JPH0989890A - 犬および猫の赤血球型を認識するポリクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 犬の１システム、犬のＤシステム及び猫のＡ
Ｂシステムにおける血液型を簡単に判定することができ
るように、標準抗血清に代わる血液型判定用組成物を提
供する。 【構成】 血液型を認識する標準抗血清に相当する犬、
又は、猫の血清フラクションを免疫グロブリンのＩｇＧ
クラスに分画精製する。この結果得られる精製物は、血
液型を認識する、いわゆるポリクローナル抗体である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、免疫グロブリン
のＩｇＧクラスに分画精製された犬の赤血球型を判定す
るためのポリクローナル抗体、および、猫の赤血球型を
判定するためのポリクローナル抗体に関する。

【０００２】

【従来の技術】獣医療の領域に輸血療法を確立するため
には、その前提として、対象となる動物の血液型が判定
されなければならない。異型輸血において深刻な副作用
を伴うことは、獣医療領域においても従来より予想され
ていたことであり、この予想が獣医療の高度化によっ
て、さしあたり、犬および猫の赤血球型の判定の必要性
として、開業獣医等に認識されつつある。

【０００３】犬の赤血球型（以下、単に「血液型」とい
う）には、その主要な分類システムとして、１システム
とＤシステムとが知られている。また、猫については、
ＡＢシステムが知られている。１システムは、犬の血液
を１・１型と、１・２型と、１（−）型とに分類するシ
ステムであり、Ｄシステムは、犬の血液をＤ１型と、Ｄ
２型と、Ｄ１Ｄ２型とに分類するシステムである。一
方、ＡＢシステムは、猫の血液を、Ａ型と、Ｂ型と、Ａ
Ｂ型とに分類するシステムである。なお、いずれの分類
システムにおいても、血液型の判定は、その分類システ
ムに対応する抗血清と、判定対象である被検赤血球との
免疫化学的反応である凝集の態度を肉眼的に観察するこ
とによって行われる。

【０００４】例えば、１システムにおいては、１・１型
に特異性を示す、あるいは１・１型を認識する抗血清
（以下、「抗−１・１抗血清」のように示す）、１・２
型に特異性を示す抗−１・２抗血清、１・１型と１・２
型との双方に特異性を示す抗−１・１，２抗血清が用い
られる。そして、抗−１・１抗血清と抗−１・１，２抗
血清との双方に凝集反応を示す被検赤血球は、１システ
ムにおける１・１型であると判定される。同様に、抗−
１・２抗血清と抗−１・１，２抗血清との双方に凝集反
応を示す被検赤血球は、１・２型であると判定され、い
ずれの抗血清にたいしても凝集反応を示さない被検赤血
球は、１（−）型であると判定される。なお、ここで
は、３種類の抗血清を用いたが、実際には、２種類の抗
血清によって、３種類の血液型を判定することが可能で
ある。また、１システムにおける凝集反応は、必ずしも
明確であるとは限らず、このため、１システムにおける
血液型の最終判定には、通常、クームス抗血清が併用さ
れる。クームス抗血清は、被検赤血球が、特定の抗血清
によって、感作されたことを認識する抗血清であり、特
定の抗血清による被検赤血球の凝集反応を強めることが
できるのである。

【０００５】このような判定操作は、犬のＤシステムに
おいても、猫のＡＢシステムにおいても同様である。す
なわち、それぞれのシステムに対応する抗血清を用いて
の血液型の判定である。ただし、猫のＡＢシステムにお
けるＢ型の判定については、１９９１年に、小麦胚芽か
ら精製された抽出物が、猫Ｂ型赤血球と親和性を示すこ
とが発見されて以来、猫の抗−Ｂ抗血清に代えて、抗−
Ｂ凝集素が用いられるようになっている。従って、学問
的にはともかく、産業的に抗−Ｂ抗血清を量産する意義
はないと言える。

【０００６】なお、犬の１システムに対応する標準抗血
清ならびに標準抗原は、現在、アメリカ、ミシガン州立
大学のＢｕｌｌおよび、この発明の発明者でもある
（株）ブルー十字の江島によって維持されている。ま
た、犬のＤシステムに対応するものは、（株）ブルー十
字の江島によって維持されている。さらに、猫のＡＢシ
ステムに対応するものは、オーストラリア、クイーンズ
ランド大学のＢｅｌｌ、アメリカ、ペンシルベニア大学
のＧｉｇｅｒ、並びに、（株）ブルー十字の江島によっ
て維持されている。

【０００７】ところで、犬のＤシステムは、日本におい
て、１９４０年に法医学者であった井関、寺島によって
発見されたが、当時、標準抗血清ならびに標準抗原が保
存された形跡はない。また、欧米において、Ｄシステム
が発見されなかったのは、欧来では、同種免疫法を主体
として抗血清を作成しているが、Ｄシステムに対応する
抗血清は、兎を免疫動物とする異種免疫法によって作成
するものであること、欧米における犬の種が、ほぼ１０
０％Ｄ２型に偏在していることにより、同種免疫によっ
ては、抗−Ｄ２抗血清を得ることができなかったためで
あると推定される。つまり、Ｄシステムに対応する標準
抗血清ならびに標準抗原は、この発明の前提物質とし
て、（株）ブルー十字の江島、木下によって初めて確保
されたのである。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】このように、可能か不
可能かということに関しては、犬、猫の血液型は、抗血
清を用いることによって判定することができるというこ
とができる。それでは、自己の所有する犬の血液型判定
を市中の動物病院に依頼して、可能か不可能かというこ
とに関しては、一般に不可能である。血液型を判定する
ための抗血清が準備されていないのである。

【０００９】すなわち、抗血清なるものの組成は、血液
から血球部分を除去した残余部分と同等であり、一般に
普及するには、その流通、保存の面において極めて不便
であり、また、物質としての均一性、安定性を欠くた
め、血液型の判定操作および最終判断に相当の熟練を要
するという問題があった。

【００１０】この発明は、抗血清に代わる血液型判定の
ための保存性、均一性、安定性にすぐれた物質を得るこ
とを目的とするものであり、以て、容易な判定操作と、
確実な最終判断を可能とし、一般市中に広く普及させる
ことのできるポリクローナル抗体を提供することであ
る。

【００１１】

【課題を解決するための手段】上記の目的を達成するた
めにこの発明が採用する手段は、抗血清相当の組成物か
ら、主に、血液型を認識する機能を担当している物質を
できるだけ純粋な状態で抽出することによって、不安定
要素を排除することである。具体的には、

【００１２】赤血球型が１システムの１・１型であるこ
とが判明している犬血液の赤血球部分を免疫原とし、該
免疫原を赤血球型が１システムの１（−）型であること
が判明している犬に免疫付けし、該犬の血液の血清フラ
クションを免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製す
ることである。このような操作術式によれば、１・１型
の免疫原によって１（−）型の犬の体内において産生さ
れる抗体は、１・１型または１・２型の血液型を認識す
る抗−１・１，２抗体である。つまり、１・１型と表記
される血液型の赤血球には、２種類の抗原成分が含まれ
ているのである。従って、その犬の血液の血清フラクシ
ョンは、実質的に抗−１・１，２抗血清である。そし
て、その血清フラクションを免疫グロブリンのＩｇＧク
ラスに分画精製してなる物質は、１・１型または１・２
型の血液型を認識する、いわゆるポリクローナル抗体で
ある。そして、このポリクローナル抗体は、１・１型ま
たは１・２型の赤血球を視認可能に凝集することができ
る。以下、同様に、

【００１３】赤血球型が１システムの１・１型であるこ
とが判明している犬血液の赤血球部分を免疫原とし、該
免疫原を赤血球型が１システムの１・２型であることが
判明している犬に免疫付けし、該犬の血液の血清フラク
ションを免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製する
ことである。この操作術式によれば、１・１型の免疫原
によって１・２型の犬の体内において産生される抗体
は、１・１型の血液型を認識する抗−１・１抗体であ
る。１・１型と表記される血液型の赤血球には、２種類
の抗原成分が含まれているのであるが、そのうち、１・
２型の抗原成分に対しては、同型である１・２型の犬の
体内において抗体が産生されることはないのである。従
って、その犬の血液の血清フラクションは、実質的に抗
−１・１抗血清であるそして、その血清フラクションを
免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製してなる物質
は、１・１型の血液型を認識するポリクローナル抗体で
ある。そして、このポリクローナル抗体は、１・１型の
赤血球を視認可能に凝集することができる。

【００１４】赤血球型が１システムの１・２型であるこ
とが判明している犬血液の赤血球部分を免疫原とし、該
免疫原を赤血球型が１システムの１（−）型であること
が判明している犬に免疫付けし、該犬の血液の血清フラ
クションを免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製す
ることである。この操作術式によれば、１・２型の免疫
原によって１（−）型の犬の体内において産生される抗
体は、１・２型の血液型を認識する抗−１・２抗体であ
る。従って、その犬の血液の血清フラクションは、実質
的に抗−１・２抗血清である。そして、その血清フラク
ションを免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製して
なる物質は、１・２型の血液型を認識するポリクローナ
ル抗体である。そして、このポリクローナル抗体は、１
・２型の赤血球を視認可能に凝集することができる。

【００１５】赤血球型がＤシステムのＤ１型であること
が判明している犬血液の赤血球部分を免疫原とし、該免
疫原を兎に免疫付けし、該兎の血液の血清フラクション
を免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製することで
ある。この操作術式によれば、Ｄ１型の免疫原によって
兎の体内において産生される抗体は、Ｄ１型の血液型を
認識する抗−Ｄ１抗体である。従って、その兎の血液の
血清フラクションは、実質的に抗−Ｄ１抗血清である。
そして、その血清フラクションを免疫グロブリンのＩｇ
Ｇクラスに分画精製してなる物質は、Ｄ１型の血液型を
認識するポリクローナル抗体である。そして、このポリ
クローナル抗体は、Ｄ１型の赤血球を視認可能に凝集す
ることができる。

【００１６】赤血球型がＤシステムのＤ２型であること
が判明している犬血液の赤血球部分を免疫原とし、該免
疫原を兎に免疫付けし、該兎の血液の血清フラクション
を免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製することで
ある。この操作術式によれば、Ｄ２型の免疫原によって
兎の体内において産生される抗体は、Ｄ２型の血液型を
認識する抗−Ｄ２抗体である。従って、その兎の血液の
血清フラクションは、実質的に抗−Ｄ２抗血清である。
そして、その血清フラクションを免疫グロブリンのＩｇ
Ｇクラスに分画精製してなる物質は、Ｄ２型の血液型を
認識するポリクローナル抗体である。そして、このポリ
クローナル抗体は、Ｄ２型の赤血球を視認可能に凝集す
ることができる。

【００１７】赤血球型がＡＢシステムのＡ型であること
が判明している猫血液の赤血球部分を免疫原とし、該免
疫原を兎に免疫付けし、該兎の血液の血清フラクション
を免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製することで
ある。この操作術式によれば、Ａ型の免疫原によって兎
の体内において産生される抗体は、Ａ型の血液型を認識
する抗−Ａ抗体である。従って、その兎の血液の血清フ
ラクションは、実質的に抗−Ａ抗血清である。そして、
その血清フラクションを免疫グロブリンのＩｇＧクラス
に分画精製してなる物質は、Ａ型の血液型を認識するポ
リクローナル抗体である。そして、このポリクローナル
抗体は、Ａ型の赤血球を視認可能に凝集することができ
る。

【００１８】

【発明の実施の形態】１システムのポリクローナル抗体
は、同種免疫法によって作成する。抗体の産生は、異物
を認識した免疫機能の結果であるから、同種免疫に際し
ては、不適合な血液の組み合わせが選択される。供血犬
と受血犬と、産生される抗体の特異性との関係は、表１
のようになる。ただし、１システムの判定に併用するク
ームス抗体は、兎を免疫動物とする異種免疫法によって
作成される。

【００１９】

【表１】

【００２０】また、表１は、抗−１・１，２抗体の特異
性の一部を、１・１型の赤血球による吸収操作によって
消滅させることによって、抗−１・２抗体を得ることが
でき、さらに、１・２型の赤血球による吸収操作によっ
て抗−１・１抗体を得ることができることを示唆してい
る。次に、３種類の抗体と、その抗体によって判定され
る血液型との関係を表２に示す。なお、この判定には、
クームス試験が併用されている。

【００２１】

【表２】 表２において、＋の記号は、特定の抗体との関係におい
て凝集反応が認められる陽性型であることを示してい
る。一方、逆に、−の記号は、特定の抗体との関係にお
いて凝集反応が認められない陰性型であることを示して
いる。また、同表は、３種類の抗体中いずれか任意の２
種類の抗体を用いることで３種類の血液型を判定できる
ことを示唆している。その場合の判定例を表３に示す。

【００２２】

【表３】

【００２３】ここで、判定された血液型に基づく輸血可
能な組み合わせを図１に示す。なお、輸血可能な方向
は、同図に矢印で示す。これによると、同型の血液間で
は、供血、受血ともに可能である。１（−）型の血液
は、いずれの型の血液にも輸血可能であり、１・２型の
血液は、１・１型の血液に対しても輸血することができ
る。これは、前述したように、１・１型と表記される血
液型の赤血球には、２種類の抗原成分が含まれているた
めである。

【００２４】次に、Ｄシステムのポリクローナル抗体
は、免疫動物として兎を用いる異種免疫法によって作成
する。Ｄシステム発見当時に兎が選択された理由は不明
であるが、追試の結果では、犬赤血球を兎に免疫する
と、同種免疫に比較して、非常に高い確立で抗−Ｄ１抗
体、抗−Ｄ２抗体が産生されることが確認できる。ただ
し、異種免疫の場合、目的とする抗体の他に、動物種が
異なることによる種族特異性抗体が同時に産生される
が、この種族特異性抗体は、目的とする抗体によって認
識されない型の犬赤血球による吸収操作によって除去す
ることができる。例えば、抗−Ｄ１抗体とともに産生さ
れた種族特異性抗体は、Ｄ２型の犬赤血球による吸収操
作によって除去することができるのである。作成された
２種類の抗体を用いての３種類血液型判定例を表４に示
す。

【００２５】

【表４】

【００２６】判定された血液型に基づく輸血可能な組み
合わせを図２に示す。これによると、同型の血液間で
は、供血、受血ともに可能である。また、Ｄ１型は、Ｄ
１Ｄ２型に輸血可能であり、Ｄ２型も、Ｄ１Ｄ２型に輸
血可能である。

【００２７】猫ＡＢシステムのポリクローナル抗体は、
免疫動物として兎を用いる異種免疫法によって作成す
る。抗−Ａ抗体は、自然抗体としてＢ型の猫赤血球中に
も存在するが、量産することを前提すれば、異種免疫法
による方が高力価のものが得られて有利である。産生さ
れた抗−Ａ抗体と、小麦胚芽由来の抗−Ｂ凝集素とを用
いた猫の血液型の判定例を表５に示す。また、輸血可能
な組み合せを図３に示す。

【００２８】

【表５】

【００２９】次に、この発明に係るポリクローナル抗体
を得るための製造方法の実施例について具体的に説明す
る。

【００３０】（実施例１） １システムの抗−１．１，
２型抗体を産生するための免疫動物には、体重が１０Ｋ
ｇ前後の健康な犬で、血液型が１システムの１（−）型
であることが判明しているものを用いる。この際の血液
型は、標準抗血清を用いて判定する。同様の判定方法に
より、血液型が１．１型であることが判明している犬か
ら採血した血液を、遠心分離して赤血球を採取し、これ
をリン酸緩衝食塩液（以下「ＰＢＳ」という）を用いて
５回以上洗浄し、洗浄したものをＰＢＳで１０％浮遊液
としたものを免疫原とする。得られた免疫原を免疫動物
として選択した犬の前腕静脈に、一週間に一度の度数
で、所定の抗体価に達するまで反復注射し、免疫付けを
行う。この操作によって、犬の血液中に１．１型の赤血
球を認識する抗−１・１，２抗体が産生される。次い
で、この犬から採血し、採血した血液を遠心分離し、そ
の血清フラクションを採取する。採取した血清フラクシ
ョンは、６０°Ｃで３０分加熱処理し、非動化する。こ
の血清フラクションは、実質的に抗血清であり、保存す
る場合には、−８０°Ｃ以下で保存することを要する。

【００３１】なお、上記の抗血清たる血清フラクション
について必要とする抗体価は、つぎのように測定する。
先ず、主たる試験用の被検赤血球浮遊液と、クームス試
験用の被検赤血球浮遊液とを準備する。前者は、血液型
が１・１型、１・２型、および１（−）型であることが
判明している犬の血液を、それぞれ、抗凝固処理した後
赤血球を採取し、それに、赤血球濃度が２〜４％になる
ようにＰＢＳを加えたものとする。また、後者は、この
ようにして得られた被検赤血球浮遊液に測定対象である
血清フラクションを感作させた上、ＰＢＳで洗浄し、洗
浄した赤血球に赤血球濃度が２〜４％になるようにＰＢ
Ｓを加えたものとする。

【００３２】主たる試験では、それぞれの血清フラクシ
ョンと被検赤血球浮遊液との一定の量を同一の試験管に
入れ、５〜１０秒間遠心し、凝集反応の有無を肉眼的に
観察する。一方、クームス試験においては、感作させた
それぞれの被検赤血球浮遊液に対し、犬クームス抗体を
一定量ずつ加え、凝集反応の有無を肉眼的に観察する。
この際、クームス試験を含め、血清フラクションに含有
される抗体に特異性を有する被検赤血球浮遊液に対して
は、凝集反応を認めなければならず、特異性を有しない
被検赤血球浮遊液に対しては、凝集反応を認めてはなら
ない。ここで、凝集反応を認め得た抗血清、すなわち、
血清フラクションの最終希釈倍数の逆数をもって抗体価
とする。１システムにおける必要抗体価は、最終製品段
階にもとめられる抗体価から逆算して決定する。この方
式によって、この実施例においては、１，０２４倍を基
準とした。

【００３３】所定の抗体価であることを確認した血清フ
ラクションについて、吸収処理を行う。この処理は、特
異性を担保するための処理である。血液型が１（−）型
であることが判明している犬血液の赤血球をＰＢＳで洗
浄したものを吸収用赤血球とする。血清フラクションと
等量の吸収用赤血球を静かに混和し、４゜Ｃ及び３７゜
Ｃの環境下に、それぞれ１時間放置した後、４゜Ｃに冷
却、これを１，２００ｇで１５分間遠心した上清を原液
とする。

【００３４】原液を免疫グロブリンのＩｇＧに精製する
には、血清フラクションを１０，０００ｇで約１５分間
遠心し、その上清をプロテインＡ−セファロースカラム
で精製する方式による。プロテインＡは、ＩｇＧを二分
子結合できる分子量４２，０００の蛋白質である。この
蛋白質が、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー用樹脂で
あるセファロース４ＦＦにカップリングされたものがプ
ロテインＡ−セファロースである。これをガラスカラム
に充填して、プロテインＡ−セファロースカラムとす
る。ＩｇＧの精製様式としては、弱アルカリ性緩衝液で
結合し、弱酸性緩衝液で解離させる仕組みである。この
ようにして得られたカラム溶出画分が実質上、１システ
ムの１・１型および１・２型とを認識する抗−１．１，
２型のＩｇＧたるポリクローナル抗体である。

【００３５】ただし、このままでは、不安定であり、保
存に適さないため、さらにこれを、安定剤として塩化ナ
トリウム、塩化カリウム、リン酸水素二ナトリウム・１
２水塩、リン酸二水素カリウム、牛血清アルブミンを含
む溶剤に対して透析し、これに、保存剤としてアジ化ナ
トリウムの適量を加えたものを最終精製物とし、これを
滅菌容器に小分けしたものが最終製品である。

【００３６】この最終製品には、原則として、前述した
抗血清たる血清フラクションに求められる全ての特性が
求められる。すなわち、この発明は、従来使用されてい
た抗血清に代わる純粋な物質を追及するものであるから
である。ただし、抗体価については、これ以上希釈する
ことのない最終製品としては、８倍でもって足りる。ま
た、純粋物質としては、無色透明でなければならず、異
物又は異臭を認めてはならない。小分容器ごとの性状は
均一でなければならない。この最終製品を試験した結果
は、抗体価、特異性、外観等の諸要求を十分に満たすも
のであった。

【００３７】（実施例２） １システムの抗−１・１型
抗体を作成するには、免疫動物として血液型が１システ
ムの１・２型である犬を用いる。また、免疫原には、血
液型が１システムの１・１型である犬の赤血球部分のＰ
ＢＳによる１０％浮遊液を用いる。この免疫原を、免疫
動物に免疫付けすることによって、犬の血液中に１・１
型の赤血球を認識する抗−１・１型抗体が産生される。
すなわち、免疫原としての１・１型赤血球は、１・１型
と１・２型との二種類の抗原成分を有するのであるが、
免疫動物の血液型に適合する１・２型の抗原成分に対す
る抗−１・２型抗体は産生されず、抗−１・１型抗体の
みが産生されるのである。

【００３８】犬の血液中に産生された抗体の抗体価が所
定の値に達したところで、この犬の血液を採取し、この
血液から遠心上清である血清フラクションを分画する。
これを熱非動化した後、吸収処理を経て、ＩｇＧに精製
する。精製様式は、実施例１と同様であり、また、以
後、最終製品にいたる過程も同様である。ただし、吸収
処理には、１・２型の赤血球を用いる。このようにして
得られた最終製品についても、抗体価試験及び特異性試
験を行った。試験方法は、血清フラクションに対する試
験様式と同様である。結果は、いずれも満足できるもの
であった。

【００３９】（実施例３） １システムの抗−１・２型
抗体を作成するには、免疫動物として血液型が１システ
ムの１（−）型である犬を用いる。また、免疫原には、
血液型が１システムの１・２型である犬の赤血球部分の
ＰＢＳによる１０％浮遊液を用いる。この免疫原を、免
疫動物に免疫付けすることによって、犬の血液中に１・
２型の赤血球を認識する抗−１・２型抗体が産生され
る。犬の血液中に産生された抗体の抗体価が所定の値に
達したところで、この犬の血液を採取し、この血液から
遠心上清である血清フラクションを分画する。この血清
フラクションに対して１（−）型の赤血球を用いて吸収
処理をする。これをＩｇＧに精製し、最終製品に加工す
る。また、最終製品について、所定の試験を行う。

【００４０】（実施例４） なお、１システムの抗−１
・１型抗体は、抗−１・１，２抗体から直接作成するこ
ともできる。この場合、吸収処理の工程において、１
（−）型の赤血球を用いるのに代えて１・２型の吸収用
赤血球を用いる。これによって、抗−１・１，２抗体か
ら１・２型の抗原を認識する抗体活性が消滅し、抗−１
・１型抗体が作成される。製造の実際としては、この方
法によるのが便利である。

【００４１】ここで、１システムの血液型判定に併用す
るクームス抗体の作成方法について説明する。免疫動物
には、体重３Ｋｇ前後の健康な兎を用いる。また、免疫
原には、任意の血液型の犬の血液の血清部分を用いる。
免疫原を兎の耳静脈に、一週間に一度の度数で、所定の
抗体価に達するまで反復注射する。この兎血液の血清フ
ラクションを非動化処理し、これを任意の血液型の犬の
赤血球を用いて吸収処理する。以後は、同様に、これを
精製してクームス抗体を得る。

【００４２】また、凝集反応の比較対象として用いる陰
性コントロール液について説明する。陰性コントロール
液は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸水素二ナ
トリウム・１２水塩、リン酸二水素カリウム、牛血清ア
ルブミン、アジ化ナトリウムの所定量を精製水に溶解し
たものである。

【００４３】（実施例５） Ｄシステムの抗−Ｄ１抗体
は、兎を免疫動物として作成する。免疫原には、血液型
がＤシステムのＤ１型であることが判明している犬血液
の赤血球を用いる。以下の各工程及び精製様式は、１シ
ステムにおけると同様である。なお、原液の段階におい
て、必要とされる抗体価は、それぞれの抗体ごとに異な
っており、Ｄシステムにおいては、１２８万倍以上が適
当である。

【００４４】（実施例６） Ｄシステムの抗−Ｄ２抗体
の作成方法は、血液型がＤシステムのＤ２型であること
が判明している犬血液の赤血球を免疫原として用いる点
において実施例５と異なるのみである。

【００４５】（実施例７） 猫のＡＢシステムの抗−Ａ
抗体を産生するための免疫動物には、兎を用いる。ま
た、免疫原には、標準抗血清によって血液型がＡがたで
あることが判明している兎血液の赤血球をＰＢＳを用い
て十分に洗浄し、これをＰＢＳの１０％浮遊液としたも
のを用いる。この免疫原を兎の耳静脈に所定の抗体価に
達するまで反復注射する。ついで、血液を採取し、遠心
分離によって血清フラクションを分画する。分画した血
清フラクションを、血液型がＢ型であることが判明して
いる猫血液の赤血球を用いて吸収処理する。吸収処理
は、血清フラクションと等量の吸収用赤血球を静かに混
和し、４゜Ｃおよび３７゜Ｃの環境下に、それぞれ１時
間放置し、これを４゜Ｃに冷却、この後、１，２００ｇ
で１５分間遠心した上精を原液とする。原液を１０，０
００ｇで１５分間遠心し、その上精をプロテインＡ−セ
ファロースカラムで精製する。精製ＩｇＧを含むカラム
溶出液を、安定剤を規定の濃度になるように溶かした溶
剤に対して透析する。それに定量の保存剤を加えたもの
を最終精製物とする。これを滅菌容器に小分けして最終
製品とする。最終製品について抗体価試験、特異性試
験、外観等の特性試験をおこなう。これらの試験に要求
される事項は、１システムにおけると同様である。

【００４６】ここで、抗−Ｂ凝集素について説明する。
抗−Ｂ凝集素は、小麦胚芽レクチンを、安定剤を含む精
製水に溶解し、定量の安定剤を加えたものである。な
お、ＡＢシステムについても凝集反応の比較対象とし
て、１システムにおけると同様の陰性コントロール液を
用いる。

【００４７】次に、この発明に係る１システム及びＤシ
ステムのポリクローナル抗体の使用方法を説明する。透
明丸底の極小型のマイクロチューブと、小型の遠心分離
器とを用いる。 （１） 血液型を判定しようとする血液にＰＢＳを加
え、赤血球濃度が２〜４％になるように希釈したものを
被検赤血球浮遊液とする。 （２） １システムでは、３本のマイクロチューブに、
それぞれ抗−１・１，２抗体、抗−１・１抗体、陰性コ
ントロール液を５０μｌずつ取り分ける。なお、Ｄシス
テムでは、抗−Ｄ１抗体、抗−Ｄ２抗体、陰性コントロ
ール液を５０μｌずつ取り分ける。 （３） 各マイクロチューブに被検赤血球浮遊液を５０
μｌずつ加える。 （４） １システムにおいては、抗−１・１，２抗体又
は、抗−１・１抗体を感作させた赤血球浮遊液をＰＢＳ
で２回洗浄後、上精を取り除き、クームス抗体を５０μ
ｌずつ加える。Ｄシステムでは、クームス試験は行わな
い。 （５） 室温で静かに混和し、ただちに軽く遠心する。 （６） 各、抗体が入っているマイクロチューブを軽く
振り動かせて、陰性コントロールが入ったマイクロチュ
ーブと比較しながら、凝集の有無を肉眼で判定する。こ
の際、凹面鏡を用いてマイクロチューブの底部分を拡大
することによって、観察が容易になる。 （７） 被検血液に、１システムにおいても、Ｄシステ
ムにおいても抗体に対して特異性を有する抗原があれ
ば、肉眼的に凝集を認めることができる。凝集反応の強
さは、個体によって異なるが、＋（ワンプラス）から＋
＋＋＋（フォープラス）のどの段階であっても、陽性型
と判定する。一方、±（プラスマイナス、疑陽性）と−
（マイナス）は、陰性型と判定する。なお、このような
判定操作は、猫のＡＢシステムにおいても同様である。

【００４８】なお、この判定結果について、標準抗血清
を用いての追試を行った。その結果、いずれの判定結果
についても、標準抗血清を用いての判定結果と完全に一
致することが確認された。また、判定に要する時間は、
標準抗血清を用いる場合の１／５〜１／１０に短縮でき
ることが判明した。

【００４９】

【発明の効果】以上に説明したように、この発明は、
犬、猫の血液型を認識する抗血清たる血清フラクション
を、免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製すること
によって、抗血清に較べて、物質としての組成を格段に
単純化し、十分な均一性、保存性、安定性、流通性を確
保することができるので、広く一般に普及させて利用す
ることが可能であり、獣医療の領域に安全な輸血療法を
確立することができるという優れた効果がある。

【図面の簡単な説明】

【図１】犬の１システムにおける輸血可能な組み合せを
示す図。

【図２】犬のＤシステムにおける輸血可能な組み合せを
示す図。

【図３】猫のＡＢシステムにおける輸血可能な組み合せ
を示す図。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 赤血球型が１システムの１・１型である
   ことが判明している犬血液の赤血球部分を免疫原とし、
   該免疫原を赤血球型が１システムの１（−）型であるこ
   とが判明している犬に免疫付けし、該犬の血液の血清フ
   ラクションを免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製
   してなる犬の赤血球型を認識するポリクローナル抗体。
2. 【請求項２】 赤血球型が１システムの１・１型である
   ことが判明している犬血液の赤血球部分を免疫原とし、
   該免疫原を赤血球型が１システムの１・２型であること
   が判明している犬に免疫付けし、該犬の血液の血清フラ
   クションを免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製し
   てなる犬の赤血球型を認識するポリクローナル抗体。
3. 【請求項３】 赤血球型が１システムの１・２型である
   ことが判明している犬血液の赤血球部分を免疫原とし、
   該免疫原を赤血球型が１システムの１（−）型であるこ
   とが判明している犬に免疫付けし、該犬の血液の血清フ
   ラクションを免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製
   してなる犬の赤血球型を認識するポリクローナル抗体。
4. 【請求項４】 赤血球型がＤシステムのＤ１型であるこ
   とが判明している犬血液の赤血球部分を免疫原とし、該
   免疫原を兎に免疫付けし、該兎の血液の血清フラクショ
   ンを免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製してなる
   犬の赤血球型を認識するポリクローナル抗体。
5. 【請求項５】 赤血球型がＤシステムのＤ２型であるこ
   とが判明している犬血液の赤血球部分を免疫原とし、該
   免疫原を兎に免疫付けし、該兎の血液の血清フラクショ
   ンを免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製してなる
   犬の赤血球型を認識するポリクローナル抗体。
6. 【請求項６】 赤血球型がＡＢシステムのＡ型であるこ
   とが判明している猫血液の赤血球部分を免疫原とし、該
   免疫原を兎に免疫付けし、該兎の血液の血清フラクショ
   ンを免疫グロブリンのＩｇＧクラスに分画精製してなる
   猫の赤血球型を認識するポリクローナル抗体