JPH11513896A

JPH11513896A - Ｇ−蛋白結合受容体ｈｎｆｄｓ７８

Info

Publication number: JPH11513896A
Application number: JP10506879A
Authority: JP
Inventors: バーグスマ，ダーク・ジェイ; エルショーバギー，ナビル・エイ; サラウ，ヘンリー; ルーベン，スティーブン・エム
Original assignee: Human Genome Sciences Inc; SmithKline Beecham Corp
Current assignee: Human Genome Sciences Inc; SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1996-07-22
Filing date: 1996-07-22
Publication date: 1999-11-30
Also published as: AU6649196A; EP0859787A1; EP0859787B1; WO1998003539A1; EP0859787A4; DE69615850D1

Abstract

(57)【要約】ヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドおよびかかるＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしているＤＮＡ（ＲＮＡ）および組換え技術によりかかるポリペプチドを製造する方法を開示する。また、かかるＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をアテローム性動脈硬化症、炎症性疾患、ならびに感染症等の疾病の治療に利用する方法も開示する。かかるＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に対するアンタゴニストおよび疾病を治療するための治療としてのそれらの使用もまた開示する。また、該ポリペプチドの核酸配列における変異および変化した濃度に関連する疾病を検出するための診断アッセイも開示する。また、Ｇ−蛋白結合受容体をコードしているポリヌクレオチドにおける変異および宿主中の該ポリペプチドのレベル変化を検出するための診断アッセイも開示する。

Description

【発明の詳細な説明】Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８本発明は、一部には、新たに同定されたポリヌクレオチドおよびポリペプチド；該ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの変種および誘導体；該ポリヌクレオチドおよびポリペプチドおよびそれらの変種および誘導体の製造方法、該ポリペプチドのアンタゴニストおよびアゴニスト；ならびにポリヌクレオチド、ポリペプチド、変種、誘導体、アゴニストおよびアンタゴニストの使用に関する。詳細には、これらの点および他の点において、本発明は、ヒトＧ−蛋白結合受容体（以下「Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８」という）のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する。発明の背景本発明は、新たに同定されたポリヌクレオチド、かかるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、かかるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの使用、ならびにかかるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの製造に関する。より詳細には、本発明ポリペプチドはヒト７回膜貫通型受容体（Ｇ−蛋白結合受容体）である。また本発明は、かかるポリペプチドの作用の阻害にも関する。医学的に重要な生物学的プロセスは、Ｇ−蛋白および／または第２のメッセンジャー、例えばｃＡＭＰを包含するシグナル変換経路に関与している蛋白によって媒介されることがよく知られている(Lefkowitz,Nature,1991,351:353-354)。本明細書においては、これらの蛋白を、Ｇ−蛋白またはＰＰＧ−蛋白に関する経路に関与する蛋白という。これらの蛋白のいくつかの例は、ＧＰＣ受容体、例えばアドレナリン作動性薬剤およびドーパミンに対するものを包含する(Kobilka,e t al.,PNAS,1987,84:46-50;Kobilka，et al.,Science,1987,238:650-656;Bunzow ,et al.,Nature,1988,336:783-787)。Ｇ−蛋白自体は、例えば、ホスホリパーゼＣ、アデニルシクラーゼ、およびホスホジエステラーゼ、およびアクチェーター蛋白、例えばプロテインキナーゼＡおよびプロテインキナーゼＣのようなエフェクター蛋白である(Simon，et al.,Science,1991，252:802-808)。例えば、シグナル変換の１の形態において、ホルモン結合の効果は細胞内の酵素であるアデニレートシクラーゼの活性化である。ホルモンによる酵素の活性化はヌクレオチドＧＴＰの存在に依存し、ＧＴＰはホルモン結合にも影響する。Ｇ −蛋白は、ホルモン受容体をアデニレートシクラーゼに結合させる。Ｇ−蛋白は、ホルモン受容体により活性化された場合、ＧＴＰを結合ＧＤＰと交換することが示されている。次いで、ＧＴＰ担持形態は、活性化されたアデニレートシクラーゼに結合する。Ｇ−蛋白自体により触媒されるＧＴＰのＧＤＰへの加水分解により、Ｇ−蛋白はその基底不活性形態に戻る。かくして、Ｇ−蛋白は、受容体からエフェクターへのシグナルを中継する中間体、ならびにシグナル発生期間を調節する時計としての２つの作用を行う。Ｇ−蛋白結合受容体の膜蛋白遺伝子スーパーファミリーは、７個の推定上の膜貫通ドメインを有することにより特徴づけられている。ドメインは、細胞外または細胞質ループにより結合されている膜貫通α−ヘリックスを示すものと考えられている。Ｇ−蛋白結合受容体は、例えば、ホルモン、ウイルス、成長因子および神経受容体のごとき広範な生物学的活性受容体を包含する。Ｇ−蛋白結合蛋白は、少なくとも８個の異なる親水性ループに結合している、これらの７個の保存された疎水的部分（約２０個ないし３０個のアミノ酸）を含むものとして特徴づけられている。結合受容体のＧ−蛋白ファミリーは、精神病および神経学的疾病の治療に用いる神経遮断薬に結合するドーパミン受容体を包含する。このファミリーのメンバーの他の例は、カルシトニン、アドレナリン作動薬、エンドセリン、ｃＡＭＰ、アデノシン、ムスカリン作動性薬、アセチルコリン、セロトニン、ヒスタミン、トロンビン、キニン、卵胞刺激ホルモン、オプシン、内皮分化遺伝子−１受容体、ロドプシン、オドラント、サイトメガロウイルス受容体等を包含する。大部分のＧ−蛋白結合受容体は、最初の２個の細胞外ループのそれぞれに１個の保存されたシステイン残基を有し、それらはジスルフイド結合を形成し、機能的蛋白構造を安定化すると考えられている。７個の膜貫通領域はＴＭ１、ＴＭ２、ＴＭ３，ＴＭ４、ＴＭ５、ＴＭ６、ＴＭ７と呼ばれる。ＴＭ３はシグナル変換に関与している。システイン残基のホスホリレーションおよびリピデーション（パルミチレーションまたはファルネシレーション）は、いくつかのＧ−蛋白結合受容体のシグナル変換に影響しうる。大部分のＧ−蛋白結合受容体は、３番目の細胞質ループおよび／またはカルボキシ末端において潜在的なホスホリレーション部位を含んでいる。β−アドレナリン受容体のごとき数種のＧ−蛋白結合受容体については、プロテインキナーゼＡおよび／または特異的受容体キナーゼによるホスホリレーションは受容体の感受性をなくす。いくつかの受容体について、Ｇ−蛋白結合受容体のリガンド結合部位は、数個のＧ−蛋白結合受容体の膜貫通ドメインにより形成される親水性ソケットを含むと考えられており、該ソケットはＧ−蛋白結合受容体の疎水性残基により囲まれている。各Ｇ−蛋白結合受容体膜貫通ヘリックスの親水性部位は、内側に向いていると考えられ、極性リガンド結合部位を形成すると考えられる。ＴＭ３は、ＴＭ３アスパラギン酸エステル残基を包含するようなリガンド結合部位を有するものとして、数個のＧ−蛋白結合受容体に関連している。ＴＭ５のセリン、ＴＭ６のアスパラギンおよびＴＭ６またはＴＭ７のフェニルアラニンまたはチロシンもリガンド結合に関連している。Ｇ−蛋白結合受容体は、細胞内において、ヘテロ三量体Ｇ−蛋白により種々の細胞内酵素、イオンチャンネルおよびトランスポーターに結合し得る(例えば、J ohnson et al.,Endoc.Rev.,1989,10:317-331参照)。異なるＧ−蛋白のα−サブユニットは優先的に特定のエフェクターを刺激して細胞中の種々の生物学的機能を転調させる。Ｇ−蛋白結合受容体の細胞質残基のホスホリレーションは、いくつかのＧ−蛋白結合受容体へのＧ−蛋白結合の調節に関する重要な機構であると確認されている。Ｇ−蛋白結合受容体は哺乳動物宿主中の多くの部位で見いだされる。明らかに、ケモカインに対する受容体である因子、および機能不全ならびに疾病におけるそれらの役割が必要である。従って、機能不全または疾病の予防、改善または修正において役割を果たし得るケモカイン受容体であるかかる因子の同定および特徴づけに対する必要性がある。本発明のポリペプチドは、保持された７個の膜貫通ドメイン残基を有し、既知ケモカイン受容体、例えばCC CKR1(Ben-Baruch，et al.，J．Biol．Chem．270: 22123 1995)、CC CKR3(Combadiere，C.，P．M．J．Biol．Chem．270: 16491(199 5))、CC CKR4（Power，et al.，J.Biol.Chem.270:19495）およびCC CKR5（Deng ，et al.，Nature 381：20(1996)；Dragic，et al.，Nature381：20(1996)）に対するアミノ酸配列相同性を有する。発明の概要上記事情に鑑み、本発明は、ポリペプチド、詳細には、図１に示すアミノ酸配列と他の蛋白（例えば、CC CKR1、CC CKR3、CC CKR4およびCC CKR5）の既知アミノ酸配列との間の相同性により新規Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８であると同定されるポリペプチドを提供することを１の目的とする。さらに、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードするポリヌクレオチド、特に本明細書でＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８と称されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供することが本発明の目的である。本発明のこの態様の特に好ましい具体例において、該ポリヌクレオチドは、図１に示す配列中のヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードする領域を含む。本発明の態様によれば、ＡＴＣＣ受託番号９８０９９中に含まれるヒト・ｃＤＮＡにより発現される成熟ポリペプチドをコードする単離核酸分子が提供される。本発明の態様によれば、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡを包含するヒト・Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードする単離核酸分子が提供され、さらに本発明態様の具体例において、その生物学的に、診断上、臨床的にまたは治療的に有用な変種、アナログまたはそれらの誘導体、あるいは上記変種、アナログおよび誘導体のフラグメントを包含するそれらのフラグメントが提供される。ヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の天然に存在する対立遺伝子変種は、発明の特に好ましい具体例に含まれる。治療目的、例えば、アテローム性動脈硬化、炎症、および感染、例えば、細菌性、真菌性、原生動物性および特にＡＩＤＳのごときウイルス感染の治療に用いられる、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチド、詳細にはヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドを提供することも本発明の目的である。本発明の態様によれば、本明細書においてＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８と呼ばれるヒト由来の新規ポリペプチド、ならびにその生物学的、診断上または治療上有用なフラグメント、変種およびその誘導体、フラグメントの変種および誘導体、および上記のもののアナログが提供される。本発明のこの態様の特に好ましい具体例は、ヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８遺伝子の天然に存在する対立遺伝子によりコードされるヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の変種である。本発明のもう１つの態様によれば、本発明の受容体ポリペプチドに結合してこれを活性化または阻害する化合物、ならびにケモカインβ−８のごとき受容体リガンドのスクリーニング方法も提供される。上記ポリペプチド、ポリペプチドフラグメント、変種および誘導体、変種および誘導体のフラグメント、ならびにそれらのアナログの製造方法を提供することが本発明のもう１つの目的である。本発明のこの態様の好ましい具体例において、発現可能に導入された外来のヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしているポリヌクレオチドを有する宿主細胞を、宿主中でのヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８発現のための条件下で培養し、次いで、発現したポリペプチドを回収することを特徴とする、上記Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドの製造方法が提供される。本発明のもう１つの目的によれば、特に、研究、生物学、臨床および治療目的に、上記ポリペプチドおよびポリヌクレオチドを用いる製品、組成物、手順および方法が提供される。本発明のこの態様の特定の好ましい具体例によれば、特に、他の事に使用する製品、組成物および方法も提供され、他の事とは：Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドまたはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしているｍＲＮＡを調べることによる細胞中のＧ−蛋白結合受容体発現の評価；本明細書開示のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドまたはポリヌクレオチドに細胞を曝露することによるイン・ビトロ、エクス・ビボまたはイン・ビボでの、とりわけアテローム性動脈硬化、卒中、再発狭窄症、炎症、および感染、例えば、細菌性、真菌性、原生動物性、および詳細にはＡＩＤＳのごときウイルス感染の治療；Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８遺伝子における欠失のごとき遺伝学的変種および変状のアッセイ；およびＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８機能の増大またはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８機能不全の治癒のための、生物体へのＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの投与である。本発明の依然として別の具体例によれば、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の発現低下に関連する症状の治療のために、本発明の受容体ポリペプチドを刺激するかかる活性化化合物の使用方法が提供される。本発明のもう１つの態様によれば、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の過剰発現に関連する症状の治療のために、かかる阻害化合物を使用する方法も提供される。本発明のもう１つの態様によれば、本発明のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の少なくとも１個の膜貫通型ドメインについての保存的アミノ酸置換を有するフラグメント、コンセンサスフラグメントおよび／または配列である、非天然合成、単離および／または組み換えＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドが提供され、その結果、受容体は、例えばケモカインβ−８のごときＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８リガンドに結合でき、あるいは、例えばケモカインβ −８の結合のごときＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８リガンド結合を定性的または定量的に転調させうる。本発明の依然として別の態様によれば、予想される生物学的特性のため、例えばケモカインβ−８の結合のようにリガンドに結合すること、またはリガンド結合を転調させることによりＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８機能に対する潜在的モジュレーターとして有用でありうる合成または組み換えＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチド、その保存的置換物および誘導体、それらに対する抗体、抗−イディオタイプ抗体、組成物および方法が提供され、それらを診断、治療および／または研究用に用いることができる。本発明のさらにもう１つの目的は、種々のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８またはそのフラグメントを阻害または模倣するように、受容体タイプおよびサブタイプとして設計された合成、単離もしくは組み換えポリペプチドを提供することである。本発明のこの態様および別の態様のある好ましい具体例によれば、ヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８配列に対してハイブリダイズするプローブが提供される。本発明のこの態様のさらに好ましい具体例において、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドに対する抗体が提供される。この点において、特定の好ましい具体例において、抗体はＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に対して非常に選択的である。本発明の別の態様によれば、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８アゴニストが提供される。なかでも好ましいアゴニストは、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を模倣し、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８−結合分子または受容体分子に結合し、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８により誘導される応答を誘発または増大させる分子である。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８またはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチド、あるいはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８活性の他のモジュレーターと相互作用し、そのことによりＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の１つの効果またはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の１つよりも多い効果を有効ならしめ、あるいは増大させる分子も好ましいアゴニストに含まれる。本発明のまだもう１つの態様によれば、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８アンタゴニストが提供される。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を模倣してＧ− 蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８受容体または結合分子に結合するがＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８により誘導される１つの応答またはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８により誘導される１つよりも多い応答を誘発しないものは、好ましいアンタゴニストに含まれる。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８と結合または相互作用してＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の１つの効果またはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の１つよりも多い効果を阻害し、あるいはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の発現を妨げる分子も好ましいアンタゴニストに含まれる。本発明のさらなる態様において、イン・ビトロで細胞に、エクス・ビボで細胞に、さらにはイン・ビボで細胞に投与される、あるいは多細胞生物に投与されるＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリヌクレオチドまたはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドを含んでなる組成物が提供される。本発明のこの態様の特定の好ましい具体例において、組成物は、疾病の治療のための宿主生物中でのＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチド発現のためのＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリヌクレオチドを含んでなる。この点に関して、変化した内在Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８活性に関連した機能不全の治療のためのヒト患者における発現が特に好ましい。本発明の他の目的、特徴、利点および態様は、下記説明から当業者に明らかとなろう。しかしながら、下記説明および特定の実施例は、本発明の好ましい具体例を示すものであるが、説明のためだけのものであることを理解すべきである。本発明の精神および範囲内での種々の変更および修飾は、下記説明を読み、本開示の他の部分を読めば当業者に容易に明らかとなろう。図面の簡単な説明下記の図は、本発明の特定の具体例を示す。それらは、本発明を説明するだけのものであって、いかなる方法においても本明細書中に開示された発明を制限するものではない。図１は、ヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のヌクレオチドおよび推定アミノ酸配列を示す。図２は、ヒト・ケモカインβ−８のポリヌクレオチドおよび椎定アミノ酸配列を示す。定義下記の説明は本明細書、特に実施例における特定の用語の理解を容易にするためのものである。説明は、便利なものとして提供され、本発明を制限するものではない。「ＤＮＡの消化」とは、ＤＮＡ中の特定配列にのみ作用する制限酵素でのＤＮＡの触媒的開裂をいう。本明細書の種々の制限酵素は市販されており、それらの反応条件、コファクターおよび使用される他の必要物は知られており、当業者にとり日常的である。分析目的には、典型的には、約２０μｌの反応バッファー中で１μｇのプラスミドまたはＤＮＡフラグメントを約２ユニットの酵素で消化する。プラスミド構築用のＤＮＡフラグメントの単離目的には、典型的には、反応規模に応じて反応体積を増加させて５ないし５０μｇのＤＮＡを２０ないし２５０ユニットの酵素で消化する。個々の制限酵素に適するバッファーおよび基質量は標準的な研究室用マニュアル、例えば、後に引用する文献に記載されており、それらは市販業者により詳述されている。３７℃で１時間のインキュベーション時間を通常使用するが、標準的手順、販売者の指示および個々の反応に応じて条件を変化させてもよい。消化後、反応物を分析することができ、当業者にとり日常的な既知方法を用いてアガロースまたはポリアクリルアミドゲルゲルによる電気泳動によりフラグメントを精製することができる。「遺伝学的エレメント」とは、一般的には、ポリペプチドをコードする領域、あるいは転写または翻訳または宿主細胞におけるポリペプチドの発現にとり重要な他のプロセスを調節する領域を含んでなるポリヌクレオチドを意味し、あるいはポリペプチドをコードする領域および発現調節領域に作動可能に連結された領域の両方を含んでなるポリヌクレオチドを意味する。遺伝学的エレメントはベクター中に含まれていてもよく、ベクターはエピソームエレメントとして複製するものであり、すなわち、宿主細胞ゲノムとは物理的に独立した分子として複製するものである。遺伝学的エレメントは、真核細胞におけるメトトレキセート選択によりトランスフェクションされたＤＮＡの増幅期間中に生じるようなミニ染色体に含まれていてもよい。遺伝学的エレメントは宿主細胞ゲノムに含まれていてもよく、それらは天然の状態でなないが、特に、精製ＤＮＡまたはベクター中の形態で単離、クローニングおよび宿主細胞中へ導入される。「単離」とは、「人の手」によって天然状態から変化させられていることを意味し、すなわち、天然において単離される場合には、本来の環境から変化させられ、あるいは本来の環境から除去されること、あるいはその両方を意味する。例えば、天然状態の生きた動物中に存在する天然のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」されていないが、天然状態における共存物質から分離されている同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、本明細書の用語によれば「単離」されたものである。例えば、ポリヌクレオチドに関しては、用語「単離」は、それが天然において存在している染色体および細胞から分離されていることを意味する。単離の一部として、あるいは単離後に、例えば、突然変異により融合蛋白を得るために、そして宿主中での増殖または発現のために、かかるポリヌクレオチドをＤＮＡのごとき他のポリヌクレオチドに結合させることができる。単離ポリヌクレオチドは、単独またはベクターのごとき他のポリヌクレオチドと結合されて、培養細胞または生物そのものに導入されうる。培養宿主細胞または生物そのものへ導入された場合、本明細書の用語によれば、かかるＤＮＡはやはり単離されるものである。なぜなら、それらは天然に存在する形態でなく、あるいは天然環境に存在するものでないからである。同様に、ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、例えば、培地処方、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの例えば細胞中への導入のための溶液、化学反応または酵素反応のための組成物または溶液（それらは天然には存在しない組成のものであり、その中で単離ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは本明細書にいう単離された状態となっている）の中に存在していてもよい。「連結」とは、しばしば２本鎖ＤＮＡである２個またはそれ以上のポリヌクレオチド間のホスホジエステル結合形成プロセスをいう。連結方法は当該分野においてよく知られており、連結プロトコールは標準的な研究室用マニュアルおよび文献に記載されており、例えば、Sambrook et al.,MOLECULAR CLONING,A LABORA TORY MANUAL,2nd Ed;Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbo r,New York(1989)および下で引用するManiatis et al.,の１４６頁に記載されている。「オリゴヌクレオチド」とは比較的短いポリヌクレオチドをいう。しばしば、該用語は１本鎖デオキシリボヌクレオチドをいうが、１本鎖または２本鎖リボヌクレオチド、ＲＮＡ：ＤＮＡハイブリッドおよびとりわけ２本鎖ＤＮＡも指すことがある。１本鎖ＤＮＡプローブオリゴヌクレオチドのごときオリゴヌクレオチドは、しばしば、自動オリゴヌクレオチド合成のごとき化学的方法により合成される。しかしながら、オリゴヌクレオチドを種々の方法により製造することができ、それらはイン・ビトロ組み換えＤＮＡによる方法ならびに細胞および生物におけるＤＮＡ発現による方法を包含する。化学合成されたＤＮＡは、典型的には最初に５’リン酸を欠く形で得られる。かかるオリゴヌクレオチドの５’末端は、典型的には組み換えＤＮＡ分子を得るためにＤＮＡリガーゼを用いる連結反応によるホスホジエステル結合形成の基質ではない。かかるオリゴヌクレオチドの連結が所望の場合には、キナーゼおよびＡＴＰを用いるような標準的方法によりリン酸を付加することができる。一般的には、化学合成されたオリゴヌクレオチドの３’末端は遊離ヒドロキシル基を有し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼのごときリガーゼの存在下で、別のオリゴヌクレオチドのごとき別ののポリヌクレオチドの５’ホスフェートとの間にホスホジエステル結合を容易に形成する。よく知られているように、所望ならば、連結の前に他のポリヌクレオチドの５’ホスフェートを除去することによりこの反応を選択的に防止することができる。一般的には本明細書において「プラスミド」は、当業者によく知られた慣用的命名法により、大文字および／または数字が前および／または後に続く小文字の「ｐ」により命名される。本明細書開示の出発プラスミドは市販のもの、制限なく公的に利用可能なものであるか、あるいはよく知られた公表された方法を用いて利用可能なプラスミドから日常的に構築可能なものである。本発明により使用可能な多くのプラスミドならびに他のクローニングおよび発現ベクターはよく知られており、当業者が容易に入手できるものである。そのうえ、当業者は、本発明における使用に適するどのような数のプラスミドであっても容易に構築することができる。本発明におけるかかるプラスミドならびに他のベクターの特性、構築および使用は、本開示から当業者に容易に明らかとなろう。一般的には、「ポリヌクレオチド」とはポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドをいい、末修飾ＲＮＡまたはＤＮＡあるいは修飾ＲＮＡまたはＤＮＡであってもよい。よって、例えば、本明細書で使用されるポリヌクレオチドは、特に、１本鎖および２本鎖ＤＮＡ、１本鎖および２本鎖領域の混ざったＤＮＡ、１本鎖および２本鎖ＲＮＡ、および１本鎖および２本鎖領域の混ざったＲＮＡ、１本鎖、より典型的には２本鎖または１本および２本鎖領域の混ざってものであり得るＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子をいう。さらに、本明細書で使用されるポリヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＤＮＡあるいはＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含んでなる３本鎖をいう。かかる領域中の鎖は同じ分子由来であってもよく、また異なる分子由来であってもよい。その領域は１つまたはそれ以上の分子の全体を含みうるが、より典型的には、いくつかの分子の１の領域のみを含む。３本鎖らせん領域の分子の１つは、しばしば、１のオリゴヌクレオチドである。さらに本明細書の用語ポリヌクレオチドは、１個またはそれ以上の修飾塩基を含む上記ＤＮＡまたはＲＮＡを包含する。よって、安定性または他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡは、本明細書にいう「ポリヌクレオチド」である。そのうえ、例えば、２つのみ例を挙げると、イノシンまたはトリチウム化された修飾塩基のごとき修飾塩基を含んでなるＤＮＡまたはＲＮＡも本明細書にいうポリヌクレオチドである。当業者に知られた多くの有用な目的の非常に多くの修飾がＤＮＡおよびＲＮＡについて行われていることが認識されよう。本明細書の用語ポリヌクレオチドは、かかる化学的に、酵素的、あるいは代謝的に修飾された形態のポリヌクレオチド、ならびに、特にウイルスの特徴および単一・複合細胞を包含する細胞の特徴を示すＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。本明細書の用語「ポリペプチド」を以下に説明する。ポリペプチドの基本的構造はよく知られており、当該分野の多数の教科書および他の刊行物に記載されている。この点からすると、用語ポリペプチドは、ペプチド結合により互いに直鎖状に結合した２個またはそれ以上のアミノ酸を含んでなるペプチドまたは蛋白をいうために用いられる。本明細書において該用語は短鎖（当該分野において通常にはペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーという）および長鎖（当該分野において一般的には蛋白といい、種々のタイプがある）の両方をいう。ポリペプチドは、しばしば２０個の天然アミノ酸といわれるもの以外のアミノ酸を含み、プロセッシングおよび他の翻訳後修飾のごとき天然プロセスのみならず当該分野でよく知られた化学的修飾法によっても末端アミノ酸を包含する多くのアミノ酸を一定のポリペプチド中で修飾できることが理解されよう。ポリペプチドにおいて自然に起こる普通の修飾でさえも、ここに挙げるには膨大すぎるが、それらは基本的な教科書およびさらに詳細な研究論文に記載されており、さらには膨大な研究文献にも記載されており、それらは当業者によく知られている。本発明ポリペプチド中に存在してもよい知られている修飾のうち、少しの例を挙げると、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフイド結合の形成、脱メチル化、共有結合による架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシレーション、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白分解的プロセッシング、ホスホリレーション、プレニレーション、ラセミ化、セレノイレーション、硫酸化、アルギニン化のごとき転移−ＲＮＡにより媒介される蛋白へのアミノ酸付加、およびユビキチネーションがある。かかる修飾は当業者によく知られており、科学文献に非常に詳細に記載されている。いくつかの特によく行われる修飾、グリコシレーション、脂質付加、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カルボキシル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰ −リボシル化は、例えばPROTEINS-STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES,2nd Ed .，T．E．Creighton，W．H．Freemen and Company，New York(1993)のごとき最も基本的な教科書に記載されている。多くの詳細なレビューがこの問題について利用でき、例えば、POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICATION OF PROTEINS，B ．C．Johnson，Ed.，Academic Press，New York(1983)中、Wold，F.，Posttrans lational Protein Modifications: Prespectives and Prospects，pgs.1-12； S eifter et al.，Analysis for protein modifications and nonprotein cofacto rs，Meth．Enzymol．182:626-646(1990)およびRattman et al.，Protein Synthe sis: Posttranslational Hodifications and Aging．Ann．N.Y．Acad．Sci．663 :48-62(1992)にある。よく知られていることであるが、上記したように、ポリペプチドは常に完全に直鎖状であるとは限らないことが理解されよう。例えば、一般的には、天然に起こるプロセッシングおよび自然には起こらない人間による操作を包含する翻訳後の出来事の結果として、ポリペプチドは至る所で分枝しており、また、分枝ありまたはなしで環状であったりする。非翻訳的天然プロセスおよび全くの合成法によっても、環状、分枝、および分枝つき環状のポリペプチドが合成されうる。ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノ末端およびカルボキシル末端を包含するポリペプチドのいずれの場所においても修飾が起こり得る。実際、ポリペプチド中のアミノまたはカルボキシル基、あるいはそれら両方の共有結合修飾によるブロックは、天然および合成ポリペプチドにおいてよく起こるものであり、かかる修飾が本発明のポリペプチド中に存在してもよい。例えば、蛋白分解プロセッシングの前にイー・コリ（E.coli）において作られるポリペプチドのアミノ末端残基は、ほとんど例外なくＮ−ホルミルメチオニンであろう。ポリペプチドにおいて生じる修飾は、しばしば、それがいかにして作られるのかという機能であろう。例えば、宿主中でクローン化された遺伝子を発現することにより作られるポリペプチドは、宿主細胞翻訳後修飾能およびポリペプチドアミノ配列に存在する修飾シグナルによって、修飾の性質および程度の大部分が決定される。例えば、よく知られているように、グリコシレーションは、しばしば、イー・コリのごとき細菌宿主においては起こらない。したがって、グリコシレーションが望まれる場合には、ポリペプチドをグリコシレーションする宿主中、一般的には真核細胞中で発現すべきである。昆虫細胞は、しばしば、哺乳動物と同じ翻訳後グリコシレーションを行うので、昆虫細胞発現系は、特に無傷のグリコシレーションパターンを有する哺乳動物蛋白を効率よく発現するために開発されてきた。同様に、他の修飾への応用を考えられる。同じタイプの修飾が一定のポリペプチドにおけるいくつかの部位で、同じ程度かまたは変化して存在し得ることが理解されよう。また、一定のポリペプチドは多くのタイプの修飾を含みうる。一般的には本明細書の用語「ポリペプチド」は、かかる修飾すべてを含み、詳細には、宿主細胞中でポリヌクレオチドを発現させることにより合成されるポリペプチド中に存在する修飾物を含む。本明細書の用語ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの「変種」とは、それぞれ、もとのポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは異なるポリヌクレオチドまたはポリペプチドをいう。この意味において変種は本開示の以下の部分およびいずれかの部分においてより詳細に説明される。（１）変種は、もとのポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列が異なるポリヌクレオチドを包含する。一般的には、相違は、もとのヌクレオチド配列と変種ヌクレオチド配列が全体的に極めて類似し、多くの領域において同一であるようなものに限られる。下記のごとく、変種におけるヌクレオチド配列の変化がサイレントであってもよい。すなわち、それらは、ポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸を変化させなくてもよい。変化がこのタイプのサイレント変化に限定される場合、変種はもとのポリペプチドと同じアミノ酸配列をコードしているであろう。また、下記のごとく、変種におけるヌクレオチド配列の変化が、もとのポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変化させたものであってもよい。下記のごとく、かかるヌクレオチド変化は、もとの配列によりコードされるポリペプチド中のアミノ酸置換、付加、欠失、融合および切断を引き起こし得る。（２）また変種は、もとのポリペプチドとはアミノ酸配列が異なるポリペプチドも包含する。一般的には、相違は、もとのアミノ酸配列と変種アミノ酸配列が全体的に極めて類似し、多くの領域において同一であるようなものに限られる。変種ともとのポリペプチドとは、１個またはそれ以上の置換、付加、欠失、融合および切断によりアミノ酸配列が異なっていてもよく、それらはいずれの組み合わせにおいて存在してもよい。本明細書の用語「受容体分子」は、本発明の分子を示し、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドならびに、好ましくは特に本発明のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドに結合または相互作用する分子、あるいは特に本発明のポリペプチドに結合または相互作用する他の分子（各々「結合分子」および「相互作用分子」と称され、「Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８結合分子」および「Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８相互作用分子」と称される）を包含するがそれらに限定するものではない。本発明のポリペプチドおよび受容体または結合または相互作用分子を包含するかかる分子間の結合は、非常に好ましくは本発明のポリペプチドにしかなく、または非常に好ましくは本発明のポリペプチドに非常に特異的であり得、または好ましくは本発明のポリペプチドを包含する蛋白群に非常に特異的であり得、または少なくとも１個の本発明のポリペプチドを包含する数個の蛋白群に特異的であり得る。また、受容体は本発明のポリペプチドに特異的に結合する抗体および抗体由来の試薬のように非天然であってもよい。発明の詳細な説明本発明は、以下に詳細に説明するように、特に新規Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドおよびポリヌクレオチドに関する。詳細には、本発明は、アミノ酸配列の相同性により、CC CKR1、CC CKR3、CC CKR4およびCC CKR5 ポリペプチドに関連する新規ヒト・Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のポリペプチドおよびポリヌクレオチドに関する。本発明は、特に、図１に示すヌクレオチドおよびアミノ酸配列を有するＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８、ならびにＡＴＣＣ受託番号９８０９９（本明細書では「寄託クローン」または「寄託クローンのｃＤＮＡ」という）中のヒト・ｃＤＮＡのＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列に関する。図１に示すヌクレオチドおよびアミノ酸配列は寄託クローンのｃＤＮＡを配列決定することにより得られたことが理解されるであろう。それゆえ、寄託クローンの配列は二者の不一致について支配的であり、図１の配列に対する言及は寄託クローンのヒト・ｃＤＮＡの配列への言及を包含する。ポリヌクレオチド本発明の１の態様によれば、図１の推定アミノ酸配列を有するＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドが提供される。図１に示すポリヌクレオチド配列のごとき本明細書の情報を用いれば、微小血管内皮組織由来の細胞を出発物質として得られるｍＲＮＡを用いるｃＤＮＡクローニングのための方法のごとき標準的クローニングおよびスクリーニング法を用いてヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドをコードしている本発明ポリヌクレオチドを得ることができる。本発明の説明として、図１に示すポリヌクレオチドは、ヒト微小血管内皮組織の細胞由来のｃＤＮＡライブラリーにおいて開示された。寄託クローン中のヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしているｃＤＮＡの配列決定の結果により示されるように、本発明のヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８は、ケモカイン受容体ファミリーの他の蛋白に構造的に関連している。このようにして得られたｃＤＮＡ配列を図１に示す。それは、推定分子量約３８００ｋＤａの、約３４４個のアミノ酸からなる蛋白をコードしている読み枠を含んでいる。最初の約２０個のアミノ酸は推定上のリーダー配列である。該蛋白は、他の既知蛋白のなかでも、CC CKR3蛋白に対して高い相同性を有する。図１のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８は、CC CKR3のアミノ酸配列に対して約５７．５％の同一性および約５７．５％の類似性をする。本発明ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡのごときＲＮＡ形態であってもよく、あるいは例えばクローニングまたは化学合成法またはそれらの組み合わせにより得られるｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡを包含するＤＮＡ形態であってもよい。ＤＮＡは２本鎖または１本鎖であってよい。１本鎖ＤＮＡはコーディング鎖（センス鎖としても知られる）であってもよく、あるいは非コーディング鎖（アンチ−センス鎖としても知られる）であってもよい。ポリペプチドをコードしているコーディング配列は、図１に示すポリヌクレオチドのコーディング配列と同じであってもよい。コーディング配列は別の配列を有するポリヌクレオチドであってもよく、それは、遺伝コードの重複（縮重）の結果として図１のポリペプチドをコードするものであってもよい。図１のポリペプチドをコードしている本発明ポリヌクレオチドは、それらにより示される成熟ポリペプチドのコーディング配列；当該ポリペプチド配列およびリーダー配列または分泌配列（プレ−またはプロ−またはプレプロ−蛋白配列）をコードしているような付加的配列に関するコーディング配列；さらなる非コーディング配列（例えば、イントロンおよび転写されるが翻訳されない非コーディング５’および３’配列(転写、ｍＲＮＡプロセッシング−スプライシングおよびポリアデニレーションシグナルを包含−リボソーム結合およびｍＲＮＡ安定性において役割を果たす)；さらなるコーディング配列（さらなる官能基を提供するさらなるようなアミノ酸をコードしている）を伴った上記の付加的配列を有するあるいは有していないポリペプチドに関するコーディング配列（これらに限らない）を包含してもよい。よって、例えば、ポリペプチドがペプチドのごときマーカー配列に融合していてもよく、該マーカー配列は融合ポリペプチドの精製を容易にするものであってよい。本発明のこの態様の特定の好ましい具体例において、マーカー配列は、特にｐＱＥベクター（Qiagen,Inc）中のタグのごときヘキサヒスチジンペプチドであり、それらの多くが市販されている。例えば、 Gentz et al.，Proc．Natl．Acad．Sci.，USA 86,821-824(1989)に記載のごとく、ヘキサヒスチジンは融合蛋白の精製を便利にする。ＨＡタグはインフルエンザ・ヘマグルチニン蛋白に対応するものであり、例えば、Wilson et al.，Cell 37 :767(1984)に記載されている。上記によれば、本明細書の用語「ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド」は、本発明ポリペプチド、詳細には、図１に示すアミノ酸配列を有するヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしている配列を含むポリヌクレオチドを包含する。該用語は、さらなる領域（コーディングおよび／または非コーディング配列を含んでいてもよい）を伴ったポリペプチド（例えば、イントロンにより分断されている）をコードしている単一の連続領域または不連続領域を含むポリヌクレオチドも包含する。さらに本発明は、図１の推定アミノ酸配列を有するポリペプチドのフラグメント、アナログおよび誘導体をコードする上記ポリヌクレオチドの変種に関する。ポリヌクレオチドの変種は、天然に存在する対立遺伝子変種のごとき天然に存在する変種であってもよく、あるいは天然に存在することが知られていない変種であってもよい。かかるポリヌクレオチドの非天然変種を、ポリヌクレオチド、細胞または生物に適用される突然変異法を包含する突然変異法により作成してもよい。この点において、ヌクレオチド置換、欠失または付加によって上記ポリヌクレオチドと異なる変種も「変種」に含まれる。置換、欠失または付加には１個またはそれ以上のヌクレオチドが関与しうる。変種はコーディング配列または非コーディング配列あるいはそれらの両方において変化していてもよい。コーディング配列の変化が保存的または非保存的アミノ酸置換、欠失または付加を生じるものであってもよい。この点において本発明の特に好ましい具体例は、図１に示すＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド；その変種、アナログ、誘導体およびフラグメント、ならびにその変種、アナログおよび誘導体のフラグメントである。この点において、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８変種、アナログ、誘導体およびフラグメント、ならびにそのフラグメントの変種、アナログおよび誘導体をコードしているポリヌクレオチドであって、図１のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドのアミノ酸配列を有するものがさらに特に好ましく、該アミノ酸中、いくつかの、少数の、５ないし１０個、１ないし５個、１ないし３、２、１個または０個のアミノ酸残基が置換、欠失または付加されており、あるいはそれらが組み合わされている。これらのうち特に好ましいのは、サイレント置換、付加および欠失であり、それらはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の特性および活性を変化させない。また、この点において、保存的置換が特に好ましい。置換を有しない図１のアミノ酸配列を有しているポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドが最も好ましい。本発明のさらに好ましい具体例は、図１に示すアミノ酸配列を有するＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対して少なくとも７０％同一であるポリヌクレオチド、およびかかるポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドである。あるいはまた、寄託クローンのヒト・ｃＤＮＡのＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対して少なくとも８０％同一である領域を含むポリヌクレオチドおよびそれに相補的なポリヌクレオチドが非常に好ましい。この点において、上記ポリペプチドに対して少なくとも９０％同一であるポリヌクレオチドが特に好ましく、特に好ましいのは、少なくとも９５％同一のものである。さらにそのうえ、少なくとも９７％同一のものが非常に好ましく、少なくとも９８ないし９９％同一のものが特に非常に好ましく、少なくとも９９％のものが最も好ましい。そのうえ、この点において特に好ましい具体例は、図１のｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドのいずれかと実質的に同じ生物学的機能または活性を保持しているポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドである。さらに本発明は、本明細書において上で述べた配列とハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関する。この点において本発明は、特に、厳密な条件下で本明細書において上で述べた配列とハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関する。本明細書の用語「厳密な条件」とは、少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％同一である配列間においてのみハイブリダイゼーションが起こることを意味する。本発明のポリヌクレオチドアッセイに関して本明細書中でさらに論じるように、例えば、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしている全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するため、ならびにヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８遺伝子に非常に類似した配列を有する他の遺伝子のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するために、上で論じたような本発明のポリヌクレオチドをｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡのハイブリダイゼーションプローブとして使用してもよい。かかるプローブは、一般に、少なくとも１５塩基を含むであろう。むしろ、かかるプローブは少なくとも３０塩基を含み、少なくとも５０塩基を有してもよい。特に好ましいプローブは、少なくとも３０塩基を有し、５０塩基かまたはそれよりも少ない塩基を有するであろう。例えば、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８遺伝子のコーディング領域を、オリゴヌクレオチドプローブを合成するために既知ＤＮＡ配列を用いるスクリーニングによって単離してもよい。次いで、本発明の遺伝子の配列と相補的な配列を有する標識化したオリゴヌクレオチドを使用して、ヒトｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮＡのライプラリーをスクリーンし、該プローブがハイブリダイズするライプラリーのメンバーを決定する。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドを特に、ヒト疾病に対する治療および診断の発見のための研究試薬および材料として使用してもよく、さらにポリヌクレオチドアッセイに関連して本明細書中で論じてもよい。ポリヌクレオチドは、当該成熟蛋白およびさらなるアミノもしくはカルボキシル末端アミノ酸、あるいは成熟ポリペプチドに対する内部アミノ酸（例えば、成熟ペプチド形態が１種よりも多いポリペプチド鎖を有する場合）であるポリペプチドをコードしていてもよい。かかる配列は、前駆体から個々の形態への蛋白のプロセッシングにおいて役割を果たしている可能性があり、蛋白輸送を容易にする可能性があり、蛋白半減期を延長または短縮する可能性があり、あるいは特に、アッセイまたは製造のために蛋白の取り扱いを容易にする可能性もある。in s ituにおける一般的な場合には、細胞酵素により、さらなるアミノ酸がプロセッシングにより成熟蛋白から除去されうる。１またはそれ以上のプロ配列に融合した成熟形態のポリペプチドを有する前駆体蛋白は、そのポリペプチドの不活性形態であってもよい。プロ配列が除去される場合、一般的にはかかる不活性前駆体が活性化される。プロ配列のいくつかまたはすべてが活性化前に除去される。一般的にはかかる前駆体はプロ蛋白と呼ばれる。まとめると、本発明ポリヌクレオチドは、成熟蛋白、成熟蛋白およびリーダー配列(プレ蛋白ともいわれる)、プレ蛋白のリーダー配列でない１個またはそれ以上のプロ配列を有する成熟蛋白の前駆体、あるいはリーダー配列および１個またはそれ以上のプロ配列（一般的には、活性形態および成熟形態のポリペプチドを生じるプロセッシング工程の間に除去される）を有するプロ蛋白の前駆体であるプレプロ蛋白をコードしていてもよい。寄託物ヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ｃＤＮＡの寄託は、前記のようにAme rican Type Culture Collectionに寄託された。前記のように、ヒトｃＤＮＡ寄託物を「寄託クローン」または「寄託クローンのｃＤＮＡ」という。寄託クローンは、American Type Culture Collection，12301 Park Lawn Driv e，Rockville，Maryland 20852,USAに、１９９６年７月３日に寄託され、受託番号９８０９９を付与された。寄託材料は、全長のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ｃＤＮＡを含有する組換えエシェリシア・コリ（Escherichia coli）であり、寄託に関して「エシェリシア・コリＨＧＳＨＮＦＤＳ７８(ＡＴＧ７９８)」と称する。寄託は、特許手続き上の微生物寄託の国際承認に関するブダペスト条約の条件下でなされている。特許が発行されると何らの制限または条件もなく、最終的に株は分譲される。寄託は当業者の便宜のためにのみ提供され、３５Ｕ.Ｓ.Ｃ．１１２条のもとに要求されるような、寄託が実施可能要件であることを承認するものではない。寄託材料中の含まれるポリヌクレオチドの配列、ならびにそれによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、本明細書の配列の記載との矛盾が起こった場合に支配的である。寄託物を製造、使用または販売するためにはライセンスが必要であるが、そのようなライセンスはここでは賦与されていない。ポリペプチドさらに本発明は、図１の推定アミノ酸配列を有するヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドに関する。また本発明は、これらのポリペプチドのフラグメント、アナログおよび誘導体に関する。用語「フラグメント」、「誘導体」および「アナログ」は、図１のポリペプチドについていう場合、かかるポリペプチドと本質的に同じ生物学的機能または活性すなわち、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のごとき機能を保持しているポリペプチド、あるいはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のごとき機能を有さないポリペプチドであっても、リガンドまたは受容体、例えば受容体の可溶型を結合する能力を保持しているポリペプチド意味する。よって、アナログは、プロ蛋白部分の開裂により活性化されて活性成熟ポリペプチドを生じうるプロ蛋白を包含する。本発明ポリペプチドは組み換えポリペプチド、天然ポリペプチドまたは合成ポリペプチドであってもよい。特定の好ましい具体例において、本発明ポリペプチドは組み換えポリペプチドである。図１のポリペプチドのフラグメント、誘導体またはアナログは：(ｉ)１個またはそれ以上のアミノ酸残基が保存的または非保存的アミノ酸残基（好ましくは、保存的アミノ酸残基）で置換されており、かかる置換アミノ酸残基は遺伝コードによりコードされているものであっても、コードされていないものであってもよいもの、あるいは（ｉｉ）１個またはそれ以上のアミノ酸残基が置換基を含むもの、あるいは（ｉｉｉ）ポリペプチドの半減期を延長させるような別の化合物（例えば、ポリエチレングリコール）とポリペプチドが融合しているもの、あるいは（ｉｖ）リーダーまたは分泌配列、またはポリペプチドの精製に用いられる配列、またはプロ蛋白配列のごときさらなるアミノ酸がポリペプチドに融合しているものである。かかるフラグメント、誘導体およびアナログは、本明細書の教示から当業者の範囲内であると考えられる。この点において、図１に示すＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のアミノ酸配列を有するポリペプチド、その変種、アナログ、誘導体およびフラグメント、ならびに該フラグメントの変種、アナログおよび誘導体は本発明の特に好ましい具体例に属する。あるいはまた、この点において、本発明の特に好ましい具体例は、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のアミノ酸配列を有するポリペプチド、その変種、アナログ、誘導体およびフラグメント、ならびに該フラグメントの変種、アナログおよび誘導体である。保存的アミノ酸置換によって元のものとは異なる変種も好ましい変種に属する。かかる置換は、ポリペプチド中のあるアミノ酸を同様の特性の別のアミノ酸で置換するものである。典型的に見られるのは、脂肪族アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅ間での相互置換；水酸基を有するＳｅｒおよびＴｈｒの相互置換、酸性残基ＡｓｐおよびＧｌｕの相互置換、アミド残基ＡｓｎおよびＧｌｎ間の置換、塩基性残基ＬｙｓおよびＡｒｇの置換、ならびに芳香族残基Ｐｈｅ、Ｔｙｒ間の置換である。この点において、いくつかの、少数の、５ないし１０個の、１ないし５個の、１ないし３、２、１個の、または０個のアミノ酸残基が置換、欠失または付加（あるいはそれらのいずれかの組み合わせ）されている図１のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドのアミノ酸配列を有する変種、アナログ、誘導体およびフラグメント、ならびに該フラグメントの変種、アナログおよび誘導体がさらに特に好ましい。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の特性および活性を変化させないサイレント置換、付加および欠失がこれらのうちで特に好ましい。また、この点において、保存的置換が特に好ましい。置換のない図１のアミノ酸配列を有するポリペプチドがもっとも非常に好ましい。好ましくは、本発明ポリペプチドおよびポリヌクレオチドは単離形態で提供され、好ましくは均一にまで精製されている。本発明ポリペプチドは、配列番号：２のポリペプチド（詳細には成熟ポリペプチド）ならびに配列番号：２のポリペプチドに対して少なくとも８０％の同一性を有し、より好ましくは配列番号：２のポリペプチドに対して少なくとも９０％の類似性（より好ましくは少なくとも９０％の同一性）を有し、さらにより好ましくは配列番号：２のポリペプチドに対して少なくとも９５％の類似性（さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性）を有するポリペプチドを包含し、また、かかるポリペプチドの部分も包含する(ポリペプチドに対するかかる部分は一般的には少なくとも３０個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも５０個のアミノ酸を含む)。当該分野において周知のように、２個のポリペプチド間の「類似性」は、アミノ酸配列および１ポリペプチドのその保存的アミノ酸置換を２個目のポリペプチドと比較することによって決定される。さらに、また当該分野において周知のように、「同一性」は、２個の連続配列間の合致の同一性により決定される２個のポリペプチドまたは２個のポリヌクレオチド配列間の配列相関の度合を意味する。同一性および類似性の両方は、容易に計算することができる(Computational M olecular Biology，Lesk，A.M.，ed.，Oxford University Press，New York，19 88; Biocomputing: Informatics and Genome Projects，Smith，D.W.，ed.，Aca demic Press，New York，1993; Computer Analysis of Sequwnce Data，PartI， Griffin，A.M.，and Griffin，H.G.，eds.，Humana Press，New Jersey， 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology，von Heinje，G.，Academic P ress，1987; and Sequence Analysis Primer，Gribskov，M．and Devereux，J. ，eds.，M Stockton Press，New York，1991)。２個のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の同一性および類似性を測定する多くの方法が存在する一方で、用語「同一性」および「類似性」は、当業者によく知られている(Sequence Analysis in Molecular Biology，von Heinje，G.，Academic Press，1987; Seq uence Analysis Primer，Gribskov，M．and Devereux，J.，eds.，M Stockton P ress，New York，1991；and Carillo，H.，and Lipman，D.，SIAM J.Applied Ma th.，48：1073(1988))。一般に２配列間の同一性または類似性を決定するために使用される方法は、Guide to Huge Computers，Martin ｊ．Bishop，ed.，Acade mic Press，San Diego，1994，and Carillo，H.，and Limpman，D.，SIAM J．Ap plied Math．48:1073(1988)に開示されているものを包含するが、それに限定するものではない。同一性を決定する好ましい方法は、試験した２配列間で最も大きな合致を与えるように設計されている。同一性および類似性を決定する方法は、コンピュータープログラムに体系化されている。２配列間の同一性および類似性を決定するための好ましいコンピュータープログラムは、ＧＣＧプログラムパッケージ(Devereux，et al.，Nucleic Acids Research 12(1)：387(1984)，BLAS TP，BLASTN，FASTA(Atschul，et al.，J．Molec．Biol．215:403(1990))を包含するがそれに限定するものではない。本発明ポリペプチドのフラグメントまたは部分を、ペプチド合成による対応する全長のポリペプチドの合成に使用してもよい。それゆえ、フラグメントを全長のポリペプチドの製造のための中間体として使用してもよい。本発明ポリペプチドのフラグメントまたは部分を用いて本発明の全長のポリヌクレオチドを合成してもよい。フラグメント本発明のこの態様のなかでも好ましい具体例は、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のフラグメント、最も好ましくは、図１に示されるアミノ酸配列を有するＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のフラグメント、および図１のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の変種ならびに誘導体のフラグメントを含むポリペプチドである。この点において、フラグメントは、前記のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドおよびその変種または誘導体のアミノ酸配列と全部ではないが部分的に完全に同じアミノ酸配列を有するポリペプチドである。かかるフラグメントは「フリー−スタンディング(free-standing)」、すなわち、他のアミノ酸またはポリペプチドの一部でなく、かかるフラグメントが大きなポリペプチド中に含まれていて、その一部分または領域となっていてもよい。大きなポリペプチド中に含まれている場合、現在議論中のフラグメントは、最も好ましくは単一の連続した領域を形成する。しかしながら、単一のより大きなポリペプチド中にいくつかのフラグメントが含まれていてもよい。例えば、特定の好ましい具体例は、宿主における発現のために設計された前駆体ポリペプチド中に含まれていて、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８フラグメントのアミノ末端に融合した異種プレおよびプロ−ポリペプチド領域ならびに該フラグメントのカルボキシル末端に融合したさらなる領域を有している本発明Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドのフラグメントに関する。それゆえ、本明細書における意味の１の態様において、フラグメントとは、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８由来の融合ポリペプチドまたは融合蛋白の一部または部分をいう。本発明ポリペプチドフラグメントの典型例として、長さが約５ないし１５個、１０ないし２０個、１５ないし４０個、３０ないし５５個、４１ないし７５個、４１ないし８０個、４１ないし９０個、５０ないし１００個および７５ないし１００個、９０ないし１１５個、１００ないし１２５個、および１１０ないし１１３個のアミノ酸のものを挙げることができる。この文脈において、「約」とは、特に列挙した範囲、ならびに片方の端または両端において数個、少数、５、４、３、２、１個のアミノ酸の分だけ大きいまたは小さい範囲を包含する。例えば、この文脈において、約４０ないし９０個のアミノ酸は、４０プラスマイナス数個、少数、５、４、３、２、１個から、９０プラスマイナス数個、少数、５、４、３、２、１個までのポリペプチドフラグメントを意味し、すなわち、広くは４０マイナス数個から９０プラス数個のアミノ酸、狭くは４０プラス数個から９０マイナス数個のアミノ酸の範囲である。この点において、列挙した範囲プラスまたはマイナス５個程度のアミノ酸（上限または下限、あるいはそれらの両方の範囲において）が非常に好ましい。列挙した範囲プラスまたはマイナス３個程度のアミノ酸（上限または下限、あるいはそれらの両方の範囲において）が特に非常に好ましい。列挙した範囲プラスまたはマイナス１個程度のアミノ酸（上限または下限、あるいはそれらの両方の範囲において）または列挙した範囲そのものが特に非常に好ましい。この点において、約５ないし１５個、１０ないし２０個、１５ないし４０個、３０ないし５５個、４１ないし７５個、４１ないし８０個、４１ないし９０個、５０ないし１００個および７５ないし１００個、９０ないし１１５個、１００ないし１２５個、および１１０ないし１１３個のアミノ酸の長さのフラグメントが最も好ましい。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の切断された変異種は本発明の特に好ましいフラグメントに含まれる。切断された変異種は、図１のアミノ酸配列を有するＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチド、あるいはその変種または誘導体を包含するが、アミノ末端を含む連続した一連の残基（すなわち、連続した領域、部分または一部分）の欠失、あるいはカルボキシル末端を含む連続した一連の残基の欠失、あるいは二重切断変異種（double truncation mutants）中にあるような２つの連続した残基の欠失（１つはアミノ末端を含み、もう１つはカルボキシル末端を含む）は除く。上に示したサイズ範囲のフラグメントも切断されたフラグメントの好ましい具体例であり、一般的にはそれらはフラグメントのなかでも特に好ましいものである。本発明のこの態様において、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の構造的または機能的属性によって特徴づけられるフラグメントも好ましい。この点において本発明の好ましい具体例は、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のアルファ−ヘリックスおよびアルファ−ヘリックス形成領域(「アルファ−領域」)、ベータ−シートおよびベータ−シート形成領域(「ベータ−領域」)、ターンおよびターン形成領域(「ターン領域」)、コイルおよびコイル形成領域(「コイル−領域」)、親水性領域、疎水性領域、アルファ両親媒性領域、ベータ両親媒性領域、フレキシブル領域、表面形成領域および高抗原性インデックス領域を含んでなるフラグメントを包含する。この点において、いくつかの上記特徴のごときいくつかの構造的特徴を合わせたＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の領域を含んでなるフラグメントは、非常に好ましいフラグメントに属する。この点において、図１の、約１０ないし約２０個、約４０ないし約５０個、約７０ないし約９０個および約１００ないし約１１３個の残基により決定される領域（そのすべてが、ターン領域、親水性領域、フレキシブル領域、表面形成領域および高抗原性インデックス領域の特徴を顕著に有するアミノ酸組成により特徴づけられる）は特に非常に好ましい領域である。かかる領域は大きなポリペプチド中に含まれていてもよく、あるいは上記のごとくそれら自体本発明の好ましいフラグメントでありうる。この段落の用語「約」は一般的なフラグメントに関して上で説明した意味を有する。さらに好ましい領域はＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の活性を媒介する領域である。この点において、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の化学的、生物学的活性または他の活性（類似活性または改善された活性を包含し、または望ましくない活性は減じられている）を有するフラグメントが最も好ましい。この点において、ケモカイン受容体、CC CKR1、CC CKR3、CC CKR4、およびCC CKR5 を包含する関連ポリペプチドのごとき、関連ポリペプチドの活性領域に対して、配列または位置、あるいは配列および位置の両方についての相同物である領域を含むフラグメントが非常に好ましい。前記のように、これらの点において切断変異種は、特に好ましいフラグメントに含まれる。また本発明は、特に、上記フラグメントをコードしているポリヌクレオチド、該フラグメントをコードしているポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションするポリヌクレオチド、詳細には厳密な条件下でハイブリダイゼーションするもの、および該フラグメントをコードしているポリペプチドを増幅するためのＰＣＲプライマーのごときポリヌクレオチドに関することが理解されよう。これらの点において、好ましいポリヌクレオチドは上記のような好ましいフラグメントに対応するポリヌクレオチドである。ベクター、宿主細胞、発現また、本発明は、本発明ポリヌクレオチドを含むベクター、本発明ベクターを用いて遺伝子操作された宿主細胞および組み換え法による本発明ポリペプチドの製造に関する。宿主細胞を遺伝子操作してポリヌクレオチドを含むようにして、本発明ポリペプチドを発現させることができる。例えば、感染、形質導入、トランスフェクション、トランスベクションおよび形質転換のよく知られた方法を用いてポリヌクレオチドを宿主細胞中に導入してもよい。ポリヌクレオチドを単独または他のポリヌクレオチドとともに導入してもよい。かかる他のポリヌクレオチドを本発明ポリヌクレオチドとは別個に、同時に、あるいは本発明ポリヌクレオチドと結合して導入してもよい。よって、例えば、哺乳動物細胞において同時トランスフェクションおよび選択のための標準的方法を用いて、例えば、本発明ポリヌクレオチドを、選択マーカーをコードしているもう１つの別個のポリペプチドとともに宿主細胞中にトランスフェクションしてもよい。この場合、一般的には、ポリヌクレオチドは宿主細胞ゲノム中に安定に取り込まれるであろう。別法として、宿主中での増殖のための選択マーカーを含むベクターにポリヌクレオチドを結合させてもよい。上記方法によりベクター構築物を宿主細胞中に導入してもよい。一般的には、プラスミドベクターを、リン酸カルシウム沈殿のごとき沈殿中、あるいは荷電脂質との複合体中のＤＮＡとして導入する。エレクトロポレーションを用いてポリヌクレオチドを宿主中に導入してもよい。ベクターがウイルスである場合、それをイン・ビトロでパッケージングし、あるいはパッケージング細胞中に導入することができ、パッケージングされたウイルスを細胞中にトランスダクションすることができる。本発明によるポリヌクレオチドの製造および細胞中へのポリヌクレオチドの導入に適した広範囲の方法は当業者によく知られており、日常的なものである。かかる方法は上記Sambrook et al.の文献にようやく記載されたものであり、その文献はこれらの方法を詳述する多くの研究室マニュアルの説明である。本発明のこの態様によれば、ベクターは、例えばプラスミドベクター、１本鎖もしくは２本鎖のファージベクター、１本鎖もしくは２本鎖のＲＮＡまたはＤＮＡウイルスベクターであってよい。細胞中へのＤＮＡおよびＲＮＡ導入のためのよく知られた方法によって、かかるベクターをポリヌクレオチドとして、好ましくはＤＮＡとして細胞中に導入することができる。ファージおよびウイルスベクターの場合、ベクターは感染および形質導入のためのよく知られた方法によって、好ましくは、パッケージングされ、あるいはカプセル封入されたウイルスとしてベクターを細胞中に導入する。ウイルスベクターは複製可能であってもよく、複製欠陥であってもよい。後者の場合、一般的にはウイルス増殖は相補的宿主細胞においてのみ起こるであろう。特定の態様において、本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの発現用ベクターが特に好ましい。一般的には、かかるベクターは、発現されるべきポリヌクレオチドに作動可能に連結された宿主中での発現に効果的なシス−作用性制御領域を含んでなる。適当なトランス−作用性因子は宿主によっても提供され、あるいは相補的ベクターによっても提供され、あるいは宿主中への導入によりベクター自身により提供される。この点において、特定の好ましい具体例において、ベクターは特異的発現を提供する。かかる特異的発現は誘導可能な発現であってもよく、あるいはある種のタイプの細胞においてのみ起こる発現であってもよく、あるいは誘導可能および細胞特異的の両方であってもよい。温度および栄養添加物のごとき操作容易な環境因子による発現に関して誘導されうるベクターが、特に好ましい誘導可能ベクターである。原核細胞および真核細胞宿主において使用される構成的発現ベクターおよび誘導可能発現ベクターを包含する本発明のこの態様に適した種々のベクターは当業者によく知られており、日常的に使用されている。遺伝子操作された宿主細胞を慣用的な培地で培養することができ、特にプロモーターの活性化、形質転換体の選択または遺伝子の増幅に関して、適宜、培地を修飾してもよい。発現用に選択された宿主細胞に関して以前使用されていた温度、ｐＨ等の培養条件は、一般的には、当業者に明らかであるように、本発明ポリペプチドの発現に適するであろう。非常に多種にわたる発現ベクターを用いて本発明ポリペプチドを発現させることができる。かかるベクターは、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクター、例えば、細菌プラスミド由来のベクター、バクテリオファージ由来のベクター、酵母エピソーム由来のベクター、酵母染色体エレメント由来のベクター、バクイロウイルスのごときウイルス、類人猿ウイルス４０（「ＳＶ４０」）のごときパポーバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、フォウルポックスウイルス、偽狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス由来のもの、ならびにコスミドおよびファージミドのごときプラスミドおよびバクテリオファージの遺伝エレメント由来のベクターのごときそれらの組み合わせ由来のベクターを包含し、それらすべてを本発明のこの態様による発現に使用できる。この点において、一般的には、宿主細胞中でのポリヌクレオチドの維持、増殖または発現に適したベクターを発現に用いることができる。種々のよく知られた日常的方法のいずれによっても適当なＤＮＡ配列をベクター中に挿入することができる。一般的には、発現させるＤＮＡ配列および発現ベクターを１種またはそれ以上の制限酵素で開裂し、次いで、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いて制限フラグメントを結合させることにより、発現させるＤＮＡ配列を発現ベクターに結合させる。この目的に用いることのできる制限的開裂および連結の手順は当業者によく知られており、日常的なものである。この点において、別法を用いる発現ベクターの構築のための適当な手順も当業者によく知られており、本明細書の他の場所で引用しているSambrook et al.の文献に非常に詳細に説明されている。発現ベクター中のＤＮＡ配列を適当な発現制御配列（例えば、ｍＲＮＡ転写を指令するプロモーターを包含）に作動可能に連結する。かかるプロモーターの典型例は、ファージラムダＰＬプロモーター、イー・コリのlac、trpおよびtacプロモーター、ＳＶ４０初期および後期プロモーターならびにレトロウイルスＬＴＲプロモーターを包含するが、それらは当業者によく知られているもののほんの例示に過ぎない。ここで述べなかった多くのプロモーターも本発明のこの態様に適し、それらは当業者によく知られており、本明細書で説明され、実施例に示されたようにして容易に使用されうることが理解されるであろう。一般的には、発現構築物は、転写される領域に転写開始部位および終止部位を有し、さらに翻訳のためのリボソーム結合部位を含むであろう。構築物により発現される成熟転写物のコーディング部分は、翻訳されるべきポリペプチドの初めの部分に翻訳開始ＡＵＧを、さらに終わりの部分に適当に位置している終止コドンを含むであろう。さらに、構築物は、発現を調節ならびに発生させる制御領域を含んでいてもよい。一般的には、多くの通常行われる手順によれば、かかる領域は、特に、リプレッサー結合部位およびエンハンサーのごとき転写調節により作動するものであろう。一般的には、増殖および発現のためのベクターは選択マーカーを含むであろう。かかるマーカー遺伝子は、増幅に適当であり得、またはベクターはこの目的のためのさらなるマーカーを含み得る。この点において、好ましい発現ベクターは、１つまたはそれ以上の選択マーカー遺伝子を含んで、形質転換宿主細胞の選択のための表現型上の特徴を与える。好ましいマーカーは、真核細胞用のジヒドロ葉酸レダクターゼまたはネオマイシン耐性、イー・コリおよび他の細菌用のテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性遺伝子を包含するがこれらに限らない。所望ポリペプチドの宿主中での発現に適した種々の既知方法を用いて、上記のような適当なＤＮＡ配列ならびに適当なプロモーター、さらに他の適当な制御配列を含むベクターを適当な宿主中に導入することができる。適当な宿主の典型例は、イー・コリ、ストレプトミセス（Streptomyces）およびサルモネラ・チフィムリウム（Salmonella typhimurium）細胞のごとき細菌細胞；酵母細胞のごとき真菌細胞；ショウジョウバエ S2およびスポドプテラ（Spodoptera）Sf9細胞のごとき昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳおよびボウズ（Bowes）メラノーマ細胞のごとき動物細胞；ならびに植物細胞を包含する。多種の発現構築物用宿主がよく知られており、当業者は本開示により本発明のこの態様におけるポリペプチドの発現のための宿主を容易に選択することができよう。より詳細には、本発明は、発現構築物のごとき組み換え構築物も包含し、それらは１種またはそれ以上の上記配列を含んでなる。構築物は、本発明のかかる配列が挿入されたプラスミドまたはウイルスベクターのごときベクターを含む。配列を順方向または逆方向に挿入することができる。この点において、特定の好ましい具体例において、構築物はさらに、例えば該配列に作動可能に連結されたプロモーターを包含する調節配列を含んでなる。多数の適当なベクターおよびプロモーターが当業者に知られており、本発明における使用に適した多くのベクターが市販されている。市販されている下記ベクターを例示する。それらのうち、細菌での使用に適するのはｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０およびｐＱＥ−９(Qiagenから市販)；ｐＢＳベクター、Phagescriptベクター、Bluescriptベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ(Stratageneから市販)；ならびにｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（Pharmaci aから市販）である。それらのうち、好ましい真核細胞ベクターはｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ(Stratageneから市販)；ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧおよびｐＳＶＬ（Pharmaciaから市販）である。これらのベクターは多くの市販ベクターの例示のためにのみ挙げたのであり、それらは本発明のこの態様により使用するために当業者によく知られたものである。例えば、宿主中における本発明ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの導入、維持、増殖または発現に適する他のプラスミドまたはベクターを本発明のこの態様に使用してもよいことが理解されよう。制限部位または候補プロモーターフラグメント（すなわち、プロモーターを含み得るフラグメント）導入部位の下流のクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）転写ユニットのごとき、プロモーター領域を欠くレポーター転写ユニットを含むベクターを用いてプロモーター領域をいずれの所望遺伝子からも選択できる。よく知られているように、ベクター中のｃａｔ遺伝子上流の制限部位でのプロモーター含有フラグメントの導入は、ＣＡＴ活性の発生を引き起こし、それを標準的ＣＡＴアッセイにより検出することができる。この目的に適するベクターはよく知られており、容易に入手できる。２種のかかるベクターはｐＫＫ２３２−８およびｐＣＭ７である。よって、本発明ポリヌクレオチドの発現用のプロモーターはよく知られていて容易に入手できるものを包含するだけでなく、レポーター遺伝子を用いて上記方法により容易に得ることのできるプロモーターも包含する。イー・コリlacIおよびlacZおよびT3およびT7プロモーター、gptプロモーター、ラムダPR、PLプロモーターならびにtrpプロモーターは、本発明によるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの発現に適した既知細菌プロモーターに属する。サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）即時初期プロモーター、ＨＳＶチミジンキナーゼプロモーター、初期および後期ＳＶ４０プロモーター、例えばラウス（Rous ）サルコーマウイルス（ＲＳＶ）のごときレトロウイルスＬＴＲｓのプロモーター、ならびにマウス・メタロチオネイン−Ｉプロモーターのごときメタロチオネインプロモーターは、この点において適する知られている真核細胞プロモーターに含まれる。宿主細胞中での発現に適するベクターおよびプロモーターの選択はよく知られた手順であり、発現ベクターの構築、宿主中へのベクターの導入および宿主における発現に関する精妙な方法は当業者にとり日常的なものである。また本発明は、上記構築物を含む宿主細胞に関する。宿主細胞は哺乳動物細胞のごとき高等真核細胞であってもよく、あるいは酵母細胞のごとき下等真核細胞であってもよく、また、宿主細胞は細菌細胞のごとき原核細胞であってもよい。リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストランにより媒介されるトランスフェクション、カチオン性脂質により媒介されるトランスフェクション、エレクトロポレーション、トランスダクション、感染または他の方法により宿主細胞中への構築物の導入を行うことができる。かかる方法は多くの標準的研究室マニュアル、例えばDavis et al．BASIC METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY(1986)に記載されている。宿主中の構築物を慣用的方法で使用して、組み換え配列によりコードされた遺伝子産物を得ることができる。別法として、慣用的ペプチド合成装置により本発明ポリペプチドを合成的に得ることもできる。適当なプロモーターの制御下で、哺乳動物細胞、酵母、細菌、または他の細胞において成熟蛋白を発現させることができる。本発明ＤＮＡ構築物由来のＲＮＡを用いる無細胞翻訳系を用いてかかる蛋白を得ることもできる。原核宿主および真核宿主についての使用に適するクローニングベクターおよび発現ベクターは上で引用したSambrook et al.，HOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，2nd E d.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N．Y．(1989 )により記載されている。一般的には、組み換え発現ベクターは、複製起点、下流構造配列の転写を指令する高発現遺伝子由来のプロモーター、およびベクターに細胞を曝露した後のベクター含有細胞の単離を可能にする選択マーカーを含むであろう。特に、３−ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）のごとき糖分解酵素、ａ−ファクター、ホスファターゼ、および熱ショック蛋白をコードしている遺伝子由来のプロモーターが適当なプロモーターである。選択可能マーカーは、イー・コリのアンピシリン耐性遺伝子およびエス・セレビシエ（S.cerevisiae）のｔｒｐ１遺伝子を包含する。ベクター中にエンハンサー配列を挿入することにより、本発明ポリペプチドをコードしているＤＮＡの高等真核細胞による転写を増大させることができる。エンハンサーはＤＮＡのシス−作用性エレメントであり、通常には、約１０ないし３００ｂｐであり、特定の宿主細胞タイプにおけるプロモーターの転写活性を増大するように作用する。エンハンサーの例は、複製起点の後期側１００ないし２７０ｂｐに位置するＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーター、複製起点の後期側にあるポリオーマエンハンサー、ならびにアデノウイルスエンハンサーを包含する。一般的には、本発明ポリペプチドの異種構造配列をコードしている本発明ポリヌクレオチドを標準的方法を用いてベクター中に挿入して、それが発現用プロモーターに作動可能に連結されるようにする。転写開始部位がリボソーム結合部位の５’付近に位置するようにポリヌクレオチドを置く。リボソーム結合部位は、発現されるポリペプチドの翻訳を開始するＡＵＧの５’である。一般的には、開始コドン（通常にはＡＵＧ）から始まる他の読み枠は存在せず、他の読み枠はリボソーム結合部位と開始ＡＵＧとの間には存在しないであろう。また、一般的には、ポリペプチド末端に翻訳終止コドンが存在し、転写される領域の３’末端に適当に分散して存在するポリアデニレーションシグナルおよび転写終止シグナルが存在するであろう。翻訳された蛋白の小胞体ルーメン中、ペリプラスム空間中または細胞外環境中への分泌のために、適当な分泌シグナルを発現されるポリペプチド中に組み込むことができる。シグナルはポリペプチドに対する内在性のものであってもよく、あるいは異種シグナルであってもよい。ポリペプチドを、融合蛋白のごとき修飾形態で発現させてもよく、それは分泌シグナルのみならずさらなる異種機能領域を含んでいてもよい。よって、例えば、さらなるアミノ酸の領域、詳細には荷電アミノ酸の領域をポリペプチドのＮ末端に付加して宿主細胞中、精製中またはさらなる取り扱いおよび保存中の安定性および維持を改善してもよい。また、精製を容易にする領域をポリペプチドに付加してもよい。最終的なポリペプチドの調製の前にかかる領域を除去することができる。特に、分泌または外分泌を引き起こすための、安定性を改善するための、そして精製を容易にするためのペプチド部分のポリペプチドへの付加は当業者によく知られている日常的方法である。好ましい融合蛋白は、受容体を可溶化するのに有用な免疫グロブリン由来の異種領域を含む。例えば、ＥＰ−Ａ−Ｏ４６４５３３（カナダ対応出願第２０４５８６９号）は、別のヒト蛋白またはその部分を伴う免疫グロブリン分子の一定領域の様々な部分を含んでなる融合蛋白を開示する。多くの場合、融合蛋白のＦｃ部分は、治療および診断における使用に全く有効で、従って例えば、改善された薬物動力学的特性を生じる(ＥＰ−Ａ−０２３２２６２)。一方、いくつかの使用のために、記載の有効な方法において融合蛋白が発現、検出および精製された後で、Ｆｃ部分を削除できることが望ましい。これは、Ｆｃ部分が治療および診断における使用に対して障害であることを証明するとき、例えば、融合蛋白が免疫化の抗原として使用される場合である。薬物発見において、例えば、shIL5-のごときヒト蛋白は、hIL-5のアンタゴニストを同定するために、高処理量スクリーニングアッセイの目的でＦｃ部分と融合された(D．Bennett et al.，Journal of Molecular Recognition 8:8 52-58(1995) and K．Johanson et al.，The Journal of Biological Chemistry 270:16，pp94 59-9471(1995)参照)。本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの増殖、維持または発現に適した原核宿主は、エシェリシア・コリ、バチルス・ズブチリス（Bacillus subtilis ）およびサルモネラ・チフィムリウム（Salmonella typhimurium）を包含する。シュードモナス(Pseudomonas)、ストレプトミセス（Streptomyces）およびスタフィロコッカス（Staphylococcus）の種々の種はこの点において適当な宿主である。そのうえ、この点において当業者に知られている他の多くの宿主も使用可能である。典型的であるが限定的でない例として、細菌用途の有用発現ベクターは、選択可能マーカーおよび市販プラスミド（よく知られたクローニングベクターｐＢＲ３２２（ＡＴＣＣ３７０１７）の遺伝学的エレメントを含んでなる）由来の細菌の複製開始点を含んでなる。かかる市販ベクターは、例えば、ｐＫＫ２２３−３（Pharmacia Fine Chemicals，Uppsala，Sweden）およびＧＥＭ１（Promega Bio tec，Madison，WI，USA）を包含する。これらのｐＢＲ３２２「骨格」部分を適当なプロモーターおよび発現すべき構造配列と結合する。適当な宿主株の形質転換および適当な細胞密度までの宿主株の増殖の後、選択したプロモーターが誘導可能である場合には、適当な手段（例えば、温度シフトまたは化学誘導剤への曝露）によりそれを誘導し、適当時間細胞を培養する。典型的には、次いで、細胞を遠心分離により集め、物理的または化学的手段により破壊し、得られた粗抽出物をさらなる精製に供する。凍結−融解繰り返し、ソニケーション、機械的破壊を包含する慣用的方法、あるいは当業者によく知られた細胞溶解剤の使用により、蛋白発現に使用する徴生物細胞を破壊することができる。かかる方法は、当業者によく知られている。同様に、種々の哺乳動物細胞培養系を発現に使用することができる。哺乳動物発現系の例は、Gluzman et al.，Cell 23:175(1981)に記載されたサル・腎臓線維芽細胞ＣＯＳ−７細胞系を包含する。適合するベクターを発現させうる他の細胞系は、例えば、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、Ｈｅｌａ、ヒト・腎臓２９３およびＢＨＫ細胞を包含する。哺乳動物発現ベクターは、複製起点、適当なプロモーターおよびエンハンサー、ならびに必要なリボソーム結合部位、ポリアデニレーション部位、スプライスドナーおよびアクセプター部位、転写終止配列、および発現に必要とされる５’ 隣接非転写配列を含んでなる。この点において、特定の好ましい具体例において、ＳＶ４０スプライス部位由来のＤＮＡ配列、およびＳＶ４０ポリアデニレーション部位が、これらのタイプの所望の非転写遺伝学的エレメントとして用いられる。硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを包含するよく知られた方法により、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドを組み換え細胞培養物から回収し、精製することができる。最も好ましくは、高品質液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を精製に用いる。単離または精製中にポリペプチドが変性している場合には、蛋白の再生のためのよく知られた方法を用いて活性コンホーメーションを再生することができる。本発明ポリペプチドは、天然の精製ポリペプチド、化学合成法により得られるポリペプチド、細菌、酵母、高等植物、昆虫および哺乳動物細胞を包含する原核細胞または真核細胞から組み換え法により得られるポリペプチドを包含する。組み換え法に使用する宿主によっては、本発明ポリペプチドはグリコシレーションされていてもよく、されていなくてもよい。さらに、いくつかの場合、宿主によるプロセスの結果として本発明ポリペプチドは最初の修飾されたメチオニン残基を含みうる。本発明に従って、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを種々の適用例、詳細にはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の化学的および生物学的特性を用いる適用例に使用することができる。さらなる適用例は、細胞、組織および器官の疾病の診断および治療に関する。本発明のこれらの態様を以下の議論によってさらに説明する。ポリヌクレオチドアッセイ本発明は、例えば診断試薬としての相補的ポリヌクレオチドの検出のためのＧ −蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリヌクレオチドの使用に関する。機能不全に関連した変異形態のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の検出は、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の発現低下、発現過剰または変化した発現から生じる疾病の診断またはかかる疾病に対する感受性に関する診断に付加しうる、あるいはかかる診断を明確化しうる診断道具を提供するであろう。ヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８遺伝子における変異を有する個体を、種々の方法により、ＤＮＡレベルにおいて検出することができる。診断のための核酸を、患者の細胞、体液 (例えば、血液、尿、唾液)、生検および剖検材料から得ることができる。ゲノムＤＮＡを検出用に直接使用してもよく、あるいは分析前にＰＣＲ（Saiki et al. ,Nature,324:163-166(1986)）を用いることにより酵素的に増幅してもよい。ＲＮＡまたはｃＤＮＡを同じように使用してもよい。一例として、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしている核酸に相補的なＰＣＲプライマーを用いてＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の発現および変異を同定および分析することができる。例えば、正常遺伝子型との比較における増幅生成物のサイズの変化により、欠失および挿入を検出することができる。増幅したＤＮＡを放射性標識Ｇ −蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ＲＮＡとハイブリダイゼーションさせることにより、あるいは別法として放射性標識Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８アンチセンスＤＮＡ配列とハイブリダイゼーションさせることにより点突然変異を同定することができる。好ましくは、ＲＮａｓｅＡ消化または融点温度の相違により、合致した配列と合致しない２本鎖とを識別することができる。直接ＤＮＡ配列決定により、もとの遺伝子と変異を有する遺伝子との間の配列の相違も明らかとなりうる。さらに、クローンされたＤＮＡセグメントをプローブとして用いて特定のＤＮＡ配列を検出してもよい。ＰＣＲまたは他の増幅方法を適当に用いることにより、かかる方法の感度をおおいに向上させることができる。例えば、配列決定プライマーを、２本鎖ＰＣＲ生成物またはＰＣＲ変法により得られた１本鎖鋳型分子とともに使用する。放射性標識を用いる慣用的方法により、あるいは蛍光タグを用いる自動配列決定法により配列決定を行う。変性剤有りまたは無しにおけるゲル中のＤＮＡの電気泳動の移動度の変化を検出することにより、ＤＮＡ配列の相違に基づく遺伝学的試験を行うことができる。高分解能ゲル電気泳動により、小規模な配列の欠失および挿入を可視化することができる。個々の融点または部分的に融解する温度によってＤＮＡフラグメントがゲル中の異なる位置において移動が阻止される変性ホルムアミド濃度勾配ゲル上で異なる配列のＤＮＡフラグメントを識別することができる(例えば、Myers et al.,Science,230:1242(1985)参照)。ＲＮａｓｅおよびＳ１保護のごときヌクレアーゼ保護アッセイまたは化学的開裂法により、特定の位置における配列の変化も明らかとなる(例えば、cotton et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,85:4397-4401(1985))。よって、ハイブリダイゼーション、ＲＮａｓｅ保護、化学的開裂、直接ＤＮＡ配列決定または制限酵素の使用（例えば、制限フラグメント長多型性(ＲＦＬＰ) ）およびゲノムＤＮＡのサザンブロッティングのごとき方法により、特定のＤＮＡ配列の検出を行うことができる。より慣用的なゲル電気泳動およびＤＮＡ配列決定以外にも、in situ分析によって突然変異を検出することができる。本発明のさらなる態様によれば、アテローム性動脈硬化、再狭窄、卒中、炎症性疾患、および感染、例えば細菌性、真菌性、原生動物性、および特に例えばＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされるようなウイルス感染、あるいはこれらの疾病に対する感受性の決定方法が提供される。従って、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８中の変異は、アテローム性動脈硬化、再狭窄、卒中、炎症性疾患、および感染、特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされるようなウイルス感染に対する感受性を示しうるものであり、上記核酸配列をかかる感受性の確認のためのアッセイ用いてもよい。よって、例えば、該アッセイを用いて上記ヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８蛋白における変異、例えば、欠失、切断、挿入、フレームシフト等（かかる変異はアテローム性動脈硬化、再狭窄、卒中、炎症性疾患、および感染、特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされるようなウイルス感染に対する感受性を示すものである）を決定してもよい。例えば、ＤＮＡ配列決定アッセイを用いて変異を確認することができる。血液試料（これに限らない）を包含する組織試料をヒト患者から得る。当該分野で知られた方法により試料を処理してＲＮＡを捕捉する。ｍＲＮＡに存在するポリアデノシン伸長部分にハイブリダイゼーションするポリチミジン残基からなるオリゴヌクレオチドプライマーを添加することにより、第１鎖ｃＤＮＡをＲＮＡ試料から合成する。逆転写酵素およびデオキシリボヌクレオチドを添加して第１鎖ｃＤＮＡを合成する。本発明ＤＮＡ修復蛋白のＤＮＡ配列に基づいてプライマー配列を合成する。一般的には、プライマー配列は少なくとも１５個の連続した塩基を含んでなり、少なくとも３０個またはちょうど５０個の連続した塩基を含んでいてもよい。ＲＴ−ＰＣＲを用いて変異を検出することもできる。ＲＴ−ＰＣＲを、自動検出システム、例えば、GeneScanのごときシステムと組み合わせて用いることが特に好ましい。ＲＮＡまたはｃＤＮＡもまた、同じ目的、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲに用いてもよい。一例として、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしている核酸に相補的なＰＣＲプライマーを用いて変異を同定し分析することができる。典型的なプライマーの例は、下記表１に示す。正常な遺伝子型と比較した場合の増幅生成物のサイズの変化により、欠失および挿入を検出することができる。増幅ＤＮＡを放射性標識ＲＮＡと、あるいは別法として放射性標識アンチセンスＤＮＡ配列とハイブリダイゼーションさせることにより、点突然変異を同定することができる。ＲＮａｓｅＡ消化または融解温度の相違により、完全に合致した配列を合致しない二本鎖から識別することができる。上記プライマーを、患者からの試料より単離したＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ｃＤＮＡの増幅に用いることができる。また本発明は、５’および／または３’末端から１、２、３または４個のヌクレオチドが除去されたプライマーに関する。該プライマーを用いて患者から単離した遺伝子を増幅して、次いで、遺伝子を種々の方法に供してＤＮＡ配列を調べることができる。このようにして、ＤＮＡ配列における変異を診断することができる。もとの遺伝子および変異を有する遺伝子間の配列相違を直接ＤＮＡ配列決定法によって明らかにすることができる。さらに、クローン化ＤＮＡセグメントをプローブとして使用して、特異的ＤＮＡセグメントを検出し得る。該方法の感度は、ＰＣＲと組みあわせると、非常に増強される。例えば、配列決定プライマーを２本鎖ＰＣＲ産物またはＰＣＲ変法によって生じた１本鎖鋳型分子と共に使用する。配列決定は、放射性標識した核酸を用いる慣用的方法によって、または蛍光タグを用いる自動配列決定法によって行う。ＤＮＡ配列差異に基づく遺伝学的試験は、変性剤を用いるまたは用いないゲル中のＤＮＡフラグメントの電気泳動移動度における変化を検出することによって達成され得る。小配列欠失および挿入を高分離ゲル電気泳動によって明視化することができる。個々の融点または部分的に融解する温度によってＤＮＡフラグメントの移動がゲル中の異なる位置において阻止される変性ホルムアミド濃度勾配ゲル上で、異なる配列のＤＮＡフラグメントを識別することができる(例えば、M yers et al.,Science,230:1242(1985)参照)。ＲＮａｓｅおよびＳ１保護のごときヌクレアーゼ保護アッセイまたは化学的開裂法により、特定の位置における配列の変化も明らかとなる(例えば、Cotton et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,85:4397-4401(1985))。よって、ハイブリダイゼーション、ＲＮａｓｅ保護、化学的開裂、直接ＤＮＡ配列決定または制限酵素の使用（例えば、制限フラグメント長多型性(ＲＦＬＰ) ）およびゲノムＤＮＡのサザンブロッティングのごとき方法により、特定のＤＮＡ配列の検出を行うことができる。本発明は、疾病、特にアテローム性動脈硬化、再狭窄、卒中、炎症性疾患、および感染、例えば細菌性、真菌性、原生動物性、および特に例えばＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされるようなウイルス感染、最も特には心血管疾患ならびに感染性症の診断方法であって、図１（配列番号：１）の配列を有するポリヌクレオチドの発現レベルを減少させた患者から得た試料から測定することを特徴とする方法を提供する。ポリヌクレオチドの減少された発現は、ポリヌクレオチドを定量化するための当該分野で周知の方法、例えば、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮａｓｅ保護、ノーザンブロッティングおよび他のハイブリダイゼーション法のいずれか１つを用いて測定することができる。より慣用的なゲル電気泳動法およびＤＮＡ配列決定以外に、in situ分析によっても変異を検出することができる。中期染色体スプレッドに対するｃＤＮＡクローンの蛍光in situハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を用いて、正確な染色体位置を提供することができる。いかにしてこれを行うかについての一例として、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ＤＮＡをＱＩＡＥＸIIＤＮＡ精製キット(QIAGEN，Inc.，Chatsworth，CA) を用いて消化および精製し、Super Cos１コスミドベクター(STRATAGENE，La Jol la，CA)に対して連結反応を行った。ＤＮＡをQiagen Plasmid Purification Kit （QIAGEN，Inc.，Chatsworth，CA）で精製し、１ｍｇをビオチン−ｄＡＴＰ存在下でBioNick Labelling Kit(GibcoBRL，Life Technologies Inc.，Gaithers burg，MD)を用いてニックトランスレーションによって標識化した。ビオチニル化は、GENE-TEBT Detection System（CLONTECH Laboratories，Inc.Palo Alto， CA）を用いて検出した。in situハイブリダイゼーションは、ONCOR Light Hybri dization Kit(ONCOR，Gaitherberg，MD)を用いてスライド上で行い、中期染色体上で単一コピーを検出した。正常なドナーの末梢血を２０％ＦＣＳ、３％ＰＨＡおよびペニシリン／ストレプトマイシンを補足したＰＲＭＩ１６４０上で３日間培養し、１０^-7Ｍメトトレキサートで１７時間同調させ、非補足ＰＲＭＩで２回洗浄した。細胞を１０^-3Ｍチミジンで７時間インキュベートした。細胞をコルセミド（０．５μｇ／ｍｌ）と共に２０分間インキュベーション後、分裂中期において停止させ、次いで７５ｍＭＫＣｌ中で３７℃にて１５分間低張溶解した。次いで、細胞ペレットを遠心分離で集め、Carnoy固定液（３：１メタノール／酢酸）中で固定した。懸濁液をスライド上へ滴下することによって、中期スプレッドを調製し、自然乾燥させた。ヒト胎盤ＤＮＡ１μｇ／ｍｌでブロッキングしつつ、１０ｍｌのハイブリダイゼーション混合液（５０％ホルムアミド、２ｘＳＳＣ、１％硫酸デキストラン）中に懸濁させた１００ｎｇのプローブを添加することによって、ハイブリダイゼーションを行った。プローブ混合液を７０℃ウォーターバス中で１０分間変性させ、３７℃で１時間インキュベートした後、予め温めた(３７℃)スライド（前以って７０℃にて７０％ホルムアミド／２ｘＳＳＣ中で変性させて、一連のエタノール処理で脱水し、４℃に冷却しておいた）上に載せた。スライドを加湿チャンバー中３７℃にて１６時間インキュベートした。スライドを５０％ホルムアミド／２ｘＳＳＣ中４１℃で１０分間、および２ｘＳＳＣ中３７℃で７分間洗浄した。製造者のプロトコールに従って、ハイブリダイゼーションプローブをＦＩＴＣ−アビジン（ONCOR，Gaithersberg，MD）とともにスライドをインキュベーションすることによって検出した。マウンティング媒体（mo unting medium）中にに懸濁したヨウ化プロプリジウムで染色体を対比染色した。Leitz ORTHOPLAN ２−エピ蛍光顕微鏡を使用してスライドを明視化し、 Imageneticsコンピューターおよびマッキントッシュプリンターを使用して５つのコンピューター画像を得た。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を染色体３ｐ２１に対してマッピングする。一旦、配列を正確な染色体上の位置にマッピングしたら、染色体上の該配列の物理的位置を、遺伝子地図データと関連付けることができる。かかるデータは、例えば、コンピューターを介してオンラインで公的に利用できるV．McKusick，M endelian Inheritance in Manにある。次いで、同じ染色体領域上でマッピングされた遺伝子と疾病の関係を連鎖分析（物理的に隣接する遺伝子の共同遺伝）を介して同定する。別に提示しないかぎり、形質転換は、Graham，F.およびVan der Eb，A.，Viro logy，52:456-457(1973)の方法における記載の通りに行われた。染色体アッセイ本発明配列は染色体の同定にも価値がある。配列は個々のヒト・染色体上の特定位置に特別に標的化されており、これとハイブリダイゼーションしうる。そのうえ、染色体上の特定部位を同定する必要性が現在ある。実際の配列データ（繰り返し多型性）に基づいて染色体をマーキングする少数の試薬が染色体のマーキングに現在利用できる。本発明による染色体へのＤＮＡのマッピングは、配列を疾病関連遺伝子と関連づけることにおいて重要な最初の工程である。この点における特定の好ましい具体例において、本明細書中に開示されたｃＤＮＡを使用して、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８遺伝子のゲノムＤＮＡをクローン化する。これは、様々なよく知られた技法および一般に市販されているライプラリーを用いて達成できる。ゲノムＤＮＡをこの目的で、よく知られた技法を用いるin situ染色体マッピングに使用する。典型的に、染色体マッピングの日常の手法によると、いくつかの試みおよび誤りが、良いin situハイブリダイゼーションシグナルを与えるゲノムプローブの同定に必要とされ得る。さらにいくつかの場合、ｃＤＮＡからＰＣＲプライマー（好ましくは１５ないし２５ｂｐ）を調製することにより、配列を染色体にマッピングすることができる。遺伝子の３’非翻訳領域のコンピューター分析を用いてゲノムＤＮＡ中の１つよりも多いエキソンにまたがらないプライマーを迅速に選択し、かくして、増幅過程を複雑化する。次いで、これらのプライマーを、個々のヒト染色体を含有する体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングに用いる。プライマーに対応したヒト遺伝子を含有するハイブリッドのみが増幅フラグメントを生じるであろう。体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、個々のＤＮＡを個々の染色体に帰属するための迅速な手順である。同じオリゴヌクレオチドプライマーに関して本発明を用いて、類似の方法で特定の染色体由来のフラグメントのパネルまたは大きなゲノムクローンのプールに関して下位の位置決めを行うことができる。染色体へのマッピングに同様に用いることのできる他のマッピング法は、in situハイブリダイゼーション、標識フロー−ソーテッド（flow-sorted）染色体に関するプレスクリーニングおよび染色体特異的ｃＤＮＡライプラリーを構築するためのハイブリダイゼーションによるプレセレクションを包含する。中期染色体スプレッドに対するｃＤＮＡクローンの蛍光in situハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を用いて、正確な染色体位置を一工程で知ることができる。この方法を５０または６０ｂｐ程度の短いｃＤＮＡとともに用いることができる。この技法に関するレビューについては、Verma et al.,HUMAN CHROMOSOME: A MANUAL OF BASIC TECHNIQUES，Pergamon Press，New York(1988)を参照。一旦、配列が正確な染色体位置にマッピングされたら、遺伝学的地図のデータと染色体上の配列の物理的位置を関連付けることができる。かかるデータは、例えば、V．McKusick，Mendelian Inheritance in Man（Johns Hopkins Universit y Welch Medical Libraryよりオンラインで利用可能）に見いだされる。次いで、連鎖分析（物理的に隣接した遺伝子の共同遺伝）により、同じ染色体にマッピングされた遺伝子と疾病との関連を確認する。次に、疾病にかかっている個体および疾病にかかっていない個体間のｃＤＮＡまたはゲノム配列の相違を決定することが必要である。疾病にかかっている個体の一部または全部において変異が観察されるが正常個体においては変異が観察されない場合には、その変異は疾病の病因である可能性がある。物理的マッピングおよび遺伝学的マッピング法の現在の分離能によれば、疾病に関連した染色体領域に正確に位置決めされるｃＤＮＡは５０ないし５００個の潜在的病因遺伝子のうち１つでありうる(１メガベースのマッピング分離能とし、２０ｋｂにつき１個の遺伝子と仮定)。ポリペプチドアッセイ本発明は、正常および異常なレベルの決定を包含する、細胞および組織中のＧ −蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８蛋白レベルの検出のための定量および診断アッセイのごとき診断アッセイにも関する。よって、例えば、正常対照組織試料と比較して本発明Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８蛋白の過剰発現を検出するための本発明診断アッセイを用いて、例えば腫瘍の存在を検出してもよい。宿主由来の試料中の本発明Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８蛋白のごとき蛋白のレベルを決定するのに用いることのできるアッセイ法は当業者によく知られている。かかるアッセイ法は、ラジオイムノアッセイ、競争結合アッセイ、ウェスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイを包含する。これらのうち、ＥＬＩＳＡがしばしば好ましい。ＥＬＩＳＡアッセイでは、最初に、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に対して特異的な抗体、好ましくはモノクローナル抗体を調製することを特徴とする。さらに、一般的には、モノクローナル抗体に結合するレポーター抗体を調製する。レポーター抗体は、放射性試薬、蛍光試薬または酵素試薬検のごとき検出可能試薬に結合しているが、この実施例では西洋ワサビ・ペルオキシダーゼ酵素に結合している。ＥＬＩＳＡを行うために試料を宿主から取り、試料中の蛋白を結合する固体支持体、例えば、ポリスチレンディッシュ上でインキュベーションする。次いで、ウシ・血清アルブミンのごとき非特異的蛋白とともにインキュベーションすることによりディッシュ上の遊離の蛋白結合部位を被覆する。次に、モノクローナル抗体をディッシュ中でインキュベーションし、その間にモノクローナル抗体は、ポリスチレンディッシュに結合しているＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８蛋白に結合する。未結合モノクローナル抗体をバッファーで洗浄除去する。西洋ワサビ・ペルオキシダーゼに結合されたレポーター抗体をディッシュ中に置き、レポーター抗体といずれのＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に結合しているモノクローナル抗体との結合を生じさせる。次いで、未結合レポーター抗体を洗浄除去する。次いで、発色基質を包含するペルオキシダーゼ活性のための試薬をディッシュに添加する。１次抗体および２次抗体によりＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に結合し、固定化されているペルオキシダーゼは着色反応生成物を生じる。一定時間の発色量は試料中のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８蛋白量を示す。典型的には、標準曲線を参照して定量結果を得る。固体支持体に結合したＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８特異的抗体および標識Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８および宿主由来の試料が固体支持体上に通される競争アッセイを用いてもよい。固体支持体に結合した検出標識量は試料中のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８量と相関関係を有しうる。抗体ポリペプチド、それらのフラグメントもしくは他の誘導体、またはそれらのアナログ、またはそれらを発現する細胞を免疫原として用いてそれらに対する抗体を作ることができる。これらの抗体は、例えば、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体でありうる。また本発明は、キメラ、１本鎖およびヒト化抗体ならびにＦａｂフラグメント、またはＦａｂ発現ライプラリーの生成物を包含する。当該分野で知られた種々の方法をかかる抗体およびフラグメントの製造に用いてもよい。動物へポリペプチドを直接注入することによって、または動物、好ましくはヒト以外にポリペプチドを投与することによって、本発明配列に対応したポリペプチドに対して生成した抗体を得ることができる。次いで、そのようにして得られた抗体はポリペプチド自体と結合するであろう。このようにして、ポリペプチドのフラグメントのみをコードする配列を用いて無傷のポリペプチド全体に結合する抗体を得ることさえできる。次いで、かかる抗体を用いて、ポリペプチドを発現する組織からそのポリペプチドを単離することができる。モノクローナル抗体の調製のために、連続的な細胞系の培養により得られる抗体を製造する方法を用いることができる。例は、ハイブリドーマ法(Kohler and Milstein Nature 1975 256:495-497)、トリオーマ法、ヒト・Ｂ細胞ハイブリドーマ法（Kozbor et al.，Immunology Today 1983 4:72）およびヒト・モノクローナル抗体を製造するためのＥＢＶ−ハイブリドーマ法（Cole et al．Monoclon al Antibodies and Cancer Therapy．Alan R．Liss，Inc，pp 77-96(1985)）を包含する。１本鎖抗体の製造に関して記載された方法（米国特許第４，９４６，７７８号）を適用して、本発明の免疫原性ポリペプチド生成物に対する１本鎖抗体を製造することができる。また、トランスジェニックマウスまたは他の哺乳動物のごとき他の生物を用いて、本発明の免疫原性ポリペプチド生成物に対するヒト化抗体を発現させてもよい。上記抗体を用いて、ポリペプチドを発現するクローンを単離または同定してもよく、あるいはアフィニティークロマトグラフィーによる単離および／または精製のための固体支持体への抗体の結合により本発明ポリペプチドを精製してもよい。よって、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に対する抗体を用いて、とりわけ、高血圧、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、アルツハイマー病、卒中、炎症(慢性および急性)、ＣＮＳ炎症、喘息、アレルギー、神経変性疾患、頭部外傷で誘導される神経変性疾患、良性前立腺肥大症および、精神分裂症、躁病、うつ病、せん妄、痴呆または激しい精神遅滞、ハンチントン病またはジル・ド・ラ・トゥレット症候群のごとき運動異常症を包含する精神病性ならびに神経学的障害、細菌性感染、真菌性感染、原生動物性感染、およびウイルス感染を抑制してもよい。Ｇ− 蛋白結合受容体を抑制する抗体は、内因性食欲不振の回復および大食の制御にも有用である。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を抑制する抗体は、細菌細胞、真菌細胞、原生動物細胞ならびにウイルスの結合の阻害、および細菌性感染、真菌性感染、原生動物感染ならびにウイルス感染、特にＨＩＶ−１結合ならびに感染またはＨＩＶ−２結合ならびに感染にも有用である。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８結合分子およびアッセイまた、本発明は、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に結合する受容体分子のごとき分子の同定方法も提供する。当業者に知られた多くの方法、例えば、リガンドパンニング（panning）およびＦＡＣＳソーティングにより、受容体蛋白のごときＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に結合する蛋白をコードしている遺伝子を同定することができる。かかる方法は多くの研究室用マニュアル、例えば、 Coligan et al.，Current Protocols in Immunology 1(2)：第５章（１９９１年）に記載されている。例えば、発現クローニングをこの目的に用いてもよい。この目的のために、Ｇ −蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に応答する細胞からポリアデニル化ＲＮＡを調製し、ｃＤＮＡライプラリーをこのＲＮＡから作成し、ライプラリーをプールに分割し、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に応答しない細胞中に各プールをトランスフェクションする。次いで、トランスフェクションした細胞を標識Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に曝露する(放射性ヨウ素化または部位特異的プロテインキナーゼ認識部位を含めることといった標準的方法を包含する種々のよく知られた方法によりＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を標識することができる )。曝露後、細胞を固定し、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の結合を測定する。便利には、これらの手順をスライドガラス上で行う。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８結合細胞を生じるｃＤＮＡについてプールを同定する。これらの陽性物からサブ−プール（sub-pool）を調製し、宿主細胞中にトランスフェクションし、上記のごとくスクリーニングする。反復サブ−プーリングおよび再スクリーニングプロセスを用いて、推定上受容体分子のごとき結合分子をコードしている１種またはそれ以上のクローンを単離することができる。別法として、標識リガンドを、受容体分子のごときリガンドが結合する分子を発現する細胞から調製した膜または膜抽出物のごとき細胞抽出物に光親和性結合させることができる。ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）により架橋材料を分離し、Ｘ線フィルムに曝露する。リガンド−受容体を含む標識複合体を切断し、ペプチドフラグメントにまで分解し、蛋白微小配列決定に供することができる。微小配列決定から得られたアミノ酸配列を用いて、ユニークな、または縮重したオリゴヌクレオチドプローブを設計し、ｃＤＮＡライプラリーをスクリーニングして、受容体分子をコードしている遺伝子を同定することができる。本発明ポリペプチドを用いて、細胞中または無細胞調製物中において、受容体分子のごときＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８結合分子の結合能を評価することもできる。本発明の受容体ポリペブチドの活性化を活性化する（アゴニスト）または抑制する（アンタゴニスト）化合物のスクリーニング法において、本発明のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を用いてもよい。一般的には、かかるスクリーニング法は、表面に本発明の受容体ポリペプチドを発現する適当な細胞を提供することを包含する。かかる細胞は哺乳動物、酵母、ショウジョウバエまたはイー・コリ由来の細胞を包含する。とりわけ、本発明の受容体をコードしているポリヌクレオチドを用いて細胞をトランスフェクションし、そのことによりＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を発現させる。次いで、発現された受容体を試験化合物と接触させて結合、機能的応答の刺激または阻害を観察する。１のかかるスクリーニング法は、トランスフェクションされて本発明のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を発現するようになった黒色素胞の使用を包含する。かかるスクリーニング法はＰＣＴＷＯ９２／０１８１０（１９９２年２月６日公開）に記載されている。よって、例えば、かかるアッセイを用いて、受容体をコードしている黒色素胞を受容体リガンドおよびスクリーニングすべき化合物の両方に接触させることにより、本発明の受容体ポリペプチドの活性化を阻害する化合物をスクリーニングしてもよい。リガンドにより発生したシグナルの阻害は、化合物がその受容体に対して潜在的なアンタゴニストであること、すなわち、その化合物が受容体活性化を阻害することを示す。かかる細胞をスクリーニングすべき化合物に接触させ、かかる化合物がシグナルを発生するかどうか、すなわち、受容体を活性化するかどうかを決定することにより、受容体を活性化する化合物の決定に当該スクリーニングを用いてもよい。他のスクリーニング法は、例えば、Science 246:181-296（1989年10月）の記載のように、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を発現する細胞（例えば、トランスフェクションされたＣＨＯ細胞）を、受容体活性化により引き起こされる細胞外ｐＨ変化を測定する系において使用することを包含する。例えば、本発明の受容体ポリペプチドを発現する細胞に化合物を接触させ、次いで、第２メッセンジャー応答、例えばシグナル変換またはｐＨ変化を測定して潜在的に化合物が受容体を活性化または阻害するかどうかを決定してもよい。もう１つのかかるスクリーニング法は、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしているＲＮＡをアフリカツメガエル・卵母細胞に導入して一時的に受容体を発現させることを包含する。次いで、受容卵母細胞を例えばケモカインβ− ８のごとき受容体リガンドおよびスクリーニングすべき化合物と接触させ、次いで、受容体の活性化を阻害すると考えられる化合物のスクリーニングにおいて、シグナル（例えば、プロトン、ならびに他のイオンシグナル、詳細にはカルシウムイオンシグナル）の阻害または活性化を検出してもよい。もう１つのスクリーニング法は、例えばホスホリパーゼＣまたはＤまたは他の蛋白に受容体が結合しているＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を発現させることを包含する。かかる細胞の典型例として、内皮細胞、平滑筋細胞、胚の腎細胞等が挙げられる。受容体の活性化または受容体の活性化の阻害を第２シグナル（例えば、ホスホリパーゼまたは他の活性化／発現された蛋白）から検出することにより、上記のごとくスクリーニングを行ってもよい。もう１つの方法は、表面に受容体を有する細胞への標識リガンドの結合に対する阻害を調べることによる、本発明のアンタゴニストの受容体ポリペプチドの活性化を阻害する化合物のスクリーニングを包含する。かかる方法は、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしているＤＮＡで真核細胞細胞をトランスフェクションして細胞が受容体を表面に発現するようにし、既知リガンドの標識形態の存在下で細胞を化合物と接触させることを包含する。例えば放射活性によりリガンドを標識することができる。受容体に結合した標識リガンドの量は、例えば受容体の放射能を測定することにより測定される。化合物が受容体に結合する際に、受容体に結合する標識リガンドの減少が認められるならば、受容体への標識リガンドの結合は阻害されている。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８は、哺乳動物宿主に偏在しており、多くの病状を包含する多くの生物学的機能の原因となる。よって、一方でＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を刺激し、一方でＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の機能を阻害しうる化合物および薬物を見つけることが望ましい。例えば、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を活性化する化合物を、癌および感染症の治療のごとき目的に用いてもよい。一般的には、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８活性化を阻害する化合物を、種々の治療目的、例えば、とりわけ、高血圧、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、アルツハイマー病、卒中、アテローム性動脈硬化症、炎症(慢性および急性)、ＣＮＳ炎症、喘息、アレルギー、神経変性疾患、頭部外傷で誘導される神経変性疾患、良性前立腺肥大症および、精神分裂症、躁病、うつ病、せん妄、痴呆あるいは激しい精神遅滞、ハンチントン病またはジル・ド・ラ・トゥレット症候群のごとき運動異常症を包含する精神病性ならびに神経学的障害、細菌、真菌、原生動物、およびウイルスにより引き起こされる感染の治療に用いてもよい。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を阻害する化合物は、細菌、真菌、原生動物ならびにウイルスの結合の阻害、および細菌、真菌、原生動物、ならびにウイルス二より引き起こされる感染の阻害、詳細にはＨＩＶ−１結合ならびに感染またはＨＩＶ−２結合ならびに感染の阻害にも有用である。抗体は、本発明のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を拮抗し、またはいくつかの場合、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に結合するが第２メッセンジャー応答を顕在化しないオリゴペプチドが、その結果Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の活性を妨げる。通常には抗体の抗原結合部位に結合するユニークな決定基を認識する抗イディオタイプ抗体を包含する。また潜在的なアンタゴニスト化合物は、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のリガンドに密接に関連した蛋白、すなわちリガンドのフラグメントであって、生物学的機能を失っていてＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に結合しても応答を生じないものを包含する。アンチセンス法を用いることにより調製されるアンチセンス構築物を用いて、三重らせん形成またはアンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡにより遺伝子発現を制御してもよく、両方の方法とも、ＤＮＡもしくはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に基づくものである。例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド配列の５’コーディング部分を用いて、長さ約１０ないし４０塩基対のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計する。転写に関与する遺伝子の領域に相補的であるようにＤＮＡオリゴヌクレオチドを設計し(三重らせん−Lee et al.，Nucleic Acids Research 6:3073(1979)；Dervan et al.，Scie nce 251:1360(1991)参照)、そのことによりＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の転写および生成を防止する。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、イン・ビボにおいてｍＲＮＡにハイブリダイゼーションし、ｍＲＮＡ分子のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８への翻訳をブロックする(Okano,J.Neurochem.56:560( 1991)；OLIGONUCLEOTIDES AS ANTISENSE INHIBITORS OF GENE EXPRESSION,CRC P ress,Boca Raton,FL(1988))。上記オリゴヌクレオチドを細胞に送達して、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡがイン・ビボにおいて発現されてＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の生成を阻害するようにすることもできる。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に結合し、リガンドに近づき難くして、正常な生物学的活性を妨げる小型分子、例えば小型ペプチドまたはペプチド様分子を用いて、本発明の受容体ポリペプチドの活性を阻害してもよい。可溶性形態のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８、例えば受容体のフラグメントを用いて、本発明のポリペプチドに対するリガンドに結合させ、リガンドが膜結合Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８と相互作用することを防止することにより受容体活性化を阻害してもよい。さらに本発明は、過剰なＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８活性に関連した異常な症状の治療方法であって、リガンドのＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８への結合をブロックすることにより、あるいは第２のシグナルを阻害することにより活性化を阻害するに有効量の上記阻害剤化合物を医薬上許容される担体とともに対象に投与し、そのことにより異常な症状を改善することを特徴とする方法を提供する。また本発明は、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８活性の発現不足に関連した異常な症状の治療方法であって、上記のごとく本発明の受容体ポリペプチドを活性化する治療上有効量の化合物を医薬上許容される担体とともに対象に投与し、そのことにより異常な症状を改善することを特徴とする方法を提供する。可溶性形態のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８、およびかかる受容体を活性化または阻害する化合物を、適当な医薬担体と混合して使用してもよい。かかる組成物は、治療上有効量のポリペプチドまたは化合物、および医薬上許容される担体または賦形剤を含んでなる。かかる担体は、セイライン、緩衝化セイライン、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの混合物を包含するが、これらに限らない。処方は投与方法に適合させるべきである。アンタゴニストおよびアゴニストアッセイおよび分子本発明はまた、細胞上のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の作用、例えば受容体分子のごときＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８結合分子との相互作用を増強またはブロックする化合物を同定するための、化合物のスクリーニング方法も提供する。アゴニストは、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の天然の生物学的機能を増加させる、またはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に類似した方法で機能する化合物であり、一方、アンタゴニストは、かかる機能を減少させる、または消去させる化合物である。例えば、膜または膜標品のごときその調製物のような細胞コンパートメントを、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８により転調されたシグナリングもしくは調節経路の分子であってＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に結合する分子を発現する細胞から調製してもよい。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８アゴニストまたはアンタゴニスト候補分子の存在下または不存在下において調製物を標識Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８とともにインキュベーションする。結合分子に結合する候補分子の能力は、標識リガンドの結合低下に反映される。不必要に、すなわちＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８結合分子への結合に対するＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の効果を誘導せずに結合する分子は、良好なアンタゴニストである可能性が最も高い。よく結合し、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８と同じ効果またはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に密接に関連した効果を誘導する分子はアゴニストである。例えば、候補分子と細胞または適当な細胞調製物との相互作用後に第２メッセンジャー系の活性化を調べ、次いで、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８またはＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８と同じ効果を誘導する分子の効果と比較することにより、潜在的アゴニストのＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８様効果を測定してもよい。この点に関して有用でありうる第２メッセンジャー系は、ＡＭＰグアニレートシクラーゼ、イオンチャンネルまたはホスホイノシチド加水分解の系を包含するが、これらに限らない。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８アンタゴニストを探すアッセイのもう１つの例は、競争的阻害アッセイに適した条件下でＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８と潜在的アゴニストを膜結合Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８受容体分子または組み換えＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８受容体分子と結合させる競争アッセイである。受容体分子に結合しているＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８分子数を正確に決定して潜在的アンタゴニストに有効性を評価できるようにするために、例えば放射活性によりＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を標識することができる。潜在的アンタゴニストは、本発明のポリペプチドに結合し、それによってその活性を阻害または消去させる小型有機分子、ペプチド、ポリペプチドおよび抗体を包含する。潜在的アンタゴニストはまた、受容体分子のごとき結合分子上の同じ部位で結合するが、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８誘導活性を伴わず、それによって、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を結合させなくすることによりＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の作用を妨げる密接に関連した蛋白または抗体のごとき小型有機分子、ペプチド、ポリペプチドでありうる。潜在的アンタゴニストは、ポリペプチドに結合し、ポリペプチドの結合部位を占有し、それにより受容体分子のごとき細胞結合分子に対する結合を妨げ、その結果、正常な生物学的活性を妨げる小型分子を包含する。小型分子の例は、小型有機分子、ペプチドまたはペプチド様分子を包含するがそれらに限定されるものではない。他の潜在的アンタゴニストは、アンチセンス分子を包含する。アンチセンス法を用いて、アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡによって、あるいは３重らせん形成によって遺伝子発現を制御することができる。アンチセンス法は、例えば、Okan o,J.Neurochem.56:560(1991)；OLIGONUCLEOTIDES AS ANTISENSE INHIBITORS OF GENE EXPRESSION，CRC Press，Boca Raton，FL(1988)）で論じられている。３重らせん形成は、例えばLee et al.，Nucleic Acids Research 6: 3073(1979)；Co oney et al.，Science 241:456(1988)；およびDervan et al.，Science 251:136 0(1991)で論じられている。該方法は、相補的ＤＮＡまたはＲＮＡに対するポリヌクレオチドの結合に基づいている。例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの５’コーディング部分を使用して、長さ約１０ないし４０塩基対のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計してもよい。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子の領域に相補的であるように設計し（、そのことによりＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の転写および生成を防止する。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、イン・ビボにおいてｍＲＮＡにハイブリダイゼーションし、ｍＲＮＡ分子のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８への翻訳をブロックする。上記オリゴヌクレオチドを細胞に送達して、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡがイン・ビボにおいて発現されてＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の生成を阻害するようにすることもできる。アンタゴニストは、例えば下記のような医薬上許容される担体と共に化合物において使用してもよい。アンタゴニストは、例えば、とりわけ、高血圧、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、アルツハイマー病、卒中、アテローム性動脈硬化症、炎症(慢性および急性)、ＣＮＳ炎症、喘息、アレルギー、神経変性疾患、頭部外傷で誘導される神経変性疾患、良性前立腺肥大症および、精神分裂症、躁病、うつ病、せん妄、痴呆あるいは激しい精神遅滞、ハンチントン病またはジル・ド・ラ・トゥレット症候群のごとき運動異常症を包含する精神病性ならびに神経学的障害、細菌性感染、真菌性感染、原生動物性感染、およびウイルス性感染を阻害するために使用してもよい。本発明のアンタゴニストは、内因性の食欲不振の回復ならびに大食の制御、および細菌、真菌、原生動物ならびにウイルスの結合の阻害、および細菌性感染、真菌性感染、原生動物感染、ならびにウイルス性感染の阻害、詳細にはＨＩＶ−１結合ならびに感染またはＨＩＶ−２結合ならびに感染の阻害にも有用である。アゴニストは、例えば下記のような医薬上許容される担体と共に化合物において使用してもよい。アゴニストは、例えば自己免疫疾患、感染症および癌を治療するために使用してもよい。組成物また本発明は、上記ポリヌクレオチドまたはポリペプチド、あるいはアゴニストまたはアンタゴニストを含んでなる組成物に関する。よって、細胞、組織または生物について使用される未滅菌または滅菌担体、例えば、対象への投与に適した医薬担体と組み合わせて本発明ポリペプチドを用いてもよい。かかる組成物は、例えば、媒体、添加物または治療上有効量の本発明ポリペプチド、および医薬上許容される担体または賦形剤を含んでなる。かかる担体は、セイライン、緩衝化セイライン、デキストロース、水、グリセロール、エタノールおよびそれらの混合物を包含するが、これらに限らない。処方は投与モードに適合すべきである。キットさらに本発明は、上記本発明組成物の１種またはそれ以上の成分を充填した１個またはそれ以上の容器を含んでなる医薬パックおよびキットに関する。かかる容器については、医薬または生物学的製品の製造、使用または販売を規制している政府当局により指示された形態であり、ヒトへの投与のための製品の製造、使用または販売に対する当局による認可を反映したものである。投与本発明のポリペプチドおよび他の化合物を単独で、あるいは治療化合物のごとき他の化合物と組み合わせて使用してよい。効果的で便利な方法、例えば、特に、局所、経口、肛門、膣、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内または皮内ルートによる投与を包含する方法で医薬組成物を投与してよい。一般的には、医薬組成物を、個々の徴候または徴候（複数）の治療または予防の有効な量で投与する。一般的には、少なくとも約１０μｇ／ｋｇ体重の量で組成物を投与する。大部分の場合、１日につき約８ｍｇ／ｋｇ体重を超えない量で組成物が投与されるであろう。好ましくは、大部分の場合、１日につき用量は約１０μｇ／ｋｇ体重ないし約１ｍｇ／ｋｇ体重である。症状、その重さ、投与経路、合併症等を考慮して、各治療様式についての標準的方法および症状により最適用量が決定されることが理解されよう。遺伝子治療しばしば「遺伝子治療」と呼ばれる治療様式において、イン・ビボでポリペプチドを発現させることにより、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリヌクレオチド、ポリペプチド、ポリペプチドであるアゴニストおよびアンタゴニストを本発明に従って使用することができる。よって、例えば、ポリペプチドをコードしているＤＮＡまたはＲＮＡのごときポリヌクレオチドで患者からの細胞をエク・ビボで処理し、次いで、ポリペプチドで治療すべき患者に処理細胞を与えてもよい。例えば、本発明ポリペプチドをコードしているＲＮＡを含むレトロウイルスプラスミドベクターの使用により細胞をエクス・ビボで処理してもよい。かかる方法は当該分野においてよく知られており、本発明におけるそれらの使用は本明細書の教示から明らかである。同様に、当該分野において知られた方法により、イン・ビボでのポリペプチドの発現のために細胞をイン・ビボで処理してもよい。例えば、上記のように複製欠陥レトロウイルスベクター中での発現のために本発明ポリヌクレオチドを処理してもよい。次いで、レトロウイルス発現構築物を単離し、パッケージング細胞中に導入し、本発明ポリペプチドをコードしているＲＮＡを含むレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入して、パッケージング細胞が対象遺伝子を含有する感染性ウイルス粒子を産生するようにすることができる。イン・ビボでの細胞の処理およびイン・ビボでのポリペプチドの発現のためにこれらのプロデューサー細胞を患者に投与することができる。本発明ポリペプチドを投与するためのこれらの方法および他の方法は、本発明の教示から当業者に明らかなはずである。本明細書において上で述べたレトロウイルスプラスミドベクターが由来するレトロウイルスは、モロニーマウス・白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ラウスサルコーマウイルス、ハーベイサルコーマウイルス、トリ・白血病ウイルス、テナガザル・白血病ウイルス、ヒト・免疫不全ウイルスのごときレトロウイルス、アデノウイルス、ミエロプロリファレイティブサルコーマウイルス(Myeloprolif erative Sarcomavirus)、および哺乳動物腫瘍ウイルスを包含するが、これらに限らない。１の具体例において、レトロウイルスプラスミドベクターはモロニーマウス・白血病ウイルス由来のものである。かかるベクターは、本発明ポリペプチド発現のための１個またはそれ以上のプロモーターを含むであろう。使用できる適当なプロモーターは、レトロウイルスＬＴＲ；ＳＶ４０プロモーター；およびMiller et al.，Biotechniques 7:980-9 90(1989)に記載されたヒト・サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、または他のいずれかのプロモーター（例えば、ヒストン、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ、およびβ−アクチンプロモーター（これらに限らない）を包含する真核細胞プロモーターのごとき細胞プロモーター）を包含するが、これらに限らない。使用できる他のウイルスのプロモーターは、アデノウイルスプロモーター、チミジンキナーゼ（ＴＫ）プロモーター、およびＢ１９パルボウイルスプロモーターを包含するが、これらに限らない。適当なプロモーターの選択は、本明細書に含まれる教示から当業者に明らかであろう。本発明ポリペプチドをコードしている核酸配列は適当なプロモーターの制御下に置かれるであろう。使用できる適当なプロモーターは、アデノウイルス大後期プロモーターのごときアデノウイルスプロモーター；またはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターのごとき異種プロモーター；呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター；ＭＭＴプロモーター、メタロチオネインプロモーターのごとき誘導可能プロモーター；熱ショックプロモーター；アルブミンプロモーター；ＡｐｏＡＩプロモーター；ヒト・グロビンプロモーター；単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼプロモーターのごときウイルスのチミジンキナーゼプロモーター；レトロウイルスのＬＴＲ(本明細書で上で述べた修飾レトロウイルスＬＴＲを包含)；β−アクチンプロモーター；およびヒト・成長ホルモンプロモーターを包含するが、これらに限らない。プロモーターは、本発明ポリペプチドをコードしている遺伝子を制御する無傷のプロモーターであってもよい。レトロウイルスプラスミドベクターを用いてパッキング細胞系に形質導入してプロデューサー細胞系を得る。トランスフェクションされうるパッキング細胞の例は、ＰＥ５０１、ＰＡ３１７、Ｙ−２、Ｙ−ＡＭ、ＰＡ１２、Ｔ１９−１４Ｘ、ＶＴ−１９−１７−Ｈ２、ＹＣＲＥ、ＹＣＲＩＰ、ＧＰ＋Ｅ−８６、ＧＰ＋ｅｎｖＡｍ１２、およびMiller，A.，Human Gene Therapy 1:5-14(1990)に記載されたＤＡＮ細胞系を包含するが、これらに限らない。当該分野で知られたいずれかの手段によりベクターをパッケージング細胞中に形質導入してもよい。かかる手段は、エレクトロポレーション、リポソームの使用、ＣａＰＯ₄沈殿を包含するが、これらに限らない。１の別法において、レトロウイルスベクターをリポソーム中に封入し、あるいは脂質と結合させ、次いで、宿主に投与してもよい。プロデューサー細胞系は感染性レトロウイルスベクター粒子を生じるであろうし、該粒子はポリペプチドをコードしている核酸配列を含んでいる。次いで、かかるレトロウイルスベクター粒子を用いて、イン・ビトロまたはイン・ビボのいずれかにおいて真核細胞に形質導入してもよい。形質導入された真核細胞はポリペプチドをコードしている核酸配列を発現するであろう。形質導入されうる真核細胞は、胚幹細胞、胚カルシノーマ細胞、ならびに造血幹細胞、肝細胞、線維芽細胞、筋芽細胞、ケラチノサイト、内皮細胞、および気管支上皮細胞を包含するが、これらに限らない。実施例下記実施例により本発明をさらに説明する。実施例は、個々の具体例を参照することにより、本発明の説明のためだけに提供される。これらの例示は、本発明の特定の態様を説明するが、開示された発明の範囲を何ら限定するものでない。本明細書に用いる特定の用語はすでに上で説明してある。特記しない限り、すべての実施例は、当業者によく知られた日常的な標準的方法を用いて行われたものである。上で引用したSambrookら、MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL，2nd Ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1989)の標準的な研究室用マニュアルに記載されているようにして下記実施例の日常的な分子生物学の方法を行うことができる。特記しないかぎり、下記実施例に示すすべての部または量は重量によるものである。特記しないかぎり、Sambrookおよび多くの他の文献、例えば、Goeddel et al. ，Nucleic Acids Res.,8:4057(1980)による文献に記載のアガロースおよびポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）の標準的方法を用いて下記実施例におけるフラグメントのサイズによる分離を行った。特記しない限り、標準的バッファー、インキュベーション温度および時間、ほぼ等モル量の連結すべきＤＮＡフラグメント、ならびに０．５μｇのＤＮＡにつき約１０ユニットのＴ４ＤＮＡリガーゼ（「リガーゼ」）を用いて連結反応を行った。実施例１細菌を用いるヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の発現および精製寄託されたポリヌクレオチドにおけるヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードするＤＮＡ配列を、ヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８蛋白のアミノ酸カルボキシ末端配列およびベクター遺伝子の３’配列に特異的なＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅した。クローニングを容易にするために、制限部位を含有する付加ヌクレオチドを５’および３’配列それぞれに加えた。５’オリゴヌクレオチドプライマーは、開始ＡＵＧをコードし、その後に図１に示すヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８コーディング配列の１２ヌクレオチドを伴うＥｃｏＲ１制限部位（下線を付した）を含有する５’−ＣＡＧＧＧＡＡＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＣＣＡＡＴＴＡＣＡＣＧ−３’[配列番号：３]配列を有した。３’プライマーは、後に８ヌクレオチドを伴うＥｃｏＲ１制限部位（下線を付した）を含有する５’−ＧＣＡＴＴＴＧＧＴＧＧＡＴＡＴＣＡＧＴＴＴＡＣＡＣＴＴＣＧＧ−３’[配列番号：４]を有した。該制限部位は、これらの実施例において細菌性発現に使用された細菌性発現ベクターｐＱＥ−９中の制限酵素部位に対して便利であった(Qiagen，Inc．Chatsw orth，CA．ｐQE-9はアンピシリン抗生物質耐性（“Ampr”）をコードし、細菌性複製起点(“ori”)、IPTG誘導プロモーター、リボソーム結合部位(“RBS”)、６ −Hisタグおよび制限酵素部位を含有する)。増幅されたヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ＤＮＡおよびベクターｐＱＥ−９の両方をＥｃｏＲ１で消化し、次いで消化されたＤＮＡをいっしよに連結反応を行った。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ＤＮＡのＥｃｏＲ１切断ベクターへの挿入は、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８コーディング領域を下流に配置し、作動可能にベクターのIPTG誘導プロモーターと結合し、開始ＡＵＧを有するフレーム内で、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の翻訳に適当に配置した。連結反応混合物を十分なイー・コリ細胞へ、標準法を用いて形質転換した。かかる手順は、Sambrook ら、MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL，2nd Ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1989) に記載されている。lac抑制因子を発現し、カナマイシン耐性（“Kan^r”）を与える、プラスミドｐＲＥＰ４の複数のコピーを含有するイー・コリ株Ｍ１５／ｒｅｐ４を、本明細書に記載した説明の実施例を行うために使用した。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を発現するのに適する多くの株のうちのたった１つである該株は、Qiagenから市販されている。形質転換株は、アンピシリン存在下でのLBプレート上で生育する能力によって同定された。プラスミドDNAを耐性コロニーから単離し、クローン化DNAの同定を制限分析によって確認した。所望の構築物を含有するクローンを一晩(“Ｏ／Ｎ”)、アンピシリン（１００ μｇ／ｍｌ）およびカナマイシン（２５μｇ／ｍｌ）の両方を補足したＬＢ培地中、液体培養で生育させた。Ｏ／Ｎ培養体を用いて、約１：１００ないし１：２５０の希釈で大量培養を行った。細胞を６００nmで光学濃度０．４〜０．６（“ＯＤ⁶⁰⁰”）まで生育させた。次いで、イソプロピル−B−D−チオガラクトピラノシド（“IPTG”）を最終濃度１mMに加えて、lac抑制因子感受性プロモーターから、lacI 抑制因子を不活化することによって転写を誘導した。続いて細胞をさらに３ないし４時間インキュベートした。次いで、細胞を遠心分離によって回収し、標準法によって粉砕した。封入体を粉砕した細胞から日常の回収技法をもちいて精製し、蛋白を封入体から８M尿素へ溶解させた。溶解した蛋白を含有する８M尿素溶液を２ｘリン酸セーライン緩衝液（“PBS”）中のPD-10カラムに通し、それによって尿素を除去し、緩衝液を交換し、蛋白を元の状態へ戻した。内毒素を除去するためのクロマトグラフィーのさらなる工程によって蛋白を精製した。次いで、それを滅菌濾過した。滅菌濾過した蛋白調製物を２ｘPBS中、９５μｇ／mL濃度で保存した。実施例２バキュロウイルス発現系におけるヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のクローニングおよび発現寄託クローン中において、全長ヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８蛋白をコードしているｃＤＮＡ配列を、遺伝子の５’および３’配列に相当するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅する。５’プライマーは、後に図１［配列番号：１］のＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の配列の１２塩基を伴うＥｃｏＲ１制限酵素部位（下線を付した）を含有する５’−ＣＡＧＧＧＡＡＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＣＣＡＡＴＴＡＡＣＡＣＧ −３’[配列番号：３]配列を有する。下記のように、発現ベクターへ挿入された、ヒトＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしている増幅フラグメントの５’末端は、有効なシグナルペプチドを提供する。真核細胞における翻訳開始のための有効なシグナルは、Kozak，M.，J．Mol．Biol．196:947-950(1987)によって記載されるように、構築物のベクター部分に適当に位置されている。３’プライマーは、ＥｃｏＲ１制限部位（下線を付した）を含有する５’−ＧＣＡＴＴＴＧＧＴＧＧＡＴＡＴＣＡＧＴＴＴＡＣＡＣＴＴＣＧＧ−３’[配列番号：４]配列を有する。増幅されたフラグメントを、市販キット（"Geneclean"BIO 101 Inc,La Jolla, CA）を用いて１％アガロースゲルから単離する。次いで、そのフラグメントをＢａｍＨＩおよびＡｓｐ７１８で消化し、再度１％アガロースゲルで精製する。このフラグメントを本明細書ではＦ２と命名する。 Summers et al.，A MANUAL OF METHODS FOR BACULOVIRUS VECTORS AND INSECT CELL CULTURE PROCEDURES，Texas Agricultural Experimental Station Bulleti n No.1555(1987)に記載のごとき標準的方法を用い、ベクターｐＲＧ１を用いてＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８蛋白をバキュロウイルス発現系において発現させた。この発現ベクターは、オートグラファ・カリフォルニカ（Autographa c alifornica）核多角体病ウイルス（ＡｃＭＮＰＶ）の強力なポリヘドリンプロモーターを含んでおり、都合のよい制限部位が付されたものである。Ｎ末端メチオニンを含むＡｃＭＮＰＶｇｐ６７のシグナルペプチドはＢａｍＨＩ部位のすぐ上流に位置している。類人猿ウイルス４０（ＳＶ４０）のポリアデニレーション部位を有効なポリアデニル化のために使用した。組み換えウイルスの選択容易化のために、イー・コリ由来のベータ−ガラクトシダーゼ遺伝子をポリヘドリンプロモーターと同じ方向に挿入し、その後にポリヘドリン遺伝子のポリアデニレーションシグナルが続く。ポリヘドリン配列は、細胞により媒介される野生型ウイルスＤＮＡとの相同組み換えに関するウイルス配列に対して、両サイドにおいて隣接しており、クローン化されたポリヌクレオチドを発現する生きたウイルスを生じさせる。ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１およびｐＡｃＩＭ１のごとき他の多くのバキュロウイルスベクターを、ｐＡ２−ＧＰのかわりに用いることができるであろうし、当業者は、必要に応じて、構築物がイン−フレームＡＵＧおよびシグナルペプチドのごとき転写、翻訳、トラフィッキング（Trafficking）等のための適当に存在するシグナルを提供することを容易に理解するであろう。かかるベクターは、特にLuckow et al.，Virology 170:31-39に記載されている。当該分野において知られた日常的方法を用いて、制限酵素ＥｃｏＲＩでプラスミドを消化し、次いで、子ウシ・腸ホスファターゼを用いて脱リン酸化する。次いで、市販キット（"Geneclean"BIO 101 Inc,La Jolla,CA）を用いてＤＮＡを１％アガロースから単離する。このベクターＤＮＡを本明細書ではＶ２と命名する。フラグメントＦ２および脱リン酸化プラスミドＶ２を、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いて連結する。イー・コリＨＢ１０１細胞を連結混合物で形質転換し、培養プレート上に広げる。ＸｂａＩおよびＢａｍＨＩを用いる個々のコロニー由来のＤＮＡ消化、次いで、ゲル電気泳動による消化生成物の分析により、細菌はヒト・Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８遺伝子を含むプラスミドを含有することが同定される。クローン化フラグメントの配列をＤＮＡ配列決定により確認する。本明細書において、このプラスミドをpBacＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８と命名する。 Felgner et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1987,84:7413-7417に記載のリポフェクチン法を用いて、５μｇのpBacＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を１．０ μｇの市販直鎖状バキュロウイルスＤＮＡ（”BaculoGold^TM baculovirus DNA” ,Pharmingen，San Diego，CA）とともに同時形質転換する。１μｇの BaculoGold（登録商標）ウイルスＤＮＡおよび５μｇのプラスミドｐBacＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を、５０μｌの無血清Grace培地（Life Technologi es Inc.，Gaithersburg，MD）の入ったマイクロタイタープレートの滅菌済みウェル中で混合する。その後、１０μｌのリポフェクチンおよび９０μｌのGrace 培地を添加し、混合し、室温で１５分インキュベーションする。次いで、トランスフェクション混合物を、Ｓｆ９昆虫細胞(ATCC CRL 1711)（１ｍｌの血清不含G race培地とともに３５ｍｍ組織培養プレートに撒種）に滴下する。プレートを元に戻し、新たに添加した溶液を強制混合する。次いで、プレートを２７℃で５時間インキュベーションする。５時間後、トランスフェクション溶液をプレートから除去し、１０％ウシ胎児血清を補足したGrace昆虫培地１ｍｌを添加する。プレートをインキュベーションに戻し、２７℃で４日間インキュベーションする。４日後、上清を集め、Summers and Smith（すでに引用）により記載されたようにプラークアッセイを行う。"Blue Gal"（Life Technologies Inc.，Gaithers burg）を含むアガロースゲルを用いてgal-発現クローン（青色染色プラークを生じる）の同定および単離を容易にする(このタイプの「プラークアッセイ」についての詳細な説明は、Life Technologies Inc.，Gaithersburgにより配布されている、昆虫細胞培養およびバキュロウイルス学に関する案内の９〜１０頁に見いだされる)。４日後、系列希釈したウイルスを細胞に添加する。適当なインキュベーション後、青色染色プラークをエッペンドルフピペットチップを用いて拾う。次いで、組み換えウイルス含有寒天を、２００μｌのGrace培地を入れたエッペンドルフチューブ中に再懸濁する。短時間遠心分離することにより寒天を除去し、組み換えバキュロウイルス含有上清を用いてＳｆ９細胞（３５ｍｍディッシュに撒種されている）に感染させる。４日後、これらの培養ディッシュの上清を集め、４℃ で保存する。制限マッピングおよび配列決定を包含するＤＮＡ分析により、正しく挿入されたＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を含有するクローンを同定する。１０％熱不活性化ＦＢＳを補足したGrace培地でＳｆ９細胞を増殖させる。感染の多重度（ＭＯＩ）約２（約１ないし約３）で組み換えバキュロウイルスＶ− Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８に細胞を感染させる。６時間後、培地を除去し、メチオニンおよびシステインを含まないＳＦ９００ＩＩ培地（Life Techno logies Inc.，Gaithersburgから市販）に置き換える。４２時間後、５μＣｉの３５Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの３５Ｓシステイン（Amersham，Arlington Heights，ILから市販）を添加する。さらに細胞を１６時間インキュベーションし、次いで、細胞を遠心分離により集め、溶解し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィーにより標識蛋白を可視化する。実施例３ＣＯＳ細胞におけるＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の発現発現プラスミド、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ＨＡを、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしているｃＤＮＡを発現ベクターｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ（Invitrogen，Inc.，SanDiego，CA）中にクローニングすることにより作成する。発現ベクターｐｃＤＮＡＩ／ａｍｐは、(１)イー・コリおよび他の原核細胞における増殖に効果的なイー・コリの複製起点；(２)プラスミド含有原核細胞の選択のためのアンピシリン耐性遺伝子；(３)真核細胞における増殖のためのＳＶ４０複製起点；(４)ｃＤＮＡを便利にＣＭＶプロモーター発現調節下に置き、ポリリンカー中の制限部位を用いてＳＶ４０イントロンおよびポリアデニレーションシグナルに作動可能に連結できるように配置されたＣＭＶプロモーター、ポリリンカー、ＳＶ４０イントロン、およびポリアデニレーションシグナルを含む。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８前駆体全体およびその３’末端にフレーム内で融合されたＨＡタグをコードしているＤＮＡフラグメントをベクターのポリリンカー領域中に組み込み、組み換え蛋白発現がＣＭＶプロモーターにより指令されるようにする。ＨＡタグはインフルエンザのヘマグルチニン蛋白由来のエピトープ（Wilson et al.,Cell,1984,37:767）に対応する。標的蛋白へのＨＡタグの融合は、ＨＡエピトープを認識する抗体を用いる組み換え蛋白の検出を容易にする。プラスミド構築法は以下のごとし。イー・コリおよびエス・フギペルダ（S.fugiperda）におけるＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の発現のための発現ベクターの構築についてすでに説明したように、都合のよい制限部位を含むプライマーを用いて寄託クローンのＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ｃＤＮＡを増幅する。発現されるＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の欠失、精製および特徴づけを容易にするために、プライマーの１つは上記ヘマグルチニンタグ（ＨＡタグ）を含んでいる。該実施例において使用される適当なプライマーは、以下のものを包含する。ＥｃｏＲ１部位（下線部）を含有する５’プライマーは、５’−ＣＡＧＧＧＡＡＴＴＣＴＧＡＡＧＡＴＧＧＣＣＡＡＴＴＡＣＡＣＧ−３’[配列番号：３]配列を有する。ＥｃｏＲ１（下線部）を含有する３’プライマーは、５’−ＧＣＡＴＴＴＧＧＴＧＧＡＴＡＴＣＡＧＴＴＴＡＣＡＣＴＴＣＧＧ−３’[配列番号：４]配列を有する。ＰＣＲ増幅したＤＮＡフラグメントおよびベクター、ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐを消化し、次いで連結する。連結混合物をイー・コリＳＵＲＥ株（Stratagene Clo ning Systems，11099 North Torrey Pines Road，La Jolla,CA 92037から市販）中に形質転換する。形質転換培養物をアンピシリン培地プレート上に撒き、次いで、インキュベーションしてアンピシリン耐性コロニーを増殖させる。プラスミドＤＮＡを耐性コロニーから単離し、制限分析およびゲルによるサイズ測定によりＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をコードしているフラグメントを探す。組み換えＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の発現のために、DEAE-DEXTRAN（例えば、Sambrook et al，MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL，Cold Spr ing Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York(1989)に記載）を用いて、上記のごとくＣＯＳ細胞を発現ベクターでトランスフェクションする。ベクターによるＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８発現条件下で細胞をインキュベーションする。例えば、Harlow et al.，ANTIBODIES: A LABORATORY MANUAL,2nd Ed,; Cold S prong Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York(1988)に記載の方法を用いて、放射性標識および免疫沈降によりＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ＨＡ融合蛋白の発現を検出する。この目的のために、トランスフェクションから２日後に、³⁵Ｓ−システイン含有培地で８時間インキュベーションすることにより細胞を標識する。細胞および培地を集め、細胞を洗浄し、上で引用したWilson et alに記載されたように界面活性剤含有ＲＩＰＡバッファー（150mM NaCl、0.1% SDS、1% NP-40、0.5% DOC、50mM TRIS,pH7.5）で溶解する。ＨＡ特異的モノクローナル抗体を用いて細胞溶解物および培地から蛋白を沈殿させる。次いで、沈殿した蛋白をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルおよびオートラジオグラフィーにより分析する。予想サイズの発現生成物が細胞溶解物中に見られ、それは負の対照中には見られない。実施例４ヒト・Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の遺伝子治療発現皮膚生検により線維芽細胞を対象から得る。得られた組織を組織培養培地中に置き、小片に分離する。小さな組織塊を組織培養フラスコの濡れた表面に置き、各フラスコに約１０片を置く。フラスコを転置し、フラスコの蓋をかたく閉めて室温で一晩置く。室温で２４時間後、フラスコを転置すると組織塊はフラスコの底に固定されたままであり、新鮮培地を添加する(例えば、１０％ＦＢＳ、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するHam's F12培地)。次いで、適当には組織を１週間３７℃でインキュベーションする。この時、新鮮培地を添加し、引き続き数日おきに培地を交換する。さらに２週間培養後、線維芽細胞の単層が現れる。単層をトリプシン処理し、大きなフラスコに移す。発現すべきフラグメントをクローン化するために制限酵素を用いて遺伝子治療用ベクターを消化する。消化されたベクターを子ウシ・小腸ホスファターゼで処理して自己連結を防止する。デホスホリレーションされた直鎖状ベクターをアガロースゲル上で分画し、精製する。活性Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を発現しうるＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ｃＤＮＡを単離する。必要ならば、ベクター中へのクローニングのためにフラグメントの末端を修飾する。例えば、５’オーバーハング末端をＤＮＡポリメラーゼで処理して平滑末端を作成してもよい。３’オーバーハング末端をＳ１ヌクレアーゼを用いて除去してもよい。Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いてリンカーを平滑末端に連結してもよい。等量のモロニーマウス白血病ウイルス直鎖骨格およびＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８フラグメントをいっしよに混合し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いて連結させる。連結反応混合物を用いてイー・コリを形質転換し、次いで、そのイー・コリをカナマイシン含有寒天上にプレーティングする。カナマイシン耐性表現型および制限分析により、ベクターが正しく挿入された遺伝子を有することが確認される。１０％ウシ・血清(ＣＳ)、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するDu lbecco's Modified Eagles Medium（ＤＭＥＭ）中で、パッケージング細胞を組織培養において増殖させて集密とする。標準的方法によりＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８遺伝子を含有するベクターをパッケージング細胞中に導入する。Ｇ −蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８遺伝子を含んでいる感染性ウイルス粒子をパッケージング細胞（今度はプロデューサー細胞という）から集める。新鮮培地をプロデューサー細胞に添加し、適当なインキュベーション時間後、集密プロデューサー細胞のプレートから培地を集める。感染性ウイルス粒子を含んでいる培地をMilliporeフィルイターで濾過して浮遊プロデューサー細胞を除去する。次いで、濾過した培地を用いて線維芽細胞に感染させる。線維芽細胞の亜集密（sub-confluent）プレートから培地を除去し、濾過した培地にすばやく置き換える。POLYBRENE（Aldrich）を培地に含ませて形質導入を容易にしてもよい。適当なインキュベーション後、培地を除去し、新鮮培地に置き換える。ウイルス力価が高い場合には、事実上すべての線維芽細胞が感染しており、選択は不要であろう。力価が低い場合には、neoまたはhisのごとき選択マーカーを有するレトロウイルスベクターを用いてエクスパンジョン用の形質導入された細胞を選択する必要がある。次いで、処理された線維芽細胞を、そのまま、あるいはCytodex3ビーズのごとき微小担体ビーズ上で集密となるまで増殖した後、ラットに注射することができる。注射された線維芽細胞はＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を産生し、その蛋白の生物学的作用は宿主にまで伝達されている。特に前記の説明および実施例に記載しない限り、本発明が実行されうることは明白であろう。本発明の多くの修飾および変更が前記の技術を考えて可能であり、よって付随の請求の範囲内である。実施例５哺乳動物細胞系における受容体の一時的発現受容体発現を最大にするために、ｐＣＤＮ発現ベクター（Aiyar，N.et al.，M olecular and Cellular Biochemistry,1994,131:75-86）中に挿入する前に５’ および３’非翻訳領域（ＵＴＲｓ）を受容体ｃＤＮＡから除去する。ＰＣＲを用いてｃＤＮＡをトリミングするので、発現の前に日常的な配列決定法によりＤＮＡ配列を日常的に確認する。最初に、デキスラン硫酸法を用いてＣＯＳ細胞におけるＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８の一時的トランスフェクションを行った。要するに、１ｘ１０⁷個のＣＯＳ細胞を２４５ｘ２４５ｍｍの組織培養プレート中で２４時間増殖させて５０〜７０％集密とした。細胞をＰＢＳで洗浄し、次いで、１０％ Neuserum および１％グルタミン、ＤＥデキストランおよびクロロキン培地を含有するＣＭＥＭ培地中で１００μｇのＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ｃＤＮＡでトランスフェクションし、３時間インキュベーションした。次いで、１０％ＤＭＳＯを用いて細胞にショックを与え、１０％ウシ胎児血清、１％グルタミンを含有するＤＭＥＭ培地中で洗浄し、３日間インキュベーションした。実施例６受容体を用いるリガンド結合研究上記のごとくＧ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８をＣＯＳ細胞において一時的に発現させた。膜を調製し、ヨウ素化ＭＣＰ−１(Cambadiere，C.，et al.，P.M .J．Biol．Chem．270:16491(1995))、ＭＣＰ−３(Cambadiere，C.，et al.，P.M .J．Biol．Chem．270:16491(1995))、ＭＣＰ−４（ＷＯ−ＵＳ９４／０５３８４）およびケモカインＣＫβ−８を用いて結合の研究を開始した。ＣＫβ−８の単離に有用な方法は、ＵＳ９４／０７２５６および米国特許第５５０４００３号に開示されている。ＣＫβ−８アミノ酸配列［配列番号：６］およびヌクレオチド配列［配列番号：５］を図２に示す。陽性対照として、ＣＨＯ−ＣＣ−ＣＫＲ− ２Ｂ受容体（Cambadiere，C.，et al.，P.M.J．Biol．Chem．270: 16491(1995) ）および分化したＥＯＬ−３細胞由来の膜を使用した。これらの研究の結果を下記表１に示す。Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８は、ケモカインＣＫβ−８との特異的結合を示した。よって、ＣＫβ−８は、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８のリガンドである。実施例７異なる細胞タイプにおけるｍＲＮＡ発現よく知られたグアニジニウムチオシアネート−フェノール法、次いでオリゴｄＴカラムを用いる単離を用いて種々の細胞タイプからポリＡ⁺ＲＮＡを単離した。鋳型複写装置（Schreier & Schuell,Keene,NH）を用いてＲＮＡドットブロット分析を行って均一なドットサイズとした。０．５μｇのＲＮＡを用いてポリＡ⁺ ＲＮＡを応用した。１Ｍホルムアルデヒドに調整することによってＲＮＡ試料を変性させ、５５℃で１５分加熱した。試料を２０倍体積の３ＭＮａＣｌ（０．３Ｍクエン酸三ナトリウムを含有）中に希釈し、おだやかに吸引しながらニトロセルロースフィルターにアプライした。さらなる希釈液でフィルターを洗浄し、８０℃で２時間焼き付け、次いで、５０％ホルムアミド、５ｘＳＳＰＥ、５ｘデンハーツ、０．１％ＳＤＳおよび１００μｇ／ｍｌ酵母ｔＲＮＡ中の高い厳密さの下で、ハイブリダイズさせた。５０℃において０．１ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳでブロットを洗浄し、−７０℃で４８時間Ｘ線フィルムに曝す。ホスホ− イメージング（Phospho-imaging）分析を用いてドットの定量を行い、データ（相対光学単位(ＯＤ単位)）を決定した。表２中の下記データは、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８が単球中で発現され、細胞を形成する場合アップレギュレートされることを明白に示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/00 ６１３Ａ６１Ｋ 31/00 ６１３Ｅ６２５６２５Ｂ６２６６２６Ｎ６２９６２９６３１６３１６３１Ｍ６３７６３７Ｅ６４３６４３Ｄ 38/00 39/395 Ｄ 39/395 45/00 45/00 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ０７Ｋ 14/705 16/28 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 1/68 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者バーグスマ，ダーク・ジェイアメリカ合衆国19312ペンシルベニア州バーウィン、アイリッシュ・ロード271番 (72)発明者エルショーバギー，ナビル・エイアメリカ合衆国19380ペンシルベニア州ウエスト・チェスター、バウ・トゥリー・ドライブ1648番 (72)発明者サラウ，ヘンリーアメリカ合衆国19438ペンシルベニア州ハーリーズビル、メイプル・アベニュー 348番 (72)発明者ルーベン，スティーブン・エムアメリカ合衆国20832メリーランド州オールニ、ヘリティッジ・ヒルズ・ドライブ 18528番

Claims

【特許請求の範囲】１．(ａ) 配列番号：２のアミノ酸１から３４４までを含むポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対して少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド； (ｂ)(ａ)のポリヌクレオチドに対して相補的なポリヌクレオチド；および (ｃ)(ａ)または（ｂ）のポリヌクレオチドの少なくとも１５個の塩基を含むポリヌクレオチドからなる群より選択されるメンバーを含む単離ポリヌクレオチド。２．ポリヌクレオチドがＤＮＡである請求項１のポリヌクレオチド。３．ポリヌクレオチドがＲＮＡである請求項１のポリヌクレオチド。４．配列番号：１に示すヌクレオチド１から１０５０までを含む請求項２のポリヌクレオチド。５．配列番号：２のアミノ酸１から３４４までをコードする配列番号：１に示すヌクレオチド配列を含む請求項２のポリヌクレオチド。６．配列番号：２のアミノ酸２１から３４４までを含むポリペプチドをコードする請求項２のポリヌクレオチド。７．(ａ) ＡＴＣＣ受託番号９８０９９中に含まれるヒト・ｃＤＮＡにより発現される同じ成熟ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対して少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド； (ｂ)(ａ)のポリヌクレオチドに対して相補的なポリヌクレオチド；および (ｃ)(ａ)または（ｂ）のポリヌクレオチドの少なくとも１５個の塩基を含むポリヌクレオチドからなる群より選択されるメンバーを含む単離ポリヌクレオチド。８．請求項２のＤＮＡを含むベクター。９．請求項８のベクターを含む宿主細胞。１０．該ＤＮＡによりコードされるポリペプチドを請求項９の宿主細胞から発現させることを特徴とするポリペプチドの製造方法。１１．請求項８のベクターで細胞を形質転換またはトランスフェクションして、該ベクター中に含まれるヒト・ｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドを細胞が発現するようにすることを特徴とする、ポリペプチドを発現する細胞の製造方法。１２．配列番号：２のアミノ酸１から３４４までに対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド。１３．配列番号：２に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。１４．請求項１２のポリペプチドのアゴニスト。１５．請求項１２のポリペプチドに対する抗体。１６．請求項１２のポリペプチドの活性を阻害するアンタゴニスト。１７．治療上有効量の請求項１２のポリペプチドを患者に投与することを特徴とする、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８を必要とする患者の治療方法。１８．該ポリペプチドをコードしていて該ポリペプチドをイン・ビボで発現するＤＮＡを患者に提供することにより治療上有効量のポリペプチドが投与される請求項１７の方法。１９．治療上有効量の請求項１６のアンタゴニストを患者に投与することを特徴とする、Ｇ−蛋白結合受容体ＨＮＦＤＳ７８ポリペプチドを阻害することを必要とする患者の治療方法。２０．請求項１２のポリペプチドの発現に関連した疾病または該疾病に対する感受性の診断方法であって、該ポリペプチドをコードしている核酸配列中の変異を決定することを特徴とする診断方法。２１．宿主由来の試料中の請求項１２のポリペプチドの存在について分析を行うことを特徴とする診断方法。２２．ポリペプチドに対する受容体を細胞表面に発現する細胞を、受容体への結合を可能にする条件下でスクリーニングすべき化合物と接触させること(受容体は、受容体への化合物の結合に応答して検出可能シグナルを発することのできる第２の成分に結合している)；および化合物と受容体との相互作用により生じるシグナルの存在または不存在を検出することにより、化合物が受容体に結合するかどうか、そして受容体を活性化または阻害するかどうかを決定することを特徴とする、請求項１２のポリペプチドに対する受容体に結合し、これを活性化または阻害する化合物の同定方法。