JPH09504301A

JPH09504301A - 血液調節ペプチド

Info

Publication number: JPH09504301A
Application number: JP7512865A
Authority: JP
Inventors: バットナガール，プラディップ・クマール
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1993-10-29
Filing date: 1994-10-28
Publication date: 1997-04-28
Also published as: EP0725651B1; EP0725651A1; WO1995011693A1; EP0725651A4; DE69420044T2; US5652219A; DE69420044D1

Abstract

(57)【要約】本発明は、一般式（Ｉ）で示される化合物を提供する。該化合物は、血液調節活性を有し、骨髄造血の刺激に使用でき、ウイルス、真菌ならびに細菌感染疾患の予防および治療に使用することができる。

Description

【発明の詳細な説明】血液調節ペプチド発明の分野本発明は、血液調節活性を有し、造血の刺激に使用でき、ウイルス、真菌ならびに細菌感染疾患の治療に使用できる新規化合物に関する。発明の背景コロニー刺激因子、インターフェロン、およびさまざまなタイプのペプチドのごとき種々の調節伝達物質および修飾剤は、骨髄造血調節について役割を果たしている（メトカルフ（Metcalf）,セル（Cell）,第４３巻：５頁（１９８５年）；バセルガ,アール（Baserga,R.）、フォア,ピー（Foa,P.）、メトカルフ,ディー（Metcalf,D.）、ポリ,イー・イー（Polli,EE.）（編）,バイオロジカル・レギュレイション・オブ・セル・プロリファレイション（Biological Regulation of Cell Proliferation）（１９８６年）；ニコラ（Nicola）ら,ジャーナル・オブ・セル・フィジオロジー（J.Cell Physiol.）,第１２８巻：５０１頁（１９８６年）；ゾウムボス（Zoumbos）ら,プロイル・ヘマト（Proyr.Hemat.）,第１巻：３４１頁および１４巻：２１０頁（１９８６年）；ワーナー（Werner）ら,イクスペリメンティア（Experimentia）,第４２巻：５２１頁（１９８６年））。１９８２年に、合成血液調節ペプチドが、インビトロおよびインビボの両方において骨髄造血細胞に対して選択的な阻害効果を有することが報告された。その主たる効果は骨髄造血幹細胞（ＣＦＵ−ｇｍ）に対するものと思われる（パウコビツ（Paukovits）ら,ツァイトシュリフト・フュア・ナトゥールフォルシュンク（Z.Naturforsch.）第３７巻：１２９７頁（１９８２年）および米国特許第４, ４９９,０８１号）。このペプチドは、骨髄抽出物中に微量見いだされる天然に存在する顆粒球形成阻害因子のアナログであると考えられている。１９８７年に、レルム（Laerum）らは、このペプチドの酸化産物はジスルフィド架橋により形成される二量体（ＨＰ−５）であることを報告した。この二量体は、インビトロにおいてヒトおよびネズミ双方のＣＦＵ−ｇｍのコロニー形成を刺激し、インビボにおいてネズミ・骨髄造血細胞を促進調節するというような、その単量体とは逆の効果を有している。それが欧州特許出願第８７３０９８０６ .５号に権利請求されている。該二量体は、組織反応を抑制するための免疫抑制治療により骨髄機能が抑制されている患者、すなわち、骨髄移植術を受けている患者をはじめとする、骨髄損傷、顆粒球減少症および再生不良性貧血を含む骨髄造血活性の減少に苦しむ患者における骨髄造血を刺激することにおいて有用である。さらにそれを用いて、新生物およびウイルス性疾患のための細胞増殖抑制治療および放射線療法後におけるより迅速な骨髄再生を促進してもよい。患者が骨髄疾患後の免疫応答の欠乏により重大な感染症を有する場合に、それは特に価値がある。我々は、骨髄造血細胞に対して刺激効果を有し、ウイルス、真菌および細菌性疾患の予防および治療に有用なある種の新規化合物をついに見いだした。発明の概要本発明は、以下において式（Ｉ）として表される化合物であって、血液調節活性を有し、造血の刺激に使用でき、ウイルス、真菌ならびに細菌性疾患の予防および治療に使用できる化合物からなる。これらの化合物は、外科的に誘発された骨髄抑制、ＡＩＤＳ、ＡＲＤＳ、先天性骨髄形成異常、骨髄ならびに器官の移植のごとき種々の臨床的状況により細胞数が減少した患者における白血球の回復において；感染による白血球減少症の患者の防御において；重症のやけどの患者の治療において；いくつかの細胞周期特異的抗ウイルス剤に関して観察される骨髄抑制の改善において、および骨髄移植を受けた患者、特に、宿主疾患に対する移植物を有する患者における感染の治療において、結核の治療において、また、ヒトおよび動物における原因不明の熱の治療において有用である。さらに該化合物は、免疫抑制されているかまたは「正常」な対象両方におけるウイルス、真菌および細菌および細菌感染疾患、特に、カンジダ、ヘルペスならびに肝炎の治療および予防に有用である。これらの化合物を、同時係属の米国特許第０７／７９９,４６５号および米国特許第４,４９９,０８１号（参照により本明細書に取り入れる）の単量体と組み合わせて用いて骨髄細胞に高活性および低活性の交互のピークを提供して、かくして、通常の２４時間リズムの造血を促進してもよい。このようにして、低い骨髄活性の時期に細胞増殖抑制療法を行うことができ、かくして、骨髄損傷の危険性を減少させることができ、一方では、活性の連続的なピークにより再生が促進されるであろう。さらに本発明は、式（Ｉ）の化合物および医薬上許容される担体からなる医薬組成物である。さらに本発明は、ヒトを含む動物における骨髄造血系を刺激するための方法であって、かかる刺激を必要とする動物に有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することからなる方法を構成する。また本発明は、免疫抑制されているかまたは正常な動物におけるウイルス、真菌および細菌感染の予防および治療方法であって、かかる予防および治療を必要とする動物に有効量の式（Ｉ）の化合物を投与することからなる方法を構成する。発明の詳細な説明１．下式：［式中：Ｙ₁およびＹ₂は独立してＣＨ₂またはＳ；ｘは０、１、２、３、または４；ｍは０または２；ｎは０または２；Ａはピログルタミン酸、プロリン、グルタミン、チロシン、グルタミン酸、２ −チオフェンカルボン酸、ピコリン酸、シクロヘキサンカルボン酸、テトラヒドロ−２−フロ酸、テトラヒドロ−３−フロ酸、２−オキソ−４−チアゾリジンカルボン酸、シクロペンタンカルボン酸、３−チオフェンカルボン酸、(Ｓ)−(＋) −５−オキソ−２−テトラヒドロフランカルボン酸、ピペコリン酸、ピロールカルボン酸、イソピロールカルボン酸、ピラゾールカルボン酸、イソイミダゾールカルボン酸、トリアゾールカルボン酸、ジチオールカルボン酸、オキサチオールカルボン酸、イソオキサゾールカルボン酸、オキサゾールカルボン酸、チアゾールカルボン酸、イソチアゾールカルボン酸、オキサジアゾールカルボン酸、オキサトリアゾールカルボン酸、オキサチオレンカルボン酸、オキサジンカルボン酸、オキサチアゾールカルボン酸、ジオキサゾールカルボン酸、ピランカルボン酸、ピリミジンカルボン酸、ピリジンカルボン酸、ピリダジンカルボン酸、ピラジンカルボン酸、ピペラジンカルボン酸、トリアジンカルボン酸、イソオキサジンカルボン酸、オキサチアゼンカルボン酸、モルホリンカルボン酸、インドールカルボン酸、インドレネンカルボン酸、２−イソベンザゾールカルボン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、ピラゾロ[３,４−ｂ]ピロールカルボン酸、ピラゾロ[３ ,４−ｂ]ピロールカルボン酸、イソインダゾールカルボン酸、インドキサジンカルボン酸、ベンゾオキサゾールカルボン酸、アントラニルカルボン酸、キノリンカルボン酸、イソキノリンカルボン酸、シノリンカルボン酸、キナゾレンカルボン酸、ナフチリジンカルボン酸、ピリド[３,４−ｂ]−ピリジンカルボン酸、ピリド[３,２−ｂ]−ピリジンカルボン酸、ピリド[４,３−ｂ]ピリジンカルボン酸、１,３,２−ベンゾオキサジンカルボン酸、１,４,２−ベンゾオキサジンカルボン酸、２,３,１−ベンゾオキサジンカルボン酸、３,１,４−ベンゾオキサジンカルボン酸、１,２−ベンゾイソオキサジンカルボン酸、１,４−ベンゾイソオキサジンカルボン酸、カルバゾールカルボン酸、アクリジンカルボン酸、またはプリンカルボン酸；Ｂはセリン、スレオニン、グルタミン酸、チロシン、システインまたはアスパラギン酸、Ｇはグルタミン酸、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アラニン、フェニルアラニン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、スレオニン、トリプトファン、ノルロイシン、アロスレオニン、グルタミン、アスパラギン、バリン、プロリン、グリシン、リジン、β−アラニンまたはサルコシン；Ｄはリジン、アルギニン、チロシン、Ｎ−メチルアルギニン、アルギニン、アスパラギン酸、オルニチン、セリン、アラニン、フェニルアラニン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、スレオニン、トリプトファン、ノルロイシン、アロスレオニン、グルタミン、アスパラギン、バリン、プロリン、グリシン、リジン、β−アラニン、サルコシン、またはジアミノヘキシン酸；またはそのカルボキサミドもしくはヒドロキシメチルもしくはＮ−メチル誘導体；Ｆはチロシンまたはペプチド結合；Ｒ₁およびＲ₂は独立して水素、Ｃ₁〜₃アルキル、Ｃ₂〜₄アルケニル、Ｃ₂〜₄アルキニル、(ＣＨ₂)_nＡｒまたは(ＣＨ₂)_xＲ₃；Ｒ₃はＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂、−ＮＨＣ(ＮＨ₂)ＮＨ、ＣＯ₂ＨまたはＣＯＮＨ₂；Ａｒはフェニル、ピリジル、フリル、ナフチル、チオフェニル、ピロリル、イミダゾリル、インドリルまたはヒドロキシフェニル；ただし：Ｙ₁およびＹ₂がＳである場合、ｘは０、２、３または４でありｍおよびｎは２；またはＹ₁およびＹ₂がＣＨ₂である場合、ｘは０、１、２、３または４でありｍおよびｎは０；またはＹ₁がＳでありＹ₂がＣＨ₂である場合、ｘは０でありｍおよびｎは２である］で示される化合物またはその医薬上許容される塩。すべてのアルキル、アルケニル、アルキニル、およびアルコキシ基は直鎖または分枝であってよい。本発明化合物は１個またはそれ以上の不斉炭素原子を含んでいてもよく、ラセミ体および光学的に活性な形態として存在してもよい。これらの化合物およびジアステレオマー異性体のすべては本発明の範囲内であると考えられる。本発明化合物の医薬上許容される塩複合体も本発明に包含される。式（Ｉ）において、Ａが末端アミノ基を含むことに注意すべきである。同様に、Ｄは末端カルボキシル基、またはそのカルボキサミドもしくはヒドロキシメチル誘導体を含む。当該分野において常用される略号および記号を本明細書に用いてペプチドを記載する：Ａｌａ＝アラニンｐＧｌｕ＝ピログルタミン酸Ｐｒｏ＝プロリンＧｌｕ＝グルタミン酸Ａｓｐ＝アスパラギン酸Ｔｙｒ＝チロシンＰｉｃ＝ピコリン酸Ｐｐｃ＝ピペコリン酸Ｇｌｙ＝グリシンＯｒｎ＝オルニチンＬｙｓ＝リジンＣｙｓ＝システインＳｅｒ＝セリン慣用的表記法によれば、アミノ末端は左、カルボキシ末端は右である。すべてのキラルなアミノ酸はＤまたはＬ絶対配置であってよい。すべての光学異性体が考えられる。アミノ末端をアシル化により保護してもよい。かかる保護基の例は、ｔ−ブトキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）、ＣＨ₃ＣＯおよびＡｒ−ＣＯ（Ａｒ＝ベンジル、またはフェニル）である。Ｃ−末端は、天然のアミノ酸の場合のようにカルボキシルであってもよく、あるいはカルボキサミド（−(Ｏ)ＮＨ₂）またはヒドロキシメチル（−ＣＨ₂−ＯＨ）誘導体であってもよい。好ましい化合物は：Ａがピログルタミン酸、ピコリン酸、プロリン、チロシン、またはピペコリン酸；Ｂがグルタミン酸、セリン、アスパラギン酸またはチロシン；Ｇがアスパラギン酸、グルタミン酸、チロシンまたはリジン；Ｄがリジンまたはそのカルボキサミド誘導体、アルギニン、Ｎ−メチルアルギニン、２,６−ジアミノ−４−ヘキシン酸、アスパラギン酸またはオルニチン；Ｙ₁およびＹ₂がＣＨ₂；ｘが０または２；ｍおよびｎが０である化合物である。Ａがピログルタミン酸、プロリンおよびピコリン酸；Ｂがグルタミン酸、アスパラギン酸またはセリン；Ｇがアスパラギン酸またはグルタミン酸；Ｄがリジンまたはそのカルボキサミド誘導体Ｆが結合；Ｙ₁およびＹ₂がＣＨ₂；ｘが０または２であって、キラルなアミノ酸がＬ絶対配置となっている化合物がより好ましい。本発明は、以下の（ａ）、（ｂ）からなる工程により製造することのできる式（Ｉ）：で示される化合物を提供する：（ａ）ｘが１、２、３または４であり；Ｙ₁、Ｙ₂、ｍ、ｎ、Ｒ₁およびＲ₂が式（Ｉ）における定義に同じである場合には；式（II）：Ｈ₂Ｎ−(ＣＨ₂)_m−Ｙ₁−(ＣＨ₂)_x−Ｙ₂−(ＣＨ₂)_n−ＮＨ₂ （II）で示される化合物を、ＣＨ₂Ｃｌ₂のごとき適当な溶媒中で２当量の式（III）：Ｂｒ−ＣＲ₁Ｒ₂−ＣＯ₂Ｅｔ（III）で示される化合物と反応させて式（IV）：で示される化合物を得る。ＣＨ₂Ｃｌ₂のごとき適当な溶媒中で化合物（VI）を過剰のジ−ｔ−ブチルジカルボネートと反応させて式（Ｖ）：で示される化合物を得る。ＴＨＦのごとき適当な溶媒中で化合物（Ｖ）を水酸化ナトリウムのごとき水性塩基と反応させてエチルエステルを加水分解する。次いで、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドのごとき適当な溶媒中でＥＤＣ／ＨＯＢｔのごとき標準的なカップリング試薬を用いてこの化合物を適当に誘導体化された式（VI）で示されるペプチド：Ｆ−Ｄ（VI）とカップリングさせて式（VII）：で示される化合物を得る。次いで、ＣＨ₂Ｃｌ₂のごとき適当な溶媒中でトリフルオロ酢酸のごとき適当な試薬を用いて、化合物（VII）のＢＯＣ保護基を除去する。次いで、得られたジアミンを、エム・ボダンスキ（M.Bodanski）ら,「ペプチド・シンセシス（Peptide Synthesis）」,ジョン・ウィリー・アンド・サンズ ,インク,ニューヨーク,ＮＹ（John Wiley and Sons,Inc.,New York,NY）（１９７６年）（参照により本明細書に取り入れる）において見いだされるような標準的な液相アミノ酸合成法を用いて、適当に保護されたＢＯＣ−アミノ酸Ｇ、ＢそしてＡと順次カップリングさせる。無水フッ化水素での保護基の除去により式（Ｉ）の化合物を得る。（ｂ）ｘが０あり；Ｙ₁、Ｙ₂、ｍ、ｎ、Ｒ₁およびＲ₂が式（Ｉ）における定義に同じである場合には；式（VIII）：ＰＹ₁−(ＣＨ₂)_n−ＮＨ₂ （VIII）で示される化合物を、ＣＨ₂Ｃｌ₂のごとき適当な溶媒中で１当量の式（III）で示される化合物と反応させて式（IX）：ＰＹ₁−(ＣＨ₂)_n−ＮＨ−ＣＲ₁Ｒ₂−ＣＯ₂Ｅｔ（IX）で示される化合物を得る。ＣＨ₂Ｃｌ₂のごとき適当な溶媒中で化合物（IX）を過剰のジ−ｔ−ブチルジカルボネートと反応させて式（Ｘ）：で示される化合物を得る。次いで、ＣＨ₂Ｃｌ₂のごとき適当な溶媒中でトリフルオロ酢酸のごとき適当な試薬を用いて化合物（Ｘ）のＢＯＣ保護基を除去する。標準的な溶液相アミノ酸合成法を用いて、得られたアミノ酸を適当に保護されたＢＯＣ−アミノ酸Ｇ、ＢそしてＡと順次カップリングさせて式（XI）：で示される化合物を得る。Ｙ₁がＳである化合物に関しては、無水フッ化水素での保護基の除去を行い、ＴＲＩＳ緩衝化ｐＨ８.５のごとき適当な媒体中でグルタチオンのごとき酸化剤を用いて、生じた化合物を処理すると式（Ｉ）の化合物が得られる。一般的には、刺激効果を発揮させるためには、１日当たり体重７０ｋｇにつき０.５ｎｇないし１ｍｇ、好ましくは、５〜５００ｎｇの用量範囲で注射することにより、あるいは１日当たり体重７０ｋｇにつき５０ｎｇないし５ｍｇ、例えば、０.０１ｍｇないし１ｍｇの用量範囲で経口的に、本発明ペプチドをヒト患者に投与することができる。輸液または同様の方法により投与する場合には、用量は体重７０ｋｇあたり０.００５ｎｇないし１ｍｇ、例えば、６日間にわたり約０.０３ｎｇであってよい。理論上は、患者の細胞外体液中約１０^-15Ｍないし１０^-5Ｍのペプチド濃度とすることが望ましい。本発明のさらなる特徴によれば、医薬用担体または賦形剤と混合された、１種またはそれ以上の上記定義の式（Ｉ）の化合物またはその生理学的に適合する塩を活性成分としてなる医薬組成物が提供される。本発明組成物を、例えば、経口、鼻腔内または直腸投与に適した形態で提供してもよい。本明細書の用語「医薬上」は、本発明の獣医学への適用を包含する。これらのペプチドを、カプセル封入、錠剤化してもよく、あるいは経口投与用エマルジョンまたはシロップとして製造してもよい。医薬上許容される固体または液体担体を添加して組成物を増強または安定化してもよく、あるいは組成物の製造を容易にしてもよい。液体担体は、糖蜜、ピーナッツ油、オリーブ油、グリセリン、セイラインまたは水を包含する。固体担体は、澱粉、ラクトース、硫酸カルシウム二水和物、白陶土、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸、タルク、ペクチン、アラビアゴム、寒天またはゼラチンを包含する。担体が、モノステアリン酸グルセリルもしくはジステアリン酸ステアリルのみ、あるいはそれらとロウとの混合物のごとき除放性物質を含有していてもよい。固体担体量は変更されるが、好ましくは、投与単位あたり約２０ｍｇないし約１ｇの間であろう。錠剤が必要な場合には、粉砕、混合、顆粒化、そして打錠のごとき製薬分野の慣用的方法に従って医薬調製物を製造してもよく、あるいは硬ゼラチンカプセルの製造には、粉砕、混合し、そして充填を行ってもよい。例えば、活性成分をラクトースまたはソルビトールのごとき不活性担体と混合し、混合物をゼラチンカプセル中に充填することにより、１種またはいくつかの活性成分を含有するカプセルを製造してもよい。液体担体を用いる場合、調製物はシロップ、エリキシル、エマルジョンまたは水性もしくは非水性懸濁液の形態であろう。かかる液体処方を直接経口的に投与してもよく、あるいは軟ゼラチンカプセル中に充填してもよい。器官特異的担体系を用いてもよい。別法として、本発明医薬組成物、またはその誘導体を非経口投与用の凍結乾燥粉末の溶液として処方してもよい。使用前に、適当な希釈剤または他の医薬上許容される担体を添加することにより粉末を復元してもよい。適当な希釈剤の例は、通常の等張セイライン溶液、標準の水中５％デキストロースまたは緩衝化酢酸ナトリウムもしくは酢酸アンモニウム溶液である。かかる処方は特に非経口投与に適するが、経口投与に使用してもよく、計量吸入器または吸入用噴霧器中に入れてもよい。ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシセルロース、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムのごとき賦形剤を添加するのが望ましい。直腸投与には、本発明ペプチドの細粉化粉末をカカオ脂、グリセリン、ゼラチンまたはポリエチレングリコールのごとき賦形剤と混合し、坐薬に成型してもよい。また、細粉化粉末を、緩衝化して、あるいは緩衝化せずに、油性調製物、ゲル、クリームまたはエマルジョンに配合してもよく、経皮パッチを通して投与してもよい。水溶液と同様にして鼻用スプレーを処方し、エアロゾル推進剤または手動圧縮手段のいずれかを伴ったスプレー容器中に詰めてもよい。本発明化合物を含有する投与単位は、好ましくは、０.１〜１００ｍｇ、例えば、１〜５０ｍｇの式（Ｉ）のペプチドまたはその塩を含有する。本発明のさらなる特徴によれば、有効量の上記定義の医薬組成物を対象に投与することからなる、骨髄造血の阻害方法が提供される。本発明化合物を本発明にしたがって投与する場合、許容されない毒物学的効果は考えられない。式（Ｉ）の化合物の生物学的活性を以下の試験により示す。基質細胞によるコロニー刺激活性の誘導ネズミ・骨髄基質細胞系Ｃ６を、プラスチック組織培養用デイッシュにおいてでＲＰＭＩ−１６４０培地および５％ＦＢＳ中で集密になるまで増殖させる。実験前日に、この培地を血清無添加ＤＭＥＭに交換する。これらの培養物に化合物を１時間添加し、次いで、培養物から洗浄除去する。培地を新鮮なＤＭＥＭと交換し、５％ＣＯ₂、３７℃で２４時間細胞をインキュベーションする。２４時間後、Ｃ６細胞培養物の上清を集め、滅菌濾過し、次いで、下記のように造血性コロニー刺激活性（ＣＳＡ）の存在についてアッセイできるまで凍結する。軟寒天アッセイルイス（Lewis）ラットから骨髄細胞を得る。それらを、血清無添加ＤＭＥＭ中１０⁶個／ｍｌとする。以下のものを用いる単層寒天系を使用する：栄養素（ＮａＨＣＯ₃、ピルベート、アミノ酸、ビタミン、およびＨＥＰＥＳバッファー）でエンリッチされたＤＭＥＭ；０．３％バクトアガー（Bacto agar）、および２０％ルイスラット血清。上で得られたＣ６細胞系上清の希釈物（１０〜２.５％）をラット・骨髄細胞（最終濃度＝１０⁵個／ｍｌ）とともに、これに添加する。寒天プレートを５％ＣＯ₂、３７℃で７〜８日間インキュベーションする。増殖している骨髄細胞（ＣＦＵ−Ｃ）のコロニーを顕微鏡を用いて計数する。計数した寒天のコロニー数はＣ６骨髄基質細胞系上清中に存在するＣＳＡ量に比例する。単純ヘルペスマウスモデル感染７日前に、用量１０および１ｎｇ／ｋｇの化合物を体積０.２ｍｌとして１日１回Ｂａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注射する。対照マウスには０.１ｍｌの希釈用緩衝液ＤＰＢＳおよび０.５％熱不活性化正常マウス血清の混合物を注射する。０.０５ｍｌのＰＢＳ中５.０ｘ１０⁵／ｐｆｕを後ろ足のそれぞれの甲に注射することにより、単純ヘルペスウイルス（ＭＳ株）をマウスに感染させる。マウスに対し、瀕死状態（餌またはＨ₂Ｏを摂取できない）になるまで化合物または対照注射を継続する。通常には、感染約８日後に後ろ足のマヒが起こる。脳炎が起こるまでマヒが進行する。別法として、膣経路によりウイルスを接種する。５.０ｘ１０⁵／ｐｆｕのＭＳ −ＮＡＰ株を含有する綿栓をマウスの膣に挿入する。ウィルコキシン（Wilcoxin）試験を用いて、処理群において対照群に対する有意な生存率の増加が見いだされるかどうかを調べる。カンジダ攻撃カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）Ｂ３１１ａ株を用いる。この株はマウスを経て、次いで、−７０℃に凍結される。Ｂ３１１ａは、免疫抑制されたマウスに対しては５.０ないし８.０ｘ１０⁴ｃｆｕ／マウスの範囲で毒性があり、正常マウスに対しては１.０ないし２.０ｘ１０⁵ｃｆｕ／マウスの範囲で毒性がある。カンジダの凍結ストックからの試料をサブロー（Sabouroud）デキストローススラント上で増殖させ、次いで、サブローブロスの５０ｍｌの振盪培養に移して１８時間培養した。細胞を３回洗浄し、次いで、ヘモサイトメーター（ hemocytometer）で計数し、メチレン染料排除法により生存率を確認した。計数値を確実にするために接種量に基づいて生存率の計数を行った。カンジダ感染させるすべてのマウス（Ｂａｌｂ／ｃ）を、０.２ｍｌのセイラインに懸濁した細胞を静脈注射して感染させた。何匹かのマウスを、３００ｒａｄの放射線を用いて亜致死まで骨髄抑制させる。照射２時間後から、正の対照として化合物ＣＳＦを、あるいは賦形剤を毎日動物に注射する。照射および処理開始から７日後、静脈内投与によりカンジダ・アルビカンスをマウスに与える。この投与は正常マウスに対してほぼＬＤ７５であることに留意すること。他の研究においては、マウスを免疫抑制しない。これらの研究においては、照射されたマウスと同じ方法で感染後から７日後にマウスの治療を開始する。両モデルにおいて、瀕死状態までマウスを追跡研究し、ウィルコキシン試験（Wilcoxin test）を用いて生存率の変化を比較する。以下の実施例は本発明の説明に役立つ。実施例は本発明の範囲を何ら限定するものではないが、本発明化合物をいかにして製造し使用するのかを示すために提供される。実施例において、すべての温度はセ氏である。高速原子衝撃を用いるＶＧＺＡＢ質量スペクトル計によりＦＡＢ質量スペクトルを行った。実施例１ａ）Ｎ,Ｎ'−ビス（メチルカルボキシエトキシ）−１,４−ジアミノブタンＣＨ₂Ｃｌ₂（４０ｍＬ）中のブロモ酢酸（２.４０ｍＬ,２１.６ｍｍｏｌ）、Ｅｔ₃Ｎ（４.２０ｍＬ,３０.１ｍｍｏｌ）および１,４−ジアミノブタン（１.００ｍＬ,９.９５ｍｍｏｌ）の混合物を室温で撹拌した。２時間後、反応混合物をブライン（１００ｍＬ）中に注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（３ｘ１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濃縮して白色油状物質（１.５３ｇ）を得た。フラッシュクロマトグラフィー（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ₃＋１％Ｅｔ₃Ｎ,シリカゲル）により所望化合物を黄色油状物質（０.５７ｇ,２２％）として得た。¹ＨＮＭＲ（９０ＭＨｚ,ＣＤＣｌ₃）δ４.２５（ｑ,Ｊ＝６.８Ｈｚ, ４Ｈ）,３.４０（ｓ,４Ｈ）,２.６５（ｍ,４Ｈ）,１.６５（ｍ,６Ｈ）,１.３０（ｔ,Ｊ＝６.８Ｈｚ,６Ｈ）。ｂ）Ｎ,Ｎ',Ｎ,Ｎ'−ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）ビス（メチルカルボキシエトキシ）−１,４−ジアミノブタンＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ｍＬ）中の（ａ）（０.５７ｇ,２.１９ｍｍｏｌ）およびＥｔ₃Ｎ（１.２５ｍＬ,８.９７ｍｍｏｌ）の溶液に、ジ−ｔ−ブチルジカルボネート（１.４４ｇ,６.６０ｍｍｏｌ）を添加した。１８時間後、反応物をブライン（５０ｍＬ）中に注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（３ｘ７５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濃縮してわずかに灰色がかった白色の残渣（１. ５０ｇ）を得た。フラッシュクロマトグラフィー（３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン ,シリカゲル）により所望生成物を透明油状物質（０.８９ｇ,８８％）として得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４６１.２［Ｍ＋Ｈ］⁺ ｃ）ＴＨＦ（５ｍＬ）中の（ｂ）（０.３７ｇ,０.８０ｍｍｏｌ）および１ＮＮａＯＨ（５ｍＬ,５ｍｍｏｌ）の混合物を室温で撹拌した。１８時間後、反応物をＣＨＣｌ₃（２０ｍＬ）で希釈し、１ＮＨＣｌで酸性にした。ＣＨＣｌ₃（２ｘ２０ｍＬ）で水層をさらに抽出した。合わせた有機層をブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥し、濃縮して透明油状物質（０.２９ｇ）を得た。この物質は放置すると固化し、さらに精製せずに次の工程において使用した。 −１０℃のＤＭＦ（３ｍＬ）中のＬｙｓ（ＣＢＺ）ＯＢｚｌ.ＨＣｌ（０.７２ｇ,１.７７ｍｍｏｌ）に、ＥｔＮｉＰｒ₂（０.３１ｍＬ,１.７６ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（０.２５ｇ,１.８２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液に、ＤＭＦ（３ｍＬ）中の上記工程で得たジ酸（０.２９ｇ,０.８０ｍｍｏｌ）の溶液、次いで、ＥＤＣ（０.３４ｇ,１.７７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温まで暖めた。１８時間後、反応物をブライン（２００ｍＬ）中５％Ｎａ₂ＣＯ₃に注ぎ、ＣＨＣｌ₃（４ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機部分をＨ₂Ｏ（５０ｍＬ）、１ＮＨＣｌ（２ｘ５０ｍＬ）、ブライン（２ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濃縮してオレンジ色油状物質を得た。フラッシュクロマトグラフィー（２.５％ＭｅＯＨ,ＣＨＣｌ₃,シリカゲル）により所望化合物を白色固体（０.６７ｇ,７５％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ１１０９.６［Ｍ＋Ｈ］⁺ ｄ）ＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍＬ）中の（ｃ）（０.１１ｇ,０.１０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（２ｍＬ）を添加した。室温で１時間後、溶媒を減圧除去した。得られたオレンジ色油状物質をトルエンと共沸させ、ＤＭＦ（０.５ｍＬ）中に溶解し、生のＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ）（０.１４ｇ,０.４４ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（０.０６ｇ,０.４４ｍｍｏｌ）に添加した。得られた溶液に、ＥｔＮｉＰｒ₂（０.８ｍＬ,０.４４ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（０.０８ｇ,０.４３ｍｍｏｌ）を添加した。１８時間後、反応物をブライン（２００ｍＬ）中５％Ｎａ₂ＣＯ₃ に注ぎ、ＣＨＣｌ₃（４ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機部分をＨ₂Ｏ（５０ｍＬ）、１ＮＨＣｌ（２ｘ５０ｍＬ）、ブライン（２ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濃縮してロウ状固体を得た。フラッシュクロマトグラフィー（１％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ₃,シリカゲル）により所望化合物（０.０８ｇ,５１％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ１５０３.８［Ｍ＋Ｈ］⁺ ｅ）ＣＨ₂Ｃｌ₂（５ｍＬ）中の（ｄ）（０.０８ｇ,５０.０μｍｏｌ）の溶液にＴＦＡ（５ｍＬ）を添加した。室温で１時間後、溶媒を減圧除去した。得られた油状物質をトルエンと共沸させ、ＤＭＦ（０.５ｍＬ）中に溶解し、生のＢｏｃ− Ｇｌｕ（ＯｃＨｅｘ）（７６.３ｍｇ,０.２２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（３１. １ｍｇ,０.２３ｍｍｏｌ）に添加した。得られた溶液に、ＥｔＮｉＰｒ₂（３８. ０μＬ,０.２２ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（４５.６ｍｇ,０.２４ｍｍｏｌ）を添加した。１８時間後、反応物をブライン（２００ｍＬ）中５％Ｎａ₂ＣＯ₃に注ぎ、ＣＨＣｌ₃（４ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機部分をＨ₂Ｏ（５０ｍＬ）、１ＮＨＣｌ（２ｘ５０ｍＬ）、ブライン（２ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濃縮して白色固体を得た。フラッシュクロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ₃,シリカゲル）により所望化合物（３１.０ｍｇ,３０％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ９６３.６［Ｍ＋Ｈ］²⁺ ｆ）ＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍＬ）中の（ｅ）（３０ｍｇ,１５.６μｍｏｌ）の溶液にＴＦＡ（５２ｍＬ）を添加した。室温で１時間後、溶媒を減圧除去した。得られた油状物質をトルエンとともに共沸させ、ＤＭＦ（０.５ｍＬ）に溶解し、生のｐＧｌｕ（１２.８ｍｇ,９９.１μｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（１０.１ｍｇ,７４.５μ ｍｏｌ）に添加した。得られた溶液に、ＥｔＮｉＰｒ₂（１２.０μＬ,６８.９μ ｍｏｌ）およびＥＤＣ（１３.８ｍｇ,７２.１μｍｏｌ）を添加した。１８時間後、反応物を１：１の氷／水（１００ｍＬ）中に注いだ。生じた沈殿を集め、減圧乾燥して白色固体（１５.９ｍｇ,５２％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ９７５.０［Ｍ＋２Ｈ］²⁺ ｇ）化合物１ −７８℃のＨＦ容器中に（ｆ）（１４.９ｍｇ,７.６μｍｏｌ）、無水ＨＦ（５ｍＬ）およびｐ−クレゾール（０.５ｍＬ）を入れた。反応物を０℃に暖めた。０℃で１.５時間後、ＨＦを減圧除去し、残渣を４％酢酸水溶液に溶解した。この物質を凍結乾燥した。調製用ＨＰＬＣ（Vydac^TMＣ−１８、６０分かけて２. ５％から５０％アセトニトリル／水＋０.１％ＴＦＡ）により標記化合物を白色固体として得た。ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｅ１１７１.４［Ｍ＋Ｈ］⁺ 実施例２本発明化合物を含有する医薬用途の処方を、多数の賦形剤を伴った種々の形態にして製造することができる。かかる処方の実施例を以下に示す。錠剤／成分１錠あたり１．活性成分０.５ｍｇ（式Ｉの化合物）２．コーンスターチ２０ｍｇ３．アルギン酸２０ｍｇ４．アルギン酸ナトリウム２０ｍｇ５．ステアリン酸マグネシウム１.３ｍｇ錠剤製造工程：工程１成分１、成分２、成分３および成分４を適当なミキサー／ブレンダー中で混合する。工程２工程１で各成分を添加後得られた混合物に十分な水を注意深く混合しながら少しずつ添加する。混合物が湿顆粒への変化が可能となる濃度になるまでかかる水の添加および混合を行う。工程３８番（２.３８ｍｍ）のふるいを用いるオシレーティンググラニュレーター（oscillating granulator）に該湿混合物を通すことにより顆粒に変化させる。工程４次いで、湿顆粒を１４０°Ｆ（６０℃）のオーブンで乾燥させる。工程５成分５を用いて乾燥顆粒を潤滑化する。工程６潤滑化した顆粒を適当な打錠機で打錠する。非経口処方適当量の式Ｉの化合物をポリエチレングリコール中に加熱しながら溶解することにより非経口投与用医薬組成物を製造する。次いで、この溶液を欧州局方注射用水で希釈する（１００ｍｌとする）。次いで、０.２２ミクロンのメンブランフィルターで該溶液を滅菌し、滅菌済み容器中に密封する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 38/00 ＡＤＹＡ６１Ｋ 37/02 ＡＤＹＡＤＺＡＤＺＡＥＤＡＣＳ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＪＰ，ＵＳ

Claims

【特許請求の範囲】１．下式：［式中：Ｙ₁およびＹ₂は独立してＣＨ₂またはＳ；ｘは０、１、２、３、または４；ｍは０または２；ｎは０または２；Ａはピログルタミン酸、プロリン、グルタミン、チロシン、グルタミン酸、２ −チオフェンカルボン酸、ピコリン酸、シクロヘキサンカルボン酸、テトラヒドロ−２−フロ酸、テトラヒドロ−３−フロ酸、２−オキソ−４−チアゾリジンカルボン酸、シクロペンタンカルボン酸、３−チオフェンカルボン酸、(Ｓ)−(＋) −５−オキソ−２−テトラヒドロフランカルボン酸、ピペコリン酸、ピロールカルボン酸、イソピロールカルボン酸、ピラゾールカルボン酸、イソイミダゾールカルボン酸、トリアゾールカルボン酸、ジチオールカルボン酸、オキサチオールカルボン酸、イソオキサゾールカルボン酸、オキサゾールカルボン酸、チアゾールカルボン酸、イソチアゾールカルボン酸、オキサジアゾールカルボン酸、オキサトリアゾールカルボン酸、オキサチオレンカルボン酸、オキサジンカルボン酸、オキサチアゾールカルボン酸、ジオキサゾールカルボン酸、ピランカルボン酸、ピリミジンカルボン酸、ピリジンカルボン酸、ピリダジンカルボン酸、ピラジンカルボン酸、ピペラジンカルボン酸、トリアジンカルボン酸、イソオキサジンカルボン酸、オキサチアゼンカルボン酸、モルホリンカルボン酸、インドールカルボン酸、インドレネンカルボン酸、２−イソベンザゾールカルボン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、ピラゾロ[３,４−ｂ]ピロールカルボン酸、ピラゾロ[３, ４−ｂ]ピロールカルボン酸、イソインダゾールカルボン酸、インドキサジンカルボン酸、ベンゾオキサゾールカルボン酸、アントラニルカルボン酸、キノリンカルボン酸、イソキノリンカルボン酸、シノリンカルボン酸、キナゾレンカルボン酸、ナフチリジンカルボン酸、ピリド[３,４−ｂ]−ピリジンカルボン酸、ピリド[３,２−ｂ]−ピリジンカルボン酸、ピリド[４,３−ｂ]ピリジンカルボン酸、１,３,２−ベンゾオキサジンカルボン酸、１,４,２−ベンゾオキサジンカルボン酸、２,３,１−ベンゾオキサジンカルボン酸、３,１,４−ベンゾオキサジンカルボン酸、１,２−ベンゾイソオキサジンカルボン酸、１,４−ベンゾイソオキサジンカルボン酸、カルバゾールカルボン酸、アクリジンカルボン酸、またはプリンカルボン酸；Ｂはセリン、スレオニン、グルタミン酸、チロシン、システインまたはアスパラギン酸、Ｇはグルタミン酸、チロシン、アスパラギン酸、セリン、アラニン、フェニルアラニン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、スレオニン、トリプトファン、ノルロイシン、アロスレオニン、グルタミン、アスパラギン、バリン、プロリン、グリシン、リジン、β−アラニンまたはサルコシン；Ｄはリジン、アルギニン、チロシン、Ｎ−メチルアルギニン、アルギニン、アスパラギン酸、オルニチン、セリン、アラニン、フェニルアラニン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、スレオニン、トリプトファン、ノルロイシン、アロスレオニン、グルタミン、アスパラギン、バリン、プロリン、グリシン、リジン、β−アラニン、サルコシン、またはジアミノヘキシン酸；またはそのカルボキサミドもしくはヒドロキシメチルもしくはＮ−メチル誘導体；Ｆはチロシンまたはペプチド結合；Ｒ₁およびＲ₂は独立して水素、Ｃ₁〜₃アルキル、Ｃ₂〜₄アルケニル、Ｃ₂〜₄アルキニル、（ＣＨ₂）_nＡｒまたは（ＣＨ₂）_xＲ₃；Ｒ₃はＯＨ、ＳＨ、ＮＨ₂、−ＮＨＣ(ＮＨ₂)ＮＨ、ＣＯ₂ＨまたはＣＯＮＨ₂；Ａｒはフェニル、ピリジル、フリル、ナフチル、チオフェニル、ピロリル、イミダゾリル、インドリルまたはヒドロキシフェニル；ただし：Ｙ₁およびＹ₂がＳである場合、ｘは０、２、３または４でありｍおよびｎは２；またはＹ₁およびＹ₂がＣＨ₂である場合、ｘは０、１、２、３または４でありｍおよびｎは０；またはＹ₁がＳでありＹ₂がＣＨ₂である場合、ｘは０でありｍおよびｎは２である］で示される化合物またはその医薬上許容される塩。２．Ａがピログルタミン酸、ピコリン酸、プロリンまたはピペコリン酸である請求項１記載の化合物。３．Ｂがグルタミン酸、セリン、アスパラギン酸またはチロシンである請求項２記載の化合物。４．Ｇがアスパラギン酸、グルタミン酸、チロシンまたはリジンであり、Ｄがリジンまたはそのカルボキサミド誘導体、アルギニン、Ｎ−メチルアルギニン、２,６−ジアミノ−４−ヘキサン酸、アスパラギン酸またはオルニチンである請求項３記載の化合物。５．請求項１の化合物および医薬上許容される担体からなる医薬組成物。６．骨髄造血系の刺激を必要とする対象に有効量の請求項１の化合物を投与することからなる骨髄造血系の刺激方法。７．ウイルス、真菌および細菌感染の治療を必要とする対象に有効量の請求項１の化合物を投与することからなるウイルス、真菌および細菌感染の治療方法。８．カンジダ（Candida）またはヘルペスまたは肝炎感染の治療を必要とする対象に有効量の請求項１の化合物を投与することからなるカンジダまたはヘルペスまたは肝炎感染の治療方法。