JPH09145673A - 還元剤を含む試料の電気泳動方法 - Google Patents
還元剤を含む試料の電気泳動方法Info
- Publication number
- JPH09145673A JPH09145673A JP7308340A JP30834095A JPH09145673A JP H09145673 A JPH09145673 A JP H09145673A JP 7308340 A JP7308340 A JP 7308340A JP 30834095 A JP30834095 A JP 30834095A JP H09145673 A JPH09145673 A JP H09145673A
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- Japan
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- electrophoresis
- dtt
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】ジチオスレイトール（ＤＴＴ）を含む試料
溶液を電気泳動するに際し、ジメチルスルホキシド（Ｄ
ＭＳＯ）の存在下に電気泳動を行うことを特徴とする電
気泳動方法。 【効果】本発明により、ＤＴＴを含む電気泳動用試料に
ついて電気泳動を行った場合に認められる電気泳動像の
乱れを是正し、核酸の分離の低下を改善することができ
る。
溶液を電気泳動するに際し、ジメチルスルホキシド（Ｄ
ＭＳＯ）の存在下に電気泳動を行うことを特徴とする電
気泳動方法。 【効果】本発明により、ＤＴＴを含む電気泳動用試料に
ついて電気泳動を行った場合に認められる電気泳動像の
乱れを是正し、核酸の分離の低下を改善することができ
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、電気泳動を利用す
る分野に関する。さらに詳しくは、電気泳動用の試料の
調製時にジチオスレイトール（ＤＴＴ）を使用する場合
に生ずる電気泳動の歪みを是正する方法に関する。
る分野に関する。さらに詳しくは、電気泳動用の試料の
調製時にジチオスレイトール（ＤＴＴ）を使用する場合
に生ずる電気泳動の歪みを是正する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、ＤＴＴは、その還元剤としての性
質およびチオール基酸化防止剤としての性質を利用して
各種反応に使用される。しかし、この反応生成物が分離
精製されずにそのまま電気泳動等の分析手段に付される
と、ＤＴＴまたはＤＴＴ由来の物質の存在により、電気
泳動の分離が悪くなったり、電気泳動像を歪ませたりす
る場合がある。
質およびチオール基酸化防止剤としての性質を利用して
各種反応に使用される。しかし、この反応生成物が分離
精製されずにそのまま電気泳動等の分析手段に付される
と、ＤＴＴまたはＤＴＴ由来の物質の存在により、電気
泳動の分離が悪くなったり、電気泳動像を歪ませたりす
る場合がある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】そこで本発明の目的
は、電気泳動用の試料がその調製時にＤＴＴを使用する
ものである場合に生ずる電気泳動の歪みを是正する方法
を提供することにある。
は、電気泳動用の試料がその調製時にＤＴＴを使用する
ものである場合に生ずる電気泳動の歪みを是正する方法
を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の状
況に鑑み、電気泳動用の試料がその調製時にＤＴＴを使
用したものの場合に見られる電気泳動の歪みを是正し得
る化合物を探索した結果、意外なことに電気泳動の際に
電気泳動用試料にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を
存在せしめると、上記の歪みが是正され、分離能が大き
く改善されること見出した。本発明はかかる知見に基づ
きさらに研究を進めて完成するに至ったものである。
況に鑑み、電気泳動用の試料がその調製時にＤＴＴを使
用したものの場合に見られる電気泳動の歪みを是正し得
る化合物を探索した結果、意外なことに電気泳動の際に
電気泳動用試料にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を
存在せしめると、上記の歪みが是正され、分離能が大き
く改善されること見出した。本発明はかかる知見に基づ
きさらに研究を進めて完成するに至ったものである。
【０００５】即ち、本発明の要旨は（１） ジチオスレ
イトール（ＤＴＴ）を含む試料溶液を電気泳動するに際
し、該試料溶液に好ましくは２〜２０容量％のジメチル
スルホキシド（ＤＭＳＯ）を添加することを特徴とする
電気泳動方法、並びに（２） 電気泳動で分析される試
料の調製をＤＴＴの存在下に反応させて行う電気泳動用
試料の調製法において、該泳動試料溶液中における濃度
が好ましくは２〜２０容量％になるように該反応時にＤ
ＭＳＯを添加することを特徴とする電気泳動用試料の調
製法、に関する。
イトール（ＤＴＴ）を含む試料溶液を電気泳動するに際
し、該試料溶液に好ましくは２〜２０容量％のジメチル
スルホキシド（ＤＭＳＯ）を添加することを特徴とする
電気泳動方法、並びに（２） 電気泳動で分析される試
料の調製をＤＴＴの存在下に反応させて行う電気泳動用
試料の調製法において、該泳動試料溶液中における濃度
が好ましくは２〜２０容量％になるように該反応時にＤ
ＭＳＯを添加することを特徴とする電気泳動用試料の調
製法、に関する。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下に本発明を詳細に説明する。
本発明に用いられる電気泳動用の試料としては、その試
料の調製時に、ＤＴＴを使用したものであれば、特に限
定されない。ＤＴＴは、還元剤としての性質やチオール
基の酸化防止剤としての性質を有する為、各種の反応に
使用される。従って、電気泳動用の試料の多くにＤＴＴ
が含まれていることが多い。このような試料はすべて、
本発明に用いることができる。ＤＴＴを含む試料に見ら
れる電気泳動の歪みは、ＤＴＴの濃度に依存し、濃度が
高い程歪みは大きくなる。３ｍＭ程度のＤＴＴが存在す
れば電気泳動像は乱れ、この度合いは、ＤＴＴの濃度の
増加と共に大きくなる。本発明におけるＤＭＳＯの添加
量は、電気泳動用の試料中のＤＴＴの濃度が３〜６ｍＭ
程度であれば、該試料中において２〜１０容量％でよ
い。ＤＴＴの濃度が高くなれば、ＤＭＳＯの添加量も増
加させた方が電気泳動像の乱れの是正効果は大きくな
る。
本発明に用いられる電気泳動用の試料としては、その試
料の調製時に、ＤＴＴを使用したものであれば、特に限
定されない。ＤＴＴは、還元剤としての性質やチオール
基の酸化防止剤としての性質を有する為、各種の反応に
使用される。従って、電気泳動用の試料の多くにＤＴＴ
が含まれていることが多い。このような試料はすべて、
本発明に用いることができる。ＤＴＴを含む試料に見ら
れる電気泳動の歪みは、ＤＴＴの濃度に依存し、濃度が
高い程歪みは大きくなる。３ｍＭ程度のＤＴＴが存在す
れば電気泳動像は乱れ、この度合いは、ＤＴＴの濃度の
増加と共に大きくなる。本発明におけるＤＭＳＯの添加
量は、電気泳動用の試料中のＤＴＴの濃度が３〜６ｍＭ
程度であれば、該試料中において２〜１０容量％でよ
い。ＤＴＴの濃度が高くなれば、ＤＭＳＯの添加量も増
加させた方が電気泳動像の乱れの是正効果は大きくな
る。
【０００７】また、本発明の方法は、電気泳動用の試料
を調製する際に、ＤＴＴを使用する反応において予めＤ
ＭＳＯを反応溶液に添加しておくことにより実施するこ
とができる。この場合、ＤＴＴの濃度が３〜６ｍＭ程度
であれば、ＤＭＳＯの添加量は、反応溶液中で２〜１０
容量％である。ただし、ＤＭＳＯの添加によりこの反応
が阻害される場合は、この方法を採用せず、前記のよう
に、電気泳動を行う前に電気泳動用試料にＤＭＳＯを添
加する方法を用いる。本発明に用いるＤＭＳＯは市販品
（例えば、ＳＩＧＭＡ社製）をそのまま使用することが
できる。
を調製する際に、ＤＴＴを使用する反応において予めＤ
ＭＳＯを反応溶液に添加しておくことにより実施するこ
とができる。この場合、ＤＴＴの濃度が３〜６ｍＭ程度
であれば、ＤＭＳＯの添加量は、反応溶液中で２〜１０
容量％である。ただし、ＤＭＳＯの添加によりこの反応
が阻害される場合は、この方法を採用せず、前記のよう
に、電気泳動を行う前に電気泳動用試料にＤＭＳＯを添
加する方法を用いる。本発明に用いるＤＭＳＯは市販品
（例えば、ＳＩＧＭＡ社製）をそのまま使用することが
できる。
【０００８】本発明に用いられる電気泳動の条件は、特
に限定されない。ＤＴＴの存在下に実施しても電気泳動
像の乱れが生じない場合を除き、すべての条件が対象と
なる。特に分離能のよいポリアクリルアミドゲル電気泳
動やハイドロリンクゲル電気泳動の場合にＤＴＴによる
電気泳動像の乱れが大きく、本発明の方法の効果が大き
い。
に限定されない。ＤＴＴの存在下に実施しても電気泳動
像の乱れが生じない場合を除き、すべての条件が対象と
なる。特に分離能のよいポリアクリルアミドゲル電気泳
動やハイドロリンクゲル電気泳動の場合にＤＴＴによる
電気泳動像の乱れが大きく、本発明の方法の効果が大き
い。
【０００９】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳しく説
明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定さ
れるものではない。
明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定さ
れるものではない。
【００１０】実施例１ （１）核酸の塩基配列決定における本発明の利用 Ｔ７−ＤＮＡポリメラーゼを使用したサンガー式シーケ
ンス反応を行うため、下記の反応液Ａと反応液Ｂとを調
製した。 反応液Ａ：１Ｍ トリス−塩酸（ｐＨ７．５）、１００
ｍＭ ＭｇＣｌ2 反応液Ｂ：３００ｍＭ ＤＴＴ、４０ｍＭ ＭｎＣ
ｌ2 、３００ｍＭ クエン酸ナトリウム 反応液Ａを２．０μｌ、反応液Ｂを１．０μｌ、蛍光標
識プライマー、鋳型ＤＮＡ、Ｔ７−ＤＮＡポリメラーゼ
を加え、総量を２０μｌとして、この混合液から４．５
μｌずつを反応基質２．５μｌと混ぜ、サンガー式シー
ケンス反応を行った。反応終了後、反応を停止させるた
めに４．０μｌの反応停止液を加えた。得られた試料の
３．０μｌずつを蛍光ＤＮＡシーケンサー（ＤＳＱ−１
０００、島津社製）を用いて電気泳動を行った。得られ
た電気泳動像を図１に示す。図１から明らかなように、
２００〜２５０塩基の付近に電気泳動像の乱れが生じ、
核酸の分離の低下が観察された。この試料のＤＴＴ濃度
は約６ｍＭであった。
ンス反応を行うため、下記の反応液Ａと反応液Ｂとを調
製した。 反応液Ａ：１Ｍ トリス−塩酸（ｐＨ７．５）、１００
ｍＭ ＭｇＣｌ2 反応液Ｂ：３００ｍＭ ＤＴＴ、４０ｍＭ ＭｎＣ
ｌ2 、３００ｍＭ クエン酸ナトリウム 反応液Ａを２．０μｌ、反応液Ｂを１．０μｌ、蛍光標
識プライマー、鋳型ＤＮＡ、Ｔ７−ＤＮＡポリメラーゼ
を加え、総量を２０μｌとして、この混合液から４．５
μｌずつを反応基質２．５μｌと混ぜ、サンガー式シー
ケンス反応を行った。反応終了後、反応を停止させるた
めに４．０μｌの反応停止液を加えた。得られた試料の
３．０μｌずつを蛍光ＤＮＡシーケンサー（ＤＳＱ−１
０００、島津社製）を用いて電気泳動を行った。得られ
た電気泳動像を図１に示す。図１から明らかなように、
２００〜２５０塩基の付近に電気泳動像の乱れが生じ、
核酸の分離の低下が観察された。この試料のＤＴＴ濃度
は約６ｍＭであった。
【００１１】上記の反応混合液中に、３．０μｌのＤＭ
ＳＯを加えて、同様にサンガー式シーケンス反応を行
い、この試料を電気泳動に付したところ、図２に示す電
気泳動像が得られた。図２から明らかなように、２００
〜２５０塩基付近の核酸の泳動像の歪みが顕著に是正さ
れ、核酸の分離能が改善された。この試料のＤＴＴ濃度
は約６ｍＭ、ＤＭＳＯの濃度は約６容量％であった。
ＳＯを加えて、同様にサンガー式シーケンス反応を行
い、この試料を電気泳動に付したところ、図２に示す電
気泳動像が得られた。図２から明らかなように、２００
〜２５０塩基付近の核酸の泳動像の歪みが顕著に是正さ
れ、核酸の分離能が改善された。この試料のＤＴＴ濃度
は約６ｍＭ、ＤＭＳＯの濃度は約６容量％であった。
【００１２】実施例２ 実施例１の反応液Ａを２．０μｌ、反応液Ｂを１．０μ
ｌ、蛍光標識プライマー、鋳型ＤＮＡ、Ｔ７ＤＮＡポリ
メラーゼを加え総量２０．０μｌとし、この混合液から
４．５μｌずつを反応基質液２．５μｌと混ぜ、サンガ
ー式シーケンス反応を行った。反応終了後、反応停止液
４．０μｌを加えて反応を停止させた。この試料に、
０．７５μｌのＤＭＳＯを加えて攪拌した後、その３．
０μｌを蛍光ＤＮＡシーケンサー（ＤＳＱ−１０００、
島津社製）を用いて電気泳動を行った。その結果、図２
と同様の電気泳動像が得られ、ＤＭＳＯ無添加の場合に
観察される２００〜２５０塩基付近の泳動像の乱れは改
善され、核酸のこの領域での分離の低下が改善された。
ｌ、蛍光標識プライマー、鋳型ＤＮＡ、Ｔ７ＤＮＡポリ
メラーゼを加え総量２０．０μｌとし、この混合液から
４．５μｌずつを反応基質液２．５μｌと混ぜ、サンガ
ー式シーケンス反応を行った。反応終了後、反応停止液
４．０μｌを加えて反応を停止させた。この試料に、
０．７５μｌのＤＭＳＯを加えて攪拌した後、その３．
０μｌを蛍光ＤＮＡシーケンサー（ＤＳＱ−１０００、
島津社製）を用いて電気泳動を行った。その結果、図２
と同様の電気泳動像が得られ、ＤＭＳＯ無添加の場合に
観察される２００〜２５０塩基付近の泳動像の乱れは改
善され、核酸のこの領域での分離の低下が改善された。
【００１３】
【発明の効果】本発明により、ＤＴＴを含む電気泳動用
試料について電気泳動を行った場合に認められる電気泳
動像の乱れを是正し、核酸の分離の低下を改善すること
ができる。
試料について電気泳動を行った場合に認められる電気泳
動像の乱れを是正し、核酸の分離の低下を改善すること
ができる。
【図１】図１は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）の存在
下に行ったサンガー式シーケンス反応液の蛍光ＤＮＡシ
ーケンサー（ＤＳＱ−１０００、島津社製）によるハイ
ドロリンクゲル電気泳動の結果を示す図である。
下に行ったサンガー式シーケンス反応液の蛍光ＤＮＡシ
ーケンサー（ＤＳＱ−１０００、島津社製）によるハイ
ドロリンクゲル電気泳動の結果を示す図である。
【図２】図２は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）の存在
下に行ったサンガー式シーケンス反応液にＤＭＳＯを添
加した後、蛍光ＤＮＡシーケンサーによりハイドロリン
クゲル電気泳動を行った結果を示す図である。
下に行ったサンガー式シーケンス反応液にＤＭＳＯを添
加した後、蛍光ＤＮＡシーケンサーによりハイドロリン
クゲル電気泳動を行った結果を示す図である。
Claims (2)
- 【請求項１】 ジチオスレイトール（ＤＴＴ）を含む試
料溶液を電気泳動するに際し、該試料溶液にジメチルス
ルホキシド（ＤＭＳＯ）を添加することを特徴とする電
気泳動方法。 - 【請求項２】 電気泳動で分析される試料の調製をＤＴ
Ｔの存在下に反応させて行う電気泳動用試料の調製法に
おいて、該反応時にＤＭＳＯを添加することを特徴とす
る電気泳動用試料の調製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7308340A JPH09145673A (ja) | 1995-10-31 | 1995-10-31 | 還元剤を含む試料の電気泳動方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7308340A JPH09145673A (ja) | 1995-10-31 | 1995-10-31 | 還元剤を含む試料の電気泳動方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09145673A true JPH09145673A (ja) | 1997-06-06 |
Family
ID=17979887
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7308340A Pending JPH09145673A (ja) | 1995-10-31 | 1995-10-31 | 還元剤を含む試料の電気泳動方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09145673A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006034496A3 (en) * | 2004-09-23 | 2007-04-26 | Nanogen Inc | Methods and materials for optimization of electronic transportation and hybridization reactions |
-
1995
- 1995-10-31 JP JP7308340A patent/JPH09145673A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006034496A3 (en) * | 2004-09-23 | 2007-04-26 | Nanogen Inc | Methods and materials for optimization of electronic transportation and hybridization reactions |
| US7314542B2 (en) * | 2004-09-23 | 2008-01-01 | Nanogen, Inc. | Methods and materials for optimization of electronic transportation and hybridization reactions |
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