JPH1052263A - Embryonic stem cell - Google Patents
Embryonic stem cellInfo
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- JPH1052263A JPH1052263A JP9129068A JP12906897A JPH1052263A JP H1052263 A JPH1052263 A JP H1052263A JP 9129068 A JP9129068 A JP 9129068A JP 12906897 A JP12906897 A JP 12906897A JP H1052263 A JPH1052263 A JP H1052263A
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、マウス由来の新規
な胚性幹細胞に関するものである。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel embryonic stem cell derived from a mouse.
【０００２】[0002]
【従来の技術】胚性幹細胞は、胚盤胞期の受精卵の内部
細胞塊 (Inner Cell Mass: ICM) に由来し、イン・ビト
ロで未分化状態を保ったまま培養維持できる細胞であ
り、ES細胞 (embryonic stem cell)とも呼ばれる。胚性
幹細胞はトランスジェニック動物の作成に極めて有用な
生物材料であり、例えば、相同組換え系を用いて不活性
化遺伝子と胚性幹細胞染色体の活性遺伝子とを交換する
ことにより、特定の遺伝子を不活性化させた遺伝子ノッ
クアウトマウスを作成することができる。BACKGROUND ART Embryonic stem cells are derived from the inner cell mass (ICM) of a blastocyst stage fertilized egg and are cells that can be cultured and maintained in vitro while maintaining an undifferentiated state. It is also called ES cell (embryonic stem cell). Embryonic stem cells are extremely useful biological materials for producing transgenic animals.For example, by exchanging an inactivated gene with an active gene of an embryonic stem cell chromosome using a homologous recombination system, a specific gene can be obtained. An inactivated gene knockout mouse can be created.
【０００３】従来、マウス、ハムスター、ブタ由来の胚
性幹細胞が報告されているが、胚性幹細胞の樹立方法に
ついては未知の部分が多く、多種多様な実験目的にあわ
せて開発されてきたマウス系統の数に比べると、その種
類は極めて限定されているのが実情である。現在、胚性
幹細胞としてマウス 129/Sv 系統由来の細胞が最も広く
研究者に利用されている。しかしながら、129/Sv系統の
マウスは繁殖が必ずしもよくないので、遺伝子欠損マウ
スを作成しても他系統と交配して雑種にせざるを得ない
という問題を有していた。129/Sv系統のマウスには種々
の亜系があり、これらより樹立された胚性幹細胞の由来
を遺伝学的に完全に特定することができないという問題
があった。Hitherto, mouse, hamster and pig-derived embryonic stem cells have been reported, but the method of establishing embryonic stem cells is largely unknown, and mouse strains developed for a variety of experimental purposes have been developed. The fact is that the types are extremely limited compared to the number. Currently, cells derived from the mouse 129 / Sv line are most widely used by researchers as embryonic stem cells. However, since the 129 / Sv strain mouse does not always reproduce well, there is a problem that even if a gene-deficient mouse is created, it must be crossed with another strain to be a hybrid. Mice of the 129 / Sv strain have various sublines, and there has been a problem that the origin of embryonic stem cells established from them cannot be completely identified genetically.
【０００４】一般に、一つの遺伝子の個体レベルにおけ
る作用はその他の遺伝的背景の影響を受けるので、遺伝
子ノックアウトによる厳密な比較研究のためには、十分
な基礎データが蓄積された近交系マウス系統から胚性幹
細胞を樹立し、目的とする遺伝子をノックアウトしてそ
の影響を元系統と比較するのが理想的である。このよう
な理由から、近交系マウス系統からの新規な胚性幹細胞
の樹立が望まれていたが、従来、このような胚性幹細胞
は知られていない。なお、マウス由来の胚性幹細胞とし
ては、特開平5-328878号公報に記載された胚性未分化細
胞などが知られているが、この細胞は雑種 F1 由来の胚
性幹細胞であることを特徴としており、近交系から樹立
された細胞ではない。In general, the effect of one gene at the individual level is influenced by other genetic backgrounds, and therefore, for a rigorous comparative study by gene knockout, inbred mouse strains with sufficient basic data accumulated It is ideal to establish embryonic stem cells from, to knock out the gene of interest, and to compare its effects with the original line. For these reasons, establishment of new embryonic stem cells from inbred mouse strains has been desired, but such embryonic stem cells have not been known so far. As mouse-derived embryonic stem cells, undifferentiated embryonic cells described in JP-A-5-328878 are known, and this cell is characterized by being an embryonic stem cell derived from hybrid F1. It is not a cell established from an inbred strain.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は新規な
胚性幹細胞を提供することにある。より具体的には、近
交系マウス系統から樹立された胚性幹細胞を提供するこ
とが本発明の課題である。An object of the present invention is to provide a novel embryonic stem cell. More specifically, it is an object of the present invention to provide embryonic stem cells established from an inbred mouse strain.
【０００６】[0006]
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の課題
を解決すべく鋭意努力した結果、C3H/HeN などの近交系
マウスから新規な胚性幹細胞を樹立することに成功し
た。すなわち本発明は、C3H/HeN, C57BL/6N, DBA/1J 及
び BALB/c 系統由来の胚性幹細胞を提供するものであ
る。Means for Solving the Problems As a result of intensive efforts to solve the above problems, the present inventors have succeeded in establishing new embryonic stem cells from inbred mice such as C3H / HeN. That is, the present invention provides embryonic stem cells derived from C3H / HeN, C57BL / 6N, DBA / 1J and BALB / c lines.
【０００７】[0007]
【発明の実施の形態】本発明の胚性幹細胞は、マウス近
交系であるC3H/HeN, C57BL/6N, DBA/1J 及びBALB/c 系
統から調製されたものである。上記の近交系のうち、C3
H/HeN, C57BL/6N 及び DBA/1J は遺伝学的に完全な近交
系である。また、BALB/c系統には、例えば、BALB/cA 及
び BALB/cCr 系統の亜系統の存在が知られているが、こ
れらの亜系統も遺伝学的には極めて近接した系統であ
る。これらのマウス系統は実験動物としていずれも汎用
されており、容易に入手することが可能である。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The embryonic stem cells of the present invention have been prepared from mouse inbred lines C3H / HeN, C57BL / 6N, DBA / 1J and BALB / c. Of the above inbred strains, C3
H / HeN, C57BL / 6N and DBA / 1J are genetically perfect inbred strains. The BALB / c strain is known to include, for example, BALB / cA and BALB / cCr sublines, and these sublines are also genetically very close lines. These mouse strains are widely used as experimental animals and can be easily obtained.
【０００８】例えば、本発明の胚性幹細胞は以下のよう
にして樹立することができる。上記各系統の雌雄マウス
を自然交配させ、翌日、膣栓をもった雌を妊娠０日と
し、妊娠３日目の雌の子宮より胚盤胞を採取して培養
し、ハッチ後にフィーダー細胞（例えば、BALB/cA 系統
の14日目胎仔から線繊芽細胞をマイトマイシンＣで処理
することにより調製したもの）上に移し替えて 2〜3 日
間培養する。隆起してきた内部細胞塊 (ICM)を剥離して
0.25%程度のトリプシンの小滴中で細胞小塊とし、この
小塊を 24 ウェルプレート中のフィーダー細胞上に移し
て初代継代とする。以後の処置としては、翌日から毎日
培養液を交換して 2〜5 日後にコロニーをピックアップ
し、トリプシン処理して細胞小塊とし、ESM 中で個々の
細胞を分離した後に再びフィーダー細胞上にまき、この
ようにして10代目に到達した時点で胚性幹細胞樹立とす
る。For example, the embryonic stem cells of the present invention can be established as follows. Male and female mice of the above strains are mated naturally. On the next day, females with vaginal plugs are defined as day 0 of pregnancy, blastocysts are collected from the uterus of females on day 3 of pregnancy and cultured. After hatching, feeder cells (eg, On day 14 of the BALB / cA strain, prepared by treating fibroblasts with mitomycin C) and culturing for 2-3 days. Remove the raised inner cell mass (ICM)
A cell clump is formed in a droplet of about 0.25% trypsin, and the clump is transferred onto a feeder cell in a 24-well plate to be a first passage. As a subsequent treatment, the culture medium was changed every day from the next day, and the colonies were picked up 2 to 5 days later.The colonies were picked up, trypsinized into cell clumps, separated into individual cells in ESM, and then spread on feeder cells again. In this way, at the time of reaching the 10th generation, embryonic stem cells are established.
【０００９】[0009]
【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定され
ることはない。 (1) 採卵 マウス C3H/HeN,C57BL/6N 及び DBA/1J 系統の雌雄をそ
れぞれ自然交配させ、妊娠３日目のマウスの子宮を摘出
して M2 バッファーで洗浄した。また、BALB/cについて
は、BALB/cA 及び BALB/cCr 系統間の交配によって作成
した亜系統間のF1 胚を用いた。シリンジに潅流針 (30
ゲージ）を装着して、子宮内部から M2バッファーで胚
を洗い出した。透明帯を付けた胚盤胞を M2 で２回洗浄
した後、ESM 培地［直径 5 mm のドロップを作り、ミネ
ラル油（シグマ社製）を重層して予め37℃, 5% CO2イン
キュベーター内でプレインキュベートしたもの］で胚が
ハッチするまで37℃の5% CO2インキュベーター内で約30
時間培養した。その後、ハッチした胚盤胞をマイトマイ
シンＣ (10μg/ml・ DMEM) で処理したフィーダー細胞
(BALB/cA 系統マウスの14日目胎仔から調製したもの）
上に移してさらにESM培地で培養した。ハッチした胚は
2〜3 日後にICM を隆起させた。EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to Examples, but the scope of the present invention is not limited to these Examples. (1) Egg Collection Mice Male and female of C3H / HeN, C57BL / 6N and DBA / 1J strains were naturally mated, and the uterus of the mouse on the third day of pregnancy was excised and washed with M2 buffer. For BALB / c, F1 embryos between sublines created by crossing between BALB / cA and BALB / cCr lines were used. Perfusion needle into syringe (30
The uterus was washed out of the uterus with M2 buffer. After washing the blastocysts with the zona pellucida twice with M2, make a 5 mm diameter drop of ESM medium, overlay mineral oil (manufactured by Sigma) in advance in a 37 ° C, 5% CO 2 incubator. Pre-incubated] in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C until the embryos hatch
Cultured for hours. Then, feeder cells obtained by treating the hatched blastocysts with mitomycin C (10 μg / ml in DMEM)
(Prepared from BALB / cA strain mouse fetus on day 14)
Transferred to the top and further cultured in ESM medium. The hatched embryo
After 2-3 days, the ICM was raised.
【００１０】(2) ICM の分離と解離 予め少量のPBS(-)を吸引させた50μl 容のマイクロピペ
ットで隆起したICM を吸引ピックアップし、PBS(-)で２
回洗浄した後に、0.25% トリプシン溶液のドロップ中に
移して室温で 1〜1.5 分間インキュベートした。細胞塊
がほぐれる前にトリプシン・ドロップ内にマイクロピペ
ットでESM を少量加えてトリプシンを非活性化した。別
に用意したESM のドロップ中で細胞塊を適当に小さくし
た後、個々の塊をマイトマイシンＣ（10μg/ml・ DMEM)
で処理したフィーダー細胞上に移した。この状態を初代
細胞として、翌日から毎日培地を交換した。２代目から
は、40〜60秒間のトリプシン処理の後にESM 中で細胞塊
を完全にほぐし、個々の細胞に分離した後にフィーダー
細胞上に同様に移した。(2) Separation and dissociation of ICM The raised ICM was suctioned and picked up with a 50 μl micropipette in which a small amount of PBS (-) had been sucked in advance, and the PBS (-) was used to aspirate.
After washing twice, they were transferred into a drop of 0.25% trypsin solution and incubated at room temperature for 1-1.5 minutes. Before the cell mass was loosened, trypsin was inactivated by adding a small amount of ESM to the trypsin drop with a micropipette. After appropriately reducing the cell mass in a separately prepared drop of ESM, the individual mass was mitomycin C (10 μg / ml in DMEM).
Were transferred onto feeder cells treated with. With this state as primary cells, the medium was changed every day from the next day. From the second generation, the cell mass was completely loosened in ESM after trypsinization for 40 to 60 seconds, separated into individual cells, and similarly transferred onto feeder cells.
【００１１】(a) ESM 培地: DMEM 400 ml （ペニシリン
Ｇカリウム 0.012 g, 硫酸ストレプトマイシン 0.02 g,
炭酸水素ナトリウム 0.6 g, DMEM 4 gを水に溶かして
400 ml にしたもの), NEAA 2 ml (non essential amin
o acid, ×100), ヌクレオシド・ストック溶液 4 ml
（アデノシン 3mM, グアノシン 3mM, ウリジン 3mM, シ
チジン 3mM, チミジン 1mM), 2−メルカプトエタノール
・ストック溶液 0.4 ml (DMEM 5ml, 2- メルカプトエタ
ノール 35 μl), LIF 50μl (leukemia inhibitingfact
or), グルコース 1.85 g, FCS 100 ml を混ぜた。 (b) 0.25% トリプシン溶液: トリプシン (0.25 g), EDT
A ・2Na (0.037 g), 1 ×リン酸緩衝生理食塩水(-) (100
ml)(A) ESM medium: DMEM 400 ml (penicillin G potassium 0.012 g, streptomycin sulfate 0.02 g,
Dissolve 0.6 g of sodium bicarbonate and 4 g of DMEM in water
400 ml), NEAA 2 ml (non essential amin
o acid, × 100), nucleoside stock solution 4 ml
(3 mM adenosine, 3 mM guanosine, 3 mM uridine, 3 mM cytidine, 1 mM thymidine), 0.4 ml 2-mercaptoethanol stock solution (5 ml DMEM, 35 μl 2-mercaptoethanol), 50 μl LIF (leukemia inhibitingfact)
or), glucose 1.85 g, and FCS 100 ml. (b) 0.25% trypsin solution: trypsin (0.25 g), EDT
A ・ 2Na (0.037 g), 1 × phosphate buffered saline (-) (100
ml)
【００１２】(c) M2バッファー: ストック溶液A 15.0 m
l (200 ml 中に NaCl 11.068 g, KCl0.712 g, KH2PO
4 0.324 g, MgSO4 ・7H2O 0.586 g, 乳酸ナトリウム
(60% シロップ状) 6.64 ml, グルコース 2.000 g, ペ
ニシリンG カリウム 0.120 g, 硫酸ストレプトマイシン
0.100 g), ストック溶液B 2.4 ml (50 ml 中に NaHCO
3 1.051 g, フェノールレッド 0.005 g), ストック溶
液C 1.5 ml (10 ml 中にピルビン酸ナトリウム 0.036
g), ストック溶液D 1.5 ml (50 ml 中に CaCl2・2H2O1.
260 g), ストック溶液E 12.6 ml (100 ml 中に HEPES
5.958 g, フェノールレッド 0.010 g, NaOHで pH 7.4
に調整), BSA 600 mg を混ぜた後、蒸留水で150mlに調
整した。(C) M2 buffer: Stock solution A 15.0 m
l (200 ml NaCl 11.068 g, KCl 0.712 g, KH 2 PO
4 0.324 g, MgSO 4 · 7H 2 O 0.586 g, sodium lactate
(60% syrup) 6.64 ml, glucose 2.000 g, penicillin G potassium 0.120 g, streptomycin sulfate
0.100 g), Stock solution B 2.4 ml (NaHCO in 50 ml
3 1.051 g, phenol red 0.005 g), stock solution C 1.5 ml (sodium pyruvate 0.036 in 10 ml)
g), Stock solution D 1.5 ml (CaCl 2・ 2H 2 O1 in 50 ml.
260 g), Stock solution E 12.6 ml (HEPES in 100 ml)
5.958 g, phenol red 0.010 g, pH 7.4 with NaOH
), And mixed with 600 mg of BSA, and adjusted to 150 ml with distilled water.
【００１３】(3) 胚性幹細胞の選択 2 〜5 日程度の培養で種々の形態の細胞集団が認められ
たので、その中から形態的に均一な小型細胞で構成され
るフラットなコロニーを胚性幹細胞集団としてピックア
ップし、40〜60秒のトリプシン処理を行った後に、上記
(2) と同様にして新たに用意したフィーダー細胞上に継
代した。このようにして10代まで継代培養を継続して本
発明の胚性幹細胞を樹立し、工業技術院生命工学工業技
術研究所（茨城県つくば市東一丁目１番３号）に平成８
年５月17日付けで寄託した。これらの寄託は、平成９年
５月１日付けで原寄託からブタペスト条約に基づく国際
寄託に移管されており、下記の受託番号により特定され
る。(3) Selection of embryonic stem cells Since a variety of cell populations were observed in culture for about 2 to 5 days, a flat colony composed of morphologically uniform small cells was transformed into embryos. After picking up as a sex stem cell population and performing trypsin treatment for 40 to 60 seconds,
The cells were subcultured on freshly prepared feeder cells in the same manner as in (2). In this way, the subculture is continued up to the tenth generation to establish the embryonic stem cells of the present invention, and the Institute of Biotechnology, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (1-3-1 Higashi, Tsukuba City, Ibaraki Pref.)
Deposited on May 17, 2016. These deposits have been transferred from the original deposits to international deposits under the Budapest Treaty on May 1, 1997 and are identified by the following deposit numbers.
【００１４】[0014]
【表１】 ──────────────────────────── 胚性幹細胞 マウス系統 受託番号 （原寄託番号） ──────────────────────────── C-6 C3H/HeN FERM BP-5934 (FERM P-15633) C-2 C3H/HeN FERM BP-5933 (FERM P-15632) Cr/A-3 BALB/c FERM BP-5932 (FERM P-15631) DB1 DBA/1J FERM BP-5931 (FERM P-15630) B6-26 C57BL/6N FERM BP-5935 (FERM P-15634) ────────────────────────────[Table 1] Embryonic stem cell mouse strain Accession number (Original accession number) ────────────────────── C-6 C3H / HeN FERM BP-5934 (FERM P-15633) C-2 C3H / HeN FERM BP-5933 (FERM P-15632) Cr / A-3 BALB / c FERM BP-5932 (FERM P-15631) DB1 DBA / 1J FERM BP-5931 (FERM P-15630) B6-26 C57BL / 6N FERM BP-5935 (FERM P- 15634) ────────────────────────────
【００１５】これらの胚性幹細胞は、いずれもアルカリ
フォスファターゼ活性染色において陽性を示した。ま
た、これらの胚性幹細胞のうち、 C-6, C-2 及び Cr/A-
3 についてインジェクション法又はアグリゲーション法
によってキメラマウスを作成し、生殖細胞への分化能を
確認したところ、以下の結果を得た。All of these embryonic stem cells were positive for alkaline phosphatase activity staining. Among these embryonic stem cells, C-6, C-2 and Cr / A-
A chimeric mouse was prepared by injection or aggregation for 3 and its ability to differentiate into germ cells was confirmed. The following results were obtained.
【００１６】[0016]
【表２】 ─────────────────────────────────── 胚 性1)キメラ 受容側 交 配 妊娠数 幹細胞2)受容側2)総 数2)ES由来 幹細胞 個 体 胚系統 系 統 （回） 由 来 胚由来 率(%) ─────────────────────────────────── C-63) C-6-1 BALB/cA BALB/cA 3 27 0 27 100 C-63) C-6-2 BALB/cA BALB/cA 7 16 37 53 30 C-63) C-6-3 BALB/cA BALB/cA 9 16 44 60 27 C-63) C-6-4 BALB/cA BALB/cA 6 6 36 42 14 C-63) C-6-6 BALB/cA BALB/cA 6 48 0 48 100 C-63) CY-1 BALB/cA BALB/cA 4 30 0 30 100 C-24) B1 C57BL/6N C57BL/6N 2 14 0 14 100 C-24) B12 C57BL/6N C57BL/6N 2 11 6 17 65 C-24) B13 C57BL/6N C57BL/6N 1 2 2 4 50 Cr/A-33) CY-2 C3H/HeN BALB/cA 5 4 41 45 9 Cr/A-33) CY-3 C3H/HeN BALB/cA 2 0 15 15 0 DB13) DB1-1 C57BL/6J DBA/1J 2 115) 0 11 100 ───────────────────────────────────1) 本発明の胚性幹細胞 C-6 及び C-2: C3H/HeN 由来；Cr/A-3: BALB/c由来 DB１: DBA/1J由来2) 子供の数3) アグリゲーション法4) インジェクション法5) CSA 遺伝子型についてPCT 法で決定[Table 2] 胚 Embryonic 1) Chimera Recipient Mating Pregnancy Stem cells 2) Recipient 2) Total number 2) ES-derived stem cells Individual embryonic lineage lineage (times) Yuki embryo-derived rate (%) ─────────────────── ──────────────── C-6 3) C-6-1 BALB / cA BALB / cA 3 27 0 27 100 C-6 3) C-6-2 BALB / cA BALB / cA 7 16 37 53 30 C-6 3) C-6-3 BALB / cA BALB / cA 9 16 44 60 27 C-6 3) C-6-4 BALB / cA BALB / cA 6 6 36 42 14 C-6 3) C-6-6 BALB / cA BALB / cA 6 48 0 48 100 C-6 3) CY-1 BALB / cA BALB / cA 4 30 0 30 100 C-2 4) B1 C57BL / 6N C57BL / 6N 2 14 0 14 100 C-2 4) B12 C57BL / 6N C57BL / 6N 2 11 6 17 65 C-2 4) B13 C57BL / 6N C57BL / 6N 1 2 2 4 50 Cr / A-3 3) CY- 2 C3H / HeN BALB / cA 5 4 41 45 9 Cr / A-3 3) CY-3 C3H / HeN BALB / cA 2 0 15 15 0 DB1 3) DB1-1 C57BL / 6J DBA / 1J 2 11 5) 0 11 100 ────────────────────────────────── 1) of the present invention embryonic stem cell C-6 and C-2: derived from C3H / HeN; Cr / A- 3: BALB / c -derived DB1: DBA / 1 J from 2) Number of children 3) aggregation method 4) injection method 5) CSA genotype determined by PCT method
【００１７】[0017]
【発明の効果】本発明の胚性幹細胞は遺伝学的に完全な
近交系マウスに由来するので厳密な遺伝学的研究に極め
て有用であり、例えば、ノックアウトマウスの作成や細
胞系譜の解析のほか、胚性幹細胞樹立の機構解析にも有
用である。特に、C3H 系統由来の胚性幹細胞などについ
ては、未処理の状態（例えば遺伝子マーカーなどを導入
しない状態）の胚性幹細胞を用いて作成したキメラマウ
スの組織内における胚性幹細胞由来の細胞挙動を、特開
平5-184385号公報に記載されたモノクローナル抗体を用
いて組織レベルで解析できるという特徴がある。EFFECT OF THE INVENTION The embryonic stem cells of the present invention are extremely useful for rigorous genetic studies because they are derived from genetically intact inbred mice. It is also useful for analyzing the mechanism of embryonic stem cell establishment. In particular, for embryonic stem cells derived from the C3H line, cell behavior derived from embryonic stem cells in the tissue of chimeric mice created using untreated embryonic stem cells (for example, without introducing a genetic marker, etc.) It is characterized in that it can be analyzed at the tissue level using the monoclonal antibody described in JP-A-5-184385.
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【手続補正書】[Procedure amendment]
【提出日】平成９年６月１９日[Submission date] June 19, 1997
【手続補正１】[Procedure amendment 1]
【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement
【補正対象項目名】００１６[Correction target item name] 0016
【補正方法】変更[Correction method] Change
【補正内容】[Correction contents]
【００１６】[0016]
【表２】 ─────────────────────────────────── 胚 性1)キメラ 受容側 交 配 妊娠数 幹細胞2)受容側2)総 数2)ES由来 幹細胞 個 体 胚系統 系 統 （回） 由 来 胚由来 率(%) ─────────────────────────────────── C-63) C-6-1 BALB/cA BALB/cA 3 27 0 27 100 C-63) C-6-2 BALB/cA BALB/cA 7 16 37 53 30 C-63) C-6-3 BALB/cA BALB/cA 9 16 44 60 27 C-63) C-6-4 BALB/cA BALB/cA 6 6 36 42 14 C-63) C-6-6 BALB/cA BALB/cA 6 48 0 48 100 C-63) CY-1 BALB/cA BALB/cA 4 30 0 30 100 C-24) B1 C57BL/6N C57BL/6N 2 14 0 14 100 C-24) B12 C57BL/6N C57BL/6N 2 11 6 17 65 C-24) B13 C57BL/6N C57BL/6N 1 2 2 4 50 Cr/A-33) CY-2 C3H/HeN BALB/cA 5 4 41 45 9 Cr/A-33) CY-3 C3H/HeN BALB/cA 2 0 15 15 0 DB13) DB1-1 C57BL/6J DBA/1J 2 115) 0 11 100 ───────────────────────────────────1) 本発明の胚性幹細胞 C-6 及び C-2: C3H/HeN 由来；Cr/A-3: BALB/c由来 DB１: DBA/1J由来2) 子供の数3) アグリゲーション法4) インジェクション法5) CSA 遺伝子型についてPCR 法で決定[Table 2] 胚 Embryonic 1) Chimera Recipient Mating Pregnancy Stem cells 2) Recipient 2) Total number 2) ES-derived stem cells Individual embryonic lineage lineage (times) Yuki embryo-derived rate (%) ─────────────────── ──────────────── C-6 3) C-6-1 BALB / cA BALB / cA 3 27 0 27 100 C-6 3) C-6-2 BALB / cA BALB / cA 7 16 37 53 30 C-6 3) C-6-3 BALB / cA BALB / cA 9 16 44 60 27 C-6 3) C-6-4 BALB / cA BALB / cA 6 6 36 42 14 C-6 3) C-6-6 BALB / cA BALB / cA 6 48 0 48 100 C-6 3) CY-1 BALB / cA BALB / cA 4 30 0 30 100 C-2 4) B1 C57BL / 6N C57BL / 6N 2 14 0 14 100 C-2 4) B12 C57BL / 6N C57BL / 6N 2 11 6 17 65 C-2 4) B13 C57BL / 6N C57BL / 6N 1 2 2 4 50 Cr / A-3 3) CY- 2 C3H / HeN BALB / cA 5 4 41 45 9 Cr / A-3 3) CY-3 C3H / HeN BALB / cA 2 0 15 15 0 DB1 3) DB1-1 C57BL / 6J DBA / 1J 2 11 5) 0 11 100 ────────────────────────────────── 1) of the present invention embryonic stem cell C-6 and C-2: derived from C3H / HeN; Cr / A- 3: BALB / c -derived DB1: DBA / 1 J from 2) Number of children 3) aggregation method 4) injection method 5) CSA genotype determined by PCR
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 加門 敏雄 東京都目黒区青葉台２−20−14 日本クレ ア株式会社内 ────────────────────────────────────────────────── ─── Continued on the front page (72) Inventor Toshio Kamon 2-20-14 Aobadai, Meguro-ku, Tokyo Inside CLEAR JAPAN
Claims (5)
統、及びBALB/c系統からなる群から選ばれるマウス系統
由来の胚性幹細胞。1. An embryonic stem cell derived from a mouse strain selected from the group consisting of a C3H / HeN strain, a C57BL / 6N strain, a DBA / 1J strain, and a BALB / c strain.
に記載の胚性幹細胞であって、それぞれ受託番号 FERM
BP-5933 及び FERM BP-5934 で特定される C-2及びC-6
細胞。2. The method according to claim 1, which is derived from a mouse C3H / HeN strain.
The embryonic stem cells according to the above, each having the accession number FERM
C-2 and C-6 specified in BP-5933 and FERM BP-5934
cell.
に記載の胚性幹細胞であって、受託番号 FERM BP-5935
で特定されるB6-26 細胞。3. The method according to claim 1, which is derived from the mouse C57BL / 6N strain.
An embryonic stem cell according to claim 1, which has an accession number of FERM BP-5935.
B6-26 cells identified in.
記載の胚性幹細胞であって、受託番号 FERM BP-5931 で
特定されるDB1 細胞。4. The embryonic stem cell according to claim 1, which is derived from the mouse DBA / 1J line, and is a DB1 cell identified by accession number FERM BP-5931.
記載の胚性幹細胞であって、受託番号 FERM BP-5932 で
特定されるCr/A-3細胞。5. The Cr / A-3 cell according to claim 1, which is derived from the mouse BALB / c line, and is identified by accession number FERM BP-5932.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9129068A JPH1052263A (en) | 1996-05-21 | 1997-05-20 | Embryonic stem cell |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12553396 | 1996-05-21 | ||
| JP8-125533 | 1996-05-21 | ||
| JP9129068A JPH1052263A (en) | 1996-05-21 | 1997-05-20 | Embryonic stem cell |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1052263A true JPH1052263A (en) | 1998-02-24 |
Family
ID=26461951
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9129068A Pending JPH1052263A (en) | 1996-05-21 | 1997-05-20 | Embryonic stem cell |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1052263A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8697444B2 (en) | 2001-12-21 | 2014-04-15 | Thrombogenics N.V. | Compositions for the in vitro derivation and culture of embryonic stem (ES) cell lines with germline transmission capability and for the culture of adult stem cells |
-
1997
- 1997-05-20 JP JP9129068A patent/JPH1052263A/en active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8697444B2 (en) | 2001-12-21 | 2014-04-15 | Thrombogenics N.V. | Compositions for the in vitro derivation and culture of embryonic stem (ES) cell lines with germline transmission capability and for the culture of adult stem cells |
| US8993323B2 (en) | 2001-12-21 | 2015-03-31 | Thrombogenics N.V. | Compositions for the in vitro derivation and culture of embryonic stem (ES) cell lines with germline transmission capability and for the culture of adult stem cells |
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