JPH11501901A

JPH11501901A - 単糖類分析のための化合物および方法

Info

Publication number: JPH11501901A
Application number: JP8517832A
Authority: JP
Inventors: ケイ．ベンディアク，ブラッド
Original assignee: ケイ．ベンディアク，ブラッド
Priority date: 1994-12-09
Filing date: 1995-12-07
Publication date: 1999-02-16
Anticipated expiration: 2015-12-07
Also published as: EP0796241A2; WO1996017824A2; DE69516174T2; ATE191459T1; JP3453382B2; CA2207307A1; AU4599096A; AU696329B2; EP0796241B1; CA2207307C; DE69516174D1; WO1996017824A3; US5585473A

Abstract

(57)【要約】単糖類分析に使用するための化合物および方法が提供される。本発明は、ヒドラジノ単糖類誘導体を開示する。アルドースおよびケトース単糖類の構造解析のためにヒドラジノ単糖類誘導体を調製する方法ならびに使用する方法もまた開示される。

Description

【発明の詳細な説明】単糖類分析のための化合物および方法技術分野本発明は、一般に単糖類分析のための組成物および方法に関する。さらに詳細には、本発明は、ヒドラジノ単糖類誘導体、その調製、およびアルドースおよびケトース単糖類の構造決定のための使用に関し、そしてこのような化合物の導入または自動化システムへの方法に関する。発明の背景糖または炭水化物とも呼ばれる糖類は、生物系の主要な成分である。糖類は植物の乾燥重量の約80%を形成し、そしてモノマー（単糖類）か、または共有結合した単糖類よりなるポリマー（オリゴ糖類）かのいずれかとして、高等動物における代謝経路の不可欠な成分である。さらに、糖類はしばしば、より大きな生物学的マクロ分子（タンパク質、脂質および核酸を含む）として見出される。この広範な種類の形態において、糖類は天然に非常に多くの重要な機能を有する。生物系における糖類の重要性のため、フリーのおよびオリゴ糖類のモノマー成分としての両方において、単糖類の明白な同定の手順が非常に有用である。さらに、オリゴ糖類の末端で単糖類を選択的に同定する手順は、ポリマーの糖類構造の証明のために重要である。ほとんどの天然の単糖類は、５個の炭素原子（ペントース）または６個の炭素原子（ヘキソース）を含有する骨格構造を有する。これらの分子の直線形態において、各骨格炭素原子は、酸素原子に共有結合し得て、ヒドロキシル基（またはその修飾体）、およびケトン基またはアルデヒド基のシリーズを形成する。アルデヒド基を有するこれらの分子は、アルドースと呼ばれ、一方、ケトン基を有するこれらの分子はケトースとして公知である。天然において、ほとんどの単糖類はアルドースである。アルドースの各クラスの要素（例えば、ペントースおよびヘキソース）は構造的に類似する一方で、多数の異なる立体異性体が各クラス内に存在する。例えば、ヘキソースシリーズにおいては、C-1位にアルデヒド基、および炭素骨格に沿って全ての別の位置にヒドロキシル基を有する16のヘキソースが存在する。これらの16の立体異性体は、その直線（Fischer投影）形態で図１に示される。（Fischer投影は、図１の第１の分子に示されるように、不斉炭素原子上の水素原子およびヒドロキシル基が、紙平面から読者への方向に出て来るように分子を表す。）各立体異性体は異なる分子であり、異なる不斉炭素原子で立体化学においてのみ異なる。ケトースもまた天然に見出され、D-フルクトースについて以下に示されるように（骨格炭素は１〜６で表される）、通常C-2位（すなわち、炭素骨格の第２炭素）にケトンおよび全ての別の炭素にヒドロキシル基を有する。ケトースはまた、異なる炭素数を有し得る。例えば、C-2でケトン官能基を有するヘキソースおよびペントースがある。ケトースのヘキソースシリーズにおいて、C-2にケトン基を有する８個の立体異性体がある。これらのヘキソースは、フルクトース、ソルボース、タガトース、およびプシコースのそれぞれのD体およびL体であり、それぞれ不斉炭素C-3〜C-5で立体化学が異なる。これらの立体化学の変化に加えて、ヘキソースおよびペントースはまた、５原子環形態（５員環またはフラノースとしても公知である）、および６原子環形態（６員環またはピラノースとしても公知である）で存在し得る。これらの環形態においては、酸素原子は環構造中に存在する。例えば、以下に示すのは、D-グルコースについての５員環および６員環である。溶液中では、アルドースおよびケトースの単糖類は、図１に示すように、環形態と開鎖形態との間の平衡にある。環形態は以下のグルコースの平衡において示されるように、C-1での置換基の配置によりαまたはβアノマーであり得る。溶液中で相互変換し得、開鎖形態を与える単糖類は、それ自身を還元し得（すなわち、カルボニル基が低酸化状態（例えば、アルコール）に変換される）、その結果、還元単糖類と言われる。フリーの単糖類、およびオリゴ糖類の一末端（還元末端）に位置する単糖類の両方が還元単糖類であり得る。同一の元素組成を有する、非常に多くの異なる単糖類が特定の糖類の同定に対して問題を起こす。例えば、C-1にアルデヒド基を有する16のヘキソースのそれぞれは、５つの形態（４つの環形態および１つの直線形態）で存在し得、これは溶液中ですばやく相互変換する。その結果、クロマトグラフ分析の間に、非常に密接に関連し、相互変換する分子の16×5=80の可能な形態が存在し、クロマトグラムを複雑にし、そしてしばしば分析を不可能にする。さらに、単糖類分析を複雑にするのは、上述の基本的な「コア」構造から特定の方法で修飾される、天然に存在する、非常に多くのこのような分子である。例えば、炭素骨格に沿った１またはそれより多くのヒドロキシル基を欠く（１つのヒドロキシル基を欠く場合、デオキシ糖と言われ、または２つのこのような基を欠く場合、ジデオキシ糖と言われる）、ヒドロキシル基の代わりにエーテル結合を含有する（通常、メチルエーテルであり、そしてメチル化糖と言われる）、ヒドロキシル基を置換するアミノ基またはN-アシルアミノ基を有する（それぞれアミノ糖またはアシルアミノ糖と言われる）、あるいはCH₂OH基の代わりにC-6位にカルボン酸基を有する（ウロン酸と言われる）、多くの生物源から共通の単糖類および豊富な単糖類が存在する。単糖類はまた、直線状の炭素骨格を有するよりむしろ分岐状であり得る（分岐鎖糖と言われる）。図２に示されるように、ハマメロース（hamamelose）は分岐状単糖類の例である。希な場合に、単糖類はこれらの修飾体の組み合わせを包含し得るか、またはエステル、環状アセタール、硫酸エステルおよびリン酸エステルを包含するが、これらに限定されない他の修飾体を包含し得る。いくつかの代表的な修飾体の例は図２に提供される。多くの単糖類は共に結合して、オリゴ糖類を形成する。直線状のオリゴ糖類において、単糖類は、常に１つの単糖類のC-1から他の単糖類のC-2、C-3、C-4、C- 5またはC-6の１つへの結合で、共に結合される。例えば、以下に示すのは、１つのD-グルコース（「Glc」）分子が他のD-グルコース分子に、左側のD-グルコース分子のC-1から右側のD-グルコースのC-4へ結合するオリゴ糖類である。２つのD-グルコース間の結合は「グリコシド結合」と言われる。２つのグルコース分子間の結合は、αでもよくまたはβでもよく、左のD-グルコースのC-1の置換基の配置に依存する。ジ-グルコースオリゴ糖類構造の右側のD-グルコースは、そのモノマーの開鎖形態でアルデヒド基として存在し得るヒドロキシル基（ C-1の）を有する。それ故に、右側のD-グルコースは還元単糖類である。逆に、構造の左側のD-グルコースはC-1にヒドロキシル基を有さず、従って、非還元単糖類と言われる。オリゴ糖類は、１つしか還元単糖類を含有しない。直線状であるオリゴ糖類（すなわち、分岐せずに、直鎖で結合される単糖類）においては、１つの還元末端および１つの非還元末端がある。オリゴ糖類に分岐が存在すれば（すなわち、１より多い単糖類が１つの所定の単糖類に結合される）、還元末端はやはり１つだけであるが、２またはそれより多くの非還元末端が存在する。各単糖類が隣接の単糖類の異なる位置に結合し得るため、顕著に複雑なオリゴ糖類になる可能性がある。しかし、各還元オリゴ糖類は、開鎖形態で存在し得る還元単糖類（アルドースでもよいし、またはケトースでもよい）を１つだけ有する。結果として、その単糖類上でカルボニル基のみを修飾する反応を用いて、還元アルドースまたはケトース単糖類を明白に同定するための可能性がある。しかし、単糖類の明白な同定（フリーかまたはオリゴ糖類の還元末端かのいずれかで）は困難であることが分かっている。存在する、莫大な数の異なる単糖類（その多くは、クロマトグラフィーにおいて類似の、または同一の移動特性を有する）および各単糖類の異なる相互変換形態のため、単糖類の同定は、クロマトグラフィーシステムにおけるその保持時間に基づくだけでは間違いなく達成することはできない。従って、単糖類を同定するためには質量分析法の使用が不可欠である。なぜなら、質量の分裂スペクトルパターン（例えば、電子衝撃質量分析法において）は、上記の分子のクラス間で明らかに識別されるためである。同一の質量スペクトルを与えるクラスの全て（例えば、全てヘキソースのように）の可能な要素が分離可能である限り、質量分析法の使用によりモノマーを間違いなく同定し得る。単糖類が存在し得る可能な形態の数を制限するため、そしてそのようにして質量分析に先だってクロマトグラフィーによる各クラスの要素の分離を改良するため、誘導体化技術がしばしば用いられる。しかし、いくつかの誘導体はまた、環状生成物をもたらし得る。通常４つのこのような生成物（αおよびβフラノース誘導体ならびにαおよびβピラノース誘導体）が存在するため、各単糖類は４つのクロマトグラフィーのピークを異なる量で生じさせ得る。このことは、多くのオーバーラップするピークのために、複雑な混合物の分析を不可能でなくても、困難にする。単一のクロマトグラフィーのピークを生じる単糖類のいくつかの修飾が記載されている。最も有用な修飾は、環化できない直線状誘導体に単糖類を変換し、従ってクロマトグラフィーの間、相互変換しない。過去において広く用いられてきた１つの手順は、単糖類のアルデヒド基またはケトン基のヒドロキシル基への直接還元を含む。この反応はアルドースまたはケトースをアルジトールに変換する。アルジトールの過アシル化はガスクロマトグラフィー-質量分析法（GCMS）に対して適切な誘導体をもたらす。しかし、この手順は、１つより多い単糖類からいくつかのアルジトールが生じ得るため、深刻な制限を受ける。例えば、図３に示されるように、同一のアルジトール生成物が、分子D-グルコースおよびL-グルコースの還元により生じる。結果として、この手順はこれらの２つの立体異性体を区別できない。同一のアルジトール生成物を与えるアルドースのさらなる対は、L-グルコースおよびD-グルコース、D-アルトロースおよびD-タロース、L-アルトロースおよびL-タロース、D-ガラクトースおよびL-ガラクトース、ならびにD- アロースおよびL-アロースである。アルドースの中で、D-マンノース、L-マンノース、D-イドース、およびL-イドースだけが、ただ１つのアルジトール生成物を生成する。さらに、ケトースの還元は一対のアルジトールを生成する。例えば、D-フルクトースはD-グルシトールおよびD-マンニトールを生成し、D-ソルボースはD-グリトールおよびD-イジトールを生成し、D-タガトースはD-ガラクチトールおよびD- タリトールを生成し、そしてD-プシコースはD-アリトールおよびD-アルトリトールを生成する。従って、単糖類の還元において与えられたアルジトールの形成は、ケトースおよびアルドースの両方が同一のアルジトールを生成し得るため、単糖類を明白には同定しない。非環式誘導体をもたらす単糖類分析について他の方法が記載されている。GCMS について、単糖類の定量に対して最も有用な誘導体は、アルドノニトリル（アルドースより生成され得る）およびジチオアセタール（アルドースおよびケトースから生成され得る）である。なぜなら、これらの誘導体の定量収率を本質的に達成する方法が存在するためである。これらの誘導体の代表例を図４に与える。これらの誘導体化技術は、各単糖類に対して単一の生成物を生じるという重要な利点を有する。例えば、16の異なるアルドースヘキソースのそれぞれは、ただ１つの誘導体を与える。GCMSによる分析に先だって、アルドノニトリル誘導体は、通常アセチルエステルに変換され、そしてジチオアセタールは通常トリメチルシリルエーテルまたはトリフルオロアセチルエステルに転換される。アセチルエステルは安定であるが、トリメチルシリルエステルおよびトリフルオロアセチルエステルは、調製後、直ちに分析されなくてはならず、そして分析前および分析中に大気中の水による開裂を非常に受けやすい。さらに、これらの誘導体はオリゴ糖類の還元末端で単糖類の分析のために使用できない。ジチオアセタールの合成は、それ自身、グリコシド結合を切断し、オリゴ糖類の単糖類成分の非選択的誘導体化をもたらす。さらに、ジチオアセタールは、オリゴ糖類のグリコシド結合を切断するのに必要な酸性条件下で安定でない。アルドノニトリルの形成はグリコシド結合を切断せずに達成され得るが、この誘導体はオリゴ糖類から誘導体化された単糖類を切断するのに必要な酸性条件に耐えない。従って、当該分野ではフリーの単糖類の誘導体、およびオリゴ糖類の還元末端での単糖類の誘導体を生成する方法が必要であり、ここで、誘導体は、(1)各前者の単糖類を明確に同定し得、(2)室温および室温以下の温度で、長い期間（すなわち、１年以上）安定であり、(3)グリコシド結合を切断する条件に耐え、それによって、オリゴ糖類の還元末端で単糖類を同定し得、そして(4)オンライン質量スペクトル分析（例えば、GCMS、LCMS（液体クロマトグラフィー-質量分析法）およびCZE（キャピラリーゾーン電気泳動−質量分析法）などであるが、これらに限定されない）が技術的に行い易いか、または例えば、GC-MSMSまたはGC- MSMSMSなどであるが、これらに限定されない手順において娘イオンが多数に分裂しやすい。本発明はこれらの必要性を満たし、そしてさらに関連した利点を提供する。発明の要旨簡単に述べると、本発明は、単糖類分析のための化合物および方法を提供する。本発明の１つの局面においては、ヒドラジノ単糖類誘導体が提供され、これは以下の構造を有する：ここで、R₁はNに共有結合した1-デオキシアルドース部またはデオキシケトース部である。R₁が1-デオキシアルドース部である場合、Nへの共有結合はC₁位を介して生じる。R₁がデオキシケトース部である場合、Nへの共有結合は糖骨格におけるデオキシ炭素を介して生じる（これはケトン基に元々存在した）。全ての場合において、R₂は水素またはアルキル基である。本発明の関連した局面においては、新規のヒドラジノ単糖類誘導体を調製するための方法が提供される。１つの実施態様において、方法は以下の工程を包含する：(a)以下の構造を有するヒドラジンでアルドースまたはケトースを反応することによりヒドラゾンを生成する工程であって、：ここで、Rは水素またはアルキル基である、工程；(b)ヒドラゾンをヒドラジノ誘導体に還元する工程；および(c)ヒドラジノ誘導体を、実質的に全ての窒素原子でアセチル化が起こる条件下でアセチル化する工程。別の実施態様においては、工程(a)で使用されるアルドースまたはケトースは、オリゴ糖類の還元末端に位置された単糖類であり、そしてこの方法はさらにオリゴ糖類から誘導されたアルドースまたはケトースを切断する工程を包含する。さらに別の実施態様においては、本方法はさらにヒドラジノ単糖類誘導体を完全にアセチル化する工程を包含する。本発明のさらに関連した局面においては、方法はアルドースおよびケトース単糖類の構造解析のために提供される。１つの実施態様においては、本方法は以下の工程を包含する：(a)N,N'-ジアセチルヒドラジノアルドースまたはケトース単糖類誘導体を生成する工程；(b)クロマトグラフィーにより単糖類誘導体を分離する工程；および(c)分離された単糖類誘導体を分析し、同定を決定する工程。好ましい実施態様においては、ヒドラジノ単糖類誘導体の分離はオンライン質量分析法と組み合わせたクロマトグラフィーによる。本発明の、これらの、および他の局面は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照することにより明らかになる。図面の簡単な説明図１は、C-1にアルデヒド基、および炭素骨格に沿って全ての他の位置にヒドロキシル基を有するアルドースヘキソースのクラスにおける16の立体異性体を図示する。立体異性体は、Fischer投影のようにその直線形態で示される。各Fisch er投影は、不斉炭素原子上の水素原子およびヒドロキシル基が、紙平面から読者への方向に出て来るように分子を表す。図２は、単糖類の代表的ないくつかの修飾体を図示する。図３は、D-グルコースおよびL-グロースの還元により、アルジトールであるD- グルシトールの生成を図示する。図４は、D-グルコースのアルドノニトリルおよびジエチルジチオアセタール誘導体を図示する。図５a-gは、いくつかの代表的な1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ) アルジトールの溶離プロフィールを図示する。図６a-fは、完全にアセチル化された誘導体のクロマトグラフィーによる分離を図示する。図７a-iは、完全にアセチル化された1-デオキシ-1-ヒドラジノアルジトールまたは2-デオキシ-2-ヒドラジノアルジトールの代表的な電子衝撃質量スペクトルを図示する。図８aおよびbは、クロマトグラフィー上で一緒に移動する完全にアセチル化された1-デオキシ-1-ヒドラジノアルジトール誘導体の、これらの誘導体のクラスを、ガスクロマトグラフィー／質量分析法により同定する、選択されたイオン抽出の使用を図示する。図９a-cは、完全にアセチル化された2-デオキシ-2-ヒドラジノアルジトール（ケトースから誘導される）の存在下で、完全にアセチル化された1-デオキシ-1 -ヒドラジノアルジトール（アルドースから誘導される）を、ガスクロマトグラフィー／質量分析法により明白に同定する、選択されたイオン抽出の使用を図示する。発明の詳細な説明本発明を説明する前に、以下に使用される特定の用語の定義を説明することがその理解に役立ち得る。本発明に関連して、「糖類」は任意の単糖類またはオリゴ糖類を言う。「単糖類」は、より小さな糖類ユニットに加水分解できない糖類である。単糖類は、無置換、非加水分解糖類（例えば、グルコース）、および１またはそれより多くのヒドロキシル基が置換を含むかまたは水素原子で置き換わった修飾糖類（すなわち、デオキシ、ジデオキシおよびトリデオキシ糖類）を包含する。単糖類は、「フリーの単糖類」であり得る（単糖類がどの他の単糖類とも共有結合しないことを意味する）。あるいは、単糖類は、オリゴ糖類内に存在し得る。「オリゴ糖類」は、直線状または分岐状で共に結合された、２またはそれより多くの単糖類を含む加水分解可能な糖類である。「還元単糖類」はオリゴ糖類の還元末端に位置される単糖類である。用語「アルドース」は、フリーかまたはオリゴ糖類の還元末端でかのいずれかの単糖類を言うのに使用され、これは、C-1位にアルデヒド基を有し得る。「1- デオキシ-アルドース部」は、C-1で炭素原子が第２の部に共有結合し得るように、C-1位でアルデヒド基内に元々存在する酸素原子が除去され、そして単一の水素原子で置換されている単糖類部である。例えば、1-デオキシ-D-グルコース部は以下の構造を有する：用語「ケトース」は、フリーかまたはオリゴ糖類の還元末端のいずれかの単糖類を言うのに使用され、これは単糖類の骨格に沿って任意の内部炭素原子にケトン基を有し得る。「デオキシ-ケトース部」は、元々ケトン基内に存在する炭素原子が第２の部に共有結合され得るように、元々ケトン基内に存在する酸素原子が除去され、そして単一の水素原子で置換されている単糖類である。例えば、2- デオキシ-D-グルシトール部は以下の構造を有する： 3-または4-デオキシケトース部は、C-3またはC-4位でケトン酸素原子がそれぞれ除去され、そして１つの水素原子により置換される単糖類を言う。「アセチル化」分子は、１つまたはそれより多くのアセチル基が分子に共有結合する分子である。「完全にアセチル化された分子」は、全てのフリーのヒドロキシル基および窒素原子が誘導体化されて、アセチルエステル、アミド、またはヒドラジドを形成する分子である。上記のように、本発明は、一般に種々の目的（例えば、単糖類分析）に対して有用な化合物および方法に関する。より詳細には、本発明は単糖類のヒドラジノ誘導体ならびにヒドラジノ単糖類誘導体を調製する方法およびヒドラジノ単糖類誘導体の使用（例えば、フリーの単糖類およびオリゴ糖類の還元末端での単糖類分析のための）に関する。本発明の単糖類誘導体は、一般に以下の式により表され得る： R₁は、任意のアルドースまたはケトース単糖類から誘導され得る1-デオキシアルドース部またはデオキシケトース部であり、フリーの単糖類およびオリゴ糖類の還元末端での単糖類を含む。適切な単糖類としては、アルドースヘキソース（例えば、D-グルコース、L-グルコース、D-アロース、D-アルトロース、D-ガラクトース、D-グロース、D-イドース、D-マンノース、およびD-タロース）；ケトースヘキソース（例えば、D-フルクトース、D-プシコース、D-ソルボース、および D-タガトース）；アルドースペントース（例えば、D-アラビノース、D-リキソース、D-リボース、およびD-キシロース）；アルドーステトロース（例えば、D-エリトロースおよびD-トレオース）；アルドーストリオース（例えば、D-グリセルアルデヒド）；ならびにグリコールアルデヒドが挙げられるが、これらに限定されない。アルドースまたはケトース部はまた、修飾された単糖類から誘導され得る。適切な修飾単糖類としては、デオキシ糖（例えば、6-デオキシ-L-ガラクトース（L -フコース）および6-デオキシ-L-マンノース（L-ラムノース））、ジデオキシ糖、トリデオキシ糖、アミノ糖（例えば、2-アミノ-2-デオキシ-D-グルコースおよび2-アミノ-2-デオキシ-D-ガラクトース）、アシルアミノ糖（例えば、2-アセトアミド-2-デオキシ-D-グルコースおよび2-アセトアミド-2-デオキシ-D-ガラクトース）、１つまたはそれより多くのＯ-アルキルエーテルを有する糖（例えば、3 -Ｏ-メチル-D-グルコース）、ウロン酸、分岐鎖糖、１つまたはそれより多くのヒドロキシル基の硫酸エステルまたはリン酸エステルを有する糖、あるいは上記の修飾体の任意の組み合わせを有する糖が挙げられるが、これらに限定されない。これらの修飾体の代表的な組み合わせとしては、テベトース（6-デオキシ-3- Ｏ-メチル-D-グルコース）およびビネロース（6-デオキシ-3-C-メチル-2-Ｏ-メチル-L-タロース）に見出される組み合わせが挙げられ、これはＯ-メチルエーテルを有する分岐鎖ジデオキシ糖である。さらに適切な単糖類は、例えば、化学および物理のCRC教本、第68版（CRC Press，Inc．1987）のC-705〜C-710に見出され得、これは本明細書中に参考として援用される。好ましくは、R₁は、２〜９個の炭素原子の骨格を有する1-デオキシアルドース部、または３〜９個の炭素原子の骨格を有するデオキシケトース部である。さらに好ましくは、R₁は、デオキシペントースまたはデオキシヘキソース部である。 R₁が1-デオキシペントース部である、本発明の単糖類誘導体の代表例は、アラビノースについて以下に示される： 1-デオキシヘキソース誘導体の代表例はグルコースについて以下に示される： 2-デオキシヘキソース誘導体の代表例は、D-フルクトースについて以下に示される：他の好ましい実施態様では、Ｒ₁は、最初にオリゴ糖類の還元末端に配置していた、アルドースまたはケトースから誘導される。Ｒ₂は一般的には、水素あるいは直線状または分岐状のアルキル基である。好ましくは、Ｒ₂は、１個〜８個の炭素原子を有するアルキル基である。より好ましくは、Ｒ₂は１個〜６個の炭素原子を有するアルキル基である。本発明の単糖類誘導体は、一般的に、次の工程により調製され得る：（ａ）単糖類（フリーのまたはオリゴ糖類の還元末端の、のいずれか）からヒドラゾンまたはアルキルヒドラゾン誘導体を生成する工程、（ｂ）その誘導体を還元し、デオキシ-ヒドラジノアルジトール誘導体またはデオキシ-（N'-アルキルヒドラジノ）アルジトール誘導体、または（オリゴ糖類の還元の場合）グリコシド結合で置換された誘導体を生成する工程、および（ｃ）還元された誘導体をアセチル化する工程。どちらか１つのみが窒素原子上で起こる場合、デオキシ-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトールまたはデオキシ-(N'-アルキル-N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトールを生じ、遊離したヒドロキシル基および窒素原子の両方で起こる場合、デオキシ-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトールの過-Ｏ- アセチル化誘導体またはデオキシ-(N'-アルキル-N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトール誘導体を生じる。あるいは、デオキシ-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ) アルジトールはアルキル化されて、デオキシ-(N'-アルキル-N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトールあるいはその部分的または全体的にＯ-アルキル化された誘導体を生じ得る。使用された手順に関わらず、90％〜95％の単糖類が、所望の誘導体に転換され得る。例えば、アルドース誘導体は、次の工程から形成され得る：（ａ）ヒドラゾンまたはアルキルヒドラゾン誘導体を生成する工程、（ｂ）その誘導体を還元して 1-デオキシ-1-ヒドラジノアルジトールまたは1-デオキシ-1-(N'-アルキルヒドラジノ)アルジトールを生成する工程、および（ｃ）還元された誘導体をアセチル化し、1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトール、1-デオキシ-1 -(N'-アルキル-N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトール、またはそれらの完全にアセチル化された誘導体を生成する工程。同様に、ケトン基をC-2に有するケトース誘導体は、次の工程により形成され得る：（ａ）ヒドラゾンまたはアルキルヒドラゾン誘導体を生成する工程、（ｂ）その誘導体を還元して2-デオキシ-2-ヒドラジノアルジトールまたは2-デオキシ-2-(N'-アルキルヒドラジノ)アルジトールを生成する工程、そして（ｃ）還元された誘導体をアセチル化し、2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトール、2-デオキシ-2-(N'-アルキル-N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトール、またはそれらの完全にアセチル化された誘導体を生成する工程。オリゴ糖類の還元末端に存在するアルドースおよびケトースの単糖類誘導体もまた、本発明の方法により、特異的に生成され得る。内部の単糖類の誘導体は生成されない。なぜなら、これらの単糖類のカルボニル基は、グリコシド結合に含まれるからである。オリゴ糖類の還元末端の単糖類のみが、ヒドラゾンまたはアルキルヒドラゾン誘導体を生成するのに必要な、遊離したカルボニル基を含む。それゆえに、本発明の方法は、オリゴ糖類の還元末端に存在する単糖類を選択的に誘導化するのに使用され得、従って、これらの単糖類を同定するのに有用である。誘導された単糖類がオリゴ糖類の還元末端に存在する場合、本発明の方法はさらに、オリゴ糖類のグリコシド結合を切断する工程を含む。例えば、切断の工程は、水、アルコール、またはカルボン酸のような種々の溶媒中で、酸性条件を使用することにより達成され得る。適切な切断剤には、水中の塩酸またはトリフルオロ酢酸溶液、無水メタノール中の塩酸、および無水酢酸溶液中の硫酸が挙げられる。この切断は、還元単糖類のみを誘導化するために、デオキシ-ヒドラジノアルジトール誘導体またはデオキシ-(N'-アルキルヒドラジノ)アルジトール誘導体の生成の後に行われる。この切断は、ヒドラジノ誘導体のアセチル化の前または後に行われ得る。簡潔に言えば、ヒドラゾン誘導体またはアルキルヒドラゾン誘導体を生成するために、任意のアルドースまたはケトースが、以下の構造を有するヒドラジン誘導体と反応し得る：ここで、Ｒは水素あるいは直鎖状または分岐状アルキル基である。好ましくは、Ｒは１個〜８個の炭素原子を含むアルキル基であり、より好ましくは、Ｒは１個〜６個の炭素原子を含むアルキル基である。アルドースまたはケトースは、フリーの単糖類またはオリゴ糖類の還元末端の単糖類であり得る。アルドースまたはケトースとヒドラジン誘導体との間の反応は、当業者に公知である適切な条件の下で行われ得る。好ましくは、反応は、約0.1時間〜24時間の期間にわたって、室温にて起こる。ヒドラゾン誘導体またはアルキルヒドラゾン誘導体において、アルドースまたはケトースのカルボニル酸素原子は、ヒドラジン誘導体の窒素原子と置換される。例えば、D-グルコースのヒドラゾン誘導体は、以下の構造を有する：ここで、Ｒ₂は水素あるいは直線状または分岐状アルキル基である。ヒドラゾン誘導体またはアルキルヒドラゾン誘導体は、当業者に公知の任意の適切な還元剤を使用して還元され得、適切な還元剤には、例えば、水素化ホウ素ナトリウムのような水素化ホウ素試薬[これらは種々の塩として入手可能であり、水素化ホウ素の形態で、カチオン性ポリマーを含有する（例えば、ポリマー支持水素化ホウ素試薬、製品32,864-2および35,994-7、Aldrich Chemical Co.、Mi lwaukee、Wis.）ならびにシリカまたはアルミナ支持水素化ホウ素ナトリウム(製品24,361-2および24,362-0、Aldrich)]；ホウ素-炭素共有結合もまた有する、ホウ素中心水素化物（例えば、直接ホウ素に結合した、アルキル基、またはかさ高い基、またはシアノ基）[このクラスのメンバーには、トリ-sec-ブチル水素化ホウ素カリウム（K-selectride、Aldrich、製品22,076-0）、KS- selectride、9-B BN水素化リチウム、L-selectride、L-S-selectride、R-Alpine-hydride、および S-Alpine-hydride（製品22,077-9、34,423-0、25,704-4、22,592-4、22,902-4、および23,772-8、それぞれ、Aldrich Chemical Co.、Milwaukee、Wis.）が挙げられる]；しばしば、例えば、トリエチルアミン、ジエチルアミン、t-ブチルアミン、モルホリン、ピリジン、またはテトラヒドロフランのような試薬との複合体として使用される、ボラン/ジボラン；例えば、水素化アルミニウムリチウムのような、水素化アルミニウム試薬[これらは、例えばナトリウム塩のような他の塩として入手可能である]；水素化ジイソブチルアルミニウムのような、共有結合した炭素または水素と置換するアルコキシ基を有する他のアルミニウム中心水素化物[Aldrich.種々の溶媒中の溶液またはビス(2-メトキシエトキシ)水素化アルミニウムナトリウム(Red-Al、製品19,619-3、Aldrich Chemical Co.、Milwa ukee、Wis.)として供給される]。触媒的水素化はまた、水素ガスおよび種々の金属およびラネーニッケル（ニッケル-アルミニウム合金）のような、調製された金属合金を使用して行われ得る。さらに、金属還元物の溶解、アルカリ金属（リチウム、ナトリウム、またはカリウム）の使用、ならびに溶媒（例えば、アルコール、酢酸、液体アンモニア、または1,2-ジメトキシエタンなどのエーテル）中の、例えば、亜鉛、マグネシウム、スズ、鉄、または水銀が一般に効果的である。好ましい還元剤は、水素化ホウ素ナトリウムである。水素化ホウ素ナトリウムによる還元は、通常、約０℃〜約100℃の範囲内の温度で行われ、約20℃〜約40 ℃の温度がより代表的である。好ましくは、ヒドラゾン誘導体またはアルキルヒドラゾン誘導体の還元剤とのインキュベーションは、室温にて約20時間行われ、ヒドラジノ誘導体またはアルキルヒドラジノ誘導体を生成する。これらの反応のいずれかに要する時間はそれぞれ、温度が上昇または低下するに従って短縮または延長し得るということは、当業者には明らかである。ヒドラゾンの還元により、以下の構造を有するヒドラジノ誘導体を生じる：ここで、Ｒ₁は1-デオキシアルドース部位またはデオキシケトース部位であり、そしてＲ₂は、水素あるいは直鎖状または分岐状アルキル基である。還元工程での生成物および収量は、例えば、プロトンNMRおよび質量分析などの分析技術によりモニターされ得る。還元工程に続いて、オリゴ糖類の還元末端に配置されたヒドラジノ単糖類誘導体またはアルキルヒドラジノ単糖類誘導体は、単糖類から切断され得る。当業者に公知の、任意の切断方法が使用され得る。好ましくは、切断は、100℃で３時間、2.0ＭのHCl水溶液により達成される。ヒドラジノ誘導体またはアルキルヒドラジノ誘導体は、選択的にアセチル化されて、デオキシ-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトール誘導体またはデオキシ-(N'-アルキル-N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトール誘導体を生成する。当業者には、ヒドロキシル基を実質的に修飾せずに、種々のアセチル化反応が選択的に窒素原子をアセチル化することが理解される。選択的なＮ-アセチル化は、飽和重炭酸ナトリウム水溶液中で、過剰の無水酢酸により行われ得る。ケテンおよびアセチルハライド（例えば、アセチルクロリド）もまた、選択的なＮ-アセチル化反応に使用され得る。さらに、デオキシ-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ) アルジトール誘導体またはデオキシ-(N'-アルキル-N,N'-ジアセチルヒドラジノ) アルジトール誘導体は、下記の完全なN-およびＯ-アセチル化、それに続く、例えばメタノール中のナトリウムメトキシドまたはメタノール中のアンモニアを使用するＯ-アセチル基の選択的脱離によって生成され得る。好ましくは、Ｎ-アセチル化は、飽和重炭酸ナトリウム水溶液中で、無水酢酸により、約0.1時間〜２時間の間、０℃〜60℃の温度で達成される。前述の還元末端に配置し、ヒドラジノ単糖類誘導体またはアルキルヒドラジノ単糖類誘導体を有するオリゴ糖類もまた、上記のように選択的にＮ-アセチル化され得、前述の還元末端に配置されたデオキシ-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトールまたはデオキシ-(N'-アルキル-N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトールを有する誘導体を生じる。これらのオリゴ糖類の誘導体化は、液体クロマトグラフィーに有用であり得る、紫外線波長における吸収をもたらす。これらの誘導体は、当業者に公知の任意の方法により、オリゴ糖類から切断され得る。好ましくは、100℃で３時間、2.0ＭのHCl水溶液が使用される。これらの誘導体は、この処理の間に、それぞれヒドラジノモノマーまたはアルキルヒドラジノモノマーに転換されるが、上記のように選択的に再Ｎ-アセチル化され得るか、または下記のように完全にＮ-アセチル化およびＯ-アセチル化され得る。ヒドラジノ単糖類またはアルキルヒドラジノ単糖類を還元末端に有するオリゴ糖類と同様に、ジ-N-アセチル誘導体はオリゴ糖類から切断され得、そして誘導されて、オリゴ糖類の前述の還元末端に配置した単糖類を、下記のように選択的にし、そして明瞭に同定することを可能にする。単糖類誘導体の末端生成物は、1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトール誘導体または1-デオキシ-1-(N'-アルキル-N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトール誘導体であり得る。あるいは、これらの誘導体はさらに修飾され得る。例えば、誘導体は、分析に先立ち完全にアセチル化され得る。完全にアセチル化された誘導体は、遊離したヒドロキシル基および窒素原子の全てがアセチル化されたものである。任意の適切なＯ-アセチル化反応が、誘導体を完全にアセチル化するのに使用され得る。これらには、無水酢酸/ピリジン混合物、無水酢酸、塩化亜鉛、酢酸ナトリウム、または硫酸、またはピリジン溶液中のアセチルクロリドとの反応が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Horton D．IA、「The Amino Sugars」、３〜211頁（R．W．Jeanloz編、Academic Press 1969）を参照のこと）。好ましくは、アセチル化は、乾燥ピリジン中で、無水酢酸と約12時間〜24時間反応させることにより達成される。Ｎ-アセチル化は、Ｏ-アセチル化よりもずっと容易に起こる。従って、デオキシ-ヒドラジノアルジトールおよびデオキシ-(N'-アルキルヒドラジノ)アルジトールの完全なＮ-アセチル化およびＯ-アセチル化は、上記の「Ｏ-アセチル化」についての条件の下で起こり、これらの分子の両方の窒素基上および全ての遊離ヒドロキシル基上にアセチル基を生じる。これらの完全にＮ-アセチル化またはＯ-アセチル化された分子は、完全にアセチル化される。デオキシ-(N'-アルキル-N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトールあるいはその部分的または完全なＯ-アルキル化誘導体を生成する他の方法は、デオキシ-(N N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトールのアルキル化である。当業者に公知である、任意の適切なアルキル化の手法が使用され得る。例えば、アルキル化は、ヨウ化メチルのようなアルキルハライドを、ジメチルスルホキシドのような溶媒中で、水素化ナトリウムのような強塩基の存在下において使用することにより行われ得る。当業者には、アルキル化に先立ち、適切なブロッキング基による遊離したヒドロキシル基のブロックによってＯ-アルキル化が阻害され得ることが理解される。あるいは、N-アルキル化誘導体およびＯ-アルキル化誘導体が生成され得る。オリゴ糖類の場合においては、アルキル化は、前述のオリゴ糖類から還元した単糖類の切断の前または後に行われ得る。本発明の誘導体は、分析に先立ち精製され得るが、オンライン分析（例えば、 GCMSおよびLCMS）と組み合わせたクロマトグラフィー分離を使用する分析に先立っては、必ずしも精製されなくてもよい。完全にアセチル化された誘導体の場合、精製工程はＯ-アセチル化の前または後に行われ得る。N,N'-ジアセチルヒドラジンまたはN-アルキル-N,N'-ジアセチルヒドラジンを、使用され得る誘導された単糖類から除去するのに十分な任意の精製技術は、当業者には明らかである。好ましくは、誘導体はクロマトグラフィーで精製され、より好ましくは、精製は高速液体クロマトグラフィーの使用により行われる。例えば、いくつかの1-デオキシ-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトール誘導体の高速液体クロマトグラフィーによる単離は、図５に示される。精製されたＮ-アセチル化または完全にアセチル化された誘導体は、単糖類の構造の決定に使用され得る。構造決定の好ましい方法は、質量分析の前の、誘導化単糖類のクロマトグラフィーによる分離からなる。より好ましくは、その分離は、ガスクロマトグラフィーによる。ガスクロマトグラフィーが、例えば、温度勾配が100℃〜300℃の範囲内で、または等温範囲において等温条件下、種々のキャピラリーGCカラムを使用して、ヘリウムをキャリアーガスとして使用し行われ得る。本発明のアルドース誘導体は、単一ピークとして溶離する。各ケトースは、共移動（comigrate）しない限り、通常２つの特徴的なピークを示す２つの誘導体を生成する。種々のアルドースおよびケトースに由来する、完全にアセチル化された一連の誘導体のガスクロマトグラフィーによる分離の例は、それぞれの全イオンカレントまたは選択されたイオンMSによるモニタリングとして、図６に示される。誘導体の検出は、当業者に公知の任意の適切な技術により行われ得る。好ましくは、検出は、代表的には200nmにおける紫外吸収、または質量分析（MS）を使用して行われる。オンライン質量分析（すなわち、溶離した化合物は、分析のために質量分光光度計を直接通過する）を使用する誘導体の検出が、特に好ましい。質量分析において、全イオンカレントがモニタリングされ得る。この装置は電子衝撃モードまたは化学的イオン化モードで、イソブタンまたは他の化学的イオン化試薬を用いて、使用され得る。質量分析は、安定イオンを形成し得る、実質上任意の化合物について行われ得る。多くの化合物について、１ピコモル未満の化合物が質量分析で分析され得る。適切に広い質量範囲にわたり速やかにサンプルをスキャンする能力（１秒未満以内に、約１〜2000の原子質量単位）のために、オンライン分析（LCMS、GCMS、またはCZEMS）には四極子MSまたはイオントラップMSが最も適切である。基礎的な装置の概説（Cooks，R．G.、Glish，G．L．、McLucky，S．A.、およびKaiser，R．E.、Chemical and Engineering News、19 91年３月25日、26〜41頁）が発行されている。オンラインMS分析の装置は、ガスクロマトグラフィーのカラムから溶離した分子を、電子衝撃または化学的イオン化によりイオン化させ得る。代表的には、電子衝撃マススペクトルは、化合物の特定のクラスに対する「指紋」と考えられ得るマススペクトルを提供する。例えば、アルドースおよびケトースの特定のクラスに特徴的な、特定のE1フラグメンテーションスペクトルは、図７に示される。化学的イオン化は、分子の分解（br eakdown）をほとんど引き起こさないので、分子の主要なフラグメントが維持される。質量分析は、分岐状単糖類の同定に、そして単糖類のクラスの識別に特に有用であり、そして、所与のクラスの全てのメンバーがクロマトグラフィーにて分離可能な場合に、単糖類の明瞭な帰属を可能にする。さらに、質量分析は、誘導体が異なるクラスの化合物の同じ誘導体と共に偶然に共移動した場合でさえも、特定の誘導体を識別するのに使用され得る。例えば、図８に示すように、完全にアセチル化されたD-リボースおよびL-フコースの1-デオキシ-1-ヒドラジノアルジトール誘導体は共移動するが、m/z210および359のイオン（これらは、完全にアセチル化された1-デオキシ-1-ヒドラジノペンチトールおよび1,6-ジデオキシ-1- ヒドラジノヘキシトールの各々の特異的イオンである）の選択されたイオン抽出により容易に識別され得る。これらの完全にアセチル化された誘導体に関する、 MS分析のさらなる主要な利点は、1-デオキシ-1-ヒドラジノアルジトール誘導体（アルドースから誘導化される）と2-デオキシ-2-ヒドラジノアルジトール誘導体（ケトースから誘導化される）の間の差異を明瞭にする能力である。例えば、図９に示されるように、そして、図7aおよび7hで比較されるように、アルドースは、そのm/z87のイオンが完全に特異的である1-デオキシ-1-ヒドラジノアルジトールを生成する；これは、ケトースから誘導化される2-デオキシ-2-ヒドラジノアルジトールでは見出されない。完全にアセチル化された2-ヒドラジノ-2-ヒドラジノアルジトールは、m/z99（図7h）に顕著なイオンを生じ、そして2-デオキシ-2-ヒドラジノヘキシトールは、図９に示されるように、これらの誘導体において高度に選択的である、371におけるそれらの顕著なイオンにより選択され得る。特定のクラスに対し高度に選択的である特定のイオンの比を検査することにより、またはそれらの全体のマススペクトルを検査することにより、混合物中のアルドースおよびケトースは、それらの対応するデオキシヒドラジノアルジトール誘導体への転化率を通して速やかに識別され得る。さらに、1-デオキシ-1-ヒドラジノアルジトールまたは2-デオキシ-2-ヒドラジノアルジトールは、グリコシド結合を切断させる酸加水分解または他の加溶媒分解に耐えるので、それらはオリゴ糖類の還元末端の単糖類を確立させるのに使用され得る。任意または全ての上記の種々の反応工程は、液相または固相条件下で行われ得るということは、当業者に明らかである。代表的には、固相法においては、反応物または試薬は、グラスビーズ、ポリマーマトリックス、焼結ガラスディスク、ファイバーガラス膜、またはポリマー膜などの固体支持体上に固定される。例えば、ヒドラジン誘導体は、クロマトグラフィー樹脂および、反応を進行させるのに十分な条件および時間の下、樹脂に接触するようにされた糖類に共有結合（例えば、直接に、または架橋剤を介して）し得る。あるいは、糖類は、所望の段階に挿入される１回以上の洗浄工程と共に、段階的な方法で、種々の反応物に固定および接触させられ得る。液相または固相条件下のいずれで行われるにせよ、上記の種々の反応工程は、反応を自動化するシステムに組み入れられ得ることはまた、明白である。このようなシステムは、代表的には、装置の形式である。システムは、各容器中で単一の化学反応が行われる、複数の反応容器を含み得る。このようなシステムでは、全ての一連の反応を達成するために、糖類は容器から容器に輸送される。あるいは、システムは、連続的な添加および適切な試薬の除去により全ての化学反応が段階的に行われる、単一の反応容器を含み得る。このようなシステムでは、反応に影響を与えるのに十分な条件および時間で導入される特定の反応のために、糖類は反応容器中および必要な試薬に固定され得る。反応段階の完結に続き、任意の試薬および副生成物を除去するために、反応容器をフラッシュし、固定され修飾された糖類を取り出す。新たな試薬のセットを導入し、反応させ、そして除去するプロセスを、一連の反応における第２の反応工程を達成するために繰り返す。本発明の方法を自動化するための種々の方法が存在することは、当業者に明白である。以下の実施例を要約すると、実施例１は、完全にアセチル化されたヒドラジノ単糖類誘導体のフリーの単糖類からの合成を記載する。実施例２は、オリゴ糖類の還元末端の単糖類からの、完全にアセチル化されたヒドラジノ単糖類誘導体の合成を記載する。実施例３は、代表的な1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトールのクロマトグラフィーによる精製を記載する。実施例４は、本発明の代表的な完全にアセチル化された誘導体の、クロマトグラフィーによる分離を記載する。実施例５は、質量分析を使用する、代表的な完全にアセチル化された1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトールの分析を記載する。実施例６は、分析上の著しく困難な問題（例えば、２つの異なった化合物の共移動、またはアルドヘキソースおよびケトヘキソースのような異性体の複雑な混合物の同定）を解決するための、完全にアセチル化された誘導体と、ガスクロマトグラフィー/質量分析の組み合わされた使用を記載する。以下の実施例は、例示として提示されるが、制限としての提示ではない。実施例実施例１フリーの単糖類からの単糖類誘導体の合成本実施例は、フリーの単糖類からの本発明の単糖類誘導体の合成を例示する。下記の誘導体の収率は、95％より多かった。Ａ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-グルシトール七酢酸 D-グルコース（0.100ミリモル）を、Pierce反応バイアル中で、1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして、窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを備えた蓋でキャップした。サンプルを室温にて16時間保持した後、D-グルコースのヒドラゾン誘導体へ変換し、Speed-Vac濃縮器でエバポレートして樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを、定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、その分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-グルシトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、0.200mLの氷酢酸を、約30秒間隔で滴下して加えた。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混合しながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.10 0mLの無水酢酸を添加し、続いて溶液を穏やかに撹拌してその全てを溶解させた。10分後、さらに0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかに撹拌して溶解させた。そして、さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そしてそれを10m L〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺型を有するカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。合計した溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-グルシトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上の高速クロマトグラフィーにより、アイソクラチックなアセトニトリル/水を使用して、8 5/15（容量／容量）、1.0mL/分、200nmの波長でモニターしながら行い、単一な糖成分を42.5分の単一なピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-グルシトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかで、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、100 μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にサンプルを保持し、そしてSp eed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプル由来の過-Ｏ-アセチル化材料のGCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS ）は、448（Ｍ⁺-42）、431（Ｍ⁺-59）、195、153、141、129、および87であり、より少量のイオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、質量448でのイオンがより豊富となった（例えば、図7aの挿入図を参照のこと）。CIMSでは、 491（MH）⁺、449（MH-42）⁺、および431（MH-60）⁺に主なイオンが得られた。これらのデータは、1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-グルシトール七酢酸の生成を示す。Ｂ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-アリトール七酢酸 D-アロース（0.100ミリモル）を、Pierce反応バイアル中で、1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして、窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを備えた蓋でキャップした。サンプルを室温にて16時間保持した後、D-アロースのヒドラゾン誘導体へ変換し、Sp eed-Vac濃縮器でエバポレートして樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを、定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、その分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-アリトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、0.200mLの氷酢酸を、約30秒間隔で滴下して加えた。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混合しながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて溶液を穏やかに撹拌してその全てを溶解させた。10分後、さらに0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかに撹拌して溶解させた。そして、さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そしてそれを10mL〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺型を有するカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。合計した溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-アリトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'- ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上の高速クロマトグラフィーにより、アイソクラチックなアセトニトリル/水を使用して、85/15（容量／容量）、1.0mL/分、200nmの波長でモニターしながら行い、単一な糖成分を4 1分の単一なピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの 1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-アリトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかで、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器により濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプル由来の過-Ｏ-アセチル化材料のGCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は、44 8（Ｍ⁺-42）、431（Ｍ⁺-59）、195、153、141、129、および87であり、より少量のイオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、質量448でのイオンがより豊富となった。CIMSでは、491（MH）⁺、449（MH-42）⁺、および431（MH-60 ）⁺に主なイオンが得られた。これらのデータは、1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D- アリトール七酢酸の生成を示す。Ｃ．1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-アルトリトール七酢酸 D-アルトロース（0.100ミリモル）を、Pierce反応バイアル中で、1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして、窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを備えた蓋でキャップした。サンプルを室温にて16時間保持した後、D-アルトロースのヒドラゾン誘導体へ変換し、Speed-Vac濃縮器でエバポレートして樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを、定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、その分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-アルトリトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、0.200mLの氷酢酸を、約3 0秒間隔で滴下して加えた。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混合しながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかに撹拌してその全てを溶解させた。10分後、さらに0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかに撹拌して溶解させた。そして、さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そしてそれを10m L〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺型を有するカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。合計した溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-アルトリトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上の高速クロマトグラフィーにより、アイソクラチックなアセトニトリル/水を使用して、85/15（容量／容量）、1.0mL/分、200nmの波長でモニターしながら行い、単一な糖成分を42分の単一なピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-アルトリトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかで、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、 100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μ Lの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプル由来の過-Ｏ- アセチル化材料のGCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（ EIMS）は、448（Ｍ⁺-42）、431（Ｍ⁺-59）、195、153、141、129、および87であり、より少量のイオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、質量448 でのイオンがより豊富となった。CIMSでは、491（MH）⁺、449（MH-42）⁺、および431（MH-60）⁺に主なイオンが得られた。これらのデータは、1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-アルトリトール七酢酸の生成を示す。Ｄ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-ガラクチトール七酢酸 D-ガラクトース（0.100ミリモル）を、Pierce反応バイアル中で、1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして、窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを備えた蓋でキャップした。サンプルを室温にて16時間保持した後、D-ガラクトースのヒドラゾン誘導体へ変換し、Speed-Vac濃縮器でエバポレートして樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを、定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、その分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-ガラクチトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、0.200mLの氷酢酸を、約3 0秒間隔で滴下して加えた。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混合しながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて溶液を穏やかに撹拌してその全てを溶解させた。10分後、さらに0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかに撹拌して溶解させた。そして、さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そしてそれを10mL〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺型を有するカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。合計した溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1 -(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-ガラクチトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm ）上の高速クロマトグラフィーにより、アイソクラチックなアセトニトリル/水を使用して、85/15（容量／容量）、1.0mL/分、200nmの波長でモニターしながら行い、単一な糖成分を45.5分の単一なピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-ガラクチトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかで、Sp eed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器により濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプル由来の過-Ｏ-アセチル化材料のGCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は、448（Ｍ⁺-42）、431（Ｍ⁺-59）、195、153、141、129、および87であり、より少量のイオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、質量448でのイオンがより豊富であった。CIMSでは、491（MH）⁺、449（MH-4 2）⁺、および431（MH-60）⁺に主なイオンが得られた。これらのデータは、1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-ガラクチトール七酢酸の生成を示す。Ｅ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-グリトール七酢酸 D-グロース（0.100ミリモル）を、Pierce反応バイアル中で、1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして、窒素下で、 Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを備えた蓋でキャップした。サンプルを室温にて16時間保持した後、D-グロースのヒドラゾン誘導体へ変換し、Spee d-Vac濃縮器でエバポレートして樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを、定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、その分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-グリトールとした。 24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、0.200mLの氷酢酸を、約30秒間隔で滴下して加えた。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混合しながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて溶液を穏やかに撹拌してその全てを溶解させた。10分後、さらに0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかに撹拌して溶解させた。そして、さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そしてそれを10mL〜12mL の十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺型を有するカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。合計した溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-グリトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N' -ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上の高速クロマトグラフィーにより、アイソクラチックなアセトニトリル/水を使用して、85/15（容量／容量）、1.0mL/分、200nmの波長でモニターしながら行い、単一な糖成分を4 2分の単一なピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの 1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-グリトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかで、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプル由来の過-Ｏ-アセチル化材料のGC MSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は、448（Ｍ⁺ -42）、431（Ｍ⁺-59）、195、153、141、129、および87であり、より少量のイオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、質量448でのイオンがより豊富となった。CIMSでは、491（MH）⁺、449（MH-42）⁺、および431（MH-60）⁺に主なイオンが得られた。これらのデータは、1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-グリトール七酢酸の生成を示す。Ｆ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-イジトール七酢酸 D-イドース（0.100ミリモル）を、Pierce反応バイアル中で、1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして、窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを備えた蓋でキャップした。サンプルを室温にて16時間保持した後、D-イドースのヒドラゾン誘導体へ変換し、Sp eed-Vac濃縮器でエバポレートして樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを、定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、その分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-イジトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、0.200mLの氷酢酸を、約30秒間隔で滴下して加えた。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混合しながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて溶液を穏やかに撹拌してその全てを溶解させた。10分後、0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかに撹拌して溶解させた。そして、さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そしてそれを10mL〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺型を有するカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。合計した溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-イジトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上の高速クロマトグラフィーにより、アイソクラチックなアセトニトリル/水を使用して、85/15（容量／容量）、1.0mL/分、200nmの波長でモニターしながら行い、単一な糖成分を43分の単一なピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-イジトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかで、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPie rce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、100μLの乾燥ピリジン（P ierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0 mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプル由来の過-Ｏ-アセチル化材料のGCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は、448（Ｍ⁺-42）、431（Ｍ⁺-59）、195、153、141、129、および87であり、より少量のイオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、質量448でのイオンがより豊富となった。CIMSでは、491（MH）⁺、449（MH-42）⁺、および431（MH-60）⁺に主なイオンが得られた。これらのデータは、1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-イジトール七酢酸の生成を示す。Ｇ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-マンニトール七酢酸 Pierce反応バイアル中で、D-マンノース（0.100ミリモル）を1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、D-マンノースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-マンニトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0. 100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。1 0分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20 mLで５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D -マンニトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ- アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、 Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1.0mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、単一の糖成分を43.5分の単一のピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-マンニトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器中のP ierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（P ierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1 .0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプルから誘導された過-Ｏ-アセチル化材料の GCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は448（Ｍ⁺ -42）、431（Ｍ⁺-59）、195、153、141、129、および87であり、少量イオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、質量448でのイオンがより豊富になる。CIMSでは491（MH）⁺、449（MH-42）⁺および431（MH-60）⁺に主なイオンが得られた。これらのデータは、1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-マンニトール七酢酸の生成を示す。Ｈ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-タリトール七酢酸 Pierce反応バイアル中で、D-タロース（0.100ミリモル）を1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、 Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、D-タロースのヒドラゾン誘導体に変換し、Sp eed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-タリトールとした。 24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100m Lの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mL で５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D- タリトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Wa te rs GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1.0mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、単一の糖成分を42分の単一のピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ- 1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-タリトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。 HPLC精製の前または後のサンプルから誘導された過-Ｏ-アセチル化材料のGCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。主な質量イオン（EIMS）は448（Ｍ⁺-4 2）、431（Ｍ⁺-59）、195、153、141、129、および87であり、少量イオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、質量448でのイオンがより豊富になる。CIMSでは491（MH）⁺、449（MH-42）⁺および431（MH-60）⁺に主なイオンが得られた。これらのデータは、1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-タリトール七酢酸の生成を示す。Ｉ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-アラビニトール六酢酸 Pierce反応バイアル中で、D-アラビノース（0.100ミリモル）を1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、D-アラビノースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-アラビニトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mg の重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10 〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLで５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-アラビニトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1.0mL／分にて用い、200nm の波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、単一の糖成分を34分の単一のピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-アラビニトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpee d-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、G CMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプルから誘導された過-Ｏ- アセチル化材料のGCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（ EIMS）は376（Ｍ⁺-42）、359（Ｍ⁺-59）、196、153、141、129、および87であり、少量イオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、376、129、および87でのイオンが最も豊富であった。これらのデータは、1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-アラビニトール六酢酸の生成を示す。Ｊ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-リキシトール六酢酸 Pierce反応バイアル中で、D-リキソース（0.100ミリモル）を1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、D-リキソースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-リキシトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30 秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、 0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10〜12m Lの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸 20mLで５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ) -D-リキシトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1.0mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、単一の糖成分を34分の単一のピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1- デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-リキシトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierc e反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierc e、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mL のクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプルから誘導された過-Ｏ-アセチル化材料のGC MSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は376（Ｍ⁺-4 2）、359（Ｍ⁺-59）、196、153、141、129、および87であり、少量イオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、376、129、および87でのイオンが最も豊富であった。これらのデータは、1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-リキシトール六酢酸の生成を示す。Ｋ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-リビトール六酢酸 Pierce反応バイアル中で、D-リボース（0.100ミリモル）を1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、 Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、D-リボースのヒドラゾン誘導体に変換し、Sp eed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-リビトールとした。 24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100m Lの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mL で５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D- リビトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Wa ters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1.0mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、単一の糖成分を33分の単一のピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-リビトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce 反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierce 、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mL のクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプルから誘導された過-Ｏ-アセチル化材料のGC MSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は376（Ｍ⁺-4 2）、359（Ｍ⁺-59）、196、153、141、129、および87であり、少量イオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、376、129、および87でのイオンが最も豊富であった。これらのデータは、1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-リビトール六酢酸の生成を示す。Ｌ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-キシリトール六酢酸 Pierce反応バイアル中で、D-キシロース（0.100ミリモル）を1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、D-キシロースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-キシリトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30 秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、 0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10〜12m Lの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸 20mLで５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ) -D-キシリトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1.0mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、単一の糖成分を34分の単一のピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1- デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-キシリトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mL のクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプルから誘導された過-Ｏ-アセチル化材料のGC MSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は376（Ｍ⁺-4 2）、359（Ｍ⁺-59）、196、153、141、129、および87であり、少量イオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、376、129、および87でのイオンが最も豊富であった。これらのデータは、1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-キシリトール六酢酸の生成を示す。Ｍ．2- アミノ-1,2-ジデオキシ-1-ヒドラジノ-D-グルシチトール七酢酸 Pierce反応バイアル中で、2-アミノ-2-デオキシ-D-グルコース（0.100ミリモル）を1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、2-アミノ-2-デオキシ-D-グルコースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して2-アミノ-1,2-ジデオキシ-1-ヒドラジノ-D-グルシトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。10分後、別の 0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLで５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより2-アミノ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-1,2-ジデオキシ- D-グルシトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1.0mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、単一の糖成分を41分の単一のピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの2- アミノ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-1,2-ジデオキシ-D-グルシトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpee d-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、G CMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプルから誘導された過-Ｏ- アセチル化材料のGCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（ EIMS）は374、251、209、181、139、119、96、87、および84であり、少量イオンがたくさんあった。CIMSでは490（MH）⁺、472（MH-18）、448（MH-42）⁺および4 30（MH-60）⁺に主なイオンが得られた。これらのデータは、2-アミノ-1,2-ジデオキシ-1-ヒドラジノ-D-グルシトール七酢酸の生成を示す。Ｎ．2- アミノ-1,2-ジデオキシ-1-ヒドラジノ-D-ガラクチトール七酢酸 Pierce反応バイアル中で、2-アミノ-2-デオキシ-D-ガラクトース（0.100ミリモル）を1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、2-アミノ-2-デオキシ-D-ガラクトースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL 試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して2-アミノ-1,2-ジデオキシ-1-ヒドラジノ-D-ガラクチトールとした。24 時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mL の無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLで５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより2-アミノ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-1,2-ジデオキシ-D-ガラクチトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1.0mL／分にて用い、200nm の波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、単一の糖成分を36.5分の単一のピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの2-アミノ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-1,2-ジデオキシ-D-ガラクチトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Sp eed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプルから誘導された過-Ｏ-アセチル化材料のGCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は374、251、209、181、139、114、96、87、および84であり、少量イオンがたくさんあった。CIMSでは490（MH）⁺、472（MH-18）⁺、448（MH-4 2）⁺および430（MH-60）⁺に主なイオンが得られた。これらのデータは、2-アミノ-1,2-ジデオキシ-1-ヒドラジノ-D-ガラクチトール七酢酸の生成を示す。Ｏ．1,6- ジデオキシ-1-ヒドラジノ-L-ガラクチトール七酢酸 Pierce反応バイアル中で、6-デオキシ-L-ガラクトース（0.100ミリモル）を1. 0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、6-デオキシ-L-ガラクトースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1,6-ジデオキシ-1-ヒドラジノ-L-ガラクチトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1 .0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜 200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10 mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLで５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-(N ,N'-ジアセチルヒドラジノ)-1,6-ジデオキシ-L-ガラクチトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8 ×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1.0mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、単一の糖成分を28分の単一のピークとして得た。過-Ｏ- アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-1,6- ジデオキシ-L-ガラクチトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプルから誘導された過-Ｏ-アセチル化材料のGCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は390（Ｍ⁺-42）、373(Ｍ⁺-59)、 141、129、100、および87であり、少量イオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、質量390、129、および87でのイオンが最も豊富であった。これらのデータは、1,6-ジデオキシ-1-ヒドラジノ-L-ガラクチトール七酢酸の生成を示す。Ｐ．1,6- ジデオキシ-1-ヒドラジノ-L-マンニトール七酢酸 Pierce反応バイアル中で、6-デオキシ-L-マンノース（0.100ミリモル）を1.0m Lの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、6-デオキシ-L-マンノースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1,6-ジデオキシ- 1-ヒドラジノ-L-マンニトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5. 0mLの水で希釈し、そして10〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ次いで、メタノール中の１％酢酸20mLで５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-1,6-ジデオキシ-L-マンニトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300m m）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1 .0mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、単一の糖成分を27.5分の単一のピークとして得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ )-6-デオキシ-L-マンニトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプルから誘導された過-Ｏ-アセチル化材料のGCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は390（Ｍ⁺-42）、373(Ｍ⁺-59)、 141、129、100、および87であり、少量イオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、390、129、および87でのイオンが最も豊富であった。これらのデータは、1,6-ジデオキシ-1-ヒドラジノ-L-マンニトール七酢酸の生成を示す。Ｑ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-L-グルシトール七酢酸 Pierce反応バイアル中で、L-グルコース（0.100ミリモル）を1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、L-グルコースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-L-グルシトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30 秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、 0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10〜12m Lの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸 20mLで５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-L -グルシトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ- アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、 Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1.0mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、42.5分の単一のピークを得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-L-グルシトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプルから誘導された過-Ｏ-アセチル化材料のGCMSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は448（Ｍ⁺-42）、431(Ｍ⁺-59)、19 5、153、141、129、および87であり、少量イオンがたくさんあった。低いフィラメント出力では、448での質量イオンがより豊富になる。これらのデータは、1- デオキシ-1-ヒドラジノ-L-グルシトール七酢酸の生成を示す。Ｒ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-3-Ｏ-メチル-D-グルシトール六酢酸 Pierce反応バイアル中で、3-Ｏ-メチル-D-グルコース（0.100ミリモル）を1.0 mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemlcal Company）中に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、3-Ｏ-メチル-D-グルコースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-3-Ｏ-メチル-D-グルシトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100 〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを 10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLで５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1- デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-3-Ｏ-メチル-D-グルシトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように遊離ヒドロキシル基上で直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1.0mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、31分の単一のピークを得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'- ジアセチルヒドラジノ)-3-Ｏ-メチル-D-グルシトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierc e反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierc e、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mL のクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。HPLC精製の前または後のサンプルから誘導された過-Ｏ-アセチル化材料のGC MSによる分析は、単一の糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は420（Ｍ⁺-4 2）、403(Ｍ⁺-59)、171、143、129、125、および87であり、少量イオンがたくさんあった。これらのデータは、生成物が1-デオキシ-1-ヒドラジノ-3-Ｏ-メチル- D-グルシトール六酢酸であることを示す。Ｓ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-トレイトール五酢酸 Pierce反応バイアル中で、D-トレオース（0.100ミリモル）を1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、 Pierce Tuf-bondテフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、D-トレオースのヒドラゾン誘導体に変換し、 Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-トレイトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0. 100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。1 0分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10〜12mLの十分に洗浄したDowex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20 mLで５回そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D -トレイトールを得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、またはＯ- アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、 Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1.0mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、27.5分の単一のピークを得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-トレイトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-V ac ロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。過-Ｏ-アセチル化材料のGCMSによる分析は、糖の誘導体を示した。質量イオン（EIMS）は、主に304（Ｍ⁺-42）、287(Ｍ⁺-59)、184、129、124、および87であり、少量イオンがたくさんあった。CIMSでは347（MH）⁺、305（MH-42）⁺、および287（MH-60）⁺ に主なイオンが得られた。これらのデータは、生成物が1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-トレイトール五酢酸であることを示す。Ｔ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-エリトリトール五酢酸 D-エリトロース（約0.100ミリモル）を、Sigma Chemical Companyから得たが、純度が約75％しかなく、さらなる糖不純物を含有していた。この材料をシロップとし、Pierce反応バイアル中で、1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldri ch Chemical Company）中に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bondテフロン -シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、16時間室温に置いた後、D-エリトロースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして、樹脂状材料とした。容量1.0mLの水中のサンプルを定量的に2 0mL試験管の中へ移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-エリトリトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を、約30秒を超える間隔で滴下した。サンプルを1.0mLの水で希釈した。それに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、そして随時混ぜながら重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてそのすべてを溶解した。10分後、別の0.100m Lの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。そしてさらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして10〜12mLの十分に洗浄したDow ex AG1-X8、100〜200メッシュ、Ｈ⁺形態を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。カラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLで５回そして20mL のメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去し、それにより1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-エリトリトールを主成分として得た。このサンプルはいくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンおよび糖不純物を含有した。これをＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーにより精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300m m）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、1 .0mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより行い、27分に顕著な肩を有するピークを26分に得た（約75％）。従って、生成物を、Shodex DC-613カラム（6.0×150mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水を、85／15（容量／容量）、0.6mL／分にて用い、200nmの波長でモニターしながら、高速液体クロマトグラフィーにより分離し、２つの分離したピークを得た［15.5分｛1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-エリトリトール、約75％｝、および17.5分（未知の不純物）］。過-Ｏ-アセチル化のために、約1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D- エリトリトールを、Speed-Vacロータリー濃縮器中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。アルゴン下で24時間、室温にてサンプルを保持し、そしてSpeed-Vacロータリー濃縮器により溶媒を除去した。約0.5mLのクロロホルム中でサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮した。次いで、GCMS分析用に、1.0mLのクロロホルム中にサンプルを取り込み、感度の研究のために、連続的に希釈した。過-Ｏ-アセチル化材料のGCMSによる分析は、糖の誘導体を与えた。質量イオン（EIMS）は、主に 304（Ｍ⁺-42）、287(Ｍ⁺-59)、184、129、124、および87であり、少量イオンがたくさんあった。CIMSでは347（MH）⁺、305（MH-42）⁺、および287（MH-60）⁺に主なイオンが得られた。これらのデータは、生成物が1-デオキシ-1-ヒドラジノ- D-エリトリトール五酢酸であることを示す。Ｕ．1- デオキシ-1-ヒドラジノ-D-グリセロール四酢酸 D-グリセルアルデヒド（0.100ミリモル）をPierce反応バイアル中で1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bond テフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、室温で16時間静置した後、D-グリセルアルデヒドのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして樹脂状材料とした。容積1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-グリセロールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を約30秒を越える間隔で滴下した。このサンプルを1.0mLの水で希釈した。これに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、時折かき混ぜて重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてその全てを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして、10m L〜12mLの十分に水洗したDowex AG1-X8（100-200メッシュ、H⁺形態）を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。このカラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全ての溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去した。その結果、1-デオキシ-1-(N,N' -ジアセチルヒドラジノ)-D-グリセロールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを、下記のように遊離のヒドロキシル基上で直接Ｏ-過アセチル化するか、あるいはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーによって精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPa k Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水（85／1 5（容量／容量）、1.0mL／分）を用いて、200nmの波長でモニターしながら、高速クロマトグラフィーにより行い、21.5分の単一の生成物ピークを得た。過-Ｏ- アセチル化のために、1.0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-グリセロールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器の中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。このサンプルを、室温、アルゴン下で24時間維持し、それから溶媒を窒素気流下で除去した。約0.5mLのクロロホルム中でこのサンプルを可溶化し、そして再び窒素気流下で濃縮した。GCMS による過-Ｏ-アセチル化した材料の分析は、主に232(M⁺-42)、215(M⁺-59)、129、1 12、87および69での質量イオン（EIMS）と多くのあまり豊富でないイオンとを有する、糖誘導体であることを示した。これらのデータは、この生成物が1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-グリセロール四酢酸であることを示す。Ｖ．2- ヒドラジノエタノール三酢酸グリコールアルデヒド（二量体形態で0.100ミリモル）をPierce反応バイアル中で1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bond テフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、室温で16時間静置した後、グリコールアルデヒドのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして樹脂状材料とした。容積1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して2-ヒドラジノエタノールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を約30秒を越える間隔で滴下した。このサンプルを1.0mLの水で希釈した。これに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、時折かき混ぜて重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてその全てを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして、1 0mL〜12mLの十分に水洗したDowex AG1-X8（100-200メッシュ、H⁺形態）を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。このカラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全ての溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去した。その結果、2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-エタノールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'- ジアセチルヒドラジンを含有した。これを、下記のように遊離のヒドロキシル基上で直接Ｏ-過アセチル化するか、あるいはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーによって精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8 ×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水（85／15（容量／容量）、1. 0mL／分）を用いて、200nmの波長でモニターしながら、高速クロマトグラフィーにより行い、17分の単一の生成物ピークを得た。Ｏ-アセチル化のために、1.0マイクロモルの2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-エタノールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Speed-Vacロータリー濃縮器の中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。このサンプルを、室温、アルゴン下で24時間維持し、それから溶媒を窒素気流下で除去した。約0.5mLのクロロホルム中でこのサンプルを可溶化し、そして再び窒素気流下で濃縮した。GCMSによる過-Ｏ-アセチル化した材料の分析は、主に160(M⁺-42)、143(M⁺-59)、100、87および58での質量イオン（EIMS）および多くのあまり豊富でないイオンを有する、糖誘導体であることを示した。これらのデータは、この生成物が2-ヒドラジノエタノール三酢酸であることを示す。Ｗ．1- デオキシ-1-(N'-メチルヒドラジノ)-D-グルシトール七酢酸 D-グルコース（0.100ミリモル）をPierce反応バイアル中で1.0mLのメチルヒドラジン（Aldrich Chemical Company）に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-b ond テフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、室温で16時間静置した後、D-グルコースのメチルヒドラゾン誘導体に変換し、Sp eed-Vac濃縮器中でエバポレートして樹脂状材料とした。容積1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-(N'-メチルヒドラジノ)-D-グルシトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を約3 0秒を越える間隔で滴下した。このサンプルを1.0mLの水で希釈した。これに200m gの重炭酸ナトリウムを加え、時折かき混ぜて重炭酸塩を溶解させた。次いで、0 .100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてその全てを溶解した。10 分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして、10mL〜12mLの十分に水洗したDowex AG1-X8（100-200メッシュ、H⁺形態）を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。このカラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全ての溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去した。その結果、1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチル-N'-メチルヒドラジノ)-D-グルシトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチル-N-メチルヒドラジンを含有した。これを、下記のように直接Ｏ-過アセチル化するか、あるいはＯ-アセチル化の前にクロマトグラフィーによって精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8× 300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水（85／15（容量／容量）、1.0mL／分）を用いて、200nmの波長でモニターしながら、高速クロマトグラフィーにより行い、32分で溶離する生成物を得た。過-Ｏ-アセチル化のために、1. 0マイクロモルの1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチル-N'-メチルヒドラジノ)-D-グルシトールを、液体クロマトグラフィーによる精製の前または後のいずれかに、Sp eed-Vacロータリー濃縮器の中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。このサンプルを、室温、アルゴン下で24時間維持し、それから溶媒をSpeed-Vacロータリー濃縮器を用いて除去した。約0.5 mLのクロロホルム中でこのサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器を用いて濃縮した。次いで、高速原子衝突（FAB）MS分析のために、このサンプルを20μLのクロロホルム中に取り込んだ。過-Ｏ-アセチル化した材料の分析は、505(MH)⁺、463(MH-42)⁺および445(MH-60)⁺、ならびにさらなるナトリウムイオンによる527(M＋Na)⁺での質量イオン（FABMS）を有する、単一の糖誘導体であることを示した。これらのデータは、この生成物が1-デオキシ-1-(N'-メチルヒドラジノ)-D-グルシトール七酢酸であることを示す。Ｘ．2- デオキシ-2-ヒドラジノ-D-グリトール七酢酸および 2- デオキシ-2-ヒドラジノ-D-イジトール七酢酸 D-ソルボース（0.100ミリモル）をPierce反応バイアル中で1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして窒素下で、Pi erce Tuf-bond テフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、室温で16時間静置した後、D-ソルボースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして樹脂状材料とした。容積1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-グリトールおよび 2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-イジトールの混合物とした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を約30秒を越える間隔で滴下した。このサンプルを1.0mLの水で希釈した。これに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、時折かき混ぜて重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてその全てを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして、10mL〜12mLの十分に水洗したDowex AG1-X8（100 -200メッシュ、H⁺形態）を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。このカラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全ての溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mL のメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去した。その結果、2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-グリトールおよびそのC-2エピマーである2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-イジトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを、Ｏ-アセチル化の前にクロマトグラフィーによって精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水（85／15（容量／容量）、1.0mL／分）を用いて、200nmの波長でモニターしながら、高速クロマトグラフィーにより行い、34分で、両方のエピマーを含むややブロードな生成物ピークを得た。このサンプルのFABMSによれば、281(MH)⁺ならびにさらなるナトリウムイオンによる303(M ＋Na)⁺での分子イオンが得られた。過-Ｏ-アセチル化のために、2-デオキシ-2-( N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-グリトールと2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-イジトールとの精製した混合物（1.0マイクロモル）を、Speed-Vac ロータリー濃縮器の中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50 μ Lの無水酢酸を添加した。このサンプルを、室温、アルゴン下で24時間維持し、それから溶媒をSpeed-Vacロータリー濃縮器を用いて除去した。約0.5mLのクロロホルム中でこのサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器を用いて濃縮した。次いで、FABMS分析のために、このサンプルを20μLのクロロホルム中に取り込んだ。この分析は、491(MH)⁺、449(MH-42)⁺および431(MH-60)⁺、ならびにナトリウムイオンの存在による513(M＋Na)⁺での質量イオンを有する、過-Ｏ-アセチル化生成物であることを示した。GCMSによる過-Ｏ-アセチル化生成物の分析は、１つのクロマトグラフ系において、ほぼ同じフラグメンテーションパターンを有する２つのピークを与えた。両方のピークのEIMSにより、両方に対して、多くのあまり豊富でないピークと共に、主にm/z 371、269、159、153、99 および84の質量イオンが得られた。これらのデータは、これらの生成物が2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-グリトール七酢酸および2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-イジトール七酢酸であることを示す。Ｙ．2- デオキシ-2-ヒドラジノ-D-グルシトール七酢酸および 2- デオキシ-2-ヒドラジノ-D-マンニトール七酢酸 D-フルクトース（0.100ミリモル）をPierce反応バイアル中1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして窒素下で、Pi erce Tuf-bond テフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、室温で16時間静置した後、D-フルクトースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして樹脂状材料とした。容積1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-グルシトールおよび2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-マンニトールの混合物とした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を約30秒を越える間隔で滴下した。このサンプルを1.0mLの水で希釈した。これに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、時折かき混ぜて重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてその全てを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして、10mL〜12mLの十分に水洗したDowex AG1 -X8（100-200メッシュ、H⁺形態）を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。このカラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全ての溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去した。その結果、2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-グルシトールおよびそのC-2エピマーである2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ )-D-マンニトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを、Ｏ-アセチル化の前にクロマトグラフィーによって精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300m m）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水（85／15（容量／容量）、1.0 mL／分）を用いて、200nmの波長でモニターしながら、高速クロマトグラフィーにより行い、33分および36分で、それぞれ60/40の相対量の生成物ピークを得た。過-Ｏ-アセチル化のために、2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D- グルシトールと2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-マンニトールとの混合物（1.0マイクロモル）を、Speed-Vacロータリー濃縮器の中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。このサンプルを、室温、アルゴン下で24時間維持し、それから溶媒をSpeed-Vacロータリー濃縮器を用いて除去した。約0.5mLのクロロホルム中でこのサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器を用いて濃縮した。このサンプルを、1.0mLクロロホルム中に取り込んだ。GCMSによる過-Ｏ-アセチル化生成物の分析によれば、ほぼ同じフラグメンテーションパターンを有する２つのピークが得られた。両方のピークのEIMSは、両方に対して、多くのあまり豊富でないイオンと共に、主にm/z 371、269、159、153、99および84の質量イオンを与えた。これらのデータは、これらの生成物が2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-グルシトール七酢酸および2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-マンニトール七酢酸であることを示す。Ｚ．2- デオキシ-2-ヒドラジノ-D-ガラクチトール七酢酸および 2- デオキシ-2-ヒドラジノ-D-タリトール七酢酸 D-タガトース（0.100ミリモル）をPierce反応バイアル中で1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして窒素下で、Pi erce Tuf-bond テフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、室温で16時間静置した後、D-タガトースのヒドラゾン誘導体に変換し Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして樹脂状材料とした。容積1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-ガラクチトールおよび2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-タリトールの混合物とした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を約30秒を越える間隔で滴下した。このサンプルを1.0mLの水で希釈した。これに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、時折かき混ぜて重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてその全てを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして、10mL〜12mLの十分に水洗したDowex AG1-X8（1 00-200メッシュ、H⁺形態）を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。このカラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全ての溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20 mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去した。その結果、2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-ガラクチトールおよびそのC-2エピマーである2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D- タリトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを、Ｏ-アセチル化の前にクロマトグラフィーによって精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水（85／15（容量／容量）、1.0mL／分）を用いて、200nmの波長でモニターしながら、高速クロマトグラフィーにより行い、32分および35分で、それぞれ30/70の相対量の生成物ピークを得た。過- Ｏ-アセチル化のために、2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-ガラクチトールと2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-タリトールとの混合物（1.0マイクロモル）を、Speed-Vacロータリー濃縮器の中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。このサンプルを、室温、アルゴン下で24時間維持し、それから溶媒をSpeed-Vacロータリー濃縮器を用いて除去した。約0.5mLのクロロホルム中でこのサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器を用いて濃縮した。このサンプルを1.0mL のクロロホルム中に取り込んだ。GCMSによる過-Ｏ-アセチル化生成物の分析によれば、ほぼ同じフラグメンテーションパターンを有する２つのピークが得られた。両方のピークのEIMSによれば、両方に対して、多くのあまり豊富でないイオンと共に、主にm/z 371、269、159、153、99および84の質量イオンが得られた。これらのデータは、これらの生成物が2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-ガラクチトール七酢酸および2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-タリトール七酢酸であることを示す。ＡＡ．2- デオキシ-2-ヒドラジノ-D-アリトール七酢酸および 2- デオキシ-2-ヒドラジノ-D-アルトリトール七酢酸 D-プシコース（0.100ミリモル）をPierce反応バイアル中で1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして窒素下で、Pi erce Tuf-bond テフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、室温で16時間静置した後、D-プシコースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして樹脂状材料とした。容積1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-アリトールおよび 2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-アルトリトールの混合物とした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を約30秒を越える間隔で滴下した。このサンプルを1.0mLの水で希釈した。これに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、時折かき混ぜて重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてその全てを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして、10mL〜12mLの十分に水洗したDowex AG1-X8 （1 00-200メッシュ、H⁺形態）を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。このカラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全ての溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20 mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去した。その結果、2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-アリトールおよびそのC-2エピマーである2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-アルトリトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを、Ｏ-アセチル化の前にクロマトグラフィーによって精製した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水（85／15（容量／容量）、1.0mL／分）を用いて、200nmの波長でモニターしながら、高速クロマトグラフィーにより行い、31分および33分で、それぞれ20/80の相対量の生成物ピークを得た。過- Ｏ-アセチル化のために、2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-アリトールと2-デオキシ-2-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-D-アルトリトールとの混合物（1.0マイクロモル）を、Speed-Vacロータリー濃縮器の中のPierce反応バイアル中で乾燥した。乾燥したサンプルを、100μLの乾燥ピリジン（Pierce、シリル化グレード）中に取り込み、そして50μLの無水酢酸を添加した。このサンプルを、室温、アルゴン下で24時間維持し、それから溶媒をSpeed-Vacロータリー濃縮器を用いて除去した。約0.5mLのクロロホルム中でこのサンプルを可溶化し、そして再びSpeed-Vacロータリー濃縮器を用いて濃縮した。このサンプルを1.0mL のクロロホルム中に取り込んだ。GCMSによる過-Ｏ-アセチル化生成物の分析によれば、ほぼ同じフラグメンテーションパターンを有する２つのピークが得られた。両方のピークのEIMSによれば、両方に対して、多くのあまり豊富でないイオンと共に、主にm/z 371、269、159、153、99および84の質量イオンを与えた。これらのデータは、これらの生成物が2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-アリトール七酢酸および2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-アルトリトール七酢酸であることを示す。実施例２オリゴ糖類の還元末端での単糖類からのジアセチルヒドラジノ単糖類誘導体の合成、およびその後に行われる還元単糖類誘導体の同定本実施例は、オリゴ糖類の還元末端に存在する単糖類からの本発明の単糖類誘導体の合成を示す。以下に記載される各誘導体の収率は、95％より高かった。Ａ．4- Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D-グルコースからの1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-グルシトール七酢酸の調製および還元単糖類の同定 4-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D-グルコース（0.050ミリモル）をPierce反応バイアル中で1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company ）に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bond テフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、室温で16時間静置した後、4-Ｏ-β- D-ガラクトピラノシル-D-グルコースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして樹脂状材料とした。容積1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-4-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D -グルシトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を約30秒を越える間隔で滴下した。このサンプルを1.0mLの水で希釈した。これに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、時折かき混ぜて重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてその全てを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして、1 0mL〜12mLの十分に水洗したDowex AG1-X8（100-200メッシュ、H⁺形態）を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。このカラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全ての溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去した。その結果、1-デオキシ-1-(N, N'-ジアセチルヒドラジノ)-4-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D-グルシトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを、クロマトグラフィーによる糖誘導体の精製によって除去した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水（79／21（容量／容量）、1.0mL／分）を用いて、200nm の波長でモニターしながら、高速クロマトグラフィーによって行い、41分で単一ピークとして単一の糖成分を得た。クロマトグラフによる精製の前または後のいずれかに、この生成物（1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-4-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D-グルシトール）(1.0マイクロモル)を、1.0mLの2.0M HCl中、100℃で３時間、窒素下でシールしたバイアル中で加水分解した。シールを取り除き、そしてロータリーエバポレートし、乾燥した。次いで、小さいバイアルに移し、そして濃縮し、乾燥した。残留物質を50μLの無水酢酸中に取り込み、その後直ちに、100μLのピリジンと混合した。室温、窒素下で16時間〜24時間後、サンプルをSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮し、続いて、約0.5mLのクロロホルムで洗浄した。この物質を1 .0mLのクロロホルム中に取り込み、そしてGCMSによって分析した。標準（authen tic）化合物と共に行うクロマトグラフの共移動（comigration）、ならびに低いフィラメント出力による448(M⁺-42)、129および87でのEIMSイオンに基づき、このようにして得られた過-Ｏ-アセチル化生成物を1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-グルシトール七酢酸であると同定した。Ｂ．3- Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D-アラビノースからの1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-アラビニトール六酢酸の調製および還元単糖類の同定 3-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D-アラビノース（0.50ミリモル）をPierce反応バイアル中で1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Compan y）に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bond テフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、室温で16時間静置した後、3-Ｏ-β- D-ガラクトピラノシル-D-アラビノースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac 濃縮器中でエバポレートして樹脂状材料とした。容積1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して1-デオキシ-1-ヒドラジノ-3-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル -D-アラビニトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200 mLの氷酢酸を約30秒を越える間隔で滴下した。このサンプルを1.0mLの水で希釈した。これに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、時折かき混ぜて重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてその全てを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして、10mL〜12mLの十分に水洗したDowex AG1-X8（100-200メッシュ、H⁺形態）を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。このカラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全ての溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去した。その結果、1-デオキシ -1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-3-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D-アラビニトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを、クロマトグラフィーによる糖誘導体の精製によって除去した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水（79／21（容量／容量）、1.0mL／分）を用いて、200 nmの波長でモニターしながら、高速クロマトグラフィーによって行い、37.5分で単一ピークとして単一の糖成分を得た。クロマトグラフによる精製の前または後のいずれかに、この生成物（1-デオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-3-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D-アラビニトール）(1.0マイクロモル)を、1.0mLの2.0M HCl中、100℃で３時間、窒素下でシールしたバイアル中で加水分解した。シールを取り除き、そしてロータリーエバポレートし、乾燥した。次いで、小さいバイアルに移し、そして濃縮し、乾燥した。残留物質を50μLの無水酢酸中に取り込み、その後直ちに、100μLのピリジンと混合した。室温、窒素下で16時間〜24時間後、サンプルをSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮し、続いて、約0.5mLのクロロホルムで洗浄した。この物質を1.0mLのクロロホルム中に取り込み、そしてGCMSによって分析した。標準化合物と共に行うクロマトグラフの共移動、および低いフィラメント出力による376 (M⁺-42)、129および87でのEIMSイオンに基づき、このようにして得られた過-Ｏ- アセチル化生成物を1-デオキシ-1-ヒドラジノ-D-アラビニトール六酢酸であると同定した。Ｃ．2- アセトアミド-2-デオキシ-4-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D-グルコースからの2-アミノ-1,2-ジデオキシ-1-ヒドラジノ-D-グルシトール七酢酸の調製および還元単糖類の同定 2-アセトアミド-2-デオキシ-4-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D-グルコース（0 .355ミリモル）をPierce反応バイアル中で1.0mLの無水ヒドラジン（PierceまたはAldrich Chemical Company）に溶解し、そして窒素下で、Pierce Tuf-bond テフロン-シリコーンシールを有する蓋でキャップした。このサンプルを、室温で1 6時間静置した後、2-アセトアミド-2-デオキシ-4-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル- D-グルコースのヒドラゾン誘導体に変換し、Speed-Vac濃縮器中でエバポレートして樹脂状材料とした。容積1.0mLの水中のサンプルを定量的に20mL試験管の中に移した。そして100mgの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、分子を還元して2- アセトアミド-1,2-ジデオキシ-1-ヒドラジノ-4-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D- グルシトールとした。24時間後、サンプルを氷水浴中に置き、そして0.200mLの氷酢酸を約30秒を越える間隔で滴下した。このサンプルを1.0mLの水で希釈した。これに200mgの重炭酸ナトリウムを加え、時折かき混ぜて重炭酸塩を溶解させた。次いで、0.100mLの無水酢酸を添加し、続いて穏やかにかき混ぜてその全てを溶解した。10分後、別の0.100mLの無水酢酸を添加し、溶液を穏やかにかき混ぜてそれを溶解した。さらに50分後、サンプルを5.0mLの水で希釈し、そして、1 0mL〜12mLの十分に水洗したDowex AG1-X8（100-200メッシュ、H⁺形態）を含むカラムにかけ、ナトリウムを除去した。このカラムを10mLの水でさらに５回洗浄した。全ての溶離物をロータリーエバポレートしてほぼ乾燥させ、次いで、メタノール中の１％酢酸20mLと共に５回、そして20mLのメタノール単独で３回ロータリーエバポレートして乾燥させ、ホウ酸を除去した。その結果、2-アセトアミド-1 ,2-ジデオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-4-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル -D-グルシトールを得た。このサンプルは、いくらかのさらなるN,N'-ジアセチルヒドラジンを含有した。これを、クロマトグラフィーによる糖誘導体の精製によって除去した。クロマトグラフィーは、Waters GlycoPak Nカラム（7.8×300mm）上で、アイソクラチックなアセトニトリル／水（79／21（容量／容量）、1.0mL／分）を用いて、200 nmの波長でモニターしながら、高速クロマトグラフィーによって行い、35分でのピークとして主要な糖成分を得た。クロマトグラフによる精製の前または後のいずれかに、この生成物（2-アセトアミド-1,2-ジデオキシ-1-(N,N'-ジアセチルヒドラジノ)-4-Ｏ-β-D-ガラクトピラノシル-D-グルシトール）(1.0マイクロモル)を、1.0mLの2.0M HCl中、100℃で３時間、窒素下でシールしたバイアル中で加水分解した。シールを取り除き、そしてロータリーエバポレートし、乾燥した。次いで、小さいバイアルに移し、そして濃縮し、乾燥した。残留物質を50μLの無水酢酸中に取り込み、その後直ちに、100μLのピリジンと混合した。室温、窒素下で16時間〜24時間後、サンプルをSpeed-Vacロータリー濃縮器で濃縮し、続いて、約0.5mLのクロロホルムで洗浄した。この物質を1.0mLのクロロホルム中に取り込み、そしてGCMSによって分析した。標準化合物と共に行うクロマトグラフの共移動、および374、251、181、1 39、114、96、87および84でのEIMSイオンに基づき、このようにして得られた過- Ｏ-アセチル化生成物を2-アミノ-1,2-ジデオキシ-1-ヒドラジノ-D-グルシトール七酢酸であると同定した。実施例３Ｎ-アセチル化誘導体の精製Ｎ-アセチル化した単糖類誘導体を、85％アセトニトリル、15％水に溶解し、流速1.0mL／分で、85％アセトニトリル、15％水を用いるHPLCカラム（Waters、G lyco Pak N、7.8×300mm）を使用するアイソクラチックなクロマトグラフィーにより、大まかに精製した。前述の還元単糖類で誘導体化されるオリゴ糖類もまた、65／35〜約80／20の範囲の容積比のアセトニトリル／水を用いた、同様のカラムで精製される。紫外光吸収を、200nmの波長でモニターした。これらの条件下で、主要な不純物（N,N'-ジアセチルヒドラジン）が見出され、約20分後に溶離された。一方、誘導体化された単糖類は、その後に溶離された。図5a〜gは、単糖類の特定のクラスの代表として、いくつかの1-デオキシ-1-(N ,N'-ジアセチルヒドラジノ)アルジトールの溶離プロフィールを示す：トリオースとして（Figure 5a）、D-グリセルアルデヒドの誘導体；テトロースとして（F igure 5b）、D-トレオースの誘導体；ペントースとして（Figure 5c）、D-キシロースの誘導体；ヘキソースとして（Figure 5d）、D-グルコースの誘導体；アミノ糖として（Figure 5e）、2-アミノ-2-デオキシ-D-ガラクトースのＮ-アセチル誘導体；デオキシ糖として（Figure 5f）、6-デオキシ-L-ガラクトース(L-フコース)の誘導体；１つ以上のアルコキシエーテル置換基を有する糖として（Fig ure 5g）、3-Ｏ-メチル-D-グルコース誘導体。各図において、第１の主要ピーク（約20分）は、N,N'-ジアセチルヒドラジンに対応し、第２の主要ピーク（＊で示される）は、誘導体に対応する。実施例４完全アセチル化誘導体のクロマトグラフィーによる分離 Extrel ELQ 400 MSまたはFinnigan MAT 大型質量分析計と接続したHewlett-Pa ckard 5890 GC上あるいはVarianガスクロマトグラフ上のいずれかで分離を行なった。キャリアガスはヘリウムであった。質量分析法を用いて、標準的には、電子衝撃モードまたは化学的イオン化モードで総イオンカレントモニターを用いて検出を行った。完全アセチル化誘導体を用いて行われたクロマトグラフィーによる分離のいくつかを、図6a〜fに示す：図6aは、４つのD-ペントースおよび２つの6-デオキシヘキソース（D-リボース、D-リキソース、D-アラビノース、D-キシロース、L-フコースおよびL-ラムノース）（約50ピコモル）の分離を示し、ここで、検出は総イオンカレントモニターを用いて行った。図6bは、１つの6-デオキシヘキソース（L-フコース）および６つのヘキソース（D-アロース、D-タロース、D-アルトロース、D-グルコース、D-マンノースおよびD-ガラクトース）（約50ピコモル）の分離を示し、ここで、検出は総イオンカレントモニターを用いて行った。図6cでは、１ピコモルのレベルで同じD-ヘキソースを各々分離し、そして電子衝撃モードで質量分析法を用いて検出した。図6dは、１ピコモルのレベルで同じD-ヘキソースの分離を、各々、イソブタンを用いる化学的イオン化モードで質量分析法によって検出した。図6eは、D-フルクトースから誘導される、完全にアセチル化された2-デオキシ-2-ヒドラジノアルジトールエピマーのGC分離を示し、全スペクトルから選択イオン99および159を抜粋した。この生成物は、2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-グルシトール七酢酸および2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-マンニトール七酢酸である。最後に、図6fは、D-タガトースから誘導される、完全にアセチル化された2-デオキシ-2-ヒドラジノアルジトールエピマーのGC分離を示し、全スペクトルから選択イオン99および159を抜粋した。この生成物は、2-デオキシ-2- ヒドラジノ-D-ガラクチトール七酢酸および2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-タリトール七酢酸である。実施例５完全アセチル化誘導体の質量スペクトル分析図7a〜7iは、誘導体の特定のクラスの代表として、完全にアセチル化された1- デオキシ-1-ヒドラジノアルジトールまたは2-デオキシ-2-ヒドラジノアルジトールの電子衝撃質量スペクトルを示す：図7aは、D-グルコース誘導体であるアルドヘキソースに関する（挿入図に示される、低いフィラメント出力で得られたスペクトル）；図7bは、D-リボース誘導体であるアルドペントースに関する；図7cは、2-アセトアミド-2-デオキシ-D-グルコースである2-アセトアミド-2-デオキシヘキソースに関する；図7dは、L-ラムノースである6-デオキシアルドヘキソースに関する；図7eは、3-Ｏ-メチル-D-グルコースである3-Ｏ-メチルアルドヘキソースに関する；図7fは、D-エリトロースであるアルドテトロースに関する；図7g は D-グルセルアルデヒドであるアルドトリオースに関する；図7hは、D-フルクトース、完全にアセチル化された2-デオキシ-2-ヒドラジノ-D-グルシトールまたは2- デオキシ-2-ヒドラジノ-D-マンニトールから誘導されるエピマー対の１つであるであるケトヘキソースに関する；図7iは、グリコールアルデヒドである。実施例６分析の特定の問題に対する、完全アセチル化誘導体、ガスクロマトグラフィー、および質量分析法の組み合わせによる使用図8aおよびbは、MSによってモニターした、４つのペントースおよび２つの6- デオキシヘキソース（D-リボース、D-アラビノース、D-リキソース、D-キシロース、L-ラムノースおよびL-フコース）の、完全にアセチル化された1-デオキシ-1 -ヒドラジノアルジトール誘導体のクロマトグラフィーによるプロフィールを示す。両方の図の上部に、総イオンカレントを示す。総イオンカレントは、「x」で示された非炭水化物の不純物と、実質的に同時に移動するために総イオンカレントによって明瞭に区別することのできない２つの誘導体（D-リボースおよびL- フコース）とを示す。しかし、m／z 210の選択イオン（６-デオキシヘキソースに特有、図8aの下部）が、全スペクトルから抜粋され得、この質量でペントースを「暗黙に（silent）」表す。同様に、m／z 359の選択イオン（ペントースに特有、8bの下部）が、全スペクトルから抜粋され得、この質量で6-デオキシヘキソースを「暗黙に」表す。全スペクトルからのさらなるイオンは、同じ保持時間で両方の化合物が存在することを確証するためにプロットされ得るか、あるいは２つより多い化合物がサンプルの複合混合物中で共移動し得るかどうかを決定するために用いられ得る。図9a〜cは、MSによってモニターした、２つのアルドテトロース、４つのアルドペントース、８つのアルドヘキソース、４つのケトヘキソースおよび１つの3- Ｏ-メチルアルドヘキソース（D-エリトロース(D-erthrose)、D-トレオース、D- リボース、D-リキソース、D-アラビノース、D-キシロース、D-アロース、D-タロース、D-アルトロース、D-マンノース、D-グルコース、D-グロース、D-イドース、D-ガラクトース、D-プシコース、D-タガトース、D-フルクトース、D-ソルボースおよび3-Ｏ-メチルグルコース）の、完全にアセチル化された1-デオキシ-1- ヒドラジノアルジトール誘導体および2-デオキシ-2-ヒドラジノアルジトール誘導体のガスクロマトグラフィーによるプロフィールを示す。(a)では、総イオンカレントを示す。(b)では、アルドースに特有の、m／z 87の選択イオンを抜粋した。(c)では、ケトースに選択的な、m／z 371の選択イオンを抜粋した。非炭水化物の不純物を「x」で示した。アルドースおよびケトースを、単一イオン(87) の有無に基づいて明確に区別した。全スペクトルから抜粋したイオンの比と、保持時間とを組み合わせて使用することによって、特に１つより多くのGCカラムを用いる場合に、立体異性体の複雑な混合物のほとんどを確認し得る。例示の目的で、本明細書において本発明の特定の実施態様が記載してきたが、種々の改変が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行われ得ることは、上記より明白である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＧ０１Ｎ 30/74 Ｇ０１Ｎ 30/74 Ｅ 30/88 30/88 Ｎ 31/00 31/00 Ｖ

Claims

【特許請求の範囲】１．以下の構造を有するN,N'-ジアセチルヒドラジノ単糖類誘導体：ここで、R₁は1-デオキシアルドースまたはデオキシケトース部であり、そしてR₂ は、水素または１〜８個の炭素原子を含有するアルキル基である。２．R₂が１〜８個の炭素原子を含有するアルキル基である、請求項１に記載の単糖類誘導体。３．R₁がＯ-メチル結合を有する、請求項１に記載の単糖類誘導体。４．前記単糖類誘導体が以下の工程に従って生成される、N,N'-ジアセチルヒドラジノ単糖類誘導体： (a) 単糖類を以下の構造を有するヒドラジンと反応させることによりヒドラゾンを生成する工程であって：ここで、Rは水素または１〜８個の炭素原子を含有するアルキル基であり、そして該単糖類はアルドースまたはケトースである、工程； (b) 該ヒドラゾンをヒドラジノ誘導体に還元する工程；および (c) 窒素原子上でアセチル化が起こるような条件下で該ヒドラジノ誘導体をアセチル化する工程。５．前記単糖類が、オリゴ糖類の還元末端に存在し、そしてここで前記ヒドラジノ誘導体の生成が、さらにオリゴ糖類から該単糖類誘導体を切断する工程により達成される、請求項４に記載の単糖類誘導体。６．Rが１〜８個の炭素原子を含有するアルキル基である、請求項４に記載の単糖類誘導体。７．前記誘導体が完全にアセチル化される、請求項１または４に記載の単糖類誘導体。８．以下の構造を有するN,N'-ジアセチルヒドラジノ単糖類誘導体を生成するための方法であって、：ここで、R₁は1-デオキシ-アルドース部またはデオキシケトース部であり、そしてR₂は水素または１〜８個の炭素原子を含有するアルキル基であり、以下の工程を包含する方法： (a) 単糖類を以下の構造を有するヒドラジンと反応させることによりヒドラゾンを生成する工程であって、：ここで、Rは水素、または１〜８個の炭素原子を含有するアルキル基であり、そして該単糖類は、アルドースまたはケトースである、工程； (b) 該ヒドラゾンをヒドラジノ誘導体に還元する工程；および (c) 窒素原子上でアセチル化が起こるような条件下で該ヒドラジノ誘導体をアセチル化する工程。９．前記ヒドラジノ誘導体が完全にアセチル化される条件下で、該ヒドラジノ誘導体をアセチル化する工程をさらに包含する、請求項８に記載の方法。１０．Rが１〜８個の炭素原子を含有するアルキル基である、請求項８または９のいずれかに記載の方法。１１．前記単糖類がオリゴ糖類の還元末端に存在し、そして前記方法が、ヒドラジノ誘導体と該オリゴ糖類における隣接の単糖類との間のグリコシド結合を切断する工程をさらに包含する、請求項８または９のいずれかに記載の方法。１２．以下の工程を包含する、アルドースまたはケトース単糖類を同定するための方法： (a) 請求項８または９のいずれかに記載の方法に従って、N,N'-ジアセチルヒドラジノ単糖類誘導体を生成する工程； (b) 該単糖類誘導体をクロマトグラフィーにより分離する工程；および (c) 該分離された単糖類誘導体を分析し、同定を決定する工程。１３．以下の工程を包含する、オリゴ糖類の還元末端に存在するアルドースまたはケトース単糖類を同定するための方法： (a) 請求項１１に記載の方法に従って、アセチル化ヒドラジノ単糖類誘導体を生成する工程； (b) 該単糖類誘導体をクロマトグラフィーにより分離する工程；および (c) 該分離された単糖類誘導体を分析し、同定を決定する工程。１４．前記分析工程が質量分析法による分析を包含する、請求項１２または１３のいずれかに記載の方法。１５．前記質量分析法がオンラインである、請求項１４に記載の方法。１６．前記分析工程が紫外線分光測定法による分析を包含する、請求項１２または１３のいずれかに記載の方法。１７．前記方法が自動化される、請求項８〜１６のいずれか１項に記載の方法。