JPH11510384A - 感染の出現を予測する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 感染の出現を予測する方法、およびこのような方法に使用されるキットが提供される。特に、ＭＢＰ遺伝子をコードする遺伝子のエキソン１における変異の存在の決定からなる方法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】 感染の出現を予測する方注 本発明は、感染の出現を予測する方法に関するものである。特に、本発明は、 ＨＢＶ感染などのウィルス感染の出現を予測する方法、および小児の感染の羅病 性を測定する方法に関するものである。本発明はまた、このような方法に使用さ れるキットを包含するものである。 マンノース結合タンパク質（ＭＢＰ）は、ＭＢＰ関連セリンプロテアーゼ（Ｍ ＡＳＰ）を用いて補体及びｘ食作用を活性化させ、およびＭＢＰのコラーゲンド メインを介してコルレクチンレセプター(collectin receptor)に結合することに よってオプソニンとして直接作用することによって先天性免疫において重要な役 割を果たすカルシウム依存性レクチンである（テイラー(Taylor)ら、バイオケム ジェー(Biochem．J.)、２６２：７６３〜７７１（１９８９年）；クールマン( Kuhlman)ら、ジェー エックスプ メド(J．Exp．Med.)、１６９：１７３３〜１ ７４５（１９８９年）；オータ(Ohta)ら、ジェー バイオル ケム(J．Biol．Ch em.)、２６５：１９８０〜１９８４（１９９０年）；マツシタ エム(Matsushit a，M.)及びフジタ ティー(Fujita，T.)、ジェー エックスプ メド(J．Exp．M ed.)、１７６：１４９７〜１５０２（１９９２年）；スーパー(Super)ら、クリ ン エックスプ イムノル(Clin．Exp．Immunol.)、７９：１４４〜１５０（１ ９９０年）；マルホトラ(Malhotra)ら、バイオケム ジェー(Biochem．J.)、２ ９３：１５〜１９（１９９３年））。ＭＢＰは、インフルエンザＡ型ウィルスな どの様々な病原体上の炭化水素部分に結合する（ハートショーン(Hartshorn)ら 、ジェー クリン インヴェスト(J．Clin．Invest.)、９１：１４１４〜１ ４２０（１９９３年））。ＭＢＰ遺伝子の５４及び５７番目のコドンの点変異は 、ＭＢＰの低血清レベル及び食作用異常によって引き起こされる共通の免疫不全 と関連がある（スミヤ(Sumiya)ら、ランセット(Lancet)、３３７：１５６９〜１ ５７０（１９９２年）；リプスコム(Lipscombe)ら、ヒューマン モル ジェネ ット(Human Mol．Genet.)、１：７０９〜７１５（１９９２年））。５２番目の コドンのより一般的でない変異(less common mutation)もまた、低血清ＭＢＰレ ベルに関連して報告された（マドセン(Madsen)ら、イムノジェネティックス(Imm unogenetics)、４０：３７〜４４（１９９４年））。血清ＭＢＰレベルはまた、 プロモーター多型によって修飾される（マドセン(Madsen)ら、ジェーイムノロジ ー(J．Immunology)、３０１３〜３０２０（１９９５年））。このような変異は 、小児及び成人における重篤でかつ異常な感染と関連があった（スミヤ(Sumiya) ら、（１９９２年）、上記；サマーフィールド(Summerfield)ら、ランセット(La ncet)、３４５：８８６〜８８９（１９９５年）；ガレッド(Garred)ら、ランセ ット(Lancet)、３４６：９４１〜９４３（１９９５年））。 ＷＯ−Ａ−８９０１５１９号には、ヒトのマンノース結合タンパク質の配列、 およびそのクローニングが開示される。ＷＯ−Ａ−９２０７５７９号には、ヒト のマンノース結合タンパク質などの、組換により産生されたマンノース結合タン パク質部分が開示される。 我々は、ここで、ＭＢＰをコードする遺伝子における変異と被検者の感染の罹 患性との間の明白な関係を示した。 したがって、第一の概念によると、本発明は、被検者が一以上のＭＢＰ遺伝子 の変異を有するかどうかを決定する段階からなる被検者の感染の罹患性を予測す るおよび／または評価する方法を提供するものである。 慢性疲労症候群は、筋肉痛等の他の症状を伴う、身体的及び精神的な 疲労によって特徴付けられる、病原学的に不明な状態である。この症状は、具体 的には、腺熱またはインフルエンザ様であることが多い、ウィルス感染の後に起 こる。ＥＢＶによる持続ウィルス感染（トビ(Tobi)ら、ランセット(Lancet)、 ：６１〜４（１９８２年））、ＨＨＶ６またはエンテロウィルス感染（ベハン(B ehan)ら、ジェー インフェクト（J．Infect.）、１０：２１１〜２２２（１９ ８５年））は上記症状を説明するものであるという示唆があるが、このような主 観的な性質の症状、及び改変される睡眠パターン等の他の症状の出現は抑うつ病 または身体化疾患でより典型的であるという示唆をするものもあった（マヌ(Man u)ら、イント ジェー サイキアトリー メド(Int．J．Psychiatry Med.)、２ ２：３９７〜４０８（１９９２年））。 我々は、ここで、慢性疲労症候群の発達はＭＢＰ遺伝子における同様の変異と 関連することを示した。この素因は、通常、慢性のウィルス感染への罹患性と関 連があると考えられる。 したがって、第二の概念によると、本発明は、被検者がＭＢＰ遺伝子の５２番 目のコドンの変異を有するかどうかを決定する段階からなる被検者の慢性ウィル ス感染の発達のしやすさを予測するおよび／または評価する方法を提供するもの である。 第三の概念によると、本発明は、被検者がＭＢＰ遺伝子の５２番目のコドンの 変異を有するかどうかを決定する段階からなる被検者の慢性疲労症候群の発達の しやすさを予測するおよび／または評価する方法を提供するものである。 第四の概念によると、本発明は、被検者がＭＢＰ遺伝子の５２番目のコドンの 変異を有するかどうかを決定する段階からなる被検者の慢性疲労症候群の診断方 法を提供するものである。 これにより、ウィルス感染及びその後に生じる慢性疲労症候群の発達 に対する感受性に関して患者を明確に評価する方法、さらには慢性疲労症候群の 症状を示す患者の慢性疲労症候群を診断する方法が、初めて、提供される。 加えて、既にウィルス感染に罹った患者を評価することが可能となり、これに より非変異型マンノース結合タンパク質で処置することによりこのような症候群 の発達を阻止することができる。 さらに、慢性疲労症候群および抑うつ病、過敏性腸症候群やガルフウァー症候 群(Gulf war syndrome)等の他の状態の症状群における明白な類似性及び重複が 存在する。したがって、５２番目のコドンの変異の同定はまたこのような状態の 発達のしやすさをも示すと考えられる。 したがって、第五の概念によると、本発明は、被検者がＭＢＰ遺伝子の５２番 目のコドンの変異を有するかどうかを決定する段階からなる、被検者の抑うつ病 、過敏性腸症候群および／またはガルフウァー症候群(Gulf war syndrome)の発 達のしやすさを予測するおよび／または評価する方法を提供するものである。 Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ）に曝されることにより、感染症、劇症肝炎、自己 限定急性肝炎(self limiting acute hapatitis)または肝硬変および／または肝 細胞癌に進行する慢性遷延性感染症を引き起こさない。このようにＨＢＶの本来 の履歴が様々である理由は不明であるが、恐らく宿主の免疫因子によって決定さ れると考えられる。 ＨＢＶエンベロープの中間表面タンパク質(middle surface protein)は、ＭＢ Ｐに結合する高マンノースオリゴサッカライドを含み（ガーリッチ ダブリュー (Gerlich，W.)、ストラクチャー アンド モレキュラー バイオロジー；イン ヴィラル ヘパティティス(Structure and Molecular Biology；In viral Hep atitis)、ツッカーマン エージェー(Zuckerman A.J.)、トーマス エッチシー( Thomas H.C.)著；チャー チル リビングストン(Churchill Livingstone)、頁９３（１９９３年））、慢 性ＨＢＶの患者における従来の研究により血清のオプソニン欠損が示された（ム ノズ エル(Munoz L.)、ＰｈＤ学位論文、（１９８９年）、ユニヴァーシティー オブ ロンドン、頁８９）。 医師が特定の患者が慢性のＨＢＶ感染に発達しそうかどうかを予想できること は、明らかに好ましい。 我々は、ここで、慢性のＨＢＶ感染の発達がＭＢＰの変異と関連があることを 示した。 したがって、第六の概念によると、本発明は、被検者がＭＢＰ遺伝子内に変異 を有するかどうかを決定する段階からなる被検者のＨＢＶ感染の出現(outcome) を予測する方法を提供するものである。 第七の概念によると、本発明は、被検者がＭＢＰ遺伝子内に変異を有するかど うかを決定する段階からなる被検者の慢性ＨＢＶ感染の発達のしやすさを予測す る方法を提供するものである。 第八の概念によると、本発明は、被検者がＭＢＰ遺伝子内に変異を有するかど うかを決定する段階からなる被検者のＨＢＶ感染の罹患性および／または急性Ｈ ＢＶ感染の発達のしやすさを予測する方法を提供するものである。 特に、上記本発明の方法は、ＭＢＰ遺伝子のエキソン１の５２番目のコドンに おける変異の存在の決定からなる。 患者が急性から慢性のＨＢＶ感染に進行しやすそうかどうかを決定することが できることは医師にとって非常に有用である。このような患者は、慢性のＨＢＶ 感染が発達する前に、初期に処置できる。これにより、さらに、より良い応答速 度がもたらされる。急性ＨＢＶ感染症の患者は簡単にスクリーニングでき、変異 を有する患者を処置のターゲットとすることができる。 加えて、ＨＢＶ感染に罹患しやすいため、特にワクチン接種が必要である患者 を同定することができる。これにより、変異を有すると同定された患者はターゲ ットされたワクチン接種プログラムの被検者となりうる。 ＭＢＰの変異に関連する繰り返される細菌による及び真菌による感染が免疫不 全症候群であることが疑われた小児及び成人で報告された（スミヤ(Sumiya)ら、 （１９９１年）、上記；サマーフィールド(Summerfield)ら、ランセット(Lancet )、３４５：８８６〜８８９；ガレッド(Garred)ら、ランセット(Lancet)、３４ ６：９４１〜９４３（１９９５年））。ＭＢＰの変異及び小児の感染は双方とも 共通であるが、のような変異と小児の感染の予測との間の明瞭な関連は未だ示さ れていなかった。 我々は、ここで、このような関連は存在し、マンノース結合タンパク質中の変 異の存在を試験することによって感染病の危険性がより高い小児、特に再発性の 感染症に感染しやすい小児が同定できることが示した。 したがって、第九の概念によると、本発明は、小児がＭＢＰ遺伝子中に少なく とも一の変異を有するかどうかを決定する段階からなる小児が感染症にかかりや すいとより考えられるかどうかを決定する方法を提供するものである。 第十の概念によると、本発明は、小児がＭＢＰ遺伝子中に少なくとも一の変異 を有するかどうかを決定する段階からなる小児が再発性の感染症にかかりやすい とより考えられるかどうかを決定する方法を提供するものである。 第十一の概念によると、本発明は、乳児がＭＢＰ遺伝子中に少なくとも一の変 異を有するかどうかを決定する段階からなる乳児が未熟で生まれるとより考えら れるかどうかを決定する方法を提供するものである。 第十二の概念によると、本発明は、小児がＭＢＰの変異に対して同型接合であ るかどうかを決定する段階からなる小児が感染症にかかりやすいとより考えられ るかどうかを決定する方法を提供するものである。本発明の上記概念において、 「同型接合」は、ＭＢＰの変異体に関する小児の遺伝子型または表現型のいずれ かに関する。言い換えれば、小児は、たとえＭＢＰ遺伝の各コピーにおいて異な る変異を有する場合であっても、ＭＢＰの変異体に対して同型接合であるとみな されるであろう。 特に、本発明の上記方法は、ＭＢＰ遺伝子のエキソン１の５２、５４または５ ７番目のコドンにおける変異の存在を決定することからなる。 好ましくは、本発明の方法では、被検者のゲノムＤＮＡは、適当な源から、例 えば、血液サンプルから抽出され、ＭＢＰ遺伝子のエキソン１領域は分析する前 に増幅される。増幅は当業者には既知の様々な方法を用いて行うことができ、こ のような増幅方法としては、ＰＣＲ、当業者に既知の技術、リガーゼ連鎖反応(L igase Chain Reaction)（アブラバヤ(Abravaya)ら、ヌクレイック アシッド レス(Nucleic Acid Res.)、２３：６７５〜８２（１９９５年））、増幅不応性 変異システムＰＣＲ(amplification refractory mutation system PCR)(デービ ス(Davies)ら、アースリティス アンド リューマティズム(Arthritis & Rheum atism)、３８：１１０〜１１４（１９９５年））及び特定部位の突然変異誘発Ｐ ＣＲ（マドセン(Madsen)ら、イムノジェネティックス(Immunogenetics)、４０： ３７〜４４（１９９４年））。 タンパク質における変異はまた、直接ＤＮＡ配列決定(direct DNA sequencing )、サザンブロットハイブリダイゼーション等の他の様々な手段によってまたは ペプチドに特異的な抗体、即ち、変異されたタンパク質に対する抗体を用いるこ とによって検出できる。 さらなる概念によると、本発明は、ＭＢＰ遺伝子のエキソン１領域の ＰＣＲ増幅に使用される一以上の適当なプラーマー対からなる本発明の方法に使 用されるキットを提供するものである。 必要であれば、本発明のキットは、さらに、被検者のＭＢＰ遺伝子型を確立す るのに使用される一以上の試薬および／または材料からなる。遺伝子型を確立す るための適当な試薬の例としては、ＳＳＯドット−ブロットハイブリダイゼーシ ョンに使用されるプラーマーが挙げられる。 さらなる他の概念によると、本発明は、以下を提供するものである： （ａ）慢性のウィルス感染の予防または処置を目的とする薬剤の調製におけるＭ ＢＰの使用； （ｂ）慢性疲労症候群の予防または処置を目的とする薬剤の調製におけるＭＢＰ の使用； （ｃ）被検者に有効量のＭＢＰを投与することからなる慢性疲労症候群の予防ま たは処置方法； （ｄ）被検者に有効量のＭＢＰを投与することからなる慢性ウィルス感染の予防 方法； （ｅ）ＨＢＶ感染の処置を目的とする薬剤の調製におけるＭＢＰの使用； （ｆ）急性ＨＢＶ感染の予防を目的とする薬剤の調製におけるＭＢＰの使用； （ｇ）慢性ＨＢＶ感染の発達を予防する薬剤の調製におけるＭＢＰの使用； （ｈ）被検者に有効量のＭＢＰを投与することからなるＨＢＶ感染の処置方法； （ｉ）被検者に有効量のＭＢＰを投与することからなる急性ＨＢＶ感染の予防方 法；および （ｊ）被検者に有効量のＭＢＰを投与することからなる慢性ＨＢＶ感染 の発達の予防方法； （ｋ）小児に有効量のＭＢＰを投与することからなる小児の再発性感染の処置方 法。 明確な関連がＭＢＰ遺伝子の５２、５４及び５７番目のコドンの変異及び特定 の状態の出現の間に確立されると、患者が一または他の「遺伝子治療」の形態に よって処置される可能性がでてくる。このようにして、ＭＢＰ遺伝子が欠損する 患者を、患者の正常なＭＢＰが形成されるように修正(correct)／修復(repair) ／置換(replace)する。 したがって、さらなる概念によると、本発明は以下を提供するものである： （Ｉ）以下の予防または処置に使用される薬剤の製造における正常な形態のＭＢ Ｐ遺伝子をコード化するＤＮＡの使用： （ｉ）慢性のウィルス感染、例えば、慢性のＨＢＶ感染； （ｉｉ）慢性疲労症候群； （ｉｉｉ）抑うつ病； （ｉｖ）過敏性腸症候群； （ｖ）ガルフウァー症候群(gulf war syndrome)；および／または （ｖｉ）再発性感染症、特に細菌性または真菌性感染症。 本発明の方法において、ＤＮＡサンプルのＰＣＲ増幅を行うための適当なプラ イマー対は以下のとおりである： ５’プライマー：5'-GCACCCAGATTGTAGGACAGAG-3'；および ３’プライマー：5'-CAGGCAGTTTCCTCTGGAAGG-3' および上記プライマーは本発明のさらなる概念を形成する。 他の実施態様によると、被検者の遺伝子型の決定は、配列特異的オリゴヌタレ オチド（ＳＳＯ）ドット−ブロットハイブリダイゼーション(sequence-sepcific oligonucleotide dot-blot hybridization)を用いて 簡便に行われ、適当なプライマーは以下のとおりである： ５２番目のコドンの野生型：5'-GATGGGCGTGATG-3' ； ５２番目のコドンの変異型：5'-GATGGGTGTGATG-3' ； ５４番目のコドンの野生型：5'-GTGATGGCACCAA-3' ； ５４番目のコドンの変異型：5'-GTGATGACACCAA-3' ； ５７番目のコドンの野生型：5'-ACCAAGGGAGAAAAG-3' ；および ５７番目のコドンの変異型：5'-ACCAAGGAAGAAAAG-3' 。 および上記プライマーは本発明のさらなる概念を形成する。 本発明の各概念の好ましい態様は、必要であれば変更を加えて(mutatis mutan dis)、各他の概念と同様である。 本発明を下記実施例を参照しながら説明するが、下記実施例は本発明を何等制 限するものではないと解する。 実施例１は下記図面を参照する： 図１は、コントロール小児及び感染小児におけるＭＢＰ遺伝子型を示すもので あり；有意により多くの感染小児がＭＢＰ変異体に対して異型接合であった（^* ｐ＝０．０００００４）または同型接合（^**ｐ＝０．０２）であった；および 図２は、様々な年齢群の感染及びコントロール小児におけるＭＢＰ遺伝子変異 の頻度を示すものであり；ＭＢＰ変異の頻度は、６ヶ月未満の（ｐ＝０．０５） 、６〜１８ヶ月の（ｐ＝０．０３）及び１８ヶ月を越える（ｐ＝０．０００１） 感染小児において有意により大きかったが、この際、数はグループの大きさを示 す。実施例１ 方法 血液サンプルは、通院する小児科の外来患者またはセントメリー病院の一般の 小児科病棟、小児科集中治療病棟若しくは新生児集中治療病棟 に入院した一連の子供らから得た。全てのサンプルは、臨床上の理由から静脈切 開により採血され、余剰血液の４滴までが、ブロッティングペーパー（ガスリー カード）上にスポットされ、エンベロープ（薬包紙）内に置かれ、乾燥された。 情報として、その子供の性別、生年月日、人種および仮診断込みで収集した。 仮診断は、視診のノートまたは病院のコンピューター化された(computerised)患 者管理システムの臨床診断コードによって正しさが確認された。研究対象は、パ ークサイド保健局の倫理学委員会(the ethics committee of parkside health a uthority)によって正式に承認された。 ＭＢＰ遺伝子型は、乾燥血液スポットから抽出されたＤＮＡの分析により測定 された。該ガスリーカードを、７分間１２０℃で加圧滅菌し、室温で放置した。 ＤＮＡ抽出のため、方形の区画（〜３ｍｍ²）をクリーンブレードで乾燥血液ス ポットから切取り、７分間１００μｌの１ｘＰＣＲ緩衝液中で煮沸した。その上 澄の２５〜３０μｌを用いて、該ＭＢＰ遺伝子のエキソン１を、３３８ｂｐの産 物の収率までＰＣＲによって増幅した（スミヤら、（１９９１）、上記書物・論 文による）(Sumiya et al，(1991)，supra)。当該遺伝子型が、配列の特異なオ リゴヌクレオチドのハイブリダイゼーション法によって測定された（ワーズワー スら、イムノゲネティクス、第３２巻：第４１３頁〜第４１８頁（１９９０年） ）(Wordsworth et al，Immunogenetics，32:413-418(1990))。 遺伝子頻度を測定し、ハーディ-ワインベルク方程式を用いて予想した頻度と 比較した。相違を、χ自乗検定、オッズ比および９５％信頼区間を用いて評価し た。３つの異なるＭＢＰ突然変異で子供らを統計解析の為に一斉にグループ分け した。 結果 ６９０個の血液サンプルが集められた。４５個が重複し、２個は臨床上のディ テールが不適合であり、１７個（２．５％）は、ＭＢＰ遺伝子型が欠損した。こ れらのサンプルは、分析前のデーターベースから瀉下した。残りの６２６人の子 供ら（９１％）のデータを分析し、その結果を表１に示す。０〜１８歳の範囲の 年齢でかつ男性が５８％であった。５２番目のコドンの突然変異の予想した頻度 （０．０５）が、全グループに観察された。５４番目のコドンの突然変異の頻度 （０．１）および５７番目のコドンの突然変異の頻度（０．０５）は、予想した 頻度よりも低かった。しかしながら、その頻度は、当該サンプル（アフリカ人／ カリブ人 ２１％；コーカサス人／アジア人／東洋人 ７９％）の人種構成に関 しては正確であり、ユーラシアグループ（０．１２）の５４番目のコドンおよび アフリカ系カリブ人の５７番目のコドンに対して予想した頻度（０．２２）が得 られた。 一人の子供は、５７番目のコドンの突然変異型の同型接合体であった。ハーデ ィ-ワインベルク方程式がこの集団に５４番目のコドンの同型接合体６人を予想 したのに比して、２人が５４番目のコドンの突然変異型の同型接合体であった。 しかしながら、１６人は、５２、５４および５７番目の突然変異対立遺伝子の組 み合わせを有する表現型の同型接合体であった。したがって、全体の１９人の子 供ら（３％）は、ＭＢＰ突然変異による同型接合体と考察された。 我々は、まず、感染と突然変異対立遺伝子の関係を調査した。感染のない２７ ２人の子供ら（コントロール）のうち、６４人が突然変異ＭＢＰ対立遺伝子を保 有し、２０８人が野生型であった。対比として、感染の３５４人の子供らのうち 、１５２人が突然変異ＭＢＰ対立遺伝子を保有し、２０２人が野生型であった（ 表１）。感染した子供らの突然変異ＭＢＰ対立遺伝子の増加した頻度は、非常に 有意なものであった（ｐ＜ １０-6、オッズ比２．４、９５％信頼限界１．７〜３．５）。我々は、次に、突 然変異ＭＢＰ対立遺伝子が異型接合体および同型接合体の両者の感染に対する感 受性を増加させるかどうかを調査した（図１）。 感染の１３７人が突然変異ＭＢＰ対立遺伝子による異型接合体であり、２０２ 人が野生型であった（ｐ＝０．０００００４、オッズ比２．４％、９５％信頼限 界１．６〜３．４）のに比して、コントロールの６０人が、突然変異ＭＢＰ対立 遺伝子による異型接合体であり、２０８人が野生型であった。しかしながら、同 型接合体の数は、有意な相違が今までどおり観察されたものより必然的により少 なかった。感染グループ中、１５人が突然変異ＭＢＰ対立遺伝子による同型接合 体である（ｐ＝０．０２、オッズ比３％、９５％信頼限界１．２〜１２．１）の に比して、コントロールの中では、４人が突然変異ＭＢＰ対立遺伝子による同型 接合体であった。同型接合の子供らは、敗血症による６人、蜂巣炎および腫脹に よる２人並びに重症の扁桃炎および中耳炎による４人を含む顕著な重症の感染を 引き起こした（表２参照のこと）。 我々は、その後、突然変異ＭＢＰ対立遺伝子により授与された感染のリスクが この子供らの年齢に関係するかどうかを調査した。そのデータを表２に示す。こ れは、突然変異ＭＢＰ対立遺伝子が６カ月未満の歳の子供ら（ｐ＝０．０５、オ ッズ比３％、９５％信頼限界１〜１７）、６〜１８カ月の歳の子供ら（ｐ＝０． ０３、オッズ比４％、９５％信頼限界１〜９）、および１８カ月以上の歳の子供 ら（ｐ＝０．０００１、オッズ比２．４％、９５％信頼限界１．５〜３．７）の 感染による有意な感受性を授与していることを示す。 異なった感染の突然変異ＭＢＰ対立遺伝子の頻度は、広範囲に変化した。例え ば、連鎖球菌性の感染による子供らの７０％が突然変異ＭＢＰ遺伝子を保有して いたのに比して、結核症の子供らの１３％だけが、突 然変異ＭＢＰ対立遺伝子を持っていた。最後に、コントロールグループの予期し なかった発見は、コントロール２７０人の２３％が突然変異ＭＢＰ対立遺伝子を 保有していたのに比して、未熟児２１人の４８％のサブグループがＭＢＰ突然変 異体を持ち、２人が同型接合体であったということであった（表２参照のこと） 。 考察 マンノース結合するタンパク質は先天免疫の重要な成分であり、微生物の細胞 壁のマンノースおよびＮ−アセチルグルコサミン残基への結合の後でオプソニン 作用を成立させる。ＭＢＰ遺伝子の突然変異は、オプソニン作用を害し、末梢配 列の突然変異は、子供および大人の再発性および重症の感染と関連している（ス ミヤら、（１９９１年）、上記書物・論文による；サマーフィールドら、（１９ ９５年）、上記書物・論文による；ガレッドら、（１９９５年）、上記書物・論文 による）(Sumiya et al，(1991)，supra; Summerfield et al，(1995)，supra; Garred et al，(1995)，supra)。 しかしながら、小児期の感染およびＭＢＰ突然変異の両者はありふれており、 現在に至るまで関連がＭＢＰ突然変異の存在および小児期の感染への感受性の間 に立証されることは決してなかった。ここに示したデータはこうした関連を立証 し、ＭＢＰ突然変異の存在（または不在）を決定するためのテストが感染に対す る子供の感受性の指標を与え、実際に再発性の感染に対する感受性の指標を与え ることを明瞭に示す。 ＭＢＰ突然変異の分野の先の研究は、ＭＢＰ突然変異の存在が代わる代わる観 察された障害オプソニン作用の理由となる循環ＭＢＰのレベル低下に至ることを 提案している。しかしながら、ここに記載した研究で、我々は、前記推定値がＭ ＢＰ突然変異の信頼できない予言者であるために出現することから血清ＭＢＰレ ベルの測定よりむしろ遺伝子型を信頼 した（リプスコムら、（１９９２年）、上記書物・論文による；リプスコムら、 （１９９５年）、上記書物・論文による；マドセンら、（１９９４年）、上記書 物・論文による；マドセンら、（１９９５年）、上記書物・論文による）(Lipscom be et al，(1992)，supra; Lipscombe et al，(1995)，supra; madsen et al，( 1994)，supra; madsen et al，(1995)，supra)。しかしながら、５４番目および ５７番目のコドンの突然変異は、血清ＭＢＰの大いに減少したレベルと関連し、 いくらかの異型接合体が、正常な範囲内の血清ＭＢＰレベルを有する。５２番目 のコドンの突然変異もまた、血清ＭＢＰレベルを下げる（マドセンら、（１９９ ４年）、上記書物・論文による）（madsen et al，(1994)，supra）。 全体的にみれば、データは、非常に有意である突然変異ＭＢＰ遺伝子型と感染 の顕著な関連を示した。突然変異ＭＢＰ対立遺伝子は、コントロールの子供らと 同様に感染により多くの子供らの場合、約２倍になった。さらに、疑わしい免疫 不全による患者の最近の研究（マドセンら、（１９９５年）、上記書物・論文に よる）（madsen et al，(1995)，supra)）と対照的に、突然変異ＭＢＰ対立遺伝 子による異型接合体であった子供らもまた、コントロールと比較して感染（ｐ＝ ０．０００００４）の大いに増加したリスクがあった。５２番目のコドンの突然 変異データ（ｐ＝０．０２）および５４番目のコドンのデータ（ｐ＝０．００５ ）が、個々に分析した場合にも、異型接合体の感染の増加頻度が、なお、観察さ れた。 このグループの突然変異ＭＢＰ対立遺伝子に対する子供らの同型接合の頻度は 、３％であった。こうした子供らの最も多くは（１６／１９）、対立遺伝子の５ ２、５４または５７番目の突然変異の組み合わせによる表現型同型接合体であっ た。１つは、ハーディ-ワインベルク方程式により予測した頻度である、５７番 目のコドンの同型接合体であり、２つ は、ハーディ-ワインベルク方程式がそれらは６つであるべきであると予測した 、５４番目のコドンの同型接合体（０．００３％）であった。該サンプルは、こ の相違が、統計学的に有意であるかどうかを決定するのに十分な大きさでなかっ たとしても、そのデータは、コーカサス人の集団が、５４番目のコドンの同型接 合体の相対的に劣化したものであるとする、より早いのレポート（リプスコムら 、（１９９２年）、上記書物・論文による；マドセンら、（１９９４年）、上記 書物・論文による）(Lipscombe et al，(1992)，supra; madsen et al，(1994)， supra)。と矛盾のないものである。この明白な劣化に対する理由ははっきりしな いが、影響を受けた胎児の流産の再発によるか（キルパトリックら、ヒューマン リプロダクション、１０巻、第２５０１頁〜第２５０５頁（１９９５年））(K ilpatrick et al，Human Reproduction，10: 2501−2505(1995))または新生児生 命の問題による可能性があった。このような関係においては、非感染性コントロ ールグループの２３％が、突然変異ＭＢＰ対立遺伝子を保有していたのに比して 、２１の未熟児のサブグループの４８％が、ＭＢＰ突然変異を持ち、２つは同型 接合体（１０％）であり、そのうちの１つが死んでいた（表２参照）とする記録 は興味のあることである。したがって、この明白なリンクもまた、潜在的な問題 のガイドとしてそのＭＢＰ突然変異持続状態を決定するために胎児かまたは新た に出産した乳児かいずれかをテストする可能性を表していると見ることができる 。実施例２ 方法 臨床上の理由により血液サンプルを採取した慢性ＨＢＶ感染症の続発性患者を 本研究に使用し、上記患者において、過剰の血液をＭＢＰアッセイを目的として 使用した。多重ウィルス感染の患者を、２人の無γグ ロブリン血症の患者と合わせて、除外した。急性のまたは回復した感染症（表示 (presentation)に関してＨＢｓＡｇ及びＩｇＭ抗ＨＢｃ陽性及び６ヶ月以内にＨ ＢｓＡｇを浄化(clearing)または正常なトランスアミナーゼにより抗ＨＢｃ及び 抗ＨＢｓ陽性）の１９人の白人患者［彼らのうち４人は劇症段階であった）およ び７０人の慢性肝炎（６ヶ月を越える期間ＨＢｓＡｇ陽性）の患者について研究 した。慢性感染症の患者のうち、４９人は男性であり、平均年齢は３９歳であり 、患者の多数（４９人）はウィルスの複製が進行中（ＨＢｅＡｇ陽性）であると いう証拠があった。１７人はＨＢｅＡｇ陰性であり、血清中にＨＢＶ ＤＮＡを 検出できなかった。２人の患者はＨＢＶのＨＢｅ陰性変異体に感染していた。慢 性感染の患者は、白人、アジア人及び他のグループの混合であった（表１）。コ ントロールサンプルは、９８人の成人のイギリスの白人及び１２３人の中国人（ 香港）の会社人から得た。 血清学的マーカー（ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇ）を、製造社によって推奨され るのと同様にして標準的なイムノアッセイ（アボット ダイアグノスティックス (Abbott Diagnostics)）を用いて検定した。 ゲノムＤＮＡを血液から抽出し、ＭＢＰ遺伝子のエキソン１をＰＣＲによって 増幅した。前記した３個の変異を配列特異的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼ ーション(sequence specific oligonucleotide hybridisation)（ワーズワース( Wordsworth)ら、イムノジェネティックス(Immunogenetics)、３２：４１３〜４ １８（１９９０年））によって分析した。５２番目のコドンの変異を、特定部位 の突然変異誘発（ＳＤＭ）ＰＣＲ（マドセン(Madsen)ら、（１９９４年）、上記 ）によっておよびＰＣＲ産物の直接ＤＮＡ配列決定(direct DNA sequencing)に よって確認した。すべてのＰＣＲアッセイは、適当なポジティブ及びネガティブ コントロールと共に行い、サンプルは、各実験が感染及び非感染患者の サンプル双方を含むように、グループに分けた(batch)。血清中のＭＢＰ濃度を ＥＬＩＳＡアッセイ（リプスコム(Lipscombe)ら、ユーロ ジェー ヒューム ジェネティックス(Eur．J．Hum．Genetics)、４：１３〜１９（１９９６年）） を用いて測定した。 結果 ５２番目のコドンの対立遺伝子の頻度は、白人コントロールにおいて０．０２ であったのに比して、急性Ｂ型肝炎の白人患者においては０．０８であった。急 性Ｂ型肝炎の患者の一人は、ＨＢｓ抗原を浄化するのに約６ヶ月かかった：この 患者は５２番目のコドンの変異に対して同型接合であった。 アジア人ではなく白人の被検者において、５２番目のコドンが変異した対立遺 伝子(codon 52 mutation allele)の存在と慢性ＨＢＶ感染との間に非常に有意な 関係があった（ｐ＝０．０００４）。持続してＨＢＶに感染した患者におけるこ の対立遺伝子の頻度は、コントロールの白人及びアジア人集団ではそれぞれ０． ０２及び０．０１の頻度であるのに対して、０．１７及び０．０３であった（表 ２）。５４及び５７番目のコドンが変異した対立遺伝子と急性または慢性ＨＢＶ との関連はなかった（表２）。 ３人の患者は、うち一人は急性感染であり２人は慢性感染であるが、５２番目 のコドンの変異に対して遺伝子型が同型接合であり、急性肝炎の一人の患者は５ ４番目のコドンの変異に対して同型接合であった（表１）。 慢性ＨＢＶの白人患者のうち２５人からの血清サンプルを用いて、ＭＢＰ濃度 を検定した（表３）。変異型ＭＢＰ対立遺伝子（５２及び５４番目のコドン）に 対して異型接合の患者は、遺伝子型と一致して血清濃度が消失した。 ディスカッション 持続性ＨＢＶ感染症の白人患者の２８％が５２番目のコドンのＭＢＰ対立遺伝 子に対して同型接合または異型接合であったが、急性感染の患者ではたった１１ ％がおよびコントロールの被検者では４％がこの対立遺伝子を有していた。これ に対して、慢性ＨＢＶのアジア人の患者群ではたった５％が同様の対立遺伝子対 して陽性であったが、この際、アジア人のコントロール被検者では２％であった 。 ＭＢＰは、コルレクチンレセプター(collectin receptor)を有する食細胞によ る末端マンノース残基を有する糖タンパク質の吸収を容易にする。酵母における 糖タンパク質へのＭＢＰの結合は食作用を容易にし、さらに、患者からの血清が これらの粒子をオプソニン処理できないことはＭＢＰ異常による場合がある。こ のようなオプソニン効果は慢性ＨＢＶ感染症の患者で報告された（ムノズ(Munoz )、（１９８９年）、上記）。ＭＢＰがＨＢＶの浄化にどのような影響を及ぼす かは不明である。ＨＢＶの中部エンベロープタンパク質(middle envelope prote in)は、一部がマンノース末端であるオリゴサッカライドで配糖化される４番目 の位置にアスパラギンを有する（ガーリッチ(Gerlich)、（１９９３年）、上記 ）。 したがって、ウィルス粒子は正常な血清ＭＢＰによってオプソニン処理される であろうと考えられる。慢性ＨＢＶ感染症の患者において５２番目のコドンの変 異頻度が増すことは、変異が、酵母で見られるのと同様に、ＨＢＶのオプソニン 処理及び食作用を損なうという考えと一致する。しかしながら、持続性ＨＢＶ感 染と、ＭＢＰの血清濃度を顕著に消失させる、５４及び５７番目のコドンが変異 した対立遺伝子との間には関連がないことから、５２番目のコドンが変異した対 立遺伝子を有する患者におけるＭＢＰの血清濃度の減少が病気との関連を説明す るには不十分であることが示唆される。 ５２番目のコドンの変異（アルギニンからシステインへの置換）は、（軸グリ シン(axial glycine)をジカルボン酸に置換する）他の２種の変異とは異なるも のであり、恐らく、この変異は、血清中のＭＢＰ濃度へはあまり効果を及ぼさな いが細菌性の感染と関連があり、ＭＢＰがオプソニンとして機能することを阻害 する。５２番目のコドンが変異したＭＢＰは、ＨＢＶに結合し、食細胞による吸 収が容易にできなくなるが肝細胞による吸収を促進することにより肝臓における 感染の負担を増加させると考えられる。上記関連に関する他の説明としては、Ｍ ＢＰ遺伝子における５２番目のコドンの変異はＭＢＰの遺伝子座との連鎖不平衡 でありＨＢＶへの宿主の応答に影響を及ぼす他の未同定の遺伝子内の変異に関連 するというものがある。 ５２番目のコドンの対立遺伝子の最高頻度が観察された持続性ＨＢＶ感染症の 白人患者では、一般的に、性交渉、または静脈内用薬剤(IV drug)の使用中の血 液との接触により成人期間中にＨＢＶ感染する。このようなグループでは、感染 接種量は少なく、また、この際、オプソニン機能の欠損は出現にかなり影響を及 ぼす。アジア人患者における５２番目の対立遺伝子のより低い頻度がアジア人患 者が一般的に出生時に感染 しているという事実に関連するほど、感染接種量は多く、このような場合では、 すべての被検者は、胎盤を通る分泌ＨＢｅ抗原によるＴ細胞トレランスが誘導さ れる結果、持続して感染される。このような背景に反して、遺伝的ファクターは あまり重要ではない。 ５２番目のコドンの変異の存在は、明らかに白人集団では持続性ＨＢＶ感染と 関連があるが、アジア人やアフリカ人集団では関連がない。アフリカ人集団にお ける５２番目のコドンの対立遺伝子は、恐らく、ＨＢＶが風土病である地域では このような対立遺伝子は生存に好ましくないため、まれである（マドセン(Madse n)ら、（１９９４年）、上記）。ＭＨＣ クラスＩＩ対立遺伝子ＤＲＢ１ １３ ０２の存在などの、さらなる遺伝的ファクターは、感染がアフリカ人において一 時的であるかまたは持続性であるかに影響を及ぼすと考えられる（サースズ(Thu rsz)ら、ニュー イングランド ジャーナル オブ メディシン(New England j ournal of Medicine)、３３２：１０６５〜１０６９（１９９５年））。大多数 のアジア人では、出生時に感染し、実質的にすべてのこれらの子供が、出生時ま たは出生前にＨＢｅ抗原と接触することによりＴ細胞トレランスが誘導されるた め、持続的に感染する。白人及びアジア人の被検者では、感染は、一般的に、成 人及び小児のときに起こり、それぞれ、５〜２０％が持続的に感染する。これら のグループにおいて、本研究は遺伝的ファクターが出現に影響を及ぼすことを示 す。実施例３ 材料および方法 全血サンプルをカリウム−ＥＤＴＡ中に集め、ＤＮＡ抽出まで−７０℃で貯蔵 した。ＭＢＰ遺伝子のエキソン１をＰＲＣによって増幅し、３２８ｂｐの産物を 得た。変異を配列特異的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション(sequence sepcific oligonucleotide hybridizatio n)によって同定した。５２番目のコドンの変異を特定部位の突然変異誘発ＰＣＲ によって確認した（マドセン(Madsen)ら、（１９９４年）、上記）。変異を非対 称ＰＣＲ後にＤＮＡ配列決定(DNA sequencing)によって確認して、相補的プライ マー及びシークエナーゼ（ケンブリッジバイオサイエンス(Cambridge Bioscienc e)）を用いて１本鎖のＤＮＡを製造した。 患者 患者は、慢性疲労症候群の可能性があるとの診断を一般医または病院の医師に された後、再検査された。すべての患者について、詳細な病歴、臨床検査、定常 的な血液検査及び尿検査を行った。５５人の持続性患者のうち、抑うつ病を併発 しているため、２人を慢性疲労症候群の診断から除外した。 したがって、血液サンプルを最新の国際分類（フクダ(Fukuda)ら、アン イン ター メド(Ann．Inter．Med.)、１２１：９５３〜９５９（１９９４年））に従 って慢性疲労症候群と臨床的に診断された残りの５３人の患者から得た。慢性疲 労症候群の診断に関する改訂症例基準は以下のように定義される： （ａ）他の原因が慎重な問診、試験、定常的な血液スクリーニング（全血球数、 ＥＳＲ、甲状腺機能テスト、電解質、肝機能検査、カルシウム、リン、グルコー ス及び尿検査）によって見あたらない６ヶ月間の持続性あるいは再発性(relapsi ng)疲労；および （ｂ）以下の主な関連症状の４以上が同時に起こる：（ｉ）短期間の記憶または 集中の欠落；（ｉｉ）咽頭炎；（ｉｉｉ）敏感な頚部または腋窩リンパ節；（ｉ ｖ）筋肉痛または間接痛；（ｖ）「新たな」頭痛；（ｖｉ）さわやかでない睡眠 ；（ｖｉｉ）２４時間以上続く運動性倦怠。慢性疲労症候群の診断から以下は排 除される：（ｉ）疲労に関連する活 動的な現在の医学的な状態；（ｉｉ）消散したのではないかとの臨床上の疑いが ある過去の医学的な状態；（ｉｉｉ）主要な精神障害の現在または過去の診断； （ｉｖ）アルコールまたは他の物質の中毒の顕著な病歴；（ｖ）重篤な肥満（４ ５ｋｇ／ｍ²と同等あるいはそれ以上の肥満指数）。 結果 ５３人の白人のＣＦＳ患者の遺伝子型を明らかにした。９人（１８％）が５２ 番目のコドンが変異しており、これは、イギリス人の血液ドナーコントロールで は４％が５２番目のコドンが変異していたことに比べて有意に高い（Ｐ＝０．０ ４、カイ−自乗）。 ディスカッション これらの知見から、慢性疲労症候群はＭＢＰ遺伝子の５２番目のコドンが変異 した患者で生じることが示される。この遺伝学的異常は上記患者を再発性および ／または慢性のウィルス感染にかかりやすくしたと考えられる。慢性疲労症候群 は６ヶ月以上の身体的及び精神的疲労、さらには筋肉痛等の他の症状の特徴を有 する（フクダ(Fukuda)ら、上記）。多くの患者は、可能性のある引き金として初 期のインフルエンザまたは腺熱様の疾患を報告する。 このような主観的な性質の状態は研究を制限し、症候群の性質をめぐってかな りの論争があった（デビッド(David)ら、ビーアール メドジェー(Br．Med．J.) 、２９６：６９６〜６９８（１９８８年））。多くの症状は抑うつ病または身体 化疾患の症状と重複し、精神障害の高い罹患率が上記患者群で見られた。 良く証明された発生(outbreak)（ラムセイ エーエム(Ramsay，A.M.)、オース リバン イー(O'Sullivan，E.)、ランセット(Lancet)、 ：７６１〜７６４（１ ９５６年））により、ウィルス病原学に関する疫学的な 支持が得られたが、このような環境にあっても、症状は集団ヒステリーによるも のであった（マックエベディー シーピー(McEvedy，C.P.)、ブレッド エーダ ブリュー(Bread，A.M.)、ビーアール メド ジェー(Br．Med．J.)、１：７〜１ １（１９７０年））。 血清学的な研究はウィルス病原学のコンセプトを支持することが多かった。様 々なグループがヘルペス感染−エプスタイン−バーウイルス感染（トビー(Tobi) ら、上記）、及びより近年では、ヒトのヘルペスタイプ６の掛かり合いを示唆し た。他のグループでは、患者の血清におけるＶＰ１抗原による進行中のエンテロ ウィルスによる感染の存在を支持するデータが報告された（ユーセフ(Yousef)ら 、ランセット(Lancet)、 ：１４６〜１５０（１９８８年））。 さらに、ＰＣＲの使用して、ＣＦＳの患者の筋肉の生検材料（アーチャード(A rchard)ら、ジェー ロイ ソック メド(J．Roy．Soc．Med.)、８１：３２６〜 ３２９（１９８８年））及び血清（クレメンツ(Clements)ら、ジェー メド ビ ロル(J．Med．Virol.)、 ：１５６〜１６１（１９９５年））中のウィルス核酸 を示すことによりエンテロウィルス感染の役割が支持された。上記ウィルス群の かかわり合いに関するさらなる支持が、患者における血清学的なアッセイにより 可能性のある新規なエンテロウィルスの感染をグラスガウグループ(Glasgow gro up)が示すウィルス研究群から生じる（ガルブレイス(Galbraith)ら、ジェー ゲ ン ビロル(J．Gen．Virol.)、７６：１７０１〜１７０７（１９９５年））。 宿主ファクターもまた研究されたが、現在まで、リンパ球のサブセット及び機 能がかなり免疫学的に研究されたにもかかわらず、矛盾のない異常は示されてい ない。アシクロビアによる処置（ストラウス(Straus)ら、エヌ エング ジェー メド(N．Eng．J．Med.)、３１９：１６９ ２〜８（１９８８年）では利点が示されず、免疫グロブリンの輸液は首尾一貫し た結果をもたらさなかった（ピーターソン(Peterson)ら、アム ジェー メド(A m．J．Med.)、８９：５５４〜５６０（１９９０年）；ロイド(Lloyd)ら、アム ジェー メド(Am．J．Med.)、８９：５６１〜５６８（１９９０年））。しかし ながら、より近年、インターフェロンによる予備実験から、これは患者のサブグ ループにとっては有用であることが示唆された（ブルック(Brook)ら、ジェー インフェクト ディス(J．Infect．Dis.)、１６８：７９１〜２（１９９３年） ）。 マンノース結合タンパク質は非特異的な免疫反応の一部であり、したがって、 病原体に対する最初の宿主側防御の一部となる。マンノース結合タンパク質は、 肝臓細胞によって合成され、様々な細菌、真菌及びウィルスの病原体上の炭化水 素に結合する。結合が起こると、補体が活性化される。これらの作用はその３次 元構造に依存し、近年、１０番目の染色体上に位置する、遺伝子における変異に より重合を欠失させることができることが報告された。我々の患者における５２ 番目のコドンの変異の高い出現率は、慢性疲労症候群との原因関連を示唆し、一 連のウィルスが症状の原因である、慢性感染にかかりやすい原宿主免疫不全の理 論を支持する。このような仮説は一連のウィルスの明らかなかかわり合いを説明 するものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/00 ６３１ Ａ６１Ｋ 31/00 ６３１Ｇ ６４３ ６４３ 38/00 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ａ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号 ９６１４４１４．２ (32)優先日 1996年７月９日 (33)優先権主張国 イギリス（ＧＢ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，Ｈ Ｕ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 トーマス，ホワード，クリストファー イギリス国，ロンドン ダブル２ ２ピー ジー，サウス ウァーフ ロード，クィー ン エリザベス ザ クィーン マザース （キューイーキューエム）ウィング，テン ス フロアー，ザ インペリアル スクー ル オブ メディシン アット セント メリーズ (72)発明者 サマーフィールド，ジョン，オーサー イギリス国，ロンドン ダブル２ ２ピー ジー，サウス ウァーフ ロード，クィー ン エリザベス ザ クィーン マザース ウィング，テンス フロアー，ザ イン ペリアル スクール オブ メディシン アット セント メリーズ (72)発明者 メイン，ジャニス イギリス国，ロンドン ダブル２ ２ピー ジー，サウス ウァーフ ロード，クィー ン エリザベス ザ クィーン マザース ウィング，テンス フロアー，ザ イン ペリアル スクール オブ メディシン アット セント メリーズ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．被検者が一以上のＭＢＰ遺伝子の変異を有するかどうかを決定する段階か らなる被検者の感染の罹患性を予測するおよび／または評価する方法。 ２．被検者がＭＢＰ遺伝子の５２番目のコドンの変異を有するかどうかを決定 する段階からなる被検者の慢性ウィルス感染の発達のしやすさを予測するおよび ／または評価する方法。 ３．被検者がＭＢＰ遺伝子の５２番目のコドンの変異を有するかどうかを決定 する段階からなる被検者の慢性疲労症候群の発達のしやすさを予測するおよび／ または評価する方法。 ４．被検者がＭＢＰ遺伝子の５２番目のコドンの変異を有するかどうかを決定 する段階からなる被検者の慢性疲労症候群の診断方法。 ５．被検者がＭＢＰ遺伝子の５２番目のコドンの変異を有するかどうかを決定 する段階からなる、被検者の抑うつ病、過敏性腸症候群および／またはガルフウ ァー症候群の発達のしやすさを予測するおよび／または評価する方法。 ６．被検者がＭＢＰ遺伝子内に変異を有するかどうかを決定する段階からなる 被検者のＨＢＶ感染の出現を予測する方法。 ７．被検者がＭＢＰ遺伝子内に変異を有するかどうかを決定する段階からなる 被検者の慢性ＨＢＶ感染の発達のしやすさを予測する方法。 ８．被検者がＭＢＰ遺伝子内に変異を有するかどうかを決定する段階からなる 被検者のＨＢＶ感染の罹患性および／または急性ＨＢＶ感染の発達のしやすさを 予測する方法。 ９．該決定がＭＢＰ遺伝子のエキソン１の５２番目のコドンにおける変異の存 在の決定からなる、請求の範囲第１項及び第６から８項のいず れかに記載の方法。 １０．小児がＭＢＰ遺伝子中に少なくとも一の変異を有するかどうかを決定する 段階からなる小児が感染症にかかりやすいとより考えられるかどうかを決定する 方法。 １１．小児がＭＢＰ遺伝子中に少なくとも一の変異を有するかどうかを決定する 段階からなる小児が再発性の感染症にかかりやすいとより考えられるかどうかを 決定する方法。 １２．乳児がＭＢＰ遺伝子中に少なくとも一の変異を有するかどうかを決定する 段階からなる乳児が未熟で生まれるとより考えられるかどうかを決定する方法。 １３．小児がＭＢＰの変異に対して同型接合であるかどうかを決定する段階から なる小児が感染症にかかりやすいとより考えられるかどうかを決定する方法。 １４．該決定段階を行うことにより、被検者がＭＢＰ遺伝子のエキソン１の一以 上の５２、５４または５７番目のコドンにおける変異を有するかどうかを決定す る、請求の範囲第１０から１３項のいずれかに記載の方法。 １５．被検者から得られた生物学的サンプル由来のＤＮＡについて行われる、請 求の範囲第１から１４項のいずれかに記載の方法。 １６．該生物学的サンプルが血液である、請求の範囲第１５項に記載の方法。 １７．該ＭＢＰ遺伝子のエキソン１領域が、好ましくはＰＣＲによって、増幅さ れる、請求の範囲第１から１６項のいずれかに記載の方法。 １８．該増幅段階は下記プライマー対を使用する、請求の範囲第１７項に記載の 方法： ５’プライマー：5'-GCACCCAGATTGTAGGACAGAG-3'；および ３’プライマー：5'-CAGGCAGTTTCCTCTGGAAGG-3'。 １９．小児を遺伝子型が決定される、請求の範囲第１から１８項のいずれかに記 載の方法。 ２０．該遺伝子型の決定が配列特異的オリゴヌクレオチド（ＳＳＯ）ドット−ブ ロットハイブリダイゼーションの手段によって行われる、請求の範囲第１９項に 記載の方法。 ２１．該ＳＳＯドット−ブロットハイブリダイゼーション段階が一以上の下記プ ライマーを使用する、請求の範囲第２０項に記載の方法： 5'-GATGGGCGTGATG-3' ； 5'-GATGGGTGTGATG-3' ； 5'-GTGATGGCACCAA-3' ； 5'-GTGATGACACCAA-3' ； 5'-ACCAAGGGAGAAAAG-3' ；または 5'-ACCAAGGAAGAAAAG-3' 。 ２２．ＭＢＰ遺伝子のエキソン１領域のＰＣＲ増幅に使用される一以上の適当な プラーマー対からなる請求の範囲第１から２１項のいずれかに記載の一以上の方 法に使用されるキット。 ２３．下記プライマー対からなる、請求の範囲第２２項に記載のキット： ５’プライマー：5'-GCACCCAGATTGTAGGACAGAG-3'；および ３’プライマー：5'-CAGGCAGTTTCCTCTGGAAGG-3'。 ２４．被検者のＭＢＰ遺伝子型を確立するのに使用される一以上の試薬および／ または材料からさらになる請求の範囲第２２項または第２３項に記載のキット。 ２５．該ＭＢＰ遺伝子型を確立するのに使用される試薬が以下より選ばれるプラ イマーからなる、請求の範囲第２４項に記載のキット： 5'-GATGGGCGTGATG-3' ； 5'-GATGGGTGTGATG-3' ； 5'-GTGATGGCACCAA-3' ； 5'-GTGATGACACCAA-3' ； 5'-ACCAAGGGAGAAAAG-3' ；または 5'-ACCAAGGAAGAAAAG-3' 。 ２６．下記配列を有するプライマー対： ５’プライマー：5'-GCACCCAGATTGTAGGACAGAG-3'；および ３’プライマー：5'-CAGGCAGTTTCCTCTGGAAGG-3'。 ２７．以下であるプライマー： 5'-GATGGGCGTGATG-3' ； 5'-GATGGGTGTGATG-3' ； 5'-GTGATGGCACCAA-3' ； 5'-GTGATGACACCAA-3' ； 5'-ACCAAGGGAGAAAAG-3' ；または 5'-ACCAAGGAAGAAAAG-3' 。 ２８．慢性のウィルス感染の予防または処置を目的とする薬剤の調製におけるＭ ＢＰの使用。 ２９．慢性疲労症候群の予防または処置を目的とする薬剤の調製におけるＭＢＰ の使用。 ３０．被検者に有効量のＭＢＰを投与することからなる慢性疲労症候群の予防ま たは処置方法。 ３１．被検者に有効量のＭＢＰを投与することからなる慢性ウィルス感染の予防 方法。 ３２．ＨＢＶ感染の処置を目的とする薬剤の調製におけるＭＢＰの使用。 ３３．急性ＨＢＶ感染の予防を目的とする薬剤の調製におけるＭＢＰの 使用。 ３４．慢性ＨＢＶ感染の発達を予防する薬剤の調製におけるＭＢＰの使用。 ３５．被検者に有効量のＭＢＰを投与することからなるＨＢＶ感染の処置方法。 ３６．被検者に有効量のＭＢＰを投与することからなる急性ＨＢＶ感染の予防方 法。 ３７．小児に有効量のＭＢＰを投与することからなる小児の再発性感染の処置方 法。。 ３８．以下の予防または処置に使用される薬剤の製造における正常な形態のＭＢ Ｐ遺伝子をコード化するＤＮＡの使用： （ｉ）慢性のウィルス感染； （ｉｉ）慢性疲労症候群； （ｉｉｉ）抑うつ病； （ｉｖ）過敏性腸症候群； （ｖ）ガルフウァー症候群；および／または （ｖｉ）再発性感染症、特に細菌性または真菌性感染症。