JPH10262669A - トランスジェニックウイルス - Google Patents
トランスジェニックウイルスInfo
- Publication number
- JPH10262669A JPH10262669A JP10044155A JP4415598A JPH10262669A JP H10262669 A JPH10262669 A JP H10262669A JP 10044155 A JP10044155 A JP 10044155A JP 4415598 A JP4415598 A JP 4415598A JP H10262669 A JPH10262669 A JP H10262669A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- insect
- virus
- transcription factor
- transgenic
- promoter
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43563—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/14011—Baculoviridae
- C12N2710/14111—Nucleopolyhedrovirus, e.g. autographa californica nucleopolyhedrovirus
- C12N2710/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 昆虫ウイルスを用いる従来のバイオ有害生物
殺滅剤の欠点、すなわち、ウイルスの導入から致死的感
染までの遅延のための幼虫の摂食継続による脱葉の被
害、あるいは強毒性の欠如や有効成分の非標的組織にお
ける産生による非公立性を排除した新しいタイプのバイ
オ有害生物殺滅剤の提供。 【解決手段】 発生調節昆虫転写因子をコードする異種
ＤＮＡを含有するトランスジェニックウイルスに関し、
とくに昆虫の脱皮および変態に関与する昆虫の転写因子
からなるトランスジェニック昆虫ウイルスが提供され
る。このようなトランスジェニック昆虫ウイルスは、速
効性で、強毒性を示し、ウイルス感染細胞内で機能し、
バイオ有害殺滅剤として有用である。
殺滅剤の欠点、すなわち、ウイルスの導入から致死的感
染までの遅延のための幼虫の摂食継続による脱葉の被
害、あるいは強毒性の欠如や有効成分の非標的組織にお
ける産生による非公立性を排除した新しいタイプのバイ
オ有害生物殺滅剤の提供。 【解決手段】 発生調節昆虫転写因子をコードする異種
ＤＮＡを含有するトランスジェニックウイルスに関し、
とくに昆虫の脱皮および変態に関与する昆虫の転写因子
からなるトランスジェニック昆虫ウイルスが提供され
る。このようなトランスジェニック昆虫ウイルスは、速
効性で、強毒性を示し、ウイルス感染細胞内で機能し、
バイオ有害殺滅剤として有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、昆虫転写因子から
なるトランスジェニック昆虫ウイルスに関する。とく
に、本発明は、脱皮および変態に関与する昆虫転写因子
からなるトランスジェニック昆虫ウイルスに関する。こ
のようなトランスジェニック昆虫ウイルスはバイオ有害
生物殺滅剤として有用である。
なるトランスジェニック昆虫ウイルスに関する。とく
に、本発明は、脱皮および変態に関与する昆虫転写因子
からなるトランスジェニック昆虫ウイルスに関する。こ
のようなトランスジェニック昆虫ウイルスはバイオ有害
生物殺滅剤として有用である。
【０００２】
【従来の技術】旧来の有害生物の防除は化学殺虫剤を用
いてもっぱら行われてきた。それらは速効性ではある
が、これらの化学物質は環境的に望ましくない場合があ
る。それに加えて昆虫有害生物の防除に用いられる化学
物質の多くは種特異的ではなく、標的有害生物と同様
に、標的でない脊椎動物および無脊椎動物にも作用する
可能性がある。これらの化学物質またはそれらの副産物
は長期にわたって環境に残留する場合があり得る。
いてもっぱら行われてきた。それらは速効性ではある
が、これらの化学物質は環境的に望ましくない場合があ
る。それに加えて昆虫有害生物の防除に用いられる化学
物質の多くは種特異的ではなく、標的有害生物と同様
に、標的でない脊椎動物および無脊椎動物にも作用する
可能性がある。これらの化学物質またはそれらの副産物
は長期にわたって環境に残留する場合があり得る。
【０００３】有害生物の生物学、個体群動態学、造林実
務、天然の防除剤（すなわち、寄生虫、病原体）および
改良された現用の森林有害生物管理実務の開発および利
用は森林管理の新しい手段となっている。生物学的防
除、昆虫有害生物の防除のための生存生物体の使用は、
有害生物の防除の有効な手段として次第に受入れられる
ようになってきた。たとえば、バイオ殺虫剤 Batillus
thuringiensis （Ｂt ）はハマキガやマイマイガの幼虫
の駆除に使用されている。しかしながら、Ｂｔの特異性
に関するある最近の憂慮から、絶滅寸前の鱗翅目の生息
する地域では使用しないようにとの勧告がなされてい
る。生態学的関心によって、昆虫ウイルスを含め他の微
生物産物の調査および開発に重点を置いた変化が生じて
いる。
務、天然の防除剤（すなわち、寄生虫、病原体）および
改良された現用の森林有害生物管理実務の開発および利
用は森林管理の新しい手段となっている。生物学的防
除、昆虫有害生物の防除のための生存生物体の使用は、
有害生物の防除の有効な手段として次第に受入れられる
ようになってきた。たとえば、バイオ殺虫剤 Batillus
thuringiensis （Ｂt ）はハマキガやマイマイガの幼虫
の駆除に使用されている。しかしながら、Ｂｔの特異性
に関するある最近の憂慮から、絶滅寸前の鱗翅目の生息
する地域では使用しないようにとの勧告がなされてい
る。生態学的関心によって、昆虫ウイルスを含め他の微
生物産物の調査および開発に重点を置いた変化が生じて
いる。
【０００４】昆虫ウイルスは、宿主特異的で環境に安全
と考えられる天然に存在する昆虫の病原体である。それ
らは毎年残留して、数世代にわたり昆虫に衝撃を与える
ことができる。昆虫の防除に対する可能性が考えられる
昆虫ウイルスは 1200 種以上ある（ヌクレオポリヘドロ
ウイルス、グラニュロウイルス、エントモポックスウイ
ルス、サイポウイルス等）。
と考えられる天然に存在する昆虫の病原体である。それ
らは毎年残留して、数世代にわたり昆虫に衝撃を与える
ことができる。昆虫の防除に対する可能性が考えられる
昆虫ウイルスは 1200 種以上ある（ヌクレオポリヘドロ
ウイルス、グラニュロウイルス、エントモポックスウイ
ルス、サイポウイルス等）。
【０００５】数種の天然の昆虫ウイルスに関連した一つ
の問題は、昆虫の体内へのウイルスの導入から致死的感
染までの時間的な遅延の存在である。昆虫ウイルスを感
染させるためには、幼虫による摂取が必要である。葉を
汚染したウイルス粒子を含む封入体が摂食され、昆虫の
中腸液により溶解され、ウイルス粒子が放出される。こ
れらの粒子は胃細胞を通過し、宿主幼虫の気管や他の体
組織に感染する。通常15日の期間にわたってウイルスは
易感染性組織で複製され最終的に死を起こす。しかしな
がら、感染した幼虫はこの期間も摂食を続け、したがっ
て、ウイルスの摂取から昆虫の死亡までの期間にも依然
として植物の重大な脱葉が起こり得る。この摂食による
損害は天然の昆虫ウイルスの使用では避け難い問題であ
る。
の問題は、昆虫の体内へのウイルスの導入から致死的感
染までの時間的な遅延の存在である。昆虫ウイルスを感
染させるためには、幼虫による摂取が必要である。葉を
汚染したウイルス粒子を含む封入体が摂食され、昆虫の
中腸液により溶解され、ウイルス粒子が放出される。こ
れらの粒子は胃細胞を通過し、宿主幼虫の気管や他の体
組織に感染する。通常15日の期間にわたってウイルスは
易感染性組織で複製され最終的に死を起こす。しかしな
がら、感染した幼虫はこの期間も摂食を続け、したがっ
て、ウイルスの摂取から昆虫の死亡までの期間にも依然
として植物の重大な脱葉が起こり得る。この摂食による
損害は天然の昆虫ウイルスの使用では避け難い問題であ
る。
【０００６】天然の昆虫ウイルスに伴う他の問題は強毒
性の欠如である。たとえば広範囲のフィールド試験によ
りハマキガヌクレオポリヘドロウイルス（ＣｆＭＮＰ
Ｖ）はハマキガの集団感染を起こすことになるが、大規
模な死滅および集団の減少を生じる流行は起こさないこ
とが明らかにされている［Cunningham and House, 198
4, Choristoneura fumiferana (clemens), Spruce budw
orm (Lepidoptera: Tortricidae); B. Viruses: Applic
ation and Assessment. In Biological Control Progra
mmes against Insect and Weeds in Canada 1969-1980,
Kelleher, J. S.and Hulme, M.A. 編, Commonwealth A
gricultural Bureau, Slough, England ］。
性の欠如である。たとえば広範囲のフィールド試験によ
りハマキガヌクレオポリヘドロウイルス（ＣｆＭＮＰ
Ｖ）はハマキガの集団感染を起こすことになるが、大規
模な死滅および集団の減少を生じる流行は起こさないこ
とが明らかにされている［Cunningham and House, 198
4, Choristoneura fumiferana (clemens), Spruce budw
orm (Lepidoptera: Tortricidae); B. Viruses: Applic
ation and Assessment. In Biological Control Progra
mmes against Insect and Weeds in Canada 1969-1980,
Kelleher, J. S.and Hulme, M.A. 編, Commonwealth A
gricultural Bureau, Slough, England ］。
【０００７】感染した幼虫によって生じる摂食被害を減
少させるために多くの戦略が採用されてきた。一つの戦
略は、感染が早期に起こり重大な脱葉を防止できるよう
に、初期齢の脱皮前幼虫への「ウイルスエンハンサー」
含有ウイルス処方の適用である。残念ながら、この戦略
は、昆虫が忌避性である場合または大量の昆虫ウイルス
が利用できない場合には使用できない。ハマキガ Chori
stoneura fumiferana（Clem）のヌクレオポリヘドロウ
イルスによる防除の場合がこれに該当する。
少させるために多くの戦略が採用されてきた。一つの戦
略は、感染が早期に起こり重大な脱葉を防止できるよう
に、初期齢の脱皮前幼虫への「ウイルスエンハンサー」
含有ウイルス処方の適用である。残念ながら、この戦略
は、昆虫が忌避性である場合または大量の昆虫ウイルス
が利用できない場合には使用できない。ハマキガ Chori
stoneura fumiferana（Clem）のヌクレオポリヘドロウ
イルスによる防除の場合がこれに該当する。
【０００８】生物工学の発達は遺伝学的に昆虫ウイルス
を修飾することによりそれらの効力を増大させる手段を
提供した。トキシン（サソリ／ダニトキシン）、酵素
［幼若ホルモン（ＪＨ）エステラーゼ］、神経ペプチド
（前胸腺刺激ホルモン）および羽化ホルモンをコードす
る遺伝子が様々な研究グループによってウイルスゲノム
内に導入されてきた（Bonning ら, Annu. Rev. Entomo
l. 85: 437-446 ）。これらの遺伝子はウイルス感染細
胞の外部でそれらの機能を発揮する分泌タンパク質また
はペプチドをコードする。ＪＨエステラーゼ遺伝子をア
ルファルファルーパーヌクレオポリヘドロウイルス（Ａ
ｃＭＮＰＶ）内に挿入すると血リンパへの酵素ＪＨエス
テラーゼの分泌を生じ、ウイルスは防除剤として改善さ
れる。サソリトキシンおよびダニトキシンもＡｃＭＮＰ
Ｖに挿入されている。これらのタンパク質は血リンパに
分泌され神経系に作用する神経毒素である。これらのト
ランスジェニックウイルスの主要な欠点は、異種遺伝子
が昆虫細胞の外部たとえば血リンパにおいて作用しなけ
ればならない分泌生成物をコードすることである。これ
らの遺伝子産物は昆虫の解毒システムにより分解または
排除される恐れがある。
を修飾することによりそれらの効力を増大させる手段を
提供した。トキシン（サソリ／ダニトキシン）、酵素
［幼若ホルモン（ＪＨ）エステラーゼ］、神経ペプチド
（前胸腺刺激ホルモン）および羽化ホルモンをコードす
る遺伝子が様々な研究グループによってウイルスゲノム
内に導入されてきた（Bonning ら, Annu. Rev. Entomo
l. 85: 437-446 ）。これらの遺伝子はウイルス感染細
胞の外部でそれらの機能を発揮する分泌タンパク質また
はペプチドをコードする。ＪＨエステラーゼ遺伝子をア
ルファルファルーパーヌクレオポリヘドロウイルス（Ａ
ｃＭＮＰＶ）内に挿入すると血リンパへの酵素ＪＨエス
テラーゼの分泌を生じ、ウイルスは防除剤として改善さ
れる。サソリトキシンおよびダニトキシンもＡｃＭＮＰ
Ｖに挿入されている。これらのタンパク質は血リンパに
分泌され神経系に作用する神経毒素である。これらのト
ランスジェニックウイルスの主要な欠点は、異種遺伝子
が昆虫細胞の外部たとえば血リンパにおいて作用しなけ
ればならない分泌生成物をコードすることである。これ
らの遺伝子産物は昆虫の解毒システムにより分解または
排除される恐れがある。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】したがって、なおバイ
オ有害生物殺滅剤として新たなトランスジェニックウイ
ルスを開発する要求が存在する。とくに新しいタイプの
異種遺伝子をウイルスゲノムに導入することによるトラ
ンスジェニックウイルスの構築が必要である。
オ有害生物殺滅剤として新たなトランスジェニックウイ
ルスを開発する要求が存在する。とくに新しいタイプの
異種遺伝子をウイルスゲノムに導入することによるトラ
ンスジェニックウイルスの構築が必要である。
【００１０】本発明は、バイオ有害生物殺滅剤として有
用なトランスジェニック昆虫ウイルスを提供する。
用なトランスジェニック昆虫ウイルスを提供する。
【００１１】本発明はまた、非修飾ウイルスに比較して
速効性で、増強されたビルレンスを有するトランスジェ
ニック昆虫ウイルスを提供する。
速効性で、増強されたビルレンスを有するトランスジェ
ニック昆虫ウイルスを提供する。
【００１２】本発明は、感染細胞の外部ではなくその内
部で機能するタンパク質因子をコードするトランスジェ
ニックウイルスを産生させる。
部で機能するタンパク質因子をコードするトランスジェ
ニックウイルスを産生させる。
【００１３】最後に本発明は、昆虫集団の防除に使用で
きる、本発明のトランスジェニック昆虫ウイルスを含有
する殺虫剤組成物を提供する。
きる、本発明のトランスジェニック昆虫ウイルスを含有
する殺虫剤組成物を提供する。
【００１４】本発明のこれらの目的および他の目的は以
下に記述する実施態様の１または２以上によって提供さ
れる。
下に記述する実施態様の１または２以上によって提供さ
れる。
【００１５】
【課題を解決するための手段】本発明の一実施態様にお
いては、転写調節領域に操作性に連結した発生調節昆虫
転写因子をコードする異種ＤＮＡを含有するトランスジ
ェニック昆虫ウイルスが提供される。好ましい実施態様
においては、発生調節昆虫転写因子は昆虫の脱皮および
変態に関連する。本発明のさらに他の実施態様において
は、このようなトランスジェニック昆虫ウイルスを含有
する殺虫剤、および昆虫集団を防除するためのそれらの
使用が意図される。
いては、転写調節領域に操作性に連結した発生調節昆虫
転写因子をコードする異種ＤＮＡを含有するトランスジ
ェニック昆虫ウイルスが提供される。好ましい実施態様
においては、発生調節昆虫転写因子は昆虫の脱皮および
変態に関連する。本発明のさらに他の実施態様において
は、このようなトランスジェニック昆虫ウイルスを含有
する殺虫剤、および昆虫集団を防除するためのそれらの
使用が意図される。
【００１６】本発明のこれらのおよび他の実施態様は、
新しいタイプのトランスジェニックウイルスを提供す
る。本発明によって提供されるトランスジェニックウイ
ルスはタンパク質産物をウイルス感染細胞内で機能させ
ることを可能にし、それにより他のトランスジェニック
ウイルスの分泌タンパク質に伴う問題を回避することを
可能にする。この特性はまた、トランスジェニックウイ
ルスがバイオ有害生物殺滅剤として速効的かつ効率的に
作用することを可能にする。
新しいタイプのトランスジェニックウイルスを提供す
る。本発明によって提供されるトランスジェニックウイ
ルスはタンパク質産物をウイルス感染細胞内で機能させ
ることを可能にし、それにより他のトランスジェニック
ウイルスの分泌タンパク質に伴う問題を回避することを
可能にする。この特性はまた、トランスジェニックウイ
ルスがバイオ有害生物殺滅剤として速効的かつ効率的に
作用することを可能にする。
【００１７】本発明は、発生調節昆虫転写因子を含有す
る昆虫ウイルス、およびそれによる昆虫の防除に向けら
れたものである。好ましい一実施態様においては、本発
明は昆虫の脱皮および変態に関与する昆虫転写因子をコ
ードする異種ＤＮＡを含有する昆虫ウイルスに関する。
る昆虫ウイルス、およびそれによる昆虫の防除に向けら
れたものである。好ましい一実施態様においては、本発
明は昆虫の脱皮および変態に関与する昆虫転写因子をコ
ードする異種ＤＮＡを含有する昆虫ウイルスに関する。
【００１８】
【発明の実施の形態】本発明によれば、広範囲の鱗翅目
の昆虫を制御することができる。特定の例を挙げれば以
下の通りである。
の昆虫を制御することができる。特定の例を挙げれば以
下の通りである。
【表１】
【００１９】ウイルスに感染しやすい任意の昆虫を本発
明の実施のための標的とすることができる。
明の実施のための標的とすることができる。
【００２０】昆虫ウイルスは天然に存在する昆虫の病原
体である。それらはＤＮＡウイルスであってもＲＮＡウ
イルスであってもよい。多くの昆虫ウイルスおよびそれ
らの宿主範囲が本技術分野においては周知である。本技
術分野において既知の任意の昆虫ウイルスが本発明の目
的に使用できる。使用される昆虫ウイルスは宿主特異的
であり、環境に安全であることが好ましい。さらに好ま
しくは、昆虫ウイルスは、昆虫有害生物に対する生物学
的防除剤として従来使用されてきたＤＮＡウイルス、た
とえばバキュロウイルス（ヌクレオポリヘドロウイルス
およびグラニュロウイルス）ならびにエントモポックス
ウイルスである。本発明における使用に適したＲＮＡウ
イルスには、それに限定されるものではないが、サイポ
ウイルスが包含される。
体である。それらはＤＮＡウイルスであってもＲＮＡウ
イルスであってもよい。多くの昆虫ウイルスおよびそれ
らの宿主範囲が本技術分野においては周知である。本技
術分野において既知の任意の昆虫ウイルスが本発明の目
的に使用できる。使用される昆虫ウイルスは宿主特異的
であり、環境に安全であることが好ましい。さらに好ま
しくは、昆虫ウイルスは、昆虫有害生物に対する生物学
的防除剤として従来使用されてきたＤＮＡウイルス、た
とえばバキュロウイルス（ヌクレオポリヘドロウイルス
およびグラニュロウイルス）ならびにエントモポックス
ウイルスである。本発明における使用に適したＲＮＡウ
イルスには、それに限定されるものではないが、サイポ
ウイルスが包含される。
【００２１】任意の発生調節昆虫転写因子が、本発明に
おける使用に適当である。発生調節昆虫転写因子は、昆
虫転写因子のサブセットである。このような昆虫転写因
子は調節タンパク質である。それらは、多くの場合、固
有の核局在シグナルを有し、それがそれらの核への移動
を指示し、そこでそれらはＤＮＡと相互作用してそれら
の作用を発揮する。それらはまた、遺伝子の調節領域に
おける特異的配列に結合する特異的ＤＮＡ結合ドメイン
を有する。発生調節昆虫転写因子は通常、少量が昆虫の
内部で一時的にまた位置的に調節されて産生される。転
写因子の産生は一般に様々なホルモンに依存し、たとえ
ば、それらは昆虫ホルモンたとえばエクジソン、幼若ホ
ルモン等の作用によって発現、活性化および／または不
活性化される。それらはまたホルモン受容体に類似する
構造を有するかまたは受容体スーパーファミリーに属す
るものと考えられる。発生調節昆虫転写因子は本技術分
野において周知である。それらには以下に限定されるも
のではないが、ショウジョウバエ（Drosophila）ＢＲ-
Ｃ，Ｅ74，Ｅ75，ウルトラスピラクル，Ｅ78，セブンア
ップ，Ｋni/ Ｋnrl/egon，ＦＴＺ- Ｆ１，ＤＨＲ38，Ｅ
93，レリシュ- 抗菌転写因子，コルヘッドパタン形成転
写因子，エスカルゴおよびカタツムリ転写因子たとえば
胚翅ディスク，背側転写因子たとえばＵＶに応答するレ
トロトランスポゾン，ＤＳＸ- ＭおよびＤＳＸ- Ｆ転写
因子たとえばそれぞれ卵黄タンパク質の抑制および活性
化因子，Ｄifトランス活性化セクロピン遺伝子，Ｅyele
ss 転写因子，Ｇap 遺伝子 kni 転写因子，カッパー
Ｂ様免疫遺伝子活性化転写因子，前方および後方端胚発
生調節接合体遺伝子によりコードされる転写因子，なら
びにＤＨＲ78，ＤＨＲ96，マンデュカ（Manduca ）ＭＨ
Ｒ3-エクジソン誘導転写因子，コリストニュウーラホル
モン受容体２（ＣＨＲ２），コリストニュウーラホルモ
ン受容体3 （ＣＨＲ3 ），Choristoneura fumiferana
エクジソン受容体（ＣｆＥｃＲ），Choristoneura fumi
ferana ウルトラスピラクルタンパク質（ＣｆＵＳ
Ｐ），スポドプテラ（Spodoptera）ウイルスｇｐ64 活
性化転写因子，Ｅgr- １マスタースイッチ遺伝子および
Bombyx Mori シルクタンパク質転写因子が包含され
る。
おける使用に適当である。発生調節昆虫転写因子は、昆
虫転写因子のサブセットである。このような昆虫転写因
子は調節タンパク質である。それらは、多くの場合、固
有の核局在シグナルを有し、それがそれらの核への移動
を指示し、そこでそれらはＤＮＡと相互作用してそれら
の作用を発揮する。それらはまた、遺伝子の調節領域に
おける特異的配列に結合する特異的ＤＮＡ結合ドメイン
を有する。発生調節昆虫転写因子は通常、少量が昆虫の
内部で一時的にまた位置的に調節されて産生される。転
写因子の産生は一般に様々なホルモンに依存し、たとえ
ば、それらは昆虫ホルモンたとえばエクジソン、幼若ホ
ルモン等の作用によって発現、活性化および／または不
活性化される。それらはまたホルモン受容体に類似する
構造を有するかまたは受容体スーパーファミリーに属す
るものと考えられる。発生調節昆虫転写因子は本技術分
野において周知である。それらには以下に限定されるも
のではないが、ショウジョウバエ（Drosophila）ＢＲ-
Ｃ，Ｅ74，Ｅ75，ウルトラスピラクル，Ｅ78，セブンア
ップ，Ｋni/ Ｋnrl/egon，ＦＴＺ- Ｆ１，ＤＨＲ38，Ｅ
93，レリシュ- 抗菌転写因子，コルヘッドパタン形成転
写因子，エスカルゴおよびカタツムリ転写因子たとえば
胚翅ディスク，背側転写因子たとえばＵＶに応答するレ
トロトランスポゾン，ＤＳＸ- ＭおよびＤＳＸ- Ｆ転写
因子たとえばそれぞれ卵黄タンパク質の抑制および活性
化因子，Ｄifトランス活性化セクロピン遺伝子，Ｅyele
ss 転写因子，Ｇap 遺伝子 kni 転写因子，カッパー
Ｂ様免疫遺伝子活性化転写因子，前方および後方端胚発
生調節接合体遺伝子によりコードされる転写因子，なら
びにＤＨＲ78，ＤＨＲ96，マンデュカ（Manduca ）ＭＨ
Ｒ3-エクジソン誘導転写因子，コリストニュウーラホル
モン受容体２（ＣＨＲ２），コリストニュウーラホルモ
ン受容体3 （ＣＨＲ3 ），Choristoneura fumiferana
エクジソン受容体（ＣｆＥｃＲ），Choristoneura fumi
ferana ウルトラスピラクルタンパク質（ＣｆＵＳ
Ｐ），スポドプテラ（Spodoptera）ウイルスｇｐ64 活
性化転写因子，Ｅgr- １マスタースイッチ遺伝子および
Bombyx Mori シルクタンパク質転写因子が包含され
る。
【００２２】最も好ましい発生調節昆虫転写因子は、昆
虫の脱皮、生殖、変態、および発生の調節に関連する転
写因子である。発生調節転写因子は特異的なセットの遺
伝子の発現の引き金を引き、それが続いて脱皮および変
態の生理学的事象に関与する遺伝子のスイッチを接続ま
たは切断することになる。脱皮および変態を調節する多
くのこのような転写因子が本技術分野においては知られ
ていて、たとえばコリストニューラホルモン受容体２
（ＣＨＲ２），コリストニューラホルモン受容体３（Ｃ
ＨＲ３），Choristoneura fumiferana エクジソン受容
体（ＣｆＥｃＲ），Choristoneura fumiferana ウルト
ラスピラクルタンパク質（ＣｆＵＳＰ），マンデュカホ
ルモン受容体３（ＭＨＲ3 ）およびショウジョウバエホ
ルモン受容体38（ＤＨＲ38）がある。
虫の脱皮、生殖、変態、および発生の調節に関連する転
写因子である。発生調節転写因子は特異的なセットの遺
伝子の発現の引き金を引き、それが続いて脱皮および変
態の生理学的事象に関与する遺伝子のスイッチを接続ま
たは切断することになる。脱皮および変態を調節する多
くのこのような転写因子が本技術分野においては知られ
ていて、たとえばコリストニューラホルモン受容体２
（ＣＨＲ２），コリストニューラホルモン受容体３（Ｃ
ＨＲ３），Choristoneura fumiferana エクジソン受容
体（ＣｆＥｃＲ），Choristoneura fumiferana ウルト
ラスピラクルタンパク質（ＣｆＵＳＰ），マンデュカホ
ルモン受容体３（ＭＨＲ3 ）およびショウジョウバエホ
ルモン受容体38（ＤＨＲ38）がある。
【００２３】トランスジェニックもしくは組換え昆虫ウ
イルスは、発生調節昆虫転写因子をコードするフラグメ
ントまたは連続的異種ＤＮＡをウイルスゲノム内にイン
テグレートすることにより構築することができる。本技
術分野で既知のように、異種ＤＮＡは転写調節領域にシ
スコンフィギュレーションで操作性にまたは共有結合に
より、昆虫転写因子の遺伝子発現が通常遺伝子の 5' 上
流に存在する調節領域によって駆動されるように連結さ
れる。あるいはＤＮＡフラグメントは発生調節昆虫転写
因子および検出可能な生成物からなる融合タンパク質を
コードしていてもよい。検出可能な生成物をコードする
レポーター遺伝子は本技術分野においては容易に利用で
きる。検出可能な生成物は簡便な検出可能な酵素、たと
えばクロラムフェニールアセチルトランスフェラーゼ、
β- ガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質またはルシ
フェラーゼとすることができる。
イルスは、発生調節昆虫転写因子をコードするフラグメ
ントまたは連続的異種ＤＮＡをウイルスゲノム内にイン
テグレートすることにより構築することができる。本技
術分野で既知のように、異種ＤＮＡは転写調節領域にシ
スコンフィギュレーションで操作性にまたは共有結合に
より、昆虫転写因子の遺伝子発現が通常遺伝子の 5' 上
流に存在する調節領域によって駆動されるように連結さ
れる。あるいはＤＮＡフラグメントは発生調節昆虫転写
因子および検出可能な生成物からなる融合タンパク質を
コードしていてもよい。検出可能な生成物をコードする
レポーター遺伝子は本技術分野においては容易に利用で
きる。検出可能な生成物は簡便な検出可能な酵素、たと
えばクロラムフェニールアセチルトランスフェラーゼ、
β- ガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質またはルシ
フェラーゼとすることができる。
【００２４】転写調節領域またはプロモーターは初期も
しくは後期ウイルスプロモーターまたは細胞内で用いら
れる構造プロモーターとすることができる。このような
転写調節領域は本技術分野において既知であり容易に利
用できる。それらには、以下に限定されるものではない
が、後期プロモーターたとえばポリヘドリンプロモータ
ーおよびｐ10プロモーター、初期ないし後期プロモータ
ーたとえばＥＴＬプロモーター、初期プロモーターたと
えば即時初期遺伝子１（ＩＥ１），エクジステロイドグ
ルコシルトランスフェラーゼ（egt ）プロモーターおよ
びｐ35プロモーター、ならびに構造プロモーターたとえ
ばアクチンプロモーターが包含される。プロモーターは
転写因子をコードする１または２以上のＤＮＡコピーと
連結していてもよい。異なるプロモーターに連結した転
写因子の数個のコピーが使用できる。あるいは、多重の
プロモーターに連結した異なる転写因子を使用すること
もできる。これらのプロモーターと転写因子の組合せ
は、転写因子の発現の増大および修飾ウイルスの制御に
使用できる。
しくは後期ウイルスプロモーターまたは細胞内で用いら
れる構造プロモーターとすることができる。このような
転写調節領域は本技術分野において既知であり容易に利
用できる。それらには、以下に限定されるものではない
が、後期プロモーターたとえばポリヘドリンプロモータ
ーおよびｐ10プロモーター、初期ないし後期プロモータ
ーたとえばＥＴＬプロモーター、初期プロモーターたと
えば即時初期遺伝子１（ＩＥ１），エクジステロイドグ
ルコシルトランスフェラーゼ（egt ）プロモーターおよ
びｐ35プロモーター、ならびに構造プロモーターたとえ
ばアクチンプロモーターが包含される。プロモーターは
転写因子をコードする１または２以上のＤＮＡコピーと
連結していてもよい。異なるプロモーターに連結した転
写因子の数個のコピーが使用できる。あるいは、多重の
プロモーターに連結した異なる転写因子を使用すること
もできる。これらのプロモーターと転写因子の組合せ
は、転写因子の発現の増大および修飾ウイルスの制御に
使用できる。
【００２５】好ましい実施態様においては、異種ＤＮＡ
は、ウイルスのゲノム部位、またはウイルスの宿主特異
性には関連せず、ウイルスに必須ではない機能の遺伝子
内にインテグレートされる。単離されて、異種ＤＮＡの
インテグレーション部位として使用できる遺伝子には、
たとえばエクジステロイドＵＤＰ- グルコシルトランス
フェラーゼ遺伝子（egt ），ｐ10遺伝子，ｐ48遺伝子お
よびポリヘドリン遺伝子など多数の遺伝子がある。
は、ウイルスのゲノム部位、またはウイルスの宿主特異
性には関連せず、ウイルスに必須ではない機能の遺伝子
内にインテグレートされる。単離されて、異種ＤＮＡの
インテグレーション部位として使用できる遺伝子には、
たとえばエクジステロイドＵＤＰ- グルコシルトランス
フェラーゼ遺伝子（egt ），ｐ10遺伝子，ｐ48遺伝子お
よびポリヘドリン遺伝子など多数の遺伝子がある。
【００２６】本発明では成熟前および不完全脱皮または
昆虫の異常発生を生じるのに十分な転写因子の発現レベ
ルが意図される。昆虫転写因子はトランスジェニック昆
虫ウイルスが昆虫に感染した場合、検知可能なレベルで
発現されなければならない。転写因子は感染昆虫内にお
いて生理的に必要な量よりも高いレベルで発現または過
剰発現されることが好ましい。転写因子は、トランスジ
ェニックウイルスが導入された実質的にすべての昆虫組
織で発現されることがさらに好ましい。
昆虫の異常発生を生じるのに十分な転写因子の発現レベ
ルが意図される。昆虫転写因子はトランスジェニック昆
虫ウイルスが昆虫に感染した場合、検知可能なレベルで
発現されなければならない。転写因子は感染昆虫内にお
いて生理的に必要な量よりも高いレベルで発現または過
剰発現されることが好ましい。転写因子は、トランスジ
ェニックウイルスが導入された実質的にすべての昆虫組
織で発現されることがさらに好ましい。
【００２７】通常、トランスジェニックウイルスの作成
のためには、組換えトランスファーベクターが構築され
る。たとえば、昆虫転写因子をコードするＤＮＡフラグ
メントは、ウイルスプロモーターまたは構造細胞プロモ
ーターのいずれか、たとえばｐ10プロモーターに、本技
術分野において既知の方法、たとえば制限消化、ポリメ
ラーゼチェーン反応（ＰＣＲ）およびライゲーションに
よって共有結合で連結することができる。ついで、プロ
モーターおよび転写因子を包含するＤＮＡフラグメント
を、容易に入手できるベクター、たとえばｐＵＣ18によ
って担持されるウイルス遺伝子座、たとえば egt に挿
入する。組換えトランスファーベクターは、本技術分野
で用いられる方法、たとえばリポフェクション法によ
り、細胞系中に昆虫ウイルスとともにコトランスフェク
トする。組換えトランスファーベクターによって担持さ
れるプロモーターおよび転写因子を含有する組換え昆虫
ウイルスは、検出可能な生成物、挿入された昆虫転写因
子、マーカー遺伝子またはプロモーターの検出によって
測定することができる。検出はサザンブロット、ノーザ
ンブロット、ＰＣＲ，ウエスタンブロット、酵素アッセ
イ、制限消化、または本技術分野で利用可能な他の方法
によって行われる。トランスジェニック昆虫ウイルスの
構築および試験には、本技術分野における通常の技術以
上のものは必要ではない。
のためには、組換えトランスファーベクターが構築され
る。たとえば、昆虫転写因子をコードするＤＮＡフラグ
メントは、ウイルスプロモーターまたは構造細胞プロモ
ーターのいずれか、たとえばｐ10プロモーターに、本技
術分野において既知の方法、たとえば制限消化、ポリメ
ラーゼチェーン反応（ＰＣＲ）およびライゲーションに
よって共有結合で連結することができる。ついで、プロ
モーターおよび転写因子を包含するＤＮＡフラグメント
を、容易に入手できるベクター、たとえばｐＵＣ18によ
って担持されるウイルス遺伝子座、たとえば egt に挿
入する。組換えトランスファーベクターは、本技術分野
で用いられる方法、たとえばリポフェクション法によ
り、細胞系中に昆虫ウイルスとともにコトランスフェク
トする。組換えトランスファーベクターによって担持さ
れるプロモーターおよび転写因子を含有する組換え昆虫
ウイルスは、検出可能な生成物、挿入された昆虫転写因
子、マーカー遺伝子またはプロモーターの検出によって
測定することができる。検出はサザンブロット、ノーザ
ンブロット、ＰＣＲ，ウエスタンブロット、酵素アッセ
イ、制限消化、または本技術分野で利用可能な他の方法
によって行われる。トランスジェニック昆虫ウイルスの
構築および試験には、本技術分野における通常の技術以
上のものは必要ではない。
【００２８】本発明によって提供されるトランスジェニ
ックまたは組換えウイルスはバイオ有害生物殺滅剤とし
て有用である。トランスジェニックウイルスの宿主範囲
は、非修飾、野生型ウイルスの天然の宿主範囲によって
決定される。トランスジェニックウイルスは、野生型ウ
イルスに比較して、少なくとも５倍、通常は10倍毒性が
強い。昆虫ウイルスのビルレンスは本技術分野において
既知の方法により容易に測定することができる。トラン
スジェニックウイルスは、ウイルス中に挿入された転写
因子が同じ宿主昆虫から単離されるかまたは同じ宿主昆
虫中に天然に存在する因子と同一である場合に、宿主昆
虫においてその最大の効果を発揮する。宿主昆虫と同じ
目の昆虫からの転写因子、または類似の転写因子を採用
している昆虫からの転写因子も使用できる。転写因子の
有用性は本技術分野の熟練者には容易に決定できる。
ックまたは組換えウイルスはバイオ有害生物殺滅剤とし
て有用である。トランスジェニックウイルスの宿主範囲
は、非修飾、野生型ウイルスの天然の宿主範囲によって
決定される。トランスジェニックウイルスは、野生型ウ
イルスに比較して、少なくとも５倍、通常は10倍毒性が
強い。昆虫ウイルスのビルレンスは本技術分野において
既知の方法により容易に測定することができる。トラン
スジェニックウイルスは、ウイルス中に挿入された転写
因子が同じ宿主昆虫から単離されるかまたは同じ宿主昆
虫中に天然に存在する因子と同一である場合に、宿主昆
虫においてその最大の効果を発揮する。宿主昆虫と同じ
目の昆虫からの転写因子、または類似の転写因子を採用
している昆虫からの転写因子も使用できる。転写因子の
有用性は本技術分野の熟練者には容易に決定できる。
【００２９】本発明のトランスジェニック昆虫ウイルス
は、宿主昆虫に感染したのちには、宿主昆虫の内部で複
製し発現することができる。本発明のトランスジェニッ
ク昆虫ウイルスによる昆虫の感染は、トランスジェニッ
ク昆虫ウイルスの昆虫または昆虫幼虫による摂食、吸入
および直接接触を含む慣用の方法によって達成すること
ができる。好ましい実施態様においては、トランスジェ
ニック昆虫ウイルスはトランスジェニック昆虫ウイルス
を担持する封入体を用いる経口経路によって投与され
る。一般には、昆虫幼虫または昆虫に摂取させる封入体
の量は、非修飾昆虫ウイルスおよび昆虫宿主の種の場合
の約 0.2〜約 0.001 ＬＤ50に相当する。ＬＤ50は昆虫
ウイルスのそれぞれの種および幼虫齢によって変動し、
本技術分野の熟練者によって容易に決定される。
は、宿主昆虫に感染したのちには、宿主昆虫の内部で複
製し発現することができる。本発明のトランスジェニッ
ク昆虫ウイルスによる昆虫の感染は、トランスジェニッ
ク昆虫ウイルスの昆虫または昆虫幼虫による摂食、吸入
および直接接触を含む慣用の方法によって達成すること
ができる。好ましい実施態様においては、トランスジェ
ニック昆虫ウイルスはトランスジェニック昆虫ウイルス
を担持する封入体を用いる経口経路によって投与され
る。一般には、昆虫幼虫または昆虫に摂取させる封入体
の量は、非修飾昆虫ウイルスおよび昆虫宿主の種の場合
の約 0.2〜約 0.001 ＬＤ50に相当する。ＬＤ50は昆虫
ウイルスのそれぞれの種および幼虫齢によって変動し、
本技術分野の熟練者によって容易に決定される。
【００３０】通常、使用する封入体の量は処置する領域
内に生息する昆虫の量に比例する。一般的には、１エー
カーあたり、封入体約103 〜約1012の範囲で変動する。
この量は好ましくは１エーカーあたり封入体約106 〜約
109 の範囲、最も好ましくは約103 〜約106 の範囲であ
る。封入体の形成が起こらない場合には（たとえば、異
種遺伝子の挿入部位としてポリヘドリン遺伝子が用いら
れた場合には）、組換えおよび野生型ウイルス両者の出
芽ウイルス型による昆虫のコインフェクションが組換え
および野生型ウイルスの両者を含む封入体を提供し、昆
虫幼虫の経口経路による感染を可能にする。
内に生息する昆虫の量に比例する。一般的には、１エー
カーあたり、封入体約103 〜約1012の範囲で変動する。
この量は好ましくは１エーカーあたり封入体約106 〜約
109 の範囲、最も好ましくは約103 〜約106 の範囲であ
る。封入体の形成が起こらない場合には（たとえば、異
種遺伝子の挿入部位としてポリヘドリン遺伝子が用いら
れた場合には）、組換えおよび野生型ウイルス両者の出
芽ウイルス型による昆虫のコインフェクションが組換え
および野生型ウイルスの両者を含む封入体を提供し、昆
虫幼虫の経口経路による感染を可能にする。
【００３１】本発明の殺虫組成物は環境に適した担体お
よびトランスジェニック昆虫ウイルスから構成される。
この組成物は、農業用、森林用または意図される任意の
他の特定の使用に適したものでなければならない。一般
的には、組成物の成分は非毒性であり、封入されたウイ
ルスの統合性に対して有害であってはならない。葉への
適用が植物の葉を傷つけたり痛めたりしてはならない。
適当な固体またはより好ましくは液体担体に加え、組成
物には分散剤、展着剤- 粘着剤、ＵＶ保護剤、昆虫誘引
剤、ウイルス増強剤、粘着および接着剤、乳化剤、湿潤
剤、および昆虫の摂食を刺激する物質を包含させること
ができるが、望ましくない効果を与える成分たとえば昆
虫の摂食を躊躇させるような物質は含有させない。殺虫
組成物に適当な担体は本技術分野において既知であり、
容易に利用できる、たとえば水、クレー等のような希釈
剤である。
よびトランスジェニック昆虫ウイルスから構成される。
この組成物は、農業用、森林用または意図される任意の
他の特定の使用に適したものでなければならない。一般
的には、組成物の成分は非毒性であり、封入されたウイ
ルスの統合性に対して有害であってはならない。葉への
適用が植物の葉を傷つけたり痛めたりしてはならない。
適当な固体またはより好ましくは液体担体に加え、組成
物には分散剤、展着剤- 粘着剤、ＵＶ保護剤、昆虫誘引
剤、ウイルス増強剤、粘着および接着剤、乳化剤、湿潤
剤、および昆虫の摂食を刺激する物質を包含させること
ができるが、望ましくない効果を与える成分たとえば昆
虫の摂食を躊躇させるような物質は含有させない。殺虫
組成物に適当な担体は本技術分野において既知であり、
容易に利用できる、たとえば水、クレー等のような希釈
剤である。
【００３２】
【実施例】以下の実施例は例示の目的のみで提供される
ものであり、本発明の範囲の限定を意図するものではな
い。実施例１ トランスファーベクターの構築 図１に示すように、ＣｆＭＮＰＶトランスファーベクタ
ーは、最初に egt 遺伝子を含有するＣｆＭＮＰＶの 6
kb フラグメントをｐＵＣ18にクローニングすることに
より創成した。ついでＡｃＭＮＰＶポリヘドリンおよび
ｐ10プロモーター領域ならびにｐ10プロモーター下にβ
- ガラクトシダーゼの読み取り枠を含有するカセットを
egt 遺伝子の中間部に挿入した。ＣＨＲ3 のＮ- 末端
およびＣ- 末端部におけるヌクレオチド配列に基づく合
成プライマーにより、ポリメラーゼチェーン反応（ＰＣ
Ｒ）を用いてＣＨＲ3 ｃＤＮＡを増幅した。プライマー
配列中には制限酵素Ｂagl II部位も包含させた。ＰＣＲ
産物をゲル上でチェックして期待されるサイズを有する
産物が見出された。ついでＰＣＲ産物を Sephadexカラ
ムに通して精製して、プライマー、ヌクレオチドおよび
ＰＣＲ産物の他の成分を除去した。ＤＮＡをついでＢag
l IIで消化し、Sephadex カラム上で再精製して消化さ
れたＢagl IIリンカーを除去した。消化され精製された
ＤＮＡを、ＢamＨＩ消化ＣｆＭＮＰＶトランスファーベ
クターに、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いて16℃で16時間ラ
イゲートした。ライゲートしたＤＮＡをＢamＨＩで消化
して自己ライゲートしたベクターを除去した。ライゲー
トしたＤＮＡをついでＸＬＩ青色細胞中にトランスフォ
ームし、組換えクローンを32Ｐ標識ＣＨＲ３プローブを
用いてスクリーニングした（Feinberg & Vogelstein, 1
984, Anal.Biochem. 137, 266-267 ）。ＤＮＡを陽性ク
ローンから単離しＢamＨＩで消化した。ＢamＨＩで線状
化されなかった組換えクローンからのＤＮＡおよび２種
のＣＨＲ３プライマーをＰＣＲ操作に用いて挿入体のサ
イズを確証した。組換え体中の挿入体は期待されたサイ
ズを示した。ついでジデオキシターミネーション法を用
いて組換え体からのＤＮＡの配列を決定した。ヌクレオ
チド配列は 5' および 3' 末端の両者においてＣＨＲ３
の配列と同一であった。各方向性につき１個のクローン
をＣｆＭＮＰＶへのトランスファーに選択した。
ものであり、本発明の範囲の限定を意図するものではな
い。実施例１ トランスファーベクターの構築 図１に示すように、ＣｆＭＮＰＶトランスファーベクタ
ーは、最初に egt 遺伝子を含有するＣｆＭＮＰＶの 6
kb フラグメントをｐＵＣ18にクローニングすることに
より創成した。ついでＡｃＭＮＰＶポリヘドリンおよび
ｐ10プロモーター領域ならびにｐ10プロモーター下にβ
- ガラクトシダーゼの読み取り枠を含有するカセットを
egt 遺伝子の中間部に挿入した。ＣＨＲ3 のＮ- 末端
およびＣ- 末端部におけるヌクレオチド配列に基づく合
成プライマーにより、ポリメラーゼチェーン反応（ＰＣ
Ｒ）を用いてＣＨＲ3 ｃＤＮＡを増幅した。プライマー
配列中には制限酵素Ｂagl II部位も包含させた。ＰＣＲ
産物をゲル上でチェックして期待されるサイズを有する
産物が見出された。ついでＰＣＲ産物を Sephadexカラ
ムに通して精製して、プライマー、ヌクレオチドおよび
ＰＣＲ産物の他の成分を除去した。ＤＮＡをついでＢag
l IIで消化し、Sephadex カラム上で再精製して消化さ
れたＢagl IIリンカーを除去した。消化され精製された
ＤＮＡを、ＢamＨＩ消化ＣｆＭＮＰＶトランスファーベ
クターに、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いて16℃で16時間ラ
イゲートした。ライゲートしたＤＮＡをＢamＨＩで消化
して自己ライゲートしたベクターを除去した。ライゲー
トしたＤＮＡをついでＸＬＩ青色細胞中にトランスフォ
ームし、組換えクローンを32Ｐ標識ＣＨＲ３プローブを
用いてスクリーニングした（Feinberg & Vogelstein, 1
984, Anal.Biochem. 137, 266-267 ）。ＤＮＡを陽性ク
ローンから単離しＢamＨＩで消化した。ＢamＨＩで線状
化されなかった組換えクローンからのＤＮＡおよび２種
のＣＨＲ３プライマーをＰＣＲ操作に用いて挿入体のサ
イズを確証した。組換え体中の挿入体は期待されたサイ
ズを示した。ついでジデオキシターミネーション法を用
いて組換え体からのＤＮＡの配列を決定した。ヌクレオ
チド配列は 5' および 3' 末端の両者においてＣＨＲ３
の配列と同一であった。各方向性につき１個のクローン
をＣｆＭＮＰＶへのトランスファーに選択した。
【００３３】実施例２ 組換えウイルスの製造 ＣｆＭＮＰＶ ＤＮＡおよび組換えトランスファーベク
ターＤＮＡ（センスおよびアンチセンス方向のＣＨＲ
３）を、リポフェクション法を用いてＣＦ-124Ｔ細胞に
コトランスフェクトした。トランスフェクションから１
週後に培地を集めてプラーク精製組換えウイルスの接種
材料として使用した。プラーク精製には、組換え出芽ウ
イルス（ＢＶ）を様々な希釈度でＣＦ-203細胞上にプレ
ーティングした。感染１週後に、プレートをＸ-galで染
色した。最低の希釈度で観察される青色の領域を採取し
て再プラークした。この操作を４回反復した。ＣＨＲ３
をセンスおよびアンチセンスの方向性で発現する２種の
ウイルスが得られた。プラーク精製ウイルスをついでＣ
Ｆ-203細胞中で増幅させた。ＢＶからＤＮＡを単離し、
Ｈind III で消化し、アガロースゲル上で分離した。ゲ
ルからのＤＮＡをＨybond-Ｎメンブランに移送し、32Ｐ
標識ＣＨＲ３プローブを用いて試験した。図２に示すよ
うに、ＣＨＲ３プローブにハイブリダイズした１つのバ
ンドが組換えウイルスＤＮＡの消化物中に観察された
が、野生型ＣｆＭＮＰＶ ＤＮＡ中には観察されなかっ
た。組換え体のＨind III 消化パターンを野生型ＣｆＭ
ＮＰＶ ＤＮＡの場合と比較したところ、ＣＨＲ3 ＤＮ
ＡはＣｆＭＮＰＶの期待された領域に挿入されたことが
明らかにされた。組換えウイルスから単離されたＤＮＡ
とＣＨＲ３プライマーを用いて、ＰＣＲ操作により組換
えウイルス内のＣＨＲ３挿入体のサイズを確証した。両
ウイルスとも期待されたサイズの挿入体を含有すること
が見出された。ＰＣＲ増幅ＤＮＡをついで配列決定した
ところ、そのヌクレオチド配列はＣＨＲ３の場合と同一
であった。
ターＤＮＡ（センスおよびアンチセンス方向のＣＨＲ
３）を、リポフェクション法を用いてＣＦ-124Ｔ細胞に
コトランスフェクトした。トランスフェクションから１
週後に培地を集めてプラーク精製組換えウイルスの接種
材料として使用した。プラーク精製には、組換え出芽ウ
イルス（ＢＶ）を様々な希釈度でＣＦ-203細胞上にプレ
ーティングした。感染１週後に、プレートをＸ-galで染
色した。最低の希釈度で観察される青色の領域を採取し
て再プラークした。この操作を４回反復した。ＣＨＲ３
をセンスおよびアンチセンスの方向性で発現する２種の
ウイルスが得られた。プラーク精製ウイルスをついでＣ
Ｆ-203細胞中で増幅させた。ＢＶからＤＮＡを単離し、
Ｈind III で消化し、アガロースゲル上で分離した。ゲ
ルからのＤＮＡをＨybond-Ｎメンブランに移送し、32Ｐ
標識ＣＨＲ３プローブを用いて試験した。図２に示すよ
うに、ＣＨＲ３プローブにハイブリダイズした１つのバ
ンドが組換えウイルスＤＮＡの消化物中に観察された
が、野生型ＣｆＭＮＰＶ ＤＮＡ中には観察されなかっ
た。組換え体のＨind III 消化パターンを野生型ＣｆＭ
ＮＰＶ ＤＮＡの場合と比較したところ、ＣＨＲ3 ＤＮ
ＡはＣｆＭＮＰＶの期待された領域に挿入されたことが
明らかにされた。組換えウイルスから単離されたＤＮＡ
とＣＨＲ３プライマーを用いて、ＰＣＲ操作により組換
えウイルス内のＣＨＲ３挿入体のサイズを確証した。両
ウイルスとも期待されたサイズの挿入体を含有すること
が見出された。ＰＣＲ増幅ＤＮＡをついで配列決定した
ところ、そのヌクレオチド配列はＣＨＲ３の場合と同一
であった。
【００３４】実施例３ ＣＨＲ3 発現の時間経過 組換えウイルスで感染したＣＦ-203細胞におけるＣＨＲ
３の発現の時間経過を検討するため、ＣＨＲ３をセンス
およびアンチセンスの方向で発現する組換えウイルスを
ＣＦ-203細胞に接種した。接種後 0, 6, 12, 24, 48, 7
2 および 96 時間に細胞を収集した。総ＲＮＡを単離
し、ＣＨＲ３ｃＤＮＡをプローブとして使用してノーザ
ンハイブリダイゼーションにより解析した。図３に示す
ように、２種の組換えウイルスのいずれについても、接
種24時間後にＣＨＲ３ｍＲＮＡの細胞内蓄積が開始され
た。接種後96時間までｍＲＮＡレベルは高く維持され
た。
３の発現の時間経過を検討するため、ＣＨＲ３をセンス
およびアンチセンスの方向で発現する組換えウイルスを
ＣＦ-203細胞に接種した。接種後 0, 6, 12, 24, 48, 7
2 および 96 時間に細胞を収集した。総ＲＮＡを単離
し、ＣＨＲ３ｃＤＮＡをプローブとして使用してノーザ
ンハイブリダイゼーションにより解析した。図３に示す
ように、２種の組換えウイルスのいずれについても、接
種24時間後にＣＨＲ３ｍＲＮＡの細胞内蓄積が開始され
た。接種後96時間までｍＲＮＡレベルは高く維持され
た。
【００３５】実施例４ 組換えウイルスの殺虫活性の評価 最初の試験では、ＣＨＲ３をセンスまたはアンチセンス
のいずれかの方向で発現する組換えウイルスを接種した
ＣＦ-203細胞から単離された封入体（ＯＢ）１×105 を
Choristoneura fumiferana 第五齢幼虫に摂取させた。
２〜３日後に、ＣＨＲ３をセンス方向に発現する組換え
ウイルスを摂取した幼虫10匹中８匹は頭部被膜のずれ
（ＨＣＳ）を示して瀕死状態に維持され、他の２匹は第
五齢幼虫として死亡した。頭部被膜のずれを示した幼虫
は着色していない頭部被膜を有し、摂食を停止し、瀕死
状態に維持され、最終的に死亡した。一部の昆虫では消
化管後部が肛門端から突出していた。これらの症状は、
非ステロイド性エクジソンアゴニストたとえばテブフェ
ノジドに中毒した幼虫の示す症状に類似する。アンチセ
ンス方向にＣＨＲ３を発現する組換えウイルスを摂食し
た幼虫はこれらの症状を示さなかった。部分脱皮の症状
を示した昆虫から得られたウイルスを単離し、表２およ
び３に示す第二および第三のバイオアッセイに用いた。
1000ＯＢ程度の低用量の組換えウイルスを摂取した幼虫
は不完全脱皮の典型的症状を示した。
のいずれかの方向で発現する組換えウイルスを接種した
ＣＦ-203細胞から単離された封入体（ＯＢ）１×105 を
Choristoneura fumiferana 第五齢幼虫に摂取させた。
２〜３日後に、ＣＨＲ３をセンス方向に発現する組換え
ウイルスを摂取した幼虫10匹中８匹は頭部被膜のずれ
（ＨＣＳ）を示して瀕死状態に維持され、他の２匹は第
五齢幼虫として死亡した。頭部被膜のずれを示した幼虫
は着色していない頭部被膜を有し、摂食を停止し、瀕死
状態に維持され、最終的に死亡した。一部の昆虫では消
化管後部が肛門端から突出していた。これらの症状は、
非ステロイド性エクジソンアゴニストたとえばテブフェ
ノジドに中毒した幼虫の示す症状に類似する。アンチセ
ンス方向にＣＨＲ３を発現する組換えウイルスを摂食し
た幼虫はこれらの症状を示さなかった。部分脱皮の症状
を示した昆虫から得られたウイルスを単離し、表２およ
び３に示す第二および第三のバイオアッセイに用いた。
1000ＯＢ程度の低用量の組換えウイルスを摂取した幼虫
は不完全脱皮の典型的症状を示した。
【表２】
【表３】
【００３６】実施例５ マンヂュカホルモン受容体３（ＭＨＲ3 ）を発現する A
utographa californica ヌクレオポリヘドロウイルス
（ＡｃＭＮＰＶ）の製造 本発明者らは、ＭＨＲ３を発現する組換えＡｃＭＮＰＶ
を構築した。ＭＨＲ３ｃＤＮＡ（Palli ら, 1992, Dev.
Biol.）は制限酵素消化、すなわちＥcoＲＩおよびＸho
Ｉ消化により単離し、ＡｃＭＮＰＶトランスファーベク
ターｐＦＡＳＴＢＡＣＩ（Life Technologies, INC）の
ＥcoＲＩおよびＸhoＩ部位にクローン化した。ＭＨＲ３
を発現するＡｃＭＮＰＶ組換え体をついで製造業者（Li
fe Technologies, INC）によって供給された操作にした
がって同定した。ＡｃＭＨＲ３組換え体中のＭＨＲ３ｃ
ＤＮＡの存在は、プローブとしてＭＨＲ３ｃＤＮＡを用
いたサザンブロットハイブリダイゼーションによって確
証した。ウイルスの力価はプラークアッセイ操作によっ
て測定した。ＳＦ-900培地中で培養した昆虫細胞系、Sp
odoptera frugiperda 9 細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ-1711
）をＡｃＭＨＲ３組換え体により感染多重度（ＭＯ
Ｉ）１で接種した。接種後12, 24, 48, 72 および 96
時間に細胞を収穫した。１セットの細胞サンプルからＲ
ＮＡを単離し、1.0 ％のアガロースホルムアルデヒドゲ
ル上で分割し、Ｈybond-Ｎメンブランにトランスファー
し、ノーザンハイブリダイゼーション条件下にＭＨＲ３
ｃＤＮＡをプローブとして試験した。タンパク質は他の
セットの細胞サンプルから単離し、ＭＨＲ３抗体を用い
てウエスタンブロットで分析した。ＭＨＲ３ｃＲＮＡは
ＡｃＭＨＲ３接種ＳＦ-9細胞中に12時間後に始めて検出
され、ＭＨＲ３タンパク質は24時間後に始めて検出され
た。組換えＡｃＭＮＲ３はついで、Trichoplusia ni幼
虫でのバイオアッセイ操作によって評価した。非修飾Ａ
ｃＭＮＰＶおよびＡｃＭＨＲ３と同様にして構築された
緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するＡｃＭＮＰＶ
組換え体を用いてＡｃＭＨＲ３とバイオアッセイで比較
した。最後から２番目齢の T.ni 幼虫にある量のウイル
ス（プラーク形成単位）を含有する溶液１μl を注射し
た。注射後、幼虫を食餌カップに移し、それらが死亡す
るかまたは蛹化するまで毎日観察した。図４に示すよう
に、ＡｃＭＨＲ３はこの昆虫を殺滅し、ＡｃＭＮＰＶよ
り1000倍良好に作用した。ＡｃＧＦＰはＡｃＭＮＰＶよ
り15倍良好に作用したのみであった。
utographa californica ヌクレオポリヘドロウイルス
（ＡｃＭＮＰＶ）の製造 本発明者らは、ＭＨＲ３を発現する組換えＡｃＭＮＰＶ
を構築した。ＭＨＲ３ｃＤＮＡ（Palli ら, 1992, Dev.
Biol.）は制限酵素消化、すなわちＥcoＲＩおよびＸho
Ｉ消化により単離し、ＡｃＭＮＰＶトランスファーベク
ターｐＦＡＳＴＢＡＣＩ（Life Technologies, INC）の
ＥcoＲＩおよびＸhoＩ部位にクローン化した。ＭＨＲ３
を発現するＡｃＭＮＰＶ組換え体をついで製造業者（Li
fe Technologies, INC）によって供給された操作にした
がって同定した。ＡｃＭＨＲ３組換え体中のＭＨＲ３ｃ
ＤＮＡの存在は、プローブとしてＭＨＲ３ｃＤＮＡを用
いたサザンブロットハイブリダイゼーションによって確
証した。ウイルスの力価はプラークアッセイ操作によっ
て測定した。ＳＦ-900培地中で培養した昆虫細胞系、Sp
odoptera frugiperda 9 細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ-1711
）をＡｃＭＨＲ３組換え体により感染多重度（ＭＯ
Ｉ）１で接種した。接種後12, 24, 48, 72 および 96
時間に細胞を収穫した。１セットの細胞サンプルからＲ
ＮＡを単離し、1.0 ％のアガロースホルムアルデヒドゲ
ル上で分割し、Ｈybond-Ｎメンブランにトランスファー
し、ノーザンハイブリダイゼーション条件下にＭＨＲ３
ｃＤＮＡをプローブとして試験した。タンパク質は他の
セットの細胞サンプルから単離し、ＭＨＲ３抗体を用い
てウエスタンブロットで分析した。ＭＨＲ３ｃＲＮＡは
ＡｃＭＨＲ３接種ＳＦ-9細胞中に12時間後に始めて検出
され、ＭＨＲ３タンパク質は24時間後に始めて検出され
た。組換えＡｃＭＮＲ３はついで、Trichoplusia ni幼
虫でのバイオアッセイ操作によって評価した。非修飾Ａ
ｃＭＮＰＶおよびＡｃＭＨＲ３と同様にして構築された
緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するＡｃＭＮＰＶ
組換え体を用いてＡｃＭＨＲ３とバイオアッセイで比較
した。最後から２番目齢の T.ni 幼虫にある量のウイル
ス（プラーク形成単位）を含有する溶液１μl を注射し
た。注射後、幼虫を食餌カップに移し、それらが死亡す
るかまたは蛹化するまで毎日観察した。図４に示すよう
に、ＡｃＭＨＲ３はこの昆虫を殺滅し、ＡｃＭＮＰＶよ
り1000倍良好に作用した。ＡｃＧＦＰはＡｃＭＮＰＶよ
り15倍良好に作用したのみであった。
【００３７】本発明の原理、好ましい実施態様および操
作様式について上述の明細書において説明した。しかし
ながら、開示された特定の形態は限定的なものではなく
例示的なものと見るべきであるから、ここで保護が意図
される本発明を開示された特定の形態に限定するものと
解するべきではない。本技術分野の熟練者によれば、本
発明の精神から逸脱することなく、改変および修正が可
能である。
作様式について上述の明細書において説明した。しかし
ながら、開示された特定の形態は限定的なものではなく
例示的なものと見るべきであるから、ここで保護が意図
される本発明を開示された特定の形態に限定するものと
解するべきではない。本技術分野の熟練者によれば、本
発明の精神から逸脱することなく、改変および修正が可
能である。
【図１】ＣｆＭＮＰＶトランスファーベクターの構築を
示す図。
示す図。
【図２】ＣＨＲ3 ＤＮＡがＣｆＭＮＰＶの期待される領
域に挿入されることを証明する分析図。
域に挿入されることを証明する分析図。
【図３】組換えウイルスに感染した細胞におけるＣＨＲ
3 発現の時間経過を示す図。
3 発現の時間経過を示す図。
【図４】バイオアッセイにおけるＡｃＭＨＲ３の作用を
示す図。ＡｃＭＮＰＶ（●）は、非修飾ウイルスを示
す。ＡｃＧＦＰ（▲）は、緑色蛍光タンパク質を発現す
るＡｃＭＮＰＶ組換え体を示す。ＡｃＭＨＲ３（■）
は、転写因子ＭＨＲ３を発現するＡｃＭＮＰＶ組換え体
を示す。
示す図。ＡｃＭＮＰＶ（●）は、非修飾ウイルスを示
す。ＡｃＧＦＰ（▲）は、緑色蛍光タンパク質を発現す
るＡｃＭＮＰＶ組換え体を示す。ＡｃＭＨＲ３（■）
は、転写因子ＭＨＲ３を発現するＡｃＭＮＰＶ組換え体
を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 598031567 580 Ｂｏｏｔｈ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｏｔ ｔａｗａ， Ｏｎｔａｒｉｏ， Ｃａｎａ ｄａ Ｋ１Ａ ０Ｅ４ (72)発明者 サルダー・シング・ソヒ カナダ、Ｐ６Ｂ４Ｅ６、オンタリオ、ス ー・セント・マリー、マックリー・ストリ ート 21 (72)発明者 バジル・マンタ・アリフ カナダ、Ｐ６Ａ５Ｃ８、オンタリオ、ス ー・セント・マリー、デル・アベニュー 65 (72)発明者 アーサー・リトナカラン カナダ、Ｐ６Ｂ４Ｅ６、オンタリオ、ス ー・セント・マリー、アシュグローブ・ア ベニュー 50
Claims (15)
- 【請求項１】 発生調節昆虫転写因子をコードし、転写
調節領域に操作性に連結する異種ＤＮＡを含有するトラ
ンスジェニック昆虫ウイルス。 - 【請求項２】 昆虫転写因子は、昆虫の脱皮および変態
に関連する、請求項１記載のトランスジェニック昆虫ウ
イルス。 - 【請求項３】 異種ＤＮＡは、発生調節昆虫転写因子お
よび検出可能な生成物からなる融合タンパク質をコード
する、請求項１記載のトランスジェニック昆虫ウイル
ス。 - 【請求項４】 昆虫転写因子はショウジョウバエ（Dros
ophila）ＢＲ- Ｃ，Ｅ74，Ｅ75，ウルトラスピラクル，
Ｅ78，セブンアップ，Ｋni/ Ｋnrl/egon，ＦＴＺ- Ｆ
１，ＤＨＲ38，Ｅ93，レリシュ- 抗菌転写因子，コルヘ
ッドパタン形成転写因子，エスカルゴおよびカタツムリ
転写因子，背側転写因子，ＤＳＸ- ＭおよびＤＳＸ- Ｆ
転写因子，Ｄif，Ｅyeless 転写因子，Ｇap 遺伝子 k
ni 転写因子，カッパーＢ様免疫遺伝子活性化転写因
子，前方および後方端胚発生を調節する接合体遺伝子に
よりコードされる転写因子，ＤＨＲ78，ＤＨＲ96，マン
デュカ（Manduca ）ＭＨＲ3-エクジソン誘導転写因子，
コリストニューラ（Choristoneura ）ホルモン受容体２
（ＣＨＲ２），コリストニュウーラホルモン受容体３
（ＣＨＲ３），Choristoneura fumiferana エクジソン
受容体（ＣｆＥｃＲ），Choristoneura fumiferana ウ
ルトラスピラクルタンパク質（ＣｆＵＳＰ），スポドプ
テラ（Spodoptera）ウイルス gp64 活性化転写因子，Ｅ
gr- １マスタースイッチ遺伝子ならびにBombyx Mori シ
ルクタンパク質転写因子からなる群より選択される、請
求項１記載のトランスジェニック昆虫ウイルス。 - 【請求項５】 昆虫転写因子は、コリストニューラ受容
体２（ＣＨＲ2 ），コリストニューラホルモン受容体３
（ＣＨＲ3 ），Choristoneura fumiferanaエクジソン受
容体（ＣｆＥｃＲ），Choristoneura fumiferana ウル
トラスピラクルタンパク質（ＣｆＵＳＰ），マンデュカ
ホルモン受容体３（ＭＨＲ3 ）およびショウジョウバエ
ホルモン受容体38（ＤＨＲ38）からなる群より選択され
る、請求項２記載のトランスジェニック昆虫ウイルス。 - 【請求項６】 転写調節領域は、ｐ10プロモーター，ポ
リヘドリンプロモーター，ＥＴＬプロモーター，ＩＥ１
プロモーター，egt プロモーター，ｐ35プロモーター，
およびアクチンプロモーターからなる群より選択され
る、請求項１記載のトランスジェニック昆虫ウイルス。 - 【請求項７】 ウイルスはＤＮＡウイルスである、請求
項１記載のトランスジェニック昆虫ウイルス。 - 【請求項８】 ＤＮＡウイルスは、バキュロウイルス、
エントモポックスウイルスＡおよびエントモポックスウ
イルスＢからなる群より選択される、請求項７記載のト
ランスジェニック昆虫ウイルス。 - 【請求項９】 異種ＤＮＡは、ポリヘドリン遺伝子、ｐ
10遺伝子、ｐ48遺伝子およびエクジステロイドグルコシ
ルトランスフェラーゼ遺伝子からなる群より選択される
ウイルス遺伝子内に存在する、請求項１記載のトランス
ジェニック昆虫ウイルス。 - 【請求項10】 昆虫転写因子は請求項１記載のトランス
ジェニック昆虫ウイルスに感染した昆虫内で発現され
る、請求項１記載のトランスジェニック昆虫ウイルス。 - 【請求項11】 請求項１記載のトランスジェニック昆虫
ウイルスおよび環境に適当な担体からなる殺虫組成物。 - 【請求項12】 請求項11記載の殺虫組成物を昆虫有害生
物を含む領域に投与することからなる昆虫有害生物の処
置方法。 - 【請求項13】 トランスジェニックウイルスは発生調節
昆虫転写因子をコードする異種ＤＮＡを含有し、その転
写因子は上記昆虫内に天然に存在する、請求項12記載の
方法。 - 【請求項14】 請求項１記載の昆虫トランスジェニック
ウイルスに感染させることからなる昆虫に異常な発生を
起こさせる方法。 - 【請求項15】 トランスジェニックウイルスは発生調節
昆虫転写因子をコードする異種ＤＮＡを含有し、その転
写因子は上記昆虫内に天然に存在する、請求項14記載の
方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US787,398 | 1997-01-22 | ||
| US08/787,398 US5891431A (en) | 1997-01-22 | 1997-01-22 | Transgenic virus |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10262669A true JPH10262669A (ja) | 1998-10-06 |
Family
ID=25141344
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10044155A Pending JPH10262669A (ja) | 1997-01-22 | 1998-01-22 | トランスジェニックウイルス |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5891431A (ja) |
| EP (2) | EP0861901A3 (ja) |
| JP (1) | JPH10262669A (ja) |
| KR (1) | KR19980070711A (ja) |
| CN (1) | CN1190128A (ja) |
| AU (1) | AU743526B2 (ja) |
| BR (1) | BR9800445A (ja) |
| CA (1) | CA2228195C (ja) |
| HU (1) | HUP9800113A2 (ja) |
| IL (1) | IL122999A0 (ja) |
| SG (1) | SG60187A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA98475B (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6300488B1 (en) * | 1997-07-10 | 2001-10-09 | The Salk Institute For Biological Studies | Modified lepidopteran receptors and hybrid multifunctional proteins for use in transcription and regulation of transgene expression |
| US8637237B2 (en) * | 2003-08-29 | 2014-01-28 | The University Of North Carolina At Greensboro | Methods, compositions, and systems for the identification of species-specific or developmental stage-specific insecticides |
| US7790377B2 (en) * | 2003-08-29 | 2010-09-07 | The University Of North Carolina At Greensboro | Compounds that act to modulate insect growth and methods and systems for identifying such compounds |
| US20100240056A1 (en) * | 2003-08-29 | 2010-09-23 | Henrich Iii Vincent C | Methods And Systems For Screening Species-Specific Insecticidal Candidates |
| CN101210252B (zh) * | 2007-12-24 | 2010-06-16 | 浙江大学 | 鳞翅目害虫基质金属蛋白酶基因mmp及其应用 |
| CN108949769B (zh) * | 2018-07-24 | 2021-11-09 | 江西农业大学 | 一种棉铃虫蜕皮激素调控因子E78-C基因cDNA及其应用 |
| CN109504685B (zh) * | 2018-12-20 | 2021-07-27 | 山西大学 | E93基因及其dsRNA在害虫防治中的应用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5643776A (en) * | 1988-11-01 | 1997-07-01 | The Regents Of The University Of California | Insect diagnostic and control compositions |
| GB9405951D0 (en) * | 1994-03-25 | 1994-05-11 | Zeneca Ltd | Biological control agents |
| NZ308772A (en) * | 1995-05-17 | 1999-04-29 | Du Pont | Recombinant baculovirus insecticides |
| AU6007798A (en) * | 1997-02-14 | 1998-09-08 | New Zealand Pastoral Agriculture Research Institute Limited | Insect ecdysteroid receptors |
| AUPP135698A0 (en) * | 1998-01-15 | 1998-02-05 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Insectical modalities |
-
1997
- 1997-01-22 US US08/787,398 patent/US5891431A/en not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-01-20 IL IL12299998A patent/IL122999A0/xx unknown
- 1998-01-20 CA CA002228195A patent/CA2228195C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-01-21 AU AU52161/98A patent/AU743526B2/en not_active Ceased
- 1998-01-21 ZA ZA98475A patent/ZA98475B/xx unknown
- 1998-01-22 EP EP98300446A patent/EP0861901A3/en not_active Withdrawn
- 1998-01-22 JP JP10044155A patent/JPH10262669A/ja active Pending
- 1998-01-22 HU HU9800113A patent/HUP9800113A2/hu unknown
- 1998-01-22 KR KR1019980001883A patent/KR19980070711A/ko not_active Application Discontinuation
- 1998-01-22 SG SG1998000163A patent/SG60187A1/en unknown
- 1998-01-22 CN CN98100159A patent/CN1190128A/zh active Pending
- 1998-01-22 BR BR9800445-0A patent/BR9800445A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-01-22 EP EP03003774A patent/EP1323822A3/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1323822A3 (en) | 2003-07-09 |
| EP0861901A2 (en) | 1998-09-02 |
| HUP9800113A2 (hu) | 1998-09-28 |
| AU5216198A (en) | 1998-07-30 |
| EP1323822A2 (en) | 2003-07-02 |
| IL122999A0 (en) | 1998-08-16 |
| ZA98475B (en) | 1998-07-30 |
| CA2228195C (en) | 2002-09-03 |
| US5891431A (en) | 1999-04-06 |
| CN1190128A (zh) | 1998-08-12 |
| AU743526B2 (en) | 2002-01-31 |
| BR9800445A (pt) | 2001-03-13 |
| HU9800113D0 (en) | 1998-03-30 |
| KR19980070711A (ko) | 1998-10-26 |
| SG60187A1 (en) | 1999-02-22 |
| EP0861901A3 (en) | 1999-12-22 |
| CA2228195A1 (en) | 1998-07-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3252854B2 (ja) | 組み換えバキュロウイルス殺虫剤 | |
| US6846482B2 (en) | Insect control agent | |
| US5266317A (en) | Insect-specific paralytic neurotoxin genes for use in biological insect control: methods and compositions | |
| US5858353A (en) | Insect viruses, sequences, insecticidal compositions and methods | |
| TW397865B (en) | Heterologous signal sequences for secretion of insect controlling proteins | |
| JP2001501824A (ja) | 昆虫特異的ダニ毒素遺伝子を発現する生物学的昆虫防除剤、方法および組成物 | |
| JPH10262669A (ja) | トランスジェニックウイルス | |
| CA2331853A1 (en) | Recombinant baculovirus-based insecticides | |
| EP0621337A1 (en) | Codon optimized DNA sequence for insect toxin AaIT | |
| KR19990076627A (ko) | 재조합 배큘로바이러스의 제조 | |
| US6156309A (en) | Insecticidal compositions and methods | |
| AU720082B2 (en) | Heterologous signal sequences for secretion of insect controlling toxins | |
| MXPA98000646A (en) | Transgen virus | |
| AU721364B2 (en) | Codon optimized DNA sequence for insect toxin AaIT | |
| US20050125847A1 (en) | Use of coral red fluorescence proteins as tracers for easy identification of genetic modified Baculoviruses | |
| Narayanan | Project Directorate of Biological Control, PB No. 2491, Hebbal, Bangalore 560 024, India | |
| MXPA99002857A (en) | Biological insect control agents expressing insect-specific mite toxin genes, methods and compositions | |
| MXPA00010981A (es) | Insecticidas con base en basculovirus recombinantes |