JPH10259192A - Production of phosphorothioate diester - Google Patents
Production of phosphorothioate diesterInfo
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- JPH10259192A JPH10259192A JP9082105A JP8210597A JPH10259192A JP H10259192 A JPH10259192 A JP H10259192A JP 9082105 A JP9082105 A JP 9082105A JP 8210597 A JP8210597 A JP 8210597A JP H10259192 A JPH10259192 A JP H10259192A
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- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Abstract
Description
【0001】[0001]
【発明の属する技術】本発明は、リン酸トリエステル法
(液相法)でホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを
合成するため、原料として使用するホスホロチオエート
トリエステル化合物の合成中間体であるホスホロチオエ
ートジエステル化合物の簡便な合成法に関するものであ
る。The present invention relates to a simple synthesis of a phosphorothioate diester compound which is an intermediate for synthesizing a phosphorothioate triester compound used as a raw material for synthesizing a phosphorothioate oligonucleotide by a phosphoric acid triester method (liquid phase method). It is about the law.
【0002】[0002]
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】通常、
リン酸トリエステル法(液相法)でホスホロチオエート
オリゴヌクレオチドを合成する際、ホスホロチオエート
トリエステル化合物を原料して使用する。このホスホロ
チオエートトリエステル化合物の合成法としては、従来
種々の方法が報告されているものの、いずれの方法も目
的とするトリエステル化合物の収率が低くかったり、反
応操作が煩雑であったりなどして、必ずしも満足し得る
ものではなかった(J. Am. Chem. Soc.,113, 3972-3980
(1991)、Antisense Research and Development, 5, 39-
47(1995)、米国特許第5210264号など参照)。BACKGROUND OF THE INVENTION Generally,
When synthesizing a phosphorothioate oligonucleotide by the phosphate triester method (liquid phase method), a phosphorothioate triester compound is used as a raw material. As a method for synthesizing the phosphorothioate triester compound, various methods have been reported in the past, but any method may result in a low yield of the intended triester compound or a complicated reaction operation. Was not always satisfactory (J. Am. Chem. Soc., 113, 3972-3980).
(1991), Antisense Research and Development, 5, 39-
47 (1995), US Pat. No. 5,210,264).
【0003】[0003]
【課題を解決するための手段】本発明者は、ホスホロチ
オエートトリエステル化合物の簡便な合成法を確立する
ために鋭意研究を重ねた結果、ホスホロチオエートトリ
エステル化合物の合成中間体あるいは前駆体であるホス
ホロチオエートジエステル化合物をワンポットで合成す
る方法を見いだし、得られたホスホロチオエートジエス
テル化合物から目的とするホスホロチオエートトリエス
テル化合物は公知の方法で簡単に誘導できることを確認
し、本発明を完成させた。The present inventors have conducted intensive studies to establish a simple method for synthesizing phosphorothioate triester compounds. As a result, the present inventors have found that phosphorothioate diesters are intermediates or precursors of phosphorothioate triester compounds. The present inventors have found a method of synthesizing a compound in one pot, and have confirmed that a desired phosphorothioate triester compound can be easily derived from the obtained phosphorothioate diester compound by a known method, thereby completing the present invention.
【0004】すなわち、本発明は、式(I)で表される
ヌクレオシド誘導体とチオホスホリル化合物とを反応さ
せ、さらにアルコール類(HO−R4)を反応させた
後、脱保護剤(M)を用いてリン酸保護基(R4)の一
部を除去し、式(II)で表されるホスホロチオエート
ジエステル化合物をその中間体を単離することなくワン
ポットで合成することを特徴とするホスホロチオエート
ジエステル化合物の製造法に関するものである。That is, according to the present invention, after reacting a nucleoside derivative represented by the formula (I) with a thiophosphoryl compound, further reacting an alcohol (HO-R 4 ), the deprotecting agent (M) A phosphorothioate diester compound represented by the formula (II) in one pot without isolating its intermediate by removing a part of the phosphate protecting group (R 4 ) The method relates to a method for producing the same.
【0005】[0005]
【化3】 Embedded image
【化4】 Embedded image
【0006】(式中、Bは必要により保護基を有するこ
ともある核酸塩基類を示し、R1は水酸基の保護基を示
し、R2およびR3は水素原子、水酸基または保護基を有
する水酸基、ただし少なくとも一方は水酸基である。ま
た、R4はリン酸保護基を示し、Mは脱保護剤を示
す。)(Wherein B represents a nucleobase which may have a protecting group if necessary, R 1 represents a protecting group for a hydroxyl group, and R 2 and R 3 represent a hydrogen atom, a hydroxyl group or a hydroxyl group having a protecting group. Wherein at least one is a hydroxyl group, R 4 represents a phosphate protecting group, and M represents a deprotecting agent.)
【0007】[0007]
【発明の実施の形態】本発明方法をフローチャートで示
せば下記の通りであり、反応の途中で合成される中間体
を単離することなく、簡便な方法で、しかもワンポット
で式(II)で表されるホスホロチオエートジエステル
化合物を合成できる点を最大の特長としている。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The flow chart of the method of the present invention is as follows. It is a simple method without isolating an intermediate synthesized in the course of the reaction. The greatest feature is that the phosphorothioate diester compound represented can be synthesized.
【0008】[0008]
【化5】 Embedded image
【0009】(式中、B、R1、R2、R3、R4、Mは前
記と同意義。Xはイミダゾール、トリアゾール、テトラ
ゾールなどの複素環残基を示す。)(Wherein B, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , and M have the same meanings as described above. X represents a heterocyclic residue such as imidazole, triazole, and tetrazole.)
【0010】式(I)で表されるヌクレオシド誘導体
は、オリゴヌクレオチドの合成に使用される通常の化合
物であり、特に特定のものに限定されるものではない。
すなわち、Bで表される核酸塩基としては、シトシン、
チミン、ウラシル、アデニン、グアニンなどの通常の核
酸塩基類もしくはその誘導体や類縁体、またはベンゾイ
ル、イソブチリルなどの通常の保護基を有する上記核酸
塩基類を例示することができる。R1で表される水酸基
の保護基としては、ヌクレオシドの5’位水酸基の保護
基として常用されているものであればよく、具体的に
は、ジメトキシトリチル、メトキシトリチル、トリチ
ル、t−ブチルジメチルシリル、t−ブトキシジフェニ
ルシリルなどが例示される。また、R2およびR3で表さ
れる水酸基の保護基としては、ヌクレオシドの水酸基の
保護基として通常使用されているものであればよく、具
体的にはt−ブチルジメチルシリル、テトラヒドロピラ
ニル、アセチル、ベンゾイルなどを例示することができ
る。The nucleoside derivative represented by the formula (I) is a general compound used for the synthesis of oligonucleotides, and is not particularly limited.
That is, the nucleobase represented by B includes cytosine,
Examples thereof include ordinary nucleobases such as thymine, uracil, adenine, and guanine or derivatives and analogs thereof, and the above-described nucleobases having ordinary protective groups such as benzoyl and isobutyryl. The protecting group for the hydroxyl group represented by R 1 may be any one which is commonly used as a protecting group for the hydroxyl group at the 5′-position of a nucleoside, and specifically, dimethoxytrityl, methoxytrityl, trityl, t-butyldimethyl. Examples thereof include silyl and t-butoxydiphenylsilyl. The protecting group for the hydroxyl group represented by R 2 and R 3 may be any one which is usually used as a protecting group for a hydroxyl group of a nucleoside, and specifically, t-butyldimethylsilyl, tetrahydropyranyl, Acetyl, benzoyl and the like can be exemplified.
【0011】反応に使用するチオホスホリル化合物(S
=P(X)3)としては、チオホスホリル化複素環類、
具体的にはチオホスホトリスイミダゾリド、チオホスホ
トリストリアゾリド、チオホスホトリステトラゾリドな
どを例示することができ、特にチオホスホトリストリア
ゾリドが好適である。このようなチオホスホリル化合物
は公知化合物であり、常法によって調製することができ
る(Bioact.Mol.1987(3)(Biophosphates their Analogu
es)395-399など参照)。すなわち、テトラヒドロフラ
ン、アセトニトリル、ジクロロメタン、ジクロロエタン
などの有機溶媒中、三塩化チオホスホリル、三臭化チオ
ホスホリルなどのハロゲン化チオホスホリルとイミダゾ
ール、トリアゾール、テトラゾールなどの五員複素環類
とをハロゲン化チオホスホリル1モルに対して五員複素
環類を3モル使用し、1−メチルイミダゾールなどの酸
トラップ剤3〜20モル存在下、20〜50℃で10分
〜5時間程度攪拌反応させることにより目的とするチオ
ホスホリル化合物を得ることができる。また、このよう
にして得られた反応液をそのまま本発明の方法に使用す
ることも可能である。The thiophosphoryl compound (S) used in the reaction
= P (X) 3 ) is a thiophosphorylated heterocycle,
Specific examples include thiophosphotrisimidazolide, thiophosphotristriazolide, thiophosphotristrizolidide, and the like, with thiophosphotristriazolidide being particularly preferred. Such thiophosphoryl compounds are known compounds and can be prepared by a conventional method (Bioact. Mol. 1987 (3) (Biophosphates their Analogu
es) 395-399). That is, in an organic solvent such as tetrahydrofuran, acetonitrile, dichloromethane, and dichloroethane, a halogenated thiophosphoryl such as thiophosphoryl trichloride and thiophosphoryl tribromide and a five-membered heterocyclic ring such as imidazole, triazole, and tetrazole are halogenated with thiophosphoryl halide. By using 3 moles of the 5-membered heterocycle per 1 mole, and stirring and reacting at 20 to 50 ° C for about 10 minutes to 5 hours in the presence of 3 to 20 moles of an acid trapping agent such as 1-methylimidazole, Thiophosphoryl compound can be obtained. Further, the reaction solution thus obtained can be used as it is in the method of the present invention.
【0012】ヌクレオシド誘導体とチオホスホリル化合
物との反応は、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、
ジクロロメタン、ジクロロエタンなどの単独または混合
溶媒中、ヌクレオシド誘導体1モルに対し、チオホスホ
リル化合物1〜2モル使用し、20〜50℃で10分〜
5時間程度攪拌反応させることにより実施することがで
きる。The reaction between a nucleoside derivative and a thiophosphoryl compound is carried out in tetrahydrofuran, acetonitrile,
In a single or mixed solvent such as dichloromethane and dichloroethane, 1 to 2 moles of a thiophosphoryl compound is used per 1 mole of a nucleoside derivative, and is used at 20 to 50 ° C for 10 minutes to
The reaction can be carried out by stirring and reacting for about 5 hours.
【0013】上記反応後、続けてアルコール類(HO−
R4)と反応させる。反応に使用するアルコール類とし
ては、オリゴヌクレオチド合成時に保護基として通常使
用されているR4で表されるリン酸残基の保護基を有す
るアルコールであれば特に制限されない。具体的には、
シアノエチル基、シアノブテニル基、4−ニトロフェネ
チル基、2−ピリジルエチル基を有するアルコールを例
示することができる。反応は、ヌクレオシド誘導体1モ
ルに対し、アルコール類2〜5モル使用し、20〜50
℃で10分〜5時間程度攪拌反応させることにより実施
することができる。After the above reaction, the alcohols (HO-
R 4 ). The alcohol used in the reaction is not particularly limited as long as it has an protecting group for a phosphate residue represented by R 4 which is generally used as a protecting group during oligonucleotide synthesis. In particular,
Examples thereof include alcohols having a cyanoethyl group, a cyanobutenyl group, a 4-nitrophenethyl group, and a 2-pyridylethyl group. The reaction is performed by using 2 to 5 moles of alcohol per 1 mole of the nucleoside derivative, and using 20 to 50 alcohols.
The reaction can be carried out by stirring the mixture at a temperature of about 10 minutes to about 5 hours.
【0014】最後に、脱保護剤(M)を用いてリン酸保
護基(R4)の一部を除去し、上記フローチャ−ト中の
式(II)で表されるホスホロチオエートジエステル化
合物を得る。反応に使用する脱保護剤としては、リン酸
保護基(R4)の除去に通常使用されている塩基を使用
すればよい。たとえば、R4がシアノエチル基であれ
ば、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジイソ
プロピルエチルアミン、トリブチルアミン、N−メチル
モルホリン、アンモニアなどを使用することができる。
反応は、ヌクレオシド誘導体1モルに対し、脱保護剤1
〜5モル使用し、20〜50℃で10分〜5時間程度攪
拌反応させることにより実施することができる。Finally, a part of the phosphate protecting group (R 4 ) is removed using a deprotecting agent (M) to obtain a phosphorothioate diester compound represented by the formula (II) in the above flowchart. As a deprotecting agent used in the reaction, a base usually used for removing a phosphate protecting group (R 4 ) may be used. For example, when R 4 is a cyanoethyl group, triethylamine, diisopropylamine, diisopropylethylamine, tributylamine, N-methylmorpholine, ammonia and the like can be used.
The reaction is carried out by reacting 1 mole of the nucleoside derivative with 1 mole of the deprotecting agent.
The reaction can be carried out by stirring and reacting at 20 to 50 ° C. for about 10 minutes to 5 hours.
【0015】このようにして得られた式(II)で表さ
れるホスホロチオエートジエステル化合物は、常法によ
り単離精製することができる。すなわち、反応液をクロ
ロホルム等の有機溶媒で分配後、シリカゲルカラムクロ
マトグラフィーに付すことにより目的化合物を単離精製
することができる。単離精製後、常法にてホスホロチオ
エートトリエステル化合物を合成し、ホスホロチオエー
トオリゴヌクレオチドを合成するための原料として使用
する。The phosphorothioate diester compound represented by the formula (II) thus obtained can be isolated and purified by a conventional method. That is, the target compound can be isolated and purified by partitioning the reaction solution with an organic solvent such as chloroform and then subjecting the reaction solution to silica gel column chromatography. After isolation and purification, a phosphorothioate triester compound is synthesized by a conventional method and used as a raw material for synthesizing a phosphorothioate oligonucleotide.
【0016】[0016]
【発明の効果】本発明の方法は、従来法と比較して操作
が極めて簡便であり、収率も高く、しかもワンポットで
ホスホロチオエートジエステル化合物を合成できる極め
て実用的な方法である。The method of the present invention is a very practical method which is extremely simple in operation, has a high yield and can synthesize a phosphorothioate diester compound in one pot as compared with the conventional method.
【0017】[0017]
【実施例】以下、本発明を実施例、参考例をあげて具体
的に説明するが、本発明はこれらによって何等限定され
るものではない。 実施例1:式(II)の化合物(式中、B=チミン、R
1=DMTr、R3=H、R4=シアノエチル、M=トリ
エチルアミン)の合成 1,2,4-トリアゾール(420mg)のTHF(3
0ml)、1−メチルイミダゾール(0.5ml)溶液
にチオホスホロクロリド(0.2ml)を加え、室温で
30分攪拌後、5’−O−DMTr−チミジン(436
mg)を加え、さらに90分攪拌した。この反応液にシ
アノエチルヒドリン(0.28ml)を加え2時間攪拌
し、トリエチルアミン(1.4ml)、水(5.0m
l)、ピリジン(10ml)を加え、さらに1時間攪拌
した。この反応液を、水(50ml)、クロロホルム
(50ml)に分配し、水層をクロロホルム(50m
l)で抽出し、合わせたクロロホルム層を100mmo
lTEABバッファー(50ml)、次に水(50m
l)で洗浄、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧濃縮
した。残渣をシリカゲルカラム[クロロホルム(1%ト
リエチルアミンを含む)/メタノール]で精製して目的
化合物630mg(99.2%)を得た。EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described specifically with reference to examples and reference examples, but the present invention is not limited to these examples. Example 1 Compound of Formula (II) wherein B = thymine, R
1 = DMTr, R 3 = H, R 4 = cyanoethyl, M = triethylamine) Synthesis of 1,2,4-triazole (420 mg) in THF (3
Thiophosphorochloride (0.2 ml) was added to a 1-methylimidazole (0.5 ml) solution, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes, and then 5′-O-DMTr-thymidine (436).
mg), and the mixture was further stirred for 90 minutes. To this reaction solution was added cyanoethylhydrin (0.28 ml), and the mixture was stirred for 2 hours. Triethylamine (1.4 ml) and water (5.0 ml) were added.
l) and pyridine (10 ml) were added, and the mixture was further stirred for 1 hour. This reaction solution was partitioned between water (50 ml) and chloroform (50 ml), and the aqueous layer was separated into chloroform (50 ml).
l), the combined chloroform layer was
lTEAB buffer (50ml), then water (50m
After washing with 1) and drying over sodium sulfate, the solvent was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by a silica gel column [chloroform (containing 1% triethylamine) / methanol] to obtain 630 mg (99.2%) of the desired compound.
【0018】MS(FAB<0)69231 P−NMR(CD3CN)1 H−NMR(CDCl3)d7.61(s,1H,
H6),7.42−6.83(m,13H,aroma
tic H and CHCl3),6.43(m,1
H,H1'),5.31(m,1H,H3'),4.37
(m,1H,H4'),4.28−3.95(m,2H,
P−OCH3),3.79(s,6H,OCH3),3.
55−3.38(m,2H,H5'and H5''),
2.80(q,Et3N),2.75−2.36(m,
4H,H2',H2''and CH2CN),1.37{2
s,3H,CH3(thymin)},1.19(t,
Et3N)MS (FAB <0) 692 31 P-NMR (CD 3 CN) 1 H-NMR (CDCl 3 ) d 7.61 (s, 1H,
H 6), 7.42-6.83 (m, 13H, aroma
tic H and CHCl 3 ), 6.43 (m, 1
H, H1 ' ), 5.31 (m, 1H, H3 ' ), 4.37.
(M, 1H, H4 ' ), 4.28-3.95 (m, 2H,
P-OCH 3), 3.79 ( s, 6H, OCH 3), 3.
55-3.38 (m, 2H, H5 ' and H5 '' ),
2.80 (q, Et 3 N) , 2.75-2.36 (m,
4H, H 2 ′ , H 2 ″ and CH 2 CN), 1.37 {2
s, 3H, CH 3 (thymin)}, 1.19 (t,
Et 3 N)
【0019】実施例2:式(II)の化合物(式中、B
=N2−イソブチリルグアニン、R1=DMTr、R3=
H、R4=シアノエチル、M=トリエチルアミン)の合
成 実施例1と同様に、N2−イソブチリル−5’−DMT
r−デオキシグアノシン(512mg)より、目的化合
物570mg、収率(73.3%)で得た。MS(FA
B<0)787Example 2: Compound of formula (II) wherein B
= N 2 - isobutyryl guanine, R 1 = DMTr, R 3 =
H, R 4 = cyanoethyl, M = triethylamine) As in Example 1, N 2 -isobutyryl-5′-DMT
570 mg of the target compound was obtained from r-deoxyguanosine (512 mg) in a yield (73.3%). MS (FA
B <0) 787
【0020】実施例3:式(II)の化合物(式中、B
=N6−ベンゾイルアデニン、R1=DMTr、R3=
H、R4=シアノエチル、M=トリエチルアミン)の合
成 実施例1と同様に、N6−ベンゾイル−5’−DMTr
−デオキシアデノシン(526mg)より、目的化合物
670mg、収率(92.2%)で得た。MS(FAB
<0)805Example 3: Compound of formula (II) wherein B
= N 6 -benzoyl adenine, R 1 = DMTr, R 3 =
H, R 4 = cyanoethyl, M = triethylamine) Synthesis of N 6 -benzoyl-5′-DMTr in the same manner as in Example 1.
-The desired compound was obtained from deoxyadenosine (526 mg) in a yield of 670 mg (92.2%). MS (FAB
<0) 805
【0021】実施例4:式(II)の化合物(式中、B
=N4−ベンゾイルシトシン、R1=DMTr、R3=
H、R4=シアノエチル、M=トリエチルアミン)の合
成 実施例1と同様に、N4−ベンゾイル−5’−DMTr
−デオキシシチジン(507mg)より、目的化合物5
90mg、収率(83.6%)で得た。MS(FAB<
0)781Example 4: Compound of formula (II) wherein B
= N 4 - benzoyl cytosine, R 1 = DMTr, R 3 =
Synthesis of H, R 4 = cyanoethyl, M = triethylamine) As in Example 1, N 4 -benzoyl-5′-DMTr
-Deoxycytidine (507 mg) to give the desired compound 5
Obtained in 90 mg, yield (83.6%). MS (FAB <
0) 781
【0022】参考例1:ホスホロチオエートトリエステ
ル化合物の合成Reference Example 1: Synthesis of phosphorothioate triester compound
【0023】[0023]
【化6】 Embedded image
【0024】(式中、B、R1、R3、R4、Mは前記と
同意義。) 実施例1で得られたホスホロチオエートジエステル化合
物(式中、B=チミン、R1=DMTr、R3=H、R4
=シアノエチル、M=トリエチルアミン)(6.35
g)のアセトニトリル(160ml)溶液に、2,6−
ルチジン(1.9ml)、4−ニトロベンジルブロミド
(6.9g)を加え、室温で4時間攪拌後、溶媒を減圧
濃縮した。この残渣を酢酸エチル(100ml)、水
(100ml)に分配し、酢酸エチル層を飽和重曹水で
洗浄、硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧濃縮した。
得られた残渣をシリカゲルカラム(クロロホルム/メタ
ノール)で精製してホスホロチオエートトリエステル化
合物を4.09g(61.7%)で得た。(Wherein B, R 1 , R 3 , R 4 and M have the same meanings as described above.) The phosphorothioate diester compound obtained in Example 1 (where B = thymine, R 1 = DMTr, R 3 = H, R 4
= Cyanoethyl, M = triethylamine) (6.35)
g) in acetonitrile (160 ml) solution
Lutidine (1.9 ml) and 4-nitrobenzyl bromide (6.9 g) were added, and after stirring at room temperature for 4 hours, the solvent was concentrated under reduced pressure. The residue was partitioned between ethyl acetate (100 ml) and water (100 ml). The ethyl acetate layer was washed with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate, dried over sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure.
The obtained residue was purified by a silica gel column (chloroform / methanol) to obtain 4.09 g (61.7%) of a phosphorothioate triester compound.
【0025】NMR(CDCl3) 8.18[m,2H,H meta(p−nitrob
enzyl)],7.51[m,2H,H ortho
(p−nitrobenzyl)],7.36−6.8
2(m,14H,H6 and DMTr),6.36
(m,1H,H1'),5.20(m,1H,H3'),
4.25−4.09(m,5H,P−OCH2,P−S
CH2 and H4'),3.79(s,6H,OC
H3),3.48and 3.33(2m,2H,H5'
and H5''),2.73−2.39(m,4H,C
H2CN,H2' and H2''),1.44[s,3
H,CH3(thymine)]。NMR (CDCl 3 ) 8.18 [m, 2H, H meta (p-nitrob)
Enzyl)], 7.51 [m, 2H, Hortho
(P-nitrobenzyl)], 7.36-6.8.
2 (m, 14H, H 6 and DMTr), 6.36
(M, 1H, H1 ' ), 5.20 (m, 1H, H3 ' ),
4.25-4.09 (m, 5H, P- OCH 2, P-S
CH 2 and H 4 ′ ), 3.79 (s, 6H, OC
H 3 ), 3.48 and 3.33 (2 m, 2H, H 5 ′)
and H5 '' ), 2.73-2.39 (m, 4H, C
H 2 CN, H 2 ′ and H 2 ″ ), 1.44 [s, 3
H, CH 3 (thymine)].
Claims (10)
とチオホスホリル化合物とを反応させ、さらにアルコー
ル類(HO−R4)を反応させた後、脱保護剤(M)を
用いてリン酸保護基(R4)の一部を除去し、式(I
I)で表されるホスホロチオエートジエステル化合物を
その中間体を単離することなくワンポットで合成するこ
とを特徴とするホスホロチオエートジエステル化合物の
製造法。 【化1】 (式中、Bは必要により保護基を有することもある核酸
塩基類を示し、R1は水酸基の保護基を示し、R2および
R3は水素原子、水酸基または保護基を有する水酸基を
示し、ただし少なくとも一方は水酸基である。) 【化2】 (式中、R4はリン酸保護基を示し、Mは脱保護剤を示
し、B、R1およびR3は前記と同意義。)1. A method comprising reacting a nucleoside derivative represented by the formula (I) with a thiophosphoryl compound, further reacting an alcohol (HO-R 4 ), and phosphoric acid using a deprotecting agent (M). A part of the protecting group (R 4 ) is removed, and the compound represented by the formula (I)
A process for producing a phosphorothioate diester compound, which comprises synthesizing the phosphorothioate diester compound represented by I) in one pot without isolating an intermediate thereof. Embedded image (Wherein, B represents a nucleobase that may have a protecting group as necessary, R 1 represents a protecting group for a hydroxyl group, R 2 and R 3 represent a hydrogen atom, a hydroxyl group or a hydroxyl group having a protecting group, However, at least one is a hydroxyl group.) (Wherein, R 4 represents a phosphate protecting group, M represents a deprotecting agent, and B, R 1 and R 3 have the same meanings as described above.)
化複素環類である、請求項1記載の方法。2. The method according to claim 1, wherein the thiophosphoryl compound is a thiophosphorylated heterocycle.
リスイミダゾリド、チオホスホトリストリアゾリド、チ
オホスホトリステトラゾリドから選ばれたものである、
請求項1記載の方法。3. The thiophosphoryl compound is selected from thiophosphotrisimidazolide, thiophosphotristriazolide and thiophosphotristetrazolide.
The method of claim 1.
ストリアゾリドである、請求項1記載の方法。4. The method according to claim 1, wherein the thiophosphoryl compound is thiophosphotristriazolide.
てシアノエチル基、シアノブテニル基、4−ニトロフェ
ネチル基、2−ピリジルエチル基を有するアルコールで
ある、請求項1記載の方法。5. The method according to claim 1, wherein the alcohol (HO-R 4 ) is an alcohol having a cyanoethyl group, a cyanobutenyl group, a 4-nitrophenethyl group, or a 2-pyridylethyl group as R 4 .
チルヒドリンである、請求項1記載の方法。6. The method according to claim 1, wherein the alcohol (HO-R 4 ) is cyanoethylhydrin.
記載の方法。7. The method according to claim 1, wherein the deprotecting agent (M) is a base.
The described method.
る、請求項1記載の方法。8. The method according to claim 1, wherein the deprotecting agent (M) is triethylamine.
求項1記載の方法。9. The method according to claim 1, wherein the deprotecting agent (M) is ammonia.
リストリアゾリドで、アルコール類(HO−R4)がシ
アノエチルヒドリンで、脱保護剤(M)がトリエチルア
ミンである、請求項1記載の方法。10. The method according to claim 1, wherein the thiophosphoryl compound is thiophosphotristriazolide, the alcohols (HO-R 4 ) are cyanoethylhydrin, and the deprotecting agent (M) is triethylamine.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP9082105A JPH10259192A (en) | 1997-03-14 | 1997-03-14 | Production of phosphorothioate diester |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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JP9082105A JPH10259192A (en) | 1997-03-14 | 1997-03-14 | Production of phosphorothioate diester |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
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JPH10259192A true JPH10259192A (en) | 1998-09-29 |
Family
ID=13765140
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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JP9082105A Pending JPH10259192A (en) | 1997-03-14 | 1997-03-14 | Production of phosphorothioate diester |
Country Status (1)
Country | Link |
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JP (1) | JPH10259192A (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011090052A1 (en) * | 2010-01-20 | 2011-07-28 | 国立大学法人 東京大学 | Phosphorylation reagent |
-
1997
- 1997-03-14 JP JP9082105A patent/JPH10259192A/en active Pending
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2011090052A1 (en) * | 2010-01-20 | 2011-07-28 | 国立大学法人 東京大学 | Phosphorylation reagent |
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