JPH09294A - 光学活性なフェナンスレン誘導体の分離方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】本発明は、一般式 【化１】 〔式中Ｒは低級アルキル基を示す。〕で表わされる光学
活性なフェナンスレン誘導体とその光学的対掌体とのラ
セミ混合物に、立体選択的アルカノイル化活性を有する
酵素の存在下に一般式 【化２】 〔式中Ｒ¹は低級アルカノイル基を、Ｒ²は水素原子、低
級アルキル基又は低級アルケニル基を示す。〕で表わさ
れる化合物を反応させて、上記光学的対掌体をその２位
水酸基がアルカノイル化された化合物に変換し、該化合
物と上記光学活性なフェナンスレン誘導体とを分離する
ことを特徴とする光学活性なフェナンスレン誘導体の分
離方法を提供する。 【効果】本発明方法によれば、光学活性なフェナンスレ
ン誘導体を、高光学純度且つ高収率で容易に、分離収得
できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は光学活性なフェナンスレ
ン誘導体の分離方法に関する。

【０００２】

【従来技術とその課題】本発明者らの先に開発したＩＬ
−１阻害剤有効成分化合物の合成中間体として有用な一
連のフェナンスレン誘導体〔特開平６−１７４６号公報
参照〕中には、光学活性体の形態をとることができる化
合物、例えば化合物（チ）が存在しており、この光学活
性体が最終有効成分化合物の製造に重要なものであっ
た。

【０００３】しかして、上記公報には、その参考例２１
に上記光学活性体形態の化合物（チ）の製法も示されて
はいるが、その方法は、以下の如き欠点を有しており、
上記光学活性体の製法としては、改善されるべき余地が
あった。

【０００４】（１）収率が芳しくない。

【０００５】（２）光学活性シンコジン誘導体を利用し
た反応工程を必須要件としており、これが、試薬、操
作、工程等の面で、収率、経済性等に悪影響を及ぼす。

【０００６】（３）光学純度を上げるためには、上記反
応を低温で行なう必要があり、該温度制御のための余分
な操作、装置等が必要となる不利がある。

【０００７】従って、本発明の目的は、上記光学活性体
をより有利に、製造、分離可能な新しい方法を提供する
ことにある。

【０００８】本発明者らは、上記目的より鋭意研究を重
ねた結果、特定の酵素を利用したエステル形成反応によ
れば、該酵素の基質特異性によって、ラセミ体混合物中
の光学的対掌体（鏡像体）のみが反応し、得られる鏡像
体のエステルと、所望の光学活性体とが、容易に分離で
きるという新しい事実を発見した。本発明は、この新し
い知見に基づいて完成されたものである。

【０００９】

【課題を解決するための手段】即ち、本発明によれば、
一般式

【００１０】

【化３】

【００１１】〔式中Ｒは低級アルキル基を示す。〕で表
わされる光学活性なフェナンスレン誘導体とその光学的
対掌体とのラセミ混合物に、立体選択的アルカノイル化
活性を有する酵素の存在下に一般式

【００１２】

【化４】

【００１３】〔式中Ｒ¹は低級アルカノイル基を、Ｒは
水素原子、低級アルキル基又は低級アルケニル基を示
す。〕で表わされる化合物を反応させて、上記光学的対
掌体をその２位水酸基がアルカノイル化された化合物に
変換し、該化合物と上記光学活性なフェナンスレン誘導
体とを分離することを特徴とする光学活性なフェナンス
レン誘導体の分離方法が提供される。

【００１４】本発明方法によれば、簡単な操作で容易に
所望の光学活性なフェナンスレン誘導体を、高い光学純
度で且つ高収率で分離収得することができ、かくして得
られる光学活性体からは、ＩＬ−１阻害剤有効成分化合
物である光学活性なフェナンスレン誘導体を容易に製造
することができる。

【００１５】以下、本発明方法につき詳述すれば、本発
明方法において、出発原料として用いられる一般式
（１）で表わされるフェナンスレン誘導体のラセミ混合
物は、本発明者らが先に開発した前述の特許公開公報に
記載の方法（参考例１７及び参考例２１で得られる化合
物（チ））又はこれに準じて得られる下記化合物（３）
（４ａ位が不斉中心）を還元することにより得られる。

【００１６】

【化５】

【００１７】上記還元反応は、通常の方法に従って実施
することができる。例えば代表的には、ジエチルエーテ
ル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等のエーテル類、メ
タノール、エタノール等のアルコール類等の適当な不活
性溶媒中で、水素化ホウ素ナトリウム、水素化アルミニ
ウムリチウム等の適当な還元剤を、ハイドライドとし
て、原料化合物に対して等モル量以上用いて、０〜５０
℃程度の温度条件下に、約１０分〜５時間程度を要して
実施できる。尚、還元剤として水素化ホウ素ナトリウム
を用いる場合は、必要に応じて塩化セリウム等を反応系
内に存在させることもできる。

【００１８】かくして、フェナンスレン骨格の２位と４
ａ位の絶対配置が共にＳである光学活性体（２位水酸基
と４ａ位メチル基とが共にベータである前記化合物
（１））と、その鏡像体とのラセミ混合物を得ることが
できる。

【００１９】本発明方法によれば、上記のごとくして得
られるラセミ混合物を出発原料として、立体選択的アル
カノイル化活性を有する酵素を用いて、これに上記一般
式（２）で表わされる化合物を反応させる。ここで用い
られる立体選択的アルカノイル化活性を有する酵素とし
ては、トリアシルグリセロールリパーゼ（ＥＣ．３．
１．１．３）、リポプロテインリパーゼ（ＥＣ．３．
１．１．３４）、カルボキシエステラーゼ（ＥＣ．３．
１．１．１）等を利用することができ、中でもトリアシ
ルグリセロールリパーゼ（ＥＣ．３．１．１．３）は好
ましい。これら酵素は各種微生物、動物及び植物起源の
もののいずれでもよく、種々市販されている。本発明で
はこれら市販品をいずれも使用することができ、また固
定化酵素の形態であってもよい。上記市販品の具体例と
しては、例えばノボザイム４３５（ノボ社製）、リポプ
ロテインリパーゼ（協和メデックス社製）、リパーゼＰ
アマノ（天野社製）、ポリシンパンクレアチックリパー
ゼ（シグマ社製）、ビッグリパーエステラーゼ（シグマ
社製）、ニューラーゼＦアマノ（天野社製）、リパーゼ
ＡＰ−４アマノ（天野社製）、リパーゼＭＡＰ−１０
（天野社製）等を例示できる。

【００２０】しかして、従来、かかる酵素が本発明に係
わる如きフェナンスレン誘導体のエステル化反応に利用
された例は皆無であり、勿論、かかるエステル化反応
が、特定の光学的体掌体の一方にのみ起こるという事実
は、本発明者らが初めて発見した新規な事実である。

【００２１】上記特定酵素を用いたエステル形成反応
は、適当な溶媒、例えばベンゼン、トルエン、キシレン
等の芳香族炭化水素類、メタノール、エタノール、プロ
パノール、ブタノール等のアルコール類、ジエチルエー
テル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン
（ＴＨＦ）、１，４−ジオキサン等のエーテル類、クロ
ロホルム、ジクロロメタン等のハロゲン化炭化水素類、
アセトニトリル、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等
の不活性溶媒中やこれらと水との混合溶媒中で実施でき
る。用いられる化合物（２）は、低級アルコール（炭素
数１〜６）のカルボン酸（炭素数２〜７）エステルであ
り、これを構成する低級アルコール成分としては、メタ
ノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペン
チルアルコール、ヘキシルアルコール、ビニルアルコー
ル、イソプロペニルアルコール等を、カルボン酸成分と
しては、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、ヘキサン
酸、ヘプタン酸等をそれぞれ例示でき、上記の内では特
に酢酸ビニルが好適である。

【００２２】上記反応における基質（化合物（１））、
酵素及び化合物（２）の使用濃度及び割合は、それらの
種類等に応じて適宜決定でき特に限定されるものではな
いが、通常 基質は０．１〜５０ｗ／ｗ％、好ましくは
０．５〜２５ｗ／ｗ％の濃度範囲で用いられるのがよ
く、化合物（２）（エステル）は、０．１〜５０ｗ／ｗ
％、好ましくは０．５〜２５ｗ／ｗ％の濃度とするのが
よく、また酵素は基質１Ｇに対して１００〜１００００
０ＰＬＵ、好ましくは１０００〜５００００ＰＬＵとな
る範囲とするのがよい。

【００２３】上記反応は、用いる基質等の濃度や、酵素
量等に応じて異なるが、通常０〜６０℃程度、好ましく
は２０〜４０℃の温度条件下に、３〜２００時間程度を
要して行ない得る。尚、反応の完了はクロマトグラフィ
ーやＮＭＲ等でモニターするのが好ましい。

【００２４】上記反応により、一方の光学異性体である
一般式（１）で表わされる光学活性なフェナンスレン誘
導体には、なんらの変化も伴われることなく、該誘導体
の鏡像体のみが選択的にエステル化され、之等は、例え
ばカラムクロマトグラフィー操作等により容易に分離す
ることができる。

【００２５】本発明方法により分離された光学活性なフ
ェナンスレン誘導体（１）は、これを常法に従って酸化
反応させることにより、２位がオキソ基である光学活性
なフェナンスレン誘導体（化合物（３）の光学活性体）
に戻すことができる。

【００２６】該酸化反応は、例えばジクロロメタン、ア
セトン、メタノール等の適当な不活性溶媒中、ピリジニ
ウムクロロクロメート（ＰＣＣ）、ピリジニウムジクロ
メート（ＰＤＣ）、ジョーンズ試薬、無水クロム酸等の
適当な酸化剤を用いて実施できる。酸化剤の使用量は、
通常原料化合物に対して１当量〜少過剰当量程度とする
のがよい。反応は、通常０℃〜室温程度の温度条件下
に、５分〜３時間程度で完結する。

【００２７】また、本発明方法により分離された他方の
化合物（化合物（１）の鏡像体）は、これを前述した化
合物（３）の還元操作と同様にして還元することによ
り、２位が水酸基である対応する化合物に変換させるこ
とができ、該化合物からは、上記化合物（１）の酸化反
応と同様の酸化反応によって、化合物（３）の他方の光
学活性体）を得ることができる。

【００２８】かくして本発明方法により分離された各光
学活性体は、之等より、前述した特許公報に記載の方法
に従って、ＩＬ−１阻害剤有効成分化合物である光学活
性なフェナンスレン誘導体を容易に導くことができる。

【００２９】

【実施例】以下、本発明を更に詳しく説明するため、実
施例を挙げる。

【００３０】

【実施例１】 〈工程１〉１４０℃で２時間減圧下に 乾燥した塩化セ
リウム４５４ｍｇをメタノール１０ｍｌ中に懸濁させ、
そこに５，８−ジメトキシ−１，４ａ−ジメチル−７−
（１−メチルエチル）−４，４ａ，９，１０−テトラヒ
ドロ−２（３Ｈ）−フェナンスレンのラセミ体１．０ｇ
を０℃で加えた。次にこの混合液中に水素化ホウ素ナト
リウム１１５ｍｇを加え、室温で４０分間撹拌した。
反応終了後、減圧濃縮し、残渣をクロロホルムで抽出し
た。有機層を集めて飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（溶出液…ｎ−ヘキサン：酢酸エ
チル＝９：１）で精製して、２−ヒドロキシ−５，８−
ジメトキシ−１，４ａ−ジメチル−７−（１−メチルエ
チル）−２，３，４，４ａ，９，１０−ヘキサヒドロフ
ェナンスレンの無色油状物９９３ｍｇを得た。

【００３１】・¹Ｈ−ＮＭＲ（δ：ｐｐｍ） １．２１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８），１．２２（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．８），１．３２−１．４９（１Ｈ，ｍ），
１．５４（３Ｈ，ｓ），１．６２−１．７６（１Ｈ，
ｍ），１．７９（３Ｈ，ｓ），１．９６−２．０８（２
Ｈ，ｍ），２．４２（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１６．４，１
３．７，４．４），２．８２（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝１２．
７，２．４），２．８２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１３．３，
４．１），３．０９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１６．４，
４．４，２．０），３．２９（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ＝
６．８），３．６５（３Ｈ，ｓ），３．８０（３Ｈ，
ｓ），４．０６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３，８．３），
６．６０（１Ｈ，ｓ）〔４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃〕 〈工程２〉上記で得られた化合物１２０ｍｇ、リパーゼ
（ノボ ノルディスク バイオインダストリー株式会
社、商品名：ＮＯＶＯＺＹＭ４３５；７０００ＰＬＵ／
ｇ）２４０ｍｇ及び酢酸ビニル０．１ｍｌのベンゼン
（１０ｍｌ）懸濁液を、室温で８０時間撹拌した。 反
応終了後、固形物を濾別し、濾液を濃縮し、残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーに付した。そして、ｎ
−ヘキサン溶出画分より（−）−（２Ｒ，４ａＲ）−２
−アセトキシ−５，８−ジメトキシ−１，４ａ−ジメチ
ル−７−（１−メチルエチル）−２，３，４，４ａ，
９，１０−ヘキサヒドロフェナンスレン（化合物Ａ）の
無色粉末５５ｍｇを得た。

【００３２】続いて、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝９：
１の混合溶媒溶出画分より（＋）−（２Ｓ，４ａＳ）−
２−ヒドロキシ−５，８−ジメトキシ−１，４ａ−ジメ
チル−７−（１−メチルエチル）−２，３，４，４ａ，
９，１０−ヘキサヒドロフェナンスレン（化合物Ｂ）の
無色粉末６０ｍｇを得た。

【００３３】（化合物Ａ） ・融点＝１１８〜１１９℃ ・〔α〕_D＝−３４４°（ＣＨＣｌ₃，ｃ＝０．０３） ・¹Ｈ−ＮＭＲ（δ：ｐｐｍ） １．２１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０），１．２３（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．０），１．５５（３Ｈ，ｓ），１．６５
（３Ｈ，ｓ），１．６９−１．８９（１Ｈ，ｍ），１．
８９−２．１０（２Ｈ，ｍ），２．１０（３Ｈ，ｓ），
２．１２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．７，１４．３，４．
６），２．６０ー２．９５（３Ｈ，ｍ），３．０７（１
Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１５．０，９．３，２．１），３．２
１（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ＝７．０），３．６５（３Ｈ，
ｓ），３．７９（３Ｈ，ｓ），５．３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝
８．６），６．６０（１Ｈ，ｓ）〔２００ＭＨｚ，ＣＤ
Ｃｌ₃〕 （化合物Ｂ） ・融点＝１３６〜１３８℃ ・〔α〕_D＝＋２２６°（ＣＨＣｌ₃，ｃ＝０．１７） ・¹Ｈ−ＮＭＲ（δ：ｐｐｍ） １．２１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８），１．２２（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．８），１．５４（３Ｈ，ｓ），１．５４−
１．７４（１Ｈ，ｍ），１．７９（３Ｈ，ｓ），１．９
１−２．０９（３Ｈ，ｍ），２．２６−２．５４（１
Ｈ，ｍ），２．５７ー２．９１（３Ｈ，ｍ），３．０７
（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１７．１，４．６，２．１），
３．２９（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．８），３．６５
（３Ｈ，ｓ），３．７９（３Ｈ，ｓ），４．０５ー４．
１４（１Ｈ，ｍ），６．６０（１Ｈ，ｓ）〔２００ＭＨ
ｚ，ＣＤＣｌ₃〕 〈工程３〉ピリジニウムクロロクロメート６０ｍｇのジ
クロロメタン２ｍｌ溶液中に、上記で得られた化合物Ｂ
１８ｍｇのジクロロメタン３ｍｌ溶液を室温で加え、室
温で２０分間撹拌した。反応液にジエチルエーテル５ｍ
ｌ及び無水硫酸マグネシウム１ｇを加え、室温で１０分
間撹拌した後、固形物を濾別し、濾液を濃縮した。得ら
れた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出
液…ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）で精製して、
（＋）−（４ａＳ）−５，８−ジメトキシ−１，４ａ−
ジメチル−７−（１−メチルエチル）−４，４ａ，９，
１０−テトラヒドロー２（３Ｈ）−フェナンスレンの無
色粉末１８ｍｇを得た。

【００３４】・融点＝１８０〜１８１℃ ・〔α〕_D＝＋２４４°（ＣＨＣｌ₃，ｃ＝０．０６） ・¹Ｈ−ＮＭＲ（δ：ｐｐｍ） １．２２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０），１．２４（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．０），１．６５（３Ｈ，ｓ），１．７６−
１．８８（１Ｈ，ｍ），１．８７（３Ｈ，ｓ），２．２
０−２．２９（１Ｈ，ｍ），２．４１−２．５３（２
Ｈ，ｍ），２．６７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１８．１，１
４．７，５．１），２．９５（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１
２．５，３．５，３．５），３．０３（１Ｈ，ｓｅｐ
ｔ，Ｊ＝７．０），３．２５−３．３６（２Ｈ，ｍ），
３．６５（３Ｈ，ｓ），３．８２（３Ｈ，ｓ），６．６
５（１Ｈ，ｓ）〔４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃〕 また、得られる化合物の光学純度は、シフト試薬として
Ｅｕ（ｈｆｃ）₃（トリス〔３−（ヘプタフルオロ−１
−ヒドロキシブチリデン）−（＋）−カンファラト〕ユ
ーロピウム）を用いて重ベンゼン中の¹Ｈ−ＮＭＲスペ
クトルを測定して、５位のメトキシ基のプロトンのシグ
ナルより、９３％ｅｅと判明した。

【００３５】

【実施例２】 〈工程１〉水素化リチウムアルミニウム５．６ｍｇの無
水テトラヒドロフラン５ｍｌ懸濁液中に、実施例１の工
程２で得られた化合物Ａの５５ｍｇの無水テトラヒドロ
フラン２ｍｌ溶液を滴下し、０℃で３０分間撹拌した。
反応混合液に水を滴下して過剰の水素化アルミニウムリ
チウムを分解した後、セライトパッドを通して濾過し、
濾液を無水硫酸ナトリウムで乾燥して、減圧濃縮した。
残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出液…
ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）で精製して、
（−）−（２Ｒ，４ａＲ）−２−ヒドロキシ−５，８−
ジメトキシ−１，４ａ−ジメチル−７−（１−メチルエ
チル）−２，３，４，４ａ，９，１０−ヘキサヒドロフ
ェナンスレンの無色粉末５０ｍｇを得た。

【００３６】・融点＝１５１〜１５２℃ ・〔α〕_D＝−２１０°（ＣＨＣｌ₃、ｃ＝０．２４） ・¹Ｈ−ＮＭＲ（δ：ｐｐｍ） １．２１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８），１．２２（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．８），１．５４（３Ｈ，ｓ），１．５４−
１．７４（１Ｈ，ｍ），１．７９（３Ｈ，ｓ），１．９
１−２．０９（３Ｈ，ｍ），２．２６−２．５４（１
Ｈ，ｍ），２．５７−２．９１（３Ｈ，ｍ），３．０７
（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１７．１，４．６，２．１），
３．２９（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．８），３．６５
（３Ｈ，ｓ），３．７９（３Ｈ，ｓ），４．０５ー４．
１４（１Ｈ，ｍ），６．６０（１Ｈ，ｓ）〔２００ＭＨ
ｚ，ＣＤＣｌ₃〕 〈工程２〉ピリジニウムジクロロクロメート１３７ｍｇ
のジクロロメタン２ｍｌ懸濁液中に、上記工程１で得ら
れた化合物４１ｍｇのジクロロメタン３ｍｌ溶液を室温
で加え、室温で２０分間撹拌した。反応液にジエチルエ
ーテル５ｍｌ及び無水硫酸マグネシウム１ｇを加え、室
温で１０分間 撹拌した後、 固形物を濾過し、濾液を
濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（溶出液…ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝９：
１）で精製して、（−）−（４ａＲ）−５，８−ジメト
キシ−１，４ａ−ジメチル−７−（１−メチルエチル）
−４，４ａ，９，１０−テトラヒドロー２（３Ｈ）−フ
ェナンスレンの無色粉末３８ｍｇを得た。

【００３７】・融点＝１７９〜１８０℃ ・〔α〕_D＝−３２１°（ＣＨＣｌ₃，ｃ＝０．０９） ・¹Ｈ−ＮＭＲ（δ：ｐｐｍ） １．２２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０），１．２４（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．０），１．６５（３Ｈ，ｓ），１ ７６−
１．８８（１Ｈ，ｍ），１．８７（３Ｈ，ｓ），２．２
０−２．２９（３Ｈ，ｍ），２．４１−２．５３（２
Ｈ，ｍ），２．６７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１８．１，１
４．７，５．１），２．９５（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１
２．５，３．５，３．５），３．０３（１Ｈ，ｓｅｐ
ｔ，Ｊ＝７．０），３．２５−３．３６（２Ｈ，ｍ），
３．６５（３Ｈ，ｓ），３．８２（３Ｈ，ｓ），６．６
５（１Ｈ，ｓ）〔４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃〕 また、得られた化合物の光学純度を実施例１と同様にし
て測定したところ、９６％ｅｅと判明した。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式 【化１】 〔式中Ｒは低級アルキル基を示す。〕で表される光学活
   性なフェナンスレン誘導体とその光学的対掌体とのラセ
   ミ混合物に、立体選択的アルカノイル化活性を有する酵
   素の存在下に一般式 【化２】 〔式中Ｒ¹は低級アルカノイル基を、Ｒ²は水素原子、低
   級アルキル基又は低級アルケニル基を示す。〕で表わさ
   れる化合物を反応させて、上記光学的対掌体をその２位
   水酸基がアルカノイル化された化合物に変換し、該化合
   物と上記光学活性なフェナンスレン誘導体とを分離する
   ことを特徴とする光学活性なフェナンスレン誘導体の分
   離方法。
2. 【請求項２】 立体選択的アルカノイル化活性を有する
   酵素が、トリアシルグリセロールリパーゼ及びカルボキ
   シエステラーゼから選ばれる請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 立体選択的アルカノイル化活性を有する
   酵素が、ＥＣ３．１．１．３に属するトリグリセロール
   リパーゼである請求項２に記載の方法。
4. 【請求項４】 Ｒ¹がアセチル基及びＲ²がビニル基であ
   る請求項１に記載の方法。
5. 【請求項５】 Ｒがメチル基である請求項１に記載の方
   法。