated. 24. Etch. H. in the manufacture of a medicament for H. pylori infection. Is it a cocciform form of H. pylori? Use of an agent capable of inducing a conversion to a helical form. 25. 25. Use according to claim 24, wherein the agent is urease. 26. Claim 24 or Claim 25 wherein the agent is other than a vaccine. Pharmaceutical formulation according to item. 27. Modification by at least one of the features of any one of claims 7 to 9. The use according to claim 25, corrected. 28. 28. The method according to claim 25, wherein the medicament comprises urea. Use according to any preceding claim. 29. Etch. An agent capable of inducing the conversion of H. pylori from a staphylococcal to helical form Etch in the culture medium, including adding to the cocciform medium. H. pylori cocci-like form How to convert to a spiral type. 30. Etch, except those with the helix removed. The spiral form of H. pylori grows 30. The method of claim 29, wherein the agent is administered in the form of a culture medium. . 31. Claim 30. The helical form grows in the broth for at least 3 days. The method described. 32. 32. Any of claims 29 to 31 wherein the agent is urease. Or the method of claim 1. 33. Modification by at least one of the features of any one of claims 7 to 9. 33. The method of claim 32, wherein the method is corrected. 34. Etch. An agent capable of inducing the conversion of H. pylori from a helical to a cocciform An etch in the culture medium, including adding to the helix-type culture medium. Pylori A method of converting a cancer type into a cocci-like type. 35. 35. The method of claim 34, wherein the agent is an anti-urease. 36. 36. The method of claim 35, wherein the anti-urease is a urease inhibitor. .