【発明の詳細な説明】発明の名称
Ｎ末端基で切断されたダイノルフィン類似体を用いた鎮痛方法発明の技術分野
本発明は、一般的にダイノルフィンＡ類似体に関し、さらに詳しく言えば、鎮
痛方法に有用であるアミノ末端基で切断されたダイノルフィンＡ類似体に関する
。本発明は、国家保健協会により授与された認可番号第ＮＩＤＡ−０２６４３号
および第ＮＩＤＡ−０６０１１号をもとに、政府の援助によりなされた。米国政
府は本発明における権利を有する。発明の背景
オピオイドは、鎮痛剤として臨床で使用される多種類の薬物であり、植物由来
および合成アルカロイド並びに哺乳類の脳の内因的なものであるペプチドの両方
を含む。植物由来合成アルカロイドが既知のものとなり、数千年にわたり使用さ
れてきたのに対し、内因的なオピオイドペプチドは１９７０年代中頃に発見され
たばかりである。これらは３つの性質が異なる遺伝子群をもつことで知られてい
る。それらは、プロオピオ
メラノコルチンから誘導されたβ−エンドルフィンや他のペプチド，プロエンケ
ファリンＡから誘導されたエンケファリン，そしてプロエンケファリンＢから誘
導されたダイノルフィンである。
オピオイド化合物は神経細胞と相互に作用し、痛覚のような生理学的機能を調
節する。このように、オピオイド系に帰因する生理学的な機能のうちの一つが無
痛覚である。内因的オピオイドは、中枢神経系で多様な形で存在しており、前駆
プロダイノルフィン（プロエンケファリンＢ）から誘導された一連のペプチドで
あるダイノルフィンを含む。単離された第１のダイノルフィンは、（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１と指定されて）示されている構造を有し、「ダイノルフィンＡ−（
１−１７）」としても呼ばれる１７アミノ酸ペプチドであった。
過去１０年間で、様々な米国特許によりダイノルフィンの使用に関して記述さ
れ提案されてきた。
発明者ゴールドスタインによる、１９８３年８月２日に発行された米国特許第
4,396,606号は、次の構をもつ化合物（以下「ダイノルフィンＡ−（１−１３）
」と呼ぶ）の単離に関して記述している。
この１７アミノ酸内因的ペプチドの断片は、モルモットの回腸実験において、エ
ンケファリンやβ−エンドルフィンよりも実質的により活性であることが判明し
た。ダイノルフィンを含む化合物は、オピオイドレセプタ部位との相互作用によ
り鎮痛剤と提言され、そして他のオピオイド作用薬（例えば、モルヒネ）と同じ
方法の投与が明らかになった。
発明者リー等による、１９８４年７月３１日に発行された米国特許第 4,462,9
41号は、１０アミノ酸残基をもつダイノルフィンアミド類似体に関して記述して
いる、これらのダイノルフィンＡ−（１−１０）アミド類似体は、オピオイド尾
部軽打実験において重要な鎮痛活性をもたない（痙攣を引き起こす傾向がある大
量の投与を行わない場合においてである）。
環状構造（例えば、ジスルフィド橋かけ）により立体配座的に強化されたエン
ケファリン類似体は、発明者フルビィ等による、１９８５年５月２１日に発行さ
れた米国特許第 4,518,711号により記述されている。その後、ダイノルフィン類
似体は、アミノ酸残基５（通常ロイシン）とアミノ酸残基１１（通常リシン）が
システインで置換されたものとして既知のものとなった。同様に、アミノ酸残基
８（通常イソロシン）とアミノ酸残基１３（通常リシン）は、システインによ
り橋かけ結合で置換されている。前記橋かけもしくは環状構造は、生体内分解に
対するダイノルフィン類似体の安定性を助けるものである。
リー等により、１９９３年１２月２３日に特許協力条約の下で発行された国際
出願において、麻酔性鎮痛薬と共に切断されたＮ末端基ダイノルフィンＡ類似体
の治療上の使用が明らかになり、それは麻酔性鎮痛薬の活性を増強したり、禁断
症状を防いだりする（国際公開番号ＷＯ９３／２５２１７）。しかしながら、オ
ピオイド効力用に麻酔性鎮痛薬と共同で使用するには、オピオイド薬の存在が必
要とされる。
オピオイド薬は、鎮痛剤として臨床使用されるが、通常長期にわたる治療でお
こる耐性や依存性により、それらの前記オピオイド薬の有用性は制限される。耐
性とは、ある一定レベルの無痛感を得るのに必要な薬量の増加と定義され、また
、依存性とは、禁断症状を防ぐために薬を服用し続ける必要性のある状態をいう
。これらの現象に関する多大なリサーチにもかかわらず、分子的基礎に関しては
ほとんど知られていない。例えば、モルヒネのようなオピオイド薬は、習慣性が
あり、眠気や精神活動の機能障害のような中枢オピオイド副作用がある。
いくつかの非オピエート化合物は、火傷か感覚過敏痛のような慢性的な痛みを
和らげるものとされてきた。
発明者エリスによる、１９９１年４月９日発行の米国特許第 5,006,510号は、オ
ピエートでは患者の痛みの体験を実質的には変えられないような痛みの治療に局
所投薬するためのソマトスタチン類似体化合物について述べている。
それにもかかわらず、モルヒネのような麻酔性鎮痛薬による鎮痛薬の苦痛の軽
減に比較的抵抗力がある種々の苦痛状態が存在する。発明の要約
本発明の一つの特徴において、ペプチドが痛みを和らげるために使用される。
前記ペプチドは少なくとも６、好ましくは少なくとも７アミノ酸残基をもつもの
であり、内因的ダイノルフィンＡに関して、ｄｅｓ−（Ｔｙｒ），ｄｅｓ−（Ｔ
ｙｒ−Ｇｌｙ），またはｄｅｓ−（Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）であるようなＮ末
端基で（内因的ダイノルフィンに関して）切断されるダイノルフィンＡ類似体で
ある。これらのペプチドは、製薬的な受容体溶液においてか製薬的な受容体キャ
リアで処方され、そして患者の経験している痛みの場所に有効に投与される。
本発明を実施する際のダイノルフィンＡ類似体の投与は、静脈のような体組織
が好ましく、約５０から２，０００μｇ／ｋｇの投与範囲で（もしくは持続的な
注
入で）、経鼻，経直腸，くも膜下，筋肉内，経皮下の電気輸送，もしくは皮下処
置を含む。投与はまた、局所的（例えば、傷や粘膜に）であり、そして経口投与
もまた可能である。
本発明を実施することは、一般的に痛みをなくす無痛覚に有用であり、特に、
「神経障害痛」，「神経痛」，「感覚過敏」（普通の感覚刺激に対して極度の痛
みを感じる病的反応），「異痛」，「カウザルギー」（手足などが動かなくなる
神経障害の病的反応を意味する），持続的な下背痛，内蔵痛，骨の痛み（例えば
、癌患者にしばしばみられる），手術後の痛み，そして火傷等からくる傷のよう
な、病因が知られていない痛みの状態に有用である。本発明の実施は非オピエー
ト類似体を供給するので、モルヒネのような薬による中枢神経系副作用（例えば
、眠気，神経機能障害等）は避けられる。好適な実施形態の詳細な説明
本発明は、鎮痛方法において、非オピオイドレセプタとダイノルフィンＡ類似
体の相互作用に関する。特に、本発明の好適な実施は、ダイノルフィンＡに関し
て、ｄｅｓ−（Ｔｙｒ），ｄｅｓ−（Ｔｙｒ−Ｇｌｙ），もしくはｄｅｓ−（Ｔ
ｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）であるダイノルフィンＡ類似体の使用に関する。
ダイノルフィンＡ−（２−１７）は、μ，δ，もしくはＫオピオイドレセプタ
を結合しないことは既知である。しかしながら、我々は、非オピオイド結合のダ
イノルフィンＡ類似体が、特に体組織（例えば、静脈（ｉ．ｖ．））に投与され
るとき、実質的に抗有害受容（すなわち、鎮痛薬）活性を示すことを発見した。
この効力は、モルヒネに耐性な動物であれば保たれる。すなわち、交差耐性が欠
如している。
現時点では、我々は、ダイノルフィンＡ類似体が相互作用する非オピオイドレ
セプタの本質を知らない。しかしながら、非オピオイド鎮痛薬の活性を示すのに
使用される生体内検定から得られたデータによると、本発明の実施は、鎮痛効果
がオピオイドレセプタでは発揮されない痛みを和らげるのに有用であることが示
されている。
例えば、多くの患者は、神経の軸索を部分的にか、完全に妨げる障害もしくは
病気（例えば、痛みを伴う神経病質）に係わる痛みを患っている。神経障害の後
、損傷した主要な求心性軸索の再生先端は、自発的に炎症したり、ある種の刺激
に対して異常な感受性を示す症状のように、異常な特性をもつようになる。その
ような異常な特性をもつ軸索が、糖尿病のような他の状態で存在することが信じ
られている。痛みを伴う末梢神経病質の症状の中で、それらは、神経切断の錯覚
痛
のような関連病に基づいて通常分類される。これらの種の痛みは、しばしばオピ
オイド鎮痛薬により和らげられないで、比較的耐性である。
本発明を実施する際に使用されるペプチドは、少なくとも６、好ましくは７ア
ミノ酸をもつものである。本発明の一つの特徴において、適切なペプチドは内因
的ダイノルフィンＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のアミノ酸残基類似体をもつも
のとされるが、好ましくは、使用されるペプチドは、次のＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ
：４〜１２のアミノ酸残基により示されている、ｄｅｓ−（Ｔｙｒ）である。
我々は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：４〜１２ペプチドを、ダイノルフィンＡ−（
２−８）からそれぞれダイノルフィンＡ−（２−１６）と呼ぶことがある。さら
に、当業者に既知のものである種類（例えば、それらのいくつかは、米国特許第
4,462,941号に記述されている）は、これらの適切なペプチドの範囲内である。
しかしさらに、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：４〜１２において、残基のうちの一つか
二つは、（生体内の安定性を高める）Ｄ立体配置で同じか異なるアミノ酸残基で
置換され、例えば、Ｎ末端基のＧｌｙはＤ−Ａｌａにより置換されるか、もしく
は配座的安定性もしくは剛性率の修正がなされ、例えば多数の特殊なアミノ酸残
基は、環状構造もしくは橋かけ（例えば、ジスフィルド橋かけ）を形成可能な部
分により置換される。実例のそのような橋かけされたダイノルフィンＡ類似体は
、標準の５位置のロイシン、そして１１位置のリシン（これらの位置は、内因的
ダイノルフィンにおいて呼ばれているものである）はシステインにより置換され
、それらのジスフィルド橋かけは配座的安定性を与える。
本発明を実施するのに使用される全てのペプチドは、保護基を含むＣ末端および
Ｎ末端基もしくはそのどちらかをもち、例えば、Ｎ末端基はアセチル化される。
全てのペプチドはまた、遊離酸もしくはアミド形において使用される。
本発明のｄｅｓ−（Ｔｙｒ）ペプチドはまた、内因的ダイノルフィンＡのＴｙ
ｒの横一つか横二つ目にあるグリシン残基をもたず、つまり、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ＯＳ：１３〜２１やＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２２〜２９にそれぞれ示されている
ように、ｄｅｓ−（Ｔｙｒ−Ｇｌｙ）もしくはｄｅｓ−（Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｙ）であり、すでにＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：４〜１２で記述したように、配座的
安定性もしくは剛性を高めるために、同様に修飾され、そして、ｄｅｓ−（Ｔｙ
ｒ−Ｇｌｙ）ペプチドはまた、Ｄ−Ａｌａにより置換されたＮ末端基のＧｌｙを
もち、Ｃ末端およびＮ末端基もしくはそのどちらかは、当業者には既知のもので
ある保護基（例えば、体内でペプチドの分解を阻止するためのもの）を含み、そ
して前記ペプチドは遊離酸もしくはアミド形にある。
Des-(Tyr-Gly)
我々は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：１３〜２１ペプチドをそれぞれダイノルフィ
ンＡ−（３−９）からダイノルフィンＡ−（３−１７）として参照することがあ
る。
Des-(Tyr-Gly-Gly)
我々は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２２〜２９ペプチドをそれぞれダイノルフィ
ンＡ−（４−１０）からダイノルフィンＡ−（４−１７）として参照することが
ある。
ｄｅｓ−（Ｔｙｒ）ダイノルフィンＡ−（２−１７）は、同様に本発明を実施
する際に有用であり（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）、当業者に既知であり、すで
に記述したように様々な種類や修飾をもつ。
本発明を実施するのに適切な全てのペプチドは、例えば固相ペプチド合成技術
により、容易に合成的に調製される。クロロメチル化樹脂もしくはハイドロキシ
メチル樹脂が樹脂支持体として使用され、その後樹脂支持体から解裂されたペプ
チドは、ペプチドのカルボキシル末端をアミド形にする技術としてよく知られて
いる方法において、カルボキシル末端ベンジルエステルの形に容易に変換される
。
表１は、鎮痛薬に有効なペプチドを簡単に記述しているが、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
ＯＳ：２２〜２９に示されている本発明を実施する際の非オピオイドの特性を示
しており、それらは新規ペプチドであると思われる。
オピオイドレセプタをコード化する相補助的ＤＮＡにクローンをつくる分野の
研究者等は、ｄｅｓ−（Ｔｙｒ）ダイノルフィンが種々の配位子との分析検査に
おいて、全く作用しないことを最近記述した（ザイ等，米国科学ナショナルアカ
デミー紀要，８９，４１２４〜４１２８ページ（１９９２年））。しかしながら
、本発明を実施するのに有用なｄｅｓ−（Ｔｙｒ）ダイノルフィンペプチドは、
Ｎ末端基チロシンが欠けているだけでなく、実際、表１に簡潔に示されているｄ
ｅｓ−（Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）ダイノルフィンペプチドは、初めの３つのＮ
末端基アミノ酸残基が欠けている。それにもかかわらず、これらの新規ペプチド
は、比較的にオピエートに抵抗力があるような痛みを治療するのに有用である実
質的な鎮痛薬の特性をもつ。
このように、本発明は、完全な非オピオイド化合物により効果的な無痛覚を得る
新しい方法である。
つまり、本発明の実施により、常習，耐性，依存性，そしてオピオイド薬を使用
する際の深刻な障害である中枢オピオイド副作用が避けられる。
本発明のペプチドは、製薬的な受容体溶液もしくは製薬的な受容体キャリヤに
より処方されるのが好ましく、そのような溶液もしくはキャリアで投与される。
このように、投与方法に応じて、ペプチドは、塩水やリン酸緩衝化塩液のような
多種の生理学上許容なキャ
リアで処方され、そして、グルコース，マンニトール等のような生理学上受容体
賦形剤を含む。
投与は経皮下電気輸送（皮膚を破壊しないで直流電流を印加することによって
、薬物をイオン化した物質として導入することとも言われる）によりなされる。
例えば、そのような薬の投与手段は、発明者マイヤース等による、１９９４年５
月１７日に発行された米国特許第 5,312,326号により記述されている。
他の選択的薬剤投与に適している組合せは、発明者ホアーズによる，１９９４年
３月１日に発行された米国特許第 5,290,240号、および発明者ホーク等による，
１９９４年２月２２日に発行された米国特許第5,288,289 号により記述されてい
る。
実験
ランダムに飼育された体重２０から２５ｇの雄ＩＣＲネズミ（サスコ，オマハ
，ネブラスカ）が、全ての実験で使用された。実験の前に少なくとも一日、すべ
ての動物は任意量給餌および給水され、室温（２２±１℃）、および湿度（４０
〜５０％）の制御された動物の部屋に住まわされた。それぞれのネズミは一度だ
け使われた。
ハヤシとタケモリにより提唱（１９７１年）されている腹部伸張（リーシする
こと）分検定が抗有害受容
検定として使われた。ネズミには０．６％の酢酸の１０ｍｌ／ｋｇが、腹膜を通
して注射され、そして動物当たりのリーシ応答数が、酢酸の注射後５分から開始
して６分間数えられた。一つのリーシは後部の肢を伸ばすことによって後続され
た腹部の筋系の収縮の波と定義された。動物当たりのリーシの回数は＋Ｓ．Ｅ．
の平均値として与えられる抗有害受容活性は、食塩水で処理された対照群におけ
るリーシの平均値と比較しての薬物処理された動物で観察されたリーシの平均値
の百分率の減少として表現される。薬物の投与は観察期間の中心に頂点の作用が
起きるように時機合わせをされた。３つの投与レベルで最低１０匹のネズミが、
薬の投与応答曲線とＥＤ50を決定するために用いられた。
フィニィー（１９６４年）の平行線検定がＥＤ50値、９５％の信頼間隔および
有力さ比率を評価するために使われた。
以下の表２〜４のデータは、鎮痛薬の投与を示すための用語「ＡＤ50」を使用
する。鎮痛薬の投与は少なくとも３０匹の動物（そして投与曲線群からの集計）
からの３つのデータ点を現し、そして前記動物の５０％が鎮痛薬の効果を示す。
表２のデータから理解できるように、ダイノルフィンＡ−（２−１７）は、動
物の体重に対して１．１μモル／ｋｇでｉ．ｖ．で投与されるとき、動物が５分
後に酢酸を注射され、それからリーシ検定により判定されているにもかかわらず
、実験動物の５０％が鎮痛投与であった。計算は、ダイノルフィンＡ類似体（塩
基性化合物）の投与の量は、投与された１％の酢酸の酸度を中和するのには不十
分であるからリーシ検定から示される効果は単なる化学的中和によるものでない
ことを示す。表２のデータによってさらに示されているように、反応の期間は、
酢酸の３０分前に投与されたときに、実質的に同じであるが、６０分で反応の期
間中に鎮痛薬の特性が減退し始めるのを認めることができる。
表２のデータを参照すると、測定された前記鎮痛薬の非オピオイド効果は、ナ
ロキソン（５０μモル／ｋｇ）がダイノルフィンＡ−（２−１７）に関連して投
与されたとき、依然として鎮痛薬特性と実質的に等価な特徴が得られる。ナロキ
ソンは、もちろん、オピオイドレセプタの拮抗質で、このようにこのデータは鎮
痛薬の効力がオピオイドレセプタを通って介在されていないことを明らかにする
。表３に示されているように、投与されたナロキソンの量はμおよびＫオピオイ
ドレセプタで主としてそれぞれ作用し、モルヒネとＵ５０，
４８８Ｈの両方でオピオイド無痛覚の拮抗質として、十分以上のものである。さ
らに表２のデータを参照すると、ペプチド ダイノルフィンＡ−（４−１７）が
、ダイノルフィンＡ−（４−１７）の最初の３アミノ酸残基が欠けていてさえも
、良い鎮痛性を保ち続けていることが理解できる。しかしながら、比較すると、
ダイノルフィンＡ−（７−１７）は、そうではなかった。
表４のデータはモルヒネに耐性のネズミ（前記ネズミは標準的な処置により７
５ミリグラムペレットの内移植によりモルヒネに耐性を与えられたもの）から集
められた。そしてこれらのデータは、モルヒネ耐性動物はｄｅｓ−（Ｔｙｒ）ダ
イノルフィンＡ類似体に交差耐性をもたないことを示している。
要するに、本発明の実施は非オピオイドの無痛覚を提供し、そこでは抗有害受
容は中枢神経に影響を与えない。
本発明は、好ましい特定の発明を参照して説明されているが、説明と例は理解
を容易にするためのものであり、発明の範囲を限定するものでなく、発明の範囲
は添付の請求の範囲により規定されるものと理解されたい。BACKGROUND OF THE INVENTION Technical Field of the Invention The analgesic method invention using the dynorphin analogue is cleaved under the name N-terminal group of the invention relates generally to dynorphin A analogues, and more particularly, analgesic Dinorphin A analogs cleaved at amino terminal groups useful in the method. This invention was made with government support under Grant Numbers NIDA-02643 and NIDA-06011 awarded by the National Health Association. The United States Government has rights in the invention. BACKGROUND OF THE INVENTION Opioids are a wide variety of drugs used clinically as analgesics, including both plant-derived and synthetic alkaloids and peptides that are endogenous to the mammalian brain. Whereas plant-derived synthetic alkaloids have become known and have been used for thousands of years, endogenous opioid peptides were only discovered in the mid 1970's. These are known to have different gene groups in three properties. They are β-endorphin and other peptides derived from proopiomelanocortin, enkephalin derived from proenkephalin A, and dynorphin derived from proenkephalin B. Opioid compounds interact with nerve cells and regulate physiological functions such as pain sensation. Thus, one of the physiological functions attributable to the opioid system is analgesia. Endogenous opioids exist in a variety of forms in the central nervous system and include dynorphin, a series of peptides derived from precursor prodynorphin (proenkephalin B). The first isolated dynorphin has the structure shown (designated SEQ ID NO: 1) and is a 17 amino acid peptide also referred to as "dynorphin A- (1-17)". there were. Over the past decade, various U.S. patents have described and proposed the use of dynorphin. U.S. Pat. No. 4,396,606, issued Aug. 2, 1983, by Goldstein, describes the isolation of a compound having the following structure (hereinafter "Dynorphin A- (1-13)"): doing. This 17 amino acid endogenous peptide fragment was found to be substantially more active than enkephalin and β-endorphin in guinea pig ileum experiments. Compounds containing dynorphin have been proposed as analgesics by interaction with opioid receptor sites, and have been shown to be administered in the same manner as other opioid agonists (eg, morphine). U.S. Pat. No. 4,462,941, issued Jul. 31, 1984 by Inventors Lee et al., Describes these dynorphin A- ( 1-10) Amide analogs do not have significant analgesic activity in opioid tail pat experiments (in the absence of large doses that tend to cause convulsions). Enkephalin analogs that are conformationally enhanced by a cyclic structure (eg, disulfide bridges) are described by US Patent No. 4,518,711 issued May 21, 1985 to the inventors Fulby et al. Thereafter, the dynorphin analog became known as having amino acid residue 5 (usually leucine) and amino acid residue 11 (usually lysine) replaced with cysteine. Similarly, amino acid residue 8 (usually isrosine) and amino acid residue 13 (usually lysine) are replaced by a cysteine in a bridging bond. The crosslinked or cyclic structure aids the stability of the dynorphin analog to biodegradation. Lee et al. In an international application issued under the Patent Cooperation Treaty on December 23, 1993, demonstrated the therapeutic use of N-terminal dynorphin A analogs cleaved with narcotic analgesics, It enhances the activity of narcotic analgesics and prevents withdrawal symptoms (WO 93/25217). However, use in combination with narcotic analgesics for opioid efficacy requires the presence of opioid drugs. Opioid drugs are used clinically as analgesics, but the usefulness of those opioid drugs is limited by the tolerance and dependence usually associated with long-term treatment. Tolerance is defined as an increase in the amount of drug required to achieve a certain level of analgesia, and dependence refers to a condition in which it is necessary to continue taking the drug to prevent withdrawal symptoms. Despite extensive research on these phenomena, little is known about the molecular basis. For example, opioid drugs such as morphine are addictive and have central opioid side effects such as drowsiness and impaired mental activity. Some non-opiate compounds have been shown to relieve chronic pain, such as burns or hyperesthesia. U.S. Patent No. 5,006,510, issued April 9, 1991, by the inventor Ellis, discloses a somatostatin analog compound for topical administration in the treatment of pain where opiates do not substantially alter the patient's pain experience. Is described. Nevertheless, there are a variety of distress conditions that are relatively resistant to the relief of pain medications by narcotic analgesics such as morphine. SUMMARY OF THE INVENTION In one aspect of the invention, peptides are used to relieve pain. Said peptide has at least 6, preferably at least 7 amino acid residues and, for endogenous dynorphin A, des- (Tyr), des- (Tyr-Gly) or des- (Tyr-Gly-Gly). ) Is a dynorphin A analog that is cleaved (with respect to endogenous dynorphin) at the N-terminal group as follows. These peptides are formulated in a pharmaceutical receptor solution or with a pharmaceutical receptor carrier, and are effectively administered to the pain site of the patient. Administration of the dynorphin A analog in the practice of the present invention is preferably in the body tissue, such as a vein, and can be performed intranasally, transdermally in a dosage range of about 50 to 2,000 μg / kg (or by continuous infusion). Includes rectal, subarachnoid, intramuscular, subcutaneous electrical transport, or subcutaneous procedures. Administration is also topical (eg, to wounds and mucous membranes), and oral administration is also possible. The practice of the present invention is generally useful for analgesia, which eliminates pain, and is particularly useful for "neuropathic pain", "neuralgia", "hyperesthesia" (which is extremely painful to ordinary sensory stimuli). Pathological response), “allodynia”, “causalgia” (meaning the pathological reaction of a neuropathy that causes limbs to move), persistent lower back pain, visceral pain, bone pain (for example, often in cancer patients) It is useful for pain of unknown etiology, such as pain after surgery, and wounds from burns. Since the practice of the present invention provides non-opiate analogs, central nervous system side effects (eg, drowsiness, neurological dysfunction, etc.) from drugs such as morphine are avoided. DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The present invention relates to the interaction of a non-opioid receptor with a dynorphin A analog in an analgesic method. In particular, a preferred practice of the invention relates to the use of a dynorphin A analog that is des- (Tyr), des- (Tyr-Gly), or des- (Tyr-Gly-Gly) for dynorphin A. . Dynorphin A- (2-17) is known not to bind μ, δ, or K opioid receptors. However, we note that non-opioid-bound dynorphin A analogs exhibit substantially nociceptive (ie, analgesic) activity, especially when administered to body tissues (eg, vein (iv)). Found to show. This potency is maintained in animals that are resistant to morphine. That is, cross-resistance is lacking. At this time we do not know the nature of non-opioid receptors with which dynorphin A analogs interact. However, data obtained from in vivo assays used to demonstrate the activity of non-opioid analgesics suggest that practice of the invention may be useful in relieving pain where analgesic effects are not exhibited by opioid receptors. It is shown. For example, many patients suffer from pain associated with a disorder or disease that partially or completely obstructs axons of the nerve (eg, painful neuropathy). Following neuropathy, the regenerating tips of damaged major afferent axons develop abnormal properties, such as spontaneous inflammation or symptoms of abnormal sensitivity to certain stimuli . It is believed that axons with such abnormal properties exist in other conditions, such as diabetes. Among the symptoms of painful peripheral neuropathy, they are usually categorized based on related illnesses, such as the illusion of nerve transection. These types of pain are often not relieved by opioid analgesics and are relatively resistant. The peptides used in practicing the present invention are those having at least 6, preferably 7 amino acids. In one aspect of the invention, suitable peptides are those having an amino acid residue analog of endogenous dynorphin A (SEQ ID NO: 1), but preferably the peptide used has the following SEQ ID NO: ID NOS: des- (Tyr), indicated by 4-12 amino acid residues. We may refer to SEQ ID NOS: 4-12 peptides from dynorphin A- (2-8) to dynorphin A- (2-16), respectively. In addition, species that are known to those of skill in the art (eg, some of them are described in US Pat. No. 4,462,941) are within the scope of these suitable peptides. Yet further, in SEQ ID NOS: 4-12, one or two of the residues are replaced with the same or different amino acid residues in the D configuration (enhancing stability in vivo), for example, the N-terminal The Gly group may be substituted by D-Ala or modified for conformational stability or rigidity, for example, a number of specific amino acid residues may have cyclic structures or bridges (eg, disulfide bridges). Replaced by a formable moiety. Illustrative such bridged dynorphin A analogs are the standard 5-position leucine and the 11-position lysine (these positions are those referred to in endogenous dynorphin) by cysteine. Substituted, their disulfide crosslinking confers conformational stability. All peptides used in practicing the present invention have a C-terminal and / or N-terminal group containing a protecting group, for example, the N-terminal group is acetylated. All peptides are also used in free acid or amide form. The des- (Tyr) peptide of the present invention also has no glycine residue at the first or second side of Tyr of endogenous dynorphin A, that is, SEQ ID NOS: 13 to 21 or SEQ ID NOS: As shown in ID NOS: 22 to 29, respectively, it is des- (Tyr-Gly) or des- (Tyr-Gly-Gly), and as already described in SEQ ID NOS: 4 to 12, To increase conformational stability or rigidity, the des- (Tyr-Gly) peptide also has a Gly of the N-terminal group substituted by D-Ala, and has a C-terminal and N-terminal The terminal group or either contains a protecting group known to those of skill in the art (eg, to prevent degradation of the peptide in the body), and the peptide also has a free acid. In amide form. Des- (Tyr-Gly) We may refer to SEQ ID NOS: 13-21 peptides as dynorphin A- (3-9) through dynorphin A- (3-17), respectively. Des- (Tyr-Gly-Gly) We may refer to SEQ ID NOS: 22-29 peptides as dynorphin A- (4-10) through dynorphin A- (4-17), respectively. des- (Tyr) dynorphin A- (2-17) is also useful in the practice of the present invention (SEQ ID NO: 30), is known to those skilled in the art, and has various Has types and decorations. All peptides suitable for practicing the present invention are readily prepared synthetically, for example, by solid phase peptide synthesis techniques. Chloromethylated resin or hydroxymethyl resin is used as the resin support, and the peptide cleaved from the resin support is then converted to a carboxyl-terminal benzyl by a method well known in the art to convert the carboxyl terminus of the peptide into an amide form. It is easily converted to the ester form. Table 1 briefly describes the peptides that are effective for analgesics, but shows the properties of non-opioids in practicing the invention as set forth in SEQ ID NOS: 22-29, Probably a new peptide. Researchers in the field of cloning the complementary DNA encoding opioid receptors have recently described that des- (Tyr) dynorphin has no effect in assays with various ligands (Zai et al. Et al., Bulletin of the National Academy of Sciences, 89, 4124-4128 (1992)). However, the des- (Tyr) dynorphin peptides useful in practicing the present invention are not only lacking the N-terminal tyrosine, but also, in fact, the des- (Tyr- The Gly-Gly) dynorphin peptide lacks the first three N-terminal amino acid residues. Nevertheless, these novel peptides have substantial analgesic properties that are useful in treating pain that is relatively opiate resistant. Thus, the present invention is a new method of obtaining effective analgesia with complete non-opioid compounds. Thus, the practice of the present invention avoids addiction, tolerance, dependence, and central opioid side effects, which are serious obstacles in using opioid drugs. The peptides of the present invention are preferably formulated with a pharmaceutical receptor solution or carrier, and are administered in such a solution or carrier. Thus, depending on the mode of administration, the peptides may be formulated in a variety of physiologically acceptable carriers, such as saline or phosphate buffered saline, and may be formulated with physiological receptor excipients, such as glucose, mannitol, and the like. Agent. Administration is by subcutaneous electrotransport (also referred to as introducing the drug as an ionized substance by applying a direct current without destroying the skin). For example, a means for administering such drugs is described in US Pat. No. 5,312,326 issued May 17, 1994 to Myers et al. Other combinations suitable for selective drug administration are U.S. Pat. No. 5,290,240, issued Mar. 1, 1994, issued to Hores, and Feb. 22, 1994 issued to Hawke et al. No. 5,288,289. Experimental Randomly bred male ICR rats (Sasco, Omaha, Nebraska) weighing 20-25 g were used in all experiments. At least one day prior to the experiment, all animals were fed and watered ad libitum and housed in controlled animal rooms at room temperature (22 ± 1 ° C.) and humidity (40-50%). Each rat was used only once. The abdominal extension (leish) assay, proposed by Hayashi and Takemori (1971), was used as an anti-nociceptive assay. Mice were injected with 10 ml / kg of 0.6% acetic acid through the peritoneum and the number of Leish responses per animal was counted for 6 minutes starting 5 minutes after acetic acid injection. One leish was defined as a wave of contraction of the abdominal musculature followed by stretching the posterior limb. The number of leish per animal is + S. E. FIG. The antinociceptive activity, given as the mean of, is expressed as a decrease in the percentage of the mean of leish observed in drug-treated animals compared to the mean of leish in the control group treated with saline. You. Drug administration was timed so that a peak effect occurred at the center of the observation period. From ten rats at three dose levels were used to determine the dose response curve and ED 50 medicine. Finyi parallel line assay ED 50 values (1964), was used to assess the 95% confidence intervals and leading the ratio. The data in Table 2-4, below, uses the term "AD 50" for indicating the administration of analgesics. Administration of the analgesic reveals three data points from at least 30 animals (and aggregation from the administration curve group), and 50% of the animals show analgesic effects. As can be seen from the data in Table 2, dynorphin A- (2-17) was administered at 1.1 μmol / kg i.m. v. When administered with, the animals were injected with acetic acid 5 minutes later, and then 50% of the experimental animals received analgesic treatment, as determined by Leish assay. Calculations show that the effect shown by the Rishi test is merely chemical, since the dose of dynorphin A analog (basic compound) is not sufficient to neutralize the acidity of the 1% acetic acid administered. Indicates that it is not due to neutralization. As further shown by the data in Table 2, the duration of the response is substantially the same when administered 30 minutes prior to acetic acid, but the properties of the analgesic during the period of the reaction at 60 minutes. Can begin to decline. Referring to the data in Table 2, the non-opioid effects of the analgesics measured were still the analgesic properties when naloxone (50 μmol / kg) was administered in conjunction with dynorphin A- (2-17). Is obtained. Naloxone is, of course, an antagonist of the opioid receptor, and thus this data reveals that the efficacy of the analgesic is not mediated through the opioid receptor. As shown in Table 3, the amount of naloxone administered acts primarily at the μ and K opioid receptors, respectively, and is more than sufficient as an opioid analgesia antagonist for both morphine and U50,488H. . Still referring to the data in Table 2, the peptide dynorphin A- (4-17) retains good analgesic properties even though the first three amino acid residues of dynorphin A- (4-17) are missing. I can understand that However, by comparison, Dynorphin A- (7-17) was not. The data in Table 4 were collected from morphine-resistant rats, which had been rendered morphine-resistant by implantation of a 75 milligram pellet by standard procedures. And these data indicate that morphine-resistant animals do not have cross-resistance to des- (Tyr) dynorphin A analogs. In essence, the practice of the present invention provides non-opioid analgesia, where anti-nociception does not affect the central nervous system. Although the invention has been described with reference to preferred specific inventions, the description and examples are for ease of understanding and do not limit the scope of the invention, which is set forth in the following claims. Should be understood to be defined by the range of
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(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ
Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ
，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，
ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，
ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ
Ｂ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ
，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，
ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，Ｖ
Ｎ
(72)発明者 ゴールドスタイン、 アブラム
アメリカ合衆国、94305、カリフォルニア
州 スタンフォード、ドロレス ストリー
ト 735────────────────────────────────────────────────── ───
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(81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE,
DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, M
C, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF, CG
, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN,
TD, TG), AT, AU, BB, BG, BR, BY,
CA, CH, CN, CZ, DE, DK, ES, FI, G
B, HU, JP, KP, KR, KZ, LK, LU, LV
, MG, MN, MW, NL, NO, NZ, PL, PT,
RO, RU, SD, SE, SK, UA, US, UZ, V
N
(72) Inventor Goldstein, Abram
United States, 94305, California
Dolores Street, Stanford
G 735