【発明の詳細な説明】
コルチコステロイドを含有するリポソーム
本発明は、活性成分として特定のコルチコステロイドを含有する、特に吸入療
法によるぜん息の治療に用いるための医薬組成物、及び上記医薬組成物の調製方
法に関する。
主として環境汚染の結果として、閉塞性の気管支肺の病気、たとえば気管支炎
及び気管支ぜん息が普及してきた。それらの病因及び激しさは、個体ごとに変化
する。環境的な影響（たとえば廃ガス、気象逆転層）により起こる外来的なアレ
ルギー性の気管支ぜん息及び本質的な気管支ぜん息は、しばしば変化する呼吸困
難を伴う激しい発作より特徴づけられる。せき及びたんを吐く強さも変化する。
一時的なぜん息及び混合型のぜん息は頻繁であって、治療を考慮に入れなくては
ならない。
激しさ及び起源の異なる上記疾患の治療のために、組み合せ製剤は別にして、
許容することができる危険を有する３つの限定された群の活性成分が利用できる
。これらの３つの群はβ2−アドレナリン作用剤、たとえば、アドレナリン、バ
メタン、クレンブテロール、フェノテロール、サルブタモール及びテルブタリン
、キサンチン誘導体、たとえばテオフィリン及びジプロフィリン並びにアトロピ
ン誘導体である臭化イパトロピウム及び臭化オキシトロピウムを含有する抗コリ
ン作用剤である。これらの３つの群の活性成分に基づく製剤を用いる療法が不成
功な場合には、経口でまたは吸入により投与される、特定のコルチコステロイド
、たとえばベクロメタゾンまたはブデソニドの使用が推奨される。現存する吸入
療法で用いられる唯一のコルチコステロイド製剤は、所望の抗アレルギー性、抗
滲出性、抗炎症性に加えて、吸入されたコルチコステロイドの吸収から生じる軽
いが所望しない全身的な副作用を有する。コルチコステロイドを用いる吸入療法
は、通常多年にわたり実施しなければならず、全身的な副作用の問題は著しく増
加する。
今や驚くべきことに、かつて皮膚病学の軟膏、クリーム、ゲル及び泡剤の活性
成分として示唆された、９α−クロル−６α−フルオル−11β−ヒドロキシ−16
α−メチル−３−オキソ−17α−プロピオニルオキシアンドロスタ−１，４−ジ
エン−17β−カルボン酸メチルを、リポソーム中に閉じ込めて投与した時に、特
に良好な抗ぜん息性を有することが発見された。この化合物に認められる全身的
な吸収は驚くべき低さであることも発見された。
したがって、本発明は、一面において、活性成分として、リポソームまたは脱
水されたリポソーム中に含有された、
一般式Ｉ
の化合物を含む医薬組成物を提供する。
一般式Ｉの化合物である、９α−クロル−６α−フルオル−11β−ヒドロキシ
−16α−メチル−３−オキソ−17α−プロピオニルオ
キシアンドロスタ−１，４−ジエン−17β−カルボン酸メチルは米国特許第1578
243 号明細書に記載されているように製造することができる。吸入装置を用いる
投与のためには、リポソームは水性懸濁液または脱水された形、すなわち、乾燥
粉末であってよい。
式Ｉの化合物を含有するリポソームは肺胞のマクロファージによる即座の摂取
及びアレルゲン誘発された好酸球増加症のブラウン−ノルウェイのラットモデル
における好酸球レクルートメントの有効な抑制を示すことが発見された。
適切なリポソームは一般に脂質成分が少なくとも１つの合成リン脂質を含むも
のを包含する。合成リン脂質の例は、合成ホスファチジルコリン、たとえば、ジ
ミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジ
ステアロイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジリ
ノレオイルホスファチジルコリン、ジラウリロイルホスファチジルコリン、１−
パルミトイル−２−オレオイルホスファチジルコリン、１−ミリストイル−２−
パルミトイルホスファチジルコリン及び１−パルミトイル−２−ミリストイルホ
スファチジルコリン、合成ホスファチジルグリセロール、たとえばジラウリロイ
ルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、
ジパルミトイルホスファチジルグリセロール及びジオレオイルホスファチジルグ
リセロール、合成ホスファチジン酸、たとえばジミリストイルホスファチジン酸
及びジパルミトイルホスファチジン酸、合成ホスファチジルエタノールアミン、
たとえばジミリストイルホスファチジルエタノールアミン及びジパルミトイルホ
スファチジルエタノールアミン並びに合成ホスファチジルセリン、たとえばジミ
リストイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン及びジ
オレオイルホスファチジルセリンである。
好ましくはリポソームの脂質成分は、合成ホスファチジルコリン、たとえば前
記したものを、任意に合成ホスファチジルセリンまたは合成ホスファチジルグリ
セロール、たとえば前記したものと共に、ホスファチジルセリンまたはホスアチ
ジルグリセロールに対するホスファチジルコリンの重量比が好ましくは60：40〜
95：５、特に70：30〜90：10で含む。
１つ好ましい態様では、リポソームの脂質成分は、
式
（式中、Ｒ1は偶数の炭素原子を有するＣ10〜Ｃ20のアルカノイルで、Ｒ2は偶数
の炭素原子を有するＣ10〜Ｃ20のアルケノイルで、Ｒa，Ｒb及びＲcは水素また
はＣ1〜Ｃ4アルキルで、ｎは２〜４の整数である）の合成の実質的に純粋なリン
脂質である。
式IIのリン脂質において、偶数の炭素原子を有するＣ10〜Ｃ20のアルカノイル
としてのＲ1は、好ましくはｎ−ドデカノイル、ｎ−テトラデカノイル、ｎ−ヘ
キサデカノイル、ｎ−オクタデカノイルまたはエイコサノイルである。
偶数の炭素原子を有するＣ10〜Ｃ20アルケノイルとしてのＲ2は、好ましくは
、９−シス−ドデセノイル、９−シス−テトラデセノイル、９−シス−ヘキサデ
セノイル、６−シス−オクタデセノイル、６−トランス−オクダデセノイル、９
−シス−オクタデセノイル
、９−トランス−オクタデセノイル、11−シス−オクタデセノイルまたは９−シ
ス−エイコセノイルである。式IIのリン脂質において、Ｒa，Ｒb及びＲcは好ま
しくはＣ1〜Ｃ4のアルキル、特にメチルである。
式IIにおいて、ｎは２〜４の整数で、好ましくは２である。式−（Ｃn−Ｈ2n
）−の基は、非分枝または分枝アルキレンで、たとえば１，１−エチレン、１，
１−，１，２−もしくは１，３−プロピレンまたは１，２−，１，３−もしくは
１，４−ブチレンである。１，２−エチレン（ｎ＝２）が好ましい。
式IIの特に好ましいリン脂質においては、Ｒ1はｎ−ドデカノイル、ｎ−テト
ラデカノイル、ｎ−ヘキサデカノイルまたはｎ−オクタデカノイルで、Ｒ2は９
−シス−ドデセノイル、９−シス−テトラデセノイル、９−シス−ヘキサデセノ
イル、９−シス−オクタデセノイルまたは９−シス−エイコセノイルで、Ｒa，
Ｒb及びＲcがメチルで、ｎは２である。
式IIの非常に特に好ましいリン脂質は、合成１−ｎ−ヘキサデカノイル−２−
（９−シス−オクタデセノイル）−３−sn−ホスファチジルコリンである。
特定の特に好ましいリポソームにおいては、脂質は式IIのリン脂質と共に合成
の実質的に純粋な式
（式中、Ｒ3及びＲ4は各々他方と独立して偶数の炭素原子を有す
薬として許容し得る塩基のカチオンである。）を含む。
式IIIのリン脂質において、偶数の炭素原子を有するＣ10〜Ｃ20のアルケノイ
ルとしてのＲ3及びＲ4は、好ましくは９−シス−ドデセノイル、９−シス−テト
ラデセノイル、９−シス−ヘキサデセノイル、６−シス−オクタデセノイル、６
−トランス−オクタデセノイル、９−シス−オクタデセノイル、９−トランス−
オクタデセノイル、11−シス−オクタデセノイルまたは９−シス−エイコセノイ
ルである。
金属イオン、たとえばリチウム、ナトリウムもしくはカリウムイオン、アンモニ
ウムイオン、モノー、ジーもしくはトリ−Ｃ1〜Ｃ4アルキルアンモニウムイオン
、たとえばトリメチル−、エチル−、ジエチル−もしくはトリエチルアンモニウ
ムイオン、テトラメチルアンモニウムイオン、２−ヒドロキシエチル−トリ−Ｃ1
〜Ｃ4アルキルアンモニウム、たとえばコリンカチオンまたは２−ヒドロキシエ
チルアンモニウムイオン、または塩基性アミノ酸のカチオン、
リウムイオンである。
式IIIの特に好ましいリン脂質においては、Ｒ3とＲ4は同一で、たとえば９−
シス−ドデセノイル、９−シス−テトラデセノイル、９−シス−ヘキサデセノイ
ル、９−シス−オクタデセノイルまたは
である。
非常に特に好ましい式IIIのリン脂質は合成１，２−ジ（９−シス−オクタデ
セノイル）−３−sn−ホスファチジルＳ−セリンである
。
他の好ましい態様では、リポソームの脂質成分はジ（Ｃ10〜Ｃ20アルカノイル
）ホスファチジルコリンと共にジ（Ｃ10〜Ｃ20アルカノイル）ホスファチジルグ
リセロールを含むものであり、偶数の炭素原子を有するアルカノイル基及び好ま
しい重量比は前記されている。各リン脂質において、２つのアルカノイル基は同
一であっても異なっていてもよく、好ましくはｎ−ドデカノイル（ラウロイル）
、ｎ−テトラデカノイル（ミリストイル）、ｎ−ヘキサデカノイル（パルミトイ
ル）、ｎ−オクタデカノイル（ステアロイル）またはｎ−エイコサノイルである
。特に好ましい態様では、ジ（Ｃ10〜Ｃ20アルカノイル）ホスファチジルコリン
はジステアロイルホスファチジルコリンで、ジ（Ｃ10〜Ｃ20アルカノイル）ホス
ファチジルグリセロールはジパルミトイルホスファチジルグリセロールである。
リポソームの脂質成分は、リン脂質に加えてコレステロールを含有してもよく
、コレステロールの量は、たとえば全脂質含有量の20〜60モル％、好ましくは30
〜50モル％である。他の好ましい態様では、リポソームの脂質成分は合成ホファ
チジルコリン、たとえば前記したもの、合成ホスファチジルセリンまたはホスフ
ァチジルグリセロール、たとえば前記したもの、及びコレステロールを含み、ホ
スファチジルコリンの好ましい重量比は前記のとおりであり、全リン脂質含有量
に対するコレステロールの好ましい重量比は１：１〜１：５である。特に好まし
い態様では脂質成分はジミリストイルホスファチジルセリンまたはホスファチジ
ルグリセロールに対するホスファチジルコリン、コレステロール及びジオレオイ
ルホスファチジルセリンを含有する。
一般に脂質に対する活性化合物の重量比はリポソームの安定性と両立する限り
高い方が望ましい。この重量比の最大限は脂質成分の
性質と組成に依存するが一般に約１：20であるようである。しかしながら、この
比が１：100〜１：50のリポソームで良好な結果が得られることが分かった。
本発明の活性化合物を含有するリポソームは薬剤を含有するリポソームの調製
についての公知の方法を用いて調製することができる。たとえば１つの方法では
、式Ｉの化合物と１またはそれよりも多い脂質の有機溶媒、たとえばアルコール
、エーテルもしくはハロ炭化水素またはそれらの混合物、溶液を撹拌された水性
媒体、たとえばリン酸緩衝化塩類液中に徐々に、好ましくは滴で加え、リポソー
ムの水性懸濁液を得る。他の方法では、１またはそれよりも多い脂質と式Ｉの化
合物を有機溶媒、たとえばアルコール、エーテルもしくはハロ炭化水素またはそ
れらの混合物に溶解し、生じた溶液から、たとえば凍結乾燥または回転蒸発によ
って、溶媒を除去し、残留物を水性媒体、たとえばリン酸緩衝化塩類液または糖
、たとえばラクトースの水溶液に分散させて、リポソームの水性懸濁液を得る。
水性リポソーム懸濁液を公知の方法で処理して溶媒を除去し、リポソームのサ
イズを減少させることができる。たとえば、水混和性有機溶媒を用いる上記最初
の方法により調製した水性リポソーム懸濁液を、任意にさらに水性媒体で希釈後
、透析にかけ、透析された懸濁液を限外ろ過により濃縮することができる。最初
の方法であるが水非混和性有機溶媒を用いて調製した、水性リポソーム懸濁液を
蒸発させて溶媒を除去し、次いで限外ろ過により濃縮することができる。上記第
２の方法で調製した水性リポソーム懸濁液（通常は多重層小胞(MLV)を生ずる）
を選択された孔径を有する１またはそれよりも多い膜、たとえばポリカーボネー
ト膜を通して押し出すことにより処理して、リポソームのサイズを減少させるこ
とができる。本発明で用いるリポソームは、粒径が好ましくは１μｍより小さく
、より好ましくは20〜200 nm、特に50〜100 nmである。
式Ｉの化合物を含有するリポソームは、好ましくは凍結乾燥により、脱水して
、ぜん息の治療における乾燥粉末吸入装置による投与のための乾燥粉末を得るこ
とができる。脱水されたリポソームは患者の気道中の液体によって再水和される
。リポソームの凍結乾燥は一般に抗凍結剤（リポソームの生成に用いられる水性
媒体に入れておいてもよい）の存在下に実施する。抗凍結剤は糖、たとえば単糖
類、たとえばグルコース、重合体状糖、たとえばデキストラン、または好ましく
は２糖類、たとえば蔗糖、ラクトースもしくはトレハロースである。特に好まし
い抗凍結剤はラクトース及びトレハロースである。慣用の凍結乾燥技術にしたが
って、主要な凍結乾燥は好ましくは、凍結乾燥される物質の相転移温度より低い
温度で実施する。
抗凍結剤の存在下でのリポソームの脱水は、脱水されたリポソームと抗凍結剤
の混合物を含む乾燥粉末の生成をもたらす。好ましい態様である、リポソームを
生成させた水性媒体中に抗凍結剤が存在する場合には、抗凍結剤はリポソーム粒
子の内側表面及び外側表面の両方にある。リポソームの脂質に対する抗凍結剤の
重量比は一般に１：１〜４：１であるが、所望によりそれよりも低い比も、高い
比も用いることができる。
必要なら、式Ｉの化合物を含有するリポソームの脱水、特に抗凍結剤の存在下
の凍結乾燥により行なわれた脱水により得られた生成物を細かく砕いて、たとえ
ば乾燥粉末吸収装置を用いて投与される吸入療法に用いるのに適切な粒径を得る
。適当なサイズは一般的には10μｍより小さく、好ましくは１〜７μｍである。
式Ｉの化合物を含有するリポソームは、必要なら前記したリポソームの粒径を適
当な範囲まで減少させる処理後に、水性媒体中の懸濁剤の形で吸入
療法に用いてもよい。この形で用いるために、リポソームを吸入療法中で賦形剤
として用いられる水性媒体中で調製するか、または、それらを他の媒体中で調製
して、そこから分離し、吸入療法中で賦形剤として用いられる水性媒体に導入す
る前に、任意に前記のように脱水してもよい。水性媒体は吸入療法において賦形
剤として慣用されているような水性媒体でよい。それは通常、１つまたはそれよ
りも多い医薬として許容し得る補形剤、たとえば塩化ナトリウム、緩衝剤、酸化
防止剤及び界面活性剤をその中に溶解して含有する水である。てごろな水性媒体
はリン酸緩衝化塩類液であって、それは酸化防止剤、たとえばα−トコフェロー
ルを含有しているかもしれない。吸入療法で用いる時、本発明の水性リポソーム
懸濁液を公知の噴霧器、たとえば圧縮空気を満たした噴霧器により投与できる。
脱水されたリポソームに閉じ込められた式Ｉの化合物を含有する本発明の乾燥
粉末をカプセル、たとえばゼラチンまたはプラスチック性のカプセル、または乾
燥粉末吸入装置に用いるためのブリスタ(blister)中に入れてもよい。カプセル
またはブリスタは好ましくは乾燥粉末の投薬単位を含有し、それはたとえば10〜
1000μｇ、好ましくは50〜400 μｇの式Ｉの化合物と４〜40mg、好ましくは20〜
30mgの乾燥粉末を得るのに十分な担体と共に含むことができる。代わりに、乾燥
粉末を、たとえば１動作当り２mgの乾燥粉末を放出するように適合させた多投薬
乾燥粉末吸入装置の貯蔵所に入れてもよい。
更なる面において、本発明は、前記のリポソームまたは脱水されたリポソーム
に含有された有効量の前記限定された式Ｉの化合物の吸入による投与を含むぜん
息の治療方法を提供する。
式Ｉの化合物の毎日の投与量は治療される患者の年令及び重量並びに病状の激
しさにより変化する。一般に毎日の投薬量は50〜200
μｇ、より普通には100 〜1000μｇであり得る。
本発明の次の例により説明する。部は別に言及されていないなら重量部である
。例１
１−ｎ−ヘキサデカノイル−２−（９−シス−オクタデセノイル）−３−sn−
ホスファチジルコリン(700mg)と１，２−ジ（９−シス−オクタデセノイル）−
３−sn−ホスファチジルＳ−セリン(300mg)を40℃で第３級ブタノールに溶解す
る。得られた溶液を、９α−クロル−６α−フルオル−11β−ヒドロキシ−16α
−メチル−３−オキソ−17α−プロピオニルオキシアンドロスター１，４−ジエ
ン−17β−カルボン酸メチル（化合物１）（10mg）を40℃で第３級ブタノール（
５ml）に溶解することにより生成した溶液と混合し、温度は40℃にもどった。生
じた溶液を、室温で良く撹拌されたpH7.4 のリン酸緩衝化塩類溶液(PBS)(200ml)
に滴加する。得られた水性リポソーム懸濁液を窒素の下でAMICON YM 100 膜を用
いて透析し、20mlに濃縮する。濃縮された水性リポソーム懸濁液を、孔径0.8 μ
ｍのフィルター及び0.2 μｍのフィルターで連続的にろ過し、殺菌されたガラス
びん（各ガラスびんに２ml）に分配する。得られた懸濁液は吸入療法によるぜん
息の治療で噴霧器によって投与するのに適している。例２
例１においてリポソームの生成及び透析に用いられたリン酸緩衝化塩類液の代
りに、１ｌ当り94.4ｇのラクトース・１水和物及び１ｌ当り0.24ｇの塩化ナトリ
ウムを含有する水溶液を用いる以外は例１の調製手順を繰り返して、濃縮された
水性リポソーム懸濁液を得る。例３
例２で調製された濃縮された水性リポソーム懸濁液をLyovac GT ４凍結乾燥機
中で凍結乾燥する。得られた塊をTrost 空気衝撃粉砕機を用いて微粉状にし、吸
入療法によるぜん息の治療における乾燥粉末吸入装置による投与に適切な、中央
値の粒径６〜７μｍの乾燥粉末を得る。例４
ジステアロイルホスファチジルコリン(700mg)、ジパルミトイルホスファチジ
ルコリン(300mg)及び化合物１（20ｇ）をクロロホルムとメタノールの２：１（
容積）混合物（20ml）に溶解する。溶液を回転蒸発により除去する。残留物を１
ｌ当り94.4ｇのラクトース・１水和物及び１ｌ当り0.24ｇの塩化ナトリウムを含
有するラクトースの水溶液40mlに分散させ、水性リポソーム懸濁液を得る。この
懸濁液を70℃で、上部の窒素の下で、2200nmのポリカーボネート膜を２回、2100
nmのポリカーボネート膜を10回押し出して通過させ、リポソームの粒径を減少さ
せる。生じる懸濁液を例３のように凍結乾燥し、微粉状化し、吸入療法によるぜ
ん息の治療における乾燥粉末吸入装置による投与に適切な乾燥粉末を得る。例５
ジミリストイルホスファチジルコリン(678mg)、コレステロール(193mg)、ジオ
レオイルホスファチジルセリン（81mg）及び化合物１（20mg）を第３級ブタノー
ル（20ml）に溶解する。生ずる溶液から凍結乾燥により第３級ブタノールを除去
する。残留物を例４に記載のようにラクトースの水溶液に分散させ、得られたリ
ポソーム懸濁液を、35℃の代りに70℃である以外は例４に記載のように押し出し
て、リポソームのサイズを100 nmに減少させる。生ずる懸濁液を例３のように凍
結乾燥し、微粉状化し、吸入療法によるぜん息の治
療における乾燥粉末吸入装置による投与に適切な乾燥粉末を得る。例６
好酸球レクルートメントによる、閉じ込められた化合物１を含有するリポソー
ムの作用をElwood他の「J.Allergy Clin.lmmunol」88、第951 〜960 頁（1991年
）に記載されたようにアレルゲン誘発された好酸球増加症のブラウン−ノルウェ
イのラットモデルで試験する。重さが180 〜220 ｇの４群の同系交配された雄の
ラットを調べる。
群１：動物をオボアルブミン（１mg）／Al(OH)3（100ｇ）の0.9 ％(wt／vol)
懸濁液（１ml）の腹腔内注射により敏感にさせ、21日後に塩類液のみのエアゾル
に15分間さらす。
群２：動物を群１についてと同様にオボアルブミンで感作させ、続いて21日後
に１％オボアルブミンのエアゾルに15分間さらす。
群３：動物を群１についてと同様にオボアルブミンで感作させ、続いて19日後
にケタミン麻酔下に３μｇの化合物１を含有する例１のリポソーム懸濁液(0.5ml
)を気管を通して注入し、24時間後にさらに上記気管を通して注入する。第２回
目の注入の24時間後に、動物を１％のアルブミンエアゾルに15分間さらす。
群４：動物を群３と同様にするが、化合物１を含有するリポソームの代りに、
化合物１を除く以外は同じ手順で調製したプラシーボ リポソームを用いる。
各群のラットについて、エアゾルにさらしてから24時間後に気管支肺胞の洗浄
を実施して、好酸球の総数を測定する。結果は次のとおりである。
群 １匹のラット当りの好酸球の数
１（塩類液誘発） 0.25×105
２（オボアルブミン誘発） 19.0 ×105
３（化合物１ リポソーム） 10.3 ×105
４（プラシーボ リポソーム） 16.9 ×105 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Liposomes containing corticosteroids
The present invention relates to a specific corticosteroid as an active ingredient, especially for inhalation therapy.
COMPOSITION FOR USE IN THE TREATMENT OF ASTHMA BY METHOD AND METHOD OF PREPARING THE PHARMACEUTICAL COMPOSITION
About the law.
Obstructive bronchopulmonary diseases, mainly as a result of environmental pollution, for example bronchitis
And bronchial asthma has become widespread. Their etiology and severity vary from individual to individual
I do. Extrinsic arrays caused by environmental influences (eg waste gas, weather inversion)
Luggy bronchial asthma and essential bronchial asthma are often respiratory problems
Characterized by severe seizures with difficulty. The strength of coughing and spitting also varies.
Transient asthma and mixed asthma are frequent and must be considered for treatment.
No.
For the treatment of the above diseases of different intensity and origin, apart from the combination preparations,
Three limited groups of active ingredients with acceptable risk are available
. These three groups are βTwo-Adrenergic agents, such as epinephrine,
Methane, clenbuterol, fenoterol, salbutamol and terbutaline
, Xanthine derivatives such as theophylline and diprofylline and atropi
Coli containing the derivatives of ipatropium bromide and oxitropium bromide
Activator. Successful treatment with formulations based on these three groups of active ingredients
If successful, certain corticosteroids, administered orally or by inhalation
For example, the use of beclomethasone or budesonide is recommended. Existing inhalation
The only corticosteroid preparations used in therapy are the desired antiallergic,
Exudative, anti-inflammatory, as well as light from absorption of inhaled corticosteroids
But has undesirable systemic side effects. Inhalation therapy with corticosteroids
Must be performed over many years, and the problem of systemic side effects increases significantly.
Add.
Now surprisingly, once the activity of dermatological ointments, creams, gels and foams
9α-chloro-6α-fluoro-11β-hydroxy-16 suggested as a component
α-Methyl-3-oxo-17α-propionyloxyandrosta-1,4-di
When methyl ene-17β-carboxylate is administered confined in liposomes,
Was found to have good anti-asthmatic properties. Systemic found in this compound
The absorption was also found to be surprisingly low.
Accordingly, the present invention provides, in one aspect, liposomes or delipids as active ingredients.
Contained in the watered liposomes,
General formula I
A pharmaceutical composition comprising a compound of formula (I) is provided.
9α-chloro-6α-fluoro-11β-hydroxy, a compound of general formula I
-16α-methyl-3-oxo-17α-propionylo
Methyl xandrosta-1,4-diene-17β-carboxylate is disclosed in U.S. Pat.
It can be prepared as described in US Pat. Use an inhaler
For administration, the liposomes may be in an aqueous suspension or in a dehydrated form, i.e., in a dry form.
It may be a powder.
Liposomes containing compounds of formula I are immediately uptake by alveolar macrophages
Brown-Norwegian rat model of allergen and eosinophilia induced by allergen
Was found to show effective suppression of eosinophil recruitment in E. coli.
Suitable liposomes generally have a lipid component comprising at least one synthetic phospholipid.
Including. Examples of synthetic phospholipids are synthetic phosphatidylcholines, e.g.
Myristoyl phosphatidylcholine, dipalmitoyl phosphatidylcholine, di
Stearoyl phosphatidylcholine, dioleoyl phosphatidylcholine, zili
Noreyl phosphatidylcholine, dilauroyl phosphatidylcholine, 1-
Palmitoyl-2-oleoylphosphatidylcholine, 1-myristoyl-2-
Palmitoylphosphatidylcholine and 1-palmitoyl-2-myristoylho
Sphatidylcholine, synthetic phosphatidylglycerol, such as dilauryloy
Luphosphatidylglycerol, dimyristoylphosphatidylglycerol,
Dipalmitoylphosphatidylglycerol and dioleoylphosphatidylg
Lycerol, synthetic phosphatidic acid, such as dimyristoyl phosphatidic acid
And dipalmitoyl phosphatidic acid, synthetic phosphatidylethanolamine,
For example, dimyristoyl phosphatidylethanolamine and dipalmitoyl
Sphatidylethanolamine and synthetic phosphatidylserine, such as
Ristoyl phosphatidylserine, dipalmitoylphosphatidylserine and di
Oleoyl phosphatidylserine.
Preferably, the lipid component of the liposome is synthetic phosphatidylcholine, e.g.
What is described is optionally synthetic phosphatidylserine or synthetic phosphatidylglycerol.
Serols such as phosphatidylserine or phosphatidyl
The weight ratio of phosphatidylcholine to jylglycerol is preferably 60:40
95: 5, especially 70:30 to 90:10.
In one preferred embodiment, the lipid component of the liposome is
formula
(Where R1Is C with even carbon atomsTen~ C20The alkanoyl of RTwoIs even
With carbon atoms ofTen~ C20The alkenoyl of Ra, RbAnd RcIs hydrogen or
Is C1~ CFourAlkyl and n is an integer from 2 to 4).
It is a lipid.
In a phospholipid of formula II, a C having an even number of carbon atomsTen~ C20The alkanoyl
R as1Is preferably n-dodecanoyl, n-tetradecanoyl, n-he
Xadecanoyl, n-octadecanoyl or eicosanoyl.
C with even carbon atomsTen~ C20R as alkenoylTwoIs preferably
, 9-cis-dodecenoyl, 9-cis-tetradecenoyl, 9-cis-hexade
Senoyl, 6-cis-octadecenoyl, 6-trans-octadecenoyl, 9
-Cis-octadecenoyl
, 9-trans-octadecenoyl, 11-cis-octadecenoyl or 9-
S-eicosenoyl. In a phospholipid of formula II, Ra, RbAnd RcIs preferred
Or C1~ CFourAlkyl, especially methyl.
In the formula II, n is an integer from 2 to 4, preferably 2. Formula-(Cn-H2n
)-Is an unbranched or branched alkylene, for example 1,1-ethylene, 1,
1-, 1,2- or 1,3-propylene or 1,2-, 1,3- or
1,4-butylene. 1,2-ethylene (n = 2) is preferred.
In a particularly preferred phospholipid of formula II, R1Is n-dodecanoyl, n-tetra
Ladecanoyl, n-hexadecanoyl or n-octadecanoyl;TwoIs 9
-Cis-dodecenoyl, 9-cis-tetradecenoyl, 9-cis-hexadeceno
, 9-cis-octadecenoyl or 9-cis-eicosenoyl,a,
RbAnd RcIs methyl and n is 2.
Very particularly preferred phospholipids of the formula II are synthetic 1-n-hexadecanoyl-2-
(9-cis-octadecenoyl) -3-sn-phosphatidylcholine.
In certain particularly preferred liposomes, the lipid is synthesized with a phospholipid of formula II
A substantially pure formula of
(Where RThreeAnd RFourHas an even number of carbon atoms each independently of the other
It is a cation of a pharmaceutically acceptable base. )including.
In a phospholipid of formula III, a C having an even number of carbon atomsTen~ C20Alkenoy
R as leThreeAnd RFourIs preferably 9-cis-dodecenoyl, 9-cis-tet
Ladesenoyl, 9-cis-hexadecenoyl, 6-cis-octadecenoyl, 6
-Trans-octadecenoyl, 9-cis-octadecenoyl, 9-trans-
Octadecenoyl, 11-cis-octadecenoyl or 9-cis-eicosenoy
It is.
Metal ions such as lithium, sodium or potassium ions, ammonium
Umion, mono, gee or tri-C1~ CFourAlkyl ammonium ion
For example, trimethyl-, ethyl-, diethyl- or triethylammonium
Ion, tetramethylammonium ion, 2-hydroxyethyl-tri-C1
~ CFourAlkyl ammonium such as choline cation or 2-hydroxy
Tyl ammonium ion, or cation of a basic amino acid,
It is a lithium ion.
In a particularly preferred phospholipid of formula III, RThreeAnd RFourAre the same, for example, 9-
Cis-dodecenoyl, 9-cis-tetradecenoyl, 9-cis-hexadecenoyl
9-cis-octadecenoyl or
It is.
Very particularly preferred phospholipids of formula III are synthetic 1,2-di (9-cis-octade)
Senoyl) -3-sn-phosphatidyl S-serine
.
In another preferred embodiment, the lipid component of the liposome is di (CTen~ C20Alkanoyl
) Di (C) with phosphatidylcholineTen~ C20Alkanoyl) phosphatidylg
Alkanoyl groups having an even number of carbon atoms and
The new weight ratios are described above. In each phospholipid, the two alkanoyl groups are the same.
May be one or different, preferably n-dodecanoyl (lauroyl)
, N-tetradecanoyl (myristoyl), n-hexadecanoyl (palmitoy)
C), n-octadecanoyl (stearoyl) or n-eicosanoyl
. In a particularly preferred embodiment, di (CTen~ C20Alkanoyl) phosphatidylcholine
Is distearoyl phosphatidylcholine, di (CTen~ C20Alkanoyl) phos
Fatidyl glycerol is dipalmitoyl phosphatidyl glycerol.
Lipid components of liposomes may contain cholesterol in addition to phospholipids
The amount of cholesterol is, for example, 20-60 mol% of the total lipid content, preferably 30
~ 50 mol%. In another preferred embodiment, the lipid component of the liposome is synthetic
Tidylcholine, such as those described above, synthetic phosphatidylserine or phosphine
Acetylidylglycerol, such as those described above, and cholesterol,
The preferred weight ratio of sphatidylcholine is as described above and the total phospholipid content
The preferred weight ratio of cholesterol to 1: 1 to 1: 5. Especially preferred
In a preferred embodiment, the lipid component is dimyristoyl phosphatidylserine or phosphatidyl.
Phosphatidylcholine, cholesterol and dioleoi on luglycerol
Contains luphosphatidylserine.
Generally, the weight ratio of active compound to lipid is compatible with liposome stability.
Higher is desirable. The maximum of this weight ratio is
Depending on the nature and composition, it generally appears to be about 1:20. However, this
It has been found that good results are obtained with liposomes having a ratio of 1: 100 to 1:50.
Preparation of liposomes containing the active compound of the present invention using the liposomes containing the drug
Can be prepared by using a known method. For example, one way
, A compound of formula I and one or more lipids in an organic solvent such as an alcohol
, Ethers or halohydrocarbons or mixtures thereof, aqueous solutions with stirring
Medium, for example, phosphate buffered saline, slowly, preferably dropwise,
To obtain an aqueous suspension of the In another method, one or more lipids and a compound of formula I
The compound is converted to an organic solvent such as an alcohol, ether or halohydrocarbon or
Dissolve in these mixtures and, from the resulting solution, for example, by lyophilization or rotary evaporation
The solvent is removed and the residue is washed with an aqueous medium such as phosphate buffered saline or sugar.
For example, by dispersing in an aqueous solution of lactose to obtain an aqueous suspension of liposomes.
The aqueous liposome suspension is treated by a known method to remove the solvent, and the liposome suspension is treated.
Noise can be reduced. For example, the first using a water-miscible organic solvent
The aqueous liposome suspension prepared by the method of the above is optionally further diluted with an aqueous medium.
Dialysis, and the dialyzed suspension can be concentrated by ultrafiltration. the first
An aqueous liposome suspension was prepared by using a water-immiscible organic solvent.
It can be evaporated to remove the solvent and then concentrated by ultrafiltration. The above
Aqueous liposome suspension prepared by method 2 (usually producing multilamellar vesicles (MLV))
One or more membranes having a selected pore size, such as polycarbonate
Treatment by extruding through a membrane to reduce the size of the liposomes.
Can be. The liposome used in the present invention preferably has a particle size of less than 1 μm.
, More preferably 20 to 200 nm, particularly 50 to 100 nm.
Liposomes containing the compound of formula I are dehydrated, preferably by lyophilization.
To obtain a dry powder for administration by dry powder inhaler in the treatment of asthma.
Can be. Dehydrated liposomes are rehydrated by fluid in the patient's airways
. Lyophilization of liposomes is generally performed using cryoprotectants (aqueous solution used to produce liposomes).
(Which may be contained in a medium). Cryoprotectant is a sugar, such as a simple sugar
, Such as glucose, polymeric sugars, such as dextran, or preferably
Is a disaccharide such as sucrose, lactose or trehalose. Especially preferred
New cryoprotectants are lactose and trehalose. According to the conventional freeze-drying technology
Thus, the primary lyophilization is preferably below the phase transition temperature of the substance to be lyophilized
Perform at temperature.
Dehydration of the liposome in the presence of the cryoprotectant is accomplished by combining the dehydrated liposome with the cryoprotectant.
Resulting in the production of a dry powder comprising a mixture of In a preferred embodiment, the liposome is
If a cryoprotectant is present in the formed aqueous medium, the cryoprotectant is
On both the inner and outer surfaces of the child. Of cryoprotectant for liposome lipids
The weight ratio is generally from 1: 1 to 4: 1, but lower ratios may be higher if desired.
Ratios can also be used.
If necessary, dehydration of the liposomes containing the compound of formula I, especially in the presence of cryoprotectants
The product obtained by the dehydration performed by freeze-drying of
Particle size suitable for use in inhalation therapy administered using dry powder absorption devices
. Suitable sizes are generally smaller than 10 μm, preferably 1 to 7 μm.
The liposomes containing the compound of formula I can be adjusted to the particle size of the liposomes described above, if necessary.
Inhalation in the form of a suspension in aqueous medium after treatment to a reasonable extent
May be used for therapy. For use in this form, the liposome is excipient during inhalation therapy.
Prepared in an aqueous medium used as or as they are prepared in other media
To be separated therefrom and introduced into an aqueous medium used as an excipient in inhalation therapy.
Before dewatering, it may optionally be dehydrated as described above. Aqueous vehicle shaped in inhalation therapy
Aqueous media such as those commonly used as agents can be used. It is usually one or more
Pharmaceutically acceptable excipients such as sodium chloride, buffers, oxidants
It is water containing an inhibitor and a surfactant dissolved therein. Reasonable aqueous medium
Is a phosphate buffered saline solution, which is an antioxidant such as α-tocopherol
May contain Aqueous liposomes of the invention when used in inhalation therapy
The suspension can be administered by means of a known nebulizer, for example a nebulizer filled with compressed air.
Drying of the Invention Containing a Compound of Formula I Encapsulated in Dehydrated Liposomes
Powder into capsule, for example gelatin or plastic capsule, or dry
It may be placed in a blister for use in a dry powder inhaler. capsule
Or the blister preferably contains a dosage unit of dry powder, for example 10 to
1000 μg, preferably 50-400 μg, of a compound of formula I and 4-40 mg, preferably 20
It can be included with enough carrier to obtain 30 mg of dry powder. Instead, dry
Multi-dose powder adapted to release, for example, 2 mg dry powder per operation
It may be placed in the reservoir of the dry powder inhaler.
In a further aspect, the present invention relates to a liposome or dehydrated liposome as described above.
Including the administration by inhalation of an effective amount of a compound of the above defined formula I contained in
A method for treating breath is provided.
The daily dose of the compound of formula I will vary with the age and weight of the patient being treated and the severity of the condition.
It depends on the quality. Generally daily dosage is 50-200
μg, more usually 100-1000 μg.
The following example of the present invention will be described. Parts are parts by weight unless otherwise stated
.Example 1
1-n-hexadecanoyl-2- (9-cis-octadecenoyl) -3-sn-
Phosphatidylcholine (700 mg) and 1,2-di (9-cis-octadecenoyl)-
Dissolve 3-sn-phosphatidyl S-serine (300 mg) in tertiary butanol at 40 ° C.
You. The resulting solution was treated with 9α-chloro-6α-fluoro-11β-hydroxy-16α.
-Methyl-3-oxo-17α-propionyloxyandroster 1,4-die
Methyl -17β-carboxylate (compound 1) (10 mg) at 40 ° C.
5 ml) and the temperature returned to 40 ° C. Living
The resulting solution was mixed with 200 mL of phosphate buffered saline (PBS), pH 7.4, well stirred at room temperature.
Add dropwise. The resulting aqueous liposome suspension is applied using an AMICON YM 100 membrane under nitrogen.
And dialysed and concentrated to 20 ml. The concentrated aqueous liposome suspension is diluted with 0.8 μm pore size.
Filtered and sterilized glass continuously filtered with 0.2 m filter and 0.2 μm filter
Dispense into bottles (2 ml for each vial). The suspension obtained is obtained by inhalation therapy
Suitable for administration by nebulizer in the treatment of breath.Example 2
Replacement of the phosphate buffered saline used for liposome formation and dialysis in Example 1
In addition, 94.4 g of lactose monohydrate per liter and 0.24 g of sodium chloride per liter
The procedure of Example 1 was repeated except that an aqueous solution containing
An aqueous liposome suspension is obtained.Example 3
Apply the concentrated aqueous liposome suspension prepared in Example 2 to a Lyovac GT 4 lyophilizer
Lyophilize in. The resulting mass is pulverized using a Trost air impact crusher and absorbed.
Central, suitable for administration by dry powder inhalation device in the treatment of asthma by admission
A dry powder with a particle size of 6 to 7 μm is obtained.Example 4
Distearoyl phosphatidylcholine (700 mg), dipalmitoyl phosphatidyl
Rucholine (300 mg) and Compound 1 (20 g) were mixed with chloroform and methanol at a ratio of 2: 1 (
Volume) dissolve in the mixture (20 ml). The solution is removed by rotary evaporation. 1 residue
Contains 94.4 g of lactose monohydrate per liter and 0.24 g of sodium chloride per liter.
The resultant is dispersed in 40 ml of an aqueous solution of lactose to obtain an aqueous liposome suspension. this
The suspension was heated at 70 ° C. under nitrogen top, twice with a 2200 nm polycarbonate membrane, 2100
Extrude 10 times through a 10-nm polycarbonate membrane to reduce liposome particle size.
Let The resulting suspension is lyophilized, micronized and inhaled as in Example 3.
A dry powder is obtained that is suitable for administration by a dry powder inhaler in the treatment of asthma.Example 5
Dimyristoyl phosphatidylcholine (678 mg), cholesterol (193 mg), geo
Reyl phosphatidylserine (81 mg) and compound 1 (20 mg) were tertiary butanol
In 20 ml of water. Tertiary butanol is removed from the resulting solution by lyophilization
I do. The residue was dispersed in an aqueous solution of lactose as described in
Extrude the posome suspension as described in Example 4 but at 70 ° C instead of 35 ° C
To reduce the size of the liposomes to 100 nm. Freeze the resulting suspension as in Example 3.
Drying, pulverization, cure of asthma by inhalation therapy
A dry powder is obtained that is suitable for administration by dry powder inhalation devices in therapy.Example 6
Liposomes containing trapped compound 1 by eosinophil recruitment
Elwood et al., J. Allergy Clin.lmmunol 88, 951-960 (1991
) Brown-Norway in allergen-induced eosinophilia as described in
Test in rat model of A. Four groups of inbred males weighing 180-220 g
Examine the rat.
Group 1: animals were ovalbumin (1 mg) / Al (OH)Three0.9% (wt / vol) of (100g)
Sensitized by intraperitoneal injection of suspension (1 ml), aerosol with saline only 21 days later
For 15 minutes.
Group 2: Animals sensitized with ovalbumin as for Group 1, followed by 21 days
To a 1% ovalbumin aerosol for 15 minutes.
Group 3: Animals sensitized with ovalbumin as for Group 1, followed by 19 days
The liposome suspension of Example 1 containing 3 μg of Compound 1 under ketamine anesthesia (0.5 ml
) Is infused through the trachea and 24 hours later through the trachea. 2nd
Animals are exposed to a 1% albumin aerosol for 15 minutes 24 hours after eye injection.
Group 4: animals are as in group 3, but instead of liposomes containing compound 1,
A placebo liposome prepared by the same procedure except that Compound 1 is excluded is used.
For each group of rats, bronchoalveolar lavage 24 hours after aerosol exposure
To determine the total number of eosinophils. The results are as follows.
Group Number of eosinophils per rat
1 (induced with salt solution) 0.25 × 10Five
2 (induced ovalbumin) 19.0 × 10Five
3 (Compound 1 liposome) 10.3 × 10Five
4 (placebo liposome) 16.9 × 10Five
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フロントページの続き
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ
Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ
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Ｇ)，ＵＡ(ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ
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ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，Ｌ
Ｔ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ
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ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ────────────────────────────────────────────────── ───
Continuation of front page
(81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE,
DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, M
C, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF, CG
, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN,
TD, TG), AP (KE, LS, MW, SD, SZ, U
G), UA (AZ, BY, KG, KZ, RU, TJ, TM
), AL, AM, AU, AZ, BB, BG, BR, BY
, CA, CN, CZ, EE, FI, GE, HU, IS,
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T, LV, MD, MG, MK, MN, MX, NO, NZ
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