JPH11513244A - ノンパラフィノフィリック微生物の抗菌剤感受性を測定する方法及びそれに関連する器具 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 患者から得た検体からの１以上のノンパラフィノフィリック微生物の、様々な抗菌剤及びその所定量に対する感受性を測定する方法。この方法は、水溶液を含む１以上の容器を用意し、その溶液に検体を接種することを内容とする。この方法は更に、（ｉ）炭素源でコーティングしたスライド及び(ii)検査すべき所定量の抗菌剤を容器中に入れることを内容とする。スライド上のノンパラフィノフィリック微生物の増殖の有無を観察することにより、所定量の抗菌剤が、スライド上のノンパラフィノフィリック微生物の増殖を抑制する効果があるかどうかを決定することができる。関連する器具も開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】 ノンパラフィノフィリック微生物の抗菌剤感受性を 測定する方法及びそれに関連する器具発明の背景 本発明は、ノンパラフィノフィリック微生物(nonparaffinophilic microorgan ism)の抗菌剤感受性を測定する方法及びそれに関連する器具に関する。 感染症の処置にあたっては、医療従事者は、しばしば、関係する微生物の特性 や、感染組織中に存在する微生物の効果的な処置に必要となる適切な抗菌剤及び その量について、熟練した推測を行う必要がある。いくつかの微生物の混合フロ ラを処置する必要があるときも多い。医療従事者は、患者中に存在する全ての微 生物の増殖を確実に効果的に抑制するのに必要な抗菌剤及びその投与量を迅速に 確認することに、非常に関心を持っている。 現在のところ、患者の処置に必要な抗菌剤及びその投与量を医師が迅速に確認 するのに有効で、十分な且つ経済的な方法はない。医師は、抗菌剤の選択がもっ と正確に出来るための、抗菌剤の感受性に関する情報の入手だけが出来ていない 。もし、この情報が入手されていれば、医師は、感染症をより効果的に処置する ことができたであろう。更に、抗菌剤の中には高価なものもあるため、 その情報を活用することにより、抗菌剤を、感染症を処置するのに必要な量だけ 使用することができる。最後に、最も重要なことであるが、抗菌剤には、望まし くない副作用がある場合もあるので、その情報を利用することにより、最も効果 的な抗菌剤及びその投与量を発見することができ、これによって、望ましくない 副作用を制限することができる。 本明細書中で用いられる「ノンパラフィノフィリック微生物」という用語は、 パラフィン以外の炭素源により維持される任意の微生物を意味する。このような ノンパラフィノフィリック微生物の例としては、結核菌、パラ結核菌、らい菌、 ブドウ球菌、連鎖球菌、大腸菌、リステリア、ブルセラエ、ヒュメモフィルス(H umemophilus)、トレポネーマ、肺炎球菌、クロストリジウム、クリプトコックス 、コクシジオイデス及びヒストプラスマなどが挙げられるが、これらに限定され ない。また、本明細書中で用いられる「患者」という用語は、動物界の構成員の ことをいい、ヒトを含み、その検体は、本発明の方法及び器具により処理されて いる。 米国特許第５,１５３,１１９号及び第５,３１６,９１８号は、パラフィノフィ リック微生物であるマイコバクテリウムアビウム−イントラセルラーレ（ＭＡＩ ）の抗生物質感受性を確認及び検査する方法及び器具を開示している。これらの 特許の発明者であるロバート−エイ． オラーは、ここに開示する発明の共同発明者の一人である。この方法は、水溶液 を含む容器を用意し、その溶液中に検体を接種することを内容とする。この後、 パラフィンでコーティングしたスライドを容器の中に入れる。次に、スライドを 観察して、ＭＡＩの増殖の有無を調べる。 オラー博士の特許があっても、なお抗菌剤に対する１以上のノンパラフィノフ ィリック微生物の感受性検査方法について、患者中に存在している様な１以上の ノンパラフィノフィリック微生物の増殖を抑制するために使われる抗菌剤の効果 を最大にするやり方で行う方法が必要とされている。発明の要旨 本発明は、上記及びその他の必要性を満たし、或いは上回るものである。患者 から得た検体からの１以上のノンパラフィノフィリック微生物の、様々な抗菌剤 及びその所定量に対する感受性を測定する方法は、水溶液を含む１以上の容器を 用意し、その溶液に検体を接種することを内容とする。この方法は更に、（ｉ） 炭素源でコーティングしたスライド及び、(ii)検査すべき所定量の抗菌剤を容器 中に入れることを内容とする。スライド上のノンパラフィノフィリック微生物の 増殖の有無を観察することにより、所定量の抗菌剤が、スライド上のノンパラフ ィノフィリック微生物の増殖を抑制する効果があるか どうかを決定することができる。 関連器具も開示されている。この器具は、水溶液、検査すべき一定量の抗菌剤 及び検体を含むように形成された容器を含む。この器具は更に、炭素源でコーテ ィングしたスライドを含み、該スライドは、容器中に入れておけるように形成さ れている。繰り返し述べると、スライド上の検体からのノンパラフィノフィリッ ク微生物の増殖の観察結果は、スライド上のノンパラフィノフィリック微生物に 抵抗するのに必要な抗菌剤の濃度を測定するのに用いることができる。図面の簡単な説明 本発明は、以下の発明の詳細な説明を、抗菌剤感度器具の１実施例を示す唯一 の添付図面を参照しながら読むことにより、十分に理解できるであろう。発明の詳細な説明 本発明の方法及び器具は、１以上のノンパラフィノフィリック微生物の、様々 な抗菌剤及びその所定量に対する感受性を測定するのに十分であり、効果的及び 経済的な方法を提供する。唯一の図面を参照しながら、抗菌剤感受性器具(50)の １実施例に関する抗菌剤感受性検査方法を説明する。器具(50)は、試験管(60)(6 1)(62)(63)(64)(65)の形状である６つの容器からなり、各試験管は、ツァペック ブロス(Czapek broth)(70)(71)(72)(73)(74)(75)などの一定量の水溶液を含む。 水溶液は、如何なる 炭素源も含んではならないことが分かるであろう。その理由は、検査すべきノン パラフィノフィリック微生物を、水溶液中ではなく、スライド上で効果的に増殖 させるために、後述するとおり唯一の炭素源をスライド上に提供することが望ま しいからである。試験管(61)〜(65)中の水溶液は、検査すべき抗菌剤の濃度を一 定間隔で増加させたものを含む。試験管(60)は対照管として用いられるもので、 抗菌剤を全く含まない。 次に、患者からの検体を、各々の試験管(61)〜(65)の中に接種する。検体は、 血液試料、任意の生検又は組織標本、胃液、尿、脳脊髄液、鼻咽頭粘膜又は唾液 でよい。これらの検体は、例えば、医師の診療室または病院の救急処置室で、既 知の技術によって患者から得ることができる。 次に、炭素源でコーティングしたスライド(80)(81)(82)(83)(84)(85)を、各々 の試験管(60)(61)(62)(63)(64)(65)に入れる。スライドを、最低２４時間培養す る。スライド(80)〜(85)上のノンパラフィノフィリック微生物の繁殖(90)(91)(9 2)(93)(94)を観察することにより、ノンパラフィノフィリック微生物の繁殖を防 ぐのに必要な抗菌剤の最低抑制濃度（ＭＩＣ）を測定することができる。この場 合には、スライド(85)上のノンパラフィノフィリック微生物は増殖しない。従っ て、ＭＩＣ濃度は、試験管(75)中で発見される。 検体中に、１以上のノンパラフィノフィリック微生物が存在する可能性もある ことが分かるであろう。例として、ある患者が、細菌性心内膜炎に関連する脳腫 瘍を持っている場合には、その患者は、単一の病原体（即ち、ブドウ球菌）を持 っている可能性が最も高い。しかし、スライド上で増殖した混合フロラ（即ち、 ブドウ球菌及び髄膜炎菌）がある場合もある。しかし、存在する如何なる細菌で あっても、患者中で病原性の原因となっているので、全ての細菌性フロラを処置 することが不可欠である。本発明によれば、医師は、スライド上で増殖する全て のフロラを抑制する抗菌剤及びその特定の投与量を指定することができる。従っ て、本発明は、患者中で病原性の原因となっている全てのノンパラフィノフィリ ック微生物を処置するのに有効なものである。 ここでは、複数容器及び複数スライド(80)〜(85)を具えた器具(50)を示してい るが、本発明は、複数容器及び複数スライドに限定されるものではなく、単一容 器及び単一スライドにも適用できるものである。 炭素源及びスライド(80)〜(85)は、炭素源を含むゼリー状マトリクスを含むこ とができる。炭素源は、特に、グルコース、フルクトース、グリセノール(glyce nol)、マンニトール、アスパラギン及びカゼインからなる群から選択される１以 上のものでよい。もう１つの実施例では、スライドを用意し、該スライドを接着 剤でコーティ ングし、接着剤に複数のゲル状ビード(gel beads)を固定させることができる。 次に、ゲル状ビードに、炭素源をイオン結合又は親和結合させる。 炭素源を含むゼリー状マトリクスを有するスライド(80)〜(85)は、以下の方法 で準備できる。先ず、実験用ビーカーなどの容器を、１００ｍｌの蒸留水で満た す。そのビーカーの中に、２グラムの寒天（ゼリー状マトリクス）及び３グラム の炭素源（グルコースなど）を入れる。次に、この混合液を沸騰させ、蒸気滅菌 して、炭素源を有する溶融ゼリー状マトリクスを、熱プレート上に置かれたペト リ皿に注ぎ込む。このようにして、ゼリー状マトリクス／炭素源は、溶融状態を 保つ。その後、スライド(80)などの滅菌スライドを、溶融ゼリー状マトリクス／ 炭素源の中に落とし、その中でコーティングさせる。こうしてコーティングした スライドを、ペトリ皿から取り除き、１、２分間そのままの状態を保つことによ り、スライド上のコーティングを凝固させる。こうして、炭素源を含むゼリー状 マトリクスのコーティングを有するスライドを、水溶液及び検体を含む試験管(6 0)〜(65)のうちの１つに入れる準備が整う。 スライドを準備する別の方法では、先ず、スライドを、コロジオンなどの接着 剤でコーティングし、次に、複数のゲル状ビード（ニュージャージー州パーシッ パニーのファーマシア社により市販されている）を接着剤に施す。 ゲル状ビードの直径は、約１ミクロンである。ゲル状ビードのコーティングを含 むスライドを、次に、炭素源（グルコースなど）を含む緩衝剤に浸して、イオン 結合または親和結合により、炭素源をゲル状ビードに付着させる。 本発明の方法を用いることにより確認できるノンパラフィノフィリック微生物 は、パラフィン以外の炭素源により維持される任意の微生物を含み、その中には 、結核菌、パラ結核菌、らい菌、ブドウ球菌、連鎖球菌、大腸菌、リステリア、 ブルセラエ、ヒュメモフィルス(Humemophilus)、トレポネーマ、肺炎球菌、クロ ストリジウム、クリプトコックス、コクシジオイデス及びヒストプラスマなどが 挙げられるが、これらに限定されない。 検体中の１以上のノンパラフィノフィリック微生物の感受性を測定する方法及 びそれに関連する器具が開示されたことが分かるであろう。この方法は有効で且 つ十分なものであり、高価で複雑な機器を用いる必要がない。関連する器具もま た開示されている。 以上、本発明の特定の実施例を開示したが、当該分野の専門家であれば、開示 内容の全体的な教えを考慮すれば、これらの詳細事項に種々の修正や変更を行い 得ることが分かるであろう。従って、開示された特定の構成は、例示目的のもの に過ぎず、本発明の範囲を限定するものではない。本発明の範囲は、添付の請求 の範囲及びそれ と同等の一切のものに及ぶ。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，Ｉ Ｌ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．患者から得た検体からの１以上のノンパラフィノフィリック微生物の、様々 な抗菌剤及びその所定量に対する感受性を測定する方法であって、 水溶液を含む１以上の容器を用意し、 前記溶液に前記検体を接種し、 前記容器中に、（ｉ）炭素源でコーティングしたスライド及び(ii)所定量の 抗菌剤を入れ、 前記スライド上のノンパラフィノフィリック微生物の増殖の有無を観察する ことにより、前記所定量の前記抗菌剤が、前記スライド上の前記ノンパラフィノ フィリック微生物の増殖を抑制する効果があるかどうかを決定する ことを内容とする方法。 ２．前記スライドとして、前記炭素源を含むゼリー状マトリクスをコーティング したものを用いることを内容とする、請求項１に記載の方法。 ３．前記スライドに、先ず、複数のゲル状ビードを付着させ、次に、該ゲル状ビ ードに前記炭素源を結合させることを内容とする、請求項１に記載の方法。 ４．前記炭素源は、前記ゲル状ビードにイオン結合されている、請求項３に記載 の方法。 ５．前記炭素源は、前記ゲル状ビードに親和結合されて いる、請求項３に記載の方法。 ６．前記ゲル状ビードを、接着剤によって前記スライドに付着させることを内容 とする、請求項３に記載の方法。 ７．前記接着剤として、炭素源を有するゼリー状マトリクスを用いることを内容 とする、請求項６に記載の方法。 ８．前記炭素源として、グルコース、フルクトース、グリセノール(glycenol)、 マンニトール、アスパラギン及びカゼインからなる群のうちの１以上を用いるこ とを内容とする、請求項１に記載の方法。 ９．前記検体として、血液、胃液、尿、脳脊髄液、鼻咽頭粘膜及び唾液からなる 群から選択されたものを用いることを内容とする、請求項１に記載の方法。 10．各々が水溶液を含む複数の容器を用意し、 各容器に一定量の前記検体を接種し、 （ｉ）炭素源でコーティングした別個のスライド及び(ii)検査すべき一定量 の抗菌剤を各容器に入れ、該各容器は、所定量の様々な前記抗菌剤を含み、 前記スライド上の前記ノンパラフィノフィリック微生物の増殖の有無を観察 することにより、前記ノンパラフィノフィリック微生物の増殖を抑制する前記抗 菌剤の最低抑制濃度を測定する ことを内容とする、請求項１の方法。 11．患者から得た検体からの１以上のノンパラフィノフィリック微生物の、様々 な抗菌剤及びその所定量に対する感受性を測定する器具であって、 （ｉ）水溶液、(ii)検査すべき一定量の抗菌剤及び(iii)前記検体を含むよ うに形成された容器並びに、 炭素源でコーティングしたスライドを含み、該スライドは、前記容器中に入 れておけるように形成されており、これによって、前記スライド上の前記検体か らの前記ノンパラフィノフィリック微生物の増殖の観察結果を、前記スライド上 の前記ノンパラフィノフィリック微生物に抵抗するのに必要な前記抗菌剤の濃度 を測定するのに用いることができる ことを内容とする器具。 12．前記スライドは、前記炭素源を含むゼリー状マトリクスでコーティングされ ている、請求項１２に記載の器具。 13．前記スライドは、炭素源を結合させた複数のゲル状ビードでコーティングさ れている、請求項１１に記載の器具。 14．前記炭素源は、前記ゲル状ビートにイオン結合されている、請求項１３に記 載の器具。 15．前記炭素源は、前記ゲル状ビードに親和結合されている、請求項１３に記載 の器具。 16．前記ゲル状ビードは、接着剤によって前記スライド に付着している、請求項１３に記載の器具。 17．前記接着剤はコロジオンである、請求項１６に記載の器具。 18．前記炭素源は、グルコース、フルクトース、グリセノール(glycenol)、マン ニトール、アスパラギン、尿素、カゼイン及び水解物からなる群のうちの１以上 である、請求項１１に記載の器具。 19．（ｉ）水溶液、(ii)検査すべき一定量の抗菌剤及び(iii)前記検体を含むよ うに各々が形成された複数の容器及び、 炭素源でコーティングした複数のスライドを含み、該スライドの各々は、前 記容器の１つの中に入れておけるように形成されている、 請求項１１に記載の器具。