JPH10501424A

JPH10501424A - A new strain of the yeast Candida salmon (Cyto and Ota) van Youden and Buckley and its use as a biological regulator of postharvest fungal disease of fruits

Info

Publication number: JPH10501424A
Application number: JP8528966A
Authority: JP
Inventors: インマキュラーダビニャス・アルメナール、; ホセプウサル・イ・ロディエ、; ネウステイヒード・イ・エスパサ、; ビンセンテサンチス・アルメナール、
Original assignee: シプカン・イナグラ・エス・エー
Priority date: 1995-03-28
Filing date: 1996-03-25
Publication date: 1998-02-10
Anticipated expiration: 2016-03-25
Also published as: AU706874B2; IL117678A; WO1996030495A1; ES2201174T3; EP0781843B1; NZ303679A; AR002973A1; BR9606242A; DE69628998D1; ZA962432B; ES2089981A1; EP0781843A1; JP3585931B2; DE69628998T2; ATE244757T1; CA2191252A1; ES2089981B1; IL117678A0; AU5005696A

Abstract

(57)【要約】酵母カンジダ・サケ（サイトウ・アンド・オータ）ファン・ユーデン・アンド・バックレイ（Candida sake（Saito and Ota）van Uden and Buckley）の新しい株と、果実の収穫後真菌疾病の生物学的制御物質としてのその使用が開示される。寄託番号ＣＥＣＴ−１０８１７で寄託されたこの株は、収穫後のおよび保存中の果実の腐敗に関与する真菌の拮抗剤として使用される。この拮抗剤の有効性は非常に高く、最も広く使用されている抗真菌化学物質の有効性に匹敵する。これは、低温および低酸素空気の保存条件下で、特に強い活性を示す。この拮抗剤は、特に真菌種ボツリチス・シネレア（Botrytis cinerea）、ペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expansum）およびリゾプス・ニグリカンス（Rhizopus nigricans）により引き起こされる腐敗の防除に有効である。 (57) [Summary] A new strain of the yeast Candida sake (Saito and Ota) van Uden and Buckley, as a biological regulator of fungal disease after fruit harvest Is disclosed. This strain, deposited under accession number CECT-10817, is used as an antagonist of fungi involved in post-harvest and storage fruit rot. The efficacy of this antagonist is very high, comparable to that of the most widely used antifungal chemicals. It exhibits particularly strong activity under low temperature and low oxygen air storage conditions. This antagonist is particularly effective in controlling spoilage caused by the fungal species Botrytis cinerea, Penicillium expansum and Rhizopus nigricans.

Description

【発明の詳細な説明】酵母カンジダ・サケ（サイトウ・アンド・オータ）・ファン・ユーデン・アンド・バックレイの新しい株、並びに果実の収穫後真菌疾病の生物学的制御物質としてのその使用〔発明の分野〕本発明は、カンジダ・サケ（Candida sake）の新しい株と、保存条件下で果実が腐敗するのを防止することを目的とした、収穫後の果実の真菌疾病の生物学的制御における拮抗剤としてのその使用に関する。〔技術の現状〕果実の収穫後の疾病は、毎年全世界の総収穫量の１５％〜２０％の量で、農業に損害を与えている。収穫後の果実の腐敗を引き起こす真菌を防除するために現在最も広く使用されているシステムは、殺真菌剤を用いた収穫物の処理による化学的制御である。殺真菌剤の使用は世界中に普及しており、ヨーロッパおよびアジアにおける殺菌剤市場の２６％、北米市場の６％を占めると推定されている。この殺真菌剤の大規模な使用により多くの問題が発生し、例えば耐性病原株の出現（このため処理コストが上昇し、腐敗による損失が増加する）、および果実への殺真菌剤残存量の増加（これは衛生問題を引き起こし、衛生上の制限が厳しい国への果実の輸出を困難にする）の問題が発生している。この問題に直面して、収穫後の果実の疾病を制御するための新しい代替法を求めて数年前頃から研究が始まり、その最も顕著な進展の１つは、腐敗を引き起こす真菌の生物学的制御である。この生物学的制御は、病原性真菌の増殖と作用に及ぼすい幾つかの微生物の阻害作用に基づいている。すなわち、Janisiewicz，W .J.，Phytopathology 77:481-485(1987)は、リンゴの青カビの生物学的制御処理を報告し、Janisiewicz，W.J．and Roitman，J.，Phytopathology 77:1776(1987 )は、リンゴの腐敗を防除するための収穫後の生物学的制御物質としてのシュードモナス・セパシア（Pseudomonas cepacia）の使用を報告しており、Janisiewi cz，W.J．and Roitman，J.，Phytopathology 78:1697-1700(1988)は、リンゴとナシの灰色のカビと青カビを防除するための収穫後の生物学的制御物質としてのシュードモナス・セパシア（Pseudomonas cepacia）の使用を報告している。果実の腐敗を引き起こす真菌の拮抗剤（アンタゴニスト）の中で、酵母は、長時間果実の表面にコロニーを形成し、細胞外多糖を産生してその生存を増強し利用できる栄養物質をより早く利用して、真菌のコロニー形成と胎芽の発芽を押さえる点において、特に興味深い。すなわち、McLaughlin，R.J．et al.，Phytopa thology 80:456-461（1990）は、リンゴの収穫後の疾病の生物学的制御における、カンジダ（Candida）種酵母の濃度の影響を報告した；特許出願ＰＣＴＷＯ− ９１／１６４１は、植物生産物の収穫後の疾病の生物学的制御のための物質として、数種類の酵母(中でも、カンジダ・ギリエルモンジ（Candida guilliermondi i）に属する株または単離物)の使用を記載している。この単離物は、特に以下の病原性真菌に対して活性を示す：ペニシリウム・イタリカム（Penicillium ital icum）、ペニシリウム・ジギタツム（Penicillium digitatum）、ボツリチス・シネレア（Botrytis cinerea）、リゾプス・ストロニファー（Rhizopus stoloni fer）、ゲオトリチュム・カンジヅム（Geotrichum candidum）、ペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expansum）およびアルテルナリス・アルテルナータ（Alternaris alternata）。米国特許ＵＳ−５０４１３８４（これは前述のＰＣＴ特許出願と優先権が同じである）は、カンジダ・ギリエルモンジ（Candida guilliermondii）の３つの具体的な株の活性に注目している。特許出願ＰＣＴＷＯ−９２／１８００９は、果実の収穫後の疾病の生物学的制御剤として酵母の使用を記載しており、特にロードトルラ・グルチニス（Rhodot orula glutinis）、ロードトルラ・ムシラギノーサ（Rhodotorula mucilaginosa ）、カンジダ・パラプシロピス（Candida parapsilopis）およびカンジダ・ギリエルモンジ（Candida guilliermondii）の単離物を引用している。最後に、ＮＴＩＳ（米国技術情報サービス）文書番号ＰＢ９２−１０２３３４として公表された、米国特許出願ＵＳ−７−７４５７９６において、Wilson，C.L.は、リンゴ、モモおよびオレンジのような果実の収穫後の疾病に対する生物学的制御剤として、トマトの皮から単離されたカンジダ・サケ（Candida sake）の３つの株の使用を記載している。これらの株は、ブダペスト条約に従って、61604イリノイ州ペオリア（Peoria）の米国農務省北部研究センター（The Northern Reginonal Researc h Center）に、寄託番号ＮＲＲＬＹ−１８８４４、ＮＲＲＬＹ−１８８４５、およびＮＲＲＬＹ−１８８４６として寄託された。しかし、同じ種であっても、異なる単離物または異なる株の間で抗原活性の大きな差が証明されており、収穫された果実の種々の保存条件下でのその有効性に関する情報が欠如しているため、研究を続けて、厳しい保存条件下で防除作用を示すことができ、さらに有効で作用が長く持続する生物学的制御剤を見いだすことが必要である。〔発明の目的〕本発明の目的は、収穫後の果実の腐敗に関与する病原性真菌の生物学的制御において、非常に有効な拮抗剤（アンタゴニスト）として作用することができ、低温と低酸素空気下でもその有効性を保持する、カンジダ・サケ（Candida sake）の新しい株を提供することである。本発明のさらなる目的は、収穫した果実の保存中の腐敗を防止するための、前記拮抗剤（アンタゴニスト）の使用に関する。本発明のさらに別の目的は、種々の保存条件下での収穫された果実のより良い保存法を提供することである。〔図面の簡単な説明〕本発明のより良い理解のために、本明細書には７枚の図面が添付されている。以下にその概要を説明するが、これは本発明を限定するものではない。図１は、低温条件下での、ＮＹＤＢ培地中のＣＥＣＴ−１０８１７株の増殖曲線のグラフである。図２は、１５℃、２６℃および３０℃での、ＮＹＤＢ培地中のＣＥＣＴ−１０８１７株のグラフである。図３は、３４℃および３７℃の温度での、ＮＹＤＢ培地中のＣＥＣＴ−１０８１７株のグラフである。図４は、２５℃での、「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicious″）リンゴでの、ＣＥＣＴ−１０８１７株の細胞数増加のグラフである。図５は、以下の低温保存条件下での、「ゴールデンデリシャス」（″Golden D elicious″）リンゴでの、ＣＥＣＴ−１０８１７株の細胞数増加のグラフである：通常の低温（１℃の温度、および酸素含量２１％の空気中）；制御された空気中（１℃の温度、および酸素含量３％の空気中）；および制御された極低酸素空気中（１℃の温度、および酸素含量１％の空気中）。図６は、ボツリチス・シネレア（Botrytis cinerea）を接種した「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicious″）リンゴにおける、拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７の接種により引き起こされた、腐敗の低下パーセントの３次元の棒グラフの模式図である。データは、２０℃で６日間インキュベートして得られた。図７は、ペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expansum）を接種した「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicious″）リンゴにおける、拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７の接種により引き起こされた、腐敗の低下パーセントの３次元の棒グラフの模式図である。データは、２０℃で７日間インキュベートして得られた。図８は、リゾプス・ニグリカンス（Rhizopus nigricans）を接種した「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicious″）リンゴにおける、拮抗剤ＣＥＣＴ− １０８１７の接種により引き起こされた、腐敗の低下パーセントの３次元の棒グラフの模式図である。データは、２０℃で６日間インキュベートして得られた。図９は、ペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expansum）を接種した「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicious″）リンゴにおける、拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７の接種により引き起こされた、腐敗の低下パーセントの３次元の棒グラフの模式図である。データは、以下の保存条件下で６０日間インキュベートして得られた:低温条件下（１℃の温度、および酸素含量２１％の空気中）；制御された空気中（１℃の温度、および酸素含量３％の空気中）；および制御された極低酸素空気中（１℃の温度、および酸素含量１％の空気中）。図１０は、ボツリチス・シネレア（Botrytis cinerea）を接種した「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicious″）リンゴにおける、拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７の接種により引き起こされた、腐敗の低下パーセントの３次元の棒グラフの模式図である。データは、通常の低温条件下（１℃の温度、および酸素含量２１％の空気中）で６０日間インキュベートして得られた。図１１は、ペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expansum）を接種した「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicious″）リンゴにおける、拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７にリンゴを浸して引き起こされた、腐敗の低下パーセントの３次元の棒グラフの模式図である。データは、通常の低温条件下（１℃の温度、および酸素含量２１％の空気中）で６０日間大規模試験して得られた。図１２は、ペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expansum）を接種した「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicious″）リンゴでの、７×１０⁶c .f.u./mlの拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７を噴霧し、化学的殺真菌剤イマザリル（ Imazalil）を７．５％の濃度で適用して引き起こされた、腐敗の低下パーセントの３次元の棒グラフの模式図である。比較データは、２０℃の低温条件下で８日間インキュベートして得られた。図１３は、収穫、取り扱いおよび通常の低温条件下（１℃の温度、および酸素含量２１％の空気中）で保存の間、畑で噴霧して適用した拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７の、「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicious″）リンゴでの細胞数変化のグラフである。〔発明の説明〕本発明の出願人は、広範囲の温度と酸素空気中において収穫後の果実の疾病を引き起こす真菌種に対する拮抗剤（アンタゴニスト）としての有効性を示し、真菌種の生物学的制御の工業的利用を可能にし、および保存条件下での腐敗を防止する菌株として、カンジダ・サケ（サイトウ・アンド・オータ）ファン・ユーデン・アンド・バックレイ（Candida sake（Saito and Ota）van Uden and Buckle y）の新しい株の単離に成功した。本発明の目的の株は、無菌水で繰り返し洗浄することによりリンゴの表面から単離され、この培養物を、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規定に従い、バレンシア（Valencia）大学生物科学部（Faculty of Biological Scineces）（46100、ブルジャソット（Burjasot）（バレンシア）、スペイン）の国際的寄託機関であるColceccion Espanola de Cultivos Tipo（スペイン標準培養物保存機関(Spanish Collection of Standard Cultures)）に寄託し、寄託番号ＣＥＣＴ−１０８１７を付与された。ＣＥＣＴ−１０８１７単離物は、オランダの″Centraalbureau voor Schimmel cultures″が、ＮＹＤＡ培地（酵母エキス、ブドウ糖および寒天よりなる）、およびＮＹＤＢ培地（酵母エキスのブロース、およびブドウ糖よりなる）中で培養して、カンジダ・サケ（Candida sake）と同定した。単離物ＣＥＣＴ−１０８１７は、縁が平滑で中央部が少し盛り上がり、培養物中で偽菌糸を有する、クリーム様の白色の丸い明確なコロニーを形成する。ＣＥＣＴ−１０８１７株は、表１と２に詳述する生化学的特徴を示す。さらにＣＥＣＴ−１０８１７株は、０．５g/lの濃度の抗生物質ストレプトマイシンに対して耐性である。ＮＹＤＢ培地（ｐＨ７）中でＣＥＣＴ−１０８１７株微生物の「インビトロ」増殖は、好気性条件下で広範囲のインキュベート温度で起き、１℃〜３４℃の間の温度で充分な増殖を示す。図１、図２、および図３で観察されるように、１℃ で細胞数が最大になり、これは試験した他のどの温度で起きるよりも大きい。図４と図５のグラフに示されるように、果実に微生物を接種すると、好気的条件下で、周囲温度（２５℃）でも１℃の温度でも、周囲空気（２１％酸素）または３％酸素および１％酸素の制御された空気（極低酸素）（これらは、果実園芸センターの保存条件である）でも大きな増殖を示す。ＣＥＣＴ−１０８１７株の単離物は、研究室でも工業的使用においても、適切な培地中で、専門家によく知られたの従来法を用いて得られる。例えば、ＮＹＤＢ培地（ｐＨ７）中で、容器を振盪し通気して、１℃〜３４℃の温度で、２０〜５０時間、元の株を培養することにより得られる。ＮＹＤＢ培地の最大細胞数は、２５℃で３７時間で達成される。インキュベート時間終了後、沈降法、遠心分離またはろ過の通常法により、培養培地から微生物を分離して、培養物を例えばシリカゲルで凍結して保存することができる。拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７は、任意の従来法で果実の表面に適用される。例えば、培養物を水に分散したものを調製し、収穫前に畑で果実に噴霧または散布するか、または収穫した果実の処理工程の間、保存の前に、処理を適用（この場合、処理も浸漬により行われる）される。図１３から明らかなように、果実が木の上にある時噴霧により処理すると、ＣＥＣＴ−１０８１７株の単離物は、果実の収穫および保存工程の間、果実の表面でその生存活性を維持するかまたは細胞数を増加させる。果実の処理のための適用分散液中の拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７の有効濃度は、果実のタイプ、その成熟度、果実上の病原性真菌の濃度、果実に影響する傷害のタイプ、保存温度および湿度などの因子の関数として変動する。有効濃度の範囲は、通常１０⁵〜１０⁷c.f.u./ml（コロニー形成単位/ml）であるが、この範囲は本発明の目的を限定するものではない。ＣＥＣＴ−１０８１７株の単離物は、果実の非常に多数の病原性真菌種の生物学的制御において非常に有効であり、病原性真菌としては、ボツリチス・シネレア（Botrytis cinerea）、ペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expans um）、およびリゾプス・ニグリカンス（Rhizopus nigricans）を含むが、これらに限定されない。果実の腐敗の防止における有効性は、温度や酸素の周囲条件下での保存に限定されず、微生物の前述の特徴のため、工業的果実園芸センターで通常使用される低温保存と制御された空気条件下でも優れた結果を示す。病原性真菌の制御におけるＣＥＣＴ−１０８１７株の単離物の有効性は、イミダゾール（１−［２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（２−プロペニルオキシ）エチル］−１Ｈ−イミダゾール）由来の化学物質である殺真菌剤、即ちイマザリル（Imazalil）の作用に匹敵する。イマザリル（Imazalil）は、果実の収穫後に適用するための、世界中で最も広く使用されている殺真菌剤の１つである。ＣＥＣＴ−１０８１７株単離物は、イマザリル（Imazalil）の有効な代替物となり、これはイマザリル（Imazalil）に特徴的な毒性がないという利点を有する。ＣＥＣＴ−１０８１７株の単離物は、すべてのタイプの果実の任意の変種（特に、リンゴ、ナシおよびマルメロのような種子果実；オレンジ、レモンおよびマンダリンのような柑橘果実；モモ、アプリコットおよびプラムのような核果(sto ne fluit);およびイチゴのような他の果実）の腐敗を防ぐのに有効に使用できる。本発明の発明者は、病原性真菌であるリゾプス・ニグリカンス（Rhizopus nig ricans）種に対する具体的な拮抗剤生物学的制御物質に関する報告は、本発明に至るまで不知である。この種は、ペクチン溶解性酵素を有し、発症のために傷害を必要とする感染がなくても果実の組織を破壊するため、病原性が非常に強い。このために、感染した果実に健康な果実が接触すると、その腐敗を引き起こす( 巣効果（nest effect）)。さらにこの種が引き起こす腐敗は、非常に急速に進展し、果実の組織は非常に水っぽく柔らかくなり、その結果多量の汚染した液体を出すため、他の保存箱に感染が容易に広がる。このため、工業的低温保存チャンバー中のリゾプス・ニグリカンス（Rhizopus nigricans）の存在は、非常に高率に腐敗を引き起こす。さらに本願の発明者の知る限り、リゾプス・ニグリカンス（Rh izopus nigricans）に対する特異的な化学的殺真菌剤は存在しない。このことは、例えば果実園芸生産の多い国であるスペインで、真菌種リゾプス・ニグリカンス（Rhizopus nigricans）は最も危険な病原体の１つになりつつあり、種子果実の収穫後に重大な損失を引き起こしていることを意味する。従って本発明の目的である拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７は、前述の種リゾプス・ニグリカンス（Rhizopus nigricans）の真菌により産生される悪影響を防ぐために報告された最初の有効処理法である。〔実施例〕以下に概説する実施例は、本発明を理解するための補助となるものであり、決して本発明を限定するものと解釈してはならない。実施例１．ＣＥＣＴ−１０８１７の水性分散液物の作成拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７を、ＮＹＤＡ培地を含む試験管中に接種し、２５ ℃で２４〜４８時間インキュベートした。次にこの試験管の内容物を用いて、５０mlのＮＹＤＢ培地の入った三角フラスコに接種し、１５０rpmのオービタル攪拌器中において２５℃で２４時間インキュベートした。次に、フラスコの内容物を６，０００rpmで１０分間遠心分離し、浮遊部分を除去した。沈殿物を５０ml の無菌蒸留水に分散し、この分散液を用いて、拮抗剤の濃度の間接的な測定値として、分光光度計中での微生物懸濁液の透過率を計算して、所望の濃度の拮抗剤を調製した。透過率と微生物濃度の等価解析は、トーマ（Thoma）の微生物カウントチャンバーを用いて行なった。濃度は、c.f.u./ml（コロニー形成単位/ml）として表した。実施例２．周囲温度で保存した果実に及ぼすＣＥＣＴ−１０８１７の有効性この試験は、各リンゴについて約３×３×３mmの大きさの２つの穴を開けてから、水で洗浄し乾燥させた健康な「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicio us″）リンゴについて行なった。２つの切り込みはリンゴの同じ側に行い、１つは上方に１つは下方に入れた。試料単位は３つのリンゴであり、各処理について３回の繰り返しを行なった。試験した３種類の真菌種は、ボツリチス・シネレア（Botrytis cinerea）、ペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expansum）、およびリゾプス・ニグリカンス（Rhizopus nigricans）であり、これらの胞子の懸濁液の力価測定は、ツイーン８０を含有する無菌蒸留水中にコロニーを掻き取って、コロニーを、ＰＤＡ培地（ジャガイモ、ブドウ糖および寒天）中に接種した５〜７日令の若い培養物を用いて、２８℃でインキュベートして行なった。目的の濃度（c.f.u./ml で表す）を設定して、トーマ（Thoma）チャンバー中で、胞子数を数えた。前述のように調製した３つのリンゴのバッチに、２５μlのＣＥＣＴ−１０８１７拮抗剤懸濁液を、２．６２×１０⁶c.f.u./ml、７．０×１０⁶c.f.u./mlおよび１．１５×１０⁷c.f.u./mlの濃度で接種した。果実が乾燥したら、そこに選択した３つの種の病原体の力価を測定した懸濁液２０μlを、１０³c.f.u./ml、１０⁴ c.f.u./mlおよび１０⁵c.f.u./mlの濃度で接種した。これと平行して、対照試験を準備し、病原体の力価を測定した懸濁液と無菌蒸留水のみをリンゴに接種した。処理したすべてのリンゴを小室に入れ、乾燥させ、次に箱に入れて２０℃で周囲温度でインキュベートした。ペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium ex pansum）を接種した果実では、インキュベート時間は７日間であり、ボツリチス・シネレア（Botrytis cinerea）の場合はこれは６日間であり、リゾプス・ニグリカンス（Rhizopus nigricans）の場合は、５日間であった。インキュベート期間は、対照のリンゴが大きな腐敗直径を示すまでに要する時間に基づいて設定した。このインキュベート期間後、作成したすべての穴の腐敗の直径を測定して、結果を読んだ。種々の繰り返し試験の腐敗した直径の読み値を、分散分析に基づく統計解析を行い、分散分析値が有意であった（α＜０．０１〜α＜０．０５）場合は、ダンカンマルチプルレンジ試験（Duncan Multiple Range Test）を用いて平均値の分離を行い、その結果をアルファベットの小文字（ａ、ｂ、ｃ、ｄなど）で表し、同じ文字の処理の場合は統計的に同じであるとし、異なる文字の場合は統計的に異なるものとした。表３は、ボツリチス・シネレア（Botrytis cinerea）の生物学的制御について得られた結果を示し、表４はペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expa nsum）の結果であり、表５は、リゾプス・ニグリカンス（Rhizopus nigricans）の結果である。この表の結果をグラフで示したものが、それぞれ図６、７、および８である。図６、図７および図８のグラフとともに、表３、表４および表５の前述のデータは、試験した病原性真菌の３つの種の制御、従って果実の腐敗の制御における拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７の高度の有効性を示している。得られた結果を米国特許出願ＵＳ−７−７４５７９６（ウィルソン（Wilson）の記載と比較すると、特に重要なことは、ボツリチス・シネレア（Botrytis cin erea）およびペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expansum）の制御において、カンジダ・サケ（Candida sake）ＣＥＣＴ−１０８１７株の作用は、前記特許出願に記載のＮＲＲＬＹ−１８８４４、ＮＲＲＬＹ−１８８４５、およびＮＲＲＬＹ−１８８４６株より、明らかに大きいことである。実施例３．低温および異なる酸素空気中で保存した果実に及ぼすＣＥＣＴ−１０８１７の有効性実施例２に記載の方法の後、１回の繰り返しあたり２０個の「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicious″）リンゴと処理あたり３回の処理で、試験を行なった。拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７の水性分散液の２５μlを、実施例２で使用した３つの濃度で、そして１０⁴c.f.u./mlの濃度の２０μlのペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expansum）接種物を接種した。次に接種したリンゴの３つのバッチを、分離し、６０日間保存した。１つのバッチは、通常の低温保存条件（１℃および周囲酸素）、他のバッチは制御された空気条件（１℃および３％酸素）、そして最後のバッチは極低酸素条件（１℃と１％酸素）で保存した。実施例２の方法と同様に読み、統計処理した結果を、表６、表７および表８に示す。これらをまとめたグラフを図９に示す。上記の表および図９に示すように、得られた結果は、通常の低温保存条件下でペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expansum）の制御において高い効率が得られ、この効率は、試験を低温保存条件と低酸素環境条件下で行う時、顕著に上昇することを示している。実施例４．通常の低温保存条件下でのボツリチス・シネレア（B．cinerea）の制御ボツリチス・シネレア（Botrytis cinerea）接種物２０μlを、１０⁴c.f.u./m lの濃度で用いて、実施例３と同じ条件下で試験を行なった。試験は、通常の低温保存条件（１℃および周囲酸素）で行なった。前述の統計処理法で得られた結果を表９に、そしてグラフを図１０に示す。腐敗直径の低下の結果は、優れたものであり、特に７×１０⁶c.f.u./mlの濃度のＣＥＣＴ−１０８１７インヒビターで優れていた。実施例５．ペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expansum）の大規模試験での制御この試験のために、以下の方法で拮抗剤の大規模な分散液を調製した。拮抗剤ＣＥＣＴ−１０８１７を、ＮＹＤＡ培地を含有する試験管に接種し、２５℃で２４〜４８時間インキュベートした。この試験管の内容物を、撹拌器と通気装置を取り付けた、２，０００mlのＮＹＤＢ培地の入った発酵槽に入れて、２５℃で３７時間インキュベートした。次に発酵槽の内容物を６，０００rpmで１０分間遠心分離し、浮遊物質を除去した。沈殿物を無菌蒸留水に分散し、分散液を使用して、実施例１と同じ方法で目的の濃度の拮抗剤を調製した。１回の繰り返し当たり１箱の「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicious ″）リンゴ（７０個）を使用し、１回の処理当たり４回の繰り返しを行なった。畑で集めたリンゴを、その赤道線に沿ってメスで（１個当たり４カ所に）切り込みを入れ、７×１０⁵と７×１０⁶c.f.u./mlの濃度の拮抗剤分散液を含有する浴に果実の箱を入れて、ＣＥＣＴ−１０８１７拮抗剤で処理した。未処理の対照バッチも使用した。次にリンゴが乾燥した後、１０⁴c.f.u./mlの濃度のペニシリウム・エクスパンスム（Penicillium expansum）の胞子の力価を測定した分散液を含むバッチに箱を入れた。リンゴの箱を低温保存条件（１℃と周囲酸素）下で６０日間保存し、保存期間終了後、前記の実施例と同じ条件で結果を読み、同じ統計処理を行なった。結果を表１０に、そしてグラフを図１１に示す。前述の表や図が示すように、前述の試験で得られたペニシリウム・エクスパンスム（P．expansum）の優れた制御結果が、大規模試験で確認された。７×１０⁶ c.f.u./mlの濃度のＣＥＣＴ−１０８１７拮抗剤を用いる時、腐敗直径の低下は実質的に９０％であることは、注目すべきである。実施例６．殺真菌剤イマザリル（Imazalil）との比較１回の繰り返し当たり２０個の「ゴールデンデリシャス」（″Golden Delicio us″）リンゴを使用し、１回の処理当たり４回の繰り返しを行ない、各リンゴに５つの切り込みを入れて試験を行なった。ＣＥＣＴ−１０８１７拮抗剤とイマザリル（Imazalil）殺真菌剤は、これらの溶液または分散液にリンゴを浸すことにより適用した。拮抗剤は７×１０⁶c.f. u./mlの濃度で、イマザリル（Imazalil）は７．５重量％の濃度で適用した。次にリンゴに、１０⁴c.f.u./mlの濃度のペニシリウム・エクスパンスム(Penic illium expansum)病原体を接種した。拮抗剤で処理したリンゴの１つのバッチは、処理後２４時間目に病原体を接種した。果実を２０℃で８日間インキュベータし、次に結果を読み統計的に処理した。得られた結果を表１１に、そしてグラフを図１２に示す。処理後２４時間目に拮抗剤を接種すると、ＣＥＣＴ−１０８１７拮抗剤とイマザリル（Imazalil）の有効性は実質的に同じであることがわかる。ＣＥＣＴ−１０８１７株の寄託に関する情報この微生物は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規定に従い、バレンシア（Valencia）大学生物科学部（Faculty of Biologi cal Scineces）微生物学科（46100、ブルジャソット（Burjasot）（バレンシア））にある、Colceccion Espanola de Cultivos Tipo（ＣＥＣＴ）に寄託した。１９９４年７月６日に寄託し、寄託番号ＣＥＣＴ−１０８１７を付与された。前記のブダペスト条約の規定に従い、寄託物は一般に自由に入手できるが、入手可能であることは、本発明の目的を実施する権利が与えられるものと解釈することはできず、本願特許の出願人の権利を侵害するものであると理解すべきである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION Yeast Candida salmon (Cyto and Ota) fun New shares of Uden and Buckley, and The use of fruit as a biological regulator of postharvest fungal disease [Field of the Invention] The present invention relates to a new strain of Candida sake and a fruit under storage conditions. Of fungal disease on post-harvest fruits with the aim of preventing rot It relates to its use as an antagonist in control. [Current state of technology] Post-harvest disease of fruits is 15% to 20% of the total world harvest every year, Is damaging. Currently most widely used to control fungi that cause postharvest fruit rot One system is chemical control by treating the crop with fungicides. Killing The use of fungicides is widespread worldwide and fungicides in Europe and Asia It is estimated to account for 26% of the market and 6% of the North American market. The large-scale use of this fungicide has caused many problems, such as the development of resistant pathogens. Emergence (which increases processing costs and increases decay losses), and fruit Increase the amount of fungicide remaining in the environment (this causes hygiene issues and Making it difficult to export fruits to other countries). Faced with this problem, new alternatives to control postharvest fruit disease are sought. Research began several years ago, one of the most notable developments of which was corruption Fungal biological control. This biological control affects the growth and action of pathogenic fungi. It is based on the inhibitory effect of some microorganisms. That is, Janisiewicz, W .J., Phytopathology 77: 481-485 (1987), Biological control processing of green mold of apple And Janisiewicz, W.J. and Roitman, J., Phytopathology 77: 1776 (1987 ) Is a shoe as a post-harvest biological control agent to control apple rot. Janisiewi reported the use of Pseudomonas cepacia. cz, W.J. and Roitman, J., Phytopathology 78: 1697-1700 (1988) As a post-harvest biological control agent to control gray and blue mold of pears It reports the use of Pseudomonas cepacia. Among the fungal antagonists that cause fruit rot, yeasts Colonize the surface of the fruit and produce extracellular polysaccharide to enhance its survival and Faster use of available nutrients to reduce fungal colonization and embryo germination Is particularly interesting in that That is, McLaughlin, R.J. et al., Phytopa thology 80: 456-461 (1990) discusses the biological control of postharvest disease in apples. Reported the effect of the concentration of Candida sp. Yeast; patent application PCT WO- 91/1641 is a substance for the biological control of post-harvest diseases of plant products. And several types of yeast (among others, Candida guilliermondi) i) strains or isolates). This isolate has in particular: Active against pathogenic fungi: Penicillium italicam icum), Penicillium digitatum, Botulitis Cinerea (Botrytis cinerea), Rhizopus stoloni fer), Geotrichum candidum, Penicillium Expansum (Penicillium expansum) and Alternaris Alterna (Alternaris alternata). U.S. Pat. The priority is the same as the CT patent application) is Candida Gilliermondi. guilliermondii). Patent application PCT WO-92 / 18009 describes a biological control of post-harvest disease of fruits. It describes the use of yeast as an agent, especially Rhodotorula glutinis (Rhodot orula glutinis), Rhodotorula mucilaginosa ), Candida parapsilopis and Candida gilli Reference is made to an isolate of El Mondi (Candida guilliermondii). Finally, NT Published as IS (US Technical Information Service) document number PB92-102334 Also, in U.S. Patent Application US-7-745796, Wilson, C.L. As a biological control agent for postharvest diseases of fruits such as peaches and oranges Of three strains of Candida sake isolated from tomato skin Write It is listed. These strains are in accordance with the Budapest Treaty The Northern Reginonal Researc, US Department of Agriculture (Peoria) h Center) has accession numbers NRRL Y-18844, NRRL Y-18845, And NRRL Y-18846. However, even in the same species, high levels of antigenic activity between different isolates or different strains Proof that the effectiveness of the harvested fruit under various storage conditions Lack of relevant information, research is ongoing to control To find more effective and long-lasting biological regulators that can be demonstrated Is necessary. [Object of the invention] An object of the present invention is to provide a biological control of pathogenic fungi involved in postharvest fruit spoilage. Can act as a very effective antagonist Candida sake that retains its effectiveness even in warm and low oxygen air Is to offer new strains. A further object of the present invention is to provide a method for preventing spoilage during storage of harvested fruits. The use of said antagonists. Yet another object of the present invention is to improve the harvested fruits under various storage conditions. It is to provide a preservation method. [Brief description of drawings] For a better understanding of the present invention, seven drawings are attached to this specification. The outline is described below, but this does not limit the present invention. FIG. 1 shows the growth curve of CECT-10817 strain in NYDB medium under low temperature conditions. It is a line graph. FIG. 2 shows CECT-10 in NYDB medium at 15 ° C., 26 ° C. and 30 ° C. It is a graph of 817 stocks. FIG. 3 shows CECT-108 in NYDB medium at temperatures of 34 ° C. and 37 ° C. It is a graph of 17 stocks. FIG. 4 shows a “Golden Delicious” solution at 25 ° C. FIG. 2 is a graph of cell number increase of CECT-10817 strain in Ngo. FIG. 5 shows “Golden Delicious” (“Golden D”) under the following low-temperature storage conditions. elicious ") Graph of increase in cell number of CECT-10817 strain in apple. : Normal low temperature (1 ° C. in air with 21% oxygen content); controlled air Medium (in air with a temperature of 1 ° C. and 3% oxygen content); and controlled very low oxygen air In the air (at a temperature of 1 ° C. and air with an oxygen content of 1%). FIG. 6 shows “Golden” inoculated with Botrytis cinerea. Antagonist CECT-10 in "Delicious" ("Golden Delicious") apples Three-dimensional bar graph of percent reduction in spoilage caused by inoculation of 817 FIG. Data was obtained by incubating at 20 ° C. for 6 days. FIG. 7 shows inoculation of Penicillium expansum Antagonist C in "Golden Delicious" apples Tertiary percent reduction in spoilage caused by inoculation of ECT-10817 It is a schematic diagram of an original bar graph. Data was obtained by incubation at 20 ° C for 7 days. Was done. FIG. 8 shows “Gall” inoculated with Rhizopus nigricans. The antagonist CECT- in "Den Delicious" apples 3D bar graph of percent reduction in spoilage caused by inoculation of 10817 It is a schematic diagram of a rough. Data was obtained by incubating at 20 ° C. for 6 days. FIG. 9 shows the inoculation of Penicillium expansum Antagonist C in "Golden Delicious" apples Tertiary percent reduction in spoilage caused by inoculation of ECT-10817 It is a schematic diagram of an original bar graph. Data is stored for 60 days under the following storage conditions. Obtained on bait: under low temperature conditions (temperature of 1 ° C. and air with an oxygen content of 21%) ); In controlled air (in air with a temperature of 1 ° C. and an oxygen content of 3%); In controlled very low oxygen air (at a temperature of 1 ° C. and air with 1% oxygen content). FIG. 10 shows “Golde” inoculated with Botrytis cinerea. Antagonist CECT-1 in "Golden Delicious" Apple 0 Three-dimensional bar graph of percent reduction in spoilage caused by inoculation of 817 FIG. The data are based on normal cold conditions (temperature of 1 ° C, and oxygen content of 2 (1% in air) for 60 days. FIG. 11 shows the inoculation of Penicillium expansum. "Golden Delicious" apple antagonist Percentage reduction in spoilage caused by soaking apples in CECT-10817 3 is a schematic diagram of a three-dimensional bar graph. FIG. Data are for normal low temperature conditions (1 ° C And 21% oxygen content in air) for 60 days. FIG. 12 shows the inoculation of Penicillium expansum. 7x10 with "Golden Delicious" apples⁶c .fu. / ml of the antagonist CECT-10817 and sprayed with the chemical fungicide imazalil ( Imazalil) at a concentration of 7.5%, the percent reduction in spoilage caused by 3 is a schematic diagram of a three-dimensional bar graph. FIG. Comparative data: 8 days under low temperature condition of 20 ° C Obtained by incubating for a while. FIG. 13 shows harvest, handling and normal cold conditions (1 ° C., and oxygen Antagonist CECT-10 applied by spraying in the field during storage at 21% content in air) 817 cells from "Golden Delicious" apples It is a graph of a number change. [Description of the Invention] Applicants of the present invention have discovered that post-harvest fruit disease in a wide range of temperatures and oxygen air. Demonstrates efficacy as an antagonist against the causing fungal species, Enables industrial use of biological control of bacterial species and prevents spoilage under storage conditions Candida salmon (Cyto and Ota) van Eude Candida sake (Saito and Ota) van Uden and Buckle y) The new strain was successfully isolated. The target strain of the present invention is obtained from the surface of an apple by repeatedly washing with sterile water. Once isolated, this culture can be transferred to Budapest for international recognition of the deposit of a microorganism in patent proceedings. In accordance with the provisions of the Plague Treaty, the Faculty of the Faculty of Valencia University Biological Scineces (46100, Burjasot (Valencia), Colceccion Espanola de Cultivos Tipo, an international depositary in Spain Visit the Spanish Collection of Standard Cultures Deposit No. and accession number CECT-10817. The CECT-10817 isolate was isolated from the Dutch "Centraalbureau voor Schimmel cultures "are NYDA medium (composed of yeast extract, glucose and agar), And NYDB medium (comprising yeast extract broth and glucose) Then, it was identified as Candida sake. Isolate CECT-1081 7 is a cream having a smooth edge and a slightly raised central portion and having pseudohyphae in the culture. To form clear, round, white colonies. The CECT-10817 strain exhibits the biochemical characteristics detailed in Tables 1 and 2. In addition, the CECT-10817 strain is an antibiotic streptoma at a concentration of 0.5 g / l. Resistant to isin. "In vitro" of CECT-10817 strain microorganisms in NYDB medium (pH 7) Growth occurs at a wide range of incubation temperatures under aerobic conditions and between 1 ° C. and 34 ° C. Shows sufficient growth at a temperature of As observed in FIGS. 1, 2 and 3, 1 ° C. At which the cell number is maximized, which is greater than would occur at any other temperature tested. As shown in the graphs of FIG. 4 and FIG. At ambient temperature (25 ° C.) or 1 ° C., ambient air (21% oxygen) or Is a controlled air of 3% oxygen and 1% oxygen (extreme hypoxia) (these are It shows large proliferation even under the storage conditions of the center. The isolate of strain CECT-10817 is suitable for both laboratory and industrial use. It is obtained in a suitable medium using conventional methods well known to the expert. For example, NYD In a medium B (pH 7), the container is shaken and aerated, and at a temperature of 1 ° C to 34 ° C, Obtained by culturing the original strain for 50 hours. The maximum cell number of NYDB medium is At 25 ° C. for 37 hours. After the incubation period, settle, centrifuge The microorganisms are separated from the culture medium by the usual methods of separation or filtration and the culture is e.g. It can be stored frozen on silica gel. The antagonist CECT-10817 is applied to the surface of the fruit in any conventional manner. An example For example, prepare a dispersion of the culture in water and spray or spray the fruits in the field before harvesting. Or apply the treatment during the processing of the harvested fruit before storage, In this case, the treatment is also performed by immersion). As is evident from FIG. 13, when the fruit is on the tree and treated by spraying, C Isolates of strain ECT-10817 are used on the surface of the fruit during the fruit harvest and storage process. To maintain its viability or increase cell number. The effective concentration of antagonist CECT-10817 in the applied dispersion for fruit treatment is , Fruit type, its maturity, the concentration of pathogenic fungi on the fruit, injuries affecting the fruit And as a function of factors such as storage temperature and humidity. Effective concentration range Enclosure Is usually 10^Five-10⁷c.f.u./ml (colony forming units / ml) It does not limit the purpose of the present invention. Isolates of strain CECT-10817 are used to control the very large number of pathogenic fungal species Is very effective in biological control, and pathogenic fungi include Botulinum cinere A (Botrytis cinerea), Penicillium expansum um), and Rhizopus nigricans, It is not limited to. The effectiveness in preventing fruit rot depends on temperature and oxygen ambient conditions. Not limited to preservation in the vineyard, but due to the aforementioned characteristics of microorganisms, It shows excellent results even under commonly used low temperature storage and controlled air conditions. The effectiveness of isolates of CECT-10817 in controlling pathogenic fungi is Dazole (1- [2- (2,4-dichlorophenyl) -2- (2-propenylo) Xy) ethyl] -1H-imidazole). Equivalent to the action of Imazalil. Imazalil is a fruit harvest One of the most widely used fungicides worldwide for post-harvest applications . The CECT-10817 strain isolate is an effective alternative to Imazalil Which has the advantage that Imazalil has no characteristic toxicity . Isolates of strain CECT-10817 may be derived from any variety of fruits of all types, And seed fruits such as apples, pears and quinces; oranges, lemons and Citrus fruits such as dalin; pits such as peaches, apricots and plums ne fluit); and other fruits such as strawberries) can be used effectively to prevent rot . The inventor of the present invention has proposed a pathogenic fungus, Rhizopus nigricans. ricans) reports on specific antagonist biological modulators for species Everything is unknown. This species has a pectin-dissolving enzyme and is It is highly pathogenic because it destroys fruit tissue without infection that requires it. Because of this, the contact of infected fruits with healthy fruits causes their rot ( Nest effect). In addition, the spoilage caused by this species evolves very rapidly And the fruit tissue becomes very watery and soft, resulting in large amounts of contaminated liquid. To spread it easily to other storage boxes. For this reason, industrial cold storage Very high rates of Rhizopus nigricans in bars Rot Cause defeat. Further, to the inventor's knowledge, Rhizopus nigricans (Rh There are no specific chemical fungicides against izopus nigricans. This is the case, for example, in Spain, a country with high fruit horticulture production, the fungal species Rhizopus Niglicans (Rhizopus nigricans) are becoming one of the most dangerous pathogens , Meaning that it is causing significant losses after harvesting the seed fruit. Therefore, the antagonist CECT-10817, which is the object of the present invention, comprises the aforementioned species Rhizopus ・ To prevent the negative effects of fungi of Niglicans (Rhizopus nigricans) This is the first effective treatment method reported. 〔Example〕 The examples outlined below are intended to assist in understanding the present invention, It should not be construed as limiting the invention.Embodiment 1 FIG. Preparation of aqueous dispersion of CECT-10817 Antagonist CECT-10817 was inoculated into tubes containing NYDA medium and Incubated for 24-48 hours at <RTIgt; Next, using the contents of this test tube, 5 Inoculate an Erlenmeyer flask containing 0 ml of NYDB medium and orbital shake at 150 rpm. Incubate for 24 hours at 25 ° C. in a stirrer. Next, the contents of the flask Was centrifuged at 6,000 rpm for 10 minutes to remove floating portions. 50 ml of sediment Disperse in sterile distilled water and use this dispersion to obtain indirect measurements of antagonist concentration And calculate the transmittance of the microbial suspension in the spectrophotometer to determine the desired concentration of antagonist Was prepared. The equivalent analysis of permeability and microbial concentration is based on the microbial cow The test was performed using a cell chamber. The concentration is c.fu./ml (colony forming units / ml) Expressed asEmbodiment 2. FIG. Efficacy of CECT-10817 on fruits stored at ambient temperature This test involves drilling two holes about 3 x 3 x 3 mm for each apple. , Healthy "Golden Delicious" washed with water and dried ("Golden Delicio" us ″) made on an apple. Two cuts were made on the same side of the apple, one Were placed above and one below. The sample unit is three apples, for each treatment Three repetitions were performed. The three fungal species tested were Botrytis cinerea and Pea. Penicillium expansum and Rhizopus nigs Rhizopus nigricans, and the titration of a suspension of these spores The colonies are scraped into sterile distilled water containing Tween 80 and 5-7 day old young cultures inoculated in DA medium (potato, glucose and agar) Incubation was performed at 28 ° C. using nutrients. Desired concentration (c.f.u./ml Spores were counted in a Thoma chamber. A batch of three apples, prepared as described above, received 25 μl of CECT-1081 7 antagonist suspension at 2.62 × 10⁶c.f.u./ml, 7.0 × 10⁶c.f.u./ml and 1.15 × 10⁷Inoculated at a concentration of c.fu./ml. When the fruit is dry, select there Twenty microliters of the suspension in which the three pathogens were titrated^Threec.f.u./ml, 10^Four c.f.u./ml and 10^FiveInoculated at a concentration of c.fu./ml. In parallel with this, a control test Apples were inoculated with only the suspension for which the pathogen titer was measured and sterile distilled water . Put all processed apples in a cell, allow to dry, then put in a box and rotate at 20 ° C. Incubate at ambient temperature. Penicillium ex pansum), the incubation time is 7 days and the botulitis ・ In the case of Cinerea (Botrytis cinerea), this is 6 days, and Rizopus nig In the case of recance (Rhizopus nigricans), it was 5 days. Incubation period The interval is set based on the time it takes for the control apple to show a large rot diameter. Was. After this incubation period, measure the diameter of rot in all the holes created, I read the result. Statistical analysis based on analysis of variance was performed on the decayed diameter readings of various replicate tests. When the analysis of variance value was significant (α <0.01 to α <0.05), Use the Duncan Multiple Range Test to determine the average And the result is represented by lowercase letters (a, b, c, d, etc.) If the processing of the same character is statistically the same, It was different. Table 3 shows the biological control of Botrytis cinerea Table 4 shows the results obtained, and Table 4 shows the results of Penicillium expansum. nsum), and Table 5 shows the results for Rhizopus nigricans. Is the result of The results of this table are shown graphically in FIGS. 6, 7, and 8, respectively. Along with the graphs of FIGS. 6, 7 and 8, the aforementioned data of Tables 3, 4 and 5 are shown. Has been shown to control the three species of pathogenic fungi tested, and thus control fruit rot. Shows a high degree of efficacy of the antagonist CECT-10817. The results obtained are described in U.S. patent application US-7-745796 (Wilson). It is especially important to compare with the description of Botrytis cinerea. erea) and the control of Penicillium expansum The effect of Candida sake CECT-10817 strain was NRRL Y-18844, NRRL Y-18845, and And NRRL Y-18846 strain.Embodiment 3 FIG. Effects on fruits stored in low temperature and different oxygen air Effectiveness of CECT-10817 After the method described in Example 2, 20 “Golden Delis” per repetition The test was performed with three treatments per "shadow" ("Golden Delicious") apple. became. 25 μl of the aqueous dispersion of the antagonist CECT-10817 was used in Example 2 At one concentration and 10^Four20 μl of Penicillium Expa at a concentration of c.fu./ml An inocula of Pensumillum (Penicillium expansum) was inoculated. Next three inoculated apples Were separated and stored for 60 days. One batch is stored under normal cold storage conditions (1 ° C. and ambient oxygen), other batches were controlled under air conditions (1 ° C. and 3% acid) And the last batch was stored under very low oxygen conditions (1 ° C. and 1% oxygen). Tables 6, 7 and 8 show the results of reading and statistical processing in the same manner as in the method of Example 2. Show. A graph summarizing these is shown in FIG. As shown in the above table and FIG. 9, the results obtained were obtained under normal cold storage conditions. Highly effective in controlling Penicillium expansum Efficiency, which is significant when the test is performed under cold storage and low oxygen ambient conditions. It shows that it rises remarkably.Embodiment 4. FIG. B. cinerea under normal low-temperature storage conditions Control Add 20 μl of Botrytis cinerea inoculum to 10^Fourc.f.u./m The test was carried out under the same conditions as in Example 3, using a concentration of l. The test is normal low Performed under warm storage conditions (1 ° C. and ambient oxygen). The results obtained by the above-mentioned statistical processing method are shown in Table 9 and a graph is shown in FIG. The result of the decrease in rot diameter is excellent, especially 7 × 10⁶c.f.u./ml concentration CECT-10817 inhibitor.Embodiment 5 FIG. Of Penicillium expansum Control in large-scale testing For this test, a large dispersion of the antagonist was prepared in the following manner. A test tube containing NYDA medium was inoculated with the antagonist CECT-10817, and 2 Incubated at 5 ° C for 24-48 hours. Pass the contents of this test tube through a stirrer. Into a fermenter containing 2,000 ml of NYDB medium, Incubated at 5 ° C for 37 hours. Next, the content of the fermenter was Centrifugation was performed for 0 minutes to remove suspended solids. Disperse the precipitate in sterile distilled water, Was used to prepare the target concentration of antagonist in the same manner as in Example 1. One box of "Golden Delicious" per repetition ("Golden Delicious" ″) Four repetitions were performed per treatment using 70 apples. Cut the apples collected in the field along the equator line with a scalpel (4 places per piece) Add 7 x 10^FiveAnd 7 × 10⁶In a bath containing an antagonist dispersion at a concentration of c.f.u./ml Fruit boxes were placed and treated with a CECT-10817 antagonist. Untreated control batch Ji was also used. Then, after the apple dries, 10^FourPenicillium at a concentration of c.f.u./ml ・ Contains dispersions of spore titers of Expansum (Penicillium expansum) Put the boxes in the batch. Store apple boxes under low-temperature storage conditions (1 ° C and ambient oxygen) for 60 days After completion, the results were read under the same conditions as in the above example, and the same statistical processing was performed. The results are shown in Table 10 and the graph is shown in FIG. As the above tables and figures show, the Penicillium Expan The excellent control results of P.expansum were confirmed in a large-scale test. 7 × 10⁶ When using a CECT-10817 antagonist at a concentration of c.fu./ml, the decrease in spoilage diameter is It is noteworthy that it is 90% qualitatively.Embodiment 6 FIG. Comparison with the fungicide Imazalil Twenty "Golden Delicious" items per iteration ("Golden Delicio" us ″) Using apples, repeat four times per treatment, and apply to each apple The test was performed with five cuts. CECT-10817 antagonists and Imazalil fungicides are available for these It was applied by dipping the apple in the solution or dispersion. Antagonist is 7 × 10⁶c.f. At a concentration of u./ml, Imazalil was applied at a concentration of 7.5% by weight. Then add 10 to the apple^Fourc.f.u./ml concentration of Penicillium Expansum (Penic illium expansum) pathogen. One batch of apples treated with the antagonist 24 hours after treatment, the pathogen was inoculated. The fruits were incubated at 20 ° C. for 8 days, then the results were read and processed statistically. The results obtained are shown in Table 11 and the graph is shown in FIG. When the antagonist was inoculated 24 hours after the treatment, the CECT-10817 antagonist and imatin were inoculated. It turns out that the effectiveness of Imazalil is substantially the same.Information on deposit of CECT-10817 strain This microorganism is subject to the Budapest Article on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for Patent Procedure. Faculty of Biologi University of Valencia cal Scineces, Department of Microbiology (46100, Burjasot, Valencia )) And deposited with the Colceccion Espanola de Cultivos Tipo (CECT). Deposited July 6, 1994, and assigned deposit number CECT-10817. Deposits are generally freely available in accordance with the provisions of the Budapest Treaty, What can be taken is interpreted as giving the right to carry out the objects of the invention Should not be construed as violating the rights of the applicant of the present patent. You.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＥ，ＦＩ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者テイヒード・イ・エスパサ、ネウススペイン国、 25183 セロス、カジェ・アンヘル８ (72)発明者サンチス・アルメナール、ビンセンテスペイン国、 25006 ジュイーダ、カジェ・アルカルデ・プホル９────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, L U, MC, NL, PT, SE), OA (BF, BJ, CF) , CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (KE, LS, MW, SD, S Z, UG), UA (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD , RU, TJ, TM), AL, AM, AT, AT, AU , AZ, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CZ, CZ, DE, DE, DK, DK, EE, EE, F I, FI, GB, GE, HU, IS, JP, KE, KG , KP, KR, KZ, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, N Z, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI , SK, SK, TJ, TM, TR, TT, UA, UG, US, UZ, VN (72) Inventor Tehied y Espaza, Neuus Spain, 25183 Seros, Kazi E Angel 8 (72) Inventor Santis Almenar, Vincente Spain, 25006 Juida, Ca Je Alcarde Puhol 9

Claims

[Claims] 1. Species Candida salmon deposited under the number CECT-10817 a) substantially pure biological culture of the strain. 2. Antagonism for biological control of pathogenic fungi involved in postharvest fruit spoilage Use of the culture according to claim 1 as an agent. 3. Pathogenic fungi include Botrytis cinerea, Penicillium Penicillium expansum, and Rhizopus niglycan 3. Use according to claim 2, belonging to any of the species Rhizopus nigricans. 4. Fruits are those known as seed fruits, especially apples, pears and mushrooms. 3. Use according to claim 2 which is any variant of Lumero. 5. The fruit is any variety of citrus, especially orange, lemon and mandarin 3. The use according to claim 2, wherein 6. Fruits are known as strawberries or drupes, especially peaches, 3. Use according to claim 2 which is any variant of cot and plum. 7. As an antagonist in the biological control of fruit pathogenic fungi before fruit harvest Use of the culture according to claim 1. 8. The fruit may be harvested before or after harvest, CECT-10 according to claim 1. 817. A method for preventing fruit spoilage, wherein the method is treated with a culture. 9. Spraying the fruit with an aqueous dispersion of the antagonist CECT-10817, or Claims wherein the treatment is performed by wetting or dipping the fruit with the dispersion. Item 9. The method according to Item 8. 10. The concentration of the antagonist CECT-10817 in the aqueous dispersion is 10^Five -10⁷10. The method according to claim 8 or 9, wherein the method is in the range of c.fu./ml. 11. The conditions for preservation of fruits are the conditions of ambient temperature and ambient oxygen, as claimed. Item 9. The method according to Item 8. 12. Fruits should be stored at low temperatures of less than 5 ° C and empty 9. The method of claim 8, wherein the condition is a care condition.