JPH11222434A - プテリン誘導体含有一酸化窒素合成酵素発現抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 誘導性一酸化窒素合成酵素の発現抑制剤を
提供する。 【解決手段】 下記式（Ｉ）〔式中、Ｒ¹ 及びＲ² は、
水素原子、炭素数１〜４のアルキル基、又は式Ｒ³ −Ｃ
Ｏ−（Ｒ³ は炭素数１〜４のアルキル基である）で表さ
れるアシル基であり、Ｘは、ホルミル基又はヒドロキシ
メチル基であり、Ａは下記式（Ｉａ）で表される基であ
り、ｎは０又は１以上の整数であるが、但し、Ｘがヒド
ロキシメチル基である場合には、ｎは０であるものと
し、ｎが１以上の整数である場合には、Ｒ¹ 及びＲ² は
水素原子であり、Ｘはホルミル基であるものとする〕で
表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又はそ
の塩を有効成分として含有する。 【化１】 【化２】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、プテリン誘導体を
含有する誘導性一酸化窒素合成酵素の発現抑制剤に関す
る。また、本発明は、前記のプテリン誘導体を含有す
る、一酸化窒素により引き起こされる疾病の予防又は治
療用の医薬組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】一酸化窒素合成酵素（ｎｉｔｒｉｃ ｏ
ｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ；以下、ＮＯＳと称するこ
とがある）によって合成される一酸化窒素は、生体内で
種々の生物学的反応過程に関与していることが知られて
いる。一酸化窒素が生体内で重要な役割を果たしている
ことは、血管内皮細胞から発見された未知の強力な血管
弛緩因子［内皮細胞由来平滑筋弛緩因子（ｅｎｄｏｔｈ
ｅｌｉｕｍ ｄｅｒｉｖｅｄ ｒｅｌａｘｉｎｇ ｆａ
ｃｔｏｒ；ＥＤＲＦ）］の本体が一酸化窒素であるとの
報告により、初めて明らかにされた。その後、一酸化窒
素が、前記の血管弛緩作用以外にも、神経伝達物質とし
ての作用や、細菌又は腫瘍細胞に対する細胞障害作用な
どを有することが明らかにされている。

【０００３】一酸化窒素合成酵素は、発現様式の違いか
ら、誘導性ＮＯＳ（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ＮＯＳ；以
下、ｉＮＯＳと称することがある）と構成性ＮＯＳ（ｃ
ｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ ＮＯＳ；以下、ｃＮＯＳと称
することがある）とに大きく２つに分類され、更に、ｃ
ＮＯＳは、主に神経組織に分布する神経型ＮＯＳ（ｎｅ
ｕｒｏｎ ＮＯＳ；以下、ｎＮＯＳと称することがあ
る）と、主に血管内皮細胞に分布する内皮型ＮＯＳ（ｅ
ｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ＮＯＳ；以下、ｅＮＯＳと称す
ることがある）とに分類される。ｉＮＯＳは、通常の状
態では細胞内にほとんど存在しないが、刺激因子（例え
ば、サイトカイン及び／又はリポ多糖体など）の誘導に
より、各種細胞、例えば、白血球、マクロファージ、又
は血管平滑筋などで初めて出現する。ヒトｉＮＯＳの分
子量は約１３０ｋＤａであり、その遺伝子は第１７染色
体に存在する。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】前記ｃＮＯＳは、恒常
的に存在して少量の一酸化窒素を産生し、生理的調節作
用を行なっているものと考えられる。一方、前記ｉＮＯ
Ｓは、通常の状態ではわずかにしか存在せず、誘導物質
により誘導されることにより発現し、大量の一酸化窒素
を持続的に産生し続けるので、いわば、病的状態におい
て機能しているものと考えられる。一酸化窒素により引
き起こされる疾病としては、例えば、炎症性疾患（例え
ば、慢性関節リウマチ）、虚血性障害（例えば、梗塞若
しくは虚血などに起因する各種の心臓障害若しくは脳障
害、又は虚血後の再潅流障害など）、ショック（例え
ば、出血性ショックなど）などが知られている。このよ
うな疾病は、大量の一酸化窒素を産生し続けるｉＮＯＳ
の発現を抑制することによって、予防又は治療可能であ
ることが予想される。本発明者は、ｉＮＯＳの発現抑制
作用を有する化合物を鋭意探求した結果、従来、前記作
用を有することが全く知られていなかったプテリン誘導
体が前記作用を示すことを見出した。本発明は、こうし
た知見に基づくものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】前記の目的は、本発明に
よる、式（Ｉ）：

【化４】 〔式中、Ｒ¹ 及びＲ² は、それぞれ独立に、水素原子、
炭素数１〜４のアルキル基、又は式Ｒ³ −ＣＯ−（Ｒ³
は炭素数１〜４のアルキル基である）で表されるアシル
基であり、Ｘは、ホルミル基又はヒドロキシメチル基で
あり、Ａは式（Ｉａ）：

【化５】 で表される基であり、ｎは０又は１以上の整数である
が、但し、Ｘがヒドロキシメチル基である場合にはｎは
０であるものとし、そしてｎが１以上の整数である場合
には、Ｒ¹ 及びＲ² はそれぞれ水素原子であり、Ｘはホ
ルミル基であるものとする〕で表されるプテリン誘導
体、若しくはその環状体、又はその塩を有効成分として
含有することを特徴とする、誘導性一酸化窒素合成酵素
の発現抑制剤によって達成することができる。また、本
発明は、前記式（Ｉ）で表されるプテリン誘導体、若し
くはその環状体、又は薬剤学的に許容することのできる
その塩を有効成分として含有することを特徴とする、一
酸化窒素により引き起こされる疾病の予防又は治療用の
医薬組成物にも関する。

【０００６】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明による誘導性一酸化窒素合成酵素の発現抑制剤
は、有効成分として前記式（Ｉ）で表されるプテリン誘
導体を含有する。Ｒ¹ 、Ｒ² 、及びＲ³ で表される炭素
数１〜４のアルキル基とは、直鎖又は分枝鎖の炭素数１
〜４のアルキル基であり、例えば、メチル基、エチル
基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、
ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、又はｔｅｒｔ−ブチ
ル基であり、メチル基又はエチル基が好ましい。前記式
（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ¹ 及びＲ² は、そ
れぞれ独立して、同一又は異なる、水素原子、前記の炭
素数１〜４のアルキル基、又は式Ｒ³ −ＣＯ−（Ｒ³は
前記の炭素数１〜４のアルキル基である）で表されるア
シル基であることができる。前記式（Ｉ）において、ｎ
は、０又は１以上の整数、好ましくは０又は１〜１００
の整数、より好ましくは０又は１〜１０の整数である。

【０００７】前記式（Ｉ）で表されるプテリン誘導体と
しては、Ｒ¹ 及びＲ² が、それぞれ独立に、水素原子、
炭素数１〜４のアルキル基、又は式Ｒ³ −ＣＯ−で表さ
れるアシル基であり、Ｒ³ が炭素数１〜４のアルキル基
であり、Ａが式（Ｉａ）で表される基であり、ｎが０又
は１以上の整数であり、Ｘがホルミル基である６−ホル
ミル−プテリン誘導体が好ましい。また、前記式（Ｉ）
で表されるプテリン誘導体としては、４−オキシ−プテ
リジン環の６位に、−（ＣＨ＝Ｎ−Ａ）_n −Ｘ又は−Ｘ
が結合することが好ましい。

【０００８】更に、前記式（Ｉ）で表されるプテリン誘
導体としては、Ｒ¹ 及びＲ² が水素原子であり、そして
ｎが０である前記式（Ｉ）で表される化合物、すなわ
ち、式（II）：

【化６】 で表される６−ホルミル−プテリンがより好ましい。

【０００９】６−ホルミル−プテリンは、アミノ基及び
ホルミル基を有するので、水溶液中で複数の分子間でシ
ッフ塩基を自然に形成し、６−ホルミル−プテリンのオ
リゴマー又はポリマーとなることができる。このオリゴ
マー又はポリマーには、直鎖状のオリゴマー又はポリマ
ーだけでなく、環状のオリゴマー又はポリマーも含まれ
る。単量体からオリゴマー又はポリマーへの反応は可逆
反応であり、アルカリ条件下では、６−ホルミル−プテ
リンオリゴマー又はポリマーは、単量体である６−ホル
ミル−プテリンに容易に分解する。従って、生体内や皮
膚上でも同様の可逆反応が行われるものと思われる。前
記６−ホルミル−プテリンオリゴマー又はポリマーは、
Ｒ¹ 及びＲ² が同時に水素原子であり、そしてｎが１以
上（好ましくは１〜１００）の整数である前記式（Ｉ）
で表される化合物であり、本発明による誘導性一酸化窒
素合成酵素の発現抑制剤における有効成分として使用す
ることができる。

【００１０】生体内で、前記式（Ｉ）で表されるプテリ
ン誘導体に容易に変換することのできる誘導体、すなわ
ち、プロドラッグも本発明の有効成分として使用するこ
とができる。適当なプロドラッグの選択及び製造に一般
的に用いられる方法は、例えば、Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ
Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，ｅｄ．Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，Ｅ
ｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。

【００１１】６−ホルミル−プテリンは、遊離化合物の
形で有効成分として使用することができると共に、その
塩、特に薬剤学的に許容することのできるその塩、例え
ば、無機酸塩（例えば、塩酸塩若しくは硫酸塩）又は有
機酸塩（例えば、カンファースルホン酸塩、酒石酸塩、
リンゴ酸塩、若しくはシュウ酸塩など）の形で使用する
こともできる。また、前記の６−ホルミル−プテリンオ
リゴマー又はポリマーの形で使用することもできる。６
−ホルミル−プテリンオリゴマー又はポリマーは、公知
化合物であり、それ自体公知の方法によって、遊離化合
物をその塩へ、あるいはその塩を遊離化合物又は別の塩
に変換することができる。

【００１２】前記式（Ｉ）で表されるプテリン誘導体
も、遊離化合物の形で有効成分として使用することがで
きると共に、その塩、特に薬剤学的に許容することので
きるその塩、例えば、無機酸塩（例えば、塩酸塩若しく
は硫酸塩）又は有機酸塩（例えば、カンファースルホン
酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、若しくはシュウ酸塩な
ど）の形で使用することもできる。前記式（Ｉ）で表さ
れるプテリン誘導体は、公知化合物であり、それ自体公
知の方法で調製することができる。また、それ自体公知
の方法によって、遊離化合物をその塩へ、あるいはその
塩を遊離化合物又は別の塩に変換することができる。

【００１３】前記式（Ｉ）で表されるプテリン誘導体、
若しくはその環状体、又はその薬剤学的に許容すること
のできる塩は、誘導性一酸化窒素合成酵素の発現抑制作
用を有するかあるいは誘導性一酸化窒素合成酵素の発現
抑制作用を有する化合物を誘導することができるので、
本発明による、一酸化窒素により引き起こされる疾病の
予防又は治療用の医薬組成物（以下、単に「本発明によ
る医薬組成物」と称することがある）の有効成分として
用いることができる。

【００１４】例えば、前記式（Ｉ）で表されるプテリン
誘導体の内、ｎが０であり、そしてＲ¹ 又はＲ² のいず
れかが水素原子でない式（Ｉ）で表されるプテリン誘導
体、又は６−ホルミル−プテリン〔すなわち、ｎが０で
あり、そしてＲ¹ 及びＲ² が同時に水素原子で有り、Ｘ
がホルミル基である式（Ｉ）で表される化合物〕は、そ
れ自体が、誘導性一酸化窒素合成酵素の発現を抑制する
作用を有する。

【００１５】また、前記式（Ｉ）で表されるプテリン誘
導体の内、ｎが１以上の整数、特にｎが１〜１００の整
数である式（Ｉ）で表されるプテリン誘導体は、投与し
た動物の体内又は体表で徐々に分解して６−ホルミル−
プテリンを放出するので、誘導性一酸化窒素合成酵素の
発現抑制作用を有する化合物を誘導することができる。

【００１６】本発明による医薬組成物は、前記式（Ｉ）
で表されるプテリン誘導体、若しくはその環状体、又は
その薬剤学的に許容することのできる塩を含有するの
で、誘導性一酸化窒素合成酵素の発現を抑制することが
可能である。従って、本発明による医薬組成物は、一酸
化窒素が原因で引き起こされる種々の疾病、例えば、炎
症性疾患（例えば、リウマチ性炎症、慢性関節リウマ
チ、変形性関節炎、潰瘍性大腸炎、自己免疫疾患、又は
急性炎症など）、虚血性障害（例えば、梗塞若しくは虚
血などに起因する各種の心臓障害若しくは脳障害、又は
虚血後の再潅流障害など）、ショック（例えば、内毒性
ショック、出血性ショック、又は心臓性ショックな
ど）、病的な血圧低下（例えば、サイトカインを用いる
癌治療における血圧低下、又は敗血症、出血性ショッ
ク、若しくは肝硬変において生じる血圧低下など）、移
植拒絶反応、神経系障害（例えば、アルツハイマー病、
てんかん、又は片頭痛など）、腫瘍、又はインシュリン
依存性糖尿病などを、有効に予防又は治療することがで
きる。これらの疾病は、誘導性一酸化窒素合成酵素によ
り産生された一酸化窒素が原因で引き起こされる疾病で
あり、増加した（場合により、過剰に産生された）一酸
化窒素が原因で引き起こされる疾病である。

【００１７】本発明による医薬組成物は、プテリン誘導
体又は薬剤学的に許容することのできるその塩を、それ
単独で、又は好ましくは薬剤学的若しくは獣医学的に許
容することのできる通常の担体と共に、動物、好ましく
は哺乳動物（特には、ヒト）に経口的に又は非経口的に
投与することができる。

【００１８】投与剤型としては、特に限定はなく、例え
ば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁
液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキス剤、若しくは
丸剤などの経口剤、又は注射剤、外用液剤、軟膏剤、坐
剤、局所投与のクリーム、ゼリー、ジェル、ペースト、
若しくは点眼薬などの非経口剤を挙げることができる。
これらの経口剤は、例えば、ゼラチン、アルギン酸ナト
リウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳糖、ぶどう
糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、デキス
トリン、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース、大豆
レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル、タルク、ステアリ
ン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マ
グネシウム、無水ケイ酸、又は合成ケイ酸アルミニウム
などの賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、
流動性促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味
剤、安定化剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防止剤等を用
いて、常法に従って製造することができる。例えば、６
−ホルミル−プテリンと乳糖とを混合して充填したカプ
セル剤などである。

【００１９】非経口投与方法としては、クリーム又は軟
膏等による局所投与、注射（皮下、静脈内等）、又は直
腸投与等が例示される。これらのなかで、注射剤が最も
好適に用いられる。例えば、注射剤の調製においては、
有効成分としてのプテリン誘導体の他に、例えば、生理
食塩水若しくはリンゲル液等の水溶性溶剤、植物油若し
くは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖若しく
は塩化ナトリウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化
剤、防腐剤、懸濁化剤、又は乳化剤等を任意に用いるこ
とができる。また、本発明による医薬組成物は、徐放性
ポリマーなどを用いた徐放性製剤の手法を用いて投与し
てもよい。例えば、本発明による医薬組成物をエチレン
ビニル酢酸ポリマーのペレットに取り込ませて、このペ
レットを治療すべき組織中に外科的に移植することがで
きる。

【００２０】本発明による医薬組成物は、これに限定さ
れるものではないが、プテリン誘導体又は薬剤学的に許
容することのできるその塩を、０．０１〜９９重量％、
好ましくは０．１〜８０重量％の量で含有することがで
きる。本発明による医薬組成物を、その誘導性一酸化窒
素合成酵素の発現抑制作用を利用して用いる場合の投与
量は、病気の種類、患者の年齢、性別、体重、症状の程
度、又は投与方法などにより異なり、当業者が適宜決定
することができる。更に、形態も医薬品に限定されるも
のではなく、種々の形態、例えば、機能性食品や健康食
品、又は飼料として飲食物の形で与えることも可能であ
る。

【００２１】６−ホルミル−プテリンについて、ラット
を用いる急性毒性試験を行ったところ、静脈内注射によ
り６ｍｇ／ｋｇ体重量の６−ホルミル−プテリンを１０
匹のラットに投与し、３か月間観察したが、死亡例は認
められなかった。

【００２２】

【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。

【実施例１】本実施例では、マウス腹腔から採取したマ
クロファージにおいて、リポ多糖体（ＬＰＳ）及びイン
ターフェロンγ（ＩＦＮγ）により誘導されるナイトラ
イト（ｎｉｔｒｉｔｅ）生成が、本発明における有効成
分である６−ホルミル−プテリンにより阻害されること
を確認した。６〜８週令の雄性マウス（Ｂａｌｂ／ｃマ
ウス）に、誘導試薬（ｅｌｉｃｉｔｉｎｇ ｒｅａｇｅ
ｎｔ）である４％ブリューワーズ（ｂｒｅｗｅｒ’ｓ）
チオグリコレート培地（Ｄｅｆｃｏ社）１．５ｍｌを腹
腔内注射し、それから５日後に、以下の手順で腹腔内の
マクロファージを採取した。すなわち、マウスを安楽死
させ、氷冷したＲＰＭＩ１６４０培地（グルタミン含
有；Ｆｉｓｈｅｒ社）５ｍｌを腹膜腔に注入した後に、
それを回収した。得られた細胞懸濁液を、ＲＰＭＩ１６
４０培地で２回洗浄し、細胞培養用培地［５％ウシ胎児
血清（ＦＣＳ）、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン
（Ｓｉｇｍａ社）、及び１００ユニット／ｍｌペニシリ
ン（Ｓｉｇｍａ社）含有ＲＰＭＩ１６４０培地］１５ｍ
ｌに再懸濁し、２４穴細胞培養プレート（Ｆｉｓｈｅｒ
社）に０．５ｍｌずつ分注した。

【００２３】細胞を分注した前記の２４穴細胞培養プレ
ートをインキュベーター（温度＝３７℃，二酸化炭素濃
度＝５％）中に２時間静置し、細胞を各ウェルの底に付
着させた。続いて、前記培地を、本発明における有効成
分である６−ホルミル−プテリンを種々の濃度で含む誘
導培地［前記の細胞培養用培地に、５０ｎｇ／ｍｌリポ
多糖体（大腸菌由来，血清型＝０１２７：Ｂ８；Ｓｉｇ
ｍａ社）と２５０ユニット／ｍｌインターフェロンγと
を更に添加した培地］、又は６−ホルミル−プテリンを
含有しない前記誘導培地０．５ｍｌに置換し、前記イン
キュベーター中で更に１５時間インキュベートした。

【００２４】前記インキュベーションの終了後に、培地
中に蓄積したナイトライト（一酸化窒素の酸化生成物）
の量を、以下に示すグリース（Ｇｒｉｅｓｓ）反応によ
り測定した。すなわち、各ウェルから採取した培地上清
０．１ｍｌをそれぞれ９６穴細胞培養プレートに移した
後に、各培養上清にグリース反応試薬（２％ナフチルア
ミン及び２％スルファニルアミド含有水溶液）０．１ｍ
ｌを加え、混合した。１５分間静置した後に、マイクロ
プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅ
社）により５４０ｎｍの吸光度を測定し、亜硝酸ナトリ
ウム標準溶液（Ｆｉｓｈｅｒ社）を用いて吸収係数を算
出した。なお、前記の一連の操作において、６−ホルミ
ル−プテリンの各濃度に関してそれぞれ３つの試料を準
備し、それらの試料からそれぞれ吸収係数を算出した。

【００２５】前記の一連の操作を更に２回繰り返し（各
シリーズにおいて使用するマクロファージは、それぞれ
別のマウスから調製した）、本実施例では、計３回の操
作を行なった。結果を表１に示す。表１において、記号
「Ｐ６Ａ」は、本発明における有効成分である６−ホル
ミル−プテリンを意味し、「ナイトライト」の欄に示す
数値は、マクロファージ２×１０⁶ 細胞当たりのナイト
ライト量である。リポ多糖体及びインターフェロンγに
より誘導されるマクロファージにおけるナイトライト生
成を、５０％阻害することのできる６−ホルミル−プテ
リンの濃度（ＩＣ₅₀）は、０．８ｍＭ（誤差は±７％以
下である）であった。

【００２６】

【表１】Ｐ６Ａ（ｍＭ） ナイトライト（μＭ） 阻害率（％） ０ ５６．０ ０ ０．１ ５４．１ ３．５ ０．５ ５２．８ ５．８ １．０ ２２．８ ５９．３ ２．０ ５．２ ９０．７

【００２７】

【実施例２】本実施例では、実施例１で調製したマクロ
ファージにおいて、リポ多糖体及びインターフェロンγ
により誘導される誘導性一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯ
Ｓ）ｍＲＮＡの転写が、本発明における有効成分である
６−ホルミル−プテリンにより阻害されることを、ノザ
ンブロッティングにより確認した。

【００２８】（１）前記実施例１に記載の手順に従っ
て、マウスからマクロファージを採取し、２４穴細胞培
養プレートに分注し、インキュベーター中に２時間静置
した後に、培地を、本発明における有効成分である６−
ホルミル−プテリンを種々の濃度で含む前記誘導培地、
又は６−ホルミル−プテリンを含有しない前記誘導培地
０．５ｍｌに置換した。次に、前記インキュベーター中
で更に５時間インキュベートした後に、各ウェルからマ
クロファージを回収し、各々のマクロファージ（３×１
０⁶ 細胞）から全ＲＮＡを調製した。全ＲＮＡの調製
は、市販のＲＮＡ調製試薬（ＴＲＩｚｏｌ；Ｌｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、添付の説明書に
従って実施した。

【００２９】各ウェルから得られたそれぞれの全ＲＮＡ
２０μｇを、１．７％ホルムアミド含有１％アガロース
ゲル（Ｆｉｓｈｅｒ社）を用いて電気泳動した後に、毛
細管現象を利用してポリアミド膜（ＭＳＩ社）に一晩か
けて転写し、紫外線クロスリンキングにより膜に固定し
た。得られたポリアミド膜を、プローブを含まないハイ
ブリダイゼーション溶液（ＤＩＧ Ｅａｓｙ Ｈｙｂ；
Ｂｏｅｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ社）に６５℃で
３０分間浸した後に、プローブ０．２２５μｇを含む前
記ハイブリダイゼーション溶液中で一晩ハイブリダイゼ
ーション（温度＝６５℃）を行なった。前記プローブと
して、マウスｉＮＯＳのｃＤＮＡ（ＡＬＥＸＩＳ社）を
ディグオキシジェニン（ＤＩＧ；Ｂｏｅｒｉｎｇｅｒ−
Ｍａｎｎｈｅｉｍ社）で予め標識したものを使用した。
エチジウムブロマイド染色により、各レーンの全ＲＮＡ
量が同量であることを確認した後に、以下の条件で各ブ
ロットを検出した。 一次抗体・・抗ＤＩＧ抗体（Ｂｏｅｒｉｎｇｅｒ−Ｍａ
ｎｎｈｅｉｍ社） 二次抗体・・ルシフェラーゼを連結した抗ＩｇＧ抗体 フィルム・・Ｘ線フィルム（富士写真フィルム） 検出系・・ＥＣＬシステム（Ａｍｅｒｓｈａｍ社）

【００３０】結果を図１に示す。図１は、ノザンブロッ
ティングの結果を示す写真である。レーン１は、分子量
マーカーとして、ＲＮＡラダー（ＧＩＢＣＯ社）を電気
泳動した結果を示し、レーン２は、ネガティブコントロ
ール、すなわち、リポ多糖体、インターフェロンγ、及
び６−ホルミル−プテリン無添加の培養培地を用いた場
合の結果を示し、レーン３及びレーン８は、ポジティブ
コントロール、すなわち、リポ多糖体及びインターフェ
ロンγ含有かつ６−ホルミル−プテリン無添加の培養培
地を用いた場合の結果を示し、レーン４〜レーン７は、
６−ホルミル−プテリンをそれぞれ、３ｍＭ、１ｍＭ、
０．５ｍＭ、又は０．１ｍＭ含有する培養培地（リポ多
糖体及びインターフェロンγ含有）を用いた場合の結果
を示す。なお、レーン８のみ、他のレーンにおけるＲＮ
Ａ量（２０μｇ）の２倍量（すなわち、４０μｇ）のＲ
ＮＡを泳動した。図１に記載の矢印は、その矢印の示す
位置に、ｉＮＯＳに由来するバンドが表われることを示
すものである。図１から明らかなように、リポ多糖体及
びインターフェロンγにより誘導されるマクロファージ
におけるｉＮＯＳのｍＲＮＡの転写量は、本発明におけ
る有効成分である６−ホルミル−プテリンの添加量に応
じて減少した。

【００３１】（２）６−ホルミル−プテリンの添加濃度
を３ｍＭ、１ｍＭ、０．５ｍＭ、又は０．１ｍＭとする
代わりに、２ｍＭ、１ｍＭ、０．５ｍＭ、又は０．１ｍ
Ｍとすること以外は、前記（１）の操作を３回繰り返し
た（各シリーズにおいて使用するマクロファージは、そ
れぞれ別のマウスから調製した）。結果を表２に示す。
表２において、記号「Ｐ６Ａ」は、本発明における有効
成分である６−ホルミル−プテリンを意味し、「ブロッ
ト濃度」の欄に示す「ａｒｂ．」は、ブロット濃度の単
位が任意であること、具体的には、デンシトメーター
（Ｅａｇｌｅ Ｅｙｅ社）の目盛位置から直接読みとっ
た数値であることを意味する。リポ多糖体及びインター
フェロンγにより誘導されるマクロファージにおけるｉ
ＮＯＳのｍＲＮＡの転写を、５０％阻害することのでき
る６−ホルミル−プテリンの濃度（ＩＣ₅₀）は、０．５
ｍＭ（誤差は±１３％以下である）であった。

【００３２】

【表２】Ｐ６Ａ（ｍＭ） ブロット濃度（ａｒｂ．） 阻害率（％） ０ １８．３ ０ ０．１ １２．６ ３１．１ ０．５ ５．５ ５６．３ １．０ １．０ ９４．５ ２．０ ０．１ ９９．２

【００３３】

【発明の効果】本発明による誘導性一酸化窒素合成酵素
の発現抑制剤は、誘導性一酸化窒素合成酵素の発現を抑
制することが可能である。従って、前記の誘導性一酸化
窒素合成酵素の発現抑制剤を含有する本発明による医薬
組成物は、一酸化窒素により引き起こされる種々の疾病
を効果的に予防又は治療することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ノザンブロッティングによる電気泳動
の結果を示す、図面に代わる写真である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/505 ＡＢＶ Ａ６１Ｋ 31/505 ＡＢＶ ＡＤＰ ＡＤＰ ＡＤＵ ＡＤＵ Ａ２３Ｋ 1/16 ３０２ Ａ２３Ｋ 1/16 ３０２Ｎ Ａ２３Ｌ 1/30 Ａ２３Ｌ 1/30 Ｚ // Ｃ０７Ｄ 475/04 Ｃ０７Ｄ 475/04

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 〔式中、Ｒ¹ 及びＲ² は、それぞれ独立に、水素原子、
   炭素数１〜４のアルキル基、又は式Ｒ³ −ＣＯ−（Ｒ³
   は炭素数１〜４のアルキル基である）で表されるアシル
   基であり、Ｘは、ホルミル基又はヒドロキシメチル基で
   あり、Ａは式（Ｉａ）： 【化２】 で表される基であり、ｎは０又は１以上の整数である
   が、但し、Ｘがヒドロキシメチル基である場合にはｎは
   ０であるものとし、そしてｎが１以上の整数である場合
   には、Ｒ¹ 及びＲ² はそれぞれ水素原子であり、Ｘはホ
   ルミル基であるものとする〕で表されるプテリン誘導
   体、若しくはその環状体、又はその塩を有効成分として
   含有することを特徴とする、誘導性一酸化窒素合成酵素
   の発現抑制剤。
2. 【請求項２】 式（II）： 【化３】 で表される６−ホルミル−プテリン又はその塩を有効成
   分として含有する、請求項１に記載の誘導性一酸化窒素
   合成酵素の発現抑制剤。
3. 【請求項３】 請求項１に記載の式（Ｉ）で表されるプ
   テリン誘導体、若しくはその環状体、又は薬剤学的に許
   容することのできるその塩を有効成分として含有するこ
   とを特徴とする、一酸化窒素により引き起こされる疾病
   の予防又は治療用の医薬組成物。
4. 【請求項４】 一酸化窒素により引き起こされる疾病
   が、炎症性疾患、虚血性障害、ショック、病的な血圧低
   下、移植拒絶反応、神経系障害、腫瘍、又はインシュリ
   ン依存性糖尿病である、請求項３に記載の医薬組成物。
5. 【請求項５】 請求項１に記載の式（Ｉ）で表されるプ
   テリン誘導体、若しくはその環状体、又はその塩を含有
   することを特徴とする、一酸化窒素により引き起こされ
   る疾病の予防又は治療用の機能性食品。
6. 【請求項６】 請求項１に記載の式（Ｉ）で表されるプ
   テリン誘導体、若しくはその環状体、又はその塩を含有
   することを特徴とする、一酸化窒素により引き起こされ
   る疾病の予防又は治療用の飼料。