JPH09257795A - Slide plate washing solution and kit containing the same - Google Patents

Slide plate washing solution and kit containing the same

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JPH09257795A
JPH09257795A JP8064828A JP6482896A JPH09257795A JP H09257795 A JPH09257795 A JP H09257795A JP 8064828 A JP8064828 A JP 8064828A JP 6482896 A JP6482896 A JP 6482896A JP H09257795 A JPH09257795 A JP H09257795A
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antigen
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雅英 川村
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隆 黒田
Tetsuya Ono
哲也 小野
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a washing soln. preventing the deformation or falling-off of antigen cell resulting from the drying of the surface of a slide plate in an indirect immunofluorescence or indirect enzyme antibody technique and a kit containing the same. SOLUTION: A slide plate 2 having cells or tissue containing an antigen bonded to an antibody to be detected fixed thereon and a labelled antibody labelled with a label substance and bonded to the above-mentioned antibody are used and the label bonded by the reaction of the above-mentioned antigen, the labelled antibody and the antibody to be measured in a specimen is detected on the slide plate by a microscope to detect the above-mentioned antibody. At this time, a humectant is added to a washing soln. used in order to remove the unreacted antibody and/or the labelled antibody from the slide plate 2.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【0001】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、顕微鏡を用いた蛍
光抗体法や酵素抗体法等に用いるスライドグラス等のス
ライドプレートを洗浄する際に用いる洗浄液及びそれを
含むキットに関し、詳しくは、スライドプレートの乾燥
及びそれに由来する被検物質の損傷等を防ぐための洗浄
液に関する。本発明の洗浄液及びキットは、特に自動化
された洗浄装置に好適に用いることができる。
BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a washing solution used for washing a slide plate such as a slide glass used in a fluorescent antibody method or an enzyme antibody method using a microscope, and a kit containing the washing solution. The present invention relates to a cleaning solution for preventing the drying of the product and the damage of the test substance derived therefrom. The cleaning solution and kit of the present invention can be suitably used particularly for an automated cleaning device.

【0002】[0002]

【従来の技術】顕微鏡を用いた臨床検査及び研究には、
蛍光抗体法、酵素抗体法、病理組織化学などがあり、こ
れらの方法では染色及び洗浄工程を含むものが多い。
2. Description of the Related Art For clinical examination and research using a microscope,
There are fluorescent antibody methods, enzyme antibody methods, pathological histochemistry, etc., and many of these methods include a staining and washing step.

【0003】蛍光抗体法は、抗核抗体、抗DNA抗体
(クリシディア法)、抗胃壁細胞抗体、抗平滑筋抗体、
抗ミトコンドリア抗体、抗好中球細胞質抗体等を検出す
る自己免疫性疾患検査や、EBウィルス、風疹ウィルス
抗体、ヘルペスウィルス抗体(抗原)、サイトメガロウ
ィルス抗体、クラミジア トラコマティス抗体(抗
原)、クラミジア シッタシ抗体(抗原)、エンドトキ
シン、トキソプラズマ抗体、FTA−ABS等を検出す
る感染症検査や、癌の組織診断等に用いられている検査
法である。
The fluorescent antibody method includes anti-nuclear antibody, anti-DNA antibody (Clysidia method), anti-gastric parietal cell antibody, anti-smooth muscle antibody,
Autoimmune disease tests that detect anti-mitochondrial antibodies, anti-neutrophil cytoplasmic antibodies, etc., EB virus, rubella virus antibody, herpes virus antibody (antigen), cytomegalovirus antibody, chlamydia trachomatis antibody (antigen), chlamydia sititasi It is a test method used for an infectious disease test for detecting an antibody (antigen), endotoxin, toxoplasma antibody, FTA-ABS, etc., and histological diagnosis of cancer.

【0004】この検査法は、直接法と間接法に分類さ
れ、直接法では、被験者の組織、細胞等をスライドプレ
ート上に固定し、これに蛍光標識された抗体を反応さ
せ、その免疫的染色像を顕微鏡で観察する。また、間接
法では、通常スライドプレート上に細胞や組織等の抗原
を予め固定し、被験サンプル中のこの抗原に対する抗体
を反応させた上で、蛍光標識され、かつ、前記抗体に結
合する第2の抗体を更に反応させ、被験サンプル中の目
的抗体の存在を、その免疫的染色像を蛍光顕微鏡で観察
することにより検出する。
This test method is classified into a direct method and an indirect method. In the direct method, the tissues, cells, etc. of the subject are fixed on a slide plate, and a fluorescently labeled antibody is reacted with the immunological staining. The image is viewed under a microscope. In addition, in the indirect method, an antigen such as a cell or a tissue is usually fixed on a slide plate in advance, an antibody against the antigen in a test sample is reacted, and then fluorescently labeled and bound to the second antibody. Is further reacted, and the presence of the target antibody in the test sample is detected by observing the immunologically stained image with a fluorescence microscope.

【0005】酵素抗体法は、上記蛍光抗体法の蛍光標識
された抗体のかわりに、ペルオキシダーゼやアルカリ性
フォスファターゼのような酵素で標識した抗体または、
ビオチン−アビジン結合を介して酵素が間接的に結合し
得るビオチン標識抗体を用いて、酵素反応により発色す
る基質の色を光学顕微鏡で観察することをによって、免
疫学的な検出を行う方法であって、この点を除けば、全
く蛍光抗体法と同等の方法である。
In the enzyme antibody method, instead of the fluorescently labeled antibody of the above-mentioned fluorescent antibody method, an antibody labeled with an enzyme such as peroxidase or alkaline phosphatase, or
It is a method of performing immunological detection by observing the color of a substrate developed by an enzymatic reaction with a light microscope using a biotin-labeled antibody to which an enzyme can indirectly bind via a biotin-avidin bond. Except for this point, the method is exactly the same as the fluorescent antibody method.

【0006】これまでの顕微鏡を用いた間接蛍光抗体法
や間接酵素抗体法では、スライドグラス上に被験サンプ
ルや試薬を分注することと、スライドグラスをビーカー
などの洗浄層中で生理食塩水などで洗浄することの2種
類の操作が交互に繰り返されるため、検査工程の自動化
が最も困難な分野であった。
In the conventional indirect fluorescent antibody method and indirect enzyme antibody method using a microscope, test samples and reagents are dispensed onto a slide glass, and the slide glass is washed with physiological saline in a washing layer such as a beaker. Since the two types of operations of cleaning in step 1 are repeated alternately, automation of the inspection process was the most difficult field.

【0007】抗核抗体の間接蛍光抗体法を例にとり、一
般的な検査手順を以下に示す。 1)用いられるスライドグラスは複数の検査用穴を持
ち、その部分はガラスが露出しており、その他の部分は
テフロンなどで撥水コーティングされている。このガラ
スの露出した検査用穴の部分にガン細胞HEp2(核抗
原を有する)が固定されているものを用意する。 2)患者血清を生理食塩水などで稀釈したものを、スラ
イドグラス上に載せ、血清中の特異抗体(抗核抗体)と
スライドグラス上の抗原と反応させる。 3)スライドグラスをビーカー中の生理食塩水に漬けて
洗浄する。 4)蛍光で標識された抗イムノグロブリン抗体をスライ
ドグラス上の検査用穴に載せ、スライドグラス上の抗原
に結合した特異抗体と反応させる。 5)スライドグラスをビーカー中の生理食塩水に漬けて
洗浄する。 6)グリセリン水溶液(封入剤)をスライドグラスに載
せ、カバーグラスを被せて蛍光顕微鏡で観察する。
Taking the indirect fluorescent antibody method of antinuclear antibody as an example, a general inspection procedure is shown below. 1) The slide glass used has a plurality of inspection holes, the glass is exposed at that portion, and the other portion is water-repellent coated with Teflon or the like. A cancer cell HEp2 (having a nuclear antigen) is fixed to the exposed test hole of the glass. 2) A patient serum diluted with physiological saline or the like is placed on a slide glass and reacted with a specific antibody (antinuclear antibody) in the serum and an antigen on the slide glass. 3) Soak the slide glass in physiological saline in a beaker for washing. 4) Place the fluorescently labeled anti-immunoglobulin antibody in the test hole on the slide glass and react with the specific antibody bound to the antigen on the slide glass. 5) Soak the slide glass in physiological saline in a beaker for washing. 6) Place the aqueous glycerin solution (mounting medium) on a slide glass, cover it with a cover glass, and observe with a fluorescence microscope.

【0008】このように、スライドグラスを用いた検査
の工程では、スライドグラス上への試料や抗イムノグロ
ブリン抗体の分注とビーカー中でのスライドグラスの洗
浄が繰り返されるので、自動化が行い難く、ほとんどの
工程が手作業で行われている。その結果、このような顕
微鏡を用いた臨床検査は、それ以外の臨床検査の多くが
自動化されてきた中でもっとも自動化の遅れた分野とな
っている。
[0008] As described above, in the inspection process using the slide glass, the dispensing of the sample or the anti-immunoglobulin antibody on the slide glass and the washing of the slide glass in the beaker are repeated, which makes automation difficult. Most of the process is done manually. As a result, clinical examination using such a microscope has become the least automated field in which most other clinical examinations have been automated.

【0009】このような現状に対し、本発明者らは、既
にスライドグラス上に着脱可能な通孔を有する上方部材
を装着することにより、上記で述べたように困難であっ
た自動化を可能とする装置を発明し、特許出願した(特
願平6−247750号)。
In response to such a situation, the present inventors have already made it possible to perform automation, which was difficult as described above, by mounting an upper member having a detachable through hole on the slide glass. He invented a device to do so and applied for a patent (Japanese Patent Application No. 6-247750).

【0010】[0010]

【発明が解決しようとする課題】上記の様な自動洗浄機
構を細胞の固定されたスライドグラスに適用した場合、
これまで手作業による洗浄に使用されてきた洗浄用水溶
液を使用したのでは、いくつかの不都合が存在すること
が知見された。
When the automatic washing mechanism as described above is applied to a slide glass on which cells are fixed,
It has been found that there are some inconveniences when using an aqueous cleaning solution that has been used for manual cleaning.

【0011】従来の手洗浄では、洗浄液として、生理的
食塩水(通常0.8〜0.9%程度のNaCl水溶液)
または、これにリン酸等の緩衝液を加えpHを中性付近
としたもの(例えば、「PBS」と呼ばれるもの)など
が使用されている。これを、ビーカー等の洗浄槽に満た
し、洗浄用のかごに入れたスライドグラスを浸漬した
後、かごごとスライドグラスを取り出す。この作業を繰
り返す事により、スライドグラスの洗浄を行う。
In conventional hand washing, physiological saline (usually about 0.8 to 0.9% NaCl aqueous solution) is used as the washing liquid.
Alternatively, a buffer solution such as phosphoric acid is added to this to adjust the pH to near neutral (for example, a so-called “PBS”) or the like is used. This is filled in a cleaning tank such as a beaker, the slide glass placed in a basket for cleaning is immersed, and then the basket and the slide glass are taken out. The slide glass is washed by repeating this operation.

【0012】一方、自動洗浄機を用いた洗浄では洗浄液
をノズルから注入した後、吸引用ノズルから吸引するこ
とを繰りかえす。この吸引の過程は、減圧ポンプなどの
吸引力によって洗浄液を取り去るので、洗浄液を十分に
除去するにはある程度強い吸引力が必要となり、洗浄液
が無くなった後は洗浄部分に気流を起こすことになり洗
浄面の乾燥を起こしやすい。間接蛍光抗体法や間接酵素
抗体法では、スライドグラス上には、動物や微生物の細
胞が抗原として固定されており、これらの固定化抗原は
このようなタイプの乾燥に極めて弱い性質を有する。そ
の為、従来の洗浄液を用いて、自動洗浄機による洗浄を
行うと、固定化された抗原(細胞)の乾燥に伴う変形、
損傷やスライドグラスからの脱離が観察される。そこで
自動洗浄機により、スライドグラスの洗浄を行うには、
洗浄中にスライドグラスの乾燥を防ぐ手だてが必要であ
ることが判明したのである。
On the other hand, in the cleaning using the automatic cleaning machine, after the cleaning liquid is injected from the nozzle, it is repeatedly sucked from the suction nozzle. In this suction process, the cleaning liquid is removed by the suction force of the decompression pump, etc., so a certain level of strong suction force is required to sufficiently remove the cleaning liquid, and after the cleaning liquid is exhausted, an air flow will be generated in the cleaning area. It is easy to cause the surface to dry. In the indirect fluorescent antibody method and the indirect enzyme antibody method, cells of animals and microorganisms are immobilized as an antigen on a slide glass, and these immobilized antigens have extremely weak properties against such type of drying. Therefore, when washing with an automatic washing machine using a conventional washing solution, deformation due to drying of the immobilized antigen (cell),
Damage and detachment from glass slides are observed. Therefore, in order to wash slide glasses with an automatic washing machine,
It turned out that it was necessary to have a mechanism to prevent the slide glass from drying during cleaning.

【0013】また、このような検査に用いられるスライ
ドグラスは、通常前記したようにスライドグラス上の検
査用穴以外の部分はテフロンなどで撥水コーティングさ
れている。この撥水コーティングにより、サンプルや試
薬が検査用穴間で混合してしまうことを防いでいるの
で、このコーティングの撥水性は検査の上で極めて重要
である。従来の洗浄法では、スライドグラスごと洗浄槽
に浸漬するため、洗浄液中に界面活性剤を添加するとこ
の撥水性が急速に失われ、洗浄以降の工程に支障を来す
ことになる。このため、従来の洗浄法用の洗浄液には界
面活性剤や高濃度のタンパク質などコーティングの撥水
性を低下させる物質を添加することは実質的に不可能で
あった。
Further, in the slide glass used for such an inspection, as described above, the portion other than the inspection hole on the slide glass is usually coated with water repellent material such as Teflon. The water-repellent coating prevents the sample and the reagent from mixing between the inspection holes, and therefore the water-repellent property of this coating is extremely important for the inspection. In the conventional cleaning method, since the whole slide glass is immersed in the cleaning tank, when a surfactant is added to the cleaning liquid, this water repellency is rapidly lost, which causes a trouble in the steps after cleaning. Therefore, it has been practically impossible to add substances such as surfactants and high-concentration proteins that reduce the water repellency of the coating to the cleaning liquid for the conventional cleaning method.

【0014】そこで本発明では、スライドグラス用の洗
浄液に改良を加え、上記したスライドグラスの自動洗浄
機構による効率的な洗浄を行うことを目的とした。さら
に、本発明に至る過程で、従来の洗浄液では手洗浄であ
っても、スライドグラス面の乾燥に由来する抗原細胞の
変形、脱落が知見され、これを防ぐことも本発明の課題
とし得るものである。
In view of the above, the present invention has an object to improve the cleaning solution for slide glasses and to perform efficient cleaning by the above-described automatic cleaning mechanism for slide glasses. Furthermore, in the process leading to the present invention, even with manual washing with a conventional washing solution, it was found that the antigen cells were deformed and dropped due to the drying of the surface of the slide glass, and prevention of this may also be an object of the present invention. Is.

【0015】[0015]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、蛍光抗体
法または接酵素抗体法等に用いる洗浄液に保湿剤を含有
させ、洗浄時に乾燥による固定化抗原の変形、損傷、脱
離を防ぐことにより、洗浄をより効率的に行うことがで
きることを見い出した。即ち、保湿剤を含む洗浄液をス
ライドグラスの洗浄面に注入し、吸引することを繰り返
す。このようにすると、吸引時に強い吸引力により空気
の流れができても洗浄面が乾燥を防ぐことができる。こ
のようにすれば、自動洗浄機を用いてもスライドグラス
の洗浄が可能となることを知見し、本発明を完成するに
至った。
[Means for Solving the Problems] The present inventors prevent the deformation, damage and detachment of the immobilized antigen due to drying during washing by including a moisturizer in the washing solution used in the fluorescent antibody method or the enzyme-linked immunosorbent antibody method. Therefore, it was found that the washing can be performed more efficiently. That is, the cleaning liquid containing the moisturizer is injected into the cleaning surface of the slide glass and suction is repeated. With this configuration, the cleaning surface can be prevented from being dried even when air flows through the strong suction force during suction. By doing so, it was found that the slide glass can be washed even by using the automatic washing machine, and the present invention has been completed.

【0016】すなわち本発明は、検出対象である抗体に
結合する抗原を含む細胞又は組織が固定化されたスライ
ドプレートと、標識物質で標識され、かつ、前記抗体に
結合する標識化抗体とを用い、前記抗原、標識化抗体及
び試料中の測定対象である抗体との反応により結合した
標識をスライドプレート上で顕微鏡を用いて検出するこ
とによって前記抗体を検出するに際し、あるいは、検出
対象である抗原を含む細胞又は組織が固定化されたスラ
イドプレートと、標識物質で標識され、かつ、前記抗原
に結合する標識化抗体、又は前記抗原に結合する抗体並
びに標識物質で標識され、かつ、前記抗体に結合する標
識化抗体とを用い、前記抗体及び/又は標識化抗体と前
記抗原との反応により結合した標識をスライドプレート
上で顕微鏡を用いて検出することによって前記抗原を検
出するに際し、未反応の抗体及び/又は標識化抗体をス
ライドプレートから除去するために用いる洗浄液であっ
て、保湿剤を含有することを特徴とするスライドプレー
ト洗浄液である。
That is, the present invention uses a slide plate on which cells or tissues containing an antigen that binds to an antibody to be detected are immobilized, and a labeled antibody that is labeled with a labeling substance and that binds to the antibody. When detecting the antibody by detecting the antigen, the labeled antibody and the label bound by the reaction with the antibody to be measured in the sample using a microscope on a slide plate, or the antigen to be detected A slide plate on which cells or tissues containing are immobilized, labeled with a labeling substance, and labeled with an antibody that binds to the antigen, or an antibody that binds to the antigen and a labeling substance, and A labeled antibody that binds is used, and the label bound by the reaction of the antibody and / or the labeled antibody with the antigen is used on a slide plate using a microscope. A wash solution for removing unreacted antibody and / or labeled antibody from a slide plate when detecting the antigen by detecting, and a slide plate wash solution containing a moisturizer. .

【0017】本発明はまた、顕微鏡を用いた抗体法によ
り、抗原を含む細胞又は組織を検出するためのキットで
あって、前記細胞又は組織を固定化するためのスライド
プレートと、前記の洗浄液とを含むキット、及び顕微鏡
を用いた抗体法により、抗体を検出するためのキットで
あって、前記抗体に結合する抗原を含む細胞又は組織が
固定化されたスライドプレートと、前記の洗浄液とを含
むキットを提供する。
The present invention is also a kit for detecting cells or tissues containing an antigen by an antibody method using a microscope, which comprises a slide plate for immobilizing the cells or tissues and the washing solution. A kit for detecting an antibody by an antibody method using a microscope, comprising a slide plate on which cells or tissues containing an antigen that binds to the antibody are immobilized, and the above washing solution. Provide a kit.

【0018】以下、本発明を詳細に説明する。まず、本
発明の洗浄液について説明する。本発明の洗浄液に添加
するに適する保湿剤としては、グリセリン、エチレング
リコール、プロピレングリコール、ジエチレングリコー
ル、ポリエチレングリコールなどのポリアルコール類;
ブドウ糖、ショ糖、乳糖、ガラクトース、マルトース、
ソルビトール、トレハロースなどの糖類または糖アルコ
ール類;血清アルブミン、血清グロブリン、ゼラチン、
ゼラチン加水分解物、カゼイン、カゼイン加水分解物、
オバルブミン、などのタンパク質またはタンパク質の加
水分解物;Tween20、Tween40、Tween80、Triton X-10
0、脂肪酸糖エステル、脂肪酸アミノ酸エステルなどの
界面活性剤;デキストラン、フィコール(ファルマシア
社)、ポリエチレンイミン、ポリビニルピロリドンなど
の水溶性ポリマーなどが挙げられる。
Hereinafter, the present invention will be described in detail. First, the cleaning liquid of the present invention will be described. Suitable moisturizers to be added to the cleaning liquid of the present invention include polyalcohols such as glycerin, ethylene glycol, propylene glycol, diethylene glycol and polyethylene glycol;
Glucose, sucrose, lactose, galactose, maltose,
Sugars or sugar alcohols such as sorbitol, trehalose; serum albumin, serum globulin, gelatin,
Gelatin hydrolyzate, casein, casein hydrolyzate,
Proteins or protein hydrolysates such as ovalbumin; Tween20, Tween40, Tween80, Triton X-10
0, surfactants such as fatty acid sugar ester and fatty acid amino acid ester; water-soluble polymers such as dextran, Ficoll (Pharmacia), polyethyleneimine, polyvinylpyrrolidone and the like.

【0019】本発明の洗浄液は、上記のような保湿剤を
含むことを特徴とするものであり、保湿剤以外の成分に
ついては、従来、蛍光抗体法または酵素抗体法等に用い
る洗浄液と特に変わるところはない。従来の洗浄液とし
ては、生理食塩水やこれに緩衝液成分を含んだものが用
いられているが、本発明の洗浄液も、これらを基本とす
ることができるが、これに限られるわけではない。具体
的には、1〜500mM、好ましくは5〜50mM程度
のリン酸緩衝液、pH4〜10、好ましくはpH6〜8
のような洗浄液を基本とすることができる。緩衝液はリ
ン酸以外のもの、例えば、ホウ酸、グリシン、バルビタ
ール、トリスヒドロキシアミノメタン,HEPESなど
通常用いられるあらゆる緩衝液成分が利用可能である。
また、洗浄液に適度の浸透圧を与えるもの、例えば、
0.01〜2.5%、好ましくは0.8〜0.9%のN
aCl等を含んでいてもよい。
The cleaning liquid of the present invention is characterized by containing the above moisturizing agent, and the components other than the moisturizing agent are particularly different from those conventionally used in the fluorescent antibody method or the enzyme antibody method. There is no place. As a conventional cleaning solution, physiological saline or a solution containing a buffer solution component is used. The cleaning solution of the present invention can be based on these, but is not limited thereto. Specifically, 1 to 500 mM, preferably about 5 to 50 mM phosphate buffer, pH 4 to 10, preferably pH 6 to 8.
A cleaning solution such as As the buffer solution, other than phosphoric acid, for example, boric acid, glycine, barbital, trishydroxyaminomethane, HEPES, or any other commonly used buffer solution component can be used.
Also, those that give the cleaning solution an appropriate osmotic pressure, for example,
0.01-2.5%, preferably 0.8-0.9% N
It may contain aCl or the like.

【0020】洗浄液に添加する保湿剤の量としては、ポ
リアルコール類、例えばグリセリンでは好ましくは0.
1〜10重量%、より好ましくは1〜5重量%であり、
タンパク質、例えばウシ血清アルブミン、ゼラチン加水
分解物、カゼイン加水分解物では好ましくは0.01〜
10重量%、より好ましくは、0.1〜1重量%であ
り、界面活性剤、例えばTween20, Triton X-100では、
好ましくは0.001〜0.5重量%、より好ましく
は、0.01〜0.1重量%であり、水溶性ポリマー、
例えばデキストランでは好ましくは0.01〜10重量
%、より好ましくは0.1〜5重量%である。
The amount of the moisturizing agent added to the cleaning liquid is preferably 0.1% for polyalcohols such as glycerin.
1 to 10% by weight, more preferably 1 to 5% by weight,
For proteins such as bovine serum albumin, gelatin hydrolysates, casein hydrolysates, preferably 0.01-
10% by weight, more preferably 0.1 to 1% by weight, in the case of a surfactant such as Tween20, Triton X-100,
Preferably 0.001 to 0.5% by weight, more preferably 0.01 to 0.1% by weight, a water-soluble polymer,
For example, dextran is preferably 0.01 to 10% by weight, more preferably 0.1 to 5% by weight.

【0021】界面活性剤は、保湿効果だけでなく洗浄効
果も大きい。しかし、前述したように従来の洗浄法で
は、テフロンなどで撥水コーティングしたスライドグラ
スには実質的には適用が困難なものであった。しかしな
がら、本発明者が開発したスライドプレートへの洗浄液
の注入及び吸引を自動的に行う自動洗浄機を用いた自動
洗浄法に適用する場合には、洗浄液の中に界面活性剤を
添加することができ、尚かつ洗浄効率を向上させること
ができるので極めて有用である。
The surfactant has not only a moisturizing effect but also a cleaning effect. However, as described above, it has been practically difficult to apply the conventional cleaning method to the slide glass coated with water repellent material such as Teflon. However, when the invention is applied to an automatic washing method using an automatic washing machine that automatically injects and sucks the washing solution into the slide plate, it is necessary to add a surfactant to the washing solution. This is extremely useful because it can be performed and the cleaning efficiency can be improved.

【0022】本発明において、保湿剤は、単独で用いて
もよく、2種以上の混合物として用いてもよい。例え
ば、グリセリンとTween20(界面活性剤)を組み合わせ
ると十分な保湿効果と洗浄効果を得ることができる。
In the present invention, the humectant may be used alone or as a mixture of two or more kinds. For example, when glycerin and Tween 20 (surfactant) are combined, a sufficient moisturizing effect and cleaning effect can be obtained.

【0023】また、間接蛍光抗体法、間接酵素抗体法で
は染色工程の終了後、グリセリンやポリエチレングリコ
ール水溶液を封入剤として極少量(例えば検査用穴あた
り約5μl)加えた後、カバーグラスを被せることが一
般に行われている。グリセリン、ポリエチレングリコー
ルなどのポリアルコール類を洗浄液に添加した場合、洗
浄後に洗浄液をスライドグラス等の支持体から完全に取
り去ってしまうのは実質的には不可能なので、その少量
の洗浄残液がそのまま封入剤の役割を果たすことにな
り、封入剤の分注の手間が省けるという副次的効果もあ
る。
In addition, in the indirect fluorescent antibody method and the indirect enzyme antibody method, after the dyeing step is completed, a very small amount of glycerin or polyethylene glycol aqueous solution is added as an encapsulating agent (for example, about 5 μl per inspection hole), and then a cover glass is covered. Is commonly practiced. When polyalcohols such as glycerin and polyethylene glycol are added to the cleaning solution, it is practically impossible to completely remove the cleaning solution from the support such as the slide glass after cleaning. It also serves as an encapsulant, which has the side effect of saving the labor of dispensing the encapsulant.

【0024】次に、本発明のキットについて説明する。
本発明の第1のキットは、顕微鏡を用いた抗体法によ
り、抗原を含む細胞又は組織を検出するためのキットで
あって、 前記細胞又は組織を固定化するためのスライドプレー
トと、 上記の洗浄液と、を含む。
Next, the kit of the present invention will be described.
A first kit of the present invention is a kit for detecting cells or tissues containing an antigen by an antibody method using a microscope, comprising a slide plate for immobilizing the cells or tissues, and the above washing solution. And, including.

【0025】上記キットは、直接蛍光抗体法、直接酵素
抗体法等の直接法により抗原を含む細胞又は組織を検出
するのに用いられる。本発明のキットは、1種類の抗体
(標識化抗体)を用いる方法に適用する場合には、標識
物質で標識され、かつ、前記抗原に結合する標識化抗体
(標識化抗体)を用いる。また、2種類の抗体(1次抗
体及び標識化2次抗体)を用いる二重抗体法に適用する
場合には、前記抗原に結合する抗体(1次抗体)、及び
標識物質で標識され、かつ、前記抗体に結合する標識化
抗体(標識化2次抗体)を用いる。これらの標識化抗
体、又は1次抗体及び標識化2次抗体は、キットとは別
に用意してもよく、またキットに含ませてもよい。
The above kit is used to detect cells or tissues containing an antigen by a direct method such as a direct fluorescent antibody method or a direct enzyme antibody method. When the kit of the present invention is applied to a method using one type of antibody (labeled antibody), a labeled antibody that is labeled with a labeling substance and that binds to the antigen (labeled antibody) is used. When applied to the double antibody method using two types of antibodies (primary antibody and labeled secondary antibody), the antibody that binds to the antigen (primary antibody) and a labeling substance, and A labeled antibody (labeled secondary antibody) that binds to the antibody is used. These labeled antibody, or primary antibody and labeled secondary antibody may be prepared separately from the kit, or may be included in the kit.

【0026】1種類の抗体を用いる方法では、検体であ
る細胞又は組織をスライドプレートに固定化し、これに
標識化抗体を加えてスライドプレート上の細胞又は組織
に含まれる抗原に標識化抗体を結合させ、抗原に未結合
の標識化抗体を洗浄液を用いて洗浄することによって除
去した後、標識を検出する。また、二重抗体法では、検
体である細胞又は組織を固定化したスライドプレートに
1次抗体を加えて抗原に抗体を結合させ、抗原に未結合
の標識化抗体を洗浄液を用いて洗浄することによって除
去し、次いで標識化2次抗体を加えて1次抗体に標識化
2次抗体を結合させ、1次抗体に未結合の標識化2次抗
体を洗浄して除去した後、標識を検出する。
In the method using one kind of antibody, cells or tissues as a sample are immobilized on a slide plate, a labeled antibody is added thereto, and the labeled antibody is bound to an antigen contained in the cells or tissues on the slide plate. Then, the labeled antibody not bound to the antigen is removed by washing with a washing solution, and then the label is detected. In the double antibody method, a primary antibody is added to a slide plate on which cells or tissues as a sample are immobilized to bind the antibody to the antigen, and the labeled antibody not bound to the antigen is washed with a washing solution. The labeled secondary antibody is added to the primary antibody, the labeled secondary antibody is bound to the primary antibody, and the labeled secondary antibody not bound to the primary antibody is washed and removed to detect the label. .

【0027】また、本発明の第2のキットは、顕微鏡を
用いた抗体法により、抗体を検出するためのキットであ
って、 ’前記抗体に結合する抗原を含む細胞又は組織を固定
化したスライドプレートと、 ’上記の洗浄液と、を含む。
The second kit of the present invention is a kit for detecting an antibody by an antibody method using a microscope, which comprises a slide on which cells or tissues containing an antigen that binds to the antibody are immobilized. Include a plate and 'the above washing solution.

【0028】上記キットは、間接蛍光抗体法、間接酵素
抗体法等の間接法により抗体を検出するのに用いられ
る。すなわち、抗原を含む細胞又は組織が固定化された
スライドプレートに検体を加えて検体中の抗体を抗原に
結合させ、抗原に未結合の抗体を洗浄液を用いて洗浄す
ることによって除去し、次いで標識物質で標識され、か
つ、前記抗体に結合する標識化抗体を加えて検出対象で
ある抗体に標識化抗体を結合させ、未結合の標識化2次
抗体を洗浄して除去した後、標識を検出する。標識化抗
体は、キットとは別に用意してもよく、またキットに含
ませてもよい。
The above kit is used to detect an antibody by an indirect method such as an indirect fluorescent antibody method or an indirect enzyme antibody method. That is, a sample is added to a slide plate on which cells or tissues containing an antigen are immobilized to allow the antibody in the sample to bind to the antigen, and the antibody not bound to the antigen is removed by washing with a washing solution, and then labeled. A labeled antibody that is labeled with a substance and that binds to the antibody is added to bind the labeled antibody to the antibody to be detected, and the unbound labeled secondary antibody is washed and removed, and then the label is detected. To do. The labeled antibody may be prepared separately from the kit or may be included in the kit.

【0029】本発明の洗浄液及びキットは、洗浄液とし
て保湿剤を含む以外は、通常の蛍光抗体法や酵素抗体法
に用いられる洗浄液やキットと特に変わるところはな
く、通常使用されている成分や要素を適用することがで
きる。例えば、上記の要素以外に、検体稀釈用の緩衝
液、酵素抗体法に用いる場合は酵素に対する発色基質な
どを含んでもよい。また、細胞又は組織をスライドプレ
ートに固定するには、通常行われている方法を採用する
ことができる。
The washing solution and kit of the present invention are the same as the washing solution and kit used in the usual fluorescent antibody method and enzyme antibody method except that they contain a moisturizer as the washing solution, and the components and elements that are usually used are used. Can be applied. For example, in addition to the above-mentioned elements, a buffer solution for diluting a sample, a color-developing substrate for an enzyme when used in the enzyme-antibody method may be contained. Further, a commonly used method can be adopted to fix the cells or tissues to the slide plate.

【0030】尚、キットの構成要素の一部だけを別途販
売されることもあるが、実質的な検査にはこれらが組み
合わせて使用される。スライドプレートとしては、スラ
イドグラス、ガラス以外の相当品、例えばポリスチレン
などのプラスチックプレートなどが挙げられる。スライ
ドグラスとしては、複数の検査用穴を有し、それ以外の
部分はテフロンなどでコーティングされているものが好
適に用いられるが、このような構造は必ずしも必要では
ない。
Although some of the components of the kit may be sold separately, they are used in combination for substantial inspection. Examples of the slide plate include a slide glass and an equivalent product other than glass, for example, a plastic plate such as polystyrene. As the slide glass, a slide glass having a plurality of inspection holes and other portions coated with Teflon is preferably used, but such a structure is not always necessary.

【0031】被検物質としては、抗原を含む細胞もしく
は組織又は抗体、例えば、ガン細胞、ウィルス感染細胞
等の細胞、抗核抗体、抗DNA抗体(クリシディア
法)、抗胃壁細胞抗体、抗平滑筋抗体、抗ミトコンドリ
ア抗体、抗好中球細胞質抗体、抗EBウィルス抗体、風
疹ウィルス抗体、ヘルペスウィルス抗体(又は抗原)、
サイトメガロウィルス抗体、クラミジア トラコマティ
ス抗体(又は抗原)、クラミジア シッタシ抗体(又は
抗原)、エンドトキシン、トキソプラズマ抗体、FTA
−ABSが挙げられる。
As the test substance, cells or tissues containing antigens or antibodies, for example, cells such as cancer cells and virus-infected cells, antinuclear antibodies, anti-DNA antibodies (Crysidia method), anti-gastric parietal cell antibodies, anti-smooth muscles Antibody, anti-mitochondrial antibody, anti-neutrophil cytoplasmic antibody, anti-EB virus antibody, rubella virus antibody, herpes virus antibody (or antigen),
Cytomegalovirus antibody, Chlamydia trachomatis antibody (or antigen), Chlamydia sittasis antibody (or antigen), endotoxin, toxoplasma antibody, FTA
-ABS.

【0032】被検物質が細胞又は組織である場合には、
通常、細胞又は組織は患者等から採取したものであり、
被検物質が抗体である場合には、細胞又は組織は、検出
しようとする抗体が結合する抗原を含む細胞をヒトや他
の動物から採取したものであってもよく、前記抗原を含
む培養細胞やウィルス感染細胞等であってもよい。例え
ば、抗胃壁細胞抗体の検出には、ヒト胃壁から採取した
組織などを用いることができ、ヘルペスウィルス抗体の
検出には、ヘルペスウィルスを感染させた培養細胞など
を用いることができる。
When the test substance is a cell or tissue,
Usually, cells or tissues are collected from patients,
When the test substance is an antibody, the cell or tissue may be a cell containing an antigen to which the antibody to be detected binds, taken from a human or other animal, and a cultured cell containing the antigen. Or virus-infected cells or the like. For example, a tissue collected from the human stomach wall can be used for detecting the anti-gastric parietal cell antibody, and a cultured cell infected with a herpes virus can be used for detecting the herpesvirus antibody.

【0033】第1のキットにおける標識化抗体又は1次
抗体は、被検物質である抗原に特異的に結合する抗体で
あり、モノクローナル抗体であってもポリクローナル抗
体であってもよい。また、第1のキットにおける標識化
2次抗体及び第2のキットにおける標識化抗体は、1次
抗体または被検物質である抗体が由来する動物のイムノ
グロブリンに結合する抗体であって、他の動物(例えば
ヤギ、ウサギ、マウス、ラットなど普通に用いられる動
物)で調製されたものを使用することができる。
The labeled antibody or primary antibody in the first kit is an antibody that specifically binds to an antigen as a test substance, and may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody. The labeled secondary antibody in the first kit and the labeled antibody in the second kit are antibodies that bind to the immunoglobulin of the animal from which the primary antibody or the antibody that is the test substance is derived, and Those prepared in animals (for example, commonly used animals such as goats, rabbits, mice and rats) can be used.

【0034】標識物質としては、通常の免疫測定法に用
いられる標識物質を用いることができる。そのような標
識物質としては、発色反応を触媒する酵素、蛍光物質、
ラジオアイソトープ、ビオチン等が挙げられるが、顕微
鏡下での検出には、酵素及び蛍光物質が好ましい。酵素
としては、ペルオキシダーゼ、アルカリ性フォスファタ
ーゼなどが、蛍光物質としては、FITC(フルオロセ
インイソチオシアネート)、ロ−ダミン、フィコエリス
リン、フィコシアニンなどが挙げられる。また、前記酵
素に対する基質としては、ジアミノベンチジンなどが使
用可能である。標識物質としてビオチンを用いた場合に
は、さらにアビジンを結合させた酵素や蛍光物質を結合
させることにより、検出を行うことができる。抗体をこ
れらの標識物質で標識するには、通常酵素抗体法に用い
られている方法を採用することができる。
As the labeling substance, a labeling substance used in a usual immunoassay can be used. Such labeling substances include enzymes that catalyze color development reactions, fluorescent substances,
Examples include radioisotopes and biotin, but for detection under a microscope, enzymes and fluorescent substances are preferable. Examples of the enzyme include peroxidase and alkaline phosphatase, and examples of the fluorescent substance include FITC (fluoroscein isothiocyanate), rhodamine, phycoerythrin, and phycocyanin. Further, diaminobenzidine and the like can be used as a substrate for the enzyme. When biotin is used as the labeling substance, detection can be carried out by further binding an avidin-bound enzyme or a fluorescent substance. To label the antibody with these labeling substances, a method usually used in the enzyme antibody method can be adopted.

【0035】標識の検出は、例えば標識物質が酵素であ
る場合には、支持体にその酵素に対する基質を加えて反
応させ、生じる発色によって行われる。また、標識物質
が蛍光物質である場合には、スライドプレートに励起光
を照射し、生じる蛍光を検出することによって、標識を
検出することができる。
When the labeling substance is an enzyme, the detection of the label is carried out by adding a substrate for the enzyme to the support and reacting the support to develop the resulting color. When the labeling substance is a fluorescent substance, the label can be detected by irradiating the slide plate with excitation light and detecting the generated fluorescence.

【0036】本発明の洗浄液又はキットを用いれば、洗
浄工程においてスライドプレートから洗浄液を除去して
も、乾燥による細胞や組織の変形、損傷やスライドプレ
ートからの脱離を防ぐことができる。
By using the washing solution or kit of the present invention, even if the washing solution is removed from the slide plate in the washing step, it is possible to prevent deformation of cells and tissues due to drying, damage and detachment from the slide plate.

【0037】[0037]

【発明の実施の形態】本発明の実施の形態を具体的に説
明する。 <1>洗浄液 はじめに、洗浄液の形態を例示する。 (1)グリセリンを含む洗浄液 10mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.5)、15
0mM NaCl 5%グリセリン
DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS Embodiments of the present invention will be specifically described. <1> Cleaning Liquid First, the form of the cleaning liquid will be illustrated. (1) Washing solution containing glycerin 10 mM sodium phosphate buffer (pH 7.5), 15
0 mM NaCl 5% glycerin

【0038】(2)界面活性剤(Tween20)を含
む洗浄液 10mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.5)、15
0mM NaCl 0.01% Tween20
(2) Washing liquid containing a surfactant (Tween 20) 10 mM sodium phosphate buffer (pH 7.5), 15
0 mM NaCl 0.01% Tween 20

【0039】(3)グリセリン及びTween20を含
む洗浄液 10mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.5)、15
0mM NaCl 5%グリセリン 0.01% Tween20
(3) Washing solution containing glycerin and Tween 20 10 mM sodium phosphate buffer (pH 7.5), 15
0 mM NaCl 5% glycerin 0.01% Tween20

【0040】(4)ウシ血清アルブミンを含む洗浄液 10mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.5)、15
0mM NaCl 0.5% ウシ血清アルブミン
(4) Washing solution containing bovine serum albumin 10 mM sodium phosphate buffer (pH 7.5), 15
0 mM NaCl 0.5% bovine serum albumin

【0041】(5)水溶性ポリマー(デキストラン)を
含む洗浄液 10mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.5)、15
0mM NaCl 0.5% デキストラン
(5) Washing Solution Containing Water-Soluble Polymer (Dextran) 10 mM Sodium Phosphate Buffer (pH 7.5), 15
0 mM NaCl 0.5% dextran

【0042】<2>抗核抗体検出キット 次に、本発明のキットの形態として、抗核抗体検出用の
キットを例示する。下記要素よりキットを構成する。
<2> Antinuclear Antibody Detection Kit Next, as a form of the kit of the present invention, an antinuclear antibody detection kit will be exemplified. The kit consists of the following elements.

【0043】ガン細胞Hep2(核抗原を有する)が
固定されたスライドグラス(図1)(スライドグラス
は、複数の検査用穴を持ち、その部分はガラスが露出
し、その他の部分はテフロンなどで撥水コーティングさ
れており、ガン細胞Hep2は、前期検査用穴に固定さ
れている。) 洗浄液(10mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.
5)、150mM NaCl、5%グリセリン、0.0
1% Tween20) 生理食塩水 蛍光色素で標識されたウサギ抗ヒトイムノグロブリン
抗体溶液
A slide glass (Fig. 1) on which cancer cells Hep2 (having a nuclear antigen) is fixed (the slide glass has a plurality of inspection holes, the glass is exposed at that portion, and the other portion is made of Teflon or the like. Water-repellent coating and cancer cells Hep2 are fixed in the test holes of the previous term.) Washing solution (10 mM sodium phosphate buffer (pH 7.
5), 150 mM NaCl, 5% glycerin, 0.0
1% Tween20) Saline solution Rabbit anti-human immunoglobulin antibody solution labeled with fluorescent dye

【0044】<3>本発明のキットを用いた抗核抗体の
検出例 (1)複数(2×8個)の検査用穴1を持ち、その部分
はガラスが露出しており、その他の部分はテフロンなど
で撥水コーティングされているスライドグラス2の検査
用穴に、ガン細胞Hep2が固定されているものを用意
する。細胞の固定は、例えば、細胞を接着させたスライ
ドグラスをアセトンで処理することによって行う。
<3> Example of detection of antinuclear antibody using the kit of the present invention (1) A plurality of (2 × 8) inspection holes 1 are provided, and glass is exposed at that portion, and other portions Prepares the cancer cells Hep2 fixed in the inspection holes of the slide glass 2 which is water-repellent coated with Teflon or the like. The cells are fixed, for example, by treating the slide glass to which the cells are adhered with acetone.

【0045】(2)スライドグラス6枚を並べて収容で
きる箱形の下方部材3に、下方部材3の内寸に略等しい
大きさの平板状のシール4を入れ、その上に上記のスラ
イドグラス2を乗せる。下方部材3の長辺内側には、ス
ライドグラスを固定するために突起5が設けられてい
る。さらにその上に、検査用穴2に対応した複数(12
×8個)の通孔6を持ち、下方部材3の内寸に略等しい
大きさの上方部材7を下方部材3に挿入し、スライドグ
ラス2に圧着させ、検査用筒を形成させる(図1)。
(2) A box-shaped lower member 3 capable of accommodating 6 slide glasses side by side is provided with a flat plate-shaped seal 4 having a size substantially equal to the inner size of the lower member 3, and the slide glasses 2 described above are placed thereon. Put on. A protrusion 5 is provided on the inside of the long side of the lower member 3 for fixing the slide glass. On top of that, a plurality of (12
An upper member 7 having (x8) through holes 6 and having a size substantially equal to the inner size of the lower member 3 is inserted into the lower member 3 and pressed onto the slide glass 2 to form an inspection cylinder (Fig. 1). ).

【0046】尚、下方部材、シール、及び上方部材は、
本発明のキットを用いた抗原や抗体の検出に必須ではな
いが、これらを用いることにより操作が簡便となる。特
に試薬の注入及び洗浄を自動化する上でこれらの部材は
有用である。
The lower member, the seal, and the upper member are
Although not essential for the detection of antigens and antibodies using the kit of the present invention, using them simplifies the operation. In particular, these members are useful for automating the injection and washing of reagents.

【0047】(3)患者血清を生理食塩水などで稀釈し
たものを、検査用筒に自動分注機で分注し血清中の特異
抗体(抗核抗体)とスライドグラス2上の抗原と反応さ
せる。 (4)洗浄液の注入、吸引を自動的に行う自動洗浄機を
用い、検査用筒への洗浄液の注入、吸引を2回以上繰り
返す。こうして、スライドグラス2上の抗原と反応しな
かった抗体(イムノグロブリン)を除去する。
(3) Patient serum diluted with physiological saline or the like is dispensed into an inspection cylinder by an automatic dispenser and reacted with the specific antibody (antinuclear antibody) in the serum and the antigen on the slide glass 2. Let (4) Using an automatic washing machine that automatically injects and aspirates the cleaning liquid, the injection and aspiration of the cleaning liquid into the inspection cylinder are repeated twice or more. Thus, the antibody (immunoglobulin) that has not reacted with the antigen on the slide glass 2 is removed.

【0048】(5)蛍光色素で標識されたウサギ抗ヒト
イムノグロブリン抗体を自動分注機で検査用穴に分注
し、スライドグラス2上の抗原に結合した特異抗体と反
応される。
(5) A rabbit anti-human immunoglobulin antibody labeled with a fluorescent dye is dispensed into the test hole by an automatic dispenser and reacted with the specific antibody bound to the antigen on the slide glass 2.

【0049】(6)自動洗浄機を用い、検査用筒に洗浄
液の注入、吸引を2回以上繰り返す。こうして、スライ
ドグラス2上の抗核抗体と結合しなかった蛍光標識抗イ
ムノグロブリンを除去する。
(6) Using an automatic washing machine, injecting and aspirating the washing liquid into the inspection cylinder is repeated twice or more. In this way, the fluorescence-labeled anti-immunoglobulin not bound to the antinuclear antibody on the slide glass 2 is removed.

【0050】(7)スライドグラス2から上方部材7を
外し、グリセリン水溶液をスライドグラスに載せ、カバ
ーグラスを被せて蛍光顕微鏡で観察する。
(7) The upper member 7 is removed from the slide glass 2, the aqueous glycerin solution is placed on the slide glass, covered with a cover glass, and observed with a fluorescence microscope.

【0051】[0051]

【実施例】以下に、実施例を用いてさらに具体的に説明
する。この実施例は抗核抗体検査の間接蛍光抗体法に関
するものである。 <試薬の調製> (1)細胞固定スライドグラス ヒトガン細胞HEp2を培養し、HEp2細胞懸濁液
(MEM培地中)を作成した。この細胞懸濁液をスライ
ドグラス2上の検査用穴1に乗せ、細胞をスライドグラ
ス面に接着させ、アセトン処理することによって細胞を
スライドグラスに固定した。スライドグラス2は、検査
用穴1以外の部分は、テフロンなどをバインダーとする
印刷インキを使用して着色及び撥水処理し、被験サンプ
ルや試薬を分注した際に液が検査用穴からはみ出て他の
サンプルと混ざることを防止した。
EXAMPLES The present invention will be described more specifically below with reference to examples. This example relates to the indirect fluorescent antibody method of the antinuclear antibody test. <Preparation of Reagents> (1) Cell-fixed slide glass Human cancer cells HEp2 were cultured to prepare HEp2 cell suspension (in MEM medium). The cell suspension was placed in the inspection hole 1 on the slide glass 2, the cells were adhered to the surface of the slide glass, and treated with acetone to fix the cells on the slide glass. The slide glass 2 is colored and water-repellent using a printing ink with Teflon as a binder, except for the inspection hole 1, and when the test sample or reagent is dispensed, the liquid protrudes from the inspection hole. To prevent it from being mixed with other samples.

【0052】(2)標識化抗体液 ウサギ抗ヒトガンマグロブリン抗体をFITCで標識
し、ウシ血清アルブミンを1%含むリン酸緩衝生理食塩
水(PBS)にて稀釈した。
(2) Labeled antibody solution A rabbit anti-human gamma globulin antibody was labeled with FITC and diluted with phosphate buffered saline (PBS) containing 1% bovine serum albumin.

【0053】(3)洗浄液 10mMリン酸ナトリウム緩衝液(pH7.5)、15
0mM NaCl、5%グリセリン、0.01% Twe
en20となるように洗浄液を調製した。
(3) Washing solution 10 mM sodium phosphate buffer (pH 7.5), 15
0 mM NaCl, 5% glycerin, 0.01% Twe
A washing solution was prepared so as to be en20.

【0054】<抗核抗体の検出>膠原病患者などの血清
検体をPBSで20倍に稀釈した。次に、前記の細胞固
定スライドグラス2に、前記実施の形態の項<3>
(2)と同様の下方部材3、シール4及び上方部材7を
用い、下方部材3の上にシール4、スライドグラス2、
上方部材7を順に乗せ圧着させて検査用筒を形成させ
(図1)、この検査用筒に、稀釈検体を50μlづつ分
注し、30分間室温で放置した。
<Detection of antinuclear antibody> Serum samples from patients with collagen disease were diluted 20 times with PBS. Then, the cell-fixing slide glass 2 is added to the item <3> of the embodiment.
The same lower member 3, seal 4 and upper member 7 as in (2) are used, and the seal 4, slide glass 2,
The upper member 7 was placed in order and crimped to form a test tube (FIG. 1), and 50 μl of the diluted sample was dispensed into the test tube and left at room temperature for 30 minutes.

【0055】洗浄液の注入機構と吸引機構を持つ自動洗
浄機を用いて、検査用筒へ上記の洗浄液を注入した後、
検査用筒から洗浄液を吸引した。この操作を5回繰り返
した。1回の注入量は300μlとした。この時、対照
として上記の洗浄液から保湿剤成分(グリセリン及びT
ween20)を除いた洗浄液を使用した。
After injecting the above-mentioned cleaning liquid into the inspection cylinder using an automatic cleaning machine having a cleaning liquid injection mechanism and a suction mechanism,
The cleaning liquid was aspirated from the inspection cylinder. This operation was repeated five times. The volume of one injection was 300 μl. At this time, as a control, the moisturizer components (glycerin and T
The washing liquid except for the ween 20) was used.

【0056】洗浄後、標識化抗体液を検査用筒に50μ
lづつ分注し、30分間室温に放置した後、上記と同じ
洗浄操作を5回繰り返した。次に、上方部材7をスライ
ドグラス2から取り外し、スライドグラス2にカバーグ
ラスを被せた。尚、上記した洗浄液はグリセリンを含む
ので、洗浄残液があれば特に封入剤は必要ない。対照と
した保湿剤を含まない洗浄液を用いた場合は、1検査用
穴あたり 10μlの10%グリセリンを封入剤として
加えた。
After washing, the labeled antibody solution is placed in a test tube at 50 μm.
The solution was dispensed in increments of 1 and left at room temperature for 30 minutes, and then the same washing operation as above was repeated 5 times. Next, the upper member 7 was removed from the slide glass 2, and the slide glass 2 was covered with a cover glass. Since the above-mentioned cleaning liquid contains glycerin, if there is a residual cleaning liquid, no encapsulant is required. When a cleaning solution containing no moisturizing agent was used as a control, 10 μl of 10% glycerin was added as an encapsulating agent per test hole.

【0057】上記のようにして作製したスライドグラス
上の検体について、蛍光顕微鏡で蛍光を観察した。得ら
れた蛍光画像の模式図を図2及び図3に示す。この図に
示されるように、本発明の洗浄液を用いた場合は、損傷
のない細胞が観察され(図2)、従来の洗浄液を用いた
場合は細胞の損傷、脱離が観察された(図3)。
The specimen on the slide glass prepared as described above was observed for fluorescence with a fluorescence microscope. Schematic diagrams of the obtained fluorescence images are shown in FIGS. 2 and 3. As shown in this figure, when the washing solution of the present invention was used, undamaged cells were observed (FIG. 2), and when the conventional washing solution was used, cell damage and detachment were observed (FIG. 2). 3).

【0058】[0058]

【発明の効果】本発明による洗浄液を用いれば、蛍光抗
体法及び酵素抗体法等の抗体法におけるスライドグラス
の洗浄を効率的に行う事が出来る。
EFFECT OF THE INVENTION By using the cleaning solution of the present invention, the slide glass can be efficiently washed in the antibody method such as the fluorescent antibody method and the enzyme antibody method.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図1】 実施例の検査装置の構造を示す外観図(斜視
図)。
FIG. 1 is an external view (perspective view) showing a structure of an inspection apparatus according to an embodiment.

【図2】 本発明の洗浄液を用いて自動洗浄機で洗浄し
た場合の蛍光画像の概念図である。
FIG. 2 is a conceptual diagram of a fluorescence image when washed with an automatic washing machine using the washing liquid of the present invention.

【図3】 対照の洗浄液を用いて自動洗浄機で洗浄した
場合の蛍光画像の概念図である。
FIG. 3 is a conceptual diagram of a fluorescence image when washed with an automatic washing machine using a control washing solution.

【符号の説明】[Explanation of symbols]

1.検査用穴 2.スライドグラス 3.下方部材 4.シール 5.突起 6.通孔 7.上方部材 1. Inspection hole 2. Slide glass 3. Lower member 4. Seal 5. Protrusion 6. Through hole 7. Upper member

Claims (9)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】 検出対象である抗体に結合する抗原を含
む細胞又は組織が固定化されたスライドプレートと、標
識物質で標識され、かつ、前記抗体に結合する標識化抗
体とを用い、前記抗原、標識化抗体及び試料中の測定対
象である抗体との反応により結合した標識をスライドプ
レート上で顕微鏡を用いて検出することによって前記抗
体を検出するに際し、あるいは、 検出対象である抗原を含む細胞又は組織が固定化された
スライドプレートと、標識物質で標識され、かつ、前記
抗原に結合する標識化抗体、又は前記抗原に結合する抗
体並びに標識物質で標識され、かつ、前記抗体に結合す
る標識化抗体とを用い、前記抗体及び/又は標識化抗体
と前記抗原との反応により結合した標識をスライドプレ
ート上で顕微鏡を用いて検出することによって前記抗原
を検出するに際し、 未反応の抗体及び/又は標識化抗体をスライドプレート
から除去するために用いる洗浄液であって、保湿剤を含
有することを特徴とするスライドプレート洗浄液。
1. An antigen using a slide plate on which cells or tissues containing an antigen that binds to an antibody to be detected are immobilized, and a labeled antibody that is labeled with a labeling substance and that binds to the antibody. When detecting the antibody by detecting the labeled antibody and the label bound by the reaction with the antibody to be measured in the sample using a microscope on a slide plate, or cells containing the antigen to be detected. Or a slide plate on which a tissue is immobilized, and a labeled antibody that is labeled with a labeling substance and that binds to the antigen, or an antibody that binds to the antigen and a labeling substance, and a label that binds to the antibody And detecting the label bound by the reaction of the antibody and / or the labeled antibody with the antigen using a microscope on a slide plate using a microscope. Upon detecting the antigen I, a cleaning solution used to remove antibody and / or an unreacted labeled antibody from the slide plate, the slide plate cleaning solution, characterized in that it contains a humectant.
【請求項2】 前記保湿剤がポリアルコール類から選ば
れることを特徴とする請求項1記載の洗浄液。
2. The cleaning liquid according to claim 1, wherein the humectant is selected from polyalcohols.
【請求項3】 前記保湿剤が、グリセリン、エチレング
リコール、プロピレングリコール、ジエチレングリコー
ル、ポリエチレングリコールから選ばれることを特徴と
するる請求項2記載の洗浄液。
3. The cleaning liquid according to claim 2, wherein the humectant is selected from glycerin, ethylene glycol, propylene glycol, diethylene glycol and polyethylene glycol.
【請求項4】 前記保湿剤が、洗浄液全量に対して0.
01重量%以上のタンパク質であることを特徴とする請
求項1記載の洗浄液。
4. The moisturizing agent is used in an amount of 0.
The cleaning solution according to claim 1, which comprises 01% by weight or more of protein.
【請求項5】 前記洗浄液が、洗浄液全量に対して0.
001重量%以上の界面活性剤を含有することを特徴と
する請求項1〜4のいずれか一項に記載の洗浄液。
5. The cleaning solution contains 0.
The cleaning liquid according to any one of claims 1 to 4, which contains 001% by weight or more of a surfactant.
【請求項6】 標識物質が酵素又は蛍光物質である請求
項1〜5のいずれか一項に記載の洗浄液。
6. The cleaning liquid according to any one of claims 1 to 5, wherein the labeling substance is an enzyme or a fluorescent substance.
【請求項7】 洗浄が、スライドプレートへの洗浄液の
注入及び吸引を自動的に行う自動洗浄機で行われること
を特徴とする請求項1〜6のいずれか一項に記載の洗浄
液。
7. The cleaning liquid according to claim 1, wherein the cleaning is performed by an automatic cleaning machine that automatically injects and sucks the cleaning liquid into and from the slide plate.
【請求項8】 顕微鏡を用いた抗体法により、抗原を含
む細胞又は組織を検出するためのキットであって、前記
細胞又は組織を固定化するためのスライドプレートと、
請求項1〜7のいずれか一項に記載の洗浄液とを含むキ
ット。
8. A kit for detecting cells or tissues containing an antigen by an antibody method using a microscope, comprising a slide plate for immobilizing the cells or tissues,
A kit comprising the cleaning solution according to claim 1.
【請求項9】 顕微鏡を用いた抗体法により、抗体を検
出するためのキットであって、前記抗体に結合する抗原
を含む細胞又は組織が固定化されたスライドプレート
と、請求項1〜7のいずれか一項に記載の洗浄液とを含
むキット。
9. A kit for detecting an antibody by an antibody method using a microscope, comprising: a slide plate on which cells or tissues containing an antigen that binds to the antibody are immobilized; A kit containing the washing solution according to any one of claims.
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