JPH11503715A

JPH11503715A - Method for inhibiting cancer metastasis by oral administration of soluble modified citrus pectin

Info

Publication number: JPH11503715A
Application number: JP8504302A
Authority: JP
Inventors: アヴラハムラズ; ケニスジェイピエンタ
Original assignee: Wayne State University; Michigan Cancer Foundation
Current assignee: Wayne State University; Michigan Cancer Foundation
Priority date: 1994-07-07
Filing date: 1995-06-14
Publication date: 1999-03-30
Anticipated expiration: 2014-06-14
Also published as: JP2904311B2

Abstract

(57)【要約】ホ乳動物において癌を処置する方法。癌に冒された患者が、経口投与により一次腫瘍の転移を阻害するｐＨ改質シトラスペクチンを受け取る。 (57) [Summary] A method of treating cancer in a mammal. Affected patients receive a pH-modified citrus pectin that, by oral administration, inhibits metastasis of primary tumors.

Description

【発明の詳細な説明】可溶性改質シトラスペクチンの経口投与による癌転移の抑制方法発明の分野本発明は一般的に、前立腺癌を処置する方法に関する。発明の背景人口年齢に従って、多数の形態の癌の発症率が増大すると考えられる。例えば、前立腺癌は、米国の男性において最も普通に診断される癌であり、男性の癌死の２番目に位置する原因である。このことは、1994年に200,000 件の前立腺癌と診断された新規な事例があると予測され、前立腺癌により38,000人が死亡すると予測され、この数が、人口年齢に従って増大し続けると予想されることからも理解されよう。前立腺癌と診断された患者の約50％は、前立腺を有するか又は失う病気を有する。前立腺癌は骨格系に転移し、患者は、重い骨性転移性の病気で死亡するのが典型的である。未だ、効果的な治癒療法はなく、転移性の病気の患者に対する軽減療法が僅かに存在するだけである。 E.C．Kohn，Anticancer Re.，13，2553(1993)及びL.A．Kiotta，P.S．Steeg， W.G．Stettler-Stevenson，Cell 64，327(1991)に記載されているように、腫瘍細胞の転移過程では、細胞が一次腫瘍から分れ、基底膜に侵入し、腫瘍細胞の塞栓から血流を横断し、標的器官の血管内皮細胞と相互作用し、そして、増殖して、二次腫瘍コロニーを形成することが必要である。 A．Raz，R．Lotan，Cancer Metastasis Rev．6，433(1987)及びH.J．Gabius， Biochim Biophys Acta．1071，１(1991)に記載されているように、転移のカスケードの多くの段階には、ガラクトシド結合レクチン（ガレクチン(galectin)）を含む炭水化物結合蛋白質のような細胞表面成分によって介在される細胞相互作用が含まれると、一般的に受け入れられている。L．Meromsky，R．Lotan，A．Raz ，Cancer Res．46，5270(1991)に記載されているように、インビトロにおいてＢ１６メラノーマ及びｕｖ−２２３７線維肉腫細胞を、同系移植(syngeneic)マウスの尾静脈に静注する前に、抗ガレクチンモノクローナル抗体で処理すると、腫瘍の肺コロニーの拡大が著しく阻害される。A．Raz，D．Zhu，V．Hogan，J．Sha h，T．Raz，R．Karkash，G．Pazerini，P．Carmi，Int．J．Cancer 46，871 （1990）に記載されているように、低転移性で、低ガレクチン−３発現性のｕｖ −２２３７−ｃ１１５線維肉腫細胞を、ガレクチン−３cDNAでトランスフェクトすると、トランスフェクトされた細胞の転移性表現型が増大する。更に、L．Chi ariotti，M.T．Berlinjieri，P．DeRosa，C．Battaglia，N．Berger，C.B．Brun i，A．Fusco，Omeogene 7，2507(1992)、L．Irimura，Y．Matsushite，R.C．Sut ton，D．Carralero，D.W．Ohanesian，K.R．Cleary，D.M．Ota，Int．J．Cancer 51，387(1991)、R．Lotan，H．Ito，W．Yasui，H．Yokozak，D．Lotan，E．Tah ara，Int．J．Cancer 56，474(1994)、及びM.M．Lotz，C.W．Andrews，C.A．Kor zelius，E.C．Lee，G.D．Steele，A．Clarke，A.M．Mercurio，PNAS，USA 90，3 466(1993)に記載されているように、ヒト乳頭様甲状腺癌におけるガレクチン− ３の発現レベルと、ヒト結腸直腸癌及び胃癌の腫瘍段階との間の関係が確立されている。 J．Beauthら，J．Cancer Res．Clin．Oncol．113，51(1987)に記載されているように、メチル−α−Ｄガラクトシド及びラクト−Ｎ−テトロースのような単糖は、Ｂ１６メラノーマ細胞の転移を阻害する一方、Ｄ−ガラクトース及びアラビノガラクトースがＬ−１肉腫細胞の肝臓転移を阻害することが示されている。 D．Platt及びA．Raz，J．Natl．Cancer Inst．84:438-42（1992）にそれぞれ記載されているように、B16-F1ネズミメラノーマ細胞を、シトラスペクチン又は改質シトラスペクチンとともに、同系移植マウスに静脈注射すると、肺コロニー化の著しい増大又は減少が生じることが知られている。本明細書で記載する発明より前に、非細胞毒性剤を経口投与することによって癌転移を阻害する効果的な処置は存在しなかった。したがって、非細胞毒性剤の経口投与に基づく治療方法が要望されている。発明の概要一態様において、本発明は、改質ペクチン、好ましくは水溶性ｐＨ改質シトラスペクチン（柑橘ペクチン）を経口投与することによりホ乳動物の癌を処置して、本明細書中で説明するように転移を抑制する方法を提供するものである。別の態様において、本発明は、改質ペクチン、好ましくはｐＨ改質シトラスペクチンと、薬理学的に許容される消化性担体との混合物を含む、ホ乳動物の癌を処置するための経口投与用組成物を提供するものである。さらに他の態様において、本発明の方法及び組成物は、ヒト及び他のホ乳動物の前立腺癌を治療処置して一次腫瘍の転移を抑制するために使用される。したがって、本発明の好ましい実施態様は、ガラクトシド残基に富む非細胞毒性天然複合炭水化物、すなわち、ｐＨ−改質シトラスペクチン（ＭＣＰ）の経口摂取が、自然前立腺癌転移の有効な阻害剤として作用する新規な治療法を提供するものである。本発明にしたがって処置したところ、腫瘍を有する16匹のラットのうち７匹が、10⁶Dunningラット前立腺癌ＭＬＬ細胞を接種14日後に一次腫瘍を除去した後、剖検において病気がないことが見出された（リンパ節又は肺に肉眼で認められる転移がない）のに対して、コントロール群（対照群）のラットでは16匹中16匹に転移が認められた。残りのラットの腫瘍肺コロニーの数は、１％(ｗ／ｖ)ＭＣＰの経口摂取により、コントロール群と比較して、著しく減少したが（コントロール、９±４；１％ＭＣＰ、１±１）、一次腫瘍の成長に対する影響はなかった。インビトロでは、ＭＣＰは時間及び投与量に応じてラット内皮細胞に対するＭＬＬ細胞の接着、並びに半固形培地でのコロニー形成を阻害した。ＭＣＰの作用機構としては、腫瘍細胞表面炭水化物−結合タンパクの関与が考えられる。このように、本発明は、腫瘍細胞の転移を効果的に阻害する独特の作用機構を有する非毒性薬剤である、ＭＣＰの経口投与により、癌を処置する方法を提供するものである。さらに、本発明は、ＭＣＰと経口医薬担体を含む、ホ乳動物の癌の処置用の組成物を提供するものである。図１Ａは、肺転移を有するラットの数が、0.1％ＭＣＰ及び1.0％ＭＣＰで、コントロールと比較して顕著に減少していることを示すチャートである。図１Ｂは、1.0％ＭＣＰ処置動物の肺中の転移コロニーの数が、コントロール群と比較して顕著に少ないことを示すチャートである。図１Ｃは、コントロールラットの肺の顕微鏡写真である。図１Ｄは、1.0％ＭＣＰラットの肺の顕微鏡写真である。図２は、ＭＬＬ細胞におけるラットガレクチン−３の発現についての細胞表面染色及びウエスタンブロット（挿入図）のプロットである。図３Ａは、種々の濃度のＭＣＰの存在下又は不存在下、４℃、90分間での、ＭＬＬ細胞の接着を示すグラフである。図３Ｂは、0.03％ｗ／ｖＭＣＰの存在下又は不存在下（−−−−−）でのＲＡＥＣのコンフルエントな単層に対するＭＬＬ細胞の接着の経時変化を示すグラフである。図３Ｃは、ＭＣＰ不存在下での、ＲＡＥＣ細胞に対する蛍光ＭＬＬ細胞接着の顕微鏡写真である。図３Ｄは、0.1％ｗ／ｖＭＣＰ存在下での、ＲＡＥＣ細胞に対する蛍光ＭＬＬ細胞接着の顕微鏡写真である。図４Ａは、0.5％アガロース中のＭＬＬコロニー形成に及ぼすＭＣＰの効果を示すチャートである。図４Ｂは、ＭＣＰの不存在下で生育したＭＬＬ細胞の位相差顕微鏡写真である。図４Ｃは、0.1％（ｗ／ｖ）ＭＣＰの存在下で生育したＭＬＬ細胞の位相差顕微鏡写真である。図５は、ガレクチン−３の存在を示す、ヒト一次前立腺癌組織の顕微鏡写真である。図６は、種々の濃度のＣＰ（○）又はＭＣＰ（○）の存在下での、ラミニンに対するＢ１６Ｆ１の接着に及ぼすＣＰ及びＭＣＰの効果を示すグラフである。垂直のバーは、平均±平均のｔ分布から計算した標準偏差を示す。図７Ａは、ラミニンに播種されたＢ１６Ｆ１細胞の位相差顕微鏡写真である。細胞は、ＤＭＥＭ単独で培養したものである。図７Ｂは、ラミニンに播種し、0.5％ＣＰ及びＤＭＥＭ存在下で培養したＢ１６Ｆ１細胞の位相差顕微鏡写真である。図７Ｃは、ラミニンに播種し、0.5％ＭＣＰ及びＤＭＥＭ存在下で培養したＢ１６Ｆ１細胞の位相差顕微鏡写真である。図８は、20μg/mlのアシアロフェツイン(asialofetuin)単独（Ａ）又は0.5％ＣＰ（Ｂ）若しくは0.5％ＭＣＰ（Ｃ）を添加した場合の、アシアロフェツイン −誘導同型凝集に及ぼすＣＰ及びＭＣＰの効果を示すグラフである。垂直のバーは、平均±平均のｔ分布から計算した標準偏差を示す。図９Ａは、20μg/mlのアシアロフェツイン単独の存在下でのＢ１６−Ｆ１細胞の同型凝集の位相差顕微鏡写真である。図９Ｂは、0.5％ＣＰとアシアロフェツインの存在下でのＢ１６−Ｆ２細胞の同型凝集の位相差顕微鏡写真である。図９Ｃは、0.5％ＭＣＰとアシアロフェツインの存在下でのＢ１６−Ｆ２細胞の同型凝集の位相差顕微鏡写真である。図10は、ＭＣＰを塗布したウエルに対するガレクチン−３の結合を示すグラフである。図11は、0.5％アガロース中のＢ１６Ｆ１細胞のコロニー形成能に及ぼすＣＰ及びＭＣＰの効果を示すグラフである（ＣＰ○、ＭＣＰ○）。好ましい実施態様の詳細な説明この明細書において、“治療”処置という用語は、癌と診断された患者に、患者の延命に有効である所定量の改質シトラスペクチンを経口投与することを意味する。この明細書において、“癌”という用語は、全ての腫瘍性の病気を意味し、例えば腎臓細胞癌、カポシ肉腫、慢性白血病、乳癌、肉腫、子宮癌、直腸癌、咽喉癌、メラノーマ、結腸癌、膀胱癌、肥満細胞腫、肺癌、乳腺癌（アデノカルシノーマ）、咽頭偏平細胞癌（pharyngeal squamous cell caricnoma）、及び胃部内または胃癌のような細胞性の病気を含む。本発明において治療される癌はヒト前立腺癌が好ましく、ヒト前立腺の線癌（アデノカルシノーマ）であることが最も好ましい。この明細書における略語は次の通りである。ＣＰは、天然シトラスペクチンを意味する。ＭＣＰは、ｐＨ−改質ＣＰを意味する。ＥＨＳは、エングルブレス− ホルムスウォーム(Englebreth-Holm Swarm)を意味する。ＤＭＥＭは、ダルベコ改質イーグルス最小必要培地を意味する。ＣＭＦ−ＰＢＳは、Ca²⁺-及MG²⁺-フリーリン酸緩衝食塩水(ｐＨ7.2)を意味する。ＢＳａは、ウシ血清アルブミンを意味する。既に、文献(Modulation of the Lung Colonization of B16-F1 Melanoma Cell s by Citrus Pectin，Journal of the National Cancer Institute，Vol．84，N o． 6，March 18，1992)（この文献の全ての記述をここに引用する）において報告されたように、ガラクトース残基内に多く存在する複合ポリサッカライドであるシトラスペクチン（ＣＰ）、及びそのｐＨ改質誘導体（ＭＧＰ）の、Ｂ１６メラノーマの実験的転移における効果を分析した。ＭＣＰをＢ１６−Ｆ１細胞と共に、静脈内に注射（注入）を行うと、これらの細胞の、注入を受けた鼠の肺への転移能(ability to colonize)を明らかに阻害することが見いだされた。ＣＰのｐＨ改質は、以下さらに詳細に述べるが、非改質ＣＰにおける同様の糖組成物より小さなサイズの非分岐炭水化物鎖の発生を起こす。ＭＣＰはインビボにおいてもインビトロにおいても非毒性である。本発明で使用する改質ペクチンは、シトラスペクチンを部分的に解重合して調製されるが、ｐＨ改質により調製されることが好ましい。当業者に理解されるように、非改質ペクチンは約20,000〜400,000の範囲の分子量を有する。ペクチンは、全ての植物組織の細胞壁に存在するポリサッカライドであり、細胞間接合物質として機能する。最も豊富なペクチン源の一つは、レモンまたはオレンジの皮であり、このポリサッカライドを約30％含有している。通常、(1 2)−Ｌ−ラムノース残基が挿入された、a-(1 4)結合したＤ−ポリイガラクトロネート(D-polygalacturonate)配列の部分的メチルエステルとして存在する。Ｄ−ガラクトース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース及びＬ−フコースの中性糖が、ペクチン分子の側鎖を形成している。構造研究は、D.A．Reesらにより行われた(D.A.Rees，A.W.Wight，J．Chem．Soc．B，1971，1366)。溶液中及びゲル中の二次及び三次構造は、D.A.Rees，E.J.Welsh，Angew．Chem．Int．E d．16，214(1977)に記載されている。レビュー及び引用文献は、Towle，Christe nsenn，Industrial Gums，R.L．Whister，Ed，(Academic Press，New York，2nd ed.，1973)p429-461に記載されている。ペクチンに関する、注目すべき本は、Z .I．KerteszによるThe pectic Substance（Interscience，New York，1951）である。ペクチンは、粗い粉末または細かい粉末であり、黄色がかった白色で、実質的に無臭であり、粘液性の味である。20部の水にほぼ完全に溶解し、陰性に帯電し、非常に多く水和をした粒子を含む粘着性溶液を形成する。リトマス試験で酸性であり、アルコール或いは希釈アルコールまたは他の有機溶媒に不溶である。ペクチンは、最初にアルコール、グリセロールまたは糖シロップで湿らせておくか、又は最初に３部以上のショ糖と混合しておくと、より容易に水に溶解する。穏やかな酸性条件では安定であるが、より強い酸性または塩基性条件下では解重合を起こす。本発明で用いるｐＨ改質シトラスペクチンの調製における出発物質として用いる好ましいペクチンの１つは、ミズーリ州セントルイスのシグマケミカル社(Sig ma Chemical Co.)から得ることができる。この物質は、分子量が70-100Kdであり、ガラクトロニック基が約85重量％、メトキシ基が9.5重量％であり、かつ水分含量が約10重量％より少ないものである。粉末状で入手可能である。シトラスペクチンは、又、ＩＣＮバイオメディカル社からペクチン１０２５８７ＲＴとして入手可能である。シトラスペクチンの0.5％、より好ましくは1.0％ｗ／ｖ水溶液（ここでは、全ての溶液の濃度を、特に記載しない限り、ｗ／ｖで表す）を調製し、約48時間のＵＶ照射により殺菌する。該ペクチンを部分的に解重合するために、アルバーシェイム(Alberscheim)らの論文“A Method for Analysis of Sugars in Plant Ce ll Wall Polysaccharides by Gas Liquid Chromatography”Carbohydrate Resea rch，5:340-346，1967に記載の方法に従って、ペクチン溶液のｐＨをＮａＯＨ（３Ｎ）で３分間処理して１０.０に高め、次いでＨＣｌ（３Ｎ）で3.0に低下させることにより改質する。この論文の記載内容は本明細書の記載に含まれるものとする。約10〜24時間後、溶液のｐＨを約6.3に平衡させる。次いで溶液をエタノール（70％）で洗浄し、アセトン（100％）で乾燥する。これにより、論文“Met hods of Grading Pectin in Relation to the Molecular Weight (intrinsic vi scosity of pectin)”Food Research 19:163-165（1954）に記載のクリステンセン(Christensen)の方法に従って、ヘキサメタリン酸ナトリウム20mM（ｐＨ4.5）、ＥＤＴＡ0.2％及びＮａＣｌ（0.9％）で、ウベローデNo.1粘度計で25℃での粘度測定により測定した約10kdの平均分子量を有するペクチンフラグメントが得られる。この論文の記載内容は本明細書の記載に含まれるものとする。本明細書において用いる用語“改質ペクチン”及び“ＭＣＰ”は、解重合したペクチンを指す。より好ましくは、本発明で利用する改質ペクチンは、分子量が約１−15ｋｄであり、もっとも好ましくは約10ｋｄであり、好ましくは上記のプロトコールに従って調製され、好ましくは水溶性である。乾燥ＭＣＰフラグメントは、Ｃａ²⁺やＭｇ²⁺を含まないリン酸塩緩衝食塩水(ｐＨ7.2)(ＣＭＦ− ＰＢＳ)で再水和して、0.5％（ｗ／ｖ）の最終のストック溶液にしてもよい。上述したように、本発明において、ＭＣＰは経口投与するので、本発明は、ＭＣＰと消化性医薬担体を含む組成物を提供する。好適な消化性医薬担体として、ＭＣＰを乾燥形態でカプセル化してなるゼラチンカプセル、又はＭＣＰをヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マイクロクリスタリンセルロース、プロピレングリコール、ステアリン酸亜鉛、二酸化チタン等と混合してなるタブレットがあげられる。該組成物は、患者により消費されるときに好ましい味の組成物とするために、純水、調味剤及び消化可能な担体としてのシュークロスを用い液体として構成してもよい。正確な投与量及び投与手順は、患者の年齢、体重、治療の経緯などのような変数の関数である。癌の治療に有効なＭＣＰ成分の量（つまり、消化性担体を無視する）に基づく好ましい投与量及び投与手順は、患者の体重１ｋｇ当たり、１日当たり約10〜約1000ｍｇである。ＭＣＰは等間隔で経口投与、つまり、約10〜約 1000ｍｇ／ｋｇで24時間毎及び／又は2.5〜250ｍｇ／ｋｇで６時間毎に経口投与する。この同じ投与量及び投与手順は、ヒト前立線癌を含むホ乳動物の前立線癌の治療に用い、転移を低下又は防止するのが好ましい。この同じ投与量及び投与手順は、経口予防薬組成物として投与すると、癌になる確立が非常に高いホ乳動物患者の癌を予防するのに有効であろうと信じられる。実施例以下の実施例で、本発明のさまざまな面をさらに説明するが、これらは本発明を限定するものではない。 W．F．Dunning，Natl Cancer Inst Mono 12巻、351頁（1963年）に記載されているように、前立腺癌のDunning(R3327)ラット前立腺癌モデルを、雄のラット内に見出される自然発生の腺癌からDunningで、発達させた。J．T．Isaacs，W． D．W．Heston，R．M．Weissman，D．S．Coffey，Cancer Res 38巻、4353頁（197 8年）に記載されているように、さまざまな分化及び転移特性を有する一次腫瘍から、数種のサブライン(subline)を発達させた。J．T．Isaacs，W．B．Isaacs ，W．F．J．Feitz，J．Scheres，The Prostate 9巻、261頁（1986年）及びK．J ．Pienta，B．C．Murphy，W．B．Isaacs，J．T．Isaacs，D．S．Coffey，The Pr ostate 20巻、233頁（1992年）に記載されているように、MAT-LyLu（ＭＬＬ）サブラインは、早熟であり、分化が少ない腺癌細胞系であり、ラットの腿部に１ ×10⁶ＭＬＬセルを注射すると、一次的には腫瘍負担に圧倒されて二次的に約25 日以内に動物死をもたらす。一次ＭＬＬ腫瘍は、腫瘍細胞接種後約12日で転移し始め、この前に四肢切断により一次腫瘍を除去すると、動物は回復する。K．J． Pienta，B．C．Murphy，W．B．Isaacs，J．T．Isaacs，D．S．Coffey，The Pros tate 20巻、233頁（1992年）に記載されているように、切断が12日以後に行われると、その動物のほどんどは、40日以内に肺及びリンパ節転移で死ぬ。本発明において、慢性的に水を飲んで経口により与えられる可溶性ＭＣＰは、ＭＬＬ腫瘍の自発的転移定着能に影響を及ぼす。本発明をより完全に例示するために、図面の図１Ａを参照する。０日目に、ラットの後肢(hind limb)に１×10⁶ＭＬＬセルを注射した。４日目に、一次腫瘍が大きさ約１ｃｍ³になったとき、ＭＣＰ 0.01%，0.1％又は1.0％(w:v)をラットの飲料水に連続的に加えた（Ｎ＝グループ中８体、実験は２度）。14日目、ラットに麻酔をかけて、後肢を切断することにより一次腫瘍を除去した。飲料水へのＭＣＰの添加は、いかなる濃度であっても一次腫瘍生長に影響を及ぼさなかった（平均腫瘍重量：コントロール，4.2±0.26 gm; 0.01%，4.7±0.7 gm; 0.1%，4.3 ±0.37 gm; 1.0%，5.0±0.25gm）。その後、30日目まで実験を続けたが、グループのすべてがいけにえとなった。その後解剖した。動物は、この間、飲料水からＭＣＰを絶えず摂取していた。コントロール及び処置した動物は、適切に体重が増え、ＭＣＰ処置した動物には目につく毒性は見られなかった。肺を除去して、水で濯ぎ、ブワン溶液で一晩固定した。肺転移を受けたラットの数は、コントロール（転移したラットは15／16）と比較して、0.1%（P<0.03）ＭＣＰ(転移したラットは7／14)(P<0.001)グループ（図１Ａ）ラットであって、グループすべてにおいて１日当たり30±４ｍｌ消費したラットにおいて、著しく減少した。ＭＭＬ腫瘍コロニーの数を、解剖顕微鏡で数えることにより測定した。ＭＣＰ 1.0%処置した動物の肺は平均的に、コントロールグループより著しく転移コロニーが少なかった（処置グループが１±１(P<0.05)に比較してコントロール9±4 （図１Ｂ）（マン−ホイットニー試験(Mann-Whitney test)）。ＭCＰの効果は、飲料水中のその濃度に依存するようであった。図１Ｃ及び１Ｄも、腫瘍を有する動物（Ｃ−コントロール、Ｄ−1.0%ＭＣＰ）の肺を示しており、発達した表面ＭＬＬ肺コロニーの数の減少においてＭＣＰの効果を強調している。１％ＭＣＰも、正リンパ節症の動物の数を著しく減少させた（コントロールで55％、ＭＣＰ処置で13％、p<0.01）。処置した動物は、ＭＣＰ処置の明らかな毒性を被らなかった。動物は、コントロールと同じ速さで体重を増加させた。１日の水の摂取量は、コントロール及び処置したグループで30±４ｍｌ／ラットであった。髪の組織、全体の挙動、及び便の色に変化はなかった。ＭＣＰは、細胞表面カルボキシレート−結合ガレクチン−３分子が介在する細胞−細胞相互作用を妨害しうることが予め証明されていたので、ＭＬＬ細胞がガレクチン−３分子を発現するか否かということを調べた。多くの他の癌細胞と同様に、ＭＬＬ細胞は、図２に示した定量蛍光流サイトメトリック分析(quantitat ive fluorescence flow cytometric analysis)により、及び図２(ブロット挿入) に示したモノ−特異性ウサギ抗−ガレクチン−３ペプチド抗体を用いて抽出された全細胞のイムノブロッティングにより測定されるように、それらの細胞表面上にガレクチン−３を発現する。腫瘍−内皮細胞付着は、転移プロセスにおける重要な出来事であると考えられる。したがって、ＭＬＬ内皮細胞相互作用におけるＭＣＰの影響を調べた。ＭＣＰの存在下又は不存在下におけるラット大動脈内皮細胞(RAEC)の集密的細胞単層に対するＣｒ−ラベルＭＬＬ細胞の付着は、図３Ａにおいて説明される。図３Ａ及び３Ｂから、ＭＣＰは、内皮細胞に対するＭＬＬ細胞の付着の潜在的な阻害剤であることが分かった。ＭＬＬ及びＲＡＥＣ細胞を、10％ウシ胎児血清を追加したＲＰＭＩ１６４０媒体中において成長させた。ＲＡＥＣは、組織培養ウェル中において成長して集密的なものとなった。2.4×10⁶のＭＬＬ細胞を、30分間、５μＣｉのＮａ５¹ＣｒＯ₄を用いて、37℃で、0.5％ウシ血清アルブミンとの血清フリー媒体２ｍｌ中においてインキュベートした。ウェルあたり、次に続く追加ウォッシング10⁵ＭＬＬ細胞(following extensive washing 10⁵MLL cells per well)を、その後、ＲＡＥＣ単層に４倍加えた。図３Ａに見られるように、４℃で90分間、種々の濃度のＭＣＰの不存在下又は存在下でのＭＬＬ細胞の結合を評価した。細胞を、冷却リン酸緩衝溶液中において３回洗浄して、未結合細胞を除去した。細胞を、その後、0.1％ＮａＯＨを用いて30分間37℃で可溶化し、かつ、放射能を、βカウンターで測定した。それぞれのポイントは、ヒトの４つのウェルを表し、かつ実験を２回行った。バーは、標準誤差を表す。図３Ｂに見られるように、0.03％（ｗ／ｖ）のＭＣＰの不存在下（−−−）で又は存在下でのＲＡＥＣの集密的細胞単層に対するＭＬＬ細胞の結合を、経時的に測定した。0.03％ＭＣＰの存在により、ＲＡＥＣに対するＭＬＬ細胞の結合が阻害された。ＲＡＥＣ１０⁵ＭＬＬ細胞に対して付着性の蛍光ＭＬＬ細胞を、30分間0.1％ＦＩＴＣ下においてインキュベートし（その後に追加ウォッシングが続く）、細胞をＲＡＥＣ単層に加えた。 0.1％（ｗ／ｖ）ＭＣＰ（×160で表される）の不存在下（図３Ｃ）、又は存在下（図３Ｄ）におけるＭＬＬ細胞の結合。ＭＬＬ細胞は、ＲＡＥＣ単層に素早く結合するが、制限された程度の細胞結合のみが、ＭＣＰの存在下において観察されたは明らかである。付着プロセスにおけるＭＣＰの影響は、図３Ｃ及び図３Ｄの図面により示される。ＭＬＬ細胞を、0.1％ＭＣＰを含まない（図３Ｃ）又は含む（図３Ｄ）0.5％牛血清アルブミン中におけるラット内皮細胞の集密的細胞単層に付された、ＦＩＴＣでの懸濁液中において60分間蛍光ラベルした。培養物を清浄して、未付着細胞を除去し、その後、撮影した。未処理培養物においては、蛍光ＭＬＬ細胞が付着し、殆ど均一に内皮単層に結合したが（図３Ｃ）、0.1％ＭＣＰの存在下においては、非蛍光細胞の殆どが、顕微鏡的フィールドにおいてＲＡＥＣ単層と関連して検出された（図３Ｄ）。半固形媒体において成長するという細胞の能力、即ち、固形−非依存性は、細胞のトランスフォーメーションの基準として使用することができ、薬剤又は抗体によるそのようなプロセスの阻害を利用して、それらの有効性を確認する。半固形媒体における細胞の成長のためには、それらにより、多くのインビボ転移段階（the steps of in vivo metastasis）と類似していると思われるプロセスにおいて新種の腫瘍フォーカスが移行され、侵され、確立されることが必要とされる。この半固形媒体における細胞増殖に必要とされる最小の支持(minimal support )を提供する能力、及びアガロース（ＤガラクトースとＬアンヒドロガラクトースのポリマー）のガラクトース残部と相互作用するそれらの能力と関連する細胞表面ガレクチン−３を介して、グリコプロテインのカルボヒドレート残部と相互作用する腫瘍細胞の能力は、予め示されている。つまり、抗ガレクチン−３モノクローナル抗体が、アガロースにおける腫瘍細胞の成長を阻害し得ることは確立されている。更には、通常マウスのガレクチン−３ｃＤＮＡによる該マウスのフィブロブラストのトランスフェクションにより、固形−非依存性成長を獲得する。ＭＣＰがＭＬＬコロニー形成0.5％アガロースに与える影響を検討するために、ＭＬＬ細胞を0.02％ＥＤＴＡのカルシウム及びマグネシウムフリー（ＣＭＦ） −ＰＢＳ溶液で培養した単一層から分離し、種々の濃度のＭＣＰを含むか又は含まない完全ＲＰＭＩ中に４×10³cells/mLで懸濁した。該細胞を37℃において30 分間インキュベートし、45℃で予熱した体積比１：４の１％アガロースのＲＰＭＩ溶液と体積比１：１で混合した。該混合物２ｍＬを、直径６ｃｍの皿上に前もって成形した１％アガロースの層の上に置いた。該細胞を37℃において８日間インキュベートし、固定、計測及び撮影した。図４Ａは、形成したコロニーの数を、逆位相顕微鏡を使用して盲検測定者(blinded obserber)が測定したものである。0.1％ＭＣＰの存在により、コントロールの方に存在するＭＬＬコロニーの数が著しく抑制された（ｐ＜0.01、Mann-Whitneyによる）。バーは、３回の実験の平均及びＳ．Ｅを表す。図４Ｂは、0.1％（ｗ／ｖ）ＭＣＰ×160を添加して増殖させたＭＬＬ細胞の位相差顕微鏡写真であり、図４Ｃは、添加せずに増殖させたものである。図４Ａに示されているように、ＭＣＰは、投与量依存法においてアガロース中でＭＬＬ細胞コロニー形成を抑制した。ＭＣＰは、ＭＬＬコロニーの数とそのサイズの両方とを抑制した（図４Ｂ及び４Ｃ）。インビトロ(in vitro) で培養した単一層のＭＬＬ細胞増殖速度に全く影響を与えていないため（データは示していない）、ＭＣＰの抑制作用は、細胞傷害性(cytotoxic)よりもむしろ細胞増殖抑制性（cytostatic）であることが分かる。ＭＣＰは、他の腫瘍細胞の能力に同様の影響を与え、Ｂ１６−Ｆメラノーマ、ＵＶ−２２３７繊維肉腫、ＨＴ−１０８０ヒト繊維肉腫、及びＡ３７５ヒトメラノーマを含む、軟寒天上でコロニーを形成する。ＭＣＰが、ＭＬＬ細胞が寒天のガラクトース残基に結合するのを阻止するのか、又は炭水化物含有増殖因子（群）と細胞表面ガレクチン−３とを結合させることと競争するのかは不明である。そのような相関関係が存在するけれども（図１及び図４）、同様に、in vivoで腫瘍細胞肺コロニー形成のＭＣＰ抑制が、in vitroでのコロニー形成の抑制と類似しているかどうかは不明である。本明細書に示した結果により、自発性前立腺癌転移を予防する、新規で、非毒性の経口法を提供する。予備実験において、我々は、ガレクチン−３が、ヒト前立腺癌病理学組織標本並びにヒト前立腺癌細胞系ＰＣ−３に存在することを見出した。免疫組織化学に対し、第一期前立腺癌切片を包埋したホルマリン固定化パラフィン５μｍを脱パラフィン処理し、再水和し、１ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝溶液中で10分間マイクロ波（中〜高）をかけた。ＰＢＳで洗浄後、切片を通常のヤギ血清中で30分間ブロックし、第一期抗体ラット抗−ガレクチン−３−ＴＩＢ−１６６モノクローナル抗体と共にインキュベートした。次に、切片をＤＰＢＳ中で３０分間洗浄し、ビオチニル化抗−ラットＩｇＧと共にインキュベートし、洗浄、及びアビジン−ビオチニル化セイヨウワサビパーオキシダーゼ、パーオキダーゼ基質３’−３’−ジアミノベンジジンと共にインキュベートした。切片を３％メチルグリーンで対比染色し、ゼラチン−グリセリン上にのせた。図５に示した切片は、侵襲性前立腺癌患者のものである。ＰＣ−３細胞抽出物は、免疫ブロット（immunoblot）し、図２の凡例に記載したようなヒトガレクチン−３が存在するかどうかを分析した。ヒト前立腺の標本におけるガレクチン−３の発現は、ＴＩＢ−１６６抗−ガレクチン−３モノクローナル抗体による免疫組織化学により検討した。ガレクチン−３は、ストロマ染色及び種々の通常の上皮染色のほとんどない前立腺癌細胞に主に発現する（図５）。この抗体によるガレクチン −３染色は、強度の核(intense nuclear)、細胞質、及び細胞表面染色と関連する。さらなる研究により、通常の及び癌の前立腺組織におけるガレクチン− ３の役割並びにヌードマウスでのヒト前立腺転移の抑制におけるＭＣＰの能力が決定づけられるだろう。ＭＣＰ分子は、経口投与後、血流に吸収され、第二期腫瘍細胞コロニーの形成を成功させるのに必要な腫瘍細胞表面ガレクチンの天然リガンド(natural ligand)（群）認識と競争することが分かった。ペクチンの分子特徴についてはほとんど分かっていないので、ＭＣＰの活性部分及びそれらの血清レベルを特徴付けるために、研究がさらに進められている。ＭＣＰはＭＬＬ第一期腫瘍増殖又は脈管形成に全く影響を及ぼさないので、ＭＣＰの影響は、転移細胞増殖のような後期に起こることよりも、転移の初期の段階において、腫瘍細胞塞栓の形成をおそらく抑制し、並びに癌細胞と標的器官の内皮との相互作用を抑制することが分かった。中性のシトラスペクチン（ＣＰ）及びpH−改質シトラスペクチン（ＭＣＰ）はそれぞれ、高度に分岐し及び非分岐の複合ポリサッカライドであって、ガラクトシド残基に富み、ガレクチン−３の炭水化物−結合性ドメインに結合することができるので、炭水化物−認識が介在する細胞−細胞及び細胞−マトリックス相互作用へのＣＰ及びＭＣＰの効果を研究した。ＣＰではなくＭＣＰは、ラミニンへのＢ１６−Ｆ１メラノーマ細胞の粘着、及びアシアロフェツイン−誘発血液様(h emotypic)凝集を阻害した。ＭＣＰ及びＣＰの双方は、アガロースといった半固体の培地におけるＢ１６−Ｆ１細胞の足場非依存性の成長を阻害した。これらの結果は、ガレクチン−３の細胞表面による炭水化物−認識が細胞−細胞外マトリックスの相互作用に関与し、及び腫瘍細胞の足場非依存性の成長並びにin vivo の塞栓において役割を果たすであろうことを示す。より詳しくは、内発的な脊椎動物のガラクトシド−結合性レクチンは同定されており、組織及び細胞の違いで特徴付けられる。レクチンはそれらのサイズに基づいて豊富な２つのクラスに分けられ、その分子量は〜14kDa及び〜30kDaであって最近各々ガレクチン−１及びガレクチン−３と呼ばれている。ガレクチン−３としては広範な分子、即ちネズミ科の34kDa(mL-34)及びヒトの31kDa(hL-31)腫瘍関連ガラクトシド−結合性レクチン、35kDa繊維芽細胞炭水化物−結合性蛋白質( CBP35)、ＩｇＥ−結合性蛋白質（εBP）、32kDaマクロファージ非−インテグリンラミニン−結合性蛋白質(Mac-2)、及びラット、マウス、及びヒト型の29kDaのガラクトシド−結合性レクチン（L-29）がある。分子クローニングの研究によりポリペプチドが同一であることが明らかとなった。ガレクチン−３は二つの構造ドメイン、コラーゲン様配列を含むアミノ末端ドメイン及びガラクトシド結合部位を包含する球形カルボキシ末端ドメインを含む。上述のガラクトシド結合性レクチンのすべてが、１又は複数の同じ中性リガンドを共にしているのかどうか未だ知られていない。ガレクチン−３はその炭水化物結合活性のために還元条件を要求するＳ型レクチンと見なされているが、最近の研究ではそれに反対の証拠が挙げられている。分析の幾つかの方面では、ガレクチンは相補的な糖複合体を認識し結合することによって細胞−細胞及び細胞−マトリックスの相互作用に参加し、多様な正常及び病的なプロセスにおいて重要な役割を果たすことが実証されている。ガレクチン−３は、活性化されたマクロファージ及び発癌的にトランスフォームされ転移する細胞により高度に発現される。そのポリペプチドの加速した発現は、足場非依存性成長、血液様凝集、及び腫瘍細胞肺コロニー化の増進する能力に関連し、このことはガレクチン−３が循環系における腫瘍細胞の塞栓を促進し、転移を促進することを示唆している。我々は以前にＣＰの静脈注射がＢ１６− Ｆ１ネズミメラノーマ細胞の肺コロニー化を増進させる一方、ＭＣＰが肺コロニー化を減少させることを報告した。ＣＰにより増進した肺コロニー化は、たぶん殆ど血液様凝集を促進するその能力によるのであるが、ＭＣＰが肺コロニー化を防ぐメカニズムは未だよく確立されていない。基底膜の主要非コラーゲン成分であるラミニンは、Ｎ−結合グリコプロテインを担持するポリ−Ｎ−アセチルラクトサミン配列であって、細胞の粘着、移動、成長、分化、侵入及び転移に関係している。高度の親和性でポリ−Ｎ−アセチルラクトサミン配列を含むオリゴサッカライドに結合するガレクチンはまた、ラミニンの炭水化物側鎖に、特異的な糖依存性の様式で結合する。ガレクチン−３の機能的な特性を更に研究するために、ＣＰ及びＭＣＰを使用して、それらがＢ１６−Ｆ１ネズミメラノーマ細胞のガレクチン−３に関連した特性に影響を与えるかどうかを試験した。我々は、（a）ＣＰではなくＭＣＰがラミニンへの細胞粘着を阻害すること；（b）ＭＣＰがアシアロフェツイン−誘発血液様凝集を阻害する一方、ＣＰがそれを促進すること；及び（c）ＣＰ及びＭＣＰの双方が半固体培地において足場非依存性の成長を阻害することを見出した。ＣＰ及びＥＨＳラミニンを、シグマ社(Sigma，St．Louis，Missouri)から購入した。ＭＣＰを、上述したAlbersheimらの方法に従ってｐＨ改質によりＣＰから調製した。アシアロフェツインを、フェツイン(スピロ法、Grand Island Biolog ical Co.，Grand Island，New York)の穏和な酸加水分解（0.05ＭＨ₂ＳＯ₄中8 0℃、１時間）により調製した。組換えガレクチン−３を、どこか他の場所で記載したように、アシアロフェツインアフィニティーカラムを通した１段階精製により細菌細胞から抽出した。乳糖で溶出された組み換えガレクチン−３を、使用する前にＣＭＦ−ＰＢＳに対して大規模に透析した。抗ガレクチン−３モノクローナル抗体を、テキサス大学のM.D.AndersonのLotan博士から手に入れた。西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）−結合ウサギ抗−ラットＩｇＧ＋ＩｇＭ及び 2,2'−アジノ−ジ（3-エチルベンズチアゾリンスルホン酸）（ＡＢＴＳ）基質キットを、Zymed,South San Francisco，Californiaから購入した。Ｂ１６−Ｆ１マウス黒色腫細胞を、10％加熱非活性ウシ胎児血清、非必須アミノ酸、２ｍＭグルタミン及び抗生物質を補ったダルベッコの修飾イーグル最小培地(ＤＭＥＭ)で培養した。細胞を、ＣＯ₂７％及び空気93％の湿った雰囲気中で37℃に維持した。ラミニンへの細胞接着 96ウェルプレートの組織培養ウェルを、ＥＨＳラミニンのＣＡ²⁺及びＭｇ²⁺フリー食塩加リン酸緩衝液溶液(ｐＨ7.2)で、４℃で一晩かけてプレコートし（２ μｇ／ウェル）、残りの蛋白質結合部位を１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のＣＭＦ−ＰＢＳ溶液で室温で２時間かけてブロックした。細胞を0.02％ＥＤＴＡのＣＭＦ−ＰＢＳ溶液で集め、血清を含まないＤＭＥＭに懸濁した。ＤＭＥＭに懸濁した細胞を、単独で、又は種々の濃度のＣＰ又はＭＣＰと共に、各々のウェルに５×10⁴個づつ加えた。37℃で２時間15分インキュベーションした後、接着しない細胞をＣＭＦ−ＰＢＳで洗い流した。接着細胞をメタノールで固定し、写真を撮った。接着細胞の相対的な数を、Olierらの方法により測定した。簡単に述べると、細胞をメチレンブルーで染色し、染料を開放するために塩酸−エタノールを加えた。光学的濃度(650ｎｍ)をプレートリーダーで測定した。アシアロフェツインによって誘導される同型凝集細胞を0.02％ＥＤＴＡのＣＭＦ−ＰＢＳ溶液で引き剥がし、20μｇ／ｍｌアシアロフェツイン及び0.5％ＣＰ又は0.5％ＭＣＰを含むか又は含まないＣＭＦ−ＰＢＳに１×10⁶細胞／ｍｌに懸濁した。細胞懸濁液0.5ｍｌを含むアリコートを、シリコーン処理したガラス試験管に入れ、37℃、80ｒｐｍで60分撹拌した。次いで、凝集を１％ホルムアミドのＣＭＦ−ＰＢＳ溶液により細胞を固定することにより終結させた。試料を、単一細胞の数を計測するために用い、得られた凝集を下記式により計算した。（１−Ｎｔ／Ｎｃ）×100 上記式において、Ｎｔ及びＮｃは、それぞれ試験した化合物及びコントロール緩衝液（ＣＭＦ−ＰＢＳ）に存在する単一細胞の数を意味する。ＭＣＰへのガレクチン−３の結合 96ウェルを、0.5％ＭＣＰ及び１％ＢＳＡを含むＣＭＦ−ＰＢＳでコートし、一晩乾燥した。ウェルを排水し0.1％ＢＳＡ及び0.05％Tween-20を含むＣＭＦ− ＰＢＳ（溶液Ｂ）で洗浄した後、50ｍＭ乳糖が存在するか又は存在しない、0.5 ％ＢＳＡ及び0.05％Tween-20を含むＣＭＦ−ＰＢＳ（溶液Ａ）で連続希釈したガレクチン−３を加え、120分間インキュベーションした。溶液Ａに溶解したラット抗−ガレクチン−３を加え、60分間インキュベーションし、溶液Ｂで洗浄し、溶液Ａに溶解したＨＲＰ−結合ウサギ抗ラットＩｇＧＩｇＭと30分間インキュベーションした。洗浄した後、ＡＢＴＳを添加することによって各々のウェル中の酵素の相対的な量が確認された。加水分解の程度を405ｎｍで測定した。半固体培地中のコロニー形成細胞を、0.02％ＥＤＴＡのＣＭＦ−ＰＢＳ溶液で引き剥がし、種々の濃度のＣＰ又はＭＣＰを含むか含まない完全ＤＭＥＭに１×10³細胞／ｍｌに懸濁した。細胞を37℃に30分間インキュベーションし、予め45℃に加熱した蒸留水−ＤＭＥＭ（１：４、ｖｏｌ／ｖｏｌ）の１％アガロース溶液に１：１（ｖｏｌ／ｖｏｌ）に混合した。混合物の２ｍｌのアリコートを、６ｃｍ直径のシャーレ中の１％アガロースのプレキャスト層の表面に載せた。細胞を37℃で14日間インキュベーションし、2.6％グルタルアルデヒドのＣＭＦ−ＰＢＳ溶液を加えることにより細胞を固定した後、逆位相差顕微鏡を用いて形成されたコロニーを測定した。ラミニンが、可溶性ガレクチン−３のリガンドとして働き、Ｂ１６−Ｆ１細胞が、その細胞表面で、ガレクチン−３を発現することは、以前に示されている。静脈注射されるＢ１６−Ｆ１細胞の肺移植でのＣＰ及びＭＣＰの効果を伴うこれらの結果は、その様な方法で、細胞表面ガレクチン−３の可能な役割を評価する為に、ラミニンへのＢ１６−Ｆ１細胞の接着についての効果を最初に試験する事を我々に促した。図６及び７Ａ−Ｃで示される様に、ＭＣＰは、投与量依存法では、ラミニンへの細胞接着を著しく抑制したが、ＣＰは、ラミニンへの細胞結合又は拡張のいずれにおいても効果は不明であった。ガレクチン−３ラクトースの単糖抑制剤は、100ｍＭという高い濃度では、ラミニンへの細胞接着を抑制しなかった（データは示さない）。可溶性組み換えガレクチン−３を利用する競合的結合アッセイは、ラミニンへの細胞接着を阻害する事となり、抗−Ｍａｃ−２モノクローナル抗体をも同様の結果とし（データは示さない）、細胞が、ラミニンのタンパク質核へ結合する為のインテグリンを利用するかも知れないので、ＭＣＰの抑制効果は、ラミニン上のガレクチン−３とＮ−アセチルラクトサミニル側鎖間の相互反応の妨害に対しては、単独では発揮することができないことを暗示する。更に、抗−Ｍａｃ−２モノクローナル抗体は、ガレクチン−３の炭水化物結合ドメインに対するよりも、むしろそのＮ−末端に向かい、従って、ＣＰ及びラクトースとは対照的に、ＭＣＰが接着を阻害する正確なメカニズムには、不明な点が残る。ＭＣＰの抑制効果は、ＭＣＰ（５％）が、細胞の生存能力又は試験管での成長のいずれにも影響を及ぼさなかったことから、細胞毒によるものではない。試験管内での同型の凝集を受ける腫瘍細胞の性質及び人体内でのそれらの転位可能性の間には、良好な相関関係が確立されている。Ｂ１６メラノーマ細胞集団は、単独細胞よりも、静脈注射後の肺コロニーを多く産生する。更に、抗−Ｍａｃ−２モノクローナル抗体は、細胞表面ガレクチン−３ポリペプチドが、同型凝集の形成、次いでグリコプロテインの側鎖とのそれらの相互反応をもたらす事を暗示する、アシアロフェツイン誘発同型凝集を抑制する事を示した（14）。図８及び９Ａ−Ｃで示される様に、ＭＣＰは、同型凝集の形成を著しく減少させる一方、ＣＰはそれを高める。最も可能なのは、非分岐のＭＣＰは、細胞表面ガレクチン−３とアシアロフェツインのガラクトシド残基との相互反応をマスクし、減少した同型凝集となる様に、特定の糖抑制剤、即ちラクトースの挙動を擬態する事である。逆に、分岐した炭水化物ポリマーの構造特性は、ＣＰを、同型凝集の形成を高める事となる、隣接細胞間の橋の架橋剤として働かせると仮定する事が考えられる。同時に、それは、ＭＣＰが、転位障害を形成する為には腫瘍細胞にとってきわめて重大な、細胞−細胞及び細胞−マトリックス相互反応を崩壊する事によって、転位を防ぐ事が出来る事を暗示するものかも知れない。Ｂ１６−Ｆ１細胞のラミニンへの接着と同型の凝集とを阻害するというＭＣＰの上記効果は、そのガレクチン−３との細胞表面状での相互作用に起因するものであると考えられる。その理由は、ＣＰがラクトース依存性の様式でＢ１６−Ｆ１細胞表面に結合することが、従来示されているからである。ガレクチン−３のＭＣＰへの結合を扱うため、酵素リンクした酵素吸着検定を採用し、そこで組換えガレクチン−３が固定化したＭＣＰに服量依存性の様式で結合すること、及び該結合はラクトースにより完全にブロックされることを見いだした（図９）。これらの結果から、同型の凝集に対するＭＣＰの阻害的効果は、その細胞表面ガレクチン−３分子への結合に起因するものと考えることができる。その一方で、ＣＰではなくＭＣＰが、いかにしてＢ１６−Ｆ１細胞のラミニンへの接着を減じるのかは明らかでない。枝分れを有する複雑なポリサッカライドポリマーであるＣＰをｐＨ改質することにより、同一の糖組成である枝分れのない炭水化物鎖が生ずることから、ＭＣＰがＣＰの場合よりも高い親和性をもって細胞表面ガレクチン−３分子へ結合するものと考えられる。抗インテグリン抗体がネズミＢ１６メラノーマ細胞のラミニン基質への結合を阻害するという事実をも考慮すると、インテグリンクラスのラミニン受容体によるラミニン認識をＭＣＰが立体化学的に阻害するか、あるいは、細胞表面ガレクチン−３とラミニン上のポリ−Ｎ−アセチルラクトースアミン連鎖との相互作用が、ラミニンへの細胞接着に関してインテグリンと共同して作用するものと仮定することができる。ガレクチン−１は分泌されたタンパク質であることから、ガレクチン−３と同一の糖特異性を有するガレクチン−１とＭＣＰとの相互作用が、Ｂ１６−Ｆ１細胞のラミニンへの接着と同型の凝集とを減じるその過程に影響を及ぼすという可能性は、最も除外すべき可能性が高いと考えられる。細胞が半固形培地で成長する能力、即ち、「固定非依存性」は、細胞の形質転換の基準として用いられる。その理由は、この特徴が通常形質転換した腫瘍発生性の細胞のみにより示されるものだからである。従来、腫瘍細胞が細胞表面ガレクチン−３を介して糖タンパク質炭化水素残基と相互作用する能力は、該腫瘍細胞がアガロース（Ｄ−ガラクトースとＬ−無水ガラクトースとのポリマー）のガラクトース残基と相互作用する能力、及びこの半固形培地中でのコロニー形成の効率に関連することが示唆されていた。更に、抗ガレクチン−３モノクローナル抗体がアガロース中での腫瘍細胞の成長を阻害すること、及びガレクチン−３の発現と形質転換した表現型の抑制との間には逆比例の関係があることが示されている。正常なマウス線維芽細胞のマウスガレクチン−３ｃＤＮＡとのトランスフェクションにより、固定非依存性の成長特性が得られる。細胞が半固形培地で成長することに関して細胞表面ガレクチン−３が主要な役割を果たしている可能性を更に実証するために、Ｂ１６−Ｆ１メラノーマ細胞の固定非依存性成長へのＣＰ及びＭＣＰの影響について調べた。図１１に示すように、ＣＰ及びＭＣＰは、半固形マトリックス中でのＢ１６−Ｆ１細胞コロニーの成長を、服量依存性の様式で阻害した。同様に、ラクトースも、固定非依存性の成長を、服量依存性の様式で阻害した（データは示していない）。ＣＰ及びＭＣＰの服量依存性の阻害効果は、Ｂ１６−Ｆ１メラノーマ細胞に限定されるものではなかった。軟質寒天中でのＵＶ−２２３７−１０−３ネズミ線維肉腫細胞、ＨＴ１０８０ヒト線維肉腫細胞、及びＡ３７５Ｃ１．４９ヒトメラノーマ細胞の成長も、同様に阻害された。可溶性のＣＰ及びＭＣＰがガレクチン−３結合についてアガロースのガラクトース残基と競合（complete）し、細胞産生に必要なマトリックスの最小支持の細胞を除去することにより、明らかに成長を阻害することとなるものと考えられる。また、ＣＰ及びＭＣＰが、抗ガレクチン−３抗体と同様に、ガレクチン−３と相互作用する未だ認識されていない糖共役成長因子の拮抗体のような挙動を示す可能性があること、あるいは、ＣＰ及びＭＣＰが、既知の成長因子の膜受容体へのアクセスを立体化学的に阻害することが議論されうる。しかしながら、インビトロ固定依存性成長及びシンジェネイックマウス内のＢ１６−Ｆ１細胞の腫瘍発生性が、ＭＣＰ（０．５％）により減じられなかったことから、上記議論を排除することができる可能性が高い。細胞が半固形培地で成長する能力は、細胞の形質転換の基準として用いられるため、細胞表面ガレクチン−３の獲得は、形質転換後カスケードの初期段階であると考えられる。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Method for inhibiting cancer metastasis by oral administration of soluble modified citrus pectin Field of the invention The present invention relates generally to methods for treating prostate cancer. Background of the Invention It is believed that the incidence of many forms of cancer increases with population age. For example Prostate cancer is the most commonly diagnosed cancer in men in the United States, This is the second cause. This means that in 1994 200,000 prostate cancers New cases diagnosed predict that 38,000 deaths from prostate cancer This number is expected from the fact that this number is expected to continue to increase with population age. I understand. About 50% of patients diagnosed with prostate cancer have or lose the prostate Have illness. Prostate cancer has spread to the skeletal system and the patient dies of a severe osteogenic metastatic disease It is typical to die. Patients with metastatic disease without effective cure yet There are only few palliative treatments for E.C. Kohn, Anticancer Re., 13, 2553 (1993) and L.A. Kiotta, P.S. Steeg, W.G. As described in Stettler-Stevenson, Cell 64, 327 (1991), tumors During cell metastasis, cells separate from the primary tumor, invade the basement membrane, and block tumor cells. Traverses the bloodstream from the plug, interacts with vascular endothelial cells of the target organ, and proliferates It is necessary to form a secondary tumor colony. A. Raz, R. Lotan, Cancer Metastasis Rev. 6, 433 (1987) and H.J. Gabius, Biochim Biophys Acta. 1071, 1 (1991). At many stages of the loading, a galactoside-binding lectin (galectin) is used. Cell interactions mediated by cell surface components such as carbohydrate-binding proteins Is generally accepted. L. Meromsky, R.A. Lotan, A .; Raz , Cancer Res. 46, 5270 (1991). 16 melanoma and uv-2237 fibrosarcoma cells were transferred to a syngeneic mouse. Treatment with anti-galectin monoclonal antibody before intravenous injection into the tail vein The expansion of the lung colony of the tumor is significantly inhibited. A. Raz, D. Zhu, V. Hogan, J .; Sha h, T. Raz, R. Karkash, G. Pazerini, P .; Carmi, Int. J. Cancer 46, 871 (1990), low metastatic, low galectin-3 expressing uv -2237-c115 fibrosarcoma cells are transfected with galectin-3 cDNA This increases the metastatic phenotype of the transfected cells. Further, L. Chi ariotti, M.T. Berlinjieri, P.S. DeRosa, C.E. Battaglia, N.W. Berger, C.B. Brun i, A. Fusco, Omeogene 7, 2507 (1992); Irimura, Y. Matsushite, R.C. Sut ton, D. Carralero, D.W. Ohanesian, K.R. Cleary, D.M. Ota, Int. J. Cancer 51, 387 (1991); Lotan, H .; Ito, W. Yasui, H .; Yokozak, D.S. Lotan, E .; Tah ara, Int. J. Cancer 56, 474 (1994), and M.M. Lotz, C.W. Andrews, C.A. Kor zelius, E.C. Lee, G.D. Steele, A. Clarke, A.M. Mercurio, PNAS, USA 90, 3 466 (1993), galectin in human papillary thyroid carcinoma The relationship between the expression level of 3 and the tumor stage of human colorectal and gastric cancers has been established ing. J. Beauth et al. Cancer Res. Clin. Oncol. 113, 51 (1987) Monosaccharides such as methyl-α-D-galactoside and lacto-N-tetrose Inhibits metastasis of B16 melanoma cells, whereas D-galactose and Nogalactose has been shown to inhibit liver metastasis of L-1 sarcoma cells. D. Platt and A.S. Raz, J .; Natl. Cancer Inst. 84: 438-42 (1992) respectively As described, B16-F1 murine melanoma cells were treated with citrus pectin or Intravenous injection into syngeneic transplanted mice with modified citrus pectin resulted in lung colony It is known that a significant increase or decrease in the formation occurs. Invention described in this specification Earlier, oral administration of non-cytotoxic agents was effective in inhibiting cancer metastasis. No treatment was present. Therefore, therapeutic methods based on oral administration of non-cytotoxic agents Is required. Summary of the Invention In one aspect, the invention relates to a modified pectin, preferably a water-soluble pH-modified citrus. Oral administration of spectin (citrus pectin) to treat mammals in mammals , As described herein. In another aspect, the present invention relates to a modified pectin, preferably a pH modified citrus Containing a mixture of Kuching and a pharmacologically acceptable digestive carrier, It provides a composition for oral administration for treatment. In yet another aspect, the methods and compositions of the present invention comprise humans and other mammals It is used for the therapeutic treatment of prostate cancer to suppress the metastasis of primary tumor. Thus, a preferred embodiment of the present invention provides a non-cytotoxin rich in galactoside residues. Oral of complex natural complex carbohydrate, pH-modified citrus pectin (MCP) Ingestion provides a novel therapy that acts as an effective inhibitor of spontaneous prostate cancer metastasis Things. When treated according to the present invention, 7 out of 16 tumor-bearing rats ,Ten⁶After removing the primary tumor 14 days after inoculation with Dunning rat prostate cancer MLL cells, Necropsy found no disease (visible to lymph nodes or lungs) No metastasis), while 16 of 16 rats in the control group (control group) Metastasis was observed. The number of tumor lung colonies in the remaining rats was 1% (w / v) MCP Oral ingestion significantly decreased compared to the control group (control 9 ± 4; 1% MCP, 1 ± 1), had no effect on primary tumor growth. In vitro, MCPs are ML to rat endothelial cells depending on time and dose. It inhibited L cell adhesion as well as colony formation in semi-solid media. Action mechanism of MCP The structure may involve the involvement of a carbohydrate-binding protein on the tumor cell surface. Thus, the present invention provides a unique mechanism of action that effectively inhibits tumor cell metastasis. Provided is a method for treating cancer by oral administration of MCP, a non-toxic drug having Things. Furthermore, the present invention relates to a mammalian cancer comprising an MCP and an oral pharmaceutical carrier. A composition for the treatment of FIG. 1A shows that the number of rats with lung metastases was 0.1% MCP and 1.0% MCP, FIG. 4 is a chart showing that the number is significantly reduced as compared with the control. FIG. 1B shows that the number of metastatic colonies in the lungs of 1.0% MCP-treated animals It is a chart which shows that it is significantly less than a group. FIG. 1C is a micrograph of a control rat lung. FIG. 1D is a photomicrograph of the lungs of a 1.0% MCP rat. FIG. 2. Cell surface for rat galectin-3 expression in MLL cells. It is a plot of staining and Western blot (inset). FIG. 3A shows M in the presence or absence of various concentrations of MCP at 4 ° C. for 90 minutes. It is a graph which shows adhesion of LL cell. FIG. 3B shows RA in the presence or absence (−−−−−) of 0.03% w / v MCP. Graph showing the time course of adhesion of MLL cells to a confluent monolayer of EC It is. FIG. 3C shows fluorescence MLL cell adhesion to RAEC cells in the absence of MCP. It is a microscope picture. FIG. 3D shows fluorescent MLL against RAEC cells in the presence of 0.1% w / v MCP. It is a microscope picture of cell adhesion. FIG. 4A shows the effect of MCP on MLL colony formation in 0.5% agarose. It is a chart shown. FIG. 4B is a phase contrast micrograph of MLL cells grown in the absence of MCP. . FIG. 4C shows the phase contrast of MLL cells grown in the presence of 0.1% (w / v) MCP. It is a microscopic photograph. FIG. 5 is a photomicrograph of human primary prostate cancer tissue showing the presence of galectin-3. is there. FIG. 6 shows laminin in the presence of various concentrations of CP (○) or MCP (○). 4 is a graph showing the effect of CP and MCP on the adhesion of B16F1 to B16F1. Hanging The straight bar indicates the mean ± standard deviation calculated from the mean t distribution. FIG. 7A is a phase contrast micrograph of B16F1 cells seeded on laminin. The cells were cultured in DMEM alone. FIG. 7B shows B1 seeded on laminin and cultured in the presence of 0.5% CP and DMEM. It is a phase contrast micrograph of 6F1 cell. FIG. 7C shows B seeded on laminin and cultured in the presence of 0.5% MCP and DMEM. It is a phase contrast microscope photograph of 16F1 cell. FIG. 8 shows 20 μg / ml asialofetuin alone (A) or 0.5% Asialofetuin when CP (B) or 0.5% MCP (C) is added -Graph showing the effect of CP and MCP on induced homotypic aggregation. Vertical bar Indicates the standard deviation calculated from the mean ± mean t distribution. FIG. 9A shows B16-F1 cells in the presence of 20 μg / ml asialofetuin alone 3 is a phase-contrast micrograph of the same type of aggregation. FIG. 9B shows B16-F2 cells in the presence of 0.5% CP and asialofetuin. It is a phase contrast micrograph of the homomorphic aggregation. FIG. 9C shows B16-F2 cells in the presence of 0.5% MCP and asialofetuin. 3 is a phase-contrast micrograph of the same type of aggregation. FIG. 10 is a graph showing the binding of galectin-3 to wells coated with MCP. It is. FIG. 11 shows the effect of CP on the colony forming ability of B16F1 cells in 0.5% agarose. 3 is a graph showing the effects of MCP and MCP (CP ○, MCP ○). Detailed Description of the Preferred Embodiment As used herein, the term “curative” treatment refers to a patient diagnosed with cancer. Oral administration of a prescribed amount of modified citrus pectin that is effective in extending the life of the elderly I do. As used herein, the term "cancer" refers to all neoplastic diseases, e.g. For example, renal cell carcinoma, Kaposi's sarcoma, chronic leukemia, breast cancer, sarcoma, uterine cancer, rectal cancer, throat Cancer, melanoma, colon cancer, bladder cancer, mastocytoma, lung cancer, breast cancer (adenocalcino Pharyngeal squamous cell caricnoma) and in the stomach Or include cellular diseases such as gastric cancer. The cancer treated in the present invention is a human Adenocarcinoma is preferred, most preferably a human prostate gland carcinoma (adenocarcinoma) preferable. Abbreviations in this specification are as follows. CP uses natural citrus pectin means. MCP means pH-modified CP. EHS is Engle Breath- It means Holm Swarm (Englebreth-Holm Swarm). DMEM Co-modified Eagles means the minimum required medium. CMF-PBS is Ca²⁺-MG²⁺-H Means phosphate buffered saline (pH 7.2). BSa converts bovine serum albumin means. Already published in the literature (Modulation of the Lung Colonization of B16-F1 Melanoma Cell s by Citrus Pectin, Journal of the National Cancer Institute, Vol. 84, N o. 6, March 18, 1992) (all references in this document are cited here). As shown in the figure, the complex polysaccharide abundant in galactose residues B16 melano of trastectin (CP) and its pH modified derivative (MGP) The effect on the experimental metastasis of the chromosome was analyzed. MCP together with B16-F1 cells Intravenous injection (infusion) results in the metastasis of these cells to the lungs of the injected rat It has been found that it clearly impairs ability to colonize. CP pH Modification is described in more detail below, but is less than a similar sugar composition in unmodified CP. Causes the generation of small sized unbranched carbohydrate chains. MCP can also be used in vivo. It is also non-toxic in vitro. The modified pectin used in the present invention is prepared by partially depolymerizing citrus pectin. It is preferably prepared by modifying the pH. As will be appreciated by those skilled in the art, unmodified pectin can range from about 20,000 to 400,000. Has child weight. Pectin is a polysaccharide found in the cell walls of all plant tissues. And functions as an intercellular junctional substance. One of the most abundant sources of pectin is Mon or orange peel containing about 30% of this polysaccharide. Usually, (1 2) -L-rhamnose residue inserted, a- (1 4) D-Poly bonded Galacturonate (D-polygalacturonate) sequence as a partial methyl ester Exist. D-galactose, L-arabinose, D-xylose and L-fuco Neutral sugars form the side chains of the pectin molecule. Structural studies were conducted by D.A. Rees et al. (D.A.Rees, A.W.Wight, J. Chem. Soc. B, 1971, 1366). In solution And secondary and tertiary structures in gels are described in D.A. Rees, E.J. Welsh, Angew. Chem. Int. E d. 16, 214 (1977). Reviews and citations can be found in Towle, Christe. nsenn, Industrial Gums, R.L. Whister, Ed, (Academic Press, New York, 2nd ed., 1973) p429-461. A notable book about pectin is Z .I. Kertesz's The pectic Substance (Interscience, New York, 1951) is there. Pectin is a coarse or fine powder, yellowish-white, substantially It is odorless and has a mucous taste. Almost completely soluble in 20 parts of water, negatively charged , Forming a viscous solution containing very hydrated particles. Acidity in litmus test so Yes, insoluble in alcohol or dilute alcohol or other organic solvents. Baek Chin is first moistened with alcohol, glycerol or sugar syrup, Alternatively, first mixing with 3 or more parts of sucrose dissolves more easily in water. Calm It is stable under moderately acidic conditions, but depolymerizes under stronger acidic or basic conditions. Wake up. Used as starting material in the preparation of pH modified citrus pectin for use in the present invention One preferred pectin is Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo. (Sig. ma Chemical Co.). This substance has a molecular weight of 70-100Kd About 85% by weight of galactonic groups and 9.5% by weight of methoxy groups, and It has a content of less than about 10% by weight. Available in powder form. Citrus Kuching is also available from ICN Biomedical as Pectin 102587RT. Available. 0.5%, more preferably 1.0% w / v aqueous solution of citrus pectin (here, The concentrations of all solutions are expressed in w / v, unless otherwise stated) and were prepared for about 48 hours. Sterilize by UV irradiation. In order to partially depolymerize the pectin, the Alberscheim et al., “A Method for Analysis of Sugars in Plant Ce” ll Wall Polysaccharides by Gas Liquid Chromatography ”Carbohydrate Resea rch, 5: 340-346, 1967, the pH of the pectin solution was adjusted to NaOH ( 3N) for 3 minutes to raise to 10.0, then reduce to 3.0 with HCl (3N). To improve the properties. The contents of this dissertation are included in the description of this specification. I do. After about 10-24 hours, equilibrate the pH of the solution to about 6.3. Then the solution is ethanol Wash with acetone (70%) and dry with acetone (100%). As a result, the paper “Met hods of Grading Pectin in Relation to the Molecular Weight (intrinsic vi scosity of pectin) "Christense described in Food Research 19: 163-165 (1954) Sodium hexametaphosphate 20mM (pH 4.5) according to the method of Christensen , EDTA 0.2% and NaCl (0.9%) with a Ubbelohde No. 1 viscometer at 25 ° C. A pectin fragment with an average molecular weight of about 10 kd as determined by densitometry was obtained. It is. The contents of this paper are included in the description of this specification. In this specification The terms "modified pectin" and "MCP" used in Refers to the combined pectin. More preferably, the modified pectin utilized in the present invention comprises The molecular weight is about 1-15 kd, most preferably about 10 kd, and preferably It is prepared according to the protocol described above and is preferably water-soluble. Dry MCP hula Is Ca²⁺And Mg²⁺-Free phosphate buffered saline (pH 7.2) (CMF- (PBS) to give a final stock solution of 0.5% (w / v). As described above, in the present invention, since MCP is orally administered, the present invention relates to MCP. A composition comprising a CP and a digestible pharmaceutical carrier is provided. As a suitable digestive pharmaceutical carrier, A gelatin capsule obtained by encapsulating the MCP in a dry form, Xypropylcellulose, hydroxypropyl methylcellulose, stearin Magnesium acid, microcrystalline cellulose, propylene glycol, Tablets obtained by mixing with zinc thearate, titanium dioxide and the like can be mentioned. The pair The composition is pure water, to provide a preferred taste composition when consumed by the patient, It may be composed as a liquid using seasoning and shoe cloth as a digestible carrier. No. Precise dosages and dosing procedures will vary depending on patient age, weight, treatment history, etc. It is a function of numbers. Amount of MCP component effective in treating cancer (ie ignoring digestive carriers) The preferred dosage and administration procedure based on About 10 to about 1000 mg per dose. MCP is orally administered at regular intervals, that is, about 10 to about Oral administration at 1000 mg / kg every 24 hours and / or every 2.5 to 250 mg / kg every 6 hours I do. This same dose and dosing procedure is useful for prostate cancer in mammals, including human prostate cancer. It is preferably used to treat or reduce metastasis. This same dose and administration The procedure is very similar to that of an animal that has a very high probability of becoming cancerous when administered as an oral prophylactic composition. Is believed to be effective in preventing cancer in patients.Example The following examples further illustrate various aspects of the present invention, which are not intended to be limiting. Is not limited. W. F. Dunning, Natl Cancer Inst Mono, vol. 12, p. 351 (1963) As shown, Dunning (R3327) rat prostate cancer model of prostate cancer was Developed in Dunning, from a spontaneous adenocarcinoma found in J. T. Isaacs, W.S. D. W. Heston, R .; M. Weissman, D.S. S. Coffey, Cancer Res 38, 4353 (197 8 years), primary tumors with different differentiation and metastatic properties Developed several sublines. J. T. Isaacs, W.S. B. Isaacs , W. F. J. Feitz, J .; Scheres, The Prostate 9, 261 (1986); J . Pienta, B .; C. Murphy, W.S. B. Isaacs, J .; T. Isaacs, D.S. S. Coffey, The Pr As described in ostate 20, 233 (1992), MAT-LyLu (MLL) The subline is a precocious, poorly differentiated adenocarcinoma cell line with 1 × 10⁶When MLL cells are injected, they are primarily overwhelmed by the tumor burden and secondarily by about 25%. Causes animal death within days. Primary MLL tumors metastasized about 12 days after tumor cell inoculation Initially, if the primary tumor is removed by limb amputation before this time, the animal will recover. K. J. Pienta, B .; C. Murphy, W.S. B. Isaacs, J .; T. Isaacs, D.S. S. Coffey, The Pros As described in tate 20, 233 (1992), cutting is performed after 12 days When killed, most of the animals die from lung and lymph node metastases within 40 days. In the present invention, soluble MCP given orally by drinking water chronically, Affects the ability of MLL tumors to establish spontaneous metastases. To more fully illustrate the invention, reference is made to FIG. 1A of the drawings. On day 0, 1 × 10 on the hind limb⁶MLL cells were injected. On the fourth day, the primary tumor About 1cm in size^ThreeWhen the MCP is 0.01%, 0.1% or 1.0% (w: v) They were added continuously to drinking water (N = 8 in group, 2 experiments). Day 14, rats Was anesthetized and the primary tumor was removed by cutting the hind limb. M for drinking water The addition of CP did not affect primary tumor growth at any concentration ( Average tumor weight: control, 4.2 ± 0.26 gm; 0.01%, 4.7 ± 0.7 gm; 0.1%, 4.3 ± 0.37 gm; 1.0%, 5.0 ± 0.25 gm). After that, the experiment continued until the 30th day. All of the sacrifice became sacrifice. Then dissected. Animals have been drinking water during this time He was taking MCP constantly. Control and treated animals should be appropriately weighed Increased MCP treated animals showed no visible toxicity. Remove the lungs, Rinse with water and fix overnight with Bouin's solution. The number of rats that have undergone lung metastasis 0.1% (P <0.03) MCP (transferred rats) The rats were 7/14) (P <0.001) group (FIG. 1A) rats All markedly reduced in rats consumed 30 ± 4 ml per day . The number of MML tumor colonies was determined by counting with a dissecting microscope. MCP The lungs of the 1.0% treated animals averaged significantly more metastatic colony than the control group. Fewer knees (9 ± 4 controls compared to 1 ± 1 treatment group (P <0.05) (FIG. 1B) (Mann-Whitney test). The effect of MCP is It seemed to depend on its concentration in drinking water. 1C and 1D also have tumors Lungs of animals (C-control, D-1.0% MCP) are shown, showing developed surface M It emphasizes the effect of MCP in reducing the number of LL lung colonies. 1% MCP Significantly reduced the number of animals with ortholymph node disease (55% in controls, MCP treated). 13%, p <0.01). Treated animals do not suffer the apparent toxicity of MCP treatment Was. Animals gained weight as fast as controls. The daily water intake is , 30 ± 4 ml / rat in the control and treated groups. Hair tissue , Overall behavior, and stool color did not change. MCP is a cell carboxylate-binding galectin-3 molecule-mediated cell. MLL cells have been shown to be able to interfere with vesicle-cell interactions. It was examined whether or not to express a lectin-3 molecule. Like many other cancer cells Similarly, the MLL cells were subjected to the quantitative fluorescence flow cytometric analysis shown in FIG. ive fluorescence flow cytometric analysis) and Figure 2 (blot insertion) Extracted using the mono-specific rabbit anti-galectin-3 peptide antibody shown in On their cell surface as measured by immunoblotting of whole cells Express galectin-3. Tumor-endothelial cell attachment is thought to be a key event in the metastatic process You. Therefore, the effect of MCP on MLL endothelial cell interaction was examined. MC Confluent cell monolayer of rat aortic endothelial cells (RAEC) in the presence or absence of P The attachment of Cr-labeled MLL cells to is illustrated in FIG. 3A. FIG. 3A And 3B show that MCP is a potential inhibitor of MLL cell attachment to endothelial cells It turned out to be. MLL and RAEC cells were transformed with RPMI 1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Grow throughout the body. RAEC grows and conflues in tissue culture wells It became something. 2.4 × 10⁶Of MLL cells for 30 minutes with 5 μCi of Na5¹Cr O_FourIn 2 ml of serum-free medium with 0.5% bovine serum albumin at 37 ° C. And incubated. 10 additional washings per well, followed by^FiveML L cells (following extensive washing 10^FiveMLL cells per well) and then R Four times added to AEC monolayer. As can be seen in FIG. The binding of MLL cells in the absence or presence of MCP was evaluated. Cool cells Unbound cells were removed by washing three times in phosphate buffered saline. Cells Thereafter, the cells were solubilized with 0.1% NaOH for 30 minutes at 37 ° C., and the radioactivity was reduced to β-count. It was measured with a thermometer. Each point represents four human wells, and Was performed twice. Bars represent standard errors. As seen in FIG. 3B, 0.03% (w / V) confluent cells of RAEC in the absence (−−−) or presence of MCP The binding of MLL cells to the layers was measured over time. Due to the presence of 0.03% MCP The binding of MLL cells to RAEC was inhibited. RAEC10^FiveMLL cells Fluorescent MLL cells adherent to the cells were incubated for 30 minutes under 0.1% FITC. Bait (followed by additional washing) and cells were added to the RAEC monolayer. In the absence (FIG. 3C) or presence of 0.1% (w / v) MCP (represented by x160) Binding of MLL cells in (FIG. 3D). MLL cells quickly bind to RAEC monolayers. However, only a limited degree of cell binding was observed in the presence of MCP. Is obvious. The effect of MCP on the deposition process is shown in FIGS. 3C and 3D. Shown by the drawings. MLL cells were either free (FIG. 3C) or without 0.1% MCP. (FIG. 3D) Confluent rat endothelial cells in 0.5% bovine serum albumin. The layers were fluorescently labeled in suspension in FITC for 60 minutes. Culture It was cleaned to remove unattached cells and then photographed. In untreated cultures, Fluorescent MLL cells adhered and bound almost uniformly to the endothelial monolayer (FIG. 3C), but with 0.1% In the presence of MCP, most of the non-fluorescent cells Detected in association with RAEC monolayer (FIG. 3D). The ability of cells to grow in semi-solid media, i.e., Drug or antibody that can be used as a basis for cell transformation Utilizing the inhibition of such processes by E.I. Semi-solid Due to the growth of cells in the form medium, they require a number of in vivo metastatic steps (The steps of in vivo metastasis) New tumor focus needs to be transferred, invaded and established . The minimal support required for cell growth in this semi-solid medium ), And agarose (D-galactose and L-anhydrogalactose) Cells associated with their ability to interact with the rest of galactose) Interacts with the rest of the carbohydrate of glycoprotein via surface galectin-3 The ability of the tumor cells to work has been shown previously. That is, anti-galectin-3 mono It is established that clonal antibodies can inhibit tumor cell growth in agarose Have been. Further, the mouse mouse is usually treated with the mouse galectin-3 cDNA. Obtain solid-independent growth by transfection of fibroblasts . To examine the effect of MCP on MLL colony formation 0.5% agarose , MLL cells are 0.02% EDTA calcium and magnesium free (CMF) -Separated from a monolayer cultured in PBS solution and containing or containing various concentrations of MCP 4 × 10 during complete RPMI^ThreeThe cells were suspended at cells / mL. The cells are incubated at 37 ° C for 30 minutes. 1% agarose RPM at a volume ratio of 1: 4, incubated for 45 min and preheated at 45 ° C. The solution I was mixed at a volume ratio of 1: 1. 2 mL of the mixture is placed on a 6 cm diameter dish. Placed on a layer of 1% agarose. The cells are incubated at 37 ° C for 8 days. It was incubated, fixed, measured and photographed. FIG. 4A shows the number of colonies formed. , Measured by blinded obserber using inverted phase microscopy . Number of MLL colonies present in control due to presence of 0.1% MCP Was significantly suppressed (p <0.01, according to Mann-Whitney). Bars from three experiments Mean and S.D. Represents E. FIG. 4B shows growth with the addition of 0.1% (w / v) MCP × 160. FIG. 4C is a phase-contrast micrograph of MLL cells subjected to growth, and FIG. Things. As shown in FIG. 4A, MCP was administered in a dose dependent manner. MLL cell colony formation was suppressed in the galose. MCP was used for the MLL colony. Both the number and its size were suppressed (FIGS. 4B and 4C). In vitro Has no effect on the growth rate of MLL cells in a monolayer cultured in Is not shown), the inhibitory effect of MCP is not cytotoxic (cytotoxic) It turns out that it is cytostatic. MCP is used by other tumor cells A similar effect on performance, B16-F melanoma, UV-2237 fibrosarcoma, H On soft agar containing T-1080 human fibrosarcoma and A375 human melanoma, Form Ronnie. MCP binds MLL cells to galactose residues on agar Or carbohydrate-containing growth factor (s) and cell surface galectin-3 It is unclear if it will compete with combining with. Such a correlation exists (FIGS. 1 and 4), but also in vivo the M of tumor cell lung colony formation. It is unknown whether CP suppression is similar to suppression of colony formation in vitro. is there. The results presented herein demonstrate a novel, non-toxic, prevent spontaneous prostate cancer metastasis Sexual oral methods are provided. In preliminary experiments, we found that galectin-3 was Prostate cancer pathological tissue specimen and found to be present in human prostate cancer cell line PC-3 did. For immunohistochemistry, formalin-immobilized 5 μm of raffin is deparaffinized, rehydrated, and diluted with 1 mM sodium citrate. Microwaves (medium to high) were applied in the buffer solution for 10 minutes. After washing with PBS, section First-phase antibody rat anti-galectin-3-TI Incubated with B-166 monoclonal antibody. Next, the section is DPB S for 30 minutes and incubated with biotinylated anti-rat IgG , Washed, and avidin-biotinylated horseradish peroxidase, peroxidase Incubated with the kidase substrate 3'-3'-diaminobenzidine. Section Was counterstained with 3% methyl green and mounted on gelatin-glycerin. In FIG. The sections shown are from patients with invasive prostate cancer. PC-3 cell extract is immune Immunoblot was performed and human galectin-3 as described in the legend of FIG. It was analyzed for its presence. Galectin-3 expression in human prostate specimens Shows immunohistochemistry using TIB-166 anti-galectin-3 monoclonal antibody It was examined by. Galectin-3 is responsible for stromal staining and various normal epithelial stainings. It is mainly expressed in few prostate cancer cells (FIG. 5). Galectin with this antibody -3 staining is associated with intense nuclear, cytoplasmic, and cell surface staining You. Further studies indicate that galectins in normal and cancerous prostate tissue- 3 and the ability of MCP in inhibiting human prostate metastasis in nude mice Will be determined. After oral administration, MCP molecules are absorbed into the bloodstream, A natural source of tumor cell surface galectin required for successful tumor cell colony formation Gand (natural ligand) (group) was found to compete with recognition. Pectin molecule Since little is known about the characteristics, the active parts of the MCP and their blood Further work is underway to characterize the Qing level. MCP is MLL Since it has no effect on primary stage tumor growth or angiogenesis, the effect of MCP is In early stages of metastasis, tumor cells are more likely to occur than later, such as cell proliferation. Presumably inhibits the formation of alveolar emboli and inhibits the interaction of cancer cells with the endothelium of target organs It was found to be suppressed. Neutral citrus pectin (CP) and pH-modified citrus pectin (MCP) A highly branched and unbranched complex polysaccharide, Rich in sid residues and able to bind to the carbohydrate-binding domain of galectin-3 So that carbohydrate-recognition-mediated cell-cell and cell-matrix interactions The effect of CP and MCP on action was studied. MCP, not CP, goes to laminin B16-F1 melanoma cell adhesion and asialofetuin-induced blood-like (h emotypic) Aggregation was inhibited. Both MCP and CP are semi-solid, such as agarose. Inhibited anchorage-independent growth of B16-F1 cells in somatic medium. these The results indicate that the carbohydrate-recognition of galectin-3 by the cell surface is cell-extracellular matrix. Involved in the interaction of tumor cells and anchorage-independent growth of tumor cells and in vivo It will play a role in the embolization of More specifically, endogenous vertebrate galactoside-binding lectins have been identified. And is characterized by differences between tissues and cells. Lectins are based on their size. The molecular weights are クラス 14 kDa and 3030 kDa. And recently called galectin-1 and galectin-3, respectively. Galectin-3 As a wide range of molecules, i.e., murine 34 kDa (mL-34) and human 31 kDa (hL-31) tumors Related galactoside-binding lectin, 35 kDa fibroblast carbohydrate-binding protein ( CBP35), IgE-binding protein (εBP), 32 kDa macrophage non-integer Phosphorus laminin-binding protein (Mac-2), and rat, mouse, and human There is a type of 29 kDa galactoside-binding lectin (L-29). Molecular cloning Studies revealed that the polypeptides were identical. Galectin-3 Are two structural domains, an amino-terminal domain containing a collagen-like sequence, and Includes a spherical carboxy-terminal domain encompassing the tosid binding site. Galact mentioned above All of the sid-binding lectins share one or more of the same neutral ligands It is not yet known whether or not. Galectin-3 is due to its carbohydrate binding activity Is considered an S-type lectin that requires reducing conditions, but recent studies have Opposite evidence is given. In some aspects of the analysis, galectins are complementary Cell-cell and cell-matrix phases by recognizing and binding glycoconjugates Participate in interactions and play important roles in a variety of normal and pathological processes. Has been demonstrated. Galectin-3 is activated macrophage and oncogenically transforms. And is highly expressed by cells that metastasize and metastasize. Accelerated expression of the polypeptide Has the ability to enhance anchorage-independent growth, hematoid agglutination, and tumor cell lung colonization Which indicates that galectin-3 promotes embolization of tumor cells in the circulatory system Suggests that it promotes metastasis. We have previously shown that intravenous injection of CP was B16- MCP enhances lung colonization of F1 murine melanoma cells while lung colonization Reported a reduction in The lung colonization enhanced by CP is probably Mostly due to its ability to promote blood-like aggregation, MCP Prevention mechanisms are not yet well established. Laminin, the major non-collagenous component of the basement membrane, is an N-linked glycoprotein. A poly-N-acetyllactosamine sequence that carries It is involved in growth, differentiation, invasion and metastasis. Poly-N-acetyl with high affinity Galectins that bind oligosaccharides containing lactosamine sequences also It binds to the carbohydrate side chains of nin in a specific sugar-dependent manner. Use CP and MCP to further study the functional properties of galectin-3 They were associated with galectin-3 in B16-F1 murine melanoma cells It was tested whether it affected the properties. We believe that (a) not MCP but MCP Inhibiting cell adhesion to laminin; (b) MCP is asialofetuin-induced Bleeding Inhibiting liquid-like aggregation while CP promotes it; and (c) CP and MC Both P were found to inhibit anchorage-independent growth in semi-solid media. CP and EHS laminin purchased from Sigma (St. Louis, Missouri) did. MCP is converted from CP by pH modification according to the method of Albersheim et al. Prepared. Asialofetuin was replaced with fetuin (spiro method, Grand Island Biolog ical Co., Grand Island, New York)._TwoSO_FourMedium 8 (0 ° C, 1 hour). Record recombinant galectin-3 somewhere else As mentioned, one-step purification through an asialofetin affinity column More extracted from bacterial cells. Uses recombinant galectin-3 eluted with lactose Prior to extensive dialysis against CMF-PBS. Anti-galectin-3 monochrome Was obtained from Dr. Lotan of M.D.Anderson at the University of Texas. Western Horseradish peroxidase (HRP) -conjugated rabbit anti-rat IgG + IgM and 2,2'-azino-di (3-ethylbenzthiazolinesulfonic acid) (ABTS) Units were purchased from Zymed, South San Francisco, California. B16-F1 Mouse melanoma cells were treated with 10% heat-inactivated fetal calf serum, non-essential amino acids, 2 mM Dulbecco's Modified Eagle's Minimal Medium (DMEM) supplemented with glutamine and antibiotics Cultured. The cells are_TwoMaintained at 37 ° C in a humid atmosphere of 7% and 93% air . Cell adhesion to laminin Tissue culture wells of a 96-well plate were prepared using EHS laminin CA²⁺And Mg²⁺H Precoat with a phosphate buffer solution (pH 7.2) containing Lee's salt overnight at 4 ° C. (2 μg / well), and the remaining protein binding site was replaced with 1% bovine serum albumin (BSA). Blocked with CMF-PBS solution for 2 hours at room temperature. Cells are treated with 0.02% EDTA Was collected in a CMF-PBS solution and suspended in serum-free DMEM. DMEM The suspended cells can be used alone or with various concentrations of CP or MCP in each well. 5 × 10^FourAdded one by one. After 2 hours 15 minutes incubation at 37 ° C, adhesion Unused cells were washed away with CMF-PBS. Fix the adherent cells with methanol and copy I took the truth. The relative number of adherent cells was determined by the method of Olier et al. simply In brief, cells were stained with methylene blue and HCl-ethanol Was added. Optical density (650 nm) was measured with a plate reader. Isomorphic aggregation induced by asialofetwin Cells were detached with a 0.02% EDTA solution in CMF-PBS, and the cells CMF-P with or without allofetin and 0.5% CP or 0.5% MCP 1 × 10 for BS⁶Suspended at cells / ml. Aliquots containing 0.5 ml of cell suspension, The mixture was placed in a siliconized glass test tube and stirred at 37 ° C. and 80 rpm for 60 minutes. Next Then, fixation is performed by fixing cells with a 1% formamide solution in CMF-PBS. More closed. The sample is used to count the number of single cells and the resulting agglutination It was calculated by the following equation. (1-Nt / Nc) × 100 In the above formula, Nt and Nc are the tested compound and control, respectively. It means the number of single cells present in the buffer (CMF-PBS). Binding of galectin-3 to MCP 96 wells were coated with CMF-PBS containing 0.5% MCP and 1% BSA, Dry overnight. Drain wells and add CMF- containing 0.1% BSA and 0.05% Tween-20. After washing with PBS (solution B), the presence or absence of 50 mM lactose, 0.5 Gas serially diluted with CMF-PBS (solution A) containing 5% BSA and 0.05% Tween-20 Lectin-3 was added and incubated for 120 minutes. Solution dissolved in solution A Anti-galectin-3 was added, incubated for 60 minutes, washed with solution B, HRP-conjugated rabbit anti-rat IgG dissolved in solution A Incubate with IgM for 30 minutes Privation. After washing, in each well by adding ABTS The relative amounts of the enzymes were confirmed. The degree of hydrolysis was measured at 405 nm. Colony formation in semi-solid media Cells are detached with 0.02% EDTA in CMF-PBS and various concentrations of C 1x10 in complete DMEM with or without P or MCP^ThreeSuspended at cells / ml. The cells were incubated at 37 ° C for 30 minutes and distilled water-DME pre-heated to 45 ° C. M (1: 4, vol / vol) in 1% agarose solution in 1: 1 (vol / vol) ). Aliquot a 2 ml aliquot of the mixture to 1% in a 6 cm diameter petri dish The agarose was placed on the surface of the precast layer. Incubate cells at 37 ° C for 14 days And add 2.6% glutaraldehyde in CMF-PBS After fixation of the cells, the colonies formed are measured using an inverted phase contrast microscope. Was. Laminin acts as a ligand for soluble galectin-3, and B16-F1 cells Has previously been shown to express galectin-3 on its cell surface. This with the effect of CP and MCP in lung transplantation of intravenously injected B16-F1 cells These results assess the possible role of cell surface galectin-3 in such a way. First, to test the effect on the adhesion of B16-F1 cells to laminin Prompted us. As shown in FIGS. 6 and 7A-C, MCP was administered in a dose dependent manner. Significantly inhibited cell adhesion to laminin, while CP inhibited cell binding to laminin. The effect was unclear in any of the two cases. Galectin-3 Lactose Monosaccharide inhibitors do not inhibit cell adhesion to laminin at concentrations as high as 100 mM. (Data not shown). Competitive utilizing soluble recombinant galectin-3 The binding assay would inhibit cell adhesion to laminin, and the anti-Mac-2 Similar results were obtained for noclonal antibodies (data not shown), indicating that cells were laminin May use an integrin to bind to the protein nucleus of MC The inhibitory effect of P is on galectin-3 and N-acetyllactosaminyl side on laminin. Implies that it cannot exert itself on interfering interactions between chains I do. Furthermore, the anti-Mac-2 monoclonal antibody is a carbohydrate of galectin-3. Rather than towards the binding domain, towards its N-terminus, and thus CP and The exact mechanism by which MCP inhibits adhesion, in contrast to lactose, is unknown Points remain. The inhibitory effect of MCP was that MCP (5%) Because it did not affect any of the growth in the tubes, Absent. The nature of tumor cells undergoing homotypic aggregation in vitro and their translocation in the human body A good correlation has been established between the possibilities. B16 melanoma cell population Produces more lung colonies after intravenous injection than single cells. Furthermore, anti-Ma The c-2 monoclonal antibody is a cell surface galectin-3 polypeptide that is homotypically coagulated. Aggregates and then their interaction with the glycoprotein side chains. It has been implicated in suppressing asialofetuin-induced homotypic aggregation (14). FIG. As shown in FIGS. 9A and 9A-C, MCP significantly reduces the formation of homozygous aggregates. On the other hand, CP raises it. Most likely, unbranched MCPs are Mask the interaction between tin-3 and the galactoside residue of asialofetuin to reduce Mimic the behavior of a specific sugar inhibitor, lactose, to give a slight homotypic aggregation Is the thing. Conversely, the structural properties of the branched carbohydrate polymer indicate that CP Assuming that it acts as a cross-linking agent for the bridge between adjacent cells, which enhances formation Conceivable. At the same time, it is important that MCPs Disrupts cell-cell and cell-matrix interactions that are crucial This may suggest that dislocations can be prevented. MCP that inhibits adhesion of B16-F1 cells to laminin and homotypic aggregation Is caused by its cell surface interaction with galectin-3 It is considered to be. The reason is that CP is B16-F in a lactose-dependent manner. This is because binding to one cell surface has been conventionally shown. Galectin-3 In order to handle binding to MCP, an enzyme-linked enzyme adsorption assay was used, where recombination was performed. The galectin-3 binds to the immobilized MCP in a dose-dependent manner; and The linkage was found to be completely blocked by lactose (FIG. 9). This These results indicate that the inhibitory effect of MCP on isomorphic aggregation is It can be attributed to binding to the Kutin-3 molecule. On the other hand, C How MCP but not P reduces adhesion of B16-F1 cells to laminin It is not clear if. C, a complex branched polysaccharide polymer By modifying the pH of P, unbranched carbohydrate chains having the same sugar composition are produced. The cell surface galectic has a higher affinity than the CP when MCP is used. It is thought to bind to the N-3 molecule. Anti-integrin antibody in murine B16 Considering the fact that it inhibits the binding of the laminin cell to laminin substrate, MCP stereochemically recognizes laminin recognition by integrin class laminin receptor Inhibits or inhibits cell surface galectin-3 and poly-N-acetate on laminin Interaction with the tyractose amine chain is implicated in cell adhesion to laminin. It can be assumed that it works in concert with tegulin. Galectin-1 is Because it is a secreted protein, it has the same sugar specificity as galectin-3 Interaction between galectin-1 and MCP is associated with the binding of B16-F1 cells to laminin. The possibility of affecting the process of reducing adhesion and isomorphic aggregation is most excluded. It is thought that there is a high possibility that it should be done. The ability of a cell to grow on semi-solid media, i.e., "fixation-independent", depends on the transformation of the cell. It is used as a reference for exchange. The reason is that this characteristic is usually This is because it is shown only by sex cells. Conventionally, tumor cells The ability to interact with glycoprotein carbohydrate residues through Kutin-3 is a factor in the tumor cell. Vesicles are made of agarose (a polymer of D-galactose and L-anhydrogalactose) The ability to interact with lactose residues, and the ability to form colonies in this semi-solid medium. It was suggested to be related to efficiency. Furthermore, anti-galectin-3 monoclonal The antibody inhibits tumor cell growth in agarose; and An inverse relationship has been shown between expression and suppression of the transformed phenotype I have. Transfection of normal mouse fibroblasts with mouse galectin-3 cDNA The immobilization results in an anchorage-independent growth characteristic. Cells are grown in semi-solid medium. Cell surface galectin-3 may play a major role in lengthening To further demonstrate that C16 is a fixation-independent growth of B16-F1 melanoma cells. The effects of P and MCP were investigated. As shown in FIG. 11, CP and MCP are: Growth of B16-F1 cell colonies in semi-solid matrices in a dose-dependent manner Inhibited by the formula. Similarly, lactose also increases fixation-independent growth in a dose-dependent manner. Inhibited by formula (data not shown). CP- and MCP dose-dependent inhibitory effects The results were not limited to B16-F1 melanoma cells. Soft agar medium -2237-10-3 murine fibrosarcoma cells, HT1080 human fibrosarcoma in vivo The growth of cells and A375C1.49 human melanoma cells were similarly inhibited. . Soluble CP and MCP bind to galectin-3 binding to agarose galactose Complete with the base residues and provide minimal support for the matrix necessary for cell production. Removal of vesicles may clearly inhibit growth . In addition, CP and MCP, like the anti-galectin-3 antibody, and galectin-3 Behaves like an antagonist of interacting yet unrecognized glycoconjugate growth factors Yes Or that CP and MCP bind to known growth factor membrane receptors. It can be argued that the access is sterically hindered. However, Invit B) Fixation-dependent growth and tumorigenesis of B16-F1 cells in syngeneic mice Gender was not reduced by MCP (0.5%), thus eliminating the above argument. Likely to be able to The ability of cells to grow on semi-solid media depends on the characteristics of the cells. Acquisition of cell surface galectin-3, as used as a basis for transformation, This is considered to be the initial stage of the post-cascade.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ラズアヴラハムアメリカ合衆国ミシガン州 48033 ウェストブルームフィールドマックネイコート 4251 (72)発明者ピエンタケニスジェイアメリカ合衆国ミシガン州 48084 トロイランサー 2176────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, M C, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF, CG , CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (KE, MW, SD, SZ, UG), AM, AT, AU, BB, BG, BR, BY, CA, C H, CN, CZ, DE, DK, EE, ES, FI, GB , GE, HU, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LK, LR, LT, LU, LV, MD, MG, MN, M W, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD , SE, SG, SI, SK, TJ, TM, TT, UA, US, UZ, VN (72) Inventor Raz Avraham United States Michigan 48033 U Est Bloomfield McNay Coat 4251 (72) Inventor Pienta Kennis Jay United States Michigan 48084 Roy Lancer 2176

Claims

[Claims] 1. Having orally administering an effective amount of modified pectin to a mammal affected by cancer A method of treating and treating cancer in a mammal. 2. The method according to claim 1, wherein the modified pectin is pH-modified citrus pectin. 3. The pH-modified citrus pectin has an apparent average molecular weight of about 1 to about 15 Kd. The method of claim 2. 4. The method according to claim 1, wherein the cancer is prostate cancer. 5. The method according to claim 1, wherein the cancer is human prostate cancer. 6. The modified pectin is present as a mixture with a pharmaceutically acceptable digestible carrier. The method described. 7. The method according to claim 1, wherein the treatment of cancer is suppression of metastasis. 8. Mammal cancer with a mixture of modified pectin and a pharmaceutically acceptable digestible oral carrier. Therapeutic treatment compositions. 9. The composition according to claim 8, wherein the modified pectin is pH-modified citrus pectin. Ten. The pH-modified citrus pectin has an apparent average molecular weight of about 1 Kd to about 15 Kd. The composition according to claim 9, wherein 11． 4. The pH-modified citrus pectin has an apparent average molecular weight of about 10 Kd. The described method. 12． The pH-modified citrus pectin has an apparent average molecular weight of about 10 Kd. A composition as described. 13. The method according to claim 1, wherein the modified pectin is water-soluble. 14. 9. The composition according to claim 8, wherein the modified pectin is water-soluble. 15． A method for suppressing cancer, comprising orally administering a modified pectin to a mammal.