【発明の詳細な説明】
単糖類、オリゴ糖類または多糖類を固相に
結合させる方法
本発明は、単糖類、オリゴ糖類または多糖類を第二級アミノ基を保持している
固相に結合させる方法、この方法により作られる固相、及び単糖類、オリゴ糖類
または多糖類に結合する物質を検出するための試験方法に関する。
その重篤さと発生頻度の高さより、インフルエンザ菌（Hemophilus influenza
e：Hi）感染症は、小児感染の研究において特別な地位を占めている。血清学的
には、インフルエンザ菌は二つの系統、すなわち、被膜された系統と被膜されて
いない系統に分類される。片利共生で、被膜されていない系統は気道上部の粘膜
にてコロニーを形成し、特に、以前に障害を受けた上皮組織に関連して病原性を
有する。したがって、これらはしばしば、副鼻腔炎、耳炎及び慢性気管支炎の原
因因子として検出される。被膜された系統に感染するのは、生後４か月から５歳
までの乳幼児が圧倒的に多い。
被膜はポリリボシルリビトール・リン酸（polyribosylribitol phos-phate：P
RP）から構成されており、被膜された系統だけが血液原性の感染を開始すること
ができることから、この被膜は発病力に決定的である。症例の９５％以上におい
て、この感染はｂ血清型（Hib）により引き起こされる。他の血清型のａからｆ
は、極めて稀な症例の感染において病因となるに過ぎない。
1990年にドイツへＨｉｂワクチンが導入される以前は、重篤なＨｉｂ感染の発
病率は５歳以下の100,000人の乳幼児に対して３３人であった。これは大ざっぱ
にみて欧州の他国における頻度に対応する。症例全体の
約2/3において、Ｈｉｂによる感染は脳膜炎又は喉頭蓋炎を引き起こす。Ｈｉｂ
感染のさらに異常な症例発現として、菌血症、敗血性関節炎、フレグモーネ、骨
髄炎、心膜炎及び肺炎が包含される。
しかしながら、原発性肺炎の原因因子としてのＨｉｂの発生頻度は明確ではな
い。肺の生検から得られた結果を基礎にした場合、Ｈｉｂは肺炎の症例の１０％
においても原因因子であることが示され得る。
Ｈｉｂ脳膜炎はとびぬけて危険である。この症例の大部分は後遺症を伴わず完
全に回復するが、乳幼児の約２０％は、難聴、脳発作障害及び精神障害といった
、その結果として生ずる重篤な神経障害を伴う疾患の中で生き残るに過ぎない。
文献より得られたデータによれば、Ｈｉｂ脳膜炎の死亡率は１.６から７％の間
である。
動物試験において、被膜ＰＲＰに対する抗体は、受動的又は能動的免疫のいず
れによっても防御的な機能を有し、この菌の補体依存性溶解を示す。ＰＲＰ抗体
のレベルが０.１５μg／ml以上の場合、侵入性インフルエンザ感染に対する防御
とみなすことができる。ＰＲＰ抗体のレベルが低いこととＨｉｂ感染を獲得する
蓋然性との関係も、抗体のレベルから得られる自然の経過より明らかである。
新生児に与えられた母体由来の抗体のために、新生児は比較的高い抗体価を有
している。このような抗体は生後６か月まで連続的に減り、その後生後１８か月
まで低くとどまる。その後、生後１８か月、それは免疫系の個体発生が終了し自
然との接触が免疫応答を誘導する時期であるが、その時期を経過した乳児におい
て抗体は再び増加する。この理由から、Ｈｉｂ感染は生後３か月以下及び５歳以
上の幼児において比較的稀である。しかしながら、Ｈｉｂ感染の年齢に依存した
発生頻度には顕著な人種間の相違がある。たとえば、エスキモーの乳幼児に比較
してドイツの乳幼児では、
Ｈｉｂの脳膜炎は著しく遅い時期に発生する。自然感染の後のインフルエンザ特
異的抗体のレベルの調査は、特異的免疫の発生には年齢に依存した大きな相違が
あることを示した。何人かの研究者により得られた結果は、生後１８か月より若
い患者の圧倒的大多数が、０.１５μg／ml以上のインフルエンザ特異的な抗体濃
度を発生しなかったとの事実を強調している。生後１８か月以上の患者において
は、それよりはるかに好ましい態様で免疫の発生が進行する。これらの結果は小
児科医に対し、生後１８か月より若い患者はＨｉｂ感染の後に危険集団を構成す
ること、及び能動的な免疫とそれに続く血清学的なモニターが行われなければな
らないことを明確に示している。
純粋なＰＲＰワクチンの活性は不満足であることにより、担体／ハプテン複合
体に基づき、乳幼児においても活性を持つ、新しい結合型ワクチンがここ数年来
開発されてきた。これらの新しい結合型ワクチンの原理は、弱い免疫原であるＰ
ＲＰを強力な抗原蛋白質へカップリングさせるというものである。これは、Ｔ細
胞−非依存性の抗原からＴ細胞−依存性の抗原へスイッチされる結果となる。こ
れは免疫反応における変化へと導かれる：
→ 抗体価は著しく高い
→ 二度目のワクチンはブースター反応に帰着する
→ ＩｇＭ抗体反応は、ＩｇＧ抗体反応へとスイッチする。
いくつかの新しい結合型ワクチンが開発されてきた：PRP-CRM（CRM及びCRM 19
7＝修飾ジフテリア毒素）、PRP-D（D＝ジフテリア毒素）、PRP-OMP（OMP＝髄膜
炎菌蛋白質複合体）及びPRP-T（T＝破傷風トキソイド）。
現在、４種のＨｉｂ結合型ワクチンがドイツで認可されている。個々のＨｉｂ
結合型ワクチンの間の免疫原性に関しては相違がある。それで、単
回の接種の後では、PRP-OMPワクチンはとびぬけて高い抗体レベルを達成する。
一方、PRP-Dを用いてのワクチン接種が繰り返し行われた場合、基底値での免疫
にもかかわらず、もっとも高いブースター応答が得られる。免疫後の防御力価は
≧１μg 抗PRP／ml とみなされ、Ｈｉｂの自然感染後の力価≧0.15μg／mlと対
照をなす。
免疫回数を減らす目的でワクチン併用剤を開発するとの状況の中で、ワクチン
併用剤の個々の割合は、負の妨害を何ももたらさないということが保証されるよ
う注意が払われなければならない。たとえば、４価のワクチン DPTHib を形成す
るために、Ｈｉｂワクチンを共存する併用剤ＤＰＴと結合させた場合、個々のワ
クチン抗原に対する血清転換力価（serocon-version factor）は、一方ではＤＰ
Ｔワクチン、他方ではＨｉｂワクチンを用いての順を追った互い違いのワクチン
投与により達成されるものと同程度のオーダーの高さでなければならない。
従来、Ｈｉｂワクチンの免疫原性の評価および患者血清中の抗Ｈｉｂ抗体を測
定するには、放射性抗原結合試験（radioantigen-binding test：RIA）のみが意
味のあるものとしてみなされ、関係する委員会や認可団体により承認されてきた
。
ＲＩＡはＰＲＰに結合しそれを沈殿させることができる抗体の様々なイソタイ
プやサブクラスを識別できないとの不利益を被る。さらに、放射性ヌクレオチド
を用いての作業はコストがかかり、作業の医学的安全性の見地より問題があり、
環境に弊害をもたらす。
ＲＩＡの代替として、さまざまなグループが、抗体価を測定するためのELISA
形式における試験系を構築しようとしてきた。この点における問題点は、Ｈｉｂ
特異的な多糖類、すなわちＰＲＰが、従来の（例えば、ポリスチレン製の）ミク
ロタイター・プレートに十分に結合しないことであ
る。この理由のため、例えば、ＰＲＰをヒト血清アルブミンに結合させることに
よりその結合比を増加させる試みが行われた(フィップスら、J．Immunol．Metho
ds 135，121-128，1990年)。他の試みは、ＰＲＰをチラミン化することにより修
飾し、この化学的に修飾された多糖類を通常用いられるミクロタイター・プレー
トに結合することからなっていた(クリステンソン及びベンゾン、Acta Patholog
ica et Microbiologica Scandinava 100，142-146，1992年)。しかしながら、こ
の化学修飾はネオ抗原の形成に帰着し、誤った正の、又は誤った負の結果へと結
びつくことがある。他の方法は、ミクロタイター・プレートを、たとえばポリ−
Ｌ−リジン又はプロタミンで予備保温し、化学的には酸として反応するＰＲＰを
これらの塩基性成分を経由して間接的にミクロタイター・プレートに結合させる
ことにある。
しかしながら、上述の原理に従って構築された ELISA は極めて困難を伴いや
すく、感受性が低く、また、サンプルの抗体又は結合体の非特異的な結合へと結
びつきやすい。
したがって、本発明は、単糖類、オリゴ糖類または多糖類を検出する改良され
た試験系を提供する目的に基づいていたもので、この試験系はもはや上述の不利
益を示さない。
この目的は、単糖類、オリゴ糖類または多糖類をさらに効率よく固相に結合さ
せる有利な方法、及びこの方法により得ることができる有利な、例えばミクロタ
イター・プレートの形による固相の提供により達成された。
驚くべきことに、通常用いられるミクロタイター・プレートにおいて使用され
る公知の固相とは対照的に、第二級アミノ基がスペーサーを介して結合したポリ
スチレンのような固相(第二級アミノ基運搬固相：secondary amino group-carry
ing solid phase＝SASP）が、ＰＲＰのような種々の構
造の成分に対し高い結合能を有することが見いだされた。
ＳＡＳＰの調製物は、たとえば欧州特許出願 0 319 957に記載されている。
たとえば、ＰＲＰはＳＡＳＰに直接結合できるのに対し、表面上で第二級アミ
ノ基をまったく運搬せず、特にウェル当たり６μg以上のＰＲＰがミクロタイタ
ー・プレートのコーティングに使用された場合は運搬できない、従来用いられた
ポリスチレン製のミクロタイター・プレートのような通常用いられる固相には直
接結合することはできない。商業的に入手可能
キルデ．カムストラップ．私書箱280号，ヌンクＡ／Ｓの登録商標）は、極めて
適切なＳＡＳＰの一例である。標準的な商品であるヌンクA／S U8ミクロタイタ
ー・プレートは、従来用いられた固相の一例である。したがって、ＳＡＳＰは、
ＰＲＰ−特異的抗体を測定するのに適切で、活性を失うことなく保存することも
できるミクロタイター・プレートを製造するのに極めて適している。このような
方法で調製された PRP ELISA はＰＲＰに対する抗体の正確な測定に極めて適し
ており、ELISA がＲＩＡの代替として使用され得るように、これにより得られる
値はＲＩＡにより得られる値と相関している。
本発明は結果的に、多糖類が二官能性の試薬の存在下でＳＡＳＰの第二級アミ
ノ基と反応することにより特徴づけられる、第二級アミノ基を運搬する固相（SA
SP）へ多糖類を結合させる方法に関する。
これらの具体例として、肺炎球菌(Pneumococci)、たとえば、タイプ３、６、
８、１４、１９又は２３から得られた多糖類、又はインフルエンザ菌(Hemophilu
s influenzae：Hi)、特に好適にはＨｉｂのＳＡＳＰへの結合に関するものが好
適である。本発明による、特に極めて好適な上述の方法
の具体例は、診断に重要なＨｉｂの被膜から得られたポリリボシルリビトール・
リン酸に関する。
これらの方法は、また、二官能性試薬として、カルボジイミド又はＮ−ヒドロ
キシスクシンイミドのいずれか、又は両方の物質を使用する発明に対応して好適
である。この目的に適した方法は、例えばラスムセン S.E.,Ann．Biol．Clin．(
1990)，48，647-650に記載されている。
本発明はさらに、本発明の方法のひとつにより製造することができ、好適には
ミクロタイター・プレートの形である固相（SASP）に関する。
本発明の固相は、上述の単糖類、オリゴ糖類または多糖類のひとつに結合する
物質、好適には抗体を検出する試験方法を確立するために使用され得る。Hib PR
P に対する抗体を検出するための ELISA は、例えば、本発明に特に極めて好適
である。
下記に続くように、本特許出願の基礎をなす発明は、ELISA 形式における抗Ｐ
ＲＰ試験の構築を記載する実施例によりさらに説明される。これらの実施例はヒ
ト血清における抗ＰＲＰ抗体を測定するために提供されるが、脳脊髄液や臍帯血
のような他のヒト体液から得た抗体の測定も、マウス、ウサギ、ヒツジ、及び（
他の）すべての通常用いられる実験動物のような非ヒト由来の組織から得られた
抗体の測定と同じであると明確に説明されている。ＰＲＰを検出するための ELI
SA は本特許出願に記載されているが、その ELISA はＰＲＰに対するモノクロー
ナル抗体の濃度を測定するためにも用いられ得る。肺炎球菌の多糖類のような好
適な糖抗原
イター・プレートに結合した場合、類似の態様で構築された ELISA は、他の単
糖類、オリゴ糖類または多糖類に対する抗体を測定するために使用され得る。
実施例 １
ミクロタイター・プレートのコーティング
ＰＲＰ抗原は、１％Ｎ−(３−ジメチルアミノプロピル)−Ｎ−エチルカルボジ
イミド塩酸塩溶液に１μg／ml の濃度で溶解した。ミクロタイター・プレートを
ウェル当たり１００μl の抗原溶液でコートし、密封した後に３７℃で１８時間
保温した。その後ミクロタイター・プレートをＰＯＤ洗浄液（200μl／ウェル）
で２回洗浄し、シリカゲル上で２日間乾燥させた。このような方法で調製したミ
クロタイター・プレートは、それぞれの場合、二つの乾燥カプセルとともに平ら
なアルミニウム・バッグ中に封止し、次に使用するまで４℃で保存した。
実施例 ２
試験の実施
ミクロタイター・プレートへの抗体の非特異的な結合を阻止するために、２０
％のヒツジ血清を含む１００μl のＰＢＳ、ｐＨ７.２を各ウェルに注入し、そ
の後プレートを密封し、３７℃で１時間保温し、その後ＰＢＳ、
ルはＰＢＳ、ｐＨ７.２＋２％ヒツジ血清で予め１：１０から１：100に希釈し、
２重決定法として２倍段階希釈で８列目まで、ミクロタイター・プレート上にロ
ーディングした。プレートは密封し３７℃で６０±５分間保
３回洗浄した。
その後、100μl の抗ヒトIgG−POD結合体（POD＝ペルオキシダーゼ）（PBS、p
H 7.2＋20％のヒツジ血清で１：10000希釈）を各ウェルに注入し、プレートは密
封し３７℃で６０±５分間保温した。プレートはＰＢＳ、
ゲン溶液を加えた。暗所で３０分間室温で保温した後、１００μl の停止液を各
ウェルに添加することにより反応を終了した。プレートを４５０nmで光度計によ
る評価をする。
実施例 ３
ＲＩＡ値と ELISA 値の比較
実施例として、一方ではラジオイムノアッセイ（RIA）により、他方ではここ
で記載する ELISA を使用することにより測定されたヒト血清の抗体価を以下の
表に列挙する。
ここで示された ELISA は、誤った正の値を測定しなかった。このことは、Ｒ
ＩＡでは０.１μg／ml 以下の抗ＰＲＰ抗体価しか有さず、肺炎球菌多糖類のよ
うな他のバクテリアの多糖類に対する抗体を高濃度で有するヒト血清は、ELISA
においても抗体価を示さず、抗体値は ELISA でのカットオフ値以上であること
を意味する。
実施例 ４
ＰＲＰ−特異的抗体の測定は、ヒトの研究材料に単純に限定されない；例えば
、マウス抗ＰＲＰ抗体もこの試験系で測定することができる。ヒトＰＲＰ抗体を
決定するために使用されたもの以外の保温緩衝液、すなわち、
ス抗ＰＲＰ抗体を測定するために有利に使用される。
リングベルケＡＧの登録商標である)。
実施例 ５
肺炎球菌のタイプ６、８、１９又は２３に特異的な多糖類抗原を、実施
せた場合、ＰＲＰの結合の場合と同じようにこのケースにおいても、例えばポリ
スチレン製のような従来用いられたミクロタイター・プレートに比較して実質的
に改良された、肺炎球菌の多糖類の結合が以外にも観察された。逆に、肺炎球菌
タイプ３及び１４の多糖類は従来の ELISA プレートにも十分に結合した；それ
にもかかわらず、これらの多糖類のCovaLink
型特異的肺炎球菌多糖類抗原に対する抗体の測定は、他の型特異的多糖類を添
加することにより負の影響を受けなかった。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Method of binding monosaccharide, oligosaccharide or polysaccharide to solid phase The present invention relates to binding monosaccharide, oligosaccharide or polysaccharide to a solid phase having a secondary amino group. The invention relates to a method, a solid phase produced by this method, and a test method for detecting substances that bind to monosaccharides, oligosaccharides or polysaccharides. Due to its severity and high frequency, Hemophilus influenza e (Hi) infections have a special place in the study of pediatric infections. Serologically, Haemophilus influenzae is divided into two strains: coated and uncoated. In commensal, uncoated lines colonize the mucosa of the upper respiratory tract and are pathogenic, particularly in relation to previously damaged epithelial tissue. Therefore, they are often detected as causative agents of sinusitis, otitis and chronic bronchitis. Infants from 4 months to 5 years of age are most prevalent in infecting the coated strain. The coating is composed of polyribosylribitol phos-phate (P RP) and only the coated strain is capable of initiating hematogenous infections, so this coating is determined to be virulent. It is a target. In more than 95% of cases, this infection is caused by serotype b (Hib). Other serotypes a to f are only etiological in very rare cases of infection. Before the introduction of the Hib vaccine to Germany in 1990, the incidence of severe Hib infection was 33 per 100,000 infants under 5 years of age. This roughly corresponds to the frequency in other European countries. In about 2/3 of the total cases, infection with Hib causes meningitis or epiglottitis. More abnormal case manifestations of Hib infection include bacteremia, septic arthritis, Fregmone, osteomyelitis, pericarditis and pneumonia. However, the frequency of occurrence of Hib as a causative factor of primary pneumonia is not clear. Based on results obtained from lung biopsies, Hib can be shown to be a causative factor in 10% of cases of pneumonia. Hib meningitis is by far the most dangerous. Although the majority of this case recovers completely with no sequelae, about 20% of infants survive in diseases with consequent severe neuropathy, such as hearing loss, cerebral seizure disorders and mental disorders. Not just. According to data obtained from the literature, the mortality rate of Hib meningitis is between 1.6 and 7%. In animal studies, antibodies to capsular PRP have a protective function, whether by passive or active immunization, and show complement-dependent lysis of the bacterium. A PRP antibody level of 0.15 μg / ml or more can be considered as protection against invasive influenza infection. The relationship between low levels of PRP antibody and the probability of acquiring Hib infection is also evident from the natural course obtained from antibody levels. Newborns have relatively high titers because of maternal antibodies given to the newborn. Such antibodies decrease continuously until 6 months of age and then remain low until 18 months of age. Then, 18 months after birth, when the ontogeny of the immune system ends and contact with nature induces an immune response, the antibodies increase again in infants after that time. For this reason, Hib infection is relatively rare in infants less than 3 months of age and 5 years of age or older. However, there are significant racial differences in the age-dependent incidence of Hib infection. For example, Hib meningitis occurs significantly later in German infants than in Eskimo infants. Examination of the levels of influenza-specific antibodies after natural infection showed that there was a large age-dependent difference in the development of specific immunity. The results obtained by some researchers highlight the fact that the overwhelming majority of patients younger than 18 months did not develop influenza-specific antibody concentrations of more than 0.15 μg / ml. I have. In patients older than 18 months, the development of immunity proceeds in a much more favorable manner. These results indicate to pediatricians that patients younger than 18 months constitute a risk population following Hib infection, and that active immunization and subsequent serological monitoring must be performed. Is shown in The unsatisfactory activity of pure PRP vaccines has led to the development of new conjugate vaccines based on carrier / hapten conjugates that are active in infants in recent years. The principle of these new conjugate vaccines is to couple a weak immunogen, PRP, to a strong antigen protein. This results in a switch from a T cell-independent antigen to a T cell-dependent antigen. This leads to changes in the immune response:-antibody titers are significantly higher-the second vaccine results in a booster response-the IgM antibody response switches to an IgG antibody response. Several new conjugate vaccines have been developed: PRP-CRM (CRM and CRM197 = modified diphtheria toxin), PRP-D (D = diphtheria toxin), PRP-OMP (OMP = meningococcal protein conjugate) Body) and PRP-T (T = tetanus toxoid). Currently, four Hib-conjugated vaccines are licensed in Germany. There are differences regarding the immunogenicity between individual Hib conjugate vaccines. So, after a single inoculation, the PRP-OMP vaccine achieves exceptionally high antibody levels. On the other hand, repeated vaccination with PRP-D results in the highest booster response despite basal immunity. The protective titer after immunization is considered ≧ 1 μg anti-PRP / ml, which is in contrast to the titer after natural infection of Hib ≧ 0.15 μg / ml. In the context of developing vaccine combinations in order to reduce the number of immunizations, care must be taken to ensure that individual proportions of the vaccine combination do not cause any negative interference. For example, when the Hib vaccine was combined with the co-administration drug DPT to form the tetravalent vaccine DPTHib, the serocon-version factor for the individual vaccine antigens, on the one hand, increased with the DPT vaccine, On the other hand, it must be as high as that achieved by step-wise staggered vaccination with Hib vaccine. Conventionally, for the evaluation of the immunogenicity of Hib vaccines and the measurement of anti-Hib antibodies in patient sera, only the radioantigen-binding test (RIA) has been regarded as meaningful and the relevant committee And has been approved by licensed organizations. RIA suffers from the inability to identify the various isotypes and subclasses of antibodies that can bind and precipitate PRP. In addition, working with radionucleotides is costly, is problematic in terms of the medical safety of the work, and is harmful to the environment. As an alternative to RIA, various groups have attempted to build test systems in an ELISA format for measuring antibody titers. The problem in this regard is that the Hib-specific polysaccharide, PRP, does not bind well to conventional (eg, polystyrene) microtiter plates. For this reason, for example, attempts have been made to increase the binding ratio by binding PRP to human serum albumin (Phips et al., J. Immunol. Methods 135 , 121-128, 1990). Other attempts have involved modifying tyramine to PRP and binding this chemically modified polysaccharide to commonly used microtiter plates (Christenson and Benzon, Acta Patholog ica et Microbiologica). Scandinava 100 , 142-146, 1992). However, this chemical modification may result in the formation of the neoantigen, leading to false positive or false negative results. Another method involves pre-incubating microtiter plates with, for example, poly-L-lysine or protamine, and indirectly reacting PRP, which chemically reacts as an acid, via these basic components with microtiter plates. To be combined with However, ELISAs constructed according to the principles described above are extremely difficult, less sensitive, and more likely to lead to non-specific binding of the antibody or conjugate of the sample. The invention was therefore based on the object of providing an improved test system for detecting monosaccharides, oligosaccharides or polysaccharides, which test system no longer exhibits the disadvantages mentioned above. This object is achieved by an advantageous method of binding monosaccharides, oligosaccharides or polysaccharides to a solid phase more efficiently, and by the provision of advantageous solid phases obtainable by this method, for example in the form of microtiter plates. Was done. Surprisingly, in contrast to known solid phases used in commonly used microtiter plates, solid phases such as polystyrene (secondary amino groups) with secondary amino groups attached via a spacer. Carrier solid phase: secondary amino group-carrying solid phase (SASP) was found to have high binding capacity to components of various structures such as PRP. Preparations of SASP are described, for example, in European Patent Application 0 319 957. For example, PRP can bind directly to SASP, while it does not carry any secondary amino groups on the surface, especially if more than 6 μg of PRP per well is used to coat microtiter plates, It cannot be directly attached to commonly used solid phases, such as the conventionally used microtiter plates made of polystyrene. Commercially available Kirde. Cam strap. PO Box 280, a registered trademark of Nunc A / S) is an example of a very suitable SASP. The standard product Nunc A / S U8 microtiter plate is an example of a conventionally used solid phase. Therefore, SASP is well suited for producing microtiter plates that are suitable for measuring PRP-specific antibodies and that can also be stored without loss of activity. The PRP ELISA prepared in this way is very suitable for accurate determination of antibodies to PRP, and the values obtained correlate with the values obtained by RIA, so that ELISA can be used as an alternative to RIA. ing. The present invention consequently provides a secondary amino group carrying solid phase (SAPP) characterized by the polysaccharide reacting with the secondary amino groups of SASP in the presence of a bifunctional reagent. The present invention relates to a method for binding a polysaccharide. Specific examples of these include pneumococci, for example polysaccharides obtained from types 3, 6, 8, 14, 19 or 23, or Hemophilus influenzae (Hi), particularly preferably Hib. Those relating to binding to SASP are preferred. A particularly highly preferred embodiment of the above-described method according to the invention relates to polyribosylribitol-phosphate obtained from the coating of Hib, which is important for diagnosis. These methods are also suitable for the invention using either carbodiimide or N-hydroxysuccinimide or both substances as the bifunctional reagent. Suitable methods for this purpose are described, for example, in Rasmussen SE, Ann. Biol. Clin. (1990), 48, 647-650. The invention further relates to a solid phase (SASP), which can be produced by one of the methods of the invention and is preferably in the form of a microtiter plate. The solid phase of the present invention can be used to establish a test method for detecting a substance, preferably an antibody, that binds to one of the above-mentioned monosaccharides, oligosaccharides or polysaccharides. ELISAs for detecting antibodies to Hib PRP are, for example, very particularly suitable for the present invention. As follows, the invention underlying the present patent application is further illustrated by examples describing the construction of an anti-PRP test in an ELISA format. While these examples are provided for measuring anti-PRP antibodies in human serum, the measurement of antibodies from other human body fluids, such as cerebrospinal fluid and cord blood, has also been described in mice, rabbits, sheep, and ( It is explicitly described as being the same as measuring antibodies obtained from tissues of non-human origin, such as all other commonly used laboratory animals. Although ELI SA for detecting PRP is described in this patent application, the ELISA can also be used to measure the concentration of monoclonal antibodies to PRP. Suitable saccharide antigens such as pneumococcal polysaccharides When bound to an iter plate, an ELISA constructed in a similar manner can be used to measure antibodies to other monosaccharides, oligosaccharides or polysaccharides. Example 1 Microtiter Plate Coating PRP antigen was dissolved in 1% N- (3-dimethylaminopropyl) -N-ethylcarbodiimide hydrochloride solution at a concentration of 1 μg / ml. Microtiter plates were coated with 100 μl per well of antigen solution, sealed and incubated at 37 ° C. for 18 hours. The microtiter plates were then washed twice with POD wash (200 μl / well) and dried on silica gel for 2 days. Microtiter plates prepared in this way were sealed in each case with two dry capsules in flat aluminum bags and then stored at 4 ° C. until further use. Example 2 Performing the Test To prevent non-specific binding of the antibody to the microtiter plate, inject 100 μl of PBS, pH 7.2 containing 20% sheep serum into each well, then seal the plate And incubated at 37 ° C for 1 hour, then PBS, Were diluted 1:10 to 1: 100 with PBS, pH 7.2 + 2% sheep serum, and loaded onto microtiter plates in duplicate by two-fold serial dilution up to column 8. Plate is sealed and kept at 37 ° C for 60 ± 5 minutes. Washed three times. Thereafter, 100 μl of anti-human IgG-POD conjugate (POD = peroxidase) (PBS, diluted 1: 10000 in pH 7.2 + 20% sheep serum) was injected into each well, the plate was sealed and the plate was sealed at 37 ° C. for 60 ± 5. Incubated for a minute. The plate is PBS, Gen solution was added. After incubation at room temperature for 30 minutes in the dark, the reaction was terminated by adding 100 μl of stop solution to each well. Plates are evaluated with a photometer at 450 nm. Example 3 Comparison of RIA and ELISA Values As examples, the following table lists the antibody titers of human sera measured by radioimmunoassay (RIA) on the one hand and by using the ELISA described here on the other hand. . The ELISA shown here did not measure false positive values. This suggests that RIA has an anti-PRP antibody titer of less than 0.1 μg / ml and that human sera with high concentrations of antibodies to other bacterial polysaccharides, such as pneumococcal polysaccharide, can be used in ELISA. No antibody titer is shown, meaning that the antibody value is above the cut-off value in ELISA. Example 4 Measurement of PRP-specific antibodies is not simply limited to human research material; for example, mouse anti-PRP antibodies can also be measured in this test system. Incubation buffers other than those used to determine human PRP antibodies, ie, It is advantageously used to measure anti-PRP antibodies. Is a registered trademark of Ringberge AG). Example 5 Polysaccharide antigens specific for pneumococcal types 6, 8, 19 or 23 were In this case, as in the case of PRP binding, the binding of pneumococcal polysaccharide is substantially improved in this case as compared to a conventionally used microtiter plate, for example of polystyrene. Was also observed. Conversely, the pneumococcal type 3 and 14 polysaccharides also bound well to conventional ELISA plates; nevertheless, the CovaLink of these polysaccharides Measurement of antibodies to type-specific pneumococcal polysaccharide antigens was not negatively affected by the addition of other type-specific polysaccharides.