JPH11506414A

JPH11506414A - Method for treating and / or preventing Alzheimer's disease using phenothiazines and / or thioxanthenes

Info

Publication number: JPH11506414A
Application number: JP8507474A
Authority: JP
Inventors: デイヴィーズ、ピーター; ジェイ．ヴィンセント、イネス
Original assignee: アルバートアインシュタインカレッジオブメディシンオブイェシヴァユニヴァースティ
Priority date: 1994-11-30
Filing date: 1995-08-07
Publication date: 1999-06-08

Abstract

(57)【要約】アルツハイマー病に関連する異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープの蓄積を防止または低減するのに有効な量のフェノチアジン類またはチオキサンテン類を患者に投与することからなる、アルツハイマー病を治療または予防する方法が開示されている。 (57) [Summary] Treating or preventing Alzheimer's disease comprising administering to a patient an effective amount of phenothiazines or thioxanthenes to prevent or reduce the accumulation of abnormally phosphorylated paired helical filament epitopes associated with Alzheimer's disease A method for doing so is disclosed.

Description

【発明の詳細な説明】フェノチアジン類および／またはチオキサンテン類を用いてアルツハイマー病を治療および／または予防する方法本出願は、１９９３年３月２６日付けで出願された米国特許出願第０８／０４２，４２５号の一部継続出願として１９９４年８月８日付けで出願された米国特許出願第０８／２８７，３３９号の一部継続出願である（これら２つの出願の内容は、ここで引用したことによって本明細書に含まれているものとする）。政府権益の陳述本発明は認可番号ＮＩＨＡＧ０６８０３およびＮＩＨＭＨ３８６２３に基づく政府の援助の下になされたものである。したがって、政府は本発明に関して一定の権利を有する。発明の背景１．技術分野本発明はアルツハイマー病を予防または治療する方法に係る。特にこの方法は、アルツハイマー病に関連する異常にリン酸化（phosphrylated）された対合らせんフィラメントエピトープ（paired helical filament epitopes）の蓄積を防止または軽減するのに有効な量のフェノチアジン類またはチオキサンテン類を患者に投与することからなる。２．関連技術の説明アルツハイマー病は、６５才以上の人口の７％が罹患し、知的機能を次第に失うという臨床的特徴を有する進行性神経変性障害（progressive neurodegenerat ive disorder）である。アルツハイマー病は異常にリン酸化された対合らせんフィラメント（ＰＨＦ）の蓄積を特徴とし、これらＰＨＦは神経細胞体内および神経炎斑（neuritic plaque）の軸索内に神経原線維の絡み合い（neurofibrillary tangle）として蓄積する。またＰＨＦは神経細胞突起、たとえば軸索や樹状突起にも存在する。平均的なアルツハイマー症例の皮質のＰＨＦの９０％もが斑や絡み合いではなく神経細胞突起に存在している[Wolozin,B.L．and Davies,P.，A nn ．Neurol. ，22:521-526(1987)]。アルツハイマー病の指標となるＰＨＦの蓄積は、この病気の臨床的徴候が明白になる前に内側嗅皮質年（entorhinal cortet years）内で始まることがすでに示唆されている[Braak,H.，et al.，Neurosci Lett. 103:24-28(1989)；Braak,H .，et al.，Neurooath ．and Applied Neurobiol.，15:13-26(1989)；Braak,H.， et al.，Acta Neuropath.，82:239-259（1991）]。アルツハイマー病の初期には内側嗅皮質（entorhinal cortex）のニューロンのみがＰＨＦを含有している。次の段階で、患者が短期の記憶喪失を多少示しているとき、海馬のＣＡ１およびＣＡ２錘体層（py ramidal layer）のニューロンがこれらの構造を含んでいる。それより後の段階では連合皮質（association cortex）のニューロンがＰＨＦ形成の証拠を示し始める。初期の段階、またはＰＨＦの蓄積を防ぐことによってＰＨＦ病理学が主として海馬に限定される場合におけるアルツハイマー病の進行の防止はアルツハイマー病患者にとって大いに有益であろう。単離された神経原線維の絡み合い（neurofibrillary tangle）からＰＨＦの分子的性質を決定しようとした初期の試みは、絡み合いの複雑さに起因するＰＨＦの単離と溶解度の困難さによって失敗した[Yen,S-H，et al.，NY Acad ．Sci.，4 55:819-825(1985)；Crowther,T.，et al., Ann ．Med.，21:127-132(1989)；Voge lsang,G.D.，et al.，Clin ．Biol．Res.，317:791-800（1989）]。これらの困難にもかかわらず微小管関連蛋白質（microtubule-associated protein）、ｔａｕと相同な配列が得られたのであり、これはＰＨＦがこの蛋白質を含有していることを示している[Crowther,T．et al.，Ann ．Med.，21:127-132(1989)]。また、成熟した神経原線維の絡み合いがｔａｕに加えて少なくとも２つの他の蛋白質を含有していることも示されている[Volgelsang,G.D.，et al.，Prog ．Clin．Biol ．Res. ，317:791-800(1989)；Igbal,K．and Grundke-Igbal,I.，Molecular Neur obioloy ，5:399-410(1991)；Sternberger,L.A.，et al.，Pro g ．Clin．Biol．Res. ，317:763-768(1989)；Bancher,C.，et al.，Prog ．Clin． Biol．Res. ，317:913-924(1989)]。アルツハイマー患者においてＰＨＦが生成する際に異常な蛋白質リン酸化が起こることは、ＰＨＦのｔａｕが過剰にリン酸化されていることを示したさまざまな研究によってすでに示唆されていた[Kosik,K.S.，et al.，Ann ．Med.，21:109 -112(1989)；Kosik,K.S.，J.Gerontol.，44:55-58(1989)；Goedert,M.，Trends in Neurosciences ，16:460-464(1993)；Iqbal,K.，Act Neurobiologiae Exp.，5 3:325-335(1993)]。また、他の蛋白質、特に神経フィラメント（neurofilament ）や他の微小管関連蛋白質（ＭＡＰ）もアルツハイマー病患者の脳内で過剰にリン酸化されているという証拠もある[Grundke-Iqbal,I．and Iqbal,K.，Prog ．Cl in．Biol．Res. ，317：745-753(1989)；Onorato,M.，et al.，Pro ．Clin．Bio． Res. ，317：781-789(1989)；Seitelberger,F.，et al.，J ．Neural Transmissio n ，33:37-33(1991)；Lovestone，S.，et al.，Curr ．Opinions in Neurology an d Neurosurgery ，5:833-888（1992）]。これらはまた、ＰＨＦの生成がこれらの蛋白質の異常なリン酸化の結果であるということも示唆している。本発明の発明者らは、アルツハイマー病患者の脳組織内のＰＨＦと反応し、ほとんどの場合において正常な成人脳内の蛋白質とは少しだけしか、またはまったく交差反応しないモノクローナル抗体を作製した。これらの抗体は、この病気の過程で変性されたアルツハイマー脳においてＰＨＦ蛋白質の異常にリン酸化されたエピトープと反応する。これらの抗体によって認識されるエピトープをブロックすることによってｔａｕ、その他のＭＡＰおよび神経フィラメント蛋白質を始めとする異常にリン酸化されたＰＨＦ蛋白質の生成を阻止することができれば、ＰＨＦの生成と蓄積が妨害または防止され、したがってアルツハイマー病の進行を阻止または防止するされることが期待される。しかし、今までのところ、異常にリン酸化されたＰＨＦエピトープの生成を大量に、確実に誘発することはインビボでもインビトロでも可能になっていない。シー（Shea,T.B．）らは、アルミニウム塩が神経芽腫細胞内の神経フィラメントの蓄積を誘発することを報告した[Shea,T.B．et al.，Brain Res.，492:53-64 (1989)]。しかし、シー（Shea,T.B.）らが生成した神経フィラメントがアルツハイマー病に関連するＰＨＦと相関するかどうかは示されていない。コー（Ko,Li-wen）らは、ＰＨＦエピトープに対するポリクローナル抗体を用いて、分化培地で成育したヒト神経芽腫細胞系ＩＭＲ３２において、アルツハイマー病でニューロンと関連するエピトープを発現させたと報告した[Ko,Li-wen， et al.，Am ．J．Path.，136(4)：867-879（1990）]。しかし、ＩＭＲ３２培養細胞のＡｌｚ− ５０に対する反応性は、コントロール培地（control media）において、また、コー（Ko,Li-wen）らがＰＨＦエピトープを発現しなかったと報告した他の細胞系において同等であった。このことは、発現のレベルが低過ぎてアルツハイマー病のモデルとはならないことを示している。こうして、異常にリン酸化したＰＨＦエピトープの生成を確実に、また大量に誘発するモデルシステムであって、これらのエピトープの生成をブロックする化合物をスクリーンするのに使うことができるようなモデルシステムに対する要求が高まったのである。本発明は、アルツハイマー病のエピトープを連続して大量に発現する組織培養モデルに対するものであり、この分野における大きなニーズを満たすものである。発明の概要本発明は、アルツハイマー病に関連する異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープを発現するインビトロモデル細胞システムを提供する。このシステムは、有効な量のプロテインホスファターゼインヒビターで処理し、異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープと特異的に結合する抗体と免疫的に反応性であるように処理された細胞をホモジネートとした神経芽腫細胞からなっている。本発明のモデルシステムは、ある薬剤が、アルツハイマー病に関連する異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープの蓄積を防止するか、または低減することができるかどうかを決定するのに使用できる。また本発明は、アルツハイマー病に関連する異常にリン酸化された対合らせんエピトープの蓄積をブロックする薬剤を投与することからなるアルツハイマー病の治療または予防方法も提供する。図面の簡単な説明本発明の現在の時点で（例示ではあるが）好ましい態様に関する以下の詳細な説明を添付の図面と共に参照すると上記ならびに本発明の別の目的および特徴がさらによく理解されるであろう。図１は、ＯｋＡ処理の時間経過を示す。ＭＳＮ細胞の密集（confluent）層を、３７℃で、０．０５％ＤＭＳＯを含有するＫＲＰと共に０分もしくは４時間（対照）、または１μＭのＯｋＡと共に３０分、９０分、４時間、１０時間もしくは２４時間インキュベートした。細胞を採集し、煮沸して熱安定性画分を得た。１レーン当たり２０μｇの蛋白質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけて分離し、ゲルを電気泳動でニトロセルロースに移した。Ａｌｚ−５０抗体、Ｔａｕ−１抗体、１８８抗体、ＰＨＦ−１抗体、ＮＰ−８抗体またはＴ３−Ｐ抗体を用いてブロットを免疫染色した。ＰＨＦ−１ブロットの横の矢印は６８−ｋＤａの蛋白質を示しており、これはＯｋＡ処理の後に初めて見られるものである。図２は、ＯｋＡ処理に対する用量−応答曲線を示す。ＭＳＮ細胞をＫＲＰ中で５ｎＭ、５０ｎＭ、１μＭまたは５０μＭのＯｋＡと共に３７℃で４時間インキュベートした。図１と同様にして熱安定性の画分を調製し、ウェスタンブロット分析に使用した。Ａｌｚ−５０ブロットでは５０μＭのＯｋＡで処理したサンプルが１３μｇの蛋白質しか示さなかったことに注意されたい。図３は、蛋白質合成阻害効果を示す。１００μＭのアニソマイシンの存在下または不在下、ＭＳＮ細胞を１μＭのＯｋＡと共に３７℃で９０分インキュベートした。図１と同様にして熱安定性画分を調製し、３０μｇの蛋白質をウェスタンブロッティングで分析した。図４は、ＭＳＮ細胞溶解物をＯｋＡで処理した結果、すなわちアルカリホスファターゼの効果を示す。ＭＳＮ細胞を遠心分離で集め、４ｍＭのＰＭＳＦ、２５ μＭのロイペプチンおよび２ｍＭのＥＧＴＡを含有するＫＲＰに再懸濁した。この細胞懸濁液を２秒間超音波処理し、得られた溶解物を１０μＭのＯｋＡの存在下または不在下、３７℃で６０分間インキュベートした。別にサンプルを５０ｎＭのＯｋＡで処理した。それぞれの熱安定性画分を１レーン当たり３０μｇを負荷した。２つずつのブロットを、１０ｍＭのＰＭＳＦの存在下（＋）、ｐＨ８．０の緩衝液１ｍｌ当たり２０単位のアルカリホスファターゼと共に３７℃で２４時間インキュベートした。次にこのブロットをＡｌｚ−５０抗体、Ｔａｕ−１抗体、１８８抗体、ＰＨＦ−１抗体、Ｔ３Ｐ抗体またはＮＰ− ８抗体で免疫試験した。図５Ａは、パルス‐チェイスを用いた³²ｐ標識したＴａｕの結果を示す。ＭＳＮ細胞を、リン酸を含まない培地中の２．５ｍＣｉの³²ｐ‐オルトリン酸と共に３７℃であらかじめ１時間インキュベートした。次にこれらの細胞を、１μＭのＯｋＡの不在下（対照）または存在下においてＫＲＰを用いて９０分間追跡（チェイス）した。熱安定性の上清のｔａｕを富化するために実験の詳細の欄で説明するように過塩素酸（ＰＣＡ）で処理し、メタノール沈殿を行った。ブロットをＡｌｚ−５０で染色した後オートラジオグラフィーにかけた。図５Ｂは、パルス（短期間代謝的標識）を用いた³²Ｐ標識したｔａｕの結果を示す。細胞を標識オルトリン酸と共にあらかじめ３０分インキュベートし、その終了時ひとつのサンプルに１μＭのＯｋＡ酸を導入した。さらに９０分間インキュベートした後、熱安定性の上清を単離し、ＰＣＡとメタノール沈殿とにかけた。ブロットをＡｌｚ−５０で染色した後オートラジオグラフィーにかけた。図６は、³⁵Ｓ‐メチオニン標識したｔａｕの結果を示す。ＭＳＮ細胞を、２００μＣｉ／ｍｌの同位体メチオニンを含有するメチオニンを含まない培地で一晩かけて短期間代謝的に標識した。次いでこれらの細胞を、指示された添加物と共に２ｍＭの未標識メチオニンを含有するＫＲＰを用いて９０分間追跡した。熱安定性の上清をＰＣＡで処理し、このＰＣＡ可溶性蛋白質をゲルにかけるためメタノール沈殿した。ブロットをＡｌｚ−５０で染色し、オートラジオグラフィーにかけた。図７は、Ａｌｚ−５０抗体、ＰＨＦ−１抗体、ＴＧ３抗体、ＴＧ４抗体、ＭＣ２抗体、ＭＣ６抗体もしくはＭＣ１５抗体と、正常脳、アルツハイマー病の脳、ならびにオカダ酸（okadaic acid）で処理する前のＭＳＮ細胞（ＭＳＮ−）もしくは処理した後のＭＳＮ細胞（ＭＳＮ＋）との免疫反応性を示す。脳組織のデータは、５つの正常ケースと５つのアルツハイマー病ケースから得た中部側頭皮質（mid-temporal cortex）の研究で得られた平均値である。ＭＳＮ細胞に対する値は、細胞の採集前９０分の間に、３つずつ調製したＭＳＮ細胞培養物に１μモルのオカダ酸を添加して行なった一連の実験から得られたものである。各サンプル（組織または細胞ホモジネート）を２つずつ８つの希釈段階で検定した。Ｙ軸の単位は任意単位の免疫反応性である。図８は、対照と、トリフルオペラジンもしくはクロルプロマジンによる処理後の、対合らせんフィラメントエピトープを発現する神経芽腫（ＭＳＮ−Ａ）細胞の免疫ブロットを示す。図９Ａは、アルツハイマー病患者（ＡＤ）、正常人対照（ＮＣ）、またはクロルプロマジン服用精神分裂病患者（ＲＸ）におけるブロードマン領域（Broadman area）１０での相対的ＡＤＡＰ濃度を示す。図９Ｂは、アルツハイマー病患者（ＡＤ）、正常コントロール（ＮＣ）または、クロルプロマジン服用精神分裂病患者（ＲＸ）におけるブロードマン領域（Br oadman area）３８での相対的ＡＤＡＰ濃度を示す。発明の詳細な説明本発明は、アルツハイマー病に関連する異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープを発現するインビトロモデル細胞システムを提供する。このシステムは、有効な量のプロテインホスファターゼインヒビターで処理し、処理後の細胞からのホモジネートが、異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープと特異的に結合する抗体に対して免疫反応性であるようにした神経芽腫細胞からなっている。本発明のモデルシステムは、有効な量のプロテインホスファターゼインヒビターで神経芽腫細胞を処理し、処理後の細胞からのホモジネートが、異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープと特異的に結合する抗体に対して免疫反応性となるようにするのにすることによって製造される。本発明で有用な神経芽腫細胞は、ｔａｕ、神経フィラメント蛋白質およびその他のニューロン性蛋白質を含有する子供の神経系腫瘍（nervous system tumors ）から単離した神経芽腫細胞である。これらの細胞は、ホスファターゼインヒビターで処理するまでは、異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープを発現したとしてもほとんど発現しない。特に好ましい態様での、この神経芽腫細胞は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（American Type Culture Collection）にＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ１１２５３として寄託されているヒト細胞である。プロテインホスファターゼインヒビターは、これで処理した神経芽腫細胞において、アルツハイマー病に関連する異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープの発現を誘発する任意のインヒビターである。好ましい態様では、プロテインホスファターゼインヒビターはオカダ酸（okadaic acid）、カリクリンＡ（calyculin A）、ミクロシスチン−ＬＲ（microcystin-LR）、ノデュラリン（nodularin）およびフェニルアルシンオキサド（phenylarsine oxide）である。最も好ましい態様のプロテインホスファターゼインヒビターはオカダ酸（ok adaic acid）である。神経芽腫細胞を処理するのに使用するプロテインホスファターゼインヒビターの量は、そのインヒビターで処理した細胞で異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープの発現を誘発するのに有効な量である。好ましい態様の場合、このインヒビターの濃度は０．１〜１０μＭである。最も好ましい場合その濃度は１．０μＭである。しかし、個々の最適濃度は使用するインヒビターと細胞とによる。異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープの発現は、異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープと特異的に結合する抗体を使用して検出できる。このエピトープは、実験の詳細の欄に記載するように、ウェスタンブロット分析または定量ＥＬＩＳＡによって検出される。抗体はモノクローナルでもポリクローナルでもよいが、モノクローナルが好ましい。この抗体は、公知の手順によりアルツハイマー患者から単離したＰＨＦから調製することができる。好ましい態様においては、ビンセント（Vincent,Ｉ.J.）とデイビース（Davie s,P.）によりProc ．Natl．Acad．Sci．USA，89:2878-2882（1992）に記載された免疫親和性を用いてＰＨＦを単離・精製する。特に、死亡したアルツハイマー患者の皮質組織２０グラムを、２つの３０秒間バーストに対して設定値５で操作するポリトロン（Polytron）を用い、１０容量のトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ；０．１Ｍのトリス（Tris）ベース／０．１４ＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４）中でホモジナイズする。そのホモジネートを２７，０００×ｇ、４℃で３０分間遠心分離し、その上清を免疫アフィニティーカラムにかける。アフィニティー精製に有用なモノクローナル抗体はＡｂ４２（ＩｇＧ）であり、これは公表されたプロトコル[Spira，G.，et al.，J ．Immunol．Methods，74:307-313（1984）]に従って製造したＡｌｚ−５０の１種のスイッチクローン（switch clone）である。プロテインＡで精製したＡｂ４２の約２０ｍｇを０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．１）中に透析し、洗浄したアフィゲル１０（Affi-Gel 10）［バイオ‐ラッド（Bio -Rad）］１０ｍｌと混合する。この混合物をロータリーシェーカー上で室温で３０分間インキュベートする。この時間の終了時に、ゲル／抗体混合物の容量に等しい容量の０．１のエタノールアミン（ｐＨ８．１）を加え、インキュベーションを１時間続行する。カップリング効率は通常＞９０％である。免疫吸着剤をカラムに注入し、ＴＢＳで洗浄する。カラムを４℃に保ち、クロマトグラフィー段階はすべてこの温度で実施する。サンプルを投入する前に、少なくとも２ベッド容量の溶出用緩衝液（３Ｍチオシアン酸カリウム）で、次いで５ベッド容量のＴＢＳでカラムを処理する。この免疫アフィニティーカラムに、２７，０００×ｇの上清を、約２５ｍｌ／時の流速で流す。少なくとも３０ベッド容量のＴＢＳで免疫吸着剤を洗浄することによって非特異的結合物を低減する。その後、吸着した蛋白質を溶出用緩衝液で溶出する。キアンチゴールド（Quantigold）蛋白質試薬［バイオ‐ラッド（Bio-Rad）］を用いて画分の蛋白質濃度を検定した。ピーク画分をＴＢＳに対して透析し、−７０℃で貯蔵した。モノクローナル抗体を調製するには、上記のように精製した抗原を１回の注射に付き一匹のマウスに１０〜２０マイクログラムの蛋白質を腹腔内注射することによってマウスを免疫する。マウスを４〜５回免疫した後、脾臓を取出し、標準的なプロトコルによってハイブリドーマ細胞を製造する。ハイブリドーマがアルツハイマー病の脳組織と反応する特異的抗体を産生するかどうかＥＬＩＳＡおよび免疫細胞化学によって試験する。好ましい態様の場合、これらの抗体はアルツハイマーの脳組織と高い反応性を示し、正常な個体の脳組織とはほとんどまたはまったく反応しない。最も好ましい態様においては、Ａｌｚ−５０、ＰＨＦ−１、ＴＧ３、ＴＧ４、ＭＣ２、ＭＣ６およびＭＣ１５より成る群の中から抗体を選択する。これらの抗体を分泌するハイブリドーマはすべて米国メリーランドのロックビルズ（Rockville）のアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（America n Type Culture Collection）に寄託されている。Ａｌｚ−５０はＡＴＣＣ受託番号ＨＢ９２０５で寄託されているハイブリドーマから分泌され、ＰＨＦ−１はＡＴＣＣ受託番号１１７４３で寄託されているハイブリドーマから分泌され、ＴＧ３はＡＴＣＣ受託番号１１７４４で寄託されているハイブリドーマから分泌され、ＴＧ４はＡＴＣＣ受託番号１１７４５で寄託されているハイブリドーマから分泌され、ＭＣ２はＡＴＣＣ受託番号１１７３７で寄託されているハイブリドーマから分泌され、ＭＣ６はＡＴＣＣ受託番号１１７４０で寄託されているハイブリドーマから分泌され、ＭＣ１５はＡＴＣＣ受託番号１１７４１で寄託されているハイブリドーマから分泌される。本発明のモデルシステムおよび上記抗体は、ある物質または薬剤が、アルツハイマー病の活性、すなわち、アルツハイマー病に関連する異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープの蓄積を防止または低減することができるかどうかを決定するのに使用できる。したがって、本発明は、ある薬剤が、アルツハイマー病に関連する異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープの蓄積を防止または低減することができるかどうかを決定する方法も提供する。この方法は、（ａ）処理後の細胞中で異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープを発現させることができるように有効な量のプロテインホスファターゼインヒビターで神経芽腫細胞を処理することによって、その細胞からのホモジネートを、異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープと特異的に結合する抗体に対して免疫反応性にし、（ｂ）異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープの蓄積を防止または低減することができると思われる薬剤を、前記処理された細胞に同時に、またはその後に添加し、（ｃ）前記処理された細胞に、アルツハイマー病に関連する異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープと特異的に結合する抗体を添加し、（ｄ）これらの細胞のホモジネートの前記抗体との免疫反応性を分析し、（ｅ）前記薬剤が神経芽腫細胞由来のホモジネートと前記抗体との免疫反応性のレベルを低下させたかどうかを決定することからなり、この低下が、前記薬剤が異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープの蓄積を防止または低減したことを示す指標となる。また本発明は、ある薬剤が、アルツハイマー病と関連する異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープの蓄積を防止または低減することができるかどうかを決定するのに使用されるスクリーニング用キットも提供する。このキットは、（ａ）神経芽腫細胞、（ｂ）前記神経芽腫細胞を処理したときにその細胞が異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープを発現するようにでき、それにより前記処理された細胞に由来するホモジネートを異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープに特異的に結合する抗体に対して免疫反応性にするプロテインホスファターゼインヒビター、および（ｃ）前記プロテインホスファターゼインヒビターで処理された神経芽腫細胞によって発現された異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープに特異的に結合する抗体を含んでいる。本発明のモデルシステムと方法とを使用して、ある種のフェノチアジン化合物、すなわちトリフルオペラジンおよびクロルプロマジン（ＣＰＺ）が、神経芽腫細胞に由来するホモジネートと、これらの細胞によって発現された異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープに特異的に結合する抗体との免疫反応性のレベルを低下させることが判明した。したがって、クロルプロマジンがアルツハイマーの活動性を低下させるのに有効であり、フェノチアジン類や構造上類似の化合物、たとえば下記に示すチオキサンテン類も、以下に記載するモデルシステムとアッセイにおいてクロルプロマジンと同じ活性プロフィールを示すのであるから、これらのフェノチアジン類およびチオキサンテン類もアルツハイマーの活動性を防止または低減するのに有効であり、したがってアルツハイマー病の治療または予防に有効である。したがって、本発明は、アルツハイマー病に関連する異常にリン酸化された対合らせんフィラメントエピトープの蓄積を防止または低減するのに有効な量のフェノチアジン類またはチオキサンテン類を投与することからなる、アルツハイマー病の治療または予防を必要とする対象においてそのような治療または予防をする方法も提供する。本発明で有用なフェノチアジン類は式Ｉで示される構造骨格を有する。ここで、Ａは約２〜８個の炭素原子を有する二価のアルキレン基またはアルケニレン基を表わし、Ｒ₁とＲ₂はそれぞれ独立して水素、または場合によってたとえばハロゲン、アミノ、カルボニル、スルホニル、トリフルオロメチル、低級アルキル、低級アルコキシルなどのような各種残基で置換されていてもよい有機基を表わすか、あるいは、Ｒ₁とＲ₂とが結合している窒素一緒になって、たとえばピロリジニル、ピペラジニル、低級アルキルピペラジニル、ピペリジル、チオモルホリニル、モルホリニルまたはヘキサヒドロアゼピニルのような五員〜七員の復素環を形成する。上記式Ｉにおいて、三環系は場合によって、たとえばハロゲン、アミノ、カルボニル、スルホニル、ペルフルオロアルキル（たとえば、トリフルオロメチル）、低級アルキルおよび低級アルコキシルなどのような各種の基によって置換されていてもよい。上記式Ｉのイオウ原子は場合によってスルホキシドとして存在してもよい。本発明で有用なチオキサンテン類は式IIまたはIIIで示される構造骨格をもっている。ここで、Ｒ′は水素またはアルキル基であり、ＲとＲ₁はそれぞれ独立して水素もしくはアルキルを表わすか、またはＲとＲ₁は一緒になって、たとえばピロリジノ、ピペリジノ、モルホリノもしくはピペラジノのような五員、六員もしくは七員の複素環を形成し、Ａはたとえばピロリジノ、ピペリジノ、モルホリノまたはピペラジノのような五員、六員または七員の複素環である。五員、六員または七員の複素環は場合によってハロゲン、アミノ、カルボニル、スルホニル、ペルフルオロアルキル、低級アルキル、低級アルコキシなどのような各種の残基によって置換されていてもよい。上記式IIとIIIとにおいて、三環系は場合によって、たとえばハロゲン、アミノ、カルボニル、スルホニル、ペルフルオロアルキル（たとえばトリフルオロメチル）、低級アルキルおよび低級アルコキシルなどのような各種の基によって置換されていてもよい。本発明の方法で使用するのに適した化合物には、式Ｉ、IIまたはIIIの構造骨格を有する単一の鏡像異性体、ラセミ体および幾何異性体ならびに下記構造体および化合物が包含される。さらにまた、これらの構造体および化合物の鏡像異性体と幾何異性体の混合物も包含される。対合らせんフィラメントエピトープの出現をブロックするのに有効なフェノチアジン族の薬剤の例としては、プロマジン、トリフルプロマジン、メトトリメプラジン、アセトフェナジン、フルフェナジン、ペルフェンジン、プロクロロペラジン、メソリダジンおよびトリダジン（thorridazine）がある。これらおよびその他類似のフェノチアジン化合物は米国特許第２，９２１，０６９号、第２，８３７，５１８号、第２，８６０，１３８号、第２，９０２，４８４号、第３，１９４，７３３号、第３，０８４，１６１号、第２，５１９，８８６号、第２，６４５，６４０号および第２，９８５，６５４号（引用により本明細書に含まれているものとする）に記載されている。対合らせんフィラメントエピトープの出現をブロックするのに有効なチオキサンテン族に入る薬剤の例はクロルプロチキセン（Chlo rprothixene）およびチオチキセン（Thiothixe ne）である。代表的なチオキサンテン類は米国特許第３，３１０，５５３号および第２，９５１，０８２号（これらも引用により本明細書に含まれているものとする）に記載されている。本発明の方法を実施するのに有用な代表的フェノチアジン化合物を以下に挙げる。米国特許第２，９２１，０６９号次の一般式の化合物ここで、Ｚは−Ｓ−または−ＳＯ−であり、Ｙはトリフルオロメチルであり、Ｒは水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、低級アルキルまたは低級アルコキシルであり、Ａは２〜６個の炭素原子を含有する二価で直鎖または分枝した脂肪族鎖を表わし、Ｒ₁とＲ₂は水素もしくは低級アルキルであるか、またはこれらが結合している窒素と一緒になってピロリジニル、ピペラジニル、低級アルキルピペラジニル、ピペリジル、チオモルホリニル、モルホリニルもしくはヘキサヒドロアゼピニルのような五員〜七員の複素環を形成する二価の基である。本発明で使用するのに有利な化合物は、上記構造式で表わされるもので、Ｚが −Ｓ−、Ｙが２位が４位のトリフルオロメチル、Ｒが水素、６位か８位のハロゲン、トリフルオロメチル、低級アルキルまたは低級アルコキシ、Ａが２〜５個の炭素原子を含有する二価で直鎖か分枝した脂肪族鎖であり、Ｒ₁とＲ₂が水素か低級アルキルであるかまたはこれらが結合している窒素と一緒になってピロリジニル、ピペラジニル、低級アルキルピペラジニル、ピペリジル、チオモルホリニルもしくはモルホリニルのような五員〜六員の複素環を形成する二価の基を表わすものである。本発明のさらに有利な化合物は、上記構造式で表わされるもので、Ｚが−Ｓ− 、Ｙが２位か４位のトリフルオロメチル、Ｒが水素、Ａが２〜４個の炭素原子を含有する二価の直鎖の脂肪族鎖であるかまたは２〜５個の炭素原子を含有する二価の分枝した脂肪族鎖であり、Ｒ₁とＲ₂が水素か低級アルキルであるかまたはこれらが結合している窒素と一緒になってピロリジニル、ピペラジニル、低級アルキルピペラジニル、ピペリジル、チオモルホリニルもしくはモルホリニルのような五員〜六員の複素環を形成する二価の基を表わすものである。最も好ましい化合物は、前記構造式で表わされるもので、Ｚが−Ｓ−、Ｙが２位のトリフルオロメチル、Ｒが水素、Ａが構造（ただし、Ｒ₃は水素、メチルまたはエチル）で表わされる鎖であり、Ｒ₁とＲ₂ が低級のモノアルキルかジアルキルであるかまたはこれらが結合している窒素と一緒になってピロリジニル、ピペラジニル、低級アルキルピペラジニル、ピペリジニル、チオモルホリニルもしくはモルホリニルのような五員〜六員の複素環を形成する二価の基を表わすものである。ここで使用する低級アルキルまたは低級アルコキシルという用語は、４個までの炭素原子、好ましくは２個までの炭素原子を有する脂肪族の基を示す。これらの化合物を製造する方法は米国特許第２，９２１，０６９号に記載されている。米国特許第２，８３７，５１８号次の一般式の化合物ここで、Ｙはイオウ原子、ＳＯ基およびＳＯ₂基より成る群の中から選択され、Ｘは水素原子、メチル基、メトキシ基、エチル基およびエトキシ基より成る群の中から選択され、Ｚはモノメチルアミノ基、モノエチルアミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ピロリジノ基およびピペリジノ基より成る群の中から選択される。これらの化合物を製造する方法は米国特許第２，８３７，５１８号に記載されている。米国特許第２，８６０，１３８号次の一般構造式の化合物が包含される。ここで、Ｘは９より大きいが５３より小さい原子番号を有するハロゲン原子であり、Ｒは水素と低級アルキル基（炭素原子の合計数は６以下）より成る群の中のものであり、ｎは３より小さい自然数である。これらの化合物を製造する方法は米国特許第２，８６０，１３８号に記載されている。米国許第２，９０２，４８４号次の一般式の化合物ここで、Ａは２〜６個の炭素原子を含有する直鎖か分枝した鎖をもつ二価の飽和の脂肪族炭化水素基であり、Ｒ₁は水素原子、低級アルキル基、アリール基またはアリールアルキル基であり、ＹとＹ₁は水素原子、ハロゲン原子、低級アルキル基、アルコキシ基、アリール基、アリールオキシ基を表わし、これらは好ましくは（Ｙの場合）１位か３位にある。このフェノチアジン環はメチル基の形態の置換基をもっていてもよい。「低級アルキル」という用語は６個まで、好ましくは４個までの炭素原子を含有するアルキル基を意味するものと理解されたい。これらの化合物を製造する方法は米国特許第２，９０２，４８４号に記載されている。米国特許第３，１９４，７３３号次の一般式の化合物ここで、ｒは１か２、Ｘは水素、ハロゲン（好ましくはクロロ）、トリフルオロメチル、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルカノイル、低級アルキルメルカプト、トリフルオロメチルメルカプトまたは低級アルキスルホニル（好ましくはメチルスルホニル）であり、Ｙは高級アルキル、高級アルケニル、高級アルキニル、アリール、ω‐カルボアルコキシ（高級アルキル）またはジフェニル（ヒドロキシメチル）である。ここで使用する「高級アルキル」、「高級アルケニル」および「高級アルキニル」という用語は５個より多くの炭素原子をもつ直鎖と分枝した鎖の基の両方を包含する。ここで使用する「ω‐カルボアルコキシ（高級アルキル）」という用語は６個より多くの炭素原子をもつ炭化水素カルボン酸から誘導される置換基を包含し、次式で表わすことができる。ただし、ｎは６より大きい正の整数であり、７から１２までの正の整数が好ましい。またここで使用する「アリール」という用語は単環式または二環式のアリールカルボン酸から誘導される置換基を包含し、置換されていてもされてなくてもよく、さらに次式で表わすことができる。ただし、Ｒは各々が水素、低級アルキル、低級アルコキシまたはハロゲン（たとえばクロロかブロモ）である。Ｒは水素、低級アルキルまたは低級アルコキシであるのが好ましく、水素か低級アルキルが最も好ましい。使用できるアリールカルボン酸の例としては、安息香酸、ｏ‐トルイル酸、２，６‐ジメチル安息香酸、２，６‐ジメチルアニス酸、ｏ‐ブロモ安息香酸、ｏ‐クロロ安息香酸、２，６‐ジクロロ安息香酸、ナフトエ酸、ジメチルナフトエ酸、その他の酸がある。好ましい化合物は、Ｘがクロロかトリフルオロメチル、Ｙが炭素原子６〜１４個の高級アルキル基、高級アルケニル基もしくは高級アルキニル基、低級アルキルもしくは低級アルコキシで置換されたアリール、または炭素原子１３個以下のω‐カルボアルコキシ（高級アルキル）であるものである。特に好ましいのは、Ｘがトリフルオロメチルで、Ｙが炭素原子９〜１４個の高級アルキル基である化合物である。これらの化合物を製造する方法は米国特許第３，１９４，７３３号に記載されている。米国特許第３，０８４，１６１号次の一般式の化合物ここで、ＸはＳ、ＳＯまたはＳＯ₂であり、Ｒ₁とＲ₂は各々が１〜４個の炭素原子を含有するアルキル基より成る群の中から選択されるものであり、ｎは１〜２の整数である。これらの化合物を製造する方法は米国特許第３，０８４，１６１号に記載されている。米国特許第２，５１９，８８６号次の一般構造式の化合物が包含される。ここで、Ｒ₁とＲ₂は水素原子とアルキル基（たとえば、メチル、エチル、プロピル）より成る群の中のものであり、Ｒ₃とＲ₄はアルキル基（たとえば、メチル、エチル、プロピル、ブチル）を表わし、ｎは１より大きい整数を表わす（ｎは有利には、たとえば２、３、４または５を表わすことができる）。ベンゼン核はアルキル基かアルコキシ基で置換されていてもよい。という表示は連続するＣＲ₁Ｒ₂基が同じものである直鎖脂肪族鎖、連続するＣＲ₁ Ｒ₂基が同じものである分枝した脂肪族鎖、および連続するＣＲ₁Ｒ₂基が異なっていてもよい分枝した脂肪族鎖に関するものと理解されたい。たとえば、ＣＲ₁ Ｒ₂という表示は次の分枝鎖を包含する。これらの化合物を製造する方法は米国特許第２，５１９，８８６号に記載されている。米国特許第２，６４５，６４０号次の一般式の化合物ここで、Ｒは水素原子または６位もしくは８位の塩素原子、臭素原子、メチル基もしくはメトキシ基であり、Ｘは１位か３位の塩素原子か臭素原子であり、Ａは２〜５個の炭素原子を含有する二価で直鎖または分枝した脂肪族鎖であり、Ｒ₁ とＲ₂はそれぞれメチル基かエチル基であるかまたは隣接する窒素原子と一緒になって単核の複素環を形成する。Ａが２〜５個の炭素原子を含有するアルキレン基を表わし、Ｒ₁とＲ₂が各々メチル基かエチル基であるかまたは一緒になってピロリジン核、ピペリジン核またはモルホリン核を完成するのに必要な原子を表わすのが好ましい。これらの化合物を製造する方法は米国特許第２，６４５，６４０号に記載されている。米国特許第２，９８５，６５４号次の一般式の化合物ここで、Ｙは炭素原子２〜５個で二価の炭化水素基であり、Ｒは低級アルキル基であり、Ｒ′は水素か低級アルキルであり、Ａは飽和か不飽和の脂肪族炭化水素基、およびヒドロキシ基のエーテルとエステルとを含むヒドロキシアルキル基である。Ｒで表わされる基の典型例はメチル、エチル、プロピルである。Ａの代表例はメチル、エチル、アリル、プロプラギル、ブテニル、２‐ヒドロキシエチル、３‐ヒドロキシプロピル、２‐（２‐ヒドロキシエトキシ）‐エチル、２‐アセトキシエチル、２‐カルバモイルエチルなどのような基である。基Ｙにはエチレン、プロピレン、イソプロピレン、ブチレンなどが含まれる。これらの化合物を製造する方法は米国特許第２，９８５，６５４号に記載されている。本発明の方法を実施する際に有用な代表的チオキサンテン化合物を以下に挙げる。米国特許第３，３１０，５５３号次の一般式の化合物およびその酸付加塩。ここで、Ｒは水素であるかまたはＲ₁と一緒になるときは単結合を形成し、Ｒ₁は水素と低級アルキルよりなる群の中から選択されるか、またはＲと一緒になるときは単結合を形成し、Ｒ₂は水素と低級アルキルより成る群の中から選択され、Ｒ₃とＲ₄は別々の場合水素と低級アルキルより成る群の中から選択され、またＲ₃とＲ₄が結合している窒素原子と一緒になる場合はピロリジノ、ピペリジノ、モルホリノおよび４‐低級アルキルピペラジノより成る群の中から選択される環状の基を形成し、Ａはジアルキルアミノ、４‐アルキルピペラジニル、４‐ヒドロキシアルキルピペラジニル、４‐アシルオキシアルキルピペラジニル、４‐カルバミルアルキルピペラジニル、４‐モノアルキルカルバミルアルキルピペラジニル、４‐ジアルキルカルバミルアルキルピペラジニル、４‐アルコキシアルキルピペラジニル、４‐アリールオキシアルキルピペラジニル、４‐アルコキシアルキルピペラジニル、４‐アリールオキシアルキルピペラジニル、４‐ヒドロキシアルキルオキシアルキルピペラジニル、４‐アシルアルキルピペラジニル、４‐アロイルアルキルピペラジニル、４ ‐カルボアルコキシピペラジニル、４‐カルバミルピペラジニル、４‐モノアルキルカルバミルピペラジニル、４‐ジアルキルカルバミルピペラジニル、４‐アシルピペラジニル、４‐アロイルピペラジニル、４‐アルキルスルホニルピペラジニルおよび４‐ジアルキルスルファミルピペラジニルより成る群の中から選択される。ここでアルキル基およびアシル基は約４個までの炭素原子を含有する。これらの化合物を製造する方法は米国特許第３，３１０，５５３号に記載されている。米国特許第２，９５１，０８２号次の一般式の化合物ここで、Ｘは水素、塩素、臭素、フッ素およびヨウ素より成る群の中から選択されるハロゲン、１〜約４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝した鎖のアルキル基、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝した鎖のアルコキシ基であり、は第三級アミノ基であり、有利にはジ低級アルキルアミノ基、１‐ピペリジル基、１‐ピロリジル基または４‐モルホリニル基である。トリメチレン側鎖に結合している水素の１個以上が低級アルキルで置換されていてもよい。ただし、アルキル置換基のすべての炭素原子数の合計は４を越えてはならない。トリメチレン水素の１個以上がアルキル基によって置換されているとき、アルキル置換基の１個がＲ¹と結合して窒素原子を含む複素環を形成することができる。これらの化合物を製造する方法は米国特許第２，９５１，０８２号に記載されている。本発明は、上記定義の塩基と非毒性の有機酸または無機酸とから形成された塩も包含する。このような塩は当業者に公知の方法によって容易に製造される。塩基を水混和性の溶媒（たとえばアセトンやエタノール）の中で計算量の有機酸または無機酸と反応させ、濃縮と冷却によって、または、所望の塩を直接分離する水不混和性の溶媒（たとえばチルエーテルやクロロホルム）中の過剰の酸によって塩を単離する。このような有機塩の例は、マレイン酸、エネサリチル酸（enesalicyclic acid）、メチルスルホン酸、エタンスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、アルタル酸（酒石酸）、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、マンデル酸、ケイ皮酸、シトラコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、イタコン酸、グルコール酸、ｐ‐ アミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、テオフィリン酢酸、８‐ ハロテオフィリン類、たとえば８‐クロロテオフィリンまたは８‐ブロモテオフィリンとの塩である。無機塩の例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸または硝酸との塩である。もちろん、これらの塩は、業界で周知の通り適当な塩を複分解するという慣用法によっても製造できる。上記化合物の鏡像異性体、同族体および異性体を使用することも本発明に包含されることは当業者には明らかである。これらの化合物はよく知られている方法によって医薬投与形態に調合・処方することができる。上記化合物は、常用の医薬上許容可能な非毒性担体、アジュバントおよび賦形剤を含有する投与単位医薬として経口、局所、非経口的に、吸入もしくはスプレーまたは直腸経由で投与できる。ここで使用する非経口的という用語は、皮下注射、静脈内、筋肉内、胸骨内注射または輸液技術を包含する。加えて、上記化合物の１種と医薬的に許容可能な担体とを含む薬剤組成物が提供される。１種以上のこれら化合物は１種以上の非毒性の医薬的に許容可能な担体および／または希釈剤および／またはアジュバントおよび所望であれば他の活性成分と組合わせて存在することができる。これらの化合物を含有する薬剤組成物は経口用途に適した形態、たとえば錠剤、トローチ、薬用錠剤（ロゼンジ剤）、水性か油性の懸濁液、分散性の粉末か顆粒、エマルジョン、ハードカプセルもしくはソフトカプセル、シロップまたはエリキシルであり得る。経口投与用の組成物は薬剤組成物の製造用として業界で公知のいずれかの方法に従って製造でき、このような組成物は医薬的に見て外見および風味の良好な製剤を提供するために甘味剤、着香剤、着色剤および保存剤より成る群の中から選択された１種以上の薬剤を含有していてもよい。錠剤は、錠剤の製造に適した医薬的に許容可能な非毒性賦形剤と共に活性成分を含有している。これらの賦形剤は、たとえば、不活性希釈剤（たとえば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウム）、造粒・崩壊剤（たとえばコーンスターチ、アルギン酸）、結合剤（たとえば澱粉、ゼラチン、アカシア（ac acia））、滑剤（たとえばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク）でよい。錠剤はコーティングされてなくてもよいし、あるいは胃腸管内で崩壊と吸収を遅らせることによって長時間にわたって作用が持続するように公知技術によってコーティングされていてもよい。たとえば、モノステアリン酸グリセリルやジステアリン酸グリセリルのような徐放性材料が使用できる。経口用の製剤はまた、活性成分が不活性固体希釈剤、たとえば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合されているハードゼラチンカプセル、または活性成分が水もしくはオイル媒体、たとえばピーナッツ油、液体パラフィンもしくはオリーブ油と混合されているソフトゼラチンカプセルの形態をとってもよい。水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混和された活性物質を含有する。このような賦形剤は懸濁剤、たとえばナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム（tragacanth gum）またはアカシアゴム（acacia gum）である。分散剤または湿潤剤は、天然に存在するリン脂質（たとえば、レシチン）、または、アルキレンオキサイドと脂肪酸の縮合生成物（たとえば、ポリオキシエチレンステアレート）、または、エチレンオキサイドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（たとえば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、または、エチレンオキサイドと、脂肪酸とヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合生成物（たとえば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）、または、エチレンオキサイドと、脂肪酸とヘキシトール無水物から誘導された部分エステルとの縮合生成物（たとえば、ポリエチレンソルビタンモノオレエート）でよい。水性懸濁液はまた、たとえば、ｐ‐ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｐ‐ヒドロキシ安息香酸ｎ‐プロピルのような１種以上の保存剤、１種以上の着色剤、１種以上の着香剤、および、たとえばスクロースやサッカリンのような１種以上の甘味剤を含有していてもよい。油性懸濁液は、活性成分を植物油、オリーブ油、ごま油もしくはやし油（coco nut oil）、または液体パラフィンのような鉱物油に懸濁させることによって調製できる。油性懸濁液は増粘剤、たとえば蜜ロウ、硬パラフィンまたはセチルアルコールを含有していてもよい。前記のような甘味剤や着香剤を添加して風味のよい経口製剤とすることができる。これらの組成物はアスコルビン酸のような酸化防止剤を添加することによって保存してもよい。水を添加することによって水性懸濁液を調製するのに適した分散可能な粉末や顆粒は、分散剤や湿潤剤、懸濁剤および１種以上の保存剤と混和された活性成分を含む。適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤はすでに述べたもので例示される。また、追加のたとえば甘味剤、着香剤および着色剤のような添加剤が存在していてもよい。本発明の医薬組成物はまた水中油（oil-in-water）型エマルジョンの形態であってもよい。油相は植物油、たとえばオリーブ油やアラキン油（arachis oil）、または鉱物油（たとえば、液体パラフィン）、またはこれらの混合物でよい。適切な乳化剤は天然にあるゴム、たとえばアカシアガムやトラガカントゴム、天然にあるリン脂質、たとえば大豆レシチン、および脂肪酸とヘキシトール、無水物から誘導されたエステルまたは部分エステル（たとえば、ソルビタンモノオレエート）、および前記部分エステルとエチレンオキサイドとの縮合生成物（たとえば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）であり得る。エマルジョンはまた甘味剤と着香剤を含有していてもよい。シロップとエリキシルは甘味剤、たとえばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはスクロースを用いて調製できる。このような組成物はまた保護剤（demulcent）、保存剤および着香・着色剤を含有していてもよい。医薬組成物は無菌の注射可能な水性または油性の懸濁液の形態でもよい。この懸濁液は、すでに上記した適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて公知技術によって調製できる。無菌の注射可能な製剤はまた、医薬的に許容可能な非毒性の希釈剤または溶剤に溶かした無菌の注射可能な溶液または懸濁液、たとえば１，３‐ブタンジオールの溶液であってもよい。使用できる許容可能な賦形剤および溶剤は、水、リンゲル液および等張の塩化ナトリウム溶液である。さらに、無菌の不揮発性の油は従来から溶剤または懸濁媒質として使用されている。この目的には、合成のモノグリセリドやジグリセリドを含めて刺激のないいかなる不揮発性油も使用することができる。加えて、オレイン酸のような脂肪酸も注射可能な製剤の調製に使用できる。上記化合物はまた、薬剤の直腸投与用の座薬の形態で投与することもできる。これらの組成物は、薬剤を、常温では固体であるが直腸温度では液体であり、したがって直賜内で融解して薬剤を放出する適切な非刺激性賦形剤と混合することによって調製することができる。そのような賦形剤はココアバターとポリエチレングリコールである。上記化合物は滅菌媒質に入れて非経口的に投与してもよい。使用する賦形剤および濃度に応じて、薬剤はその賦形剤に懸濁または溶解することができる。有利には、局所麻酔薬、保存剤および緩衝剤のようなアジュバントを賦形剤に溶解させることができる。上記の治療には１日に付き約０．１〜約２５００ｍｇ程度の投与レベルが有用である。単一の単位投与形態を調製するのに担体材料と組合わせられる活性成分の量は治療する宿主および特定の投与モードに応じて変化する。投与単位形態は一般に活性成分を約１〜約５００ｍｇ含有する。しかし、個々の患者に対する個々のレベルは、使用する特定の化合物の活性、年齢、体重、全般的な健康状態、性別、食事、投与時間、投与経路および排出速度を含めた各種ファクターに依存する。好ましい化合物は次の通り。以下の実験の詳細欄にて本発明を説明する。この欄は本発明の理解を助ける特定の実施例を記載するが、いかなる意味でも後に記載する請求の範囲に定義された本発明を限定するものと解してはならない。実験の詳細欄Ｉ．インビトロ（In Vitro）モデルシステムＡ．材料と方法試薬と媒体オカダ酸（ＯｋＡ、okadaic acid）はMoana Biochemical（ホノルル）から入手し、アニソマイシンはSigma から入手し、アルカリホスファターゼはBoehringer Manheimから入手した。³²Ｐ‐オルトリン酸はNENから購入し、³ ⁵ Ｓ‐Ｌ‐メチオニンはICN Biochemicalsから購入した。ＭＳＮ細胞のルーチンの成育用のＲＰＭＩ１６４０培地、およびホスフェートフリーのＲＰＭＩ培地とメチオニンフリーのＲＰＭＩ培地はGIBCO BRLから入手した。抗体抗体Ｔ３Ｐとｔａｕ４６はペンシルバニア大学のVirginia Lee博士から提供された。モノクローナル抗体１８８と１４７とは、高度に富化した対合らせんフィラメント調製物に対して作製されたものであり、Abbott Laboratories から提供された。Ｅ１１はｔａｕのヒトのエクソン１１ペプチドに対するポリクローナル抗血清であり、Medicine of Yeshiva UniversityのAlbert Einstein Coll egeのHana Kseizak-Reding博士から提供された。ｔａｕ−１はUABのLester Bind er博士から入手した。細胞培養物ＳＭＳ−ＭＳＭ−Ａヒト神経芽腫セルライン（ＭＳＮ）はJune Biedler博士（Sloan-Kettering，New York，NY）の研究所から入手したＳＭＳ−ＭＳＮ細胞からクローニングされたものであり、１９９３年２月２日にRockville，MarylandのAmerican Type Culture Collectionに寄託され、ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１１２５３としてカタログに掲載されている。この寄託したヒト神経芽腫セルラインは１９９３年２月９日に生存試験がなされ、生存していることが確認された。この神経芽腫細胞はＴ７５フラスコで１５％のウシ胎児血清を補充したＲＰＭＩ１６４０培地中で成育させた。ＭＳＮ細胞のＯｋＡ処理ＯｋＡをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、０．１２２ＭのＮａＣｌ、４．９ｍＭのＫＣｌ、１．３ｍＭのＣａＣｌ₂、１．６ｍＭのＮａ₂ＨＰＯ₄、１０ｍＭのデキストロースを含有するクレブス‐リンゲル（Krebs-Ringer）−リン酸塩緩衝液（ＫＲＰ）（ｐＨ７．４）に加えて所要の濃度にした。対照サンプルはＤＭＳＯベヒクルの同様な液と共にインキュベートし、ＤＭＳＯの最終濃度は０．１％以下に維持した。インキュベーションの前に各フラスコから成長培地を吸引して除去し、代わりにベヒクルかＯｋＡのいずれかを含有するＫＲＰを入れた。フラスコを３７℃で適当な時間インキュベートした。細胞溶解物に関する実験では、ＭＳＮ細胞をペレット化し、４ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルロライド（ＰＭＳＦ）、２ｍＭのＥＧＴＡ、２５μＭのロイペプチン（Ieupeptin）を含有する２５０μｌの冷たいトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）に再懸濁させ、２秒間のパルスで超音波処理することによって破砕した。オカダ酸またはベヒクル（対照）を氷上で適当なサンプルに加え、３７℃でインキュベーションを開始した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ用のサンプルの調製フラスコを激しく振盪することによってＭＳＮ細胞を機械的に剥がし、内容物全体を氷上に置いた１５ｍｌの円錐管（ conicaltube）に移した。フラスコを冷たいトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）で濯ぎ、細胞懸濁液全体を３０００ｇで５分間遠心分離して細胞を集めた。この細胞ペレットを４ｍＭのＰＭＳＦと２ｍＭのＥＧＴＡを含有する２５０μｌのＴＢＳに再懸濁させ、１０分間煮沸した。熱に対して安定な蛋白質をマイクロバイオラド法（micro BioRad procedure）によってその蛋白質に関してアッセイした。電気泳動とブロッティング２０μｇの蛋白質を含有する熱処理した上清の一部の液を電気泳動サンプル緩衝液と共に煮沸し、ミニ１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに負荷した。このゲルを電気泳動的にニトロセルロース膜に移し、すでに記載されているように免疫標識した[Vincent，I．and Davies，P.，PNSA USA，87:48 40-4844（1990）]。蛋白質合成阻害ＭＳＮ細胞を１００ｍＭのアニソマイシンの存在下または不在下でＫＲＰと共に３７℃で１時間プレインキュベートした。この終了時に１μ ＭのＯｋＡを適当なフラスコに導入し、サンプルをさらに９０分インキュベートした。次に通常のプロトコルに従ってウェスタンブロット分析用のサンプルを調製した。アルカリホスファターゼ処理ニトロセルロースにブロットした蛋白質サンプルを、１０ｍＭのＰＭＳＦを含有するｐＨ８の緩衝液中、２０単位／ｍｌのアルカリホスファターゼと共に３７℃で２４時間インキュベートした。次いでブロットをウェスタンブロット分析に使用した。ＭＳＮ細胞の³²Ｐ標識ＭＳＮ細胞の密集層（confluent layer）を、リン酸塩を含まないＲＰＭＩ１６４０培地と共に３７℃で５分間インキュベートすることによって洗浄した。２つのプロトコルに従って細胞を標識した。Ａ）パルス‐チェイス各フラスコに２ｍｌの新鮮なホスフェートフリー培地を加え、２．５ｍＣｉの³²Ｐ‐オルトリン酸を加え、３７℃で１時間インキュベートした。この終了時に細胞をＫＲＰで一度洗浄し、次に１μＭのＯｋＡの存在下または不在下で新鮮なＫＲＰと共に３７℃でさらに９０分間インキュベートした。Ｂ）パルスホスフェートフリー緩衝液で洗浄した細胞を２．５ｍＣｉ／ｍｌの³²Ｐ‐オルトリン酸を含有する新鮮なホスフェートフリー培地と共に３０分プレインキュベートした。次に、ひとつのフラスコに１μＭのＯｋＡを加え、さらに９０分間細胞をインキュベートした。いずれのプロトコルでも、次いで熱に安定な調製物を上記のようにして調製し、この熱安定性上清の３５μｇの蛋白質を氷上で１０分間、２．５％の過塩素酸（ＰＣＡ）で処理することによってｔａｕに関して清澄化した[Lindwall，G．and Cole，R．D.，J.Biol ．Chem.，259:1224 1-12245(1984)]。サンプルを遠心分離し、ＰＣＡ可溶性蛋白質をメタノール沈殿させ、サンプル緩衝液と共にＳＤＳ−ＰＡＧＥに使用した。ＭＳＮ細胞の［³⁵Ｓ］メチオニン標識メチオニンフリーのＲＰＭＩ培地で洗浄した後、ＭＳＮ細胞を２００μＣｉ／ｍｌの³⁵Ｓ‐Ｌ‐メチオニンを含有する同様な培地と共に３７℃で一晩プレインキュベートした。フラスコを、２ｍＭの未標識メチオニンを含有する冷たいＫＲＰで濯ぎ、メチオニンを含有する培地で９０分間追跡した。いくつかのサンプルは、１００μＭのアニソマイシンを用いて、または用いないで１μＭのＯｋＡの存在下で追跡した。３５μｇの熱安定性調製物を上記のようにＰＣＡ処理にかけ、メタノール沈殿した。Ｂ．結果ＯｋＡ処理の時間経過ヒト神経芽腫セルラインＳＭＳ−ＭＳＮ（ＭＳＮ）は見掛け分子量５７ｋＤａと６０ｋＤａのダブレットとしてｔａｕ蛋白質を発現する。これらの蛋白質は、２０μｇの熱安定性蛋白質をＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロット分析に使用したとき、抗体Ａｌｚ−５０、Ｔａｕ−１、ＰＨＦ −１、ＮＰ８およびＴ３Ｐで検出された（０分対照、図１）。これら各種エピトープに対するプロテインホスファターゼの役割を検討する際の最初の段階としてＭＳＮ細胞を細胞透過性プロテインホスファターゼインヒビターであるＯｋＡで処理した[Bialojan，C．and Takai，A.，J ．Biochem.，256:283-290(1988)]。これらの実験ではｔａｕの一次配列を認識するモノクローナル抗体１８８をネガティブ対照として使用した。０．１％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）ベヒクルではなんの変化もなかった（４時間対照、図１参照）が、１μＯｋＡに３０分さらすとリン酸化されたｔａｕエピトープ、ＰＨＦ−１、ＮＰ８およびＴ３Ｐが顕著に誘発された。また、ＯｋＡ処理により、いくつかのより高分子量の蛋白質でＰＨＦ−１、ＮＰ８およびＴ３Ｐエピトープの出現が誘発された。ＰＨ１とＴ３Ｐの両方で６８‐ｋＤａ蛋白質に対する反応性が観察された（図１）。さらに、ＰＨＦ−１ポジティブバンドが８５ｋＤａ、１２０ｋＤａおよび１８０ｋＤａで、Ｔ３Ｐポジティブバンドが１１０ｋＤａで、そして１６０ｋＤａの主バンドを含めていくつかのＮＰ８ポジティブバンドが明白になった。これら調製物においてより高分子量の蛋白質でこれらのエピトープが別個に出現したことは、これらが独立したエピトープであることを示唆している。予想外のことに、ＭＳＮ細胞をＯｋＡで処理するとＡｌｚ−５０に対するｔａｕの反応性もまた同時に増大した（図１）。免疫反応性における上記増大とは対照的に、３０分以上ＯｋＡと共にインキュベートするとＴａｕ−１の蛋白質との反応性は消失した（図１）。ＯｋＡに誘発されたこれらのさまざまなｔａｕの免疫反応性の変化に伴なって、蛋白質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ上の電気泳動時の運動性が顕著に低下した。この効果は、過剰にリン酸化されたｔａｕ蛋白質とＰＨＦの特徴であるｔａｕの見掛け分子量における２〜３ｋＤａ上方へのシフトによって示された[Baudier，J．and Cole，D．R.，J ．Biol．Chem. ，262：17577-17583（1987）]。ＯｋＡ処理に対する用量‐応答曲線さまざまな細胞性プロテインホスファターゼのＯｋＡに対する異なる感受性を用いて、特異的なｔａｕエピトープの産生を調節する酵素を同定するためにＭＳＮ細胞をいろいろな濃度の薬剤に暴露した。５０ｎＭのＯｋＡの濃度で、Ａｌｚ−５０、１８８、ＰＨＦ−１、ＮＰ８およびＴ３Ｐのｔａｕに対する免疫反応性がかなり活性化された（図２）。この濃度でもｔａｕの電気泳動運動性の低下が明白であり、ＯｋＡの濃度をさらに高くすると蛋白質の運動性はさらに落ちた。Ｔａｕ−１の免疫反応性の多少の低下が５０ｎＭのＯｋＡで観察されたが、この抗体との反応性を完全に消滅させるには１μＭの濃度が必要であった（図２）。時間依存性の場合と同様に、より高濃度のＯｋＡも、多くのより高分子量の蛋白質とＰＨＦ−１、ＮＰ８およびＴ３Ｐとの免疫反応性を誘発した。６８ｋＤａ蛋白質は５０ｎＭ以上のＯｋＡからＰＨＦ−１、ＮＰ８およびＴ３Ｐにより観察され、１８８でも標識された（図２）。ＰＨＦ−１、ＮＰ８およびＴ３Ｐと反応性のエピトープをもつ別の蛋白質も明らかとなった。蛋白質合成阻害の効果ＯｋＡ処理後のｔａｕ免疫反応性の全体的な誘発に鑑みて、そのドゥノボ（de novo）蛋白質合成に対する依存性を検討した。図３に、ｔａｕに対するＯｋＡ誘発効果に対して１００μＭのアニソマイシン（蛋白質合成阻害剤）が及ぼす影響を示す。その迅速性と一致して、Ａｌｚ−５０、１８８、ＰＨＦ−１、ＮＰ８またはＴ３Ｐの免疫反応性の増大および分子量のシフトは蛋白質合成を要求しない。また、ＯｋＡ処理の結果として生じたＴａｕ−１免疫反応性の消失はアニソマイシンの存在下でも観察された（図３）。ＭＳＮ細胞溶解物のＯｋＡによる処理：アルカリホスファターゼの効果ＯｋＡに誘発されるｔａｕ免疫反応性の変化における細胞の完全性の重要性を、ＭＳＮ細胞を超音波処理し、得られた細胞溶解物をＯｋＡに暴露することによって評価した。この細胞溶解物を対照条件下でＫＲＰと共にインキュベートするとＰＨＦ−１、ＮＰ８およびＴ３Ｐのｔａｕとの免疫反応性は急速に消滅したが、蛋白質はＡｌｚ−５０、Ｔａｕ−１および１８８との反応性を保持していた（図４、（−））。ｔａｕの見掛け分子量の同時低下も観察され、５０ｋＤａと５４ｋＤａの２つの主バンドに分離した。これらの変化はプロテアーゼインヒビターのＰＭＳＦ、ロイペプチンおよびＥＧＴＡの存在下で観察された。１μＭのＯｋＡを導入してインキュベーションすると、ＰＨＦ−１、ＮＰ８およびＴ３Ｐの免疫反応性の消失とｔａｕの見掛け分子量の低下がブロックされた（図４、（−））。このことは、これらの効果が蛋白質の分解ではなく脱リン酸化によって媒介されていることを示している。すなわち、この破壊細胞の実例において、ＯｋＡはプロテインホスファターゼの非特異的な効果を阻害するには有効であるが、ｔａｕの免疫反応性を活性化するかまたはその分子量を増大するには無効であった。進行中の蛋白質リン酸化は、完全な細胞調製物と比べて細胞溶解物では中断される可能性があり、ｔａｕの免疫反応性の活性化と分子量の増大の欠如を説明することができる。ｔａｕ免疫反応性の観察された変化がリン酸化に起因することを立証する追加の手段として、上記サンプルのふたつずつのブロットをアルカリホスファターゼと共にインキュベートした。ホスファターゼ処理後すべての蛋白質とＰＨＦ−１、ＮＰ８およびＴ３Ｐとのその後の反応が消失することが判明した（図４、（＋））。Ｔａｕ−１エピトープの性質と一致して、類似の処理でＴａｕ−１の免疫反応性が高揚した。一方、ニトロセルロースブロットのアルカリホスファターゼ処理はＡｌｚ−５０と１８８の免疫反応性に影響を及ぼさなかった。Ｔａｕの³²Ｐ標識リン酸化が増大する結果としてＯｋＡがｔａｕ免疫反応性に影響するということを明確に立証するため、ＭＳＮ細胞を２つの独立なプロトコルに従って³²Ｐ−オルトリン酸塩で標識した。最初のプロトコルでは細胞をパルス標識し、次いでＯｋＡと共に、またはＯｋＡなしでＫＲＰと共にインキュベートした（図５Ａ）。チェイス（追跡）におけるＯｋＡの存在により、ＫＲＰ単独で追跡した細胞と比較して、ｔａｕに標識が実質的に蓄積されていた。対応する免疫ブロットによって、Ａｌｚ−５０のｔａｕとの免疫反応性は、この標識が追跡で失われたときにはほとんど検出されないが、結合されたリン酸塩がＯｋＡの存在下で保持されているときには大きく高まることが明らかにされた。第二のプロトコルであるパルス法では、通常の９０分のＯｋＡ処理の間ｔａｕのリン酸化の程度を決定する手段として、³² Ｐ‐オルトリン酸塩の存在下で細胞をＯｋＡに暴露した。図５Ｂに示されているように、標識の程度はＯｋＡが存在すると対照と比べて極めて大きく、全体としてのリン酸塩の結合もパルス‐チェイスサンプルの場合より大きい。これらのデータはＭＳＮ細胞ｔａｕにおけるリン酸塩の急速な変換速度を立証している。Ｔａｕの［³⁵Ｓ］メチオン標識ＯｋＡ処理によって産生したｔａｕにおける非リン酸化エピトープ（Ａｌｚ−５０および１８８）の増大した免疫反応性のため、リン酸化が蛋白質分解による切断に対する抵抗性を付与することによってｔａｕ蛋白質の蓄積に至ると推論された。これを念頭においてｔａｕ蛋白質の変換に対するＯｋＡの影響を検討した。ＭＳＮ細胞を同位体標識したメチオニンで代謝的にパルス処理し、次いでＯｋＡの存在下または不在下で未標識メチオニンで追跡した。ＯｋＡが存在しないとき３５Ｓ標識とｔａｕのＡｌｚ−５０免疫反応性は急速に喪失した（図６）。ＯｋＡが存在する場合、標識の損失もＡｌｚ−５０免疫反応性の両者とも防止された。このことは、ｔａｕの分解は、この蛋白質が高度にリン酸化された状態のときに阻害されることを示している。この効果は、ＯｋＡ追跡（チェイス）に１００μＭのアニソマイシンを含ませることによってドウノボ（de novo）蛋白質合成が阻止されるときに存続する。Ｃ．考察以上の実験は、アルツハイマー病においてＰＨＦの特徴とされている５つの独立した抗原決定基の顕著な誘発を示している。加えて、ＰＨＦ蛋白質で観察されるように、ｔａｕの見掛けの分子量は大きく増大する。これらの変化は、ＯｋＡによって誘発されたセリン‐スレオニンプロテインホスファターゼ活性における操作の結果として生じたものである。しかし、ＯｋＡによって誘発された免疫反応性の変化はｔａｕのＳＤＳ‐ゲル運動性における変化と必ずしも一致しないので（図２参照）、ＰＨＦ−１、ＮＰ８、Ｔ３ＰおよびＴａｕ−１エピトープにおける増大したリン酸化はｔａｕの見掛けの分子量の増大の原因ではない。ＰＨＦ −１、ＮＰ８およびＴ３Ｐに対する免疫反応性をもつ６８ｋＤａ蛋白質の出現（図１、２、３参照）は、ｔａｕの別の通常一過性のイソ型の安定性に対応している。この蛋白質はＡｌｚ−５０や１８８でときおり検出される（図５、６参照）。これらＯｋＡ処理後ＰＨＦ−１、ＮＰ８およびＴ３Ｐによって認識される追加の高分子量蛋白質はまだ同定されていない（図１、２、３参照）。これらはその煮沸に対する安定性のゆえに関連細胞骨格蛋白質を示し得るが、それらは各々上記抗体のひとつとのみ反応性（ポジティブ）であり、いずれもモノクローナル抗体Ａｌｚ−５０や１８８では認識されないことからｔａｕ蛋白質を含有していない。細胞溶解調製物への内在性のホスファターゼに対する、およびブロットの外来性ホスファターゼ処理に対するＡｌｚ−５０免疫反応性の抵抗性（図４）は、ＯｋＡによってＡｌｚ−５０免疫反応性が増大するという結論を補強している。Ａｌｚ−５０免疫反応性の増大に加えて、１８８免疫反応性および一次配列決定基と反応する少なくとも３つの別の抗体の同時活性化とは、神経芽腫細胞におけるｔａｕ蛋白質の量の全体としての増大を予測させる。蛋白質合成阻害剤の存在下でのこれらの効果の迅速性とその持続性は、これらがドゥノボ（de novo）蛋白質合成の結果である可能性を排除している。このｔａｕ免疫反応性の全般的な増大に対する別の説明は分解（degradation）の低下である。ＯｋＡが存在しない場合に観察される標識の急速な損失と対照的に、すでに合成されたｔａｕ蛋白質において³⁵Ｓ‐メチオニン標識の損失を防止するＯｋＡの能力はこの考えを支持している。このことはさらに、ＯｋＡと蛋白質合成阻害剤のアニソマイシンの存在下におけるあらかじめ標識されたｔａｕの蓄積の結果によっても確認される。ＡＤ特異的エピトープの生成におけるセリン‐スレオニンホスファターゼの重要性は、浸透性のチロシンホスファターゼインヒビターであるバナジン酸塩およびゲンステイン（genstein）は効果がないという知見によって強調される。このように、アルツハイマー病の神経原線維の絡み合いおよび神経炎斑の抗ホスホチロシン抗体による修飾は、まだ同定されていないエピトープと関連しているか、あるいは非特異的であり得る。プロテインホスファターゼはＯｋＡに対していろいろな感度を示すので、所望の効果に対して必要とされる阻害剤の濃度は関与する特異的酵素の指標となり得る。ホスファターゼ１に対するＩＣ−５０は０．１〜０．５ｍＭ、ホスファターゼ２Ａは１ｎＭであり、ホスファターゼ２Ｂ（すなわち、Ｃａ²⁺／ＣＡＭ依存性ホスファターゼ、Calcineurin）に対するＩＣ−５０は１０ｍＭであるが、ホスファターゼ２Ｃ（すなわち、Ｍｇ²⁺‐依存性ホスファターゼ）は影響されない。ＰＨＦ−１、ＮＰ８およびＴ３Ｐ免疫反応性における最適な誘発はホスファターゼ２Ａに対するＩＣ−５０の５０倍の濃度である５０ｎＭで起こり、ホスファターゼ２Ａがこれらのエピトープの転換（ターンオーバー）において重要な役割を果たしているように思われる。一方、この濃度はホスファターゼ２Ｂに対するＩＣ−５０より２〜１０倍小さいので、これらのホスファターゼのいずれかがこれらのエピトープの調節に関与しているとは思われない。Ｔａｕ−１部位におけるリン酸化は１μＭ以上で優勢になるが、５０ｎＭのＯｋＡでＴａｕ−１免疫反応性におけるある程度の阻害が観察される。したがって、ホスファターゼ１はＴａｕ−１部位におけるホスファターゼの転換に関与していることの方がありそうであるが、ホスファターゼ２Ａに対する役割を排除することはできない。ｔａｕの電気泳動運動性の低下は最初５０ｎＭのＯｋＡで明らかになり、薬剤の濃度が増大すると共にますます顕著になる。ｔａｕの電気泳動挙動はひとつより多くの部位でのリン酸化に依存しており、そのためいくつかのプロテインホスファターゼが関与している可能性がある。ヒト側頭葉スライスを用いた最近の研究は、ｔａｕの電気泳動移動性におけるカルシネウリン（Calcineurin）の重要性を示している[Harris，et al.，Ann ．Neurol.，33:77-87（1992）]。一方、以前のインビトロ（in vitro）研究では、ＴａｕのＳＤＳ−ＰＡＧＥの移動性におけるホスファターゼ２Ａの関与が示されている[Yamamoto，et al.，J.Neurochem . ，55:683-690(1990)]。ＭＳＮ細胞内でのＰＨＦ−１、Ｔ３ＰおよびＮＰ８エピトープの生成におけるホスファターゼ２Ａの示唆された役割は、ｔａｕにおける正常なものおよび対合らせんフィラメント様エピトープのリン酸化状態を決定するのにこのホスファターゼが極めて重要であることを示しており、ｔａｕの代謝において重要な酵素となっている。過剰にリン酸化されたｔａｕ蛋白質で観察された細胞性プロテアーゼに対する不感受性とその結果の蓄積は不溶性のフィラメントの生成に至る初期事象のしるしかもしれない。見掛けの形態異常を伴なわないニューロンにおけるＡｌｚ−５０およびＴａｕ−１免疫反応性の早期の検出はＡＤ脳における類似の状態に相当しているかもしれない。インビトロ（in vitro）研究では、リン酸化によりｔａｕの弾性が低下し[Hagestedt，et al.，J ．Cell Biol.，109:1643-1651(1989)]、その溶解性が低下する[Hanger，et al.，Biochem ．J.，275:99-104(1991)]という証拠がある。さらに、精製されたリン酸化された形態のｔａｕは非リン酸化形態のｔａｕよりある種のプロテアーゼに対する感受性が弱い[Litersky，J．M．and Johnson ，G．V.，J.Biol.Chem.，267:1563-1568(1992)]。総じて、これらのデータは、ｔａｕは過剰なリン酸化によってプロテアーゼに対して抵抗性になり、かつ／または不溶性になるという理論を支持している。この二、三年の間にヒト胎児脳組織において対合らせんフィラメント様エピトープが発見された。また、正常なヒト胎児脳から得たｔａｕはＮＰ８とＴ３Ｐ免疫反応性に対してポジティブであることも判明した。したがって、上記エピトープは「正常」であると考えてよい。しかしながら、正常な成人の脳では明らかでないことから、これらの生成に必要な酵素過程は発生調節状態にあると思われる。したがって、アルツハイマー病におけるこれらのリン酸化部位の再出現は、アルツハイマー病の脳における異常な酵素の結果というよりも、この酵素系の脱調節（deregulation）の結果として起こると考えられる。ｔａｕにおいて各リン酸化部位を調節する特定のプロテインキナーゼとホスファターゼの細胞内局在化および活性化における変化は、アルツハイマー病におけるｔａｕの異常な翻訳後プロセッシングのきっかけとして働き得る。アルツハイマー病においてプロテインキナーゼＣおよびカゼインキナーゼIIの普通でない活性および局在化の証拠があるが、これらのキナーゼのいずれもがｔａｕにおける対合らせんフィラメント様エピトープの生成に関与していることは示されていない。 II．正常脳、アルツハイマー病の脳および処理または未処理のＭＳＮ細胞と抗体との免疫反応性モノクローナル抗体Ａｌｚ−５０、ＰＨＦ−１、ＴＧ３、ＴＧ４、ＭＣ２、ＭＣ６およびＭＣ１５と、正常脳組織やアルツハイマー病の脳組織との免疫反応性、およびオカダ酸による処理前のＭＳＮ細胞（ＭＳＮ−）および処理後のＭＳＮ細胞（ＭＳＮ＋）との免疫反応性を検査した。結果は図７に示す。脳組織のデータは、５つの正常な症例と５つのアルツハイマー病の症例から得た中央側頭皮質の研究で得られた平均値である。ＭＳＮ細胞の値は、３つずつのＭＳＮ細胞培養物に細胞採集の９０分前に１μＭのオカダ酸を添加した一連の実験である。各サンプル（組織または細胞ホモジネート）を、２つずつ、８つの希釈度でアッセイした。Ｙ軸の単位は免疫反応性を表わす任意単位である。すべてのケースで、オカダ酸がＭＳＮ細胞における免疫反応性を増大させること、およびこの増大が正常脳組織とアルツハイマー脳組織との相違の程度において似ていることが明らかである。 III．ＭＳＮ細胞におけるＰＨＦエピトープに対するトリフルオルペラジンとクロルプロマジンの効果アルツハイマー病に関連するＰＨＦエピトープに対するトリフルオペラジンとクロルプロマジンの影響を確かめるために、ＰＨＦエピトープを発現するＭＳＮ −Ａ細胞を、１００μＭのトリフルオペラジン（ＴＦＰ）、１００μＭのクロルプロマジン（ＣＰＺ）または０．２％のＤＭＳＯベヒクル（対照）と共に３７℃ で２時間インキュベートした。細胞を遠心分離で単離し、１０分間煮沸し、得られた熱安定性の上清から得た蛋白質を１レーン当たり２５μｇとしてＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルにかけた。ゲルを電気泳動的にニトロセルロース膜に移した後、ＰＨＦ−１で免疫染色した。図８に示されているように、ＴＦＰとＣＰＺはいずれも、神経芽腫細胞による対合ＰＨＦエピトープの産生を大幅に低減させた。これに対して、対照はＴＦＰまたはＣＰＺの添加なしに神経芽腫細胞によるＰＨＦエピトープの産生が起こることを示していた。有効濃度は、精神科の患者の長期治療後の脳内にこれらの薬剤が存在している範囲であるようである[Svendsen，C．N．and Bird，E．D.，Psychopharmacology ，90:316-321(1986)]。これらの結果が示唆しているように、フェノチアジン類または構造上関連する化合物で長期にわたって治療された患者はＰＨＦの蓄積から保護され、したがってアルツハイマー病の進行の確率が低くなるであろう。 IV．クロルプロマジンで処置した慢性精神分裂病の研究前脳および皮質脳組織の検体をクロルプロマジンで長期にわたって治療されていた慢性精神分裂病患者から剖検により得、文献記載のＡＬＺ−ＥＩＡ法を使用して分析した［Ghanbari，H．A.，et al.，JAMA，263:2907(1990)]。結果は図９Ａ［前脳（Broadman area 10）］および図９Ｂ［側頭（Broadman area 38）］に示す。ほぼ同数の（年齢を合わせた）正常コントロールとアルツハイマー病患者から得た脳組織（死後）も分析し、ネガティブコントロールおよびポジティブコントロール（それぞれ、正常およびＡＤに対して）として図に示した。このデータが示しているように、クロルプロマジンで処置した患者（ＲＸ）から得たサンプルでは正常対照と似た低いＰＨＦエピトープレベルを示したが、ＡＤ群のＰＨＦエピトープレベルは明らかにずっと高かった。また、これらの結果は脳検体の組織病理学的診断と一致していた。統計的に、ＲＸ年齢群の個体の約２０〜３０％でＡＤが進行しており、したがって脳領域のＰＨＦがずっと高かった。この証拠は、クロルプロマジンによる患者の長期処置はＰＨＦの生成およびＡＤを予防することを示している。同様に、クロルプロマジンのようなインビトロ（in vitro）］活性を有する化合物は有効である。ここで参照した刊行物と特許はすべて引用したことによってその全体が本明細書に含まれているものとする。特定具体例に関連して本発明を説明して来たが、これらの具体例は本発明の各種側面の単なる例示であると理解されたい。すなわち、例示具体例に対して数多くの修正・変更をなすことができ、また本発明の思想と範囲から逸脱することなくその他の変形も導くことができるものと理解されたい。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Phenothiazines and / or thioxanthenes With Alzheimer's disease Methods of treatment and / or prevention This application is related to U.S. Patent Application Serial No. 08/04, filed March 26, 1993. U.S. Patent Application No. 2,825,425 filed on August 8, 1994 No. 08 / 287,339 (part of these two applications) Are incorporated herein by reference.) Statement of Government Interest The present invention relates to grant numbers NIH AG 06803 and NIH MH 38623. It was made with the support of the government based on Accordingly, the government has And have certain rights. Background of the Invention 1. Technical field The present invention relates to a method for preventing or treating Alzheimer's disease. In particular, this method Abnormally phosphorylated pairs associated with Alzheimer's disease Prevents accumulation of paired helical filament epitopes Effective amount to stop or reduce Administering the nothiazines or thioxanthenes to the patient.2. Description of related technology Alzheimer's disease affects 7% of the population over the age of 65 and gradually loses intellectual functioning. Progressive neurodegenerat with clinical features ive disorder). Alzheimer's disease is an abnormally phosphorylated paired spiral It is characterized by the accumulation of filaments (PHFs), Neurofibrillary entanglement (neurofibrillary) in the axon of the neuritic plaque tangle). PHFs are also neuronal processes such as axons and dendrites It also exists in Ki. As much as 90% of the cortical PHF in the average Alzheimer's case It is present in neurites, not in entanglements [Wolozin, B.L. and Davies, P.,A nn . Neurol. , 22: 521-526 (1987)]. The accumulation of PHF, an indicator of Alzheimer's disease, is a clear clinical sign of the disease Can begin within the entorhinal cortet years before becoming Suggested [Braak, H., et al.,Neurosci Lett. 103: 24-28 (1989); Braak, H ., Et al.,Neurooath . and Applied Neurobiol.15: 13-26 (1989); Braak, H., et al.,Acta Neuropath., 82: 239-259 (1991)]. Early in Alzheimer's disease Only neurons of the entorhinal cortex contain PHF. In the next stage, the patient Showed some short-term memory loss when the CA1 and CA2 pyramidal layers of the hippocampus (py The neurons in the ramidal layer) contain these structures. Later stages Neurons in the association cortex begin to show evidence of PHF formation Confuse. PHF pathology is primarily at the early stages, or by preventing PHF accumulation. To prevent the progression of Alzheimer's disease when restricted to the hippocampus It would be very beneficial for patients with Myr disease. The amount of PHF from the isolated neurofibrillary tangle Early attempts to determine child properties were due to the complexity of PHF due to the complexity of entanglement. Failed due to difficulties in isolation and solubility [Yen, S-H, et al.,NY Acad . Sci.,Four 55: 819-825 (1985); Crowther, T., et al.,Ann . Med., 21: 127-132 (1989); Voge lsang, G.D., et al.,Clin . Biol. Res., 317: 791-800 (1989)]. These difficulties Nevertheless, microtubule-associated protein, tau And a sequence homologous to that of PHF containing this protein. [Crowther, T .; et al.,Ann . Med., 21: 127-132 (1989)]. Also, Mature neurofibrillary tangles cause at least two other proteins in addition to tau Have been shown to be present [Volgelsang, G.D., et al.,Prog . Clin. Biol . Res. , 317: 791-800 (1989); Igbal, K .; and Grundke-Igbal, I.,Molecular Neur obioloy , 5: 399-410 (1991); Sternberger, L.A., et al.,Pro g . Clin. Biol. Res. 317: 763-768 (1989); Bancher, C., et al.,Prog . Clin. Biol. Res. 317: 913-924 (1989)]. Abnormal protein phosphorylation occurs during PHF production in Alzheimer's patients This suggests that PHF tau is overphosphorylated, Studies have already suggested [Kosik, K.S., et al.,Ann . Med., 21: 109 -112 (1989); Kosik, K.S.,J. Gerontol., 44: 55-58 (1989); Goedert, M.,Trends in Neurosciences 16: 460-464 (1993); Iqbal, K.,Act Neurobiologiae Exp.,Five 3: 325-335 (1993)]. In addition, other proteins, especially neurofilament ) And other microtubule-associated proteins (MAPs) are also excessively recruited in the brains of Alzheimer's disease patients. There is also evidence that it has been oxidized [Grundke-Iqbal, I. and Iqbal, K.,Prog . Cl in. Biol. Res. , 317: 745-753 (1989); Onorato, M., et al.,Pro . Clin. Bio. Res. , 317: 781-789 (1989); Seitelberger, F., et al.,J . Neural Transmissio n , 33: 37-33 (1991); Lovestone, S., et al.,Curr . Opinions in Neurology an d Neurosurgery , 5: 833-888 (1992)]. They also indicate that the production of PHFs It also suggests that it is the result of abnormal phosphorylation of the protein. The inventors of the present invention react with PHF in the brain tissue of Alzheimer's disease patients, In most cases, little or no protein in normal adult brain Cross A non-reactive monoclonal antibody was prepared. These antibodies are used during the course of the disease Abnormal phosphorylation of PHF protein in denatured Alzheimer brain Reacts with tope. By blocking the epitope recognized by these antibodies, ta abnormal phosphorylation, including u, other MAP and neurofilament proteins If the production of the produced PHF protein can be prevented, the production and accumulation of PHF will be prevented. Harmed or prevented, thus preventing or preventing the progression of Alzheimer's disease It is expected to be. However, so far, abnormally phosphorylated PHF Ensuring the generation of epitopes in large quantities is reliable both in vivo and in vitro Not possible. Shea, T.B. and colleagues report that aluminum salts are used in neurofilament cells in neuroblastoma cells. Induced accumulation was reported [Shea, T.B. et al.,Brain Res., 492: 53-64 (1989)]. However, the neurofilament generated by Shea, T.B. It is not shown whether it correlates with PHF associated with Immer's disease. Use polyclonal antibodies against PHF epitopes. In the human neuroblastoma cell line IMR32 grown in a differentiation medium. Reported expression of epitopes associated with neurons in Myr disease [Ko, Li-wen, et al.,Am . J. Path., 136 (4): 867-879 (1990)]. However, IMR32 culture cells Alz- of the vesicle Reactivity to 50 in control media and Other cells reported by Ko, Li-wen et al. That they did not express the PHF epitope. It was equivalent in the system. This indicates that the level of expression was too low for Alzheimer's It is not a model of the disease. Thus, the generation of abnormally phosphorylated PHF epitopes is ensured and in large quantities A triggering model system that blocks the generation of these epitopes Requirements for a model system that can be used to screen compounds Has increased. The present invention provides continuous large-scale Alzheimer's disease epitopes. Needs for tissue culture models expressed in It satisfies. Summary of the Invention The present invention provides an aberrantly phosphorylated paired helical filament associated with Alzheimer's disease. An in vitro model cell system expressing a lament epitope is provided. this The system treats with an effective amount of protein phosphatase inhibitor and Antibodies that specifically bind to a paired helical filament epitope phosphorylated on Neuroblastoma cells homogenized with cells that have been treated to be immunologically reactive Consists of The model system of the present invention shows that a certain drug is used for Alzheimer's disease Prevents accumulation of related abnormally phosphorylated paired helical filament epitopes It can be used to determine if it can be stopped or reduced. Ma The present invention also provides an abnormally phosphorylated paired helix epidermis associated with Alzheimer's disease. Treatment of Alzheimer's disease consisting of administering drugs that block the accumulation of toep Treatment or prevention methods are also provided. BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES The following detailed description of the presently preferred (although illustrative) aspects of the invention The above and other objects and features of the invention will be apparent from the description when taken in conjunction with the accompanying drawings. It will be better understood. FIG. 1 shows the time lapse of the OkA process. MSN cell confluent layer 0 minutes or 4 hours at 37 ° C with KRP containing 0.05% DMSO ( Control), or 30 minutes, 90 minutes, 4 hours, 10 hours or 1 μM OkA Was incubated for 24 hours. Cells were collected and boiled to obtain a thermostable fraction. 20 μg of protein per lane was subjected to SDS-PAGE to separate, and the gel was electrophoresed. Transferred to nitrocellulose by electrophoresis. Alz-50 antibody, Tau-1 antibody, 18 Blots using Antibody 8, PHF-1, NP-8 or T3-P antibodies Immunostaining was performed. The arrow next to the PHF-1 blot indicates the 68-kDa protein. And this is first seen after OkA treatment. FIG. 2 shows a dose-response curve for OkA treatment. MSN cells were incubated with 5 nM, 50 nM, 1 μM or 50 μM OkA in KRP. At 37 ° C. for 4 hours. Prepare thermostable fraction in the same manner as in Fig. 1. And used for Western blot analysis. For Alz-50 blots, 50 μM Note that the sample treated with OkA showed only 13 μg of protein. I want to. FIG. 3 shows the protein synthesis inhibitory effect. In the presence of 100 μM anisomycin Or in the absence of MSN cells with 1 μM OkA at 37 ° C. for 90 minutes did. A thermostable fraction was prepared in the same manner as in FIG. Analyzed by blotting. FIG. 4 shows the results of treating the MSN cell lysate with OkA, ie, alkaline phosphatase. 7 shows the effect of vatase. MSN cells were collected by centrifugation, 4 mM PMSF, 25 Resuspended in KRP containing μM leupeptin and 2 mM EGTA. This Sonicate the cell suspension for 2 seconds and the lysate obtained is in the presence of 10 μM OkA. Incubated at 37 ° C. for 60 minutes in the absence or absence. 50n sample separately Treated with M OkA. Load 30 μg of each thermostable fraction per lane. Loaded. Duplicate blots were prepared in the presence of 10 mM PMSF (+), pH 8. 0 buffer at 37 ° C with 20 units of alkaline phosphatase per ml of buffer. Incubated for hours. The blot was then stained with the Alz-50 antibody, Tau-1 antibody. Body, 188 antibody, PHF-1 antibody, T3P antibody or NP- Immune tests were performed with 8 antibodies. FIG. 5A used pulse-chase.³²The result of p-labeled Tau is shown. MS N cells were harvested at 2.5 mCi in phosphate-free medium.³²with p-orthophosphoric acid The cells were pre-incubated for 1 hour at 37 ° C. These cells were then transferred to 1 μM Follow for 90 min with KRP in the absence (control) or presence of OkA (h). Yace) Described in the experimental details section to enrich tau in thermostable supernatants The mixture was treated with perchloric acid (PCA) to perform methanol precipitation. Blot After staining with Alz-50, it was subjected to autoradiography. FIG. 5B used pulses (short term metabolic labeling).³²P-labeled tau results Show. The cells were pre-incubated for 30 minutes with labeled orthophosphoric acid, At the end, 1 μM OkA acid was introduced into one sample. Ink for an additional 90 minutes After incubation, the thermostable supernatant was isolated and subjected to PCA and methanol precipitation. . The blot was stained with Alz-50 and then subjected to autoradiography. FIG.³⁵The result of tau labeled with S-methionine is shown. MSN cells were transferred to 20 Overnight in methionine-free medium containing 0 μCi / ml isotopic methionine Labeled metabolically for a short period of time. These cells are then combined with the indicated additives. Was followed for 90 minutes with KRP containing 2 mM unlabeled methionine. Heat Qualitative supernatant After treatment with PCA, the PCA soluble protein was precipitated with methanol for gelation. Was. Blots were stained with Alz-50 and subjected to autoradiography. FIG. 7 shows Alz-50 antibody, PHF-1 antibody, TG3 antibody, TG4 antibody, MC 2 antibody, MC6 antibody or MC15 antibody, normal brain, Alzheimer's disease brain, MSN cells before treatment with okadaic acid (MSN-) 5 shows immunoreactivity with MSN cells (MSN +) after treatment. Brain tissue day The middle temporal cortex from 5 normal cases and 5 Alzheimer's disease cases (Mid-temporal cortex). Against MSN cells Values were 1 μM in triplicate prepared MSN cell cultures 90 minutes prior to cell harvest. Of okadaic acid from a series of experiments. Each sump (Tissue or cell homogenates) were assayed in duplicate at eight dilution steps. Y axis The units are arbitrary units of immunoreactivity. FIG. 8 shows the control and after treatment with trifluoperazine or chlorpromazine. Neuroblastoma (MSN-A) cells expressing paired helical filament epitopes 3 shows an immunoblot of the above. FIG. 9A shows Alzheimer's disease patients (AD), normal controls (NC), or Broadman region in schizophrenic patients (RX) taking lupromazine area) 10 shows relative ADAP concentration. FIG. 9B shows Alzheimer's disease patient (AD), normal control (NC) or Broadman region (Br) in schizophrenic patients (RX) taking chlorpromazine oadman area) 38. Detailed description of the invention The present invention provides an aberrantly phosphorylated paired helical filament associated with Alzheimer's disease. An in vitro model cell system expressing a lament epitope is provided. this The system is treated with an effective amount of a protein phosphatase inhibitor and treated. Homogenates from later cells are abnormally phosphorylated, paired helical filaments Neuroblasts rendered immunoreactive with antibodies that specifically bind to the epitope Consists of tumor cells. The model system of the present invention comprises an effective amount of a protein phosphatase inhibitor. The neuroblastoma cells are treated with a homogenizer, and the homogenate from the treated cells is abnormally phosphated. Immune to antibodies that specifically bind to the Manufactured by making them epidemiologically reactive. Neuroblastoma cells useful in the present invention include tau, neurofilament protein and Nervous system tumors in children that contain other neuronal proteins ). These cells are phosphatase inhibitors Unusually phosphoric acid Hardly expresses even if it expresses Absent. In a particularly preferred embodiment, the neuroblastoma cells are obtained from American Type Cal. ATCC accession number for Char Type (American Type Culture Collection) No. CRL11253. Protein phosphatase inhibitors can be used to treat neuroblastoma cells treated with them. Abnormally phosphorylated paired helical filaments associated with Alzheimer's disease Any inhibitor that induces the expression of an epitope. In a preferred embodiment, Protein phosphatase inhibitors are okadaic acid, A (calyculin A), microcystin-LR (microcystin-LR), nodulari (Nodularin) and phenylarsine oxide (phenylarsine oxide) You. In a most preferred embodiment, the protein phosphatase inhibitor is okadaic acid (ok adaic acid). Protein phosphatase inhibitors used to treat neuroblastoma cells The amount of helical protein that is abnormally phosphorylated in cells treated with the inhibitor An amount effective to induce the expression of a filament epitope. Place of preferred mode In this case, the concentration of the inhibitor is 0.1 to 10 μM. The most preferred case The concentration is 1.0 μM. However, the individual optimal concentration depends on the inhibitor used and the specific By vesicles. Expression of abnormally phosphorylated paired helical filament epitopes is abnormally restored. Uses an antibody that specifically binds to an oxidized paired helical filament epitope Can be detected. This epitope is described in Wess, as described in the experimental details section. Detected by Tan blot analysis or quantitative ELISA. Antibody is monochrome It may be null or polyclonal, but monoclonal is preferred. This antibody is It can be prepared from PHFs isolated from Alzheimer's patients by known procedures. Wear. In a preferred embodiment, Vincent, IJ. And Davies s, P.)Proc . Natl. Acad. Sci. USA, 89: 2878-2882 (1992). PHF is isolated and purified using immunoaffinity. In particular, Alzheimer's disease who died 20 grams of human cortical tissue at a setting of 5 for two 30 second bursts 10 volumes of Tris buffered saline (TBS; In 0.1 M Tris base / 0.14 M NaCl, pH 7.4) Modify. The homogenate was centrifuged at 27,000 × g at 4 ° C. for 30 minutes. Release and apply the supernatant to the immunoaffinity column. Good for affinity purification Monoclonal antibody used is Ab42 (IgG), which is a published protocol. Col [Spira, G., et al.,J . Immunol. Methods, 74: 307-313 (1984)] One type of switch clone of Alz-50 produced. Professional Fine with Tein A About 20 mg of the prepared Ab42 was added to a 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 8.1). ) And washed Affi-Gel 10 [Bio-Rad -Rad)] and mix with 10 ml. The mixture is placed on a rotary shaker at room temperature for 3 hours. Incubate for 0 minutes. At the end of this time, equal the volume of the gel / antibody mixture. Add a new volume of 0.1 ethanolamine (pH 8.1) and incubate For one hour. Coupling efficiency is typically> 90%. Immunoadsorbent Inject into ram and wash with TBS. Keep the column at 4 ° C and run the chromatography All floors are operated at this temperature. At least 2 beds before loading sample Volume of elution buffer (3M potassium thiocyanate), then 5 bed volumes of T Treat the column with BS. 27,000 × g was added to this immunoaffinity column. At a flow rate of about 25 ml / hour. With at least 30 bed capacity TBS Non-specific binders are reduced by washing the immunosorbent. Then adsorb Eluted protein with elution buffer. Quantigold Protein Assay Fractions were assayed for protein concentration using the drug [Bio-Rad]. Pea Fractions were dialyzed against TBS and stored at -70 ° C. To prepare a monoclonal antibody, one injection of the antigen purified as described above Intraperitoneal injection of 10-20 micrograms of protein per mouse per day By To immunize mice. After immunizing the mice 4-5 times, the spleen is removed and Hybridoma cells are produced by protocol. Hybridoma is Alzhai ELISA and Immunization to Produce Specific Antibodies That React with Brain Tissue of Myr Disease Test by cytochemistry. In a preferred embodiment, these antibodies are Alzheimer's -Highly reactive with the brain tissue of normal Does not react well. In the most preferred embodiment, Alz-50, PHF-1, TG 3, selecting an antibody from the group consisting of TG4, MC2, MC6 and MC15 . All hybridomas secreting these antibodies are from Rockville, Maryland, USA Rockville's American Type Culture Collection (America n Type Culture Collection). Alz-50 receives ATCC PHF-1 secreted from the hybridoma deposited under accession number HB9205 Is secreted from the hybridoma deposited under ATCC accession number 11743, TG3 is secreted from the hybridoma deposited under ATCC accession number 11744. TG4 is a hybridoma deposited under ATCC accession number 11745. Secreted from MC2 and deposited as ATCC Accession No. 11737 And MC6 is deposited under ATCC Accession No. 11740. Secreted from bridoma, MC15 has been deposited under ATCC accession no. Secreted from hybridomas It is. In the model system of the present invention and the above-mentioned antibody, a certain substance or drug is Immer's disease activity, ie abnormally phosphorylated, associated with Alzheimer's disease Can we prevent or reduce the accumulation of paired helical filament epitopes? Can be used to determine whether. Thus, the present invention relates to a method for treating an agent that is abnormally linked to Alzheimer's disease. Preventing or reducing the accumulation of oxidized paired helical filament epitopes It also provides a way to determine if it can be done. This method comprises the steps of (a) treating the treated cells Of abnormally phosphorylated paired helical filament epitopes in yeast Effective amount of protein phosphatase inhibitor to reduce neuroblastoma By treating the cells, the homogenate from that cell is abnormally phosphorylated. Antibodies against antibodies that specifically bind to a paired helical filament epitope (B) accumulation of abnormally phosphorylated paired helical filament epitopes An agent that is thought to be able to prevent or reduce (C) adding to said treated cells Alzheimer's Abnormally phosphorylated paired helical filament epitopes associated with disease and specificity (D) Immunization of the homogenate of these cells with said antibody. Epidemiological reactivity was analyzed, and (e) the drug was homogenated from neuroblastoma cells and Anti-immunity with the body Determining whether the level of responsivity has been reduced, said reduction being The drug prevents the accumulation of abnormally phosphorylated paired helical filament epitopes. Or an indicator of a decrease. The invention also relates to the discovery that a drug is abnormally phosphorylated in association with Alzheimer's disease. Can prevent or reduce accumulation of paired helical filament epitopes Also provided are kits for screening used to determine whether or not. This key (A) neuroblastoma cells, and (b) the details when the neuroblastoma cells were treated. Vesicles express abnormally phosphorylated paired helical filament epitopes Capable of abnormally phosphorylating the homogenate from the treated cells. Against antibodies that specifically bind to a matched paired helical filament epitope A protein phosphatase inhibitor which renders it reactive, and (c) said protein Expressed by neuroblastoma cells treated with inphosphatase inhibitors Antibodies that specifically bind to abnormally phosphorylated paired helical filament epitopes Contains body. Certain phenothiazine compounds using the model systems and methods of the present invention That is, trifluoperazine and chlorpromazine (CPZ) Cell-derived homogenates and abnormally expressed phosphate expressed by these cells With antibodies that specifically bind to a paired paired helical filament epitope Responsiveness level Has been found to decrease. Therefore, chlorpromazine is Phenothiazines and similar structural compounds For example, thioxanthenes shown below are also compatible with the model system described below. It shows the same activity profile as chlorpromazine in These phenothiazines and thioxanthenes also increase Alzheimer's activity. Effective to prevent or reduce, and thus treat or treat Alzheimer's disease Effective for prevention. Thus, the present invention relates to abnormally phosphorylated pairs associated with Alzheimer's disease. An effective amount of a filament to prevent or reduce the accumulation of helical filament epitopes. Alzheimer's disease comprising administering enothiazines or thioxanthenes -Treating or preventing such disease in a subject in need of such treatment or prevention. It also provides a way to The phenothiazines useful in the present invention have a structural skeleton represented by Formula I: Here, A is a divalent alkylene group or alkenyl having about 2 to 8 carbon atoms. A ren group;₁And R_TwoAre each independently hydrogen, or Halogen, amino, carbonyl, sulfonyl, trifluoromethyl, lower Organic groups which may be substituted with various residues such as Represent or R₁And R_TwoAnd the nitrogen to which they are attached Loridinyl, piperazinyl, lower alkylpiperazinyl, piperidyl, thiomol 5- to 7-membered restorations such as folinyl, morpholinyl or hexahydroazepinyl To form a ring. In the above formula I, the tricyclic system may optionally be selected, for example, from halogen, amino, Bonyl, sulfonyl, perfluoroalkyl (for example, trifluoromethyl) Substituted by various groups such as lower alkyl and lower alkoxyl, etc. May be. The sulfur atom of the above formula I is optionally present as a sulfoxide. You may. Thioxanthenes useful in the present invention have a structural skeleton represented by Formula II or III. ing. Here, R 'is hydrogen or an alkyl group, and R and R₁Are each independently hydrogen Or represents alkyl, or R and R₁Are together, for example, pylori A five-member, six-member, such as dino, piperidino, morpholino or piperazino Forming a seven-membered heterocycle, A is for example pyrrolidino, piperidino, morpholino or Is a 5-, 6- or 7-membered heterocycle such as piperazino. 5-, 6- or 7-membered heterocycles may be halogen, amino, carbonyl , Sulfonyl, perfluoroalkyl, lower alkyl, lower alkoxy, etc. May be substituted by such various residues. In the above formulas II and III, the tricyclic system may optionally be, for example, a halogen, an amine. , Carbonyl, sulfonyl, perfluoroalkyl (for example, trifluoromethyl Tyl), lower alkyl and lower alkoxyl, etc. It may be replaced. Compounds suitable for use in the method of the present invention include structural bones of formula I, II or III. Single enantiomers, racemates and geometric isomers with And compounds. Furthermore, the enantiomers of these structures and compounds Also included are mixtures of isomers and geometric isomers. Phenothi effective to block the appearance of paired helical filament epitopes Examples of azine drugs include promazine, triflupromazine, methotrimep Razine, Acetophenazine, fluphenazine, perfenzine, prochloroperazine, There are solidazine and thorridazine. These and other similar Are disclosed in U.S. Pat. Nos. 2,921,069 and 2,837,5. No. 18, No. 2,860,138, No. 2,902,484, No. 3,194,7 No. 33, No. 3,084,161, No. 2,519,886, No. 2,645,6 No. 40 and 2,985,654, which are incorporated herein by reference. ). Block appearance of paired helical filament epitopes An example of a drug in the thioxanthene family that is effective in rprothixene) and thiothixene (Thiothixene). Typical Thioxa Content are disclosed in U.S. Pat. Nos. 3,310,553 and 2,951,082 (this Which are also incorporated herein by reference). Representative phenothiazine compounds useful for practicing the method of the present invention are listed below. You. U.S. Pat. No. 2,921,069 Compounds of the general formula Where Z is -S- or -SO-, Y is trifluoromethyl, R Is hydrogen, halogen, trifluoromethyl, lower alkyl or lower alkoxyl Wherein A is a divalent, linear or branched aliphatic chain containing 2 to 6 carbon atoms And R₁And R_TwoIs hydrogen or lower alkyl, or these are bonded Pyrrolidinyl, piperazinyl, lower alkyl pipera Dinyl, piperidyl, thiomorpholinyl, morpholinyl or hexahydroa It is a divalent group forming a 5- to 7-membered heterocyclic ring such as Zepinyl. Preferred compounds for use in the present invention are those represented by the above structural formula wherein Z is -S-, Y is trifluoromethyl at position 2 to position 4, R is hydrogen, and halogen at position 6 or 8 Trifluoromethyl, lower alkyl or lower alkoxy, A has 2 to 5 A divalent linear or branched aliphatic chain containing carbon atoms,₁And R_TwoIs hydrogen or low Pyrrolidinyl together with the nitrogen to which they are attached or to which they are attached , Piperazinyl, lower alkylpiperazinyl, piperidyl, thiomorpholinyl Or a divalent group forming a 5- to 6-membered heterocyclic ring such as morpholinyl Things. Further advantageous compounds of the present invention are those represented by the above structural formula wherein Z is -S- , Y is 2- or 4-position trifluoromethyl, R is hydrogen, and A is 2 to 4 carbon atoms. Contain Divalent linear aliphatic chains or divalent fractions containing 2 to 5 carbon atoms A branched aliphatic chain, R₁And R_TwoIs hydrogen or lower alkyl or these are Pyrrolidinyl, piperazinyl, lower alkylpi Five members such as perazinyl, piperidyl, thiomorpholinyl or morpholinyl Represents a divalent group forming a to 6-membered heterocyclic ring. Most preferred compounds are those represented by the above structural formula, wherein Z is -S- and Y is 2 Trifluoromethyl, R is hydrogen, A is structure (However, R_ThreeIs a chain represented by hydrogen, methyl or ethyl);₁And R_Two Is lower monoalkyl or dialkyl or the nitrogen to which they are attached Together form pyrrolidinyl, piperazinyl, lower alkylpiperazinyl, piperi A 5- to 6-membered heterocycle such as dinyl, thiomorpholinyl or morpholinyl It represents a divalent group to be formed. As used herein, the term lower alkyl or lower alkoxyl may include up to four And preferably an aliphatic group having up to 2 carbon atoms. A method for preparing these compounds is described in U.S. Pat. No. 2,921,069. ing. U.S. Pat. No. 2,837,518 Compounds of the general formula Here, Y is sulfur atom, SO group and SO_TwoSelected from the group consisting of X is a group consisting of a hydrogen atom, a methyl group, a methoxy group, an ethyl group and an ethoxy group Z is a monomethylamino group, a monoethylamino group, a dimethylamino group. , Diethylamino, pyrrolidino and piperidino groups Selected. A method for preparing these compounds is described in U.S. Pat. No. 2,837,518. ing. U.S. Pat. No. 2,860,138 Includes compounds of the following general structural formula: Here, X is a halogen atom having an atomic number larger than 9 but smaller than 53. R is a member of the group consisting of hydrogen and lower alkyl groups (total number of carbon atoms is 6 or less) Where n is a natural number smaller than 3. Methods for making these compounds are described in U.S. Pat. No. 2,860,138. ing. U.S. Patent No. 2,902,484 Compounds of the general formula Where A is a divalent saturated, straight or branched chain containing 2 to 6 carbon atoms Is an aliphatic hydrocarbon group of₁Represents a hydrogen atom, a lower alkyl group, an aryl group or Is an arylalkyl group, and Y and Y₁Is hydrogen atom, halogen atom, lower alkyl Represents an alkoxy group, an alkoxy group, an aryl group, or an aryloxy group, and these are preferred. Or (in the case of Y) in first or third place. This phenothiazine ring has the form of a methyl group It may have a substituent. The term "lower alkyl" is preferably up to 6 Is understood to mean an alkyl group containing up to 4 carbon atoms. Methods for making these compounds are described in U.S. Pat. No. 2,902,484. ing. U.S. Pat. No. 3,194,733 Compounds of the general formula Where r is 1 or 2, X is hydrogen, halogen (preferably chloro), trifluoro Methyl, lower alkyl, lower alkoxy, lower alkanoyl, lower alkyl mel Capto, trifluoromethylmercapto or lower alkulfonyl (preferably Is methylsulfonyl), Y is higher alkyl, higher alkenyl, higher alkyl Phenyl, aryl, ω-carboalkoxy (higher alkyl) or diphenyl Droxymethyl). As used herein, “higher alkyl” and “higher alkenyl” The terms "" and "higher alkynyl" refer to straight chains having more than 5 carbon atoms. Includes both branched chain groups. As used herein, the term “ω-carboalkoxy (higher alkyl)” is six Including substituents derived from hydrocarbon carboxylic acids having more carbon atoms, It can be expressed by the following equation. However, n is a positive integer greater than 6, preferably a positive integer from 7 to 12. No. As used herein, the term "aryl" refers to a monocyclic or bicyclic aryl. Include substituents derived from carboxylic acids, whether substituted or unsubstituted Well, it can be further expressed by the following equation. However, each R is hydrogen, lower alkyl, lower alkoxy or halogen ( For example, chloro or bromo). R is hydrogen, lower alkyl or lower alkoxy Preferably, hydrogen or lower alkyl is most preferred. Available arylka Examples of rubonic acids include benzoic acid, o-toluic acid, 2,6-dimethylbenzoic acid 2,6-dimethylanisic acid, o-bromobenzoic acid, o-chlorobenzoic acid, 2, There are 6-dichlorobenzoic acid, naphthoic acid, dimethylnaphthoic acid and other acids. Preferred compounds are those wherein X is chloro or trifluoromethyl, Y is a higher alkyl group, higher alkenyl group or higher alkyl group having 6 to 14 carbon atoms. A quinyl group, an aryl substituted with a lower alkyl or a lower alkoxy, or It is ω-carboalkoxy (higher alkyl) having 13 or less carbon atoms . Particularly preferred is when X is trifluoromethyl and Y is 9-14 carbon atoms. A compound that is a secondary alkyl group. Methods for making these compounds are described in U.S. Pat. No. 3,194,733. ing. U.S. Pat. No. 3,084,161 Compounds of the general formula Where X is S, SO or SO_TwoAnd R₁And R_TwoIs one to four carbon sources each N is selected from the group consisting of alkyl groups containing Is an integer. Methods for making these compounds are described in U.S. Pat. No. 3,084,161. ing. U.S. Pat. No. 2,519,886 Includes compounds of the following general structural formula: Where R₁And R_TwoRepresents a hydrogen atom and an alkyl group (for example, methyl, ethyl, R) in the group consisting of_ThreeAnd R_FourIs an alkyl group (eg, methyl, Represents ethyl, propyl, butyl), and n represents an integer greater than 1 (n represents For example, 2, 3, 4 or 5). Benzene nucleus It may be substituted with a alkyl group or an alkoxy group. Is a continuous CR₁R_TwoStraight-chain aliphatic chain in which the groups are the same, consecutive CR₁ R_TwoA branched aliphatic chain wherein the groups are the same, and a continuous CR₁R_TwoDifferent groups It is to be understood that it relates to an optionally branched aliphatic chain. For example, CR₁ R_TwoThe designation includes the following branches: Methods for making these compounds are described in U.S. Pat. No. 2,519,886. ing. U.S. Pat. No. 2,645,640 Compounds of the general formula Here, R is a hydrogen atom, a chlorine atom, a bromine atom or a methyl group at the 6th or 8th position. Or a methoxy group, X is a chlorine atom or a bromine atom at the 1- or 3-position, and A is A divalent linear or branched aliphatic chain containing 2-5 carbon atoms,₁ And R_TwoIs a methyl or ethyl group, or together with an adjacent nitrogen atom To form a mononuclear heterocycle. A represents an alkylene group containing 2 to 5 carbon atoms;₁And R_TwoAre each A tyl or ethyl group or together form a pyrrolidine nucleus, a piperidine nucleus or Preferably represents the atoms necessary to complete the morpholine nucleus. Methods for making these compounds are described in U.S. Pat. No. 2,645,640. ing. U.S. Pat. No. 2,985,654 Compounds of the general formula Here, Y is a divalent hydrocarbon group having 2 to 5 carbon atoms, and R is a lower alkyl group. R 'is hydrogen or lower alkyl, A is a saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon And hydroxyalkyl groups, including ethers and esters of hydroxy groups is there. Typical examples of the group represented by R are methyl, ethyl and propyl. Representative of A Examples are methyl, ethyl, allyl, propragyl, butenyl, 2-hydroxyethyl 3-hydroxypropyl, 2- (2-hydroxyethoxy) -ethyl, 2-a Groups such as sethoxyethyl, 2-carbamoylethyl and the like. Group Y Len, propylene, isopropylene, butylene and the like. A method for making these compounds is described in U.S. Pat. No. 2,985,654. ing. Representative thioxanthene compounds useful in practicing the method of the present invention are listed below. You. U.S. Pat. No. 3,310,553 Compounds of the general formula And its acid addition salts. Where R is hydrogen or R₁When you are with Forming a single bond, R₁Is selected from the group consisting of hydrogen and lower alkyl, or Or when R and R form a single bond,_TwoIs composed of hydrogen and lower alkyl Selected from the group_ThreeAnd R_FourIs a member of the group consisting of hydrogen and lower alkyl Selected from among_ThreeAnd R_FourWhen the is combined with the nitrogen atom to which it is attached Group consisting of lysino, piperidino, morpholino and 4-lower alkylpiperazino Forms a cyclic group selected from the group consisting of Perazinyl, 4-hydroxyalkylpiperazinyl, 4-acyloxyalkyl Piperazinyl, 4-carbamylalkylpiperazinyl, 4-monoalkylcarba Millalkylpiperazinyl, 4-dialkylcarbamylalkylpiperazinyl, 4-alkoxyalkylpiperazinyl, 4-aryloxyalkylpiperazini 4-alkoxyalkylpiperazinyl, 4-arylio Xyalkylpiperazinyl, 4-hydroxyalkyloxyalkylpiperazini 4-Acylalkylpiperazinyl, 4-aroylalkylpiperazinyl, 4 -Carboalkoxypiperazinyl, 4-carbamylpiperazinyl, 4-monoal Quilcarbamylpiperazinyl, 4-dialkylcarbamylpiperazinyl, 4-a Silpiperazinyl, 4-aroylpiperazinyl, 4-alkylsulfonylpipera Selected from the group consisting of dinyl and 4-dialkylsulfamylpiperazinyl Is done. Here, the alkyl and acyl groups contain up to about 4 carbon atoms. Methods for making these compounds are described in U.S. Pat. No. 3,310,553. ing. U.S. Pat. No. 2,951,082 Compounds of the general formula Where X is selected from the group consisting of hydrogen, chlorine, bromine, fluorine and iodine. Halogen, straight or branched chain alkyl having 1 to about 4 carbon atoms Group, Or a straight-chain or branched-chain alkoxy group having 1 to 4 carbon atoms. And Is a tertiary amino group, preferably a di-lower alkylamino group, a 1-piperidyl group 1, a pyrrolidyl group or a 4-morpholinyl group. Bonds to trimethylene side chain One or more of the hydrogens may be substituted with lower alkyl. However, al The sum of all carbon atoms of the kill substituent must not exceed four. Trimethylene When one or more of the hydrogens is replaced by an alkyl group, one of the alkyl substituents Is R¹To form a heterocycle containing a nitrogen atom. Methods for making these compounds are described in U.S. Pat. No. 2,951,082. ing. The present invention relates to a salt formed from a base as defined above and a non-toxic organic or inorganic acid. Is also included. Such salts are readily prepared by methods known to those skilled in the art. salt The group is dissolved in a water-miscible solvent (such as acetone or ethanol) in a calculated amount of organic acid or Or with an inorganic acid, by concentration and cooling, or directly separating the desired salt Excess acid in water-immiscible solvents (such as tyl ether and chloroform) To isolate the salt. Examples of such organic salts are Maleic acid, enesalicyclic acid, methylsulfonic acid, eta Sulfonic acid, acetic acid, propionic acid, altaric acid (tartaric acid), salicylic acid, Acid, gluconic acid, lactic acid, malic acid, mandelic acid, cinnamic acid, citraconic acid, Spartic acid, stearic acid, palmitic acid, itaconic acid, glycolic acid, p- Aminobenzoic acid, glutamic acid, benzenesulfonic acid, theophylline acetic acid, 8- Haloteophilins, such as 8-chlorotheophylline or 8-bromotheofe It is a salt with Irin. Examples of inorganic salts are hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, sulfamic acid , Phosphoric or nitric acid salts. Of course, these salts are well known in the industry It can also be produced by a conventional method of metathesis of an appropriate salt. Mirror image of the above compound It is understood by those skilled in the art that the use of the isomers, homologs and isomers is also encompassed by the present invention. Is clear. These compounds can be formulated and formulated into pharmaceutical dosage forms by well known methods. Can be The compounds described above are commonly used pharmaceutically acceptable non-toxic carriers, adjuvants and excipients. Oral, topical, parenteral, inhalation or spray It can be administered via the rectum or rectally. The term parenteral as used herein refers to subcutaneous injection Includes injection, intravenous, intramuscular, intrasternal injection or infusion techniques. In addition, There is provided a pharmaceutical composition comprising one of the products and a pharmaceutically acceptable carrier. One or more Of one or more non-toxic pharmaceutically An acceptable carrier and / or diluent and / or adjuvant and optionally If present, it can be present in combination with other active ingredients. Contains these compounds The pharmaceutical composition to be administered can be in a form suitable for oral use, such as tablets, troches, Lozenges), aqueous or oily suspensions, dispersible powders or granules, emulsions, Capsules or soft capsules, syrups or elixirs. The composition for oral administration may be any of the methods known in the art for the manufacture of a pharmaceutical composition. Such compositions are pharmaceutically acceptable in appearance and taste. Selected from the group consisting of sweeteners, flavoring agents, coloring agents and preservatives to provide It may contain one or more selected drugs. Tablets are suitable for the manufacture of tablets Contains active ingredients with pharmaceutically acceptable non-toxic excipients. These excipients Can include, for example, inert diluents (eg, calcium carbonate, sodium carbonate, Cactose, calcium phosphate, sodium phosphate), granulating / disintegrating agents (eg Starch, alginic acid), binders (eg starch, gelatin, acacia (ac acia)), lubricants (eg magnesium stearate, stearic acid, talc) Is fine. Tablets may be uncoated or may disintegrate in the gastrointestinal tract. Use known technology to ensure long-lasting action by delaying absorption Therefore, it may be coated. For example, monosteal Sustained-release materials such as glyceryl phosphate or glyceryl distearate can be used. Formulations for oral use may also include those in which the active ingredient is an inert solid diluent, such as calcium carbonate. Hard gelatin capsules mixed with calcium phosphate or kaolin Or if the active ingredient is a water or oil vehicle, such as peanut oil, liquid paraffin In the form of soft gelatin capsules mixed with You may. Aqueous suspensions contain the active substances in admixture with excipients suitable for the manufacture of aqueous suspensions. I do. Such excipients may be suspending agents, for example, sodium carboxymethyl cellulose. Glucose, methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, sodium alginate Thorium, polyvinylpyrrolidone, tragacanth gum or It is acacia gum. Dispersants or humectants are naturally occurring Condensation of fatty acids with fatty acids (eg lecithin) or alkylene oxides Product (eg, polyoxyethylene stearate) or ethylene oxide The condensation product of a side with a long chain aliphatic alcohol (eg, heptadecaethylene Oxycetanol) or ethylene oxide, fatty acid and hexitol Condensation products with partial esters derived from Bitol monooleate) or ethylene oxide, fatty acid and hexite Condensation products with partial esters derived from alcohol anhydrides (for example, For example, polyethylene sorbitan monooleate) may be used. Aqueous suspensions also For example, ethyl p-hydroxybenzoate or n-propyl p-hydroxybenzoate One or more preservatives, such as toluene, one or more coloring agents, one or more flavoring agents, and It may contain one or more sweeteners, for example, sucrose or saccharin. No. Oily suspensions contain the active ingredient in vegetable oil, olive oil, sesame oil or coconut oil (coco nut oil) or by suspending it in mineral oil such as liquid paraffin. Can be manufactured. Oily suspensions may be thickening agents, for example beeswax, hard paraffin or cetylua. It may contain alcohol. Add sweeteners and flavors as described above to enhance flavor It can be a good oral formulation. These compositions contain an acid such as ascorbic acid. It may be preserved by adding an antioxidant. Dispersible powders suitable for preparing aqueous suspensions by adding water or Granules are an active ingredient mixed with dispersing or wetting agents, suspending agents and one or more preservatives. including. Suitable dispersing or wetting agents and suspending agents are exemplified by those already mentioned. You. Also, there are additional additives such as, for example, sweetening, flavoring and coloring agents. May be. The pharmaceutical composition of the invention may also be in the form of an oil-in-water emulsion. You may. The oil phase is a vegetable oil such as olive oil or arachis oil Or mineral oil (eg, liquid paraffin), or these A mixture of Suitable emulsifiers include naturally occurring gums such as acacia gum and tigers. Gacant gum, naturally occurring phospholipids such as soy lecithin, and fatty acids Xitols, esters or partial esters derived from anhydrides (eg, Rubitan monooleate) and the above-mentioned partial ester and ethylene oxide. A condensation product (eg, polyoxyethylene sorbitan monooleate) obtain. The emulsion may also contain sweetening and flavoring agents. Syrups and elixirs are sweeteners such as glycerol, propylene glycol. , Sorbitol or sucrose. Such a composition is It may also contain demulcents, preservatives and flavoring and coloring agents. Doctor The pharmaceutical compositions may be in the form of a sterile injectable aqueous or oleaginous suspension. This suspension Liquids are prepared using known dispersing or wetting agents and suspending agents, which have already been mentioned above, and known in the art. Can be prepared. Sterile injectable preparations are also pharmaceutically acceptable non-toxic Sterile injectable solution or suspension in a diluent or solvent, for example, , 3-butanediol. Acceptable excipients and The solvents and solvents are water, Ringer's solution and isotonic sodium chloride solution. Furthermore, nothing Bacterial non-volatile oils have conventionally been used as solvents or suspending media. This eye Essentially, any non-irritating non-volatiles, including synthetic mono- and diglycerides Oils Can be used. In addition, fatty acids such as oleic acid can be used in injectable preparations. Can be used for preparation. The compounds can also be administered in the form of suppositories for rectal administration of the drug. These compositions allow the drug to be solid at room temperature but liquid at rectal temperature, Mixing with suitable non-irritating excipients that will eventually melt and release the drug Can be prepared by Such excipients are cocoa butter and polyethylene. Glycol. The compounds may be administered parenterally in a sterile medium. Excipients used Depending on the concentration and concentration, the drug can be either suspended or dissolved in the vehicle. advantageous Some adjuvants such as local anesthetics, preservatives and buffers are dissolved in the vehicle. Can be made. A dosage level of about 0.1 to about 2500 mg per day is useful for the above treatment. It is. Active ingredient combined with carrier material to prepare a single unit dosage form Will vary depending on the host treated and the particular mode of administration. Dosage unit forms will generally contain about 1 to about 500 mg of an active ingredient. However, the individual level for each patient depends on the activity of the particular compound used, Age, weight, general health, gender, diet, time of administration, route of administration and rate of excretion Depends on various factors including degree. Preferred compounds are as follows. The following experimental details describe the invention. This column is used to help understand the present invention. Specific examples are described, but are defined in any way by the following claims. It should not be construed as limiting the present invention.Experiment details I. In vitro model system A.Materials and methods Reagents and media Okadaic acid (OkA) is Moana Biochemical (Hono Lulu), anisomycin from Sigma, alkaline phosphatase Zeze was obtained from Boehringer Manheim.³²P-orthophosphoric acid is purchased from NEN,^Three ^Five SL-methionine was purchased from ICN Biochemicals. MSN cell routine An RPMI 1640 medium for growing, and a phosphate-free RPMI medium Methionine free RPMI medium was obtained from GIBCO BRL.antibody Antibodies T3P and tau46 were obtained from Dr. Virginia Lee of the University of Pennsylvania offered. Monoclonal antibodies 188 and 147 are highly enriched pairs Abbott Laboratories or Abbott Laboratories Provided by E11 is a polyclonal antibody against the tau human exon 11 peptide. Albert Einstein Coll. Of Medicine of Yeshiva University Courtesy of Dr. Hana Kseizak-Reding of ege. tau-1 is UAB's Lester Bind Obtained from Dr. er.Cell culture SMS-MSM-A human neuroblastoma cellular Inn (MSN) is a study of Dr. June Biedler (Sloan-Kettering, New York, NY) Cloned from SMS-MSN cells obtained from On February 2, 2013, we visited the American Type Culture Collection in Rockville, Maryland. And is listed in the catalog as ATCC # CRL11253. This place The survived human neuroblastoma cell line was tested on February 9, 1993 and survived. It was confirmed that. The neuroblastoma cells were cultured in a T75 flask in 15% bovine The cells were grown in RPMI 1640 medium supplemented with fetal serum.OkA treatment of MSN cells Dissolve OkA in dimethyl sulfoxide (DMSO) And 0.122 M NaCl, 4.9 mM KCl, 1.3 mM CaCl_Two, 1.6 mM Na_TwoHPO_FourKrebs-li containing 10 mM dextrose Krebs-Ringer-In addition to phosphate buffer (KRP) (pH 7.4) The required concentration was used. Control samples were incubated with similar solutions of DMSO vehicle. The final concentration of DMSO was kept below 0.1%. Incubation Aspirate growth medium from each flask beforehand and replace with vehicle or OkA instead. KRP containing either was placed. Incubate flask at 37 ° C for appropriate time I did it. For experiments on cell lysates, MSN cells were pelleted and 4 mM phenyl Methylsulfonylfluoride (PMSF) containing 2 mM EGTA and 25 μM leupeptin Resuspend in 250 μl of cold Tris buffered saline (TBS) for 2 seconds Crushed by sonication with intervening pulses. Okadaic acid or vehicle ( Control) was added to the appropriate samples on ice and incubation was started at 37 ° C. .Preparation of samples for SDS-PAGE Shake the flask vigorously. The MSN cells were mechanically detached with a conical tube, and the entire contents were placed on ice in a 15 ml conical tube ( conicaltube). Flask in cold Tris-buffered saline (TBS) The cells were rinsed and the entire cell suspension was centrifuged at 3000 g for 5 minutes to collect the cells. This fine The cell pellet was washed with 250 μl of TB containing 4 mM PMSF and 2 mM EGTA. Resuspended in S and boiled for 10 minutes. Microbio for heat-stable proteins The protein was assayed by the Rad method (micro BioRad procedure).Electrophoresis and blotting One of the heat-treated supernatants containing 20 μg of protein A portion of the solution was boiled together with the electrophoresis sample buffer, and the mixture was mini- 10% SDS-PAGE gel. On the load. The gel was electrophoretically transferred to a nitrocellulose membrane and described previously. Immunolabeled as described [Vincent, I .; and Davies, P.,PNSA USA, 87:48 40-4844 (1990)].Protein synthesis inhibition MSN cells were cultured in the presence or absence of 100 mM anisomycin. Preincubated with KRP in the presence for 1 hour at 37 ° C. 1μ at the end of this M OkA is introduced into a suitable flask and the sample is incubated for a further 90 minutes did. Then prepare the sample for Western blot analysis according to the usual protocol. Made.Alkaline phosphatase treatment Protein sump blotted on nitrocellulose 20 units / ml in a pH 8 buffer containing 10 mM PMSF. Incubated with cariphosphatase at 37 ° C. for 24 hours. Then block Were used for Western blot analysis. ³² P-labeled of MSN cell The confluent layer of MSN cells is phosphoric acid Incubate for 5 minutes at 37 ° C with RPMI 1640 medium without salt. And washed by. Cells were labeled according to two protocols. A)Pal S-Chase Add 2 ml of fresh phosphate-free medium to each flask, 2.5mCi³²P-orthophosphoric acid was added and incubated at 37 ° C. for 1 hour . At the end of this, cells are washed once with KRP and then in the presence of 1 μM OkA or Incubated with fresh KRP in the absence at 37 ° C. for a further 90 minutes. B)pulse 2.5 mCi / ml cells washed with phosphate-free buffer of³²30 minutes with fresh phosphate-free medium containing P-orthophosphoric acid Re-incubated. Next, 1 μM OkA was added to one flask and further added. The cells were incubated for 90 minutes. Either protocol is then heat A stable preparation was prepared as described above, and 35 μg of the protein in this thermostable supernatant was Tau by treatment with 2.5% perchloric acid (PCA) for 10 minutes on ice [Lindwall, G .; and Cole, R. D.,J. Biol . Chem., 259: 1224 1-12245 (1984)]. Centrifuge the sample and methanol precipitate the PCA soluble protein And used for SDS-PAGE with sample buffer.[ ³⁵ S] methionine labeling of MSN cells Wash with methionine-free RPMI medium After purification, the MSN cells were treated with 200 μCi / ml³⁵Contains SL-methionine Preincubated overnight at 37 ° C. with similar medium. Flask with 2 mM Rinse with cold KRP containing unlabeled methionine and in medium containing methionine Tracked for 90 minutes. Some samples use 100 μM anisomycin With or without 1 μM OkA. Thermal stability of 35 μg The preparation was subjected to PCA treatment as above and methanol precipitated.B. result Time lapse of OkA processing Human neuroblastoma cell line SMS-MSN (MSN) Expresses the tau protein as a doublet with an apparent molecular weight of 57 kDa and 60 kDa You. For these proteins, 20 μg of the thermostable protein was obtained by SDS-PAGE and When used for Western blot analysis, antibodies Alz-50, Tau-1, PHF -1, NP8 and T3P (0 min control, FIG. 1). These various episodes The first step in considering the role of protein phosphatase in toup MSN cells with the cell permeable protein phosphatase inhibitor OkA [Bialojan, C. and Takai, A.,J . Biochem., 256: 283-290 (1988)]. In these experiments, monoclonal antibody 188, which recognizes the primary sequence of tau, was negatively charged. Used as a positive control. 0.1% dimethyl sulfoxide (DMSO) No change was observed in the Kur (4 h control, see FIG. 1), but 3 μm per μOkA. Tau epitope phosphorylated on exposure to 0 min, PHF-1, NP8 and T3 P was significantly induced. OkA treatment also results in some higher molecular weight proteins. The appearance of PHF-1, NP8 and T3P epitopes was induced in white matter. PH1 Reactivity to the 68-kDa protein was observed for both and T3P (FIG. 1). Sa Furthermore, the PHF-1 positive bands were 85 kDa, 120 kDa and 180 kDa. Da, the T3P positive band is 110 kDa, And several NP8 positive bands including the main band of 160 kDa were evident. It became white. In these preparations, these epitopes were Appear separately, suggesting that they are independent epitopes. You. Unexpectedly, treatment of MSN cells with OkA resulted in a t The reactivity of au also increased at the same time (FIG. 1). In contrast to the above increase in immunoreactivity, incubation with OkA for more than 30 minutes. When reacted, the reactivity of Tau-1 with the protein disappeared (FIG. 1). Induced by OkA With the changes in the immunoreactivity of these various tau, the protein SD Motility during electrophoresis on S-PAGE was significantly reduced. This effect is excessive The apparent molecular weight of tau, a characteristic of unoxidized tau protein and PHF An upward shift of 2-3 kDa [Baudier, J. et al. and Cole, D. R.,J . Biol. Chem. 262: 17577-17583 (1987)].Dose-response curve for OkA treatment Various cellular protein phosphatas Production of specific tau epitopes using different sensitivity of Okase to OkA MSN cells were exposed to various concentrations of drug to identify enzymes that regulate . At a concentration of 50 nM OkA, Alz-50, 188, PHF-1, NP8 and And T3P immunoreactivity for tau was significantly activated (FIG. 2). Even at this concentration, a decrease in tau electrophoretic motility is evident, and the OkA concentration is further increased. Higher the protein motility was further reduced. Some immunoreactivity of Tau-1 Although a decrease was observed at 50 nM OkA, the reactivity with this antibody was completely abolished. A concentration of 1 μM was required for this (FIG. 2). As with the time-dependent case, more High concentrations of OkA are also associated with many higher molecular weight proteins and PHF-1, NP8 and T Induced immunoreactivity with 3P. 68 kDa protein from OkA of 50 nM or more It was observed by PHF-1, NP8 and T3P and was also labeled at 188 (FIG. 2). ). Another protein with an epitope reactive with PHF-1, NP8 and T3P It became clear.Effect of protein synthesis inhibition In view of the overall induction of tau immunoreactivity after OkA treatment Look, thatDe novoThe dependence on protein synthesis was investigated. In FIG. , 100 μM anisomycin (protein (Synthesis inhibitor). Consistent with its rapidity, Alz-50,18 8, Increased immunoreactivity and shift in molecular weight of PHF-1, NP8 or T3P Does not require protein synthesis. Also, the Tau-1 license generated as a result of the OkA process Loss of epidemic reactivity was also observed in the presence of anisomycin (FIG. 3).Treatment of MSN Cell Lysate with OkA: Alkaline Phosphate The effect of vatase Of cells in changes in tau immunoreactivity induced by OkA The importance of integrity was determined by sonicating MSN cells and converting the resulting cell lysate to OkA. Assessed by exposure. The cell lysate was incubated with KRP under control conditions. When incubated, PHF-1, NP8 and T3P immunoreactivity with tau Although disappeared rapidly, the protein was reactive with Alz-50, Tau-1 and 188. (FIG. 4, (-)). A simultaneous decrease in the apparent molecular weight of tau was also observed. , 50 kDa and 54 kDa. These changes are Observed in the presence of the case inhibitors PMSF, leupeptin and EGTA Was. When 1 μM OkA was introduced and incubated, PHF-1, NP Loss of immunoreactivity of 8 and T3P and reduction of apparent molecular weight of tau are blocked. (Fig. 4, (-)). This indicates that these effects are not protein degradation but Indicates that it is mediated by oxidation. In other words, the fruit of this disrupted cell In an example, OkA inhibits the non-specific effects of protein phosphatase. Is effective but activates tau immunoreactivity or increases its molecular weight Was ineffective. Ongoing protein phosphorylation is fine compared to intact cell preparations. Cell lysates can be disrupted, activating tau immunoreactivity and reducing molecular weight Explain the lack of growth. Observed changes in tau immunoreactivity due to phosphorylation As an additional means of verifying that Incubated with alkaline phosphatase. After phosphatase treatment The subsequent reaction of all proteins with PHF-1, NP8 and T3P disappears (FIG. 4, (+)). Consistent with the nature of the Tau-1 epitope, a similar The treatment enhanced the immunoreactivity of Tau-1. Meanwhile, the nitrocellulose blot Alkaline phosphatase treatment affects the immunoreactivity of Alz-50 and 188 I didn't. ³² P labeling of Tau OkA becomes tau immunoreactive as a result of increased phosphorylation MSN cells were used in two independent protocols to clearly demonstrate that According to col³²Labeled with P-orthophosphate. In the first protocol, the cells are And then incubate with OkA or KRP without OkA. (FIG. 5A). Due to the presence of OkA in the chase, There was substantial accumulation of label on tau compared to cells tracked alone. Corresponding By immunoblotting, the immunoreactivity of Alz-50 with tau indicates that this label Little is detected when lost in the trace, but the bound phosphate is OkA It was found that when held in the presence of, it greatly increased. Second In the pulse method, which is a protocol, tau phosphate is used during a normal 90 minute OkA treatment. As a means to determine the degree of³² Cells were exposed to OkA in the presence of P-orthophosphate. As shown in FIG. 5B Thus, the degree of labeling was significantly greater in the presence of OkA compared to the control, and overall All phosphate binding is also greater than in the pulse-chase sample. These de Data demonstrate a rapid rate of phosphate conversion in MSN cell tau.[ ³⁵ S] methion label of Tau In tau produced by OkA treatment Increased immunoreactivity of non-phosphorylated epitopes (Alz-50 and 188) Thus, phosphorylation confers resistance to proteolytic cleavage, thereby It was speculated that this would lead to accumulation of au protein. With this in mind, tau protein conversion Was examined for the effect of OkA. MSN cells were replaced with isotopically labeled methionine. Recombinantly pulse and then with unlabeled methionine in the presence or absence of OkA Tracked. Alz-50 immunoreactivity with 35S label and tau in the absence of OkA Sex lost rapidly (FIG. 6). In the presence of OkA, the loss of label was also Alz-5. Both zero immunoreactivity were prevented. This means that the degradation of tau is Is inhibited when in a highly phosphorylated state. This effect is By including 100 μM anisomycin in the OkA chase. Survives when de novo protein synthesis is blocked. C.Consideration The above experiments show that five types of PHF are characteristic of Alzheimer's disease. Significant induction of prominent antigenic determinants is shown. In addition, it is observed in the PHF protein As such, the apparent molecular weight of tau is greatly increased. These changes are due to OkA In serine-threonine protein phosphatase activity induced by Resulting from the operation. However, the immune response induced by OkA Changes in response do not always match changes in tau SDS-gel motility (See FIG. 2), with PHF-1, NP8, T3P and Tau-1 epitopes. Increased phosphorylation in the tau is not responsible for the increase in the apparent molecular weight of tau. PHF Emergence of a 68 kDa protein with immunoreactivity to -1, NP8 and T3P ( Figures 1, 2, 3) correspond to the stability of another usually transient isoform of tau. You. This protein is sometimes detected in Alz-50 and 188 (see FIGS. 5 and 6). . The addition recognized by PHF-1, NP8 and T3P after these OkA treatments Has not yet been identified (see FIGS. 1, 2, and 3). These are Due to their stability to boiling, they may show related cytoskeletal proteins, each of which Reactive with only one of the antibodies (positive) It does not recognize tau protein because it is not recognized by the body Alz-50 or 188. Absent. For endogenous phosphatases in cell lysate preparations and for foreign blots The resistance of Alz-50 immunoreactivity to sex phosphatase treatment (FIG. 4) This reinforces the conclusion that kA increases Alz-50 immunoreactivity. A In addition to increasing lz-50 immunoreactivity, 188 immunoreactivity and primary sequencing determinants Co-activation of at least three other antibodies that react with It predicts an overall increase in the amount of tau protein. In the presence of a protein synthesis inhibitor The speed and sustainability of these effects inDe novoProtein It excludes the possibility of being the result of quality synthesis. This general increase in tau immunoreactivity. Another explanation for large is the reduction of degradation. OkA does not exist In contrast to the rapid loss of label observed in some cases, the already synthesized tau protein At³⁵OkA's ability to prevent loss of S-methionine labeling supports this idea doing. This is further attributed to the presence of OkA and the protein synthesis inhibitor anisomycin. It is also confirmed by the result of accumulation of pre-labeled tau in the presence. Serine-threonine phosphatase weight in the generation of AD-specific epitopes The need is for vanadate, a permeable tyrosine phosphatase inhibitor, and The finding that genstein is ineffective is highlighted. this Alzheimer's disease neurogenesis Modification of fibrous entanglements and neuritic plaques by anti-phosphotyrosine antibodies has not yet been identified. May be associated with an undefined epitope or may be non-specific. Protein phosphatase has various sensitivities to OkA. The concentration of inhibitor required for the effect of the enzyme can be an indicator of the specific enzyme involved. You. IC-50 for phosphatase 1 is 0.1-0.5 mM, phosphatase Ze 2A is 1 nM and phosphatase 2B (ie, Ca²⁺/ CAM dependency The IC-50 for phosphatase (Calcineurin) is 10 mM, Phatase 2C (ie, Mg²⁺-Dependent phosphatase) is not affected. Optimal induction in PHF-1, NP8 and T3P immunoreactivity is due to phosphatase Occurs at 50 nM, 50 times the concentration of IC-50 for Ze2A, 2A plays an important role in the turnover of these epitopes Seems to play. On the other hand, this concentration is Any of these phosphatases will be 2 to 10 times smaller than C-50. It does not appear to be involved in the regulation of these epitopes. At the Tau-1 site Phosphorylation predominates above 1 μM, but Tau-1 immunoreactivity with 50 nM OkA Some inhibition in sex is observed. Therefore, phosphatase 1 is Ta more likely to be involved in phosphatase conversion at the u-1 site. There is a phosphater The role for Ze2A cannot be ruled out. Decreased electrophoretic motility of tau was first evident at 50 nM OkA, Become more pronounced as the concentration of tau has one electrophoretic behavior It depends on phosphorylation at many sites, and therefore some protein hosts Phatase may be involved. Recent research using human temporal lobe slices Is important for calcineurin in electrophoretic mobility of tau [Harris, et al.,Ann . Neurol., 33: 77-87 (1992)]. On the other hand, previousIn vitroStudies have shown that Tau's SDS-PAGE Involvement of phosphatase 2A has been shown [Yamamoto, et al.,J.Neurochem . , 55: 683-690 (1990)]. PHF-1, T3P and NP8 epithelial cells in MSN cells The suggested role of phosphatase 2A in tope production is in tau Determining the phosphorylation status of normal and paired helical filament-like epitopes This indicates that this phosphatase is extremely important, and the metabolism of tau Has become an important enzyme. Against the cellular protease observed in hyperphosphorylated tau protein Insensitivity and consequent accumulation indicate early events leading to the formation of insoluble filaments. And that's not all. Alz-5 in neurons without apparent morphological abnormalities Early detection of 0 and Tau-1 immunoreactivity corresponds to a similar condition in AD brain Maybe unknown.In vitroStudies show that tau has low elasticity due to phosphorylation [Hagestedt, et al.,J . Cell Biol., 109: 1643-1651 (1989)], and its solubility [Hanger, et al.,Biochem . J., 275: 99-104 (1991)] You. In addition, the purified phosphorylated form of tau can be converted to the unphosphorylated form of tau. Less sensitive to certain proteases [Litersky, J. et al. M. and Johnson , G. V.,J. Biol. Chem., 267: 1563-1568 (1992)]. Overall, these data tau becomes resistant to proteases by excessive phosphorylation and / or Or support the theory of becoming insoluble. Over the last few years, paired helical filament-like epithelia in human fetal brain tissue Loop was found. Also, tau obtained from normal human fetal brain was NP8 and T3P immune. It was also found to be positive for epidemiological reactivity. Therefore, the epitoe above Can be considered "normal". However, it is clear in the normal adult brain The absence of these factors suggests that the enzymatic processes required for their production are in developmentally regulated states . Therefore, the re-emergence of these phosphorylation sites in Alzheimer's disease is Rather than the result of abnormal enzymes in the brain of Ruzheimer's disease, this enzyme system is out of step It is thought to occur as a result of delegulation. Each phosphoric acid in tau Intracellular localization and specific protein kinases and phosphatases that regulate And changes in activation are associated with tau in Alzheimer's disease Can serve as a trigger for unusual post-translational processing. Alzheimer's disease Activity of protein kinase C and casein kinase II in Although there is evidence of localization, none of these kinases can be paired in tau It has not been shown to be involved in the production of cancer filament-like epitopes. II.Normal brain, Alzheimer's disease brain and treated or untreated MSN cells and antibodies Immunoreactivity with Monoclonal antibodies Alz-50, PHF-1, TG3, TG4, MC2, M Immunoreactivity of C6 and MC15 with normal brain tissue and Alzheimer's disease brain tissue , And MSN cells before treatment with okadaic acid (MSN-) and MSN after treatment Immunoreactivity with cells (MSN +) was examined. The results are shown in FIG. Brain tissue day The central temporal cortex obtained from five normal cases and five Alzheimer's disease cases These are the average values obtained in the study. The value of MSN cells was measured in triplicate MSN cell cultures. A series of experiments in which 1 μM okadaic acid was added to the material 90 minutes before cell harvest. Each service Samples (tissue or cell homogenate) are assayed at 8 dilutions, 2 in duplicate did. The unit on the Y axis is an arbitrary unit indicating immunoreactivity. In all cases, That kadaic acid increases immunoreactivity in MSN cells, and that this increase is positive. Apparently similar in degree of difference between normal brain tissue and Alzheimer brain tissue It is. III.Trifluorperazine and Cl for PHF epitopes in MSN cells Effects of lolpromazine Trifluoperazine against PHF epitopes associated with Alzheimer's disease To confirm the effect of chlorpromazine, MSN expressing PHF epitope -A cells were treated with 100 μM trifluoperazine (TFP), 100 μM chlor 37 ° C. with promazine (CPZ) or 0.2% DMSO vehicle (control) For 2 hours. The cells are isolated by centrifugation and boiled for 10 minutes to obtain The protein obtained from the heat-stable supernatant was used as SDS-P at 25 μg per lane. Run on AGE gel. After electrophoretically transferring the gel to a nitrocellulose membrane, The cells were immunostained with F-1. As shown in FIG. 8, both TFP and CPZ Significantly reduced the production of paired PHF epitopes by neuroblastoma cells. to this In contrast, the control was a PHF epithelium with neuroblastoma cells without the addition of TFP or CPZ. It indicated that the production of toup would occur. Effective concentration is the presence of these drugs in the brain after long-term treatment of psychiatric patients Seems to be a range [Svendsen, C .; N. and Bird, E. D.,Psychopharmacology , 90: 316-321 (1986)]. As these results suggest, phenothiazines Or patients treated for long periods with structurally related compounds have PHF accumulation? Protected from Thus, the probability of progression of Alzheimer's disease will be lower. IV.Study of chronic schizophrenia treated with chlorpromazine Long-term treatment of forebrain and cortical brain tissue with chlorpromazine Obtained by autopsy from a patient with chronic schizophrenia and used the ALZ-EIA method described in the literature [Ghanbari, H .; A., et al.,JAMA263: 2907 (1990)]. The result is FIG. A [Forebrain (Broadman area 10)] and Fig. 9B [Temporal (Broadman area 38)] Show. Almost the same number of normal controls (age-matched) and Alzheimer's disease patients The brain tissue (post-mortem) obtained from Controls (for normal and AD, respectively). This day As shown by the figures, sun obtained from a patient (RX) treated with chlorpromazine. The pull showed a low PHF epitope level similar to the normal control, but the PH of the AD group The F epitope level was clearly much higher. In addition, these results are Histopathological diagnosis was consistent. Statistically, AD progresses in about 20-30% of individuals in the RX age group, thus The PHF in the brain area was much higher. This evidence is due to chlorpromazine in patients Has been shown to prevent PHF production and AD. Similarly, Like lolpromazineIn vitro]Active compounds are effective is there. All publications and patents referred to herein are incorporated by reference in their entirety. Document. Although the present invention has been described in connection with specific embodiments, these embodiments are not intended to limit the present invention. It should be understood that these are merely exemplary of the species aspects. In other words, there are many Many modifications and alterations can be made without departing from the spirit and scope of the invention. It should be understood that other deformations can be derived.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ヴィンセント、イネスジェイ. アメリカ合衆国 10461 ニューヨーク州ブロンクスナンバー27スィーイーストチェスターロード 1945────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, M C, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF, CG , CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (KE, MW, SD, SZ, UG), AM, AT, AU, BB, BG, BR, BY, CA, C H, CN, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB , GE, HU, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LK, LR, LT, LU, LV, MD, MG, M K, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO , RU, SD, SE, SG, SI, SK, TJ, TM, TT, UA, UG, US, UZ, VN (72) Inventors Vincent, Ines Jay. United States 10461 New York Bronx Number 27 See Ys Tochester Road 1945

Claims

[Claims] 1. A member of the group consisting of phenothiazines, thioxanthenes and pharmaceutically acceptable salts thereof in an amount effective to prevent or reduce the accumulation of abnormally phosphorylated paired helical filament epitopes associated with Alzheimer's disease. A method of administering a selected compound to a subject in need of such treatment or prevention of Alzheimer's disease. 2. 2. The method of claim 1, wherein the compound is administered in a dose ranging from about 1-2500 mg per day. 3. The method of claim 1, wherein the compound is trifluoperazine or chlorpromazine. 4. The compound has the formula: Wherein Z is -S- or -SO-, Y is trifluoromethyl, R is hydrogen, halogen, trifluoromethyl, lower alkyl or lower alkoxyl, and A is 2-6 carbon atoms. A divalent straight or branched aliphatic chain containing atoms, wherein R ₁ and R ₂ are hydrogen or lower alkyl, or together with the nitrogen to which they are attached, pyrrolidinyl, piperazinyl, Lower alkylpiperazinyl, piperidyl, thiomorpholinyl, morpholinyl or hexahydroazepinyl, which is a divalent group forming a 5- to 7-membered heterocycle], and pharmaceutically acceptable salts thereof. 2. The method according to claim 1, which is a salt. 5. The compound has the formula: Wherein Y is selected from the group consisting of a sulfur atom, an SO group and an SO ₂ group, X is selected from the group consisting of a hydrogen atom, a methyl group, a methoxy group, an ethyl group and an ethoxy group, and Z is a monomethyl group. An amino group, a monoethylamino group, a dimethylamino group, a diethylamino group, a pyrrolidino group, and a piperidino group], and a pharmaceutically acceptable salt thereof. the method of. 6. The compound has the formula: Wherein X is a halogen atom having an atomic number greater than 9 but less than 53; R is in the group consisting of hydrogen and a lower alkyl group (total number of carbon atoms is less than 6); Is a natural number less than 3], and pharmaceutically acceptable salts thereof. 7. The compound has the formula: Wherein _A is a divalent saturated aliphatic hydrocarbon group having a straight or branched chain containing 2 to 6 carbon atoms, and R ₁ is a hydrogen atom, a lower alkyl group, an aryl group. Or an arylalkyl group, wherein Y and Y ₁ are a hydrogen atom, a halogen atom, a lower alkyl group, an alkoxy group, an aryl group, an aryloxy group, preferably (in the case of Y) at the 1-position or the 3-position, The phenothiazine ring may have a substituent in the form of a methyl group], and a pharmaceutically acceptable salt thereof. 8. The compound has the formula: Wherein r is 1 or 2, X is hydrogen, halogen, trifluoromethyl, lower alkyl, lower alkoxy, lower alkanoyl, lower alkyl mercapto, trifluoromethyl mercapto or lower alkyl sulfonyl, and Y is higher alkyl Alkenyl, higher alkynyl, aryl, ω-carboalkoxy (higher alkyl) or diphenyl (hydroxymethyl), provided that “higher alkyl”, “higher alkenyl” and “higher alkynyl” have more than 5 carbon atoms. “Ω-carboalkoxy (higher alkyl)” has substituents derived from hydrocarbon carboxylic acids having more than 6 carbon atoms and has the formula Wherein n is a positive integer from 6 to 12, wherein “aryl” may be substituted or unsubstituted, and Wherein each R is hydrogen, lower alkyl, lower alkoxy or halogen; and a pharmaceutically acceptable salt thereof. 9. The compound has the formula: Wherein X is S, SO or SO ₂ , R ₁ and R ₂ are each selected from the group consisting of alkyl groups containing 1-4 carbon atoms, and n is And an integer from 1 to 2], or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 10. The compound has the formula: Wherein R ₁ and R ₂ are in the group consisting of a hydrogen atom and an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, and R ₃ and R ₄ are an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms. And n is an integer greater than 1, and the aromatic nucleus may be substituted with an alkyl or alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms], and pharmaceutically acceptable 2. The method according to claim 1, which is a salt. 11. The compound has the formula: Wherein R is a hydrogen atom or a chlorine or bromine atom at the 6 or 8 position, a methyl group or a methoxy group, X is a chlorine or bromine atom at the 1 or 3 position, and A is 2 to 5 A divalent linear or branched aliphatic chain containing two carbon atoms, wherein R ₁ and R ₂ are each a methyl group or an ethyl group, or together with an adjacent nitrogen atom are mononuclear A divalent group forming a heterocyclic ring], and a pharmaceutically acceptable salt thereof. 12. The compound has the formula: Wherein Y is a divalent hydrocarbon group having 2 to 5 carbon atoms, R is a lower alkyl group, R ′ is hydrogen or lower alkyl, and A is a saturated or unsaturated aliphatic hydrocarbon. A hydrogen group and a hydroxyalkyl group including ethers and esters of hydroxy groups], and pharmaceutically acceptable salts thereof. 13. The compound has the formula: Wherein R is hydrogen or forms a single bond when taken together with R _1, and R ₁ is selected from the group consisting of hydrogen and lower alkyl or is taken together with R when form a single bond, R ₂ is selected from the group consisting of hydrogen and lower alkyl, R ₃ and R ₄ is selected from the group consisting of a separate case hydrogen and lower alkyl, and R ₃ and R ₄ when taken together with the nitrogen atom to which they are attached form a cyclic group selected from the group consisting of pyrrolidino, piperidino, morpholino and 4-lower alkylpiperazino; 4-alkylpiperazinyl, 4-hydroxyalkylpiperazinyl, 4-acyloxyalkylpiperazinyl, 4-carbamylalkylpiperazinyl, 4-monoalkylcarbamylal Lupiperazinyl, 4-dialkylcarbamylalkylpiperazinyl, 4-alkoxyalkylpiperazinyl, 4-aryloxyalkylpiperazinyl, 4-alkoxyalkylpiperazinyl, 4-aryloxyalkylpiperazinyl, 4-hydroxyalkyl Oxyalkylpiperazinyl, 4-acylalkylpiperazinyl, 4-aroylalkylpiperazinyl, 4-carboalkoxypiperazinyl, 4-carbamylpiperazinyl, 4-monoalkylcarbamylpiperazinyl, 4 Selected from the group consisting of -dialkylcarbamylpiperazinyl, 4-acylpiperazinyl, 4-aroylpiperazinyl, 4-alkylsulfonylpiperazinyl and 4-dialkylsulfamylpiperazinyl. Wherein the alkyl and acyl groups contain up to about 4 carbon atoms], and pharmaceutically acceptable salts thereof. 14． The compound has the formula: Wherein X is a halogen selected from the group consisting of hydrogen, chlorine, bromine, fluorine and iodine, a linear or branched alkyl group having 1 to about 4 carbon atoms, or 1 to A straight or branched alkoxy group having 4 carbon atoms, Is a tertiary amino group, R and R ¹ are lower alkyl groups having ¹ to 4 carbon atoms, and R and R ¹ may form a heterocycle together with N] 2. The method of claim 1 wherein the compound has a pharmaceutically acceptable salt. 15. The compound is: N, N-dimethyl-10H-phenothiazine-10-propanamine, 10- [3- [4-methyl-1-piperazinyl] -propyl] -2- (trifluoromethyl) -10H-phenothiazine N, N-dimethyl-2- (trifluoromethyl) -10H-phenothiazine-10-propanamine, 2-chloro-N, N-dimethyl-10H-phenothiazine-10-propanamine, 2-methoxy-N, N , Β-trimethyl-10H-phenothiazine-10-propanamine, 1- [10- [3- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] propyl] -10H-phenothiazin-2-yl] ethanone, 4 -[3- [2- (trifluoromethyl) -10H-phenothiazin-10-yl] propyl] -1-pi Razine ethanol, 4- [3- (2-chloro-10H-phenothiazin-10-yl] propyl] -1-piperazineethanol 2-chloro-10 [3-4-methyl-1-piperazinyl) propyl] -10H-phenothiazine 10- [2- (1-Methyl-2-piperidinyl) ethyl] -2- (methylsulfinyl) -10H-phenothiazine, 10- [2- (1-methyl-2-piperidinyl) ethyl] -2- (methylthio ) -10H-phenothiazine, 3- (2-chloro-9H-thioxanthen-9-ylidene) -N, N-dimethyl-1-propanamine, N, N-dimethyl-9- [3- (4-methyl- 1-piperazinyl) propylidene] thioxanthen-2-sulfonamide, and those selected from the group consisting of: 2. The method according to claim 1, which is a pharmaceutically acceptable salt.