JPH11148887A - Cutting method for organism sample as well as method and apparatus for collection of cut piece - Google Patents
Cutting method for organism sample as well as method and apparatus for collection of cut pieceInfo
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- JPH11148887A JPH11148887A JP9315642A JP31564297A JPH11148887A JP H11148887 A JPH11148887 A JP H11148887A JP 9315642 A JP9315642 A JP 9315642A JP 31564297 A JP31564297 A JP 31564297A JP H11148887 A JPH11148887 A JP H11148887A
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- G01N2001/2873—Cutting or cleaving
- G01N2001/2886—Laser cutting, e.g. tissue catapult
Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】この出願の発明は、生体組織
片、細胞、染色体および微生物等の生体サンプルを標的
位置で正確に切断する方法、この方法により切断された
生体サンプル切断片を簡便に回収する方法、およびこれ
らの方法を実行するための装置に関するものである。The present invention relates to a method for accurately cutting a biological sample such as a biological tissue piece, a cell, a chromosome or a microorganism at a target position, and to easily collect a biological sample cut piece cut by this method. And methods for performing these methods.
【０００２】[0002]
【従来の技術】生体組織片、細胞、染色体および微生物
等の生体サンプルを標的位置で切断する方法としては、
サンプルに直接レーザー光を照射する方法が知られてい
る（例えば、Am. J. Pathology 15(1):63-67, 1997; Ge
nomics 11(2):364-373, 1991）。そして、そのようにし
て切断した生体サンプルの切断片を回収する方法として
は、以下が知られている。 (1) マイクロマニュピレータとマイクロニードルを組み
合わせて切断片を掻き取る方法（Am. J. Pathology 146
(3):620-625, 1995 ）。 (2) マイクロマニュピレータとマイクロニードルを組み
合わせることにより、マイクロニードルで切断片（特
に、細胞内物質）を吸引する方法（Pro. Natl.Acad. Sc
i. USA 89:3010-3014, 1992 ）。 (3) 生体サンプルの標的領域部位にリザーバーを作成
し、このリザーバー内にプロテアーゼや界面活性剤を含
んだ溶液を添加して切断片を消化して回収する方法。 (4) 生体サンプルをフィルムに貼り付け、標的部位を切
断した後、フィルムを剥離することにより切断片を回収
する方法（Science 274:998-1001, 1996）。2. Description of the Related Art As a method for cutting a biological sample such as a biological tissue piece, a cell, a chromosome, and a microorganism at a target position,
A method of directly irradiating a sample with laser light is known (for example, Am. J. Pathology 15 (1): 63-67, 1997; Ge).
nomics 11 (2): 364-373, 1991). The following is known as a method for collecting the cut pieces of the biological sample cut in such a manner. (1) Method of scraping a cut piece by combining a micromanipulator and a microneedle (Am. J. Pathology 146
(3): 620-625, 1995). (2) A method of aspirating cut pieces (particularly intracellular substances) with a microneedle by combining a micromanipulator and a microneedle (Pro. Natl. Acad. Sc.
i. USA 89: 3010-3014, 1992). (3) A method in which a reservoir is created at a target region of a biological sample, and a solution containing a protease or a surfactant is added to the reservoir to digest and collect the cut pieces. (4) A method in which a biological sample is attached to a film, a target site is cut, and then the film is peeled off to collect a cut piece (Science 274: 998-1001, 1996).
【０００３】[0003]
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の
とおりの従来の切断片回収方法は、以下のような問題点
を有していた。(1)(2)の方法は、実験者に熟練した手技
を要求し、また生体サンプルの大量処理には不向きであ
る。However, the above-mentioned conventional method for collecting cut pieces has the following problems. The methods (1) and (2) require skilled techniques for the experimenter and are not suitable for mass processing of biological samples.
【０００４】(3) の方法は、切断片以外の生体サンプル
残存領域を何らかの手段で除去する必要があるが、この
残存領域を完全に除去することは困難であり、取り残し
た部分が後の分析時のバックグラウンドとなり、分析の
精度を損なう危険がある。さらに、切断標的部位が微細
な場合には、微少なリザーバーを作成することが困難で
ある。In the method (3), it is necessary to remove the remaining region of the biological sample other than the cut pieces by some means. However, it is difficult to completely remove the remaining region, and the remaining portion is analyzed later. There is a danger that the accuracy of the analysis may be impaired due to the background. Furthermore, when the cleavage target site is minute, it is difficult to create a minute reservoir.
【０００５】(4) の方法（Laser Capture Dissection
法）は、切断後にフィルムを剥離し、その部分をマイク
ロチューブ等の分析用容器に移し変えるという工程を必
須とするため、作業が煩雑である。この出願の発明は、
以上のとおりの事情に鑑みてなされたものであって、簡
便で迅速かつ正確に生体サンプル切断片を回収する方法
と、この回収を可能とする生体サンプル切断方法、並び
にこれらの方法を実行するための装置を提供することを
目的としている。The method (4) (Laser Capture Dissection)
Method) requires a process of peeling the film after cutting, and transferring the portion to an analytical container such as a microtube, so that the operation is complicated. The invention of this application is
In view of the circumstances as described above, a method for simply, quickly and accurately recovering a biological sample cut piece, a biological sample cutting method enabling this recovery, and a method for executing these methods The purpose of the present invention is to provide a device.
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】この出願は、上記の課題
を解決するための発明として、顕微鏡観察下にある生体
サンプルを光照射によって切断する方法であって、生体
サンプルを透明プレートの片面に保持し、生体サンプル
保持面の反対側から透明プレートを通して光を照射する
ことによって生体サンプルの目的箇所を切断することを
特徴とする生体サンプルの切断方法を提供する。SUMMARY OF THE INVENTION The present invention, as an invention for solving the above-mentioned problems, is a method for cutting a biological sample under microscopic observation by light irradiation, wherein the biological sample is placed on one surface of a transparent plate. A method for cutting a biological sample, comprising holding and irradiating light through a transparent plate from the opposite side of the biological sample holding surface to cut a target portion of the biological sample.
【０００７】またこの出願は、顕微鏡観察下にある透明
プレートの片面に保持された生体サンプルに対して直接
光を照射するか、または生体サンプル保持面の反対側か
ら透明プレートを通して光を照射することによって生体
サンプルの目的箇所を切断した後、生体サンプル保持面
の反対側から透明プレートを通して生体サンプル切断片
に光を照射することによって切断片を透明プレートより
剥離させ、透明プレートの下方にて切断片を回収するこ
とを特徴とする生体サンプル切断片の回収方法を提供す
る。[0007] This application also discloses a method of directly irradiating a biological sample held on one side of a transparent plate under microscopic observation with light, or irradiating light from the opposite side of the biological sample holding surface through the transparent plate. After cutting the target portion of the biological sample through the transparent sample from the opposite side of the biological sample holding surface, the cut piece is peeled off from the transparent plate by irradiating light to the biological sample cut piece, and the cut piece is placed below the transparent plate. And a method for collecting a cut piece of a biological sample.
【０００８】なお、上記の切断方法発明および切断片回
収方法発明においては、光がレーザー光であること、透
明プレートがスライドグラスであること、生体サンプル
が生体組織片、細胞、染色体または微生物であることを
好ましい態様としている。さらにこの出願は、光照射手
段を備えた顕微鏡装置であって、生体サンプルを保持す
る透明プレートと、このプレートの下方に生体サンプル
切断片の回収手段を備えていることを特徴とする生体サ
ンプル切断・回収装置を提供する。In the cutting method invention and the cut piece collecting method invention, the light is a laser beam, the transparent plate is a slide glass, and the biological sample is a biological tissue piece, a cell, a chromosome or a microorganism. This is a preferred embodiment. Further, the present application is a microscope apparatus provided with light irradiation means, comprising a transparent plate for holding a biological sample, and a means for collecting a biological sample cut piece below the plate.・ Provide a recovery device.
【０００９】この装置発明においては、光照射手段がレ
ーザー光照射装置であること、生体サンプル切断片の回
収手段が透明プレートと一定間隔で相対向するプレート
または透明プレートに配設された上部開口容器であるこ
とを好ましい態様としてもいる。In the apparatus according to the present invention, the light irradiating means is a laser light irradiating apparatus, and the means for recovering the cut piece of the biological sample is a plate opposed to the transparent plate at a predetermined interval or an upper opening container disposed on the transparent plate. Is also a preferred embodiment.
【００１０】[0010]
【発明の実施の形態】この発明の生体サンプル切断方法
は、例えば図１に例示したような装置構成によって実施
することができる。すなわち、下面に生体サンプル
（１）を保持した透明プレート（２）をステージ（３）
にセットし、顕微鏡のアイピース（４）またはＣＣＤカ
メラ（５）で撮像した画像をモニター（６）で確認しな
がら、透明プレート（２）を介して生体サンプル（１）
の標的領域を決定する。透明プレート（２）は、例えば
石英スライドグラスを用いることができる。また、生体
サンプル（１）を透明プレート（２）に保持するには、
例えば水分を含んだ状態の生体サンプル（１）をスライ
ドグラス上に貼り付け、乾燥させることによって行うこ
とができる。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The biological sample cutting method of the present invention can be carried out by, for example, an apparatus configuration as illustrated in FIG. That is, the transparent plate (2) holding the biological sample (1) on the lower surface is placed on the stage (3).
The biological sample (1) is inserted through the transparent plate (2) while checking the image taken by the microscope eyepiece (4) or the CCD camera (5) on the monitor (6).
Determine the target area of As the transparent plate (2), for example, a quartz slide glass can be used. In order to hold the biological sample (1) on the transparent plate (2),
For example, it can be performed by attaching a biological sample (1) containing water to a slide glass and drying it.
【００１１】そして、例えばレーザー光照射装置のよう
な光照射手段（７）より発した光を導光し、対物レンズ
（８）を通して光のビーム径を絞り、生体サンプル
（１）の標的切断部位に沿って照射し、切断する。照射
光は、例えばレーザービームの場合には、波長が 150〜
10.000nm程度であり、そのビーム径は、生体サンプル
（１）の種類や厚み等によって適宜に設定する必要があ
るが、通常は、１μｍ〜５０μｍ程度とすることができ
る。Then, the light emitted from the light irradiation means (7) such as a laser light irradiation device is guided, the beam diameter of the light is reduced through the objective lens (8), and the target cutting portion of the biological sample (1) is cut. Irradiate along and cut. The irradiation light has a wavelength of 150 to 150 in the case of a laser beam, for example.
The beam diameter is about 10.000 nm, and its beam diameter needs to be appropriately set depending on the type and thickness of the biological sample (1), but can be usually about 1 μm to 50 μm.
【００１２】なお、この図１では正立顕微鏡の構成例を
示したが、対物レンズ（８）がステージ（３）の下方に
位置する倒立顕微鏡によって装置を構成してもよい。そ
の場合には、生体サンプル（１）は透明プレート（２）
の上面に保持されることになる。次に、例えば図１に示
した装置構成により切断した生体サンプル切断片は、図
２に例示したような装置構成により回収することができ
る。すなわち、透明プレート（２）の下方に、もう一枚
のプレート（９）を配置する。そして、生体サンプル切
断片（１０）をカバーする範囲に光照射手段（７）から
光を照射して切断片（１０）を透明プレート（２）から
剥離させ、下方のプレート（９）に回収する。２枚のプ
レート（２）（９）は適宜な間隔で配置するようにし、
そのためには、図２に例示したようなスペーサー（１
１）を用いるのが好ましい。また、下方に配置する回収
用のプレート（９）は、透明プレート（２）と同様のス
ライドグラスを用いることができる。さらに、切断片
（１０）を透明プレート（２）から剥離させるための光
の強度は、生体サンプル（１）の種類や厚み、切断片
（１０）の大きさ等によって適宜とすることができる。
例えば、生体サンプル（１）が組織切片の場合には０．
５〜３．０Ｊ／ｃｍ2 程度、細胞の場合には０．１〜
３．０Ｊ／ｃｍ2 程度、染色体および微生物の場合には
０．０１〜３．０Ｊ／ｃｍ2 程度とすることができる。Although FIG. 1 shows an example of the configuration of the upright microscope, the apparatus may be configured by an inverted microscope in which the objective lens (8) is located below the stage (3). In that case, the biological sample (1) is a transparent plate (2)
Will be held on the upper surface of. Next, for example, a biological sample cut piece cut by the apparatus configuration illustrated in FIG. 1 can be collected by the apparatus configuration illustrated in FIG. 2. That is, another plate (9) is arranged below the transparent plate (2). Then, light is irradiated from the light irradiating means (7) to the area covering the biological sample cut piece (10) to peel the cut piece (10) from the transparent plate (2) and collect it on the lower plate (9). . The two plates (2) and (9) are arranged at appropriate intervals,
For this purpose, the spacer (1) as illustrated in FIG.
It is preferred to use 1). Further, as the collecting plate (9) disposed below, the same slide glass as the transparent plate (2) can be used. Furthermore, the intensity of light for peeling the cut piece (10) from the transparent plate (2) can be appropriately determined depending on the type and thickness of the biological sample (1), the size of the cut piece (10), and the like.
For example, if the biological sample (1) is a tissue section, 0.
About 5 to 3.0 J / cm 2 , 0.1 to 0.1
3.0 J / cm 2 or so, in the case of chromosomes and microorganisms can be 0.01~3.0J / cm 2 approximately.
【００１３】そして、このようにして下方のプレート
（９）上に回収した切断片（１０）は、図２に例示した
ように、マイクロマニュピレータに接続したマイクロニ
ードル（１２）等を用いることによって、マイクロチュ
ーブ等の分析用容器（１３）に移すことができる。その
際に、切断片（１０）を確実に容器（１３）に導入する
には、マイクロニードル（１２）の先端を折り取ってお
くようにしてもよい。Then, the cut piece (10) collected on the lower plate (9) in this way is, as illustrated in FIG. 2, by using a microneedle (12) connected to a micromanipulator and the like. The sample can be transferred to an analysis container (13) such as a microtube. At this time, in order to surely introduce the cut piece (10) into the container (13), the tip of the microneedle (12) may be broken off.
【００１４】図３は、この発明の別の切断片回収方法を
実施するための装置構成を例示した模式図である。すな
わち、この方法の場合には、生体サンプル（１）の切断
標的部位の下方に分析用容器（１３）を配置する。容器
（１３）は、生体サンプル（１）と軽く接触するか、も
しくは接触する直前の位置に配置すればよい。そして、
上記と同様に光照射して切断片をプレート（２）から剥
離させ、分析用容器（１３）中に回収する。この方法で
は、切断片（１０）を直接容器（１３）に回収すること
ができ、作業を簡略化することができる。FIG. 3 is a schematic view illustrating the configuration of an apparatus for carrying out another method for collecting cut pieces according to the present invention. That is, in the case of this method, the analysis container (13) is arranged below the cleavage target site of the biological sample (1). The container (13) may be lightly contacted with the biological sample (1) or may be arranged at a position immediately before the contact. And
The cut piece is peeled off from the plate (2) by irradiating light in the same manner as described above, and collected in the analysis container (13). In this method, the cut pieces (10) can be directly collected in the container (13), and the operation can be simplified.
【００１５】この発明の生体サンプル切断・回収装置
は、図１および図２に例示したように構成することがで
き、あるいは図１および図３に例示したような構成とす
ることもできるが、この発明の方法ならびに装置は以上
の例によって限定されるものではない。例えば、この発
明の切断片回収方法では、生体サンプルの切断は従来方
法と同様に、直接生体サンプルに光を照射するようにし
てもよい。例えば、倒立顕微鏡によって装置を構成した
場合には、透明プレートの下面に保持した生体サンプル
に対してステージ下方の対物レンズから光を直接照射し
て生体サンプルを切断し、次いで、ステージの上方に導
光した光を、透明プレートを通して切断片に照射して切
断片を透明プレートから剥離させ、下方の回収手段によ
り回収するようにしてもよい。The apparatus for cutting and recovering a biological sample according to the present invention can be configured as illustrated in FIGS. 1 and 2 or can be configured as illustrated in FIGS. 1 and 3. The method and apparatus of the invention are not limited by the above examples. For example, in the method for collecting cut pieces of the present invention, the biological sample may be cut directly by irradiating the biological sample with light, similarly to the conventional method. For example, when the apparatus is configured with an inverted microscope, the biological sample held on the lower surface of the transparent plate is directly irradiated with light from the objective lens below the stage to cut the biological sample, and then guided above the stage. The cut piece may be peeled from the transparent plate by irradiating the cut piece with the emitted light through the transparent plate, and the cut piece may be collected by the collecting means below.
【００１６】その他、細部についても様々な態様が可能
である。以下、非限定的な実施例を示して、この発明を
さらに詳細かつ具体的に説明する。[0016] In addition, various modes are possible for details. Hereinafter, the present invention will be described in more detail and specifically with reference to non-limiting examples.
【００１７】[0017]
実施例１ 図１に構成を示した装置により、マウス脳切片を切断し
た。先ず、６週齢のヌードマウスより、血液を生理食塩
水で環流した後、脳を外科的に取り出し、直後にＯ．
Ｃ．Ｔ Compound 中に包埋し、液体窒素中で凍結した。
凍結したマウス脳から、ミクロトームを用いて３０μｍ
厚の薄切片（１）を作成し、石英のスライドグラス
（２）に貼り付け、乾燥させた。Example 1 A mouse brain slice was cut by the apparatus shown in FIG. First, blood was refluxed from a 6-week-old nude mouse with physiological saline, and then the brain was surgically removed.
C. Embedded in T Compound and frozen in liquid nitrogen.
30 μm from a frozen mouse brain using a microtome
A thin section (1) was prepared, attached to a quartz slide glass (2), and dried.
【００１８】このスライドグラス（２）をステージ
（３）にセットし、薄切片（１）の像を顕微鏡観察して
切断部位を決定した。次いで、エキシマレーザー（Ａｒ
Ｆ）（７）より１９３ｎｍの光を導光し、反射対物レン
ズ（８）を通してビーム径を１０μｍに絞り、マウス脳
の薄切片（１）を５０μｍ×５０μｍの大きさで切断し
た。図４は、この切断の様子を示した顕微鏡写真であ
る。 実施例２ 図２に構成を示した装置により、実施例１で切断した薄
切片（１）の切断片（１０）を回収した。The slide glass (2) was set on the stage (3), and an image of the thin section (1) was observed under a microscope to determine a cut site. Next, an excimer laser (Ar
F) Light of 193 nm was guided from (7), the beam diameter was reduced to 10 μm through a reflective objective lens (8), and a thin slice (1) of the mouse brain was cut into a size of 50 μm × 50 μm. FIG. 4 is a micrograph showing the state of this cutting. Example 2 The cut piece (10) of the thin slice (1) cut in Example 1 was collected by the apparatus shown in FIG.
【００１９】スライドグラス（２）の下方に、スライド
グラス（９）を１００μｍ厚のスペーサー（１１）を介
して配置した。切断片（１０）の全体をカバーするよう
にレーザービームの照射範囲を調節し、約１．６Ｊ／ｃ
ｍ2 の強度の光を切断片（１０）に照射し、切断片（１
０）をスライドグラス（２）から剥離させた。図５は切
断片（１０）が剥離した後の薄切片（１）の顕微鏡写真
である。そして、図６に顕微鏡写真を示したように、剥
離した切断片（１０）を下方のスライドグラス（９）で
回収した。 実施例３ 図３に構成を示した装置により、実施例１で切断した薄
切片（１）の切断片（１０）を回収した。The slide glass (9) was arranged below the slide glass (2) via a spacer (11) having a thickness of 100 μm. The irradiation range of the laser beam was adjusted so as to cover the entire cut piece (10), and about 1.6 J / c.
The cut piece (10) is irradiated with light having an intensity of m 2 to cut the cut piece (1).
0) was peeled off from the slide glass (2). FIG. 5 is a micrograph of the thin section (1) after the section (10) was peeled off. Then, as shown in the micrograph in FIG. 6, the cut pieces (10) that were peeled off were collected with a lower slide glass (9). Example 3 The cut piece (10) of the thin section (1) cut in Example 1 was collected by the apparatus shown in FIG.
【００２０】スライドグラス（２）の下方にマイクロチ
ューブ（１３）を配置し、実施例２と同様にして約１．
６Ｊ／ｃｍ2 の強度の光を切断片（１０）に照射し、切
断片（１０）をスライドグラス（２）から剥離させ、マ
イクロチューブ（１３）に回収した。 試験例 実施例２および３で回収した切断片から定法に従いＤＮ
Ａを抽出し、そのＤＮＡ中に存在するGlyceraldehyde 3
-Phosphate Dehydrogenase(G3PDH) の配列をＰＣＲ増幅
した。A microtube (13) is arranged below the slide glass (2).
The cut piece (10) was irradiated with light having an intensity of 6 J / cm 2 , the cut piece (10) was peeled off from the slide glass (2), and collected in the microtube (13). Test Example DN from the cut pieces collected in Examples 2 and 3 according to a standard method.
A is extracted and Glyceraldehyde 3 present in the DNA is extracted.
-The sequence of Phosphate Dehydrogenase (G3PDH) was amplified by PCR.
【００２１】なお、実施例２でスライドグラス（９）上
に回収した切断片（１０）は、マイクロニードル（１
２）を用いて、予めマイクロチューブ（１３）に移し
た。先ず、各々マイクロチューブに回収された切断片を
消化するために、マイクロチューブに消化液（0.1mg/ml
のプロテーゼＫ＋0.01％ tween20）を加え、５５℃で３
時間反応させた。次いで、９５℃で１０分間処理するこ
とにより、酵素を失活させ、サンプル溶液とし、以下の
条件でＰＣＲを実施した。The cut piece (10) collected on the slide glass (9) in Example 2 was a microneedle (1).
It was previously transferred to microtube (13) using 2). First, a digestion solution (0.1 mg / ml) was added to a microtube in order to digest the cut pieces collected in each microtube.
Of prosthesis K + 0.01% tween 20) and add 3
Allowed to react for hours. Next, the enzyme was inactivated by treating at 95 ° C. for 10 minutes to prepare a sample solution, and PCR was performed under the following conditions.
【００２２】1)プライマー フォワード：TGAAGGTCGGTGTGAACGGATTTGGC リバース ：CATGTAGGCCATGAGGTCCACCAC 2)反応溶液組成 Ex Taqbuffer (x 10) 5 μl dNTP mix (200 μM each) 5 μl プライマー（各20μM) 0.5 μl template溶液 39 μl Ex Taq polymerase 1 unit 全量 50 μl 3)温度サイクル 95℃３分＋（94℃45秒＋60℃45秒＋72℃１分）×５０回
＋72℃７分 反応終了後、ＰＣＲ産物を２％アガロースゲル電気泳動
し、図７に示した電気泳動写真図を得た。この写真図か
らＤＮＡ断片のサイズを比較すると、コントロールと同
位置にＰＣＲ産物の主バンドが検出された。1) Primer forward: TGAAGGTCGGTGTGAACGGATTTGGC Reverse: CATGTAGGCCATGAGGTCCACCAC 2) Reaction solution composition Ex Taqbuffer (x 10) 5 μl dNTP mix (200 μM each) 5 μl primer (20 μM each) 0.5 μl template solution 39 μl Ex Taq polymerase 1 unit 3) Temperature cycle 95 ° C for 3 minutes + (94 ° C for 45 seconds + 60 ° C for 45 seconds + 72 ° C for 1 minute) × 50 times + 72 ° C for 7 minutes After completion of the reaction, the PCR product was subjected to 2% agarose gel electrophoresis, and FIG. Were obtained. Comparing the sizes of the DNA fragments from this photograph, the main band of the PCR product was detected at the same position as the control.
【００２３】以上の結果から、この発明の方法により切
断、回収した脳の微少切断片から、確実にＤＮＡが回収
可能であることが確認された。なお、この脳微少切断片
からは、定法に従い、ｍＲＮＡ等の核酸、酵素等のタン
パク質の回収も可能であった。From the above results, it was confirmed that DNA could be reliably recovered from the micro-section of the brain cut and recovered by the method of the present invention. In addition, it was possible to recover nucleic acids such as mRNA and proteins such as enzymes from the microsection of brain according to a standard method.
【００２４】[0024]
【発明の効果】以上詳しく説明したとおり、この出願の
発明は、例えば癌関連研究やゲノム関連研究分野に代表
される医学、生物学関連研究者に対して、簡便で迅速か
つ正確な生体サンプル微少切断方法および切断片回収方
法を提供する。また、この出願の方法は、病理診断等の
臨床応用分野に新たな可能性をもたらす。As described above in detail, the invention of this application is useful for medical, biological and biological researchers represented in the fields of cancer-related research and genome-related research, for example, in a simple, rapid and accurate biological sample microscopy. A method for cutting and a method for collecting cut pieces are provided. In addition, the method of this application brings new possibilities to clinical application fields such as pathological diagnosis.
【図１】この発明の生体サンプル切断方法を実施するた
めの装置構成を例示した模式図である。FIG. 1 is a schematic view illustrating an apparatus configuration for carrying out a biological sample cutting method according to the present invention.
【図２】この発明の生体サンプル切断片の回収方法を実
施するための装置構成を例示した模式図である。FIG. 2 is a schematic view illustrating the configuration of an apparatus for carrying out the method for collecting a cut piece of a biological sample according to the present invention.
【図３】この発明の生体サンプル切断片の別の回収方法
を実施するための装置構成を例示した模式図である。FIG. 3 is a schematic view illustrating an apparatus configuration for carrying out another method for collecting a cut piece of a biological sample according to the present invention.
【図４】実施例１における薄切片の切断の様子を示した
図面に代わる顕微鏡写真である。図中Ａは薄切片を切断
した状態であり、ＢおよびＣは切断片を剥離・分離した
後の状態である。FIG. 4 is a micrograph instead of a drawing showing a state of cutting a thin section in Example 1. In the figure, A is a state in which the thin section is cut, and B and C are states after the cut section is separated and separated.
【図５】実施例２における切断片剥離後の薄切片を示し
た図面に代わる顕微鏡写真である。FIG. 5 is a photomicrograph instead of a drawing showing a thin section after the section is peeled off in Example 2.
【図６】実施例２におけるスライドグラスに回収された
切断片（矢印）を示した図面に代わる顕微鏡写真であ
る。FIG. 6 is a micrograph instead of a drawing showing a cut piece (arrow) collected on a slide glass in Example 2.
【図７】試験例におけるＰＣＲ産物のゲル電気泳動の結
果を示す図面に代わる写真である。各レーンは、１：サ
イズマーカーＤＮＡ（100bp ラダー）、２：ポジティブ
・コントロール、３：ＮＩＨ／３Ｔ３より抽出したゲノ
ムＤＮＡ、４：マウス脳組織より抽出したゲノムＤＮ
Ａ、５〜８：実施例３の方法で回収したマウス脳切断片
より抽出したＤＮＡ、９〜１０：実施例２の方法で回収
したマウス脳切断片より抽出したＤＮＡ。FIG. 7 is a photograph replacing a drawing and showing the results of gel electrophoresis of PCR products in a test example. In each lane, 1: size marker DNA (100 bp ladder), 2: positive control, 3: genomic DNA extracted from NIH / 3T3, 4: genomic DN extracted from mouse brain tissue
A, 5 to 8: DNA extracted from the mouse brain slice collected by the method of Example 3, 9 to 10: DNA extracted from the mouse brain slice collected by the method of Example 2.
１ 生体サンプル（実施例１：マウス脳の薄切片） ２ 透明プレート（実施例１：スライドグラス） ３ ステージ ４ アイピース ５ ＣＣＤカメラ ６ モニター ７ 光照射手段（実施例１：エキシマレーザー） ８ 対物レンズ（実施例１：反射対物レンズ ９ 下方プレート（実施例２：スライドグラス） １０ 切断片 １１ スペーサー １２ マイクロニードル １３ 分析用容器（実施例２、３：マイクロチューブ） DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Biological sample (Example 1: Thin slice of mouse brain) 2 Transparent plate (Example 1: Slide glass) 3 Stage 4 Eyepiece 5 CCD camera 6 Monitor 7 Light irradiation means (Example 1: Excimer laser) 8 Objective lens ( Example 1: Reflective objective lens 9 Lower plate (Example 2: slide glass) 10 Cutting piece 11 Spacer 12 Microneedle 13 Analysis container (Example 2, 3: Microtube)
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/48 Ｇ０２Ｂ 21/32 Ｇ０２Ｂ 21/32 Ｇ０１Ｎ 1/28 Ｇ (72)発明者 勝又 政和 静岡県浜松市市野町1126番地の１浜松ホト ニクス株式会社内 (72)発明者 土屋 広司 静岡県浜松市市野町1126番地の１浜松ホト ニクス株式会社内 (72)発明者 金澤 一郎 東京都大田区田園調布１−47−17──────────────────────────────────────────────────の Continued on the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code FI G01N 33/48 G02B 21/32 G02B 21/32 G01N 1/28 G (72) Inventor Masakazu Katsumata 1126 Nomachi, Ichinomachi, Hamamatsu City, Shizuoka Prefecture No. 1 in Hamamatsu Photonics Co., Ltd. (72) Inventor Koji Tsuchiya Inside 1 Hamamatsu Photonics Co., Ltd. at 1126 Nomachi, Hamamatsu City, Shizuoka Prefecture (72) Inventor Ichiro Kanazawa 1-47-17 Denon Chofu, Ota-ku, Tokyo
Claims (13)
射によって切断する方法であって、生体サンプルを透明
プレートの片面に保持し、生体サンプル保持面の反対側
から透明プレートを通して光を照射することによって生
体サンプルの目的箇所を切断することを特徴とする生体
サンプルの切断方法。1. A method for cutting a biological sample under microscopic observation by light irradiation, wherein the biological sample is held on one surface of a transparent plate, and light is irradiated from the opposite side of the biological sample holding surface through the transparent plate. A method for cutting a biological sample, comprising cutting a target portion of the biological sample by using the method.
サンプルの切断方法。2. The method for cutting a biological sample according to claim 1, wherein the light is laser light.
請求項１の生体サンプルの切断方法。3. The method for cutting a biological sample according to claim 1, wherein the transparent plate is a slide glass.
色体または微生物である請求項１の生体サンプルの切断
方法。4. The method for cutting a biological sample according to claim 1, wherein the biological sample is a biological tissue piece, a cell, a chromosome, or a microorganism.
に保持された生体サンプルに対して直接光を照射する
か、または生体サンプル保持面の反対側から透明プレー
トを通して光を照射することによって生体サンプルの目
的箇所を切断した後、生体サンプル保持面の反対側から
透明プレートを通して生体サンプル切断片に光を照射す
ることによって切断片を透明プレートより剥離させ、透
明プレートの下方にて切断片を回収することを特徴とす
る生体サンプル切断片の回収方法。5. A biological sample obtained by directly irradiating a biological sample held on one side of a transparent plate under microscopic observation with light or irradiating light through the transparent plate from the opposite side of the biological sample holding surface. After cutting the target portion, the cut piece is peeled from the transparent plate by irradiating the cut piece of the biological sample through the transparent plate from the opposite side of the biological sample holding surface, and the cut piece is collected below the transparent plate. A method for collecting a cut piece of a biological sample.
サンプル切断片の回収方法。6. The method according to claim 5, wherein the light is laser light.
請求項５の生体サンプル切断片の回収方法。7. The method according to claim 5, wherein the transparent plate is a slide glass.
色体または微生物である請求項５の生体サンプル切断片
の回収方法。8. The method according to claim 5, wherein the biological sample is a biological tissue piece, a cell, a chromosome, or a microorganism.
て、生体サンプルを保持する透明プレートと、このプレ
ートの下方に生体サンプル切断片の回収手段を備えてい
ることを特徴とする生体サンプル切断・回収装置。9. A microscope apparatus provided with light irradiation means, comprising: a transparent plate for holding a biological sample; and a means for collecting a biological sample cut piece below the plate. -Collection device.
ある請求項９の装置。10. The apparatus according to claim 9, wherein the light irradiation means is a laser light irradiation device.
明プレートと一定間隔で相対向するプレートである請求
項９の装置。11. The apparatus according to claim 9, wherein the collecting means of the biological sample cut piece is a plate opposed to the transparent plate at a predetermined interval.
レートがスライドグラスである請求項１１の装置。12. The apparatus according to claim 11, wherein the transparent plate and the opposite plate are slide glasses.
明プレートに配設された上部開口容器である請求項９の
装置。13. The apparatus according to claim 9, wherein the means for collecting the cut pieces of the biological sample is an upper opening container provided on the transparent plate.
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|---|---|---|---|
| JP9315642A JPH11148887A (en) | 1997-11-17 | 1997-11-17 | Cutting method for organism sample as well as method and apparatus for collection of cut piece |
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|---|---|
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