JPH11228986A - Degumming method with phospholipase - Google Patents
Degumming method with phospholipaseInfo
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- JPH11228986A JPH11228986A JP10044595A JP4459598A JPH11228986A JP H11228986 A JPH11228986 A JP H11228986A JP 10044595 A JP10044595 A JP 10044595A JP 4459598 A JP4459598 A JP 4459598A JP H11228986 A JPH11228986 A JP H11228986A
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- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B3/00—Refining fats or fatty oils
- C11B3/003—Refining fats or fatty oils by enzymes or microorganisms, living or dead
Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、精油工業における
脱ガム法に関する。さらに、本発明は、食用油製造工業
などにも広く応用することができるものである。[0001] The present invention relates to a degumming method in the essential oil industry. Further, the present invention can be widely applied to the edible oil manufacturing industry and the like.
【０００２】[0002]
【従来の技術】大豆、パーム種子、米ぬか等より搾油し
た原油中には、リン脂質を主成分とするガム質が含まれ
ている。原油中に含まれるガム質は、油脂の品質を劣化
させるため、脱ガム工程によりこれを除去する必要があ
る。従来から、脱ガム工程には、ホスホリパーゼが用い
られている。ホスホリパーゼは、ガム質の主成分である
リン脂質を加水分解することができるので、これにより
ガム質を加水分解して除去することができる。2. Description of the Related Art Crude oil squeezed from soybeans, palm seeds, rice bran, and the like contains a gum substance mainly composed of phospholipids. Gum contained in crude oil degrades the quality of fats and oils, and thus needs to be removed by a degumming step. Conventionally, phospholipase has been used in the degumming step. Phospholipase can hydrolyze phospholipids, which are the main components of gum, so that gum can be hydrolyzed and removed.
【０００３】しかし、現在用いられているホスホリパー
ゼは、比較的耐熱性が低いため、油脂の粘性がなくなる
ような高温においては容易に失活してしまい、効率的に
リン脂質を加水分解できないという問題点があった。ま
た、リン脂質の加水分解のために添加したホスホリパー
ゼは、原油と完全に混合してしまい、回収して再利用す
ることができず、経済的な面からも問題があった。そこ
で、効率がよく経済的な脱ガム法の開発が緊急の課題と
なっている。However, the currently used phospholipase has relatively low thermostability, so that it is easily deactivated at high temperatures at which fats and oils lose viscosity, so that phospholipids cannot be efficiently hydrolyzed. There was a point. In addition, phospholipase added for the hydrolysis of phospholipids is completely mixed with crude oil, cannot be recovered and reused, and has a problem in terms of economy. Therefore, development of an efficient and economical degumming method is an urgent issue.
【０００４】[0004]
【発明が解決しようとする課題】本発明は、高温（例え
ば70℃以上）においてもホスホリパーゼにより効率よく
リン脂質を加水分解でき、さらにホスホリパーゼを回収
再利用することができる脱ガム法を提供することを目的
とする。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention provides a degumming method capable of efficiently hydrolyzing phospholipids with phospholipase even at a high temperature (for example, 70 ° C. or higher), and recovering and reusing phospholipase. With the goal.
【０００５】[0005]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究した結果、疎水性担体と陽イ
オン交換基とからなる陽イオン交換体にホスホリパーゼ
Ａ１及び／又はＡ２を固定化することにより、ホスホリ
パーゼＡ１及び／又はＡ２の耐熱性が向上するという知
見を得るとともに、加水分解の対象となるリン脂質は陽
イオン交換体の疎水性担体部分に吸着されやすい一方、
加水分解産物であるリゾリン脂質及び脂肪酸は反応液中
に遊離されやすいため、ホスホリパーゼＡ１及び／又は
Ａ２とリン脂質との反応性が増大するという知見を得
た。そして、これらの知見に基づき、疎水性担体と陽イ
オン交換基とからなる陽イオン交換体に固定化された固
定化ホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ２を用いることに
より効率よく油脂の脱ガムを行なうことができるととも
に、ホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ２の回収再利用を
図ることができることを見出し、本発明を完成するに至
った。Means for Solving the Problems The present inventors have made intensive studies to solve the above-mentioned problems, and as a result, phospholipases A1 and / or A2 were added to a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group. By immobilization, it has been found that the heat resistance of phospholipase A1 and / or A2 is improved, and the phospholipid to be hydrolyzed is easily adsorbed to the hydrophobic carrier portion of the cation exchanger.
Since lysophospholipids and fatty acids, which are hydrolysis products, are easily released into the reaction solution, it has been found that the reactivity between phospholipases A1 and / or A2 and phospholipids increases. Based on these findings, it is possible to efficiently degummify fats and oils by using immobilized phospholipases A1 and / or A2 immobilized on a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group. As a result, it has been found that phospholipase A1 and / or A2 can be recovered and reused, and the present invention has been completed.
【０００６】すなわち、本発明は、ホスホリパーゼＡ１
及び／又はＡ２を用いて油脂中のリン脂質を加水分解
し、生じる加水分解産物を除去することによって油脂中
のガム質を除去する方法において、油脂中のリン脂質の
加水分解を、疎水性担体と陽イオン交換基とからなる陽
イオン交換体に固定化された固定化ホスホリパーゼＡ１
及び／又はＡ２を用いて行なうことを特徴とする油脂の
脱ガム法である。また、本発明は、油脂中のリン脂質の
加水分解を、70℃以上の温度で行なうことを特徴とする
上記脱ガム法である。That is, the present invention relates to phospholipase A1
And / or using A2 to hydrolyze phospholipids in fats and oils and remove the resulting hydrolyzate to remove gum in fats and oils, wherein the hydrolysis of phospholipids in fats and oils is carried out by a hydrophobic carrier. Immobilized phospholipase A1 immobilized on a cation exchanger comprising cation exchange groups
And / or A2. Further, the present invention is the above degumming method, wherein the hydrolysis of the phospholipid in the fat or oil is performed at a temperature of 70 ° C. or more.
【０００７】[0007]
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の油脂の脱ガム法は、ホスホリパーゼＡ１及び／
又はＡ２を用いて油脂中のリン脂質を加水分解し、生じ
る加水分解産物を除去することによって油脂中のガム質
を除去する方法において、油脂中のリン脂質の加水分解
を、疎水性担体と陽イオン交換基とからなる陽イオン交
換体に固定化された固定化ホスホリパーゼＡ１及び／又
はＡ２を用いて行なうことを特徴とする。DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The present invention will be described below in detail.
The method for degumming fats and oils of the present invention comprises phospholipase A1 and / or phospholipase A1.
Alternatively, the method of hydrolyzing phospholipids in fats and oils by using A2 to remove gums in fats and oils by removing the resulting hydrolyzate, comprises hydrolyzing phospholipids in fats and oils with a hydrophobic carrier. It is characterized in that it is carried out using immobilized phospholipases A1 and / or A2 immobilized on a cation exchanger comprising an ion exchange group.
【０００８】本発明で使用するホスホリパーゼＡ１及び
／又はＡ２は、いかなる生物由来のものであってもよ
い。このようなホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ２とし
ては、例えば、哺乳類や微生物に由来するホスホリパー
ゼＡ１及び／又はＡ２を使用することができる。より具
体的には、例えば、ブタの膵臓から得られるホスホリパ
ーゼＡ２、パイロコッカス属又はアエロパイラム属等の
超好熱菌由来の耐熱性ホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ
２等を使用することができるが、特に、パイロコッカス
属又はアエロパイラム属等の超好熱菌由来の耐熱性ホス
ホリパーゼＡ１及び／又はＡ２を使用するのが好まし
い。これらの耐熱性ホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ２
を使用することにより、脱ガム工程に用いられる温度が
80℃以上であっても熱失活を起こさない固定化ホスホリ
パーゼＡ１及び／又はＡ２を得ることができる。[0008] The phospholipase A1 and / or A2 used in the present invention may be derived from any organism. As such phospholipases A1 and / or A2, for example, phospholipases A1 and / or A2 derived from mammals and microorganisms can be used. More specifically, for example, phospholipase A2 obtained from pig pancreas, thermostable phospholipase A1 and / or A derived from hyperthermophilic bacteria such as Pyrococcus or Aeropyram.
2, etc., but it is particularly preferable to use thermostable phospholipases A1 and / or A2 derived from hyperthermophilic bacteria such as Pyrococcus or Aeropyram. These thermostable phospholipases A1 and / or A2
The temperature used in the degumming process is reduced by using
Immobilized phospholipase A1 and / or A2 that does not cause heat inactivation even at 80 ° C. or higher can be obtained.
【０００９】本発明で使用する陽イオン交換体は、疎水
性担体と陽イオン交換基とからなる。ここで、疎水性担
体は、疎水性の担体である限り特に限定されず、公知の
いかなる疎水性担体であってもよい。また、陽イオン交
換基は特に限定されず、公知のいかなる陽イオン交換基
であってもよい。このような疎水性担体と陽イオン交換
基とからなる陽イオン交換体としては、例えば、スチレ
ン−ジビニルベンゼン共重合体にスルホン酸基（−SO3 -
H+）を導入したもの、アクリル酸又はメタクリル酸をジ
ビニルベンゼンを架橋剤として重合させたもの（陽イオ
ン交換基としてカルボン酸基を有する）、アクリル酸又
はメタクリル酸重合体にスルホン酸基を導入したもの、
ポリスチレン重合体に−COOH基を導入したもの、等を使
用することができる。The cation exchanger used in the present invention comprises a hydrophobic carrier and a cation exchange group. Here, the hydrophobic carrier is not particularly limited as long as it is a hydrophobic carrier, and may be any known hydrophobic carrier. The cation exchange group is not particularly limited, and may be any known cation exchange group. Examples of such a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group include, for example, a styrene-divinylbenzene copolymer and a sulfonic acid group (—SO 3 −).
H + ) introduced, acrylic acid or methacrylic acid polymerized using divinylbenzene as a crosslinking agent (having carboxylic acid groups as cation exchange groups), and sulfonic acid groups introduced into acrylic acid or methacrylic acid polymers What did
Those obtained by introducing a -COOH group into a polystyrene polymer can be used.
【００１０】また、このような陽イオン交換体として
は、アンバーライトIRC-76,アンバーライトIRC-50, ダ
イアイオンWK10,ダイアイオンWK11,ダイアイオンWK20,
ディオライトCC-4, レパチットCNP-80等の市販の陽イオ
ン交換体を使用することができる。ホスホリパーゼＡ１
及び／又はＡ２の疎水性担体と陽イオン交換基とからな
る陽イオン交換体への固定化方法は、ホスホリパーゼＡ
１及び／又はＡ２の触媒作用に必要な活性中心及び高次
構造を変化させずに、ホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ
２を陽イオン交換体に固定化できる限り特に限定され
ず、公知のいかなる固定化方法をも使用することができ
る。[0010] Such cation exchangers include Amberlite IRC-76, Amberlite IRC-50, Diaion WK10, Diaion WK11, Diaion WK20,
Commercially available cation exchangers such as Diolite CC-4 and Lepatit CNP-80 can be used. Phospholipase A1
And / or a method for immobilizing A2 on a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group includes phospholipase A
Phospholipases A1 and / or A2 without altering the active center and conformation required for catalysis of A1 and / or A2
There is no particular limitation as long as 2 can be immobilized on the cation exchanger, and any known immobilization method can be used.
【００１１】例えば、ホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ
２の疎水性担体と陽イオン交換基とからなる陽イオン交
換体への固定化は、以下のように陽イオン交換基を介し
て行なうことができる。すなわち、陽イオン交換基をチ
オニルクロリド、カルボジイミド等で活性化する。その
後、活性化した陽イオン交換基とホスホリパーゼＡ１及
び／又はＡ２とを反応させ、両者を共有結合させる。こ
れにより、ホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ２を陽イオ
ン交換体に固定化することができる。ホスホリパーゼＡ
１及びＡ２は、酸性タンパク質であるため中性域におい
ては静電的反発力により陽イオン交換基に結合しにくい
が、等電点以下においては静電的反発力が弱まり、陽イ
オン交換基に結合しやすくなる。従って、活性化させた
陽イオン交換基とホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ２と
の反応は、等電点以下で行なうのが好ましい。For example, phospholipase A1 and / or A
The immobilization to the cation exchanger comprising the hydrophobic carrier 2 and the cation exchange group can be performed via the cation exchange group as follows. That is, the cation exchange group is activated with thionyl chloride, carbodiimide, or the like. Thereafter, the activated cation exchange group is reacted with phospholipase A1 and / or A2, and both are covalently bonded. Thereby, the phospholipases A1 and / or A2 can be immobilized on the cation exchanger. Phospholipase A
Since 1 and A2 are acidic proteins, they do not easily bind to the cation exchange group due to electrostatic repulsion in the neutral region, but have a weak electrostatic repulsion below the isoelectric point, and It becomes easier to combine. Therefore, the reaction between the activated cation exchange group and the phospholipase A1 and / or A2 is preferably performed at an isoelectric point or lower.
【００１２】但し、ホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ２
の疎水性担体と陽イオン交換基とからなる陽イオン交換
体への固定化は、必ずしも陽イオン交換基を介して行な
う必要はなく、例えば、物理的吸着法、イオン結合法、
共有結合法、等の公知の方法によりホスホリパーゼＡ１
及び／又はＡ２を直接疎水性担体に固定化してもよい。
疎水性担体と陽イオン交換基とからなる陽イオン交換体
に固定化された固定化ホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ
２は、固定化されていないホスホリパーゼＡ１及び／又
はＡ２よりも耐熱性が高い。すなわち、ホスホリパーゼ
Ａ１及び／又はＡ２を上記陽イオン交換体に固定化する
ことにより、耐熱性を向上させることができる。However, phospholipase A1 and / or A2
Immobilization to a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group does not necessarily need to be performed via a cation exchange group, for example, a physical adsorption method, an ion binding method,
Phospholipase A1 is obtained by a known method such as a covalent bonding method.
And / or A2 may be directly immobilized on a hydrophobic carrier.
Immobilized phospholipase A1 and / or A immobilized on a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group
2 has higher thermostability than non-immobilized phospholipase A1 and / or A2. That is, by immobilizing the phospholipases A1 and / or A2 on the cation exchanger, the heat resistance can be improved.
【００１３】また、疎水性担体と陽イオン交換基とから
なる陽イオン交換体に固定化された固定化ホスホリパー
ゼＡ１及び／又はＡ２は、上記陽イオン交換体以外の担
体（例えば、陰イオン交換体等）に固定化されたホスホ
リパーゼＡ１及び／又はＡ２よりも基質であるリン脂質
との反応性が高い。これは、次の理由によるものと考え
られる。すなわち、リン脂質は疎水性に富んでいるた
め、陽イオン交換体の疎水性担体部分に吸着されやす
く、その結果、陽イオン交換体に固定化された固定化ホ
スホリパーゼＡ１及び／又はＡ２とリン脂質とが反応し
やすくなると考えられる。一方、リン脂質の加水分解産
物である脂肪酸及びリゾリン脂質のうち、リゾリン脂質
は親水性に富んでいるため、陽イオン交換体の疎水性担
体部分から離れやすいとともに水中に除去されやすく、
また、加水分解産物のもう一方の脂肪酸は負の電荷を帯
びているため、陽イオン交換体の陽イオン交換基部分と
の静電的反発により陽イオン交換体から離れ易いと考え
られる。その結果、リン脂質の加水分解産物である脂肪
酸及びリゾリン脂質は、陽イオン交換体に固定化された
固定化ホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ２から離脱しや
すくなり、陽イオン交換体に固定化された固定化ホスホ
リパーゼＡ１及び／又はＡ２とリン脂質との反応が妨害
されにくくなると考えられる。The immobilized phospholipases A1 and / or A2 immobilized on a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group may be a carrier other than the above cation exchanger (for example, an anion exchanger). Etc.) immobilized on phospholipase A1 and / or A2, has higher reactivity with phospholipid as a substrate. This is considered to be due to the following reasons. That is, since the phospholipid is rich in hydrophobicity, it is easily adsorbed on the hydrophobic carrier portion of the cation exchanger, and as a result, the immobilized phospholipases A1 and / or A2 immobilized on the cation exchanger are combined with the phospholipid. Is considered to be more responsive. On the other hand, among the fatty acids and lysophospholipids that are the hydrolysis products of phospholipids, lysophospholipids are rich in hydrophilicity, so they are easily separated from the hydrophobic carrier portion of the cation exchanger and easily removed in water,
Further, since the other fatty acid of the hydrolysis product has a negative charge, it is considered that the other fatty acid is easily separated from the cation exchanger due to electrostatic repulsion with the cation exchange group portion of the cation exchanger. As a result, fatty acids and lysophospholipids, which are hydrolysis products of phospholipids, are easily released from the immobilized phospholipases A1 and / or A2 immobilized on the cation exchanger, and the immobilized immobilized phospholipases are immobilized on the cation exchanger. It is considered that the reaction between the phospholipase A1 and / or A2 and the phospholipid is less likely to be hindered.
【００１４】疎水性担体と陽イオン交換基とからなる陽
イオン交換体に固定化された固定化ホスホリパーゼＡ１
及び／又はＡ２は、耐熱性が高いとともに基質であるリ
ン脂質との反応性が高いので、これを用いることによっ
て効率よく油脂中のリン脂質を加水分解することができ
る。また、疎水性担体と陽イオン交換基とからなる陽イ
オン交換体に固定化された固定化ホスホリパーゼＡ１及
び／又はＡ２は耐熱性が高いので、脱ガム工程において
高温（例えば70℃以上）で処理しても活性を持続するこ
とができ、更に、一度油脂中のリン脂質の加水分解に用
いた場合であっても、ヘキサン等の有機溶媒で洗浄し付
着するリン脂質を除去することにより、再度油脂中のリ
ン脂質の加水分解に使用することができる。Immobilized phospholipase A1 immobilized on a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group
Since A2 and / or A2 have high heat resistance and high reactivity with the phospholipid as a substrate, phospholipids in fats and oils can be efficiently hydrolyzed by using A2. Further, immobilized phospholipase A1 and / or A2 immobilized on a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group has high heat resistance, and thus is treated at a high temperature (for example, 70 ° C. or higher) in the degumming step. Even if it is once used for the hydrolysis of phospholipids in fats and oils, it can be maintained again by washing with an organic solvent such as hexane to remove the attached phospholipids. It can be used for the hydrolysis of phospholipids in fats and oils.
【００１５】疎水性担体と陽イオン交換基とからなる陽
イオン交換体に固定化された固定化ホスホリパーゼＡ１
及び／又はＡ２を用いて、油脂中のリン脂質を加水分解
する際の反応条件は、油脂中のリン脂質濃度、油脂の種
類、陽イオン交換体に固定化されたホスホリパーゼＡ１
及び／又はＡ２の量、等に応じて、適宜設定することが
できる。Immobilized phospholipase A1 immobilized on a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group
And / or the reaction conditions for hydrolyzing phospholipids in fats and oils using A2 are: phospholipid concentration in fats and oils, kind of fats and oils, phospholipase A1 immobilized on cation exchanger
And / or the amount of A2, etc., can be set as appropriate.
【００１６】例えば、油脂中に１〜５％程度の水を加
え、疎水性担体と陽イオン交換基とからなる陽イオン交
換体に固定化された固定化ホスホリパーゼＡ１及び／又
はＡ２を0.1〜3.0％程度加えて、60〜90℃で0.1〜６時
間反応させることにより、油脂中のリン脂質を加水分解
することができる。また、疎水性担体と陽イオン交換基
とからなる陽イオン交換体に固定化された固定化ホスホ
リパーゼＡ１及び／又はＡ２による加水分解反応時間を
長くすることにより、油脂中のリン脂質の加水分解率を
増大させることができる。For example, about 1 to 5% of water is added to fats and oils, and immobilized phospholipases A1 and / or A2 immobilized on a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group are added in an amount of 0.1 to 3.0. %, And reacted at 60 to 90 ° C. for 0.1 to 6 hours to hydrolyze phospholipids in fats and oils. Further, by increasing the hydrolysis reaction time by immobilized phospholipases A1 and / or A2 immobilized on a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group, the hydrolysis rate of phospholipids in fats and oils is increased. Can be increased.
【００１７】疎水性担体と陽イオン交換基とからなる陽
イオン交換体に固定化された固定化ホスホリパーゼＡ１
及び／又はＡ２を用いて油脂中のリン脂質を加水分解し
た後、加水分解産物として生じる脂肪酸及びリゾリン脂
質を除去することにより、油脂の脱ガムを行なうことが
できる。脂肪酸及びリゾリン脂質の除去は、常法に従っ
て行なうことができる。例えば、以下のようにして脂肪
酸及びリゾリン脂質を除去することができる。Immobilized phospholipase A1 immobilized on a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group
After hydrolyzing phospholipids in fats and oils using A2 and / or A2, fats and fats and lysophospholipids generated as hydrolysis products are removed, whereby fats and oils can be degummed. The removal of fatty acids and lysophospholipids can be performed according to a conventional method. For example, fatty acids and lysophospholipids can be removed as follows.
【００１８】すなわち、水を加えて遠心分離し、ガム層
と油層とに分離する。リゾリン脂質はガム層中に含まれ
るため、ガム層を除去することによりリゾリン脂質を除
去することができる。また、脂肪酸は、アルカリ脱酸
法、蒸留法、エステル化法、溶剤抽出法、イオン交換
法、等の公知の脱酸法によって除去することができる。That is, water is added and centrifuged to separate into a gum layer and an oil layer. Since the lysophospholipid is contained in the gum layer, the lysophospholipid can be removed by removing the gum layer. In addition, fatty acids can be removed by a known deacidification method such as an alkali deacidification method, a distillation method, an esterification method, a solvent extraction method, an ion exchange method and the like.
【００１９】[0019]
【実施例】〔実施例１〕固定化ホスホリパーゼの製造 １gのアンバーライトIRC-76に、水可溶性のカルボジイ
ミド（１−シクロヘキシル−3(2−モルホニルエチル)−
カルボジイミド・p−トルエンメトスルホン酸）50mgを1
0mLの水に溶解してから加え、６Ｎの塩酸でpH４−５に
保ちながら室温に保持した。pHが安定してきたら水洗
し、担体を活性化させた。EXAMPLES Example 1 Production of Immobilized Phospholipase 1 g of Amberlite IRC-76 was added to water-soluble carbodiimide (1-cyclohexyl-3 (2-morphonylethyl)-
50 mg of carbodiimide / p-toluenemethsulfonic acid)
After dissolving in 0 mL of water, the mixture was added and kept at room temperature while maintaining the pH at 4-5 with 6N hydrochloric acid. When the pH became stable, it was washed with water to activate the carrier.
【００２０】次に、レシターゼ10L（ブタ膵臓ホスホリ
パーゼA2)２mLを、活性化させた担体に加え、pHを４−
５に保ちながら１−２時間室温で保持した。次いで水洗
し、乾燥させて、アンバーライトIRC-76に固定化された
固定化ブタ膵臓ホスホリパーゼA2を得た。担体としてア
ンバーライトIRC-50を用いて、上記と同様の方法を行な
い、アンバーライトIRC-50に固定化された固定化ブタ膵
臓ホスホリパーゼA2を得た。Next, 2 mL of recitase 10 L (porcine pancreatic phospholipase A2) was added to the activated carrier to adjust the pH to 4-
The temperature was kept at room temperature for 1-2 hours while keeping the temperature at 5. Then, it was washed with water and dried to obtain immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-76. Using Amberlite IRC-50 as a carrier, the same method as above was performed to obtain immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-50.
【００２１】〔実施例２〕固定化ホスホリパーゼによる
リン脂質の加水分解 実施例１で製造した２種類の固定化ホスホリパーゼを用
いて、油脂中のガム質の主要成分であるリン脂質の加水
分解を次のように行った。 （１）リン含量300ppmの米ぬか油の原油25gに、水１mL
及びアンバーライトIRC-50に固定化された固定化ブタ膵
臓ホスホリパーゼA2 0.6gを加えて、原油中のリン脂質
を加水分解した。加水分解は、80℃で15分間行なった。
加水分解後、4000rpmで12分間遠心分離し、水層と油層
とに分離して、油層中のリン含量を定量した。油層中の
リン含量の定量は、基準油脂分析試験法（日本油化学協
会）の比色法を用いて行った。その結果、原油中のリン
含量は160ppmとなった。[Example 2] Hydrolysis of phospholipid by immobilized phospholipase Using the two types of immobilized phospholipases prepared in Example 1, hydrolysis of phospholipid, which is a main component of gum in oils and fats, was performed as follows. I went like that. (1) 25 g of crude rice bran oil containing 300 ppm of phosphorus and 1 mL of water
And 0.6 g of immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-50 were added to hydrolyze the phospholipids in the crude oil. The hydrolysis was performed at 80 ° C. for 15 minutes.
After hydrolysis, the mixture was centrifuged at 4000 rpm for 12 minutes, separated into an aqueous layer and an oil layer, and the phosphorus content in the oil layer was determined. The quantification of the phosphorus content in the oil layer was carried out by using the colorimetric method of the standard method for testing fats and oils (Japan Oil Chemicals Association). As a result, the phosphorus content in the crude oil was 160 ppm.
【００２２】（２）次に、アンバーライトIRC-76に固定
化された固定化ブタ膵臓ホスホリパーゼA2を用いて、上
記と同様に原油中のリン脂質を加水分解した後、遠心分
離して、油層中のリン含量を定量した。その結果、原油
中のリン含量は、140ppmとなった。 （３）一方、対照実験として、リン含量300ppmの米ぬか
油の原油を遠心分離することにより、原油中のリン脂質
の除去を試みた。遠心分離は、4000rpmで12分間行なっ
た。なお、油脂中のリンの定量は、上記と同様に基準油
脂分析試験法（日本油化学協会）の比色法を用いて行っ
た。(2) Next, phospholipids in crude oil are hydrolyzed in the same manner as described above using immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-76, and centrifuged to separate the oil layer. The phosphorus content in the was determined. As a result, the phosphorus content in the crude oil was 140 ppm. (3) On the other hand, as a control experiment, removal of phospholipids from crude oil was attempted by centrifuging crude oil of rice bran oil having a phosphorus content of 300 ppm. Centrifugation was performed at 4000 rpm for 12 minutes. In addition, the determination of phosphorus in fats and oils was performed using the colorimetric method of the standard fat and oil analysis test method (Japan Oil Chemistry Association) in the same manner as described above.
【００２３】その結果、遠心分離後の原油中のリン含量
は270ppmとなった。また、対照実験として、リン含量30
0ppmの米ぬか油の原油25gに水１mLを加え、80℃で15分
間撹拌した後、遠心分離することにより、原油中のリン
脂質の除去を試みた。遠心分離は、4000rpmで12分間行
なった。なお、油脂中のリンの定量は、上記と同様に基
準油脂分析試験法（日本油化学協会）の比色法を用いて
行なった。その結果、遠心分離後の原油中のリン含量は
200ppmとなった。 （４）以上の結果を以下の表１に示す。As a result, the phosphorus content in the crude oil after centrifugation was 270 ppm. As a control experiment, a phosphorus content of 30
1 mL of water was added to 25 g of 0 ppm rice bran oil, stirred at 80 ° C. for 15 minutes, and then centrifuged to remove phospholipids in the crude oil. Centrifugation was performed at 4000 rpm for 12 minutes. In addition, the determination of phosphorus in fats and oils was performed using the colorimetric method of the standard fat and oil analysis test method (Japan Oil Chemistry Association) in the same manner as described above. As a result, the phosphorus content in the crude oil after centrifugation is
It became 200 ppm. (4) The above results are shown in Table 1 below.
【００２４】[0024]
【表１】 [Table 1]
【００２５】表１より、遠心分離だけでは原油中のリン
脂質を十分に除去することはできないことが分かった。
また、水を加えて遠心分離しても原油中のリン脂質を十
分に除去することはできないことが分かった。一方、表
1より、アンバーライトIRC-76に固定化された固定化ブ
タ膵臓ホスホリパーゼA2又はアンバーライトIRC-50に固
定化された固定化ブタ膵臓ホスホリパーゼA2を用いて原
油中のリン脂質を加水分解した後、遠心分離することに
より、原油中のリン脂質を十分に除去することができる
ことが分かった。From Table 1, it was found that phospholipids in crude oil cannot be sufficiently removed only by centrifugation.
It was also found that even if water was added and centrifuged, the phospholipids in the crude oil could not be sufficiently removed. Meanwhile, the table
From 1, after hydrolyzing phospholipids in crude oil using immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-76 or immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-50, It was found that the phospholipids in the crude oil could be sufficiently removed by centrifugation.
【００２６】また、アンバーライトIRC-76に固定化され
た固定化ブタ膵臓ホスホリパーゼA2によるリン除去率
と、アンバーライトIRC-50に固定化された固定化ブタ膵
臓ホスホリパーゼA2によるリン除去率とが異なることか
ら、同一のホスホリパーゼであっても、固定化する疎水
性担体を変えることにより、固定化ホスホリパーゼによ
るリン脂質の加水分解率を変化させることができること
が判明した。従って、適当な疎水性担体を選択すること
により、油脂中のリン脂質をより効率よく加水分解する
ことができることが明らかとなった。The phosphorus removal rate by immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-76 is different from the phosphorus removal rate by immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-50. Thus, it was found that even with the same phospholipase, the rate of hydrolysis of phospholipids by the immobilized phospholipase can be changed by changing the hydrophobic carrier to be immobilized. Therefore, it was clarified that phospholipids in fats and oils can be more efficiently hydrolyzed by selecting an appropriate hydrophobic carrier.
【００２７】〔実施例３〕固定化ホスホリパーゼの再利
用 実施例２で使用したアンバーライトIRC-50に固定化され
た固定化ブタ膵臓ホスホリパーゼA2をヘキサンで洗浄し
た。そして、この固定化ホスホリパーゼを用いて、上記
と同様に原油中のリン脂質を加水分解した後、4000rpm
で12分間遠心分離し、油層中のリン含量を定量した。リ
ン含量の定量は、上記と同様に基準油脂分析試験法（日
本油化学協会）の比色法を用いて行なった。その結果、
原油中のリン含量は160ppmとなった。この結果から、固
定化ホスホリパーゼは、可溶性酵素では失活するような
温度においても活性を維持でき、リン脂質の加水分解に
繰り返し使用できることが判明した。Example 3 Reuse of Immobilized Phospholipase Immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-50 used in Example 2 was washed with hexane. Then, using this immobilized phospholipase, after hydrolyzing phospholipids in crude oil in the same manner as above, 4000 rpm
For 12 minutes, and the phosphorus content in the oil layer was determined. The quantification of the phosphorus content was carried out in the same manner as described above, using the colorimetric method of the standard fat and oil analysis test method (Japan Oil Chemical Association). as a result,
The phosphorus content in the crude oil was 160 ppm. This result indicates that the immobilized phospholipase can maintain its activity even at a temperature at which the soluble enzyme is inactivated, and can be used repeatedly for the hydrolysis of phospholipids.
【００２８】〔実施例４〕固定化ホスホリパーゼによる
加水分解率と反応時間との関係 アンバーライトIRC-76に固定化された固定化ブタ膵臓ホ
スホリパーゼA2を実施例１と同様にして製造した。アン
バーライトIRC-76に固定化された固定化ブタ膵臓ホスホ
リパーゼA2 0.6g及び水１mLを、リン含量300ppmの米ぬ
か油の原油25gに加え、攪拌しながら70℃で３時間反応
させ、原油中のリン脂質を加水分解した。加水分解後、
4000rpmで12分間遠心分離し、油層中のリン含量を定量
した。リン含量の定量は、基準油脂分析試験法（日本油
化学協会）の比色法を用いて行なった。その結果、反応
後の原油中のリン含量は、７ppmとなった。この結果か
ら、反応時間を長くすることにより、固定化ホスホリパ
ーゼによるリン脂質の加水分解率が増大し、物理的脱酸
法を適用できるまでに原油中のリン脂質含有量は減少す
ることが判明した。Example 4 Relationship between Hydrolysis Rate by Immobilized Phospholipase and Reaction Time Immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-76 was produced in the same manner as in Example 1. 0.6 g of immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-76 and 1 mL of water were added to 25 g of crude rice bran oil having a phosphorus content of 300 ppm, and the mixture was reacted at 70 ° C. for 3 hours with stirring to obtain phosphorus in crude oil. The lipid was hydrolyzed. After hydrolysis,
After centrifugation at 4000 rpm for 12 minutes, the phosphorus content in the oil layer was determined. The quantification of the phosphorus content was carried out using the colorimetric method of the Standard Oil and Fat Analysis Test Method (Japan Oil Chemistry Association). As a result, the phosphorus content in the crude oil after the reaction was 7 ppm. From these results, it was found that, by increasing the reaction time, the phospholipid hydrolysis rate by the immobilized phospholipase was increased, and the phospholipid content in the crude oil was reduced before the physical deacidification method could be applied. .
【００２９】[0029]
【発明の効果】本発明の油脂の脱ガム法により、油脂の
粘性がなくなるような高温（例えば70℃以上）において
も効率よく油脂の脱ガムを行なうことができる。また、
本発明の油脂の脱ガム法では、固定化酵素の回収再利用
を図ることができるため、経済的に油脂の脱ガムを行な
うことができる。According to the method for degumming fats and oils of the present invention, degumming of fats and oils can be performed efficiently even at a high temperature (for example, 70 ° C. or higher) at which the fats and oils lose viscosity. Also,
In the method of degumming fats and oils of the present invention, the immobilized enzyme can be recovered and reused, so that the fats and oils can be degummed economically.
─────────────────────────────────────────────────────
────────────────────────────────────────────────── ───
【手続補正書】[Procedure amendment]
【提出日】平成１１年１月２９日[Submission date] January 29, 1999
【手続補正１】[Procedure amendment 1]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】請求項１[Correction target item name] Claim 1
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【手続補正２】[Procedure amendment 2]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】０００６[Correction target item name] 0006
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【０００６】すなわち、本発明は、ホスホリパーゼＡ１
及び／又はＡ２を用いて油脂中のリン脂質を加水分解
し、生じる加水分解産物を除去することによって油脂中
のガム質を除去する方法において、油脂中のリン脂質の
加水分解を、疎水性担体と陽イオン交換基とからなる陽
イオン交換体に固定化された固定化ホスホリパーゼＡ１
及び／又はＡ２を用いて行なうことにより、油脂中のリ
ン含量が７ｐｐｍ以下になるようにガム質を除去するこ
とを特徴とする油脂の脱ガム法である。また、本発明
は、油脂中のリン脂質の加水分解を、70℃以上の温度で
行なうことを特徴とする上記脱ガム法である。That is, the present invention relates to phospholipase A1
And / or using A2 to hydrolyze phospholipids in fats and oils and remove the resulting hydrolyzate to remove gum in fats and oils, wherein the hydrolysis of phospholipids in fats and oils is carried out by a hydrophobic carrier. Immobilized phospholipase A1 immobilized on a cation exchanger comprising cation exchange groups
And / or by using A2 to reduce the amount of
Gums to reduce the gum content to 7 ppm or less.
And a method for degumming fats and oils. Further, the present invention is the above degumming method, wherein the hydrolysis of the phospholipid in the fat or oil is performed at a temperature of 70 ° C. or more.
【手続補正３】[Procedure amendment 3]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００１９[Correction target item name] 0019
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【００１９】[0019]
【実施例】〔製造例１〕固定化ホスホリパーゼの製造 １gのアンバーライトIRC-76に、水可溶性のカルボジイ
ミド（１−シクロヘキ シル−3(2−モルホニルエチル)
−カルボジイミド・p−トルエンメトスルホン酸）50mg
を10mLの水に溶解してから加え、６Ｎの塩酸でpH４−５
に保ちながら室温に保持した。pHが安定してきたら水洗
し、担体を活性化させた。EXAMPLES [ Production Example 1 ] Production of immobilized phospholipase 1 g of Amberlite IRC-76 was added to water-soluble carbodiimide (1-cyclohexyl-3 (2-morphonylethyl)).
-Carbodiimide / p-toluenemethsulfonic acid) 50mg
Is dissolved in 10 mL of water, and added thereto.
And kept at room temperature. When the pH became stable, it was washed with water to activate the carrier.
【手続補正４】[Procedure amendment 4]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００２１[Correction target item name] 0021
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【００２１】〔参考例１〕固定化ホスホリパーゼによる
リン脂質の加水分解製造例１ で製造した２種類の固定化ホスホリパーゼを用
いて、油脂中のガム質の主要成分であるリン脂質の加水
分解を次のように行った。 （１）リン含量300ppmの米ぬか油の原油25gに、水１mL
及びアンバーライトIRC-50に固定化された固定化ブタ膵
臓ホスホリパーゼA2 0.6gを加えて、原油中のリン脂質
を加水分解した。加水分解は、80℃で15分間行なった。
加水分解後、4000rpmで12分間遠心分離し、水層と油層
とに分離して、油層中 のリン含量を定量した。油層中
のリン含量の定量は、基準油脂分析試験法（日本油化学
協会）の比色法を用いて行った。その結果、原油中のリ
ン含量は160ppmとなった。 Reference Example 1 Hydrolysis of Phospholipids by Immobilized Phospholipase Using the two types of immobilized phospholipases prepared in Production Example 1 , hydrolysis of phospholipids, which are main components of gum in oils and fats, was carried out as follows. I went like that. (1) 25 g of crude rice bran oil containing 300 ppm of phosphorus and 1 mL of water
And 0.6 g of immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-50 were added to hydrolyze the phospholipids in the crude oil. The hydrolysis was performed at 80 ° C. for 15 minutes.
After the hydrolysis, the mixture was centrifuged at 4000 rpm for 12 minutes, separated into an aqueous layer and an oil layer, and the phosphorus content in the oil layer was determined. The quantification of the phosphorus content in the oil layer was carried out using the colorimetric method of the standard method for testing fats and oils (Japan Oil Chemicals Association). As a result, the phosphorus content in the crude oil was 160 ppm.
【手続補正５】[Procedure amendment 5]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００２４[Correction target item name] 0024
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【００２４】[0024]
【表１】 [Table 1]
【手続補正６】[Procedure amendment 6]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００２７[Correction target item name] 0027
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【００２７】〔参考例２〕固定化ホスホリパーゼの再利
用参考例１ で使用したアンバーライトIRC-50に固定化され
た固定化ブタ膵臓ホスホリパーゼA2をヘキサンで洗浄し
た。そして、この固定化ホスホリパーゼを用いて、上記
と同様に原油中のリン脂質を加水分解した後、4000rpm
で12分間遠心分 離し、油層中のリン含量を定量した。
リン含量の定量は、上記と同様に基準油脂分析試験法
（日本油化学協会）の比色法を用いて行なった。その結
果、原油中のリン含量は160ppmとなった。この結果か
ら、固定化ホスホリパーゼは、可溶性酵素では失活する
ような温度においても活性を維持でき、リン脂質の加水
分解に繰り返し使用できることが判明した。 Reference Example 2 Reuse of Immobilized Phospholipase Immobilized porcine pancreatic phospholipase A2, which was immobilized on Amberlite IRC-50 and used in Reference Example 1 , was washed with hexane. Then, using this immobilized phospholipase, after hydrolyzing phospholipids in crude oil in the same manner as above, 4000 rpm
, And the phosphorus content in the oil layer was quantified.
The quantification of the phosphorus content was carried out in the same manner as described above, using the colorimetric method of the standard fat and oil analysis test method (Japan Oil Chemical Association). As a result, the phosphorus content in the crude oil was 160 ppm. This result indicates that the immobilized phospholipase can maintain its activity even at a temperature at which the soluble enzyme is inactivated, and can be used repeatedly for the hydrolysis of phospholipids.
【手続補正７】[Procedure amendment 7]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００２８[Correction target item name] 0028
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【００２８】〔実施例〕固定化ホスホリパーゼによる加
水分解率と反応時間との関係 アンバーライトIRC-76に固定化された固定化ブタ膵臓ホ
スホリパーゼA2を製造例１と同様にして製造した。アン
バーライトIRC-76に固定化された固定化ブタ膵臓ホスホ
リパーゼA2 0.6g及び水１mLを、リン含量300ppmの米ぬ
か油の原油25gに加え、撹拌しながら70℃で３時間反応
させ、原油中のリン脂質を加水分解した。加水分解後、
4000rpmで12分間遠心分離し、油層中のリン含量を定量
した。リン 含量の定量は、基準油脂分析試験法（日本
油化学協会）の比色法を用いて行なった。その結果、反
応後の原油中のリン含量は、７ppmとなった。この結果
から、反応時間を長くすることにより、固定化ホスホリ
パーゼによるリン脂質の加水分解率が増大し、物理的脱
酸法を適用できるまでに原油中のリン脂質含有量は減少
することが判明した。[ Example ] Relationship between hydrolysis rate and reaction time by immobilized phospholipase Immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-76 was produced in the same manner as in Production Example 1 . 0.6 g of immobilized porcine pancreatic phospholipase A2 immobilized on Amberlite IRC-76 and 1 mL of water were added to 25 g of crude rice bran oil having a phosphorus content of 300 ppm, and the mixture was reacted at 70 ° C. for 3 hours with stirring to obtain phosphorus in crude oil. The lipid was hydrolyzed. After hydrolysis,
After centrifugation at 4000 rpm for 12 minutes, the phosphorus content in the oil layer was determined. The quantification of the phosphorus content was carried out using the colorimetric method of the Standard Oil and Fat Analysis Test Method (Japan Oil Chemistry Association). As a result, the phosphorus content in the crude oil after the reaction was 7 ppm. From these results, it was found that, by increasing the reaction time, the phospholipid hydrolysis rate by the immobilized phospholipase was increased, and the phospholipid content in the crude oil was reduced before the physical deacidification method could be applied. .
Claims (2)
いて油脂中のリン脂質を加水分解し、生じる加水分解産
物を除去することによって油脂中のガム質を除去する方
法において、油脂中のリン脂質の加水分解を、疎水性担
体と陽イオン交換基とからなる陽イオン交換体に固定化
された固定化ホスホリパーゼＡ１及び／又はＡ２を用い
て行なうことを特徴とする油脂の脱ガム法。1. A method for hydrolyzing phospholipids in fats and oils using phospholipases A1 and / or A2 and removing the resulting hydrolyzate to remove gum in fats and oils, comprising the steps of: A method for degumming fats and oils, wherein the hydrolysis is carried out using immobilized phospholipases A1 and / or A2 immobilized on a cation exchanger comprising a hydrophobic carrier and a cation exchange group.
の温度で行なうことを特徴とする請求項１記載の脱ガム
法。2. The degumming method according to claim 1, wherein the hydrolysis of the phospholipid in the fat or oil is carried out at a temperature of 70 ° C. or higher.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10044595A JPH11228986A (en) | 1998-02-10 | 1998-02-10 | Degumming method with phospholipase |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10044595A JPH11228986A (en) | 1998-02-10 | 1998-02-10 | Degumming method with phospholipase |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11228986A true JPH11228986A (en) | 1999-08-24 |
Family
ID=12695825
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10044595A Pending JPH11228986A (en) | 1998-02-10 | 1998-02-10 | Degumming method with phospholipase |
Country Status (1)
| Country | Link |
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