JPH09110716A - 抗癌剤 - Google Patents
抗癌剤Info
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- JPH09110716A JPH09110716A JP7300728A JP30072895A JPH09110716A JP H09110716 A JPH09110716 A JP H09110716A JP 7300728 A JP7300728 A JP 7300728A JP 30072895 A JP30072895 A JP 30072895A JP H09110716 A JPH09110716 A JP H09110716A
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- JP
- Japan
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- hgf
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- cells
- cancer
- anticancer agent
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1833—Hepatocyte growth factor; Scatter factor; Tumor cytotoxic factor II
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 新規な抗癌剤を提供することを目的とする。
【解決手段】 本発明の抗癌剤は特定の理化学的性質及
び生理活性を有する蛋白質（ＨＧＦα鎖）を有効成分と
する。本発明の抗癌剤の有効成分であるＨＧＦα鎖は、
細胞のｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦリセプターのアンタゴニスト
活性を有し、癌細胞の浸潤・転移を誘導するシグナルを
その上流で遮断する作用を有し、本発明の抗癌剤は全く
新しいタイプの抗癌剤である。
び生理活性を有する蛋白質（ＨＧＦα鎖）を有効成分と
する。本発明の抗癌剤の有効成分であるＨＧＦα鎖は、
細胞のｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦリセプターのアンタゴニスト
活性を有し、癌細胞の浸潤・転移を誘導するシグナルを
その上流で遮断する作用を有し、本発明の抗癌剤は全く
新しいタイプの抗癌剤である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は抗癌剤に関する。よ
り詳細には、ＨＧＦのα鎖を有効成分とし、そのｃ−Ｍ
ｅｔ／ＨＧＦレセプターアンタゴニスト活性に基づき、
制癌、特に癌浸潤・転移抑制を可能とする新しい抗癌剤
に関する。
り詳細には、ＨＧＦのα鎖を有効成分とし、そのｃ−Ｍ
ｅｔ／ＨＧＦレセプターアンタゴニスト活性に基づき、
制癌、特に癌浸潤・転移抑制を可能とする新しい抗癌剤
に関する。
【０００２】
【従来の技術】癌制圧は、言うまでもなく今日の医療に
おける最大の課題であり、また新規癌治療法あるいは新
抗癌剤は医療・医薬研究者の最大の関心事である。現在
のわが国の死因の第１位は癌であり、毎年多くの新しい
患者が発生している。化学療法に用いられる抗癌剤とし
て、従来のアルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質のほか
に、ピシバニール（商品名、中外製薬社製）やクレスチ
ン（商品名、三共製薬社製）を初めとする微生物由来の
生体反応修飾物質が全盛を極めた。従来のアルキル化剤
を初めとする化合物は本来、細胞毒性を利用するもので
あり、少なからぬ副作用のために使用がかなり限定され
たのに比べ、その後のピシバニールなどの生体反応修飾
物質は生体の免疫機能を高め、癌細胞を駆逐するという
作用を有する。しかし、その限界が明らかになると共
に、インターフェロンやインターロイキン−２やＴＮＦ
（腫瘍壊死因子）など、高等動物由来の生理活性蛋白に
重点が置かれるようになった。しかしながら、これらも
作用スペクトルが発見当初予想されたものよりはるかに
広範囲であったため、副作用を示さないという認識も覆
されてしまった。このような状況のなかで。癌治療が単
なる癌病巣の撃退をもって評価するだけではなく、生体
のトータルな機能の改善の中での治療を考える「クオリ
ティ・オブ・ライフ」に焦点が移りつつあることは間違
いなく、本発明者が発見したＨＧＦが抗癌剤の有効成分
であることはすでに報告済みである（特開平6-25010号
公報）。
おける最大の課題であり、また新規癌治療法あるいは新
抗癌剤は医療・医薬研究者の最大の関心事である。現在
のわが国の死因の第１位は癌であり、毎年多くの新しい
患者が発生している。化学療法に用いられる抗癌剤とし
て、従来のアルキル化剤、代謝拮抗剤、抗生物質のほか
に、ピシバニール（商品名、中外製薬社製）やクレスチ
ン（商品名、三共製薬社製）を初めとする微生物由来の
生体反応修飾物質が全盛を極めた。従来のアルキル化剤
を初めとする化合物は本来、細胞毒性を利用するもので
あり、少なからぬ副作用のために使用がかなり限定され
たのに比べ、その後のピシバニールなどの生体反応修飾
物質は生体の免疫機能を高め、癌細胞を駆逐するという
作用を有する。しかし、その限界が明らかになると共
に、インターフェロンやインターロイキン−２やＴＮＦ
（腫瘍壊死因子）など、高等動物由来の生理活性蛋白に
重点が置かれるようになった。しかしながら、これらも
作用スペクトルが発見当初予想されたものよりはるかに
広範囲であったため、副作用を示さないという認識も覆
されてしまった。このような状況のなかで。癌治療が単
なる癌病巣の撃退をもって評価するだけではなく、生体
のトータルな機能の改善の中での治療を考える「クオリ
ティ・オブ・ライフ」に焦点が移りつつあることは間違
いなく、本発明者が発見したＨＧＦが抗癌剤の有効成分
であることはすでに報告済みである（特開平6-25010号
公報）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上述のごとく、既成の
抗癌剤がその副作用や、あるいは抗癌作用そのものへの
疑問から、決定的な治療薬とはいいがたく、さらに次世
代を担う生理活性蛋白質もこれまで開発されたものは主
に免疫系にかかわる因子であり、必ずしも究極の抗癌剤
として広く利用されることを期待できない状況にある。
そこで、同じく生体が本来持っている生理活性蛋白質の
中でもその生理作用が明解で、しかも活性のスペクトル
がよく研究されているものの中から、真の抗癌剤を見い
だすことが重要になってくる。特に、従来開発されてき
た生理活性蛋白質、インターフェロンあるいはインター
ロイキン等はほとんど免疫系にかかわる因子であること
から、全く異なる作用を有する生体因子がこれからの抗
癌剤として重要であると考えらえれる。
抗癌剤がその副作用や、あるいは抗癌作用そのものへの
疑問から、決定的な治療薬とはいいがたく、さらに次世
代を担う生理活性蛋白質もこれまで開発されたものは主
に免疫系にかかわる因子であり、必ずしも究極の抗癌剤
として広く利用されることを期待できない状況にある。
そこで、同じく生体が本来持っている生理活性蛋白質の
中でもその生理作用が明解で、しかも活性のスペクトル
がよく研究されているものの中から、真の抗癌剤を見い
だすことが重要になってくる。特に、従来開発されてき
た生理活性蛋白質、インターフェロンあるいはインター
ロイキン等はほとんど免疫系にかかわる因子であること
から、全く異なる作用を有する生体因子がこれからの抗
癌剤として重要であると考えらえれる。
【０００４】ところで、癌が国内の死因のトップを占め
ていることは前述の通りであるが、その危険性は癌細胞
の浸潤・転移能に依存しているといっても過言ではな
い。いくつかの増殖因子が癌細胞の浸潤・転移能に関与
することが報告されているが、最近ＨＧＦが種々の癌細
胞に対し、その浸潤、転移能を強力に誘導する因子であ
ることが明らかにされた(H. Shimura et al. J. Jap. C
ancer Res. 86, 662-669, 1995)。実際に極めて悪性度
が高いとされている肺癌や胆嚢癌の浸潤能はＨＧＦに依
存して誘導され、また肺癌原発組織中のＨＧＦレベルは
肺癌の悪性度、致死率とよく相関するリスクファクター
であることが確認されている。上記のＨＧＦは肝実質細
胞を in vitro で増殖させる因子として見出された蛋白
質である（Biochem Biophys Res Commun, 122, 1450, 1
984、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 6489, 1986、
FEBS Letter, 22, 311, 1987、Nature, 342, 440, 198
9、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 3200, 1990）。
肝実質細胞を特異的に増殖させる因子として発見された
ＨＧＦは、本発明者らをはじめとする多くの研究者によ
る最近の研究成果によって、生体内で組織傷害治癒など
の種々の活性を示している事が明らかとなり、研究対象
としてのみならずヒトや動物の治療薬などへの応用に期
待が集まっている。このようなＨＧＦの受容体（レセプ
ター）に関して、最近の研究から、ｃ−Ｍｅｔ原腫瘍遺
伝子がＨＧＦ受容体をコードしていることが確定的にな
った(Bottaro et al., Science 251, 802-804, 1991;Na
ldini et al., Oncogene 6, 501-504, 1991)。
ていることは前述の通りであるが、その危険性は癌細胞
の浸潤・転移能に依存しているといっても過言ではな
い。いくつかの増殖因子が癌細胞の浸潤・転移能に関与
することが報告されているが、最近ＨＧＦが種々の癌細
胞に対し、その浸潤、転移能を強力に誘導する因子であ
ることが明らかにされた(H. Shimura et al. J. Jap. C
ancer Res. 86, 662-669, 1995)。実際に極めて悪性度
が高いとされている肺癌や胆嚢癌の浸潤能はＨＧＦに依
存して誘導され、また肺癌原発組織中のＨＧＦレベルは
肺癌の悪性度、致死率とよく相関するリスクファクター
であることが確認されている。上記のＨＧＦは肝実質細
胞を in vitro で増殖させる因子として見出された蛋白
質である（Biochem Biophys Res Commun, 122, 1450, 1
984、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 83, 6489, 1986、
FEBS Letter, 22, 311, 1987、Nature, 342, 440, 198
9、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 3200, 1990）。
肝実質細胞を特異的に増殖させる因子として発見された
ＨＧＦは、本発明者らをはじめとする多くの研究者によ
る最近の研究成果によって、生体内で組織傷害治癒など
の種々の活性を示している事が明らかとなり、研究対象
としてのみならずヒトや動物の治療薬などへの応用に期
待が集まっている。このようなＨＧＦの受容体（レセプ
ター）に関して、最近の研究から、ｃ−Ｍｅｔ原腫瘍遺
伝子がＨＧＦ受容体をコードしていることが確定的にな
った(Bottaro et al., Science 251, 802-804, 1991;Na
ldini et al., Oncogene 6, 501-504, 1991)。
【０００５】上述のように、ＨＧＦが種々の癌細胞に対
し、その浸潤、転移能を強力に誘導する因子であること
が明らかになってきており、ＨＧＦによる癌細胞の浸潤
・転移能を特異的にブロックするアンタゴニストならび
にインヒビターの開発は制癌という観点で極めて重要な
研究課題であると考えられる。本発明者はかかる観点か
ら鋭意検討を行った結果、ＨＧＦの有する癌細胞の浸潤
・転移能を抑制する活性、すなわち、細胞のｃ−Ｍｅｔ
／ＨＧＦリセプターに対するアンタゴニスト活性を有す
る物質を見出し、当該物質が癌細胞の浸潤、転移能を抑
制し、抗癌剤として極めて有用であるという知見を得て
本発明を完成するに至った。従って、本発明の目的は、
細胞のｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦリセプターのアンタゴニスト
活性に基づく抗癌剤として極めて有用な医薬品を提供す
ることにある。
し、その浸潤、転移能を強力に誘導する因子であること
が明らかになってきており、ＨＧＦによる癌細胞の浸潤
・転移能を特異的にブロックするアンタゴニストならび
にインヒビターの開発は制癌という観点で極めて重要な
研究課題であると考えられる。本発明者はかかる観点か
ら鋭意検討を行った結果、ＨＧＦの有する癌細胞の浸潤
・転移能を抑制する活性、すなわち、細胞のｃ−Ｍｅｔ
／ＨＧＦリセプターに対するアンタゴニスト活性を有す
る物質を見出し、当該物質が癌細胞の浸潤、転移能を抑
制し、抗癌剤として極めて有用であるという知見を得て
本発明を完成するに至った。従って、本発明の目的は、
細胞のｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦリセプターのアンタゴニスト
活性に基づく抗癌剤として極めて有用な医薬品を提供す
ることにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
になされた本発明は、下記の理化学的性質および生理活
性を有する蛋白質（以下、便宜上、α−フラグメントと
称する）を有効成分として含有する抗癌剤である。 a)ＨＧＦのα鎖からなる； b)分子量が約５５−６９ｋＤａである； c)ｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦレセプターのアンタゴニスト活性
を有する。
になされた本発明は、下記の理化学的性質および生理活
性を有する蛋白質（以下、便宜上、α−フラグメントと
称する）を有効成分として含有する抗癌剤である。 a)ＨＧＦのα鎖からなる； b)分子量が約５５−６９ｋＤａである； c)ｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦレセプターのアンタゴニスト活性
を有する。
【０００７】前述のように、本発明者は、年余にわたり
肝実質細胞の増殖因子を研究し、その結果ＨＧＦを単離
精製することに成功した。ＨＧＦは元来、肝実質細胞増
殖を促進する因子として発見されたポリペプチドである
が、細胞増殖制御に加え、細胞運動（cell motility）
を促進するモトゲン(motogen)として働く（T. Nakamur
a, Prog. Growth Factor Res., 3, 67-85, 1991）こと
は発明者によってもとより見いだされた事実である。Ｈ
ＧＦによる細胞の運動性亢進には、β−カテニンのりん
酸化によるカドヘリンを介した細胞間接着の減少、rho
small Gタンパク質の活性化を介する情報伝達系が関与
している。さらに最近、rhoの下流にp125FAK(focal adh
esion kinase)が位置し、ＨＧＦによって一過的なp125F
AKのりん酸化が起こることが明らかになった（K. Matsu
moto et al. J.Biol.Chem. 269, 31807-31813, 1994)。
ＨＧＦの刺激後、初期の焦点接着(focal adhesion)の形
成、細胞骨格の再構成にp125FAKのりん酸化が関与して
おり、ＨＧＦによる細胞の運動性亢進において細胞−マ
トリックスとの相互作用はp125FAKを介して調節されて
いると考えられる。
肝実質細胞の増殖因子を研究し、その結果ＨＧＦを単離
精製することに成功した。ＨＧＦは元来、肝実質細胞増
殖を促進する因子として発見されたポリペプチドである
が、細胞増殖制御に加え、細胞運動（cell motility）
を促進するモトゲン(motogen)として働く（T. Nakamur
a, Prog. Growth Factor Res., 3, 67-85, 1991）こと
は発明者によってもとより見いだされた事実である。Ｈ
ＧＦによる細胞の運動性亢進には、β−カテニンのりん
酸化によるカドヘリンを介した細胞間接着の減少、rho
small Gタンパク質の活性化を介する情報伝達系が関与
している。さらに最近、rhoの下流にp125FAK(focal adh
esion kinase)が位置し、ＨＧＦによって一過的なp125F
AKのりん酸化が起こることが明らかになった（K. Matsu
moto et al. J.Biol.Chem. 269, 31807-31813, 1994)。
ＨＧＦの刺激後、初期の焦点接着(focal adhesion)の形
成、細胞骨格の再構成にp125FAKのりん酸化が関与して
おり、ＨＧＦによる細胞の運動性亢進において細胞−マ
トリックスとの相互作用はp125FAKを介して調節されて
いると考えられる。
【０００８】癌細胞の増殖能や浸潤・転移能は、癌細胞
をとりまく間質細胞との相互作用を介して大きく影響さ
れることが古くから知られている(tumor-host relation
ship）。発明者は宿主間質に由来するＨＧＦ、ならびに
癌細胞に由来するＨＧＦ誘導因子（インジュリン）が癌
の悪性化（増殖能や浸潤・転移能）に関与することを明
らかにした（K. Matsumoto et al. Gann Monograph No.
42: Growth Factors:Cell growth, Morphogenesis and
Transformation, CRC press 92-112, 1994; K. Rygaard
et al. Intern. J. Oncology, 2, 991-996, 1993; W.
G. Jiang et al. Clin. & Exp. Metastasis, 11, 235-2
42, 1993; S.P. Seslar et al. Cancerres., 58, 1233-
1238, 1993; N. Rahimi et al. DNA and Cell Biol., 1
3, 1189-1197, 1994; S. Bellusci et al. Oncogene,
9, 1091-1099, 1994）。
をとりまく間質細胞との相互作用を介して大きく影響さ
れることが古くから知られている(tumor-host relation
ship）。発明者は宿主間質に由来するＨＧＦ、ならびに
癌細胞に由来するＨＧＦ誘導因子（インジュリン）が癌
の悪性化（増殖能や浸潤・転移能）に関与することを明
らかにした（K. Matsumoto et al. Gann Monograph No.
42: Growth Factors:Cell growth, Morphogenesis and
Transformation, CRC press 92-112, 1994; K. Rygaard
et al. Intern. J. Oncology, 2, 991-996, 1993; W.
G. Jiang et al. Clin. & Exp. Metastasis, 11, 235-2
42, 1993; S.P. Seslar et al. Cancerres., 58, 1233-
1238, 1993; N. Rahimi et al. DNA and Cell Biol., 1
3, 1189-1197, 1994; S. Bellusci et al. Oncogene,
9, 1091-1099, 1994）。
【０００９】胆嚢癌は一般に高転移性で致死率の高い悪
性癌である。ヒト胆嚢癌細胞は宿主間質組織内では高い
浸潤能を有するが、in vitroのコラーゲンゲル上での培
養下では自らゲル内に浸潤することはない。ところが、
正常間質線維芽細胞とコラーゲンゲルをはさんで共培養
すると胆嚢癌細胞はゲル内に活発に浸潤し、液性因子を
介した間質細胞との相互作用により胆嚢癌細胞の浸潤能
が誘導される。しかも、共培養下での癌細胞の浸潤は抗
ＨＧＦ抗体の添加により完全に阻害され、間質由来の浸
潤因子(invasion factor)がＨＧＦであることが明らか
になった。この胆嚢癌細胞のゲル内浸潤は代表的な増殖
因子であるＥＧＦ、ＴＧＦ−β、ＰＤＧＦ、ｂＦＧＦな
どでは誘導されず、ＨＧＦに特異的である。一方、胆嚢
癌細胞は間質線維芽細胞のＨＧＦ産生を誘導する因子を
産生分泌し、このＨＧＦインデューサーの実体がIL-1β
であることが明らかになった。ヒト胆嚢癌細胞に限らず
多くのカルシノマ(carcinoma)、例えば口腔粘膜上皮癌
細胞などの間質由来浸潤因子(stromal-derived invasio
n factor)の実体がＨＧＦであることも明らかになった
（K. Rygaard et al. Intrn. J. Oncology, 2, 991-99
6, 1993; W.G. Jianget al. Clin. & Exp. Metastasis,
11, 235-242, 1993; S.P.Seslar et al. Cancer Res.,
58, 1233-1238, 1993; N. Rahimi et al. DNA and Cel
l Biol., 13,1189-1197, 1994）。癌細胞の浸潤・転移
を防ぐことができれば癌による死亡率は著しく減少する
といわれている。しかも癌の８０％以上がカルシノマで
あり、これらのほとんどはｃ−Ｍｅｔ/ＨＧＦレセプタ
ーを発現するＨＧＦ標的細胞である。このことから、Ｈ
ＧＦによる癌細胞の浸潤・転移能をブロックするアンタ
ゴニストの開発は重要である。
性癌である。ヒト胆嚢癌細胞は宿主間質組織内では高い
浸潤能を有するが、in vitroのコラーゲンゲル上での培
養下では自らゲル内に浸潤することはない。ところが、
正常間質線維芽細胞とコラーゲンゲルをはさんで共培養
すると胆嚢癌細胞はゲル内に活発に浸潤し、液性因子を
介した間質細胞との相互作用により胆嚢癌細胞の浸潤能
が誘導される。しかも、共培養下での癌細胞の浸潤は抗
ＨＧＦ抗体の添加により完全に阻害され、間質由来の浸
潤因子(invasion factor)がＨＧＦであることが明らか
になった。この胆嚢癌細胞のゲル内浸潤は代表的な増殖
因子であるＥＧＦ、ＴＧＦ−β、ＰＤＧＦ、ｂＦＧＦな
どでは誘導されず、ＨＧＦに特異的である。一方、胆嚢
癌細胞は間質線維芽細胞のＨＧＦ産生を誘導する因子を
産生分泌し、このＨＧＦインデューサーの実体がIL-1β
であることが明らかになった。ヒト胆嚢癌細胞に限らず
多くのカルシノマ(carcinoma)、例えば口腔粘膜上皮癌
細胞などの間質由来浸潤因子(stromal-derived invasio
n factor)の実体がＨＧＦであることも明らかになった
（K. Rygaard et al. Intrn. J. Oncology, 2, 991-99
6, 1993; W.G. Jianget al. Clin. & Exp. Metastasis,
11, 235-242, 1993; S.P.Seslar et al. Cancer Res.,
58, 1233-1238, 1993; N. Rahimi et al. DNA and Cel
l Biol., 13,1189-1197, 1994）。癌細胞の浸潤・転移
を防ぐことができれば癌による死亡率は著しく減少する
といわれている。しかも癌の８０％以上がカルシノマで
あり、これらのほとんどはｃ−Ｍｅｔ/ＨＧＦレセプタ
ーを発現するＨＧＦ標的細胞である。このことから、Ｈ
ＧＦによる癌細胞の浸潤・転移能をブロックするアンタ
ゴニストの開発は重要である。
【００１０】しかるに本発明者らはＨＧＦの引き続く研
究において以下の点を明らかにした。ＨＧＦは約６９ｋ
Ｄａのα鎖と約３４ｋＤａのβ鎖からなるヘテロダイマ
ーである。ＨＧＦのα鎖にはN末端ヘアピンドメインと
４個のクリングルドメインが存在し、β鎖にはセリンプ
ロテアーゼ様ドメインが存在しており、ＨＧＦは非常に
ユニークなドメイン構造を有する増殖因子である。本発
明者らは既にＨＧＦ分子内のドメイン構造を欠失した種
々の変異ＨＧＦを遺伝子工学的に作製し、α鎖内のN末
端ヘアピンならびに第一、第二クリングルドメインがｃ
−Ｍｅｔ／ＨＧＦレセプターに結合する最小ドメインで
あることを明らかにした。したがってこの最小レセプタ
ー結合ドメイン内に遺伝子工学的に変異を導入すること
によりＨＧＦレセプター−アンタゴニストの作製も可能
になると考えられる。従来、癌細胞の浸潤・転移を抑制
する因子の解明はそのほとんどが癌細胞に由来するマト
リックスプロテアーゼを標的としたものであるが癌細胞
の浸潤・転移をブロックする有効な物質は解明されてい
ない。それに対し、本発明は癌細胞の浸潤・転移を誘導
するシグナルをその上流で遮断することを目的としてお
り、全く新しい戦略に基づいている点が大きな特色であ
り、先駆的な発明である。
究において以下の点を明らかにした。ＨＧＦは約６９ｋ
Ｄａのα鎖と約３４ｋＤａのβ鎖からなるヘテロダイマ
ーである。ＨＧＦのα鎖にはN末端ヘアピンドメインと
４個のクリングルドメインが存在し、β鎖にはセリンプ
ロテアーゼ様ドメインが存在しており、ＨＧＦは非常に
ユニークなドメイン構造を有する増殖因子である。本発
明者らは既にＨＧＦ分子内のドメイン構造を欠失した種
々の変異ＨＧＦを遺伝子工学的に作製し、α鎖内のN末
端ヘアピンならびに第一、第二クリングルドメインがｃ
−Ｍｅｔ／ＨＧＦレセプターに結合する最小ドメインで
あることを明らかにした。したがってこの最小レセプタ
ー結合ドメイン内に遺伝子工学的に変異を導入すること
によりＨＧＦレセプター−アンタゴニストの作製も可能
になると考えられる。従来、癌細胞の浸潤・転移を抑制
する因子の解明はそのほとんどが癌細胞に由来するマト
リックスプロテアーゼを標的としたものであるが癌細胞
の浸潤・転移をブロックする有効な物質は解明されてい
ない。それに対し、本発明は癌細胞の浸潤・転移を誘導
するシグナルをその上流で遮断することを目的としてお
り、全く新しい戦略に基づいている点が大きな特色であ
り、先駆的な発明である。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明の抗癌剤は、前述の理化学
的性質及び生理活性を有する蛋白質（α−フラグメン
ト）を有効成分とすることからなり、当該蛋白質は、例
えば、ＨＧＦを酵素的に分解する方法、遺伝子工学的技
術を用いて調製する方法、化学的に調製する方法などに
より得ることができる。上記の酵素的分解法に用いられ
るＨＧＦとしては、種々の方法で調製されたものを用い
ることができる。すなわち、ＨＧＦの調製方法として
は、各種の方法が知られている。例えば、ラット、ウ
シ、ヒツジなどの哺乳動物の肝臓、脾臓、肺臓、骨髄、
脳、腎臓、胎盤などの臓器、血小板、白血球等の血液細
胞や血漿、血清などから抽出、精製して得ることができ
る（FEBS Letters, 224, 312, 1987;Proc. Acad. Sci.
USA, 86, 5844, 1989など参照）。また、ＨＧＦを産生
する初代培養細胞や株化細胞を培養し、培養物（培養上
清、培養細胞等）から分離精製してＨＧＦを得ることも
できる。あるいは遺伝子工学的手法によりＨＧＦをコー
ドする遺伝子を適切なベクターに組み込み、これを適当
な宿主細胞に挿入して形質転換し、この形質転換体の培
養上清から目的とする組換えＨＧＦを得ることができる
（例えば、Nature, 342, 440, 1989; 特開平5-111383号
公報; 特開平3-255096号公報; Biochem. Biophys. Res.
Commun., 163, 967, 1989など参照）。上記の宿主細胞
は特に限定されず、従来から遺伝子工学的手法で用いら
れている各種の宿主細胞、例えば大腸菌、枯草菌、酵
母、糸状菌、植物または動物細胞などを用いることがで
きる。
的性質及び生理活性を有する蛋白質（α−フラグメン
ト）を有効成分とすることからなり、当該蛋白質は、例
えば、ＨＧＦを酵素的に分解する方法、遺伝子工学的技
術を用いて調製する方法、化学的に調製する方法などに
より得ることができる。上記の酵素的分解法に用いられ
るＨＧＦとしては、種々の方法で調製されたものを用い
ることができる。すなわち、ＨＧＦの調製方法として
は、各種の方法が知られている。例えば、ラット、ウ
シ、ヒツジなどの哺乳動物の肝臓、脾臓、肺臓、骨髄、
脳、腎臓、胎盤などの臓器、血小板、白血球等の血液細
胞や血漿、血清などから抽出、精製して得ることができ
る（FEBS Letters, 224, 312, 1987;Proc. Acad. Sci.
USA, 86, 5844, 1989など参照）。また、ＨＧＦを産生
する初代培養細胞や株化細胞を培養し、培養物（培養上
清、培養細胞等）から分離精製してＨＧＦを得ることも
できる。あるいは遺伝子工学的手法によりＨＧＦをコー
ドする遺伝子を適切なベクターに組み込み、これを適当
な宿主細胞に挿入して形質転換し、この形質転換体の培
養上清から目的とする組換えＨＧＦを得ることができる
（例えば、Nature, 342, 440, 1989; 特開平5-111383号
公報; 特開平3-255096号公報; Biochem. Biophys. Res.
Commun., 163, 967, 1989など参照）。上記の宿主細胞
は特に限定されず、従来から遺伝子工学的手法で用いら
れている各種の宿主細胞、例えば大腸菌、枯草菌、酵
母、糸状菌、植物または動物細胞などを用いることがで
きる。
【００１２】より具体的には、ＨＧＦを生体組織から抽
出精製する方法としては、例えば、ラットに四塩化炭素
を腹腔内投与し、肝炎状態にしたラットの肝臓を抽出し
て粉砕し、S-セファロース、ヘパリンセファロースなど
のゲルカラムクロマトグラフィー、HPLCなどの通常の蛋
白質精製法にて精製することができる。また、ＨＧＦの
アミノ酸配列をコードする遺伝子を通常の遺伝子工学的
な手法により動物細胞、例えば、チャイニーズハムスタ
ー卵巣（CHO）細胞、マウスC127細胞、サルCOS細胞、Sf
(Spodoptera frugiperda)細胞などに形質転換し、その
培養上清より得ることができる。ＨＧＦはヒト由来のも
のでも、哺乳動物由来のものでも用いることができる
が、好ましくはヒト由来のものがよく、更に好ましく
は、ヒト由来の組換えＨＧＦ（特開平5-111383号公報）
がよい。かくして得られたＨＧＦはＨＧＦと実質的に同
効である限り、そのアミノ酸配列の一部が欠失または他
のアミノ酸に置換されていたり、他のアミノ酸配列が一
部挿入されていたり、N末端および/またはC末端に1また
は2以上のアミノ酸が結合していたり、あるいは糖鎖が
同様に欠失または置換されてもよい。
出精製する方法としては、例えば、ラットに四塩化炭素
を腹腔内投与し、肝炎状態にしたラットの肝臓を抽出し
て粉砕し、S-セファロース、ヘパリンセファロースなど
のゲルカラムクロマトグラフィー、HPLCなどの通常の蛋
白質精製法にて精製することができる。また、ＨＧＦの
アミノ酸配列をコードする遺伝子を通常の遺伝子工学的
な手法により動物細胞、例えば、チャイニーズハムスタ
ー卵巣（CHO）細胞、マウスC127細胞、サルCOS細胞、Sf
(Spodoptera frugiperda)細胞などに形質転換し、その
培養上清より得ることができる。ＨＧＦはヒト由来のも
のでも、哺乳動物由来のものでも用いることができる
が、好ましくはヒト由来のものがよく、更に好ましく
は、ヒト由来の組換えＨＧＦ（特開平5-111383号公報）
がよい。かくして得られたＨＧＦはＨＧＦと実質的に同
効である限り、そのアミノ酸配列の一部が欠失または他
のアミノ酸に置換されていたり、他のアミノ酸配列が一
部挿入されていたり、N末端および/またはC末端に1また
は2以上のアミノ酸が結合していたり、あるいは糖鎖が
同様に欠失または置換されてもよい。
【００１３】ＨＧＦの酵素的分解は、例えば、エラスタ
ーゼ等の酵素を用いてＨＧＦを消化することにより行な
うことができる。ついで、高速液体クロマトグラフィー
等の慣用の蛋白精製法を用いて消化生成物を精製し、α
鎖が含まれるフラグメントが約５５−６９ｋＤａからな
る低分子ＨＧＦを単離することにより、前記の理化学的
性質及び生理活性を有する蛋白質(α−フラグメント)を
得ることができる。
ーゼ等の酵素を用いてＨＧＦを消化することにより行な
うことができる。ついで、高速液体クロマトグラフィー
等の慣用の蛋白精製法を用いて消化生成物を精製し、α
鎖が含まれるフラグメントが約５５−６９ｋＤａからな
る低分子ＨＧＦを単離することにより、前記の理化学的
性質及び生理活性を有する蛋白質(α−フラグメント)を
得ることができる。
【００１４】本発明のα−フラグメントは、上記の方法
により得られたものに限定されるものではなく、慣用の
ペプチド合成法に準じて化学的に調製したものでもよ
く、またα−フラグメントのアミノ酸配列をコードする
遺伝子を調製し、それを用いて前記の遺伝子工学的な手
法により産生させたものであってもよい。後記実施例に
示されるように、α−フラグメントはＨＧＦのマイトゲ
ン(mitogen)およびモトゲン活性を阻害するなどｃ−Ｍ
ｅｔ／ＨＧＦリセプターのアンタゴニスト活性を有し、
癌細胞の浸潤を抑制することが判明した。従って、α−
フラグメントを有効成分とする本発明の薬剤は、抗癌
剤、特に癌細胞の浸潤抑制剤、転移抑制剤として有用で
ある。
により得られたものに限定されるものではなく、慣用の
ペプチド合成法に準じて化学的に調製したものでもよ
く、またα−フラグメントのアミノ酸配列をコードする
遺伝子を調製し、それを用いて前記の遺伝子工学的な手
法により産生させたものであってもよい。後記実施例に
示されるように、α−フラグメントはＨＧＦのマイトゲ
ン(mitogen)およびモトゲン活性を阻害するなどｃ−Ｍ
ｅｔ／ＨＧＦリセプターのアンタゴニスト活性を有し、
癌細胞の浸潤を抑制することが判明した。従って、α−
フラグメントを有効成分とする本発明の薬剤は、抗癌
剤、特に癌細胞の浸潤抑制剤、転移抑制剤として有用で
ある。
【００１５】本発明の抗癌剤は種々の製剤形態（例え
ば、液剤、固形剤、カプセル剤など）をとりうるが、一
般的には有効成分であるα−フラグメントのみまたはそ
れと慣用の担体と共に注射剤とされるか、または慣用の
担体と共に経口剤とされる。当該注射剤は常法により調
製することができ、例えば、α−フラグメントを適切な
溶媒（例えば、滅菌水、緩衝液、生理食塩水等）に溶解
した後、フィルター等で濾過して滅菌し、次いで無菌的
な容器に充填することにより調製することができる。注
射剤中のα−フラグメント含量としては、通常0.0002-
0.2(w/v%)程度、好ましくは0.001-0.1(w/v%)程度に調整
される。また、経口薬としては、例えば、錠剤、顆粒
剤、細粒剤、散剤、軟または硬カプセル剤、液剤、乳
剤、懸濁剤、シロップ剤などの剤形に製剤化され、これ
らの製剤は製剤化の常法に準じて調製することができ
る。製剤中のα−フラグメント含量は、剤形、適用疾患
などに応じて適宜調整することができる。
ば、液剤、固形剤、カプセル剤など）をとりうるが、一
般的には有効成分であるα−フラグメントのみまたはそ
れと慣用の担体と共に注射剤とされるか、または慣用の
担体と共に経口剤とされる。当該注射剤は常法により調
製することができ、例えば、α−フラグメントを適切な
溶媒（例えば、滅菌水、緩衝液、生理食塩水等）に溶解
した後、フィルター等で濾過して滅菌し、次いで無菌的
な容器に充填することにより調製することができる。注
射剤中のα−フラグメント含量としては、通常0.0002-
0.2(w/v%)程度、好ましくは0.001-0.1(w/v%)程度に調整
される。また、経口薬としては、例えば、錠剤、顆粒
剤、細粒剤、散剤、軟または硬カプセル剤、液剤、乳
剤、懸濁剤、シロップ剤などの剤形に製剤化され、これ
らの製剤は製剤化の常法に準じて調製することができ
る。製剤中のα−フラグメント含量は、剤形、適用疾患
などに応じて適宜調整することができる。
【００１６】製剤化に際して、好ましくは安定化剤が添
加され、安定化剤としては、例えば、アルブミン、グロ
ブリン、ゼラチン、マンニトール、グルコース、デキス
トラン、エチレングリコールなどが挙げられる。さら
に、本発明の製剤は製剤化に必要な添加物、例えば、賦
形剤、溶解補助剤、酸化防止剤、無痛化剤、等張化剤等
を含んでいてもよい。液状製剤とした場合は凍結保存、
または凍結乾燥等により水分を除去して保存するのが望
ましい。凍結乾燥剤は、用時に注射用蒸留水などを加
え、再溶解して使用される。本発明の製剤は、該製剤の
形態に応じた適当な投与経路により投与され得る。例え
ば、注射剤の形態にして静脈、動脈、皮下、筋肉内等に
投与することができる。その投与量は、患者の症状、年
齢、体重などにより適宜調整されるが、通常α−フラグ
メントとして0.01mg-100mgであり、これを1日1回ないし
数回に分けて投与するのが適当である。
加され、安定化剤としては、例えば、アルブミン、グロ
ブリン、ゼラチン、マンニトール、グルコース、デキス
トラン、エチレングリコールなどが挙げられる。さら
に、本発明の製剤は製剤化に必要な添加物、例えば、賦
形剤、溶解補助剤、酸化防止剤、無痛化剤、等張化剤等
を含んでいてもよい。液状製剤とした場合は凍結保存、
または凍結乾燥等により水分を除去して保存するのが望
ましい。凍結乾燥剤は、用時に注射用蒸留水などを加
え、再溶解して使用される。本発明の製剤は、該製剤の
形態に応じた適当な投与経路により投与され得る。例え
ば、注射剤の形態にして静脈、動脈、皮下、筋肉内等に
投与することができる。その投与量は、患者の症状、年
齢、体重などにより適宜調整されるが、通常α−フラグ
メントとして0.01mg-100mgであり、これを1日1回ないし
数回に分けて投与するのが適当である。
【００１７】
【発明の効果】本発明の治療剤において、有効成分であ
るα−フラグメントは、高転移性で致死率の高い胆嚢癌
や肺癌を初めとする癌細胞に対して特異的な癌浸潤・転
移抑制効果を有する。従って、本発明の薬剤は、抗癌剤
としての癌の治療、予防などに用いられ、臨床上極めて
有用である。
るα−フラグメントは、高転移性で致死率の高い胆嚢癌
や肺癌を初めとする癌細胞に対して特異的な癌浸潤・転
移抑制効果を有する。従って、本発明の薬剤は、抗癌剤
としての癌の治療、予防などに用いられ、臨床上極めて
有用である。
【００１８】
【実施例】以下に実施例および試験例を示し、本発明を
より具体的に述べるが、本発明はこれに限定されるもの
ではない。 実施例１ＨＧＦのα−フラグメントの単離精製 遺伝子組換えＨＧＦ900mgをエラスターゼで１時間消化
し、これを逆相HPLC(C4)で精製した。そのクロマトグラ
ムを図１に示す。図１に示されるように、４個のピーク
が得られ、第一のピークがα−フラグメント、第二のピ
ークが未消化のＨＧＦ、第三と第四のピークがβ1、β2
であることが同定された。さらに、凍結乾燥システムで
溶媒を除去し、それぞれの分画を集めて再蒸留水で再懸
濁した。そうして得られた物質がα、β−フラグメント
であることをSDS-PAGEでさらに確認した（図２参照）。
蛋白定量の結果、α−フラグメントは178mg取得され
た。
より具体的に述べるが、本発明はこれに限定されるもの
ではない。 実施例１ＨＧＦのα−フラグメントの単離精製 遺伝子組換えＨＧＦ900mgをエラスターゼで１時間消化
し、これを逆相HPLC(C4)で精製した。そのクロマトグラ
ムを図１に示す。図１に示されるように、４個のピーク
が得られ、第一のピークがα−フラグメント、第二のピ
ークが未消化のＨＧＦ、第三と第四のピークがβ1、β2
であることが同定された。さらに、凍結乾燥システムで
溶媒を除去し、それぞれの分画を集めて再蒸留水で再懸
濁した。そうして得られた物質がα、β−フラグメント
であることをSDS-PAGEでさらに確認した（図２参照）。
蛋白定量の結果、α−フラグメントは178mg取得され
た。
【００１９】実施例２MDCK細胞を用いたモトゲンとしての作用の解析 MDCK細胞を１０％FBS加DMEM培地で2X104細胞/mlに調製
し、４８ウェルプレートに250ml/ウェルでまきこんだ。
α−フラグメントを単独で10ng/mlから10μg/ml加えて
２４時間培養し、位相差顕微鏡で観察した。その結果を
図３に示す。図３に示されるように、α−フラグメント
にはスキャタリング(scattering)作用は認められなかっ
た。続いて、ＨＧＦ2ng/mlと同時に添加してＨＧＦに対
する阻害効果を調べた。その結果を図４に示す（図中、
αの表示は、ＨＧＦに対するα−フラグメント濃度（倍
率）を示す。以下同様）。図４に示すように、１０００
倍濃度をこえるとスキャタリングの抑制が濃度依存的に
観察された。よって、α−フラグメントはＨＧＦのアン
タゴニストであることが強く示唆された。
し、４８ウェルプレートに250ml/ウェルでまきこんだ。
α−フラグメントを単独で10ng/mlから10μg/ml加えて
２４時間培養し、位相差顕微鏡で観察した。その結果を
図３に示す。図３に示されるように、α−フラグメント
にはスキャタリング(scattering)作用は認められなかっ
た。続いて、ＨＧＦ2ng/mlと同時に添加してＨＧＦに対
する阻害効果を調べた。その結果を図４に示す（図中、
αの表示は、ＨＧＦに対するα−フラグメント濃度（倍
率）を示す。以下同様）。図４に示すように、１０００
倍濃度をこえるとスキャタリングの抑制が濃度依存的に
観察された。よって、α−フラグメントはＨＧＦのアン
タゴニストであることが強く示唆された。
【００２０】実施例３ラット肝細胞を用いたマイトゲンとしての作用の解析 ラット肝細胞を48ウェルプレートで約５０％面積を占め
るように培養し、ＨＧＦ、ＥＧＦ、α−フラグメントを
添加して２２時間培養した。125I-BrdU(0.15mCi/ウェ
ル)で４時間ラベルし、活性をシンチレーションカウン
ターで測定した。その結果を図５に示す。α−フラグメ
ントには102ng/mlから104ng/mlの範囲でＤＮＡ合成促進
作用は認められなかった。そして、ＨＧＦ5ng/mlと同時
に加えるとＨＧＦのマイトゲン活性を濃度依存的に抑制
することが明らかとなった（図５ｃ参照）。ゆえに、α
−フラグメントはＨＧＦのマイトゲン、モトゲン活性に
対してアンタゴニストであることが示された。
るように培養し、ＨＧＦ、ＥＧＦ、α−フラグメントを
添加して２２時間培養した。125I-BrdU(0.15mCi/ウェ
ル)で４時間ラベルし、活性をシンチレーションカウン
ターで測定した。その結果を図５に示す。α−フラグメ
ントには102ng/mlから104ng/mlの範囲でＤＮＡ合成促進
作用は認められなかった。そして、ＨＧＦ5ng/mlと同時
に加えるとＨＧＦのマイトゲン活性を濃度依存的に抑制
することが明らかとなった（図５ｃ参照）。ゆえに、α
−フラグメントはＨＧＦのマイトゲン、モトゲン活性に
対してアンタゴニストであることが示された。
【００２１】実施例４α−フラグメントのＨＧＦ誘導癌細胞浸潤に対する作用 定量的であるマトリゲル インベイション チャンバー(M
atrigel invasion chamber, 24ウェル)を用いた基底膜
浸潤モデルでＨＧＦの癌細胞浸潤誘導作用に対するα−
フラグメントの効果を検討した。GB-d1細胞を1.5X104細
胞/200ml/ウェルに調整して、アッパー チャンバー(upp
er chamber)にまきこんだ。ロワー チャンバー(lower c
hamber)の培地500mlにはＨＧＦ2ng/mlとα−フラグメン
トを加えて２４時間培養し、固定後H&Eで染色した。顕
微鏡下に任意の10視野（8.4mm2）を観察し、フィルター
下面に浸潤してきた細胞数で浸潤能を評価した。ＨＧＦ
は濃度依存的にGB-d1細胞の浸潤を促進した（図６参
照）。ＨＧＦ3ng/mlに対するα−フラグメントの作用を
検討したところ、α−フラグメントはＨＧＦ3ng/mlの１
３０倍、４００倍、４０００倍、１３０００倍と濃度依
存的にＨＧＦの作用を阻害した（図７参照）。なお、図
８に、図６及び図７の結果を図表化したものを示す。上
記の結果からして、α−フラグメントは、ＨＧＦに誘導
される癌細胞の浸潤を抑制する作用を有することが明ら
かになった。
atrigel invasion chamber, 24ウェル)を用いた基底膜
浸潤モデルでＨＧＦの癌細胞浸潤誘導作用に対するα−
フラグメントの効果を検討した。GB-d1細胞を1.5X104細
胞/200ml/ウェルに調整して、アッパー チャンバー(upp
er chamber)にまきこんだ。ロワー チャンバー(lower c
hamber)の培地500mlにはＨＧＦ2ng/mlとα−フラグメン
トを加えて２４時間培養し、固定後H&Eで染色した。顕
微鏡下に任意の10視野（8.4mm2）を観察し、フィルター
下面に浸潤してきた細胞数で浸潤能を評価した。ＨＧＦ
は濃度依存的にGB-d1細胞の浸潤を促進した（図６参
照）。ＨＧＦ3ng/mlに対するα−フラグメントの作用を
検討したところ、α−フラグメントはＨＧＦ3ng/mlの１
３０倍、４００倍、４０００倍、１３０００倍と濃度依
存的にＨＧＦの作用を阻害した（図７参照）。なお、図
８に、図６及び図７の結果を図表化したものを示す。上
記の結果からして、α−フラグメントは、ＨＧＦに誘導
される癌細胞の浸潤を抑制する作用を有することが明ら
かになった。
【００２２】製剤例１ 生理食塩水１００ｍｌ中にα−フラグメント１ｍｇ、マ
ンニトール１ｇ及びポリソルベート８０ １０ｍｇを含
む溶液を無菌的に調製し、１ｍｌずつバイアルに分注し
た後、凍結乾燥して密封することにより凍結乾燥製剤を
得た。
ンニトール１ｇ及びポリソルベート８０ １０ｍｇを含
む溶液を無菌的に調製し、１ｍｌずつバイアルに分注し
た後、凍結乾燥して密封することにより凍結乾燥製剤を
得た。
【００２３】製剤例２ ０．０２Ｍリン酸緩衝液（０．１５Ｍ ＮａＣｌ及び
０．０１％ポリソルベート８０含有、ｐＨ７．４）１０
０ｍｌ中にα−フラグメント１ｍｇとヒト血清アルブミ
ン１００ｍｇを含む水溶液を無菌的に調製し、１ｍｌず
つバイアルに分注した後、凍結乾燥して密封することに
より凍結乾燥製剤を得た。
０．０１％ポリソルベート８０含有、ｐＨ７．４）１０
０ｍｌ中にα−フラグメント１ｍｇとヒト血清アルブミ
ン１００ｍｇを含む水溶液を無菌的に調製し、１ｍｌず
つバイアルに分注した後、凍結乾燥して密封することに
より凍結乾燥製剤を得た。
【００２４】製剤例３ 注射用蒸留水１００ｍｌ中にα−フラグメント１ｍｇ、
ソルビトール２ｇ、グリシン２ｇ及びポリソルベート８
０ １０ｍｇを含む溶液を無菌的に調製し、１ｍｌずつ
バイアルに分注した後、凍結乾燥して密封することによ
り凍結乾燥製剤を得た。
ソルビトール２ｇ、グリシン２ｇ及びポリソルベート８
０ １０ｍｇを含む溶液を無菌的に調製し、１ｍｌずつ
バイアルに分注した後、凍結乾燥して密封することによ
り凍結乾燥製剤を得た。
【図１】ＨＧＦ−酵素消化物を逆層ＨＰＬＣで精製した
ときのクロマトグラムである。
ときのクロマトグラムである。
【図２】逆層ＨＰＬＣで精製したＨＧＦ−酵素消化物を
電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、還元条件下）に付した結
果を示す電気泳動写真である。
電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、還元条件下）に付した結
果を示す電気泳動写真である。
【図３】ＭＤＣＫ細胞に対するα−フラグメントのスキ
ャタリング効果を示す写真（生物の形態）である。
ャタリング効果を示す写真（生物の形態）である。
【図４】ＨＧＦの共存下におけるＭＤＣＫ細胞に対する
α−フラグメントのスキャタリング効果を示す写真（生
物の形態）である。
α−フラグメントのスキャタリング効果を示す写真（生
物の形態）である。
【図５】ラット肝細胞のＤＮＡ合成に対するＨＧＦ、Ｅ
ＧＦ、α−フラグメントの効果を示す図である。図中、
（ａ）はＨＧＦを添加した系、（ｂ）はα−フラグメン
トを添加した系、（ｃ）は５ｎｇ／ｍｌのＨＧＦ共存下
にα−フラグメントを添加した系、（ｄ）は１０ｎｇ／
ｍｌのＥＧＦ共存下にα−フラグメントを添加した系で
ある。
ＧＦ、α−フラグメントの効果を示す図である。図中、
（ａ）はＨＧＦを添加した系、（ｂ）はα−フラグメン
トを添加した系、（ｃ）は５ｎｇ／ｍｌのＨＧＦ共存下
にα−フラグメントを添加した系、（ｄ）は１０ｎｇ／
ｍｌのＥＧＦ共存下にα−フラグメントを添加した系で
ある。
【図６】ＧＢ−ｄ１細胞の浸潤に対するα−フラグメン
トの効果を示す写真（生物の形態）である。
トの効果を示す写真（生物の形態）である。
【図７】ＨＧＦの共存下におけるＧＢ−ｄ１細胞の浸潤
に対するα−フラグメントの効果を示す写真（生物の形
態）である。
に対するα−フラグメントの効果を示す写真（生物の形
態）である。
【図８】図６及び図７の結果を図表化したものである。
Claims (1)
- 【請求項１】 下記の理化学的性質および生理活性
を有する蛋白質を有効成分として含有する抗癌剤。 a)ＨＧＦ(Hepatocyte growth factor)のα鎖からなる； b)分子量が約５５−６９ｋＤａである； c)ｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦレセプターのアンタゴニスト（an
tagonist）活性を有する。
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30072895A JP3832674B2 (ja) | 1995-10-24 | 1995-10-24 | 抗癌剤 |
| AT96935432T ATE285785T1 (de) | 1995-10-24 | 1996-10-23 | Hgf mutant und dessen verwendung als antikrebsmittel |
| PCT/JP1996/003105 WO1997016205A1 (fr) | 1995-10-24 | 1996-10-23 | Agent antitumoral |
| DK96935432T DK0890361T3 (da) | 1995-10-24 | 1996-10-23 | HGF-mutant og anvendelse af denne som middel mod cancer |
| CA002235805A CA2235805C (en) | 1995-10-24 | 1996-10-23 | Anti-cancer agent |
| EP96935432A EP0890361B1 (en) | 1995-10-24 | 1996-10-23 | HGF mutant and its use as an anticancer agent |
| ES96935432T ES2235200T3 (es) | 1995-10-24 | 1996-10-23 | Mutante de hgf y su uso como agente anticanceroso. |
| DE69634138T DE69634138T2 (de) | 1995-10-24 | 1996-10-23 | HGF Mutant und dessen Verwendung als Antikrebsmittel |
| US09/951,629 US6855685B2 (en) | 1995-10-24 | 2001-09-14 | Anti-cancer agent |
| US11/019,360 US7507401B2 (en) | 1995-10-24 | 2004-12-23 | Anti-cancer agent |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30072895A JP3832674B2 (ja) | 1995-10-24 | 1995-10-24 | 抗癌剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09110716A true JPH09110716A (ja) | 1997-04-28 |
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Family
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