JPH11158109A - 2h-indene spiro-(3'-cyclohexene) compound - Google Patents
2h-indene spiro-(3'-cyclohexene) compoundInfo
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- JPH11158109A JPH11158109A JP9323078A JP32307897A JPH11158109A JP H11158109 A JPH11158109 A JP H11158109A JP 9323078 A JP9323078 A JP 9323078A JP 32307897 A JP32307897 A JP 32307897A JP H11158109 A JPH11158109 A JP H11158109A
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Abstract
Description
【0001】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、新規化合物および
それを含有する医薬、詳しくは新規2H−インデン ス
ピロ−(3’−シクロヘキセン)化合物を含有するキマ
ーゼ阻害剤および/または抗真菌剤に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel compound and a medicament containing the same, particularly to a chymase inhibitor and / or an antifungal agent containing a novel 2H-indene spiro- (3'-cyclohexene) compound.
【0002】[0002]
【従来の技術】ヒト型キマーゼは、1990年に分離さ
れた分子量約3万の中性セリンプロテアーゼであり、主
として肥満細胞で合成、貯蔵、分泌され、心臓、血管、
皮膚に存在することが判明している。その主な作用とし
て、アンジオテンシンIIの産生が挙げられる。従来、
アンジオテンシンIIの産生にはアンジオテンシン変換
酵素(以下、ACEと略記する)が作用していると考え
られていたが、最近になって、ヒト心臓におけるアンジ
オテンシンIIの産生においてACEが作用しているの
はわずか10〜15%程度にすぎず、80%以上はヒト
型キマーゼの作用であることが明らかとなってきた(サ
ーキュレーション・リサーチ(Circulation
Research)第66巻,第883頁,1990
年、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー
(Journal of Biological Ch
emistry),第266巻,第17173頁,19
91年)。このため、新しいタイプの心血管障害治療剤
としてキマーゼ阻害剤が期待を集めている。また、キマ
ーゼは肥満細胞からのヒスタミン遊離促進にも関与して
いるとされており(ジャーナル・オブ・バイオケミスト
リー(Journal of Biochemistr
y)第103巻,第820−822頁,1988年)、
その阻害剤は新しいタイプの抗炎症剤、抗アレルギー剤
になり得るとして有望視されている。2. Description of the Related Art Human chymase is a neutral serine protease having a molecular weight of about 30,000, isolated in 1990, and is synthesized, stored and secreted mainly in mast cells, and is used in the heart, blood vessels,
It has been found to be present on the skin. Its main effect is the production of angiotensin II. Conventionally,
It was thought that angiotensin converting enzyme (hereinafter, abbreviated as ACE) acts on the production of angiotensin II, but recently, ACE acts on the production of angiotensin II in the human heart. It has been revealed that only about 10 to 15% is involved, and more than 80% is caused by the action of human chymase (Circulation Research).
Research) Vol. 66, p. 883, 1990
Year, Journal of Biological Chemistry (Journal of Biological Ch
mistry), vol. 266, p. 17173, 19
1991). For this reason, chymase inhibitors are attracting attention as a new type of therapeutic agent for cardiovascular disorders. Chymase has also been implicated in promoting histamine release from mast cells (see Journal of Biochemistry).
y) 103, 820-822, 1988),
The inhibitors hold promise as potential new types of anti-inflammatory and anti-allergic agents.
【0003】その他にも、ヒト型キマーゼは様々な活性
を有しており、インビトロではマクロファージの泡沫細
胞化促進、プロコラゲナーゼから活性型コラゲナーゼの
産生、コラーゲン、フィブロネクチン、ビトロネクチン
等の細胞外マトリックスの限定分解、トロンビンやIg
Gの限定分解等の作用を有することが既に明らかになっ
ている。また、病態生理学的には、バルーン障害後の血
管や心筋症の心臓においてキマーゼ活性が上昇している
ことも知られている。このような知見から、キマーゼは
動脈硬化、炎症、リウマチ等にも関与していることが予
測され得る。[0003] In addition, human chymase has various activities, such as promotion of macrophage foam cell formation in vitro, production of active collagenase from procollagenase, and limitation of extracellular matrix such as collagen, fibronectin and vitronectin. Degradation, thrombin and Ig
It has already been clarified that it has an action such as limited decomposition of G. It is also known pathologically that chymase activity is elevated in blood vessels after balloon injury and in hearts with cardiomyopathy. From such findings, it can be predicted that chymase is also involved in arteriosclerosis, inflammation, rheumatism and the like.
【0004】現在までに、国際特許出願公開第93/2
5574号、同95/27053号、同95/2705
5号にペプチド性キマーゼ阻害剤が開示されている。ま
た、非ペプチド性キマーゼ阻害剤としては、国際特許出
願公開第96/04248号にイミダゾリジン誘導体
が、ヨーロッパ特許公開第713876にトリアジン誘
導体が開示されている。さらに、本願化合物と類似構造
を有するキマーゼ阻害剤として特願平8−261687
号がある。To date, International Patent Application Publication No. 93/2
5574, 95/27053, 95/2705
No. 5 discloses a peptidic chymase inhibitor. Further, as non-peptide chymase inhibitors, imidazolidine derivatives are disclosed in WO 96/04248, and triazine derivatives are disclosed in EP 713876. Further, as a chymase inhibitor having a similar structure to the compound of the present application, Japanese Patent Application No. 8-261687.
There is a number.
【0005】[0005]
【発明が解決しようとする課題】現在のところ、非ペプ
チド性キマーゼ阻害剤としては上記の通り少数が見出さ
れているのみであり、キマーゼの生理学的な機能解明、
さらには臨床上有用な医薬開発のために、強い活性を有
する非ペプチド性キマーゼ阻害剤が求められていた。At present, only a small number of non-peptide chymase inhibitors have been found as described above, and the physiological function of chymase has been elucidated.
Furthermore, for the development of clinically useful drugs, non-peptide chymase inhibitors having strong activity have been demanded.
【0006】[0006]
【課題を解決する手段】本発明者らは、カビの一種であ
る、スタキボトリス パルビスポラ ヒューズ(Sta
chybotrys parvispora Hugh
es)RF−10131株の培養液中に強いヒト型キマ
ーゼ阻害活性を有する化合物を見出し、その化合物を単
離・精製し、本発明を完成した。さらに、本発明化合物
は抗真菌作用をも併せて有していることを見出した。The present inventors have means for solving the problem] is a type of mold, Stachybotrys Parubisupora fuse (Sta
bathrooms parvispora Hugh
es) A compound having strong human chymase inhibitory activity was found in the culture of the RF-10131 strain, and the compound was isolated and purified to complete the present invention. Furthermore, they have found that the compounds of the present invention also have an antifungal effect.
【0007】即ち、本発明は式(I−a):That is, the present invention provides a compound represented by the formula (Ia):
【化2】 Embedded image
【0008】で示される化合物、その互変異性体、その
立体異性体、それらをアンモニア水またはアンモニウム
塩で処理した化合物、それらの製薬上許容される塩また
はそれらの水和物を提供するものである。また、本発明
は上記アンモニア水またはアンモニウム塩で処理した化
合物が以下の物性を有するものである化合物(I−
g)、その製薬上許容される塩またはそれらの水和物を
提供する。 融点:132〜135℃(分解) [α]D 25= ±0°(c=0.5,メタノール) 元素分析実測値:C 73.88 %, H 7.35 %, N 3.37 % FABMS, m/z ; 422 HR-FABMS, m/z 実測値:422.2331 IR (KBr) cm-1; 3287, 1657, 1640, 1611, 1545, 1524,
1425, 1273, 1228,1053 UV (MeOH),λmax nm (E1% 1cm); 216 (678), 276 (22
6), 368 (356)1 H NMR (CDCl3, 300 MHz)δ: 1.52 (6H, s-like), 1.56
(6H, s-like), 1.94 (3H,d, J=1.2 Hz),2.31 (2H,m),
2.82 (2H, m), 3.94 (3H, s), 4.80 (2H, t-like),6.23
(1H, d, J=1.2 Hz), 6.27 (1H, br.s) , 7.06 (1H, d,
J=7.8 Hz) 7.43 (1H, t-like, J=8.1 Hz), 8.40 (1H, br.s), 12.9
2 (1H, br.s)13 C NMR (CDCl3, 50 MHz)δ: 18.06, 19.21, 25.77, 3
6.94, 37.06, 55.80, 56.46, 82.79,114.51, 118.95, 1
22.61, 129.65, 131.38, 131.54, 133.87, 135.78,155.
13, 166.29Which provides a compound represented by the formula (I), a tautomer thereof, a stereoisomer thereof, a compound obtained by treating them with aqueous ammonia or an ammonium salt, a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof. is there. Further, the present invention provides a compound (I-I) wherein the compound treated with the above-mentioned ammonia water or ammonium salt has the following physical properties.
g), providing a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof. Melting point: 132-135 ° C (decomposition) [α] D 25 = ± 0 ° (c = 0.5, methanol) Elemental analysis: C 73.88%, H 7.35%, N 3.37% FABMS, m / z; 422 HR- FABMS, m / z Found: 422.2331 IR (KBr) cm -1 ; 3287, 1657, 1640, 1611, 1545, 1524,
1425, 1273, 1228,1053 UV (MeOH), λ max nm (E 1% 1cm ); 216 (678), 276 (22
6), 368 (356) 1 H NMR (CDCl 3 , 300 MHz) δ: 1.52 (6H, s-like), 1.56
(6H, s-like), 1.94 (3H, d, J = 1.2 Hz), 2.31 (2H, m),
2.82 (2H, m), 3.94 (3H, s), 4.80 (2H, t-like), 6.23
(1H, d, J = 1.2 Hz), 6.27 (1H, br.s), 7.06 (1H, d,
J = 7.8 Hz) 7.43 (1H, t-like, J = 8.1 Hz), 8.40 (1H, br.s), 12.9
2 (1H, br.s) 13 C NMR (CDCl 3 , 50 MHz) δ: 18.06, 19.21, 25.77, 3
6.94, 37.06, 55.80, 56.46, 82.79, 114.51, 118.95, 1
22.61, 129.65, 131.38, 131.54, 133.87, 135.78, 155.
13, 166.29
【0009】さらに、本発明は化合物(I−a)、その
互変異性体、その立体異性体、それらの製薬上許容され
る塩またはそれらの水和物を含有することを特徴とする
医薬組成物、詳しくはキマーゼ阻害剤および/または抗
真菌剤を提供するものである。また、本発明は化合物
(I−g)、その製薬上許容される塩またはそれらの水
和物を含有することを特徴とする医薬組成物、詳しくは
キマーゼ阻害剤および/または抗真菌剤を提供する。さ
らに別の態様として、スタキボトリス(Stachyb
otrys)属に属し、化合物(I−a)、その互変異
性体またはその立体異性体を産生し得る微生物を培養
し、得られた培養物から該化合物、その互変異性体また
はその立体異性体を採取することを特徴とする、化合物
(I−a)、その互変異性体、その立体異性体、それら
の製薬上許容される塩またはそれらの水和物の製造方法
に関する。さらに、スタキボトリス パルビスポラ(S
tachybotrys parvispora)に属
し、化合物(I−a)、その互変異性体またはその立体
異性体を産生し得る微生物、詳しくはスタキボトリスパ
ルビスポラ ヒューズ RF−10131(Stach
ybotrys parvispora Hughes
RF−10131)に関する。Further, the present invention provides a pharmaceutical composition characterized by containing a compound (Ia), a tautomer thereof, a stereoisomer thereof, a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof. Products, in particular, chymase inhibitors and / or antifungal agents. The present invention also provides a pharmaceutical composition comprising the compound (Ig), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate thereof, specifically a chymase inhibitor and / or an antifungal agent. I do. In yet another embodiment, Stachyboli ( Stachyb)
otrys ), and cultivating a microorganism capable of producing the compound (Ia), a tautomer or a stereoisomer thereof, and culturing the compound, the tautomer or the stereoisomer thereof from the obtained culture. The present invention relates to a method for producing a compound (Ia), a tautomer thereof, a stereoisomer thereof, a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof, which comprises collecting a body. In addition, Stachybotrys parvispora ( S
tachybotrys parvispora ) and a microorganism capable of producing the compound (Ia), a tautomer or a stereoisomer thereof, more specifically, a stachybotrys parvispora fuse RF-10131 ( Stach).
ybotrys parvispora Hughes
RF-10131).
【0010】本発明化合物(I−a)には(I−b)お
よび(I−c)の2種の互変異性体並びに(I−d)、
(I−e)および(I−f)の3種の立体異性体が存在
し、それらの分離は非常に困難である。The compound (Ia) of the present invention includes two tautomers (Ib) and (Ic) and (Id)
There are three stereoisomers, (Ie) and (If), and their separation is very difficult.
【0011】[0011]
【化3】 Embedded image
【0012】本発明は化合物(I−a)〜化合物(I−
f)(以下、これらをまとめて化合物(I−A)と略す
こともある)、それらの製薬上許容される塩およびそれ
らの水和物を全て包含するものである。また、化合物
(I−A)をアンモニア水またはアンモニウム塩で処理
することにより得られる、化合物(I−A)の誘導体で
ある化合物(I−g)、その製薬上許容される塩または
それらの水和物も包含する(以下、(I−A)および
(I−g)をまとめて化合物(I)と略すこともあ
る)。The present invention provides compounds (Ia) to (I-
f) (hereinafter sometimes collectively referred to as compound (IA)), pharmaceutically acceptable salts thereof, and hydrates thereof. Compound (Ig), which is a derivative of compound (IA), obtained by treating compound (IA) with aqueous ammonia or an ammonium salt, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a water thereof. Also included are compounds (hereinafter, (IA) and (Ig) may be collectively abbreviated as compound (I)).
【0013】以下に本発明化合物(I)の製造方法を説
明する。本法においては、本発明化合物(I−A)を産
生し得る微生物を通常の発酵生産に用いる培地組成、培
地条件で培養し、通常の発酵生産物を分離採取する方法
により化合物(I−A)を単離する。本発明化合物(I
−A)を産生し得る微生物としては、スタキボトリス属
に属する微生物、例えばスタキボトリス パルビスポラ
ヒューズ RF−10131株が例示される。スタキ
ボトリス パルビスポラ ヒューズ RF−10131
株は以下のような形態学的性状を有していた。The method for producing the compound (I) of the present invention will be described below. In this method, a microorganism capable of producing the compound (IA) of the present invention is cultured under the medium composition and medium conditions used for normal fermentation production, and the compound (IA) is isolated and collected by a method of separating and collecting a normal fermentation product. ) Is isolated. Compound (I) of the present invention
Examples of microorganisms that can produce -A) include microorganisms belonging to the genus Stachybotrys, for example, Stachybotrys parvispora fuse RF-10131 strain. Stachybotrys Parvispora Fuse RF-10131
The strain had the following morphological properties.
【0014】コ−ンミ−ル寒天培地上でのコロニ−は、
やや生育が遅く、その表面は湿潤し、分生子形成に従っ
て緑黒色を呈する。分生子柄は単生あるいは分枝し、培
地から直立する。栄養菌糸は無色で、培地中に埋没し、
表面は平滑、巾は1.0〜1.5μmで多細胞からな
り、分枝する。個々の分生子柄は無色で3〜4細胞から
なり、高さ65.0〜100.0μm、巾は基部が4.
0〜7.0μm、上部に向かって狭まり,フィアライド
着生部分で2.5〜3.0μmとなる。表面は平滑もし
くは粒状で、上部は特に粒状が強い。フィアライドは高
さ7.0〜10.5μm、巾は3.5〜4.5μmの単
細胞で棍棒状を呈し、表面は平滑で、分生子柄先端に4
〜9個生じる。分生子は長さ5.5〜6.5μm、巾は
2.0〜3.0μmの円筒形の単細胞で、オリーブ色を
呈し、表面は平滑もしくはやや粗く、フィアライド上に
球形の湿潤した光沢のある分生子塊として形成される。The colonies on the cone mill agar medium are as follows:
It grows a little slower, its surface becomes moist, and it turns greenish black as conidia form. The conidiophores are solitary or branched and stand upright from the medium. The vegetative mycelium is colorless, buried in the medium,
The surface is smooth, has a width of 1.0 to 1.5 μm, is composed of multiple cells, and is branched. Each conidiophore is colorless and consists of 3-4 cells, height 65.0-100.0 μm, width 4.
0 to 7.0 μm, narrows toward the top, and becomes 2.5 to 3.0 μm in the phialide-adhered portion. The surface is smooth or granular, and the upper part is particularly strong. Fialide is a single cell with a height of 7.0 to 10.5 μm and a width of 3.5 to 4.5 μm, and has a club-like shape, a smooth surface, and a 4
~ 9 occur. Conidia are cylindrical single cells 5.5-6.5 μm in length and 2.0-3.0 μm in width, have an olive color, have a smooth or slightly rough surface, and have a spherical, wet gloss on phialide. It is formed as a conidium mass.
【0015】ポテトデキストロース寒天培地上でのコロ
ニーは、生育は良好で、灰味黄茶色を呈し、黄茶色の可
溶性色素を産生し、気中菌糸を形成する。10〜35℃
の範囲で生育し、生育至適温度は23〜30℃である。
この株は有性生殖器官を形成せず、分生子柄先端のフィ
アライド頂端に球形の湿潤した光沢のある分生子塊とし
て分生子を形成する性状を有することから、スタキボト
リス属に属する不完全菌であると判断される。これらの
諸性状をデルマティアセオウス・ハイフォミセーテス
(Dermatiaceous Hyphomycet
es)、コモンウェルス・マイコロジカル・インスティ
チュート、キュー、スレイ、イングランド(Commo
nwealth Mycological Insti
tute、Kew、Surrey、England)、
第542頁〜544頁、1971年;モア・デルマティ
アセオウス・ハイフォミセーテス(More Derm
atiaceous Hyphomycetes)コモ
ンウェルス・マイコロジカル・インスティチュート、キ
ュー、スレイ、イングランド(Commonwealt
h Mycological Institute、K
ew、Surrey、England)、第463頁〜
464頁、1976年;マツシマ・マイコロジカル・メ
モイリス(Matsushima Mycologic
al Memoirs)、No.1〜8、1980〜1
995年;マイコロジカル・ペーパーズ(Mycolo
gical Papers)No.48、第74頁〜7
6頁、1952;トランスアクションズ オブ ザ ブ
リティッシュ マイコロジカル ソサエテイ(Tran
sactions ofthe British My
cological Society)78、3、第5
56頁〜559頁、1982年;ジャーナル オブ ザ
アンティバクテリアル アンド アンティフンガル
エイジェンツ(Journal of the Ant
ibacterial and Antifungal
Agents)19、11、第597頁〜607頁、
1991年などの文献に記載されているスタキボトリス
属の既知種と比較した結果、分生子の形状、サイズ、表
面構造その他の性状からスタキボトリス パルビスポラ
ヒューズ 1952(Stachybotrys p
arvispora Hughes 1952)と同定
した。The colonies on the potato dextrose agar medium grow well, exhibit a grayish-yellow brown color, produce a yellow-brown soluble pigment, and form aerial hyphae. 10-35 ° C
And the optimum growth temperature is 23-30 ° C.
Since this strain does not form a sexual reproductive organ and has the property of forming conidia as a spherical wet shiny conidia mass at the apex of the phialide at the tip of the conidiophore, it is an incomplete bacterium belonging to the genus Stachybotrys It is determined that there is. These properties are described as Dermatiaseuus Hyphomycetes.
es), Commonwealth Mycological Institute, Kew, Slay, England (Commo)
nweth Mylogical Insti
Tute, Kew, Surrey, England),
542-544, 1971; More Dermatias Theeus Hyfomisates (More Derm)
atiaseus Hyphomycetes) Commonwealth Mycological Institute, Kew, Slay, England (Commonwealt)
h Mylogical Institute, K
ew, Surrey, England), pp. 463-
464, 1976; Matsushima Mycological Memoris
al Memoirs), No. 1-8, 1980-1
995; Mycological Papers
medical Papers) No. 48, pp. 74-7
6, 1952; Transactions of the British Mycology Society (Tran
actions of the British My
theoretical Society) 78, 3rd, 5th
56-559, 1982; Journal of the Antibacterial and Antifungal
Agents (Journal of the Ant)
ibacterial and Antifungal
Agents) 19, 11, 597-607,
As a result of comparison with known species of the genus Stachybotrys described in literatures such as 1991, the shape, size, surface structure, and other properties of conidia indicate that Stachybotrys parvispora fuse 1952 ( Stachybotrys p.
arvispora Hughes 1952).
【0016】尚、本菌株は工業技術院生命工学工業技術
研究所(茨城県つくば市東1丁目1番3号)に受託番号
「FERM P−16449」として平成9年(199
7年)9月29日より寄託されている。This strain was deposited with the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (1-1-3 Higashi, Tsukuba, Ibaraki Prefecture) under the accession number "FERM P-16449" in 1997 (1992).
7 years) has been deposited since September 29.
【0017】本発明化合物(I−A)の生産用培地とし
ては、炭素源、窒素源および無機塩を適当に含有するも
のであれば合成培地または天然培地のいずれでも好適に
用いることができる。必要に応じて、ビタミン類または
その他栄養物質を適宜加えてもよい。As the medium for producing the compound (IA) of the present invention, any of a synthetic medium and a natural medium can be suitably used as long as it contains a carbon source, a nitrogen source and an inorganic salt. If necessary, vitamins or other nutrients may be added as appropriate.
【0018】炭素源としては例えば、グルコース、マル
トース、フラクトース、シュークロース、デンプン等の
糖類、グリセロール、マンニトール等のアルコール類、
グリシン、アラニン、アスパラギン等のアミノ酸類、大
豆油、オリーブ油等の油脂類等の一般的な炭素源より微
生物の資化性を考慮して1種または2種以上を適宜選択
して用いればよい。窒素源としては、大豆粉、コーンス
チープリカー、ビーフエキス、ペプトン、酵母エキス、
アミノ酸混合物、魚粉等の有機含窒素化合物またはアン
モニウム塩、硝酸塩等の無機窒素化合物等が挙げられ、
微生物の資化性を考慮して1種または2種以上を適宜選
択して用いればよい。無機塩としては、例えば炭酸カル
シウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシ
ウム、硫酸銅、塩化マンガン、硫酸亜鉛、塩化コバル
ト、各種リン酸塩を必要に応じて添加すればよい。ま
た、消泡剤、例えば植物油、ポリプロピレングリコール
等は必要に応じて添加することができる。Examples of the carbon source include sugars such as glucose, maltose, fructose, sucrose and starch; alcohols such as glycerol and mannitol;
One or more kinds may be appropriately selected and used from general carbon sources such as amino acids such as glycine, alanine and asparagine, and fats and oils such as soybean oil and olive oil in consideration of the assimilation of microorganisms. Nitrogen sources include soy flour, corn steep liquor, beef extract, peptone, yeast extract,
Amino acid mixture, organic nitrogen-containing compounds such as fish meal or ammonium salts, inorganic nitrogen compounds such as nitrates and the like,
One or more kinds may be appropriately selected and used in consideration of the assimilation property of the microorganism. As the inorganic salt, for example, calcium carbonate, sodium chloride, potassium chloride, magnesium sulfate, copper sulfate, manganese chloride, zinc sulfate, cobalt chloride, and various phosphates may be added as needed. Further, an antifoaming agent, for example, vegetable oil, polypropylene glycol or the like can be added as needed.
【0019】培養温度は微生物が発育し、本発明化合物
(I−A)を生産する範囲で適宜変更できるが、好まし
くは15℃〜32℃であり、さらに好ましくは25℃〜
30℃である。初発pHは6〜8付近が好ましく、培養
時間は通常数日〜数週間程度であるが、本発明化合物
(I−A)の生産量が採取可能量、好ましくは最高に達
したときに培養を終了すればよい。培養法は固層培養、
通気攪拌培養等の通常用いられる方法であればいずれも
好適に用い得る。The culturing temperature can be appropriately changed within a range in which the microorganism grows and produces the compound (IA) of the present invention, but it is preferably 15 ° C to 32 ° C, more preferably 25 ° C to 32 ° C.
30 ° C. The initial pH is preferably around 6 to 8, and the culture time is usually about several days to several weeks. When the production amount of the compound (IA) of the present invention reaches a retrievable amount, preferably the maximum, the culture is continued. It should just end. The culture method is solid-phase culture,
Any of the commonly used methods such as aeration and agitation culture can be suitably used.
【0020】培養物から発酵生産物を分離採取する方法
には、濾過、遠心分離、各種イオン交換樹脂やその他の
活性吸着やクロマトグラフィー、各種有機溶媒による抽
出等を適当に組み合わせた通常の発酵生産物分離精製法
を用いることができる。例えば、培養物より分離精製し
た菌体を、酢酸エチル、アセトン、メチルエチルケトン
等の有機溶媒で抽出し、シリカゲルカラムクロマトグラ
フィーと薄層クロマトグラフィーを組み合わせて分離精
製すればよい。The method of separating and collecting the fermentation product from the culture includes filtration, centrifugation, various ion exchange resins and other active adsorption, chromatography, extraction with various organic solvents, and the like. A material separation and purification method can be used. For example, cells isolated and purified from a culture may be extracted with an organic solvent such as ethyl acetate, acetone, or methyl ethyl ketone, and then separated and purified by a combination of silica gel column chromatography and thin layer chromatography.
【0021】このようにして採取された化合物(I−
A)は常法により様々な誘導体に導くことが可能であ
る。例えば、化合物(I−A)を適当な溶媒に溶解し、
アンモニア水またはアンモニウム塩で処理すれば前記化
合物(I−g)が得られる。溶媒としてはメタノール、
アセトニトリル、テトラヒドロフラン、アセトン等の水
と混合可能な溶媒が好ましく、アンモニウム塩として
は、炭酸アンモニウム、炭酸水素アンモニウム、酢酸ア
ンモニウム等の弱酸との塩が好ましい。本発明は、化合
物(I)の製薬上許容される生成可能な塩を包含し、例
えばナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、カルシ
ウム、バリウム等のアルカリ土類金属塩等が挙げられ
る。これらの塩は、通常用いられる反応を用いて形成さ
せることができる。また、本発明は化合物(I)の水和
物を含し、化合物(I)1分子が任意の数の水分子と配
位していてもよい。The compound (I-
A) can be led to various derivatives by a conventional method. For example, compound (IA) is dissolved in a suitable solvent,
The compound (Ig) can be obtained by treatment with aqueous ammonia or an ammonium salt. As a solvent, methanol,
A water-miscible solvent such as acetonitrile, tetrahydrofuran, and acetone is preferable, and the ammonium salt is preferably a salt with a weak acid such as ammonium carbonate, ammonium hydrogen carbonate, and ammonium acetate. The present invention includes pharmaceutically acceptable and pharmaceutically acceptable salts of compound (I), such as alkali metal salts such as sodium and potassium, and alkaline earth metal salts such as calcium and barium. These salts can be formed using commonly used reactions. The present invention also includes a hydrate of the compound (I), and one molecule of the compound (I) may be coordinated with an arbitrary number of water molecules.
【0022】化合物(I)、その製薬上許容される塩ま
たはそれらの水和物は、強いキマーゼ阻害活性および/
または抗真菌活性を有するため、医薬または動物薬とし
てヒトやその他の動物に投与することができる。キマー
ゼ阻害剤としては、具体的には心筋梗塞、心肥大、心不
全、心筋症、高血圧、PTCA(経皮的冠状動脈形成
術)術後の血管内膜肥厚、末梢循環障害、血管炎、動脈
硬化、糖尿病性および非糖尿病性腎障害等の慢性心血管
障害並びに炎症、アレルギー、リウマチ、アトピー等の
アレルギー性疾患の治療に有効である。抗真菌剤として
は、内臓カンジダ症、肺アスペルギルス症等の深在性真
菌症および皮膚真菌症の治療に有効である。Compound (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof has strong chymase inhibitory activity and / or
Alternatively, since it has antifungal activity, it can be administered to humans and other animals as a pharmaceutical or veterinary drug. Specific examples of chymase inhibitors include myocardial infarction, cardiac hypertrophy, heart failure, cardiomyopathy, hypertension, intimal thickening after PTCA (percutaneous coronary angioplasty), peripheral circulatory disorders, vasculitis, and atherosclerosis It is effective in treating chronic cardiovascular disorders such as diabetic and non-diabetic renal disorders and allergic diseases such as inflammation, allergy, rheumatism and atopy. As an antifungal agent, it is effective for the treatment of deep mycosis such as visceral candidiasis, pulmonary aspergillosis and dermatomycosis.
【0023】化合物(I)、その製薬上許容される塩ま
たはそれらの水和物を医薬として投与する場合、経口
的、非経口的のいずれの方法でも投与が可能である。経
口投与は常法に従って錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル
剤、丸剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、バッカル剤また
は舌下剤等の通常用いられる剤型に調製して投与すれば
よい。非経口投与は、例えば筋肉内投与等の注射剤、坐
剤、経皮吸収剤、吸入剤等、通常用いられるいずれの剤
型でも好適に投与することができるが、特に静脈内投与
が好ましい。When compound (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof is administered as a medicine, it can be administered orally or parenterally. Oral administration may be carried out according to a conventional method and prepared and administered in a commonly used form such as tablets, granules, powders, capsules, pills, solutions, suspensions, syrups, buccals, and sublinguals. For parenteral administration, any commonly used dosage form, such as injections such as intramuscular administration, suppositories, transdermal absorption agents, inhalants, etc., can be suitably administered, but intravenous administration is particularly preferred.
【0024】本発明の医薬組成物は、有効成分の有効量
に最終投与剤型に適した賦形剤、結合剤、湿潤剤、崩壊
剤、滑沢剤および希釈剤等の各種医薬用添加剤を必要に
応じて混合して調製することができる。注射剤の場合に
は適当な担体と共に滅菌処理を行って製剤とすればよ
い。The pharmaceutical composition of the present invention comprises various pharmaceutical additives such as excipients, binders, wetting agents, disintegrants, lubricants and diluents suitable for the final dosage form in an effective amount of the active ingredient. Can be mixed and prepared as needed. In the case of an injection, a preparation may be prepared by sterilizing with an appropriate carrier.
【0025】具体的には、賦形剤としては乳糖、白糖、
ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウムまたは結晶セルロ
ース等、結合剤としてはメチルセルロース、カルボキシ
メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼ
ラチンまたはポリビニルピロリドン等、崩壊剤としては
カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロ
ースナトリウム、デンプン、アルギン酸ナトリウム、カ
ンテン末またはラウリル硫酸ナトリウム等、滑沢剤とし
てはタルク、ステアリン酸マグネシウムまたはマクロゴ
ール等が挙げられる。坐剤の基剤としてはカカオ脂、マ
クロゴール、またはメチルセルロース等を用いることが
できる。さらに、液剤または乳濁性、懸濁性の注射剤と
して調製する場合には通常使用されている溶解補助剤、
懸濁化剤、乳化剤、安定化剤、保存剤、等張剤等を適宜
添加してもよく、経口投与の場合には嬌味剤、芳香剤等
を加えてもよい。Specifically, the excipients include lactose, sucrose,
Glucose, starch, calcium carbonate or crystalline cellulose, etc .; binders such as methylcellulose, carboxymethylcellulose, hydroxypropylcellulose, gelatin or polyvinylpyrrolidone; disintegrants: carboxymethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, starch, sodium alginate, agar powder or lauryl Lubricants such as sodium sulfate include talc, magnesium stearate and macrogol. Cocoa butter, macrogol, methylcellulose, or the like can be used as a suppository base. In addition, when prepared as a liquid or emulsion, suspension injection, a solubilizing agent usually used,
Suspending agents, emulsifiers, stabilizers, preservatives, isotonic agents and the like may be appropriately added, and in the case of oral administration, a flavoring agent, a fragrance and the like may be added.
【0026】キマーゼ阻害剤としての投与量は、患者の
年齢、体重、投与経路、病気の種類や程度等を考慮した
上で設定することが望ましいが、ヒトへ経口的に投与す
る場合には、成人に対して通常1μg〜1000mg/
kg/日を1回〜数回に分けて投与すればよい。また、
非経口的に投与する場合には、投与経路により大きく異
なるが、通常、0.1μg〜100mg/kg/日を1
回〜数回に分けて投与すればよい。抗真菌剤としての投
与量も、同様に患者の年齢、体重、投与経路、病気の種
類や程度等を考慮した上で設定することが望ましいが、
ヒトへ経口的に投与する場合には、成人に対して通常1
μg〜200mg/kg/日、非経口的に投与する場合
には、0.1μg〜20mg/kg/日を各々1回〜数
回に分けて投与すればよい。The dose of the chymase inhibitor is desirably determined in consideration of the patient's age, body weight, administration route, type and degree of disease, and the like. Usually 1 μg to 1000 mg /
The dose may be administered once to several times per kg / day. Also,
When administered parenterally, 0.1 μg to 100 mg / kg / day usually varies depending on the administration route.
It may be administered in one to several doses. The dosage as an antifungal agent is also preferably set in consideration of the patient's age, weight, administration route, type and degree of disease, etc.
When administered orally to humans, the dose is usually 1
In the case of parenteral administration of μg to 200 mg / kg / day, 0.1 μg to 20 mg / kg / day may be administered once to several times each.
【0027】[0027]
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳しく
説明するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。実施例1 化合物(I−A)の生産(1) (1)発酵工程 馬鈴薯200gを煮沸して得た煮汁1000mlにグル
コース10gと寒天15gを加えて滅菌後、プラスチッ
クシャーレに分注して寒天平板とした。これにスタキボ
トリス パルビスポラ ヒューズ RF−10131を
塗布し、28℃で10日間培養を行った。得られたシャ
ーレ20枚に生理食塩水500mlを加えて、寒天の入
ったまま粉砕して菌液を調製した。この菌液8mlづつ
を121℃、30分間オートクレーブ滅菌した玄米培地
(玄米25g,デイフコイーストエキス0.25g、水
道水50ml)を含む500ml容量のマイヤーフラス
コ96本に接種し、28℃で26日間静置培養した。EXAMPLES The present invention will be described in more detail with reference to the following Examples, but it should not be construed that the present invention is limited thereto. Example 1 Production of Compound (IA) (1) (1) Fermentation Step To 200 ml of broth obtained by boiling 200 g of potato, 10 g of glucose and 15 g of agar were added and sterilized. And This was coated with Stachybotrys parvispora fuse RF-10131 and cultured at 28 ° C. for 10 days. 500 ml of physiological saline was added to the 20 obtained Petri dishes, and the mixture was pulverized while containing agar to prepare a bacterial solution. Each 8 ml of this bacterial solution was inoculated into 96 500 ml Mayer flasks containing brown rice medium (brown rice 25 g, Difco yeast extract 0.25 g, tap water 50 ml) autoclaved at 121 ° C. for 30 minutes, and incubated at 28 ° C. for 26 days. Stationary culture was performed.
【0028】(2)分離工程 発酵工程によって得られた各マイヤーフラスコ中の発酵
物を集めてアセトン40Lを加え撹拌抽出した。吸引濾
過し、アセトンを含む瀘液部を減圧下溶媒留去し残渣の
水層を酢酸エチル15Lで抽出する。酢酸エチル層を濃
縮乾固し粗分画(94g)を得た。この粗分画の一部
(40g)をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(メ
ルクキーゼルゲル 60,180g,230〜400メ
ッシュ、トルエン:アセトン(9:1))で精製した。
トルエン:アセトン(9:1)を合計1,800mlで
溶出し、最初の800mlを集めてA分画とし、2回分
を合わせて減圧下溶媒留去し、B分画(16.0g)を
得た。(2) Separation Step The fermented products in each of the Meyer flasks obtained in the fermentation step were collected, added with 40 L of acetone, and extracted with stirring. After suction filtration, the solvent in the filtrate containing acetone is distilled off under reduced pressure, and the aqueous layer of the residue is extracted with 15 L of ethyl acetate. The ethyl acetate layer was concentrated to dryness to obtain a crude fraction (94 g). A part (40 g) of this crude fraction was purified by silica gel column chromatography (Merck Kieselgel 60, 180 g, 230-400 mesh, toluene: acetone (9: 1)).
Toluene: acetone (9: 1) was eluted with a total of 1,800 ml, and the first 800 ml was collected to obtain an A fraction, and the two fractions were combined and evaporated under reduced pressure to obtain a B fraction (16.0 g). Was.
【0029】B分画は再度シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー(メルクキーゼルゲル60,120g,230
〜400メッシュ,クロロホルム)で精製し、C分画
(5.0g)を得た。更にシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー(メルクキーゼルゲル60,100g,230
〜400メッシュ,トルエン,トルエン:アセトニトリ
ル(97:3),(94:6))で精製した。トルエ
ン:アセトニトリル(97:3)、(94:6)溶出フ
ラクションを集めて減圧下溶媒留去し、D分画(1.8
1g)を得た。D分画(1.81g)はシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー(メルクキーゼルゲル 60,1
10g,230〜400メッシュ,クロロホルム)で精
製した。15グラムづつフラクションを集め、フラクシ
ョン69〜81を集めて減圧下溶媒留去し、残渣にジエ
チルエーテル(2ml)を加え再結晶し、化合物(I−
A)(307mg)を得た。この(I−A)中には少な
くとも化合物(I−a)および(I−e)の両方かいず
れか一方、(I−b)、(I−c)並びに(I−d)お
よび(I−f)の両方かいずれか一方の化合物が存在し
ていることを1HNMRで確認した。The B fraction was again subjected to silica gel column chromatography (Merck Kieselgel 60, 120 g, 230
-400 mesh, chloroform) to obtain a C fraction (5.0 g). Furthermore, silica gel column chromatography (Merck Kieselgel 60, 100 g, 230
Purified with 400400 mesh, toluene, toluene: acetonitrile (97: 3), (94: 6). The fractions eluted with toluene: acetonitrile (97: 3) and (94: 6) were collected, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the D fraction (1.8) was obtained.
1 g). The D fraction (1.81 g) was subjected to silica gel column chromatography (Merck Kieselgel 60, 1).
10 g, 230-400 mesh, chloroform). Fractions of 15 grams each were collected, and fractions 69 to 81 were collected and the solvent was distilled off under reduced pressure. Diethyl ether (2 ml) was added to the residue to recrystallize the compound (I-
A) (307 mg) was obtained. In this (IA), at least one of the compounds (Ia) and (Ie), (Ib), (Ic) and (Id) and (I- The presence of either or both compounds of f) was confirmed by 1 HNMR.
【0030】化合物(I−A) (物理化学的性状) 性状:無色針状晶 溶解性:クロロホルム、アセトン、酢酸エチル、メタノ
ールに可溶 n−ヘキサンにわずかに可溶 水に不溶 融点:105〜107℃ [α]D 23=±0°(c=0.5,メタノール) 元素分析:(C26H30O5として) 計算値;C:73.91%,H:7.16% 実測値;C:73.69%,H:7.22% FABMS,m/z:423[M+H]+ Compound (IA) (physicochemical properties) Properties: colorless needle crystals Solubility: soluble in chloroform, acetone, ethyl acetate, methanol Slightly soluble in n-hexane Insoluble in water Melting point: 105-105 107 ° C. [α] D 23 = ± 0 ° (c = 0.5, methanol) Elemental analysis: (as C 26 H 30 O 5 ) Calculated; C: 73.91%, H: 7.16% C: 73.69%, H: 7.22% FABMS, m / z: 423 [M + H] +
【0031】IR,λmax KBrcm-1:3520−34
00,1725,1696,1648,1629,16
02,1485,1275,1250,1080,10
54,967 UV(メタノール),nm(ε):222(31,70
0),255(sh,13,400),315(5,1
00)IR, λ max KBr cm -1 : 3520-34
00, 1725, 1696, 1648, 1629, 16
02, 1485, 1275, 1250, 1080, 10
54,967 UV (methanol), nm (ε): 222 (31, 70
0), 255 (sh, 13, 400), 315 (5, 1
00)
【0032】(I−a)および/または(I−e)1 HNMR(CDCl3,600MHz)δ:2.127
(3H,d,J=1.1Hz),3.801(1H,
d,J=10Hz),3.956(3H,s),5.6
28(1H,d,J=10Hz),6.455(1H,
q,J=1.1Hz),7.137(1H,d,J=
8.0Hz),7.292(1H,d,J=7.8H
z),7.438(1H,t,J=約8Hz)13 CNMR(CDCl3,150MHz)δ:20.5
1,55.92,58.17,75.73,78.9
1,116.13,116.86,130.39,13
1.51,136.73,143.29,157.4
1,163.54,194.33,194.83,20
9.51(Ia) and / or (Ie) 1 H NMR (CDCl 3 , 600 MHz) δ: 2.127
(3H, d, J = 1.1 Hz), 3.801 (1H,
d, J = 10 Hz), 3.956 (3H, s), 5.6
28 (1H, d, J = 10 Hz), 6.455 (1H,
q, J = 1.1 Hz), 7.137 (1H, d, J =
8.0Hz), 7.292 (1H, d, J = 7.8H)
z), 7.438 (1H, t, J = about 8 Hz) 13 CNMR (CDCl 3 , 150 MHz) δ: 20.5
1,55.92,58.17,75.73,78.9
1,116.13,116.86,130.39,13
1.51, 136.73, 143.29, 157.4
1, 163.54, 194.33, 194.83, 20
9.51
【0033】(I−b)1 HNMR(CDCl3,600MHz)δ:2.023
(3H,d,J=1.3Hz),3.939(3H,
s),6.325(1H,q,J=1.3Hz),6.
578(1H,d,J=7.9Hz),7.016(1
H,d,J=7.8Hz),7.537(1H,t,J
=約8Hz),10.392(1H,s)13 CNMR(CDCl3,150MHz)δ:20.3
0,55.75,58.36,110.23,111.
68,117.24,121.83,122.40,1
35.18,142.82,161.38,166.1
7,183.75,188.44,197.40,20
1.21(Ib) 1 H NMR (CDCl 3 , 600 MHz) δ: 2.023
(3H, d, J = 1.3 Hz), 3.939 (3H,
s), 6.325 (1H, q, J = 1.3 Hz), 6.
578 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.016 (1
H, d, J = 7.8 Hz), 7.537 (1H, t, J)
= About 8 Hz), 10.392 (1H, s) 13 C NMR (CDCl 3 , 150 MHz) δ: 20.3
0, 55.75, 58.36, 110.23, 111.
68, 117.24, 121.83, 122.40, 1
35.18, 142.82, 161.38, 166.1
7, 183.75, 188.44, 197.40, 20
1.21
【0034】(I−d)および/または(I−f)1 HNMR(CDCl3,600MHz)δ:2.117
(3H,d,J=1.1Hz),3.332(1H,
d,J=11Hz),3.967(3H,s),5.9
74(1H,d,J=11Hz),6.453(1H,
q,J=1.1Hz),7.147(1H,t,J=約
8Hz),7.259(1H,d,J=約8Hz),
7.428(1H,t,J=約8Hz)13 CNMR(CDCl3,150MHz)δ:20.5
1,55.84,58.76,73.03,80.6
3,116.27,116.99,129.48,13
1.42,136.09,143.29,157.4
5,162.04,191.82,193.31,20
8.63(Id) and / or (If) 1 H NMR (CDCl 3 , 600 MHz) δ: 2.117
(3H, d, J = 1.1 Hz), 3.332 (1H,
d, J = 11 Hz), 3.967 (3H, s), 5.9
74 (1H, d, J = 11 Hz), 6.453 (1H,
q, J = 1.1 Hz), 7.147 (1H, t, J = about 8 Hz), 7.259 (1H, d, J = about 8 Hz),
7.428 (1H, t, J = about 8 Hz) 13 CNMR (CDCl 3 , 150 MHz) δ: 20.5
1,55.84,58.76,73.03,80.6
3,116.27,116.99,129.48,13
1.42, 136.09, 143.29, 157.4
5,162.04, 191.82, 193.31, 20
8.63
【0035】(I−c)1 HNMR(CDCl3,600MHz)δ:1.897
(3H,d,J=1.3Hz),3.945(3H,
s),5.936(1H,d,J=1.3Hz),6.
663(1H,q,J=約8Hz),7.032(1
H,d,J=7.8Hz),7.556(1H,t,J
=約8Hz),10.390(1H,s)13 CNMR(CDCl3,150MHz)δ:18.4
5,53.05,55.84,111.91,113.
97,117.31,122.09,129.68,1
35.43,142.44,154.83,161.3
8,182.73,188.51,195.84,20
1.40(Ic) 1 H NMR (CDCl 3 , 600 MHz) δ: 1.897
(3H, d, J = 1.3 Hz), 3.945 (3H,
s), 5.936 (1H, d, J = 1.3 Hz), 6.
663 (1H, q, J = about 8 Hz), 7.032 (1
H, d, J = 7.8 Hz), 7.556 (1H, t, J)
= About 8 Hz), 10.390 (1H, s) 13 C NMR (CDCl 3 , 150 MHz) δ: 18.4
5, 53.05, 55.84, 111.91, 113.
97, 117.31, 122.09, 129.68, 1
35.43, 142.44, 154.83, 161.3
8, 182.73, 188.51, 195.84, 20
1.40
【0036】上記の他、次のシグナルが観測される。1 HNMR(CDCl3,600MHz)δ:1.466
(br.s−like),1.539(br.s−li
ke),1.566(br.s−like),1.57
2(br.s−like),1.617(br.s−l
ike),1.644(br.s−like),1.6
56(br.s−like),1.702(br.s−
like),2.20−2.92(m),4.67−
5.05(m)13 CNMR(CDCl3,150MHz)δ:17.8
6,17.89,17.99,18.04,25.7
6,25.81,25.88,34.95,35.6
9,36.42,38.00,38.34,38.7
4,116.28,117.28,117.51,11
7.98,118.65,119.10,134.4
1,134.72,134.93,137.50,13
7.55In addition to the above, the following signals are observed. 1 H NMR (CDCl 3 , 600 MHz) δ: 1.466
(Br.s-like), 1.539 (br.s-li
ke), 1.566 (br. s-like), 1.57
2 (br.s-like), 1.617 (br.s-l)
ike), 1.644 (br.s-like), 1.6
56 (br.s-like), 1.702 (br.s-like)
like), 2.20-2.92 (m), 4.67-
5.05 (m) 13 C NMR (CDCl 3 , 150 MHz) δ: 17.8
6, 17.89, 17.99, 18.04, 25.7
6,25.81,25.88,34.95,35.6
9, 36.42, 38.00, 38.34, 38.7
4,116.28,117.28,117.51,11
7.98, 118.65, 119.10, 134.4
1,134.72,134.93,137.50,13
7.55
【0037】実施例2 化合物(I−A)の生産(2) 馬鈴薯200gに水1Lを加え煮沸後ガーゼでろ過した
液にグルコース10gと寒天15gを加えてPG寒天平
板培地を調製した。そこへスタキボトリス パルビスポ
ラ ヒューズ RF−10131を塗布し、28℃、1
4日間培養した。全面に生育した寒天平板を内径6mm
のステンレスパイプで打ち抜き、アガーピースとした。
12個のアガーピースを生理食塩水中で砕いて、グルコ
ース2%、ポリペプトン(日本製薬製)1%、肉エキス
(Difco製)0.3%、酵母エキス(Difco
製)0.2%、食塩0.1%からなる培地800mlを
入れた2Lマイヤーフラスコに植菌した。植菌したフラ
スコを28℃で毎分180回転で4日間培養し種菌とし
た。馬鈴薯デンプン4%、CA−1(粉末―日本クレア
製)0.5%、アデカノールLG−121(旭電化工業
製)0.03%からなるPC培地30Lを含む50L容
ジャーファーメンターに、上記種菌を植菌し、28℃で
毎分60回転、毎分20Lの通気下で14日間培養し
た。 Example 2 Production of Compound (IA) (2) 1 g of water was added to 200 g of potato, and after boiling, 10 g of glucose and 15 g of agar were added to a solution filtered with gauze to prepare a PG agar plate medium. Then apply Stachybotrys Parvispora fuse RF-10131 and apply at 28 ° C, 1
Cultured for 4 days. Agar plates grown on the entire surface are 6 mm in inner diameter.
A stainless steel pipe was used to make an agar piece.
Twelve agar pieces were crushed in physiological saline, and glucose 2%, polypeptone (Nippon Pharmaceutical) 1%, meat extract (Difco) 0.3%, yeast extract (Difco)
(Manufactured by Co., Ltd.) and a 2 L Meyer flask containing 800 ml of a medium containing 0.1% of sodium chloride. The inoculated flask was cultured at 28 ° C. at 180 rotations per minute for 4 days to obtain a seed. The above-described inoculum was placed in a 50-L jar fermenter containing 30 L of a PC medium consisting of 4% of potato starch, 0.5% of CA-1 (powder-made by Nippon Clea) and 0.03% of adecanol LG-121 (made by Asahi Denka Kogyo). Was inoculated and cultured at 28 ° C. for 60 days at 60 rotations per minute under aeration at 20 L / min for 14 days.
【0038】同様にもう1台のジャーファーメンター培
養を行い、計2台から回収した発酵終了液38Lを遠心
濾過し水層と菌体とに分離した。菌体をアセトン10L
で抽出後、濾過しアセトンを減圧下留去して水層4Lを
得た。これに水4Lを加えた後酢酸エチル8Lで抽出
し、酢酸エチル層を減圧下濃縮して粗物質96gを得
た。この粗物質をトルエン200mLに溶解してシリカ
ゲル(70〜230メッシュ;メルク製)1kgを充填
したφ12cmのカラムに付し、トルエンとアセトニト
リルの混液(95:5)で溶出し400mlずつ分画し
た。(I−A)含有分画8〜14を集めて減圧下濃縮し
た。油状物質をジエチルエーテルから晶析して(I−
A)結晶2.61gを得た。Similarly, another jar fermenter was cultured, and 38 L of the fermentation end solution collected from the two jar fermenters was centrifugally filtered to separate an aqueous layer and cells. 10 L of acetone
After filtration, acetone was distilled off under reduced pressure to obtain 4 L of an aqueous layer. 4 L of water was added thereto, followed by extraction with 8 L of ethyl acetate. The ethyl acetate layer was concentrated under reduced pressure to obtain 96 g of a crude substance. This crude substance was dissolved in 200 mL of toluene, applied to a φ12 cm column packed with 1 kg of silica gel (70 to 230 mesh, manufactured by Merck), eluted with a mixed solution of toluene and acetonitrile (95: 5), and fractionated by 400 mL. Fractions 8 to 14 containing (IA) were collected and concentrated under reduced pressure. The oil was crystallized from diethyl ether (I-
A) 2.61 g of crystals were obtained.
【0039】実施例3 化合物(I−g)の製造 (I−A)80mg(0.19mmole)のアセトニ
トリル(12ml)溶液に、0.05ミリモル炭酸水素
アンモニウム水溶液(4ml)を加え、室温下0.5時
間攪拌した。アセトニトリルを減圧下留去し、得られた
残さに、ジエチルエーテル(2ml)を加え再結晶を行
い、化合物(I−g)54mgを得た。 Example 3 Preparation of Compound (Ig) To a solution of 80 mg (0.19 mmole ) of (IA) in acetonitrile (12 ml) was added a 0.05 mmol aqueous ammonium bicarbonate solution (4 ml). Stirred for .5 hours. Acetonitrile was distilled off under reduced pressure, and diethyl ether (2 ml) was added to the obtained residue, followed by recrystallization to obtain 54 mg of a compound (Ig).
【0040】外観:黄色結晶 溶解性:酢酸エチル、アセトン、クロロホルム、メタノ
ール、エタノールに可溶 n−ヘキサンにわずかに可溶 水に不溶 融点:132〜135℃(分解) [α]D 25=±0°(c=0.5,メタノール) 元素分析:C26H31NO4として 計算値;C:74.08%,H:7.41%,N:3.32% 実測値;C:73.88%,H:7.35%,N:3.37% FABMS,m/z:422[M+H]+ HR−FABMS,m/z:C26H32NO4として 計算値;422.2332 実測値;422.2331[M+H]+ Appearance: yellow crystals Solubility: soluble in ethyl acetate, acetone, chloroform, methanol, ethanol Slightly soluble in n-hexane Insoluble in water Melting point: 132-135 ° C. (decomposition) [α] D 25 = ± 0 ° (c = 0.5, methanol) Elemental analysis: Calculated for C 26 H 31 NO 4 ; C: 74.08%, H: 7.41%, N: 3.32% Found: C: 73 .88%, H: 7.35%, N: 3.37% FABMS, m / z: 422 [M + H] + HR-FABMS, m / z: C 26 H 32 NO 4 Calculated; 422.2332 Value; 422.2331 [M + H] +
【0041】IR (KBr)cm-1:3287,16
57,1640,1611,1545,1524,14
25,1273,1228,1053 UV(MeOH),λmaxnm(E1% 1cm):216(6
78),276(226),368(356)1 HNMR(CDCl3,300MHz)δ:1.52
(6H,s−like),1.56(6H,s−lik
e),1.94(3H,d,J=1.2Hz),2.3
1(2H,m),2.82(2H,m),3.94(3
H,s),4.80(2H,t−like),6.23
(1H,d,J=1.2Hz),6.27(1H,b
r.s),7.06(1H,d,J=7.8Hz),
7.43(1H,t−like,J=8.1Hz),
8.40(1H,br.s),12.92(1H,b
r.s)13 CNMR(CDCl3,50MHz)δ:18.0
6,19.21,25.77,36.94,37.0
6,55.80,56.46,82.79,114.5
1,118.95,122.61,129.65,13
1.38,131.54,133.87,135.7
8,155.13,166.29IR (KBr) cm -1 : 3287,16
57, 1640, 1611, 1545, 1524, 14
25, 1273, 1228, 1053 UV (MeOH), λ max nm (E 1% 1 cm ): 216 (6
78), 276 (226), 368 (356) 1 H NMR (CDCl 3 , 300 MHz) δ: 1.52
(6H, s-like), 1.56 (6H, s-like)
e), 1.94 (3H, d, J = 1.2 Hz), 2.3.
1 (2H, m), 2.82 (2H, m), 3.94 (3
H, s), 4.80 (2H, t-like), 6.23.
(1H, d, J = 1.2 Hz), 6.27 (1H, b
r. s), 7.06 (1H, d, J = 7.8 Hz),
7.43 (1H, t-like, J = 8.1 Hz),
8.40 (1H, br.s), 12.92 (1H, b.
r. s) 13 C NMR (CDCl 3 , 50 MHz) δ: 18.0
6, 19.21, 25.77, 36.94, 37.0
6,55.80,56.46,82.79,114.5
1,118.95,122.61,129.65,13
1.38, 131.54, 133.87, 135.7
8,155.13,166.29
【0042】以上のデータおよびX線解析より、(I−
g)の構造は以下の通りと推定される。From the above data and X-ray analysis, (I-
The structure of g) is assumed to be as follows.
【化4】 Embedded image
【0043】試験例1 キマーゼ酵素阻害活性 (1)化合物(I−A)の調製 化合物(I−A)はジメチルスルフォキサイド(DMS
O)を用いて10mg/mlとなるように溶解した。活
性測定のために持ち込むDMSO濃度は1%とした。 (2)キマーゼ阻害活性の測定 緩衝液(0.1MTris−HCl,1.8MNaCl
pH8.0)中に、DMSOに溶解した化合物(I−
A)と浦田らの方法(ジャーナル・オブ・バイオロジカ
ル・ケミストリー(Journal of Biolo
gical Chemistry)第265巻、第22
348頁〜22357頁)に準じて精製したヒトキマー
ゼを加え37℃で30分間処理した後、基質としてSu
c−Ala−Ala−Pro−Phe−pNA(バッケ
ム社(BACHEM Feinchemikalien
AG)製)を0.5mMになるように添加し、37℃
で酵素反応を行なった。反応後、溶液の吸光度(405
nm)を測定し、その阻害率を算出した。 (3)結果 化合物(I−A)のヒトキマーゼ阻害活性の50%阻害
濃度(IC50)は1.8μMであり、キマーゼ阻害活性
を有していることがわかった。 Test Example 1 Chymase Enzyme Inhibitory Activity (1) Preparation of Compound (IA) Compound (IA) was prepared from dimethyl sulfoxide (DMS).
O) to give a concentration of 10 mg / ml. The DMSO concentration brought in for the activity measurement was 1%. (2) Measurement of chymase inhibitory activity Buffer solution (0.1 M Tris-HCl, 1.8 M NaCl
Compound (I-) dissolved in DMSO in pH 8.0)
A) and the method of Urata et al. (Journal of Biological Chemistry (Journal of Biolo)
medical Chemistry) Vol. 265, No. 22
348 to 22357), and treated at 37 ° C. for 30 minutes.
c-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA (BACHEM Feinchemikalen
AG)) at a concentration of 0.5 mM.
The enzyme reaction was carried out. After the reaction, the absorbance of the solution (405
nm) was measured, and the inhibition rate was calculated. (3) Results The compound (IA) had a 50% inhibitory concentration (IC 50 ) of human chymase inhibitory activity of 1.8 μM, indicating that the compound (IA) had chymase inhibitory activity.
【0044】試験例2 抗真菌活性 (1)化合物(I)の調製方法 本発明化合物は、すべてジメチルスルホキシド(DMS
O)を用いて10mg/mlとなるように溶解した。 (2)活性の測定 カンジダ・アルビカンス Ca−15(Candida
albicans)、アスペルギルス フミガタス
MA(Aspergillus fumigatus
MA)の凍結保存菌液(10%ウシ胎児血清を添加した
サブローデキストロースブロス(Sabouraud
dextrose broth)に約2×108cfu
/mlになるように懸濁し、−80℃に保存したもの)
をイースト・ナイトロジェン・ベース(Yeast N
itrogen Base;YNB,Difco社製)
培地で1×105cfu/mlに希釈し、96穴マイク
ロプレートの各ウェルに100μlずつ分注した。本発
明化合物をこの菌液で希釈して2倍希釈系列を作成し、
増殖抑制を調べた。 Test Example 2 Antifungal Activity (1) Method for Preparing Compound (I) The compounds of the present invention were all prepared using dimethyl sulfoxide (DMS).
O) to give a concentration of 10 mg / ml. (2) Measurement of activity Candida albicans Ca-15 ( Candida
albicans ), Aspergillus fumigatus
MA ( Aspergillus fumigatus)
MA) (Sabouraud dextrose broth supplemented with 10% fetal bovine serum (Sabouraud)
about 2 × 10 8 cfu
/ Ml and stored at -80 ° C)
To East Nitrogen Base (Yeast N)
(Itrogen Base; YNB, manufactured by Difco)
It was diluted to 1 × 10 5 cfu / ml with the medium, and 100 μl was dispensed into each well of a 96-well microplate. The compound of the present invention is diluted with this bacterial solution to prepare a two-fold dilution series,
Growth inhibition was examined.
【0045】(3)培養条件と結果の判定 増殖抑制の判定は30℃で24時間培養した後、オート
リーダー(BIO−RAD)を使用して595nmの吸
光度を測定し、本発明化合物非添加時の吸光度の50%
以下に菌の増殖を抑制している濃度を最小有効濃度(M
IC50)として表わした。結果を表1に示す。(3) Determination of culture conditions and results The determination of growth inhibition was determined by culturing at 30 ° C. for 24 hours and then measuring the absorbance at 595 nm using an autoreader (BIO-RAD). 50% of the absorbance of
The concentration that inhibits the growth of bacteria is defined below as the minimum effective concentration (M
(IC 50 ). Table 1 shows the results.
【0046】[0046]
【表1】 表1より、本発明化合物(I)が抗真菌活性を有するこ
とがわかる。[Table 1] Table 1 shows that the compound (I) of the present invention has antifungal activity.
【0047】製剤例1 化合物(I−A) 3mg ゼラチン 150mg フェノール 4mg 上記成分を適量の注射用精製水に溶解し、注射溶液を調
整した。 Formulation Example 1 Compound (IA) 3 mg Gelatin 150 mg Phenol 4 mg The above components were dissolved in an appropriate amount of purified water for injection to prepare an injection solution.
【0048】[0048]
【発明の効果】以上の試験例から明らかなように、化合
物(I)はキマーゼ阻害活性および/または抗真菌活性
を示す。従って、化合物(I)、その製薬上許容される
塩またはそれらの水和物は、慢性心血管障害治療剤、ア
レルギー性疾患治療剤および/または抗真菌剤として非
常に有用である。As is clear from the above test examples, compound (I) exhibits chymase inhibitory activity and / or antifungal activity. Therefore, compound (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof is very useful as a therapeutic agent for chronic cardiovascular disorders, a therapeutic agent for allergic diseases and / or an antifungal agent.
【図1】化合物(I−A)のIRスペクトルを示すグラ
フ。FIG. 1 is a graph showing an IR spectrum of compound (IA).
【図2】化合物(I−A)の1HNMRスペクトルを示
すグラフ。FIG. 2 is a graph showing 1 HNMR spectrum of compound (IA).
【図3】化合物(I−A)の13CNMRスペクトルを示
すグラフ。FIG. 3 is a graph showing a 13 C NMR spectrum of compound (IA).
【図4】化合物(I−e)のIRスペクトルを示すグラ
フ。FIG. 4 is a graph showing an IR spectrum of compound (Ie).
【図5】化合物(I−g)の1HNMRスペクトルを示
すグラフ。FIG. 5 is a graph showing 1 HNMR spectrum of a compound (Ig).
【図6】化合物(I−g)の13CNMRスペクトルを示
すグラフ。FIG. 6 is a graph showing a 13 C NMR spectrum of compound (Ig).
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 FI C12R 1:645) ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code FI C12R 1: 645)
Claims (12)
それらをアンモニア水またはアンモニウム塩で処理した
化合物、それらの製薬上許容される塩またはそれらの水
和物。1. A compound of the formula (Ia): In the compound represented by, its tautomer, its stereoisomer,
Compounds obtained by treating them with aqueous ammonia or ammonium salts, pharmaceutically acceptable salts thereof, or hydrates thereof.
化合物、その互変異性体、その立体異性体、それらの製
薬上許容される塩またはそれらの水和物。2. A compound represented by the formula (Ia) according to claim 1, a tautomer, a stereoisomer, a pharmaceutically acceptable salt or a hydrate thereof.
モニウム塩で処理した化合物が以下の物性を有するもの
である化合物(I−g)、その製薬上許容される塩また
はそれらの水和物。 融点:132〜135℃(分解) [α]D 25=±0°(c=0.5,メタノール) 元素分析実測値:C 73.88 %, H 7.35 %, N 3.37 % FABMS, m/z ; 422 HR-FABMS, m/z 実測値:422.2331 IR (KBr) cm-1; 3287, 1657, 1640, 1611, 1545, 1524,
1425, 1273, 1228,1053 UV (MeOH),λmax nm (E1% 1cm); 216 (678), 276 (22
6), 368 (356)1 H NMR (CDCl3, 300 MHz)δ: 1.52 (6H, s-like), 1.56
(6H, s-like), 1.94 (3H,d, J=1.2 Hz),2.31 (2H,m),
2.82 (2H, m), 3.94 (3H, s), 4.80 (2H, t-like),6.23
(1H, d,J=1.2 Hz), 6.27 (1H, br.s) , 7.06 (1H, d,
J=7.8 Hz),7.43 (1H,t-like, J=8.1 Hz),8.40 (1H, br.
s), 12.92 (1H, br.s)13 C NMR (CDCl3, 50 MHz)δ: 18.06, 19.21, 25.77, 3
6.94, 37.06, 55.80, 56.46, 82.79,114.51, 118.95, 1
22.61, 129.65, 131.38, 131.54, 133.87, 135.78,155.
13, 166.293. A compound (Ig), a pharmaceutically acceptable salt or a hydrate thereof, wherein the compound treated with the aqueous ammonia or ammonium salt according to claim 1 has the following physical properties. Melting point: 132-135 ° C (decomposition) [α] D 25 = ± 0 ° (c = 0.5, methanol) Elemental analysis: C 73.88%, H 7.35%, N 3.37% FABMS, m / z; 422 HR- FABMS, m / z Found: 422.2331 IR (KBr) cm -1 ; 3287, 1657, 1640, 1611, 1545, 1524,
1425, 1273, 1228,1053 UV (MeOH), λ max nm (E 1% 1cm ); 216 (678), 276 (22
6), 368 (356) 1 H NMR (CDCl 3 , 300 MHz) δ: 1.52 (6H, s-like), 1.56
(6H, s-like), 1.94 (3H, d, J = 1.2 Hz), 2.31 (2H, m),
2.82 (2H, m), 3.94 (3H, s), 4.80 (2H, t-like), 6.23
(1H, d, J = 1.2 Hz), 6.27 (1H, br.s), 7.06 (1H, d,
J = 7.8 Hz), 7.43 (1H, t-like, J = 8.1 Hz), 8.40 (1H, br.
s), 12.92 (1H, br.s) 13 C NMR (CDCl 3 , 50 MHz) δ: 18.06, 19.21, 25.77, 3
6.94, 37.06, 55.80, 56.46, 82.79, 114.51, 118.95, 1
22.61, 129.65, 131.38, 131.54, 133.87, 135.78, 155.
13, 166.29
化合物、その互変異性体、その立体異性体、それらの製
薬上許容される塩またはそれらの水和物を含有すること
を特徴とする医薬組成物。4. It contains a compound represented by the formula (Ia) according to claim 1, a tautomer, a stereoisomer, a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof. A pharmaceutical composition comprising:
れる塩またはそれらの水和物を含有することを特徴とす
る医薬組成物。5. A pharmaceutical composition comprising the compound according to claim 3, a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof.
化合物、その互変異性体、その立体異性体、それらの製
薬上許容される塩またはそれらの水和物を含有すること
を特徴とするキマーゼ阻害剤。6. A compound represented by the formula (Ia) according to claim 1, a tautomer thereof, a stereoisomer thereof, a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof. A chymase inhibitor.
される塩またはそれらの水和物を含有することを特徴と
するキマーゼ阻害剤。7. A chymase inhibitor comprising the compound according to claim 3, a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof.
化合物、その互変異性体、その立体異性体、それらの製
薬上許容される塩またはそれらの水和物を含有すること
を特徴とする抗真菌剤。8. A compound represented by the formula (Ia) according to claim 1, a tautomer, a stereoisomer, a pharmaceutically acceptable salt or a hydrate thereof. An antifungal agent characterized by the following.
される塩またはそれらの水和物を含有することを特徴と
する抗真菌剤。9. An antifungal agent comprising the compound according to claim 3, a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof.
rys)属に属し、請求項1記載の式(I−a)で示さ
れる化合物、その互変異性体またはその立体異性体を産
生し得る微生物を培養し、得られた培養物から該化合
物、その互変異性体またはその立体異性体を採取するこ
とを特徴とする、請求項1記載の化合物、その互変異性
体、その立体異性体、それらの製薬上許容される塩また
はそれらの水和物の製造方法。10. Stachybotris ( Stachybotris)
lys ), and culturing a microorganism capable of producing a compound represented by the formula ( Ia ) according to claim 1, a tautomer or a stereoisomer thereof, and culturing the compound from the obtained culture. 2. The compound according to claim 1, wherein the tautomer or its stereoisomer is collected, the tautomer, its stereoisomer, their pharmaceutically acceptable salt or their hydration. Method of manufacturing a product.
achybotrysparvispora)に属し、
請求項1記載の式(I−a)で示される化合物、その互
変異性体またはその立体異性体を産生し得る微生物。11. Stachybotrys parvispora ( St)
achybotrysparvispora ),
A microorganism capable of producing the compound represented by the formula (Ia) according to claim 1, a tautomer or a stereoisomer thereof.
ーズ RF−10131(Stachybotrys
parvispora Hughes RF−1013
1)である請求項11記載の微生物。12. A stachybotrys Parvispora fuse RF-10131 ( Stachybotries)
parvispora Hughes RF-1013
The microorganism according to claim 11, which is 1).
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP9323078A JPH11158109A (en) | 1997-11-25 | 1997-11-25 | 2h-indene spiro-(3'-cyclohexene) compound |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP9323078A JPH11158109A (en) | 1997-11-25 | 1997-11-25 | 2h-indene spiro-(3'-cyclohexene) compound |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH11158109A true JPH11158109A (en) | 1999-06-15 |
Family
ID=18150848
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP9323078A Pending JPH11158109A (en) | 1997-11-25 | 1997-11-25 | 2h-indene spiro-(3'-cyclohexene) compound |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH11158109A (en) |
-
1997
- 1997-11-25 JP JP9323078A patent/JPH11158109A/en active Pending
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