JPH0889241A - β−カロチンの生産に有用な遺伝子およびβ−カロチンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 光合成細菌エリスロバクター・ロンガスのフ
ィトエンデヒドロゲナーゼ遺伝子およびリコピンサイク
ラーゼ遺伝子のクローニング。これらの遺伝子を含むロ
ドバクター属光合成細菌のベクタープラスミドの構築と
このベクタープラスミドを用いて形質転換されたロドバ
クター属光合成細菌。さらにこの形質転換体を用いたβ
−カロチンの製造方法。 【効果】 本発明によれば、安全性の高い天然品β−カ
ロチンを経済的に製造できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は天然品β−カロチンの生
産に有用な遺伝子群に関し、さらにこれらの遺伝子群を
用いた天然品β−カロチンの製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】β−カロチンは代表的なカロチノイドの
一つであり、食品の着色料として用いられている。近
年、β−カロチンを初めとするカロチノイドのガン予防
効果が注目され、機能性食品としての利用が期待されて
いる。β−カロチンの製造は大きく分けて化学合成によ
るものと天然物からの抽出によるものがあり、現在は化
学合成品が主に使われている。しかし、近年、化学合成
品の安全性に対する不安から天然品が望まれるようにな
っている。しかし、天然品はニンジン等の植物やドナリ
エラ等の藻類から抽出されており、天候等に左右されや
すく、安定した供給に不安があった。

【０００３】近年、微生物による製造の試みがなされ、
例えばエルビニア属細菌の遺伝子を大腸菌に導入し、生
産させる方法が試みられているが、微生物の培養に費用
がかかり、化学合成品に対抗できるものではなかった
（特開平３−５８７８６号公報）。一方、ロドバクター
属光合成細菌は光合成能力により必要最少限の炭素源と
無機塩類を与えることで生育し、且つカロチノイドを体
内に蓄積することが知られている。しかし、ロドバクタ
ー属光合成細菌が生産するカロチノイドはスファロイデ
ン、スファロイデノン等の開環型カロチノイドであり、
閉環型カロチノイドであるβ−カロチンは生産できな
い。そこで、光合成細菌に異種細菌であるがβ−カロチ
ンを中間体として生産するエルビニア属細菌の遺伝子を
導入し、種々のカロチノイドを生成させる試み（Ｊ．Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌ．、１７６、３６９２−３６９７、１
９９４）もなされているが、効率よくβ−カロチンだけ
を生産する手段はなかった。

【０００４】同じ光合成細菌であるエリスロバクター・
ロンガス（Ｅｒｙｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｌｏｎｇｕ
ｓ）ＯＣｈ１０１ ＡＣＴＴ １４１２６はβ−カロチ
ンの派生物であるエリスロキサンチンを多量に生産す
る。また、他の光合成細菌がクロロフィルと等量程度の
カロチノイドしか体内に蓄積できないのに対し、多量の
カロチノイドを蓄積できることが知られている（Ｐｈｏ
ｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓＲｅｓｅａｒｃｈ、３１、２１
−３０、１９９２）。

【０００５】しかし、エリスロバクター・ロンガスのカ
ロチノイドの生合成経路の解明はなされておらず、且
つ、エリスロバクター・ロンガスの遺伝子についてはカ
ロチノイドの生合成に関するものはもちろん、他の遺伝
子についても全く報告されていなかった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は天然品
β−カロチンを経済的に製造するために有用な遺伝子群
を提供する事である。さらにこの遺伝子群を用いて天然
品β−カロチンを製造する方法を提供することを目的と
するものである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ロドバク
ター属光合成細菌の光合成能力を利用して天然品β−カ
ロチンを生産性よく製造する方法を鋭意検討した結果、
光合成細菌エリスロバクター・ロンガス（Ｅｒｙｔｈｒ
ｏｂａｃｔｅｒ ｌｏｎｇｕｓ）ＯＣｈ１０１のβ−カ
ロチンの生合成に関与する遺伝子群をクローニングし、
ロドバクター属光合成細菌に遺伝子導入することによ
り、β−カロチンが安定して生産性よく生産されること
を見いだし、本発明を完成するに至った。

【０００８】すなわち、本発明は、（１）エリスロバク
ター属細菌のフィトエンデヒドロゲナーゼ遺伝子、
（２）エリスロバクター属細菌のリコピンサイクラーゼ
遺伝子、（３）該遺伝子を含有するベクタープラスミ
ド、（４）該ベクタープラスミドにより形質転換された
ロドバクター属光合成細菌、（５）該ロドバクター属光
合成細菌による天然品β−カロチンの製造方法である。

【０００９】以下に本発明を詳述する。本発明の遺伝子
の供給源として用いられる光合成細菌はβ−カロチン生
産能力のあるエリスロバクター属光合成細菌であればよ
く、エリスロバクター・ロンガス（Ｅｒｙｔｈｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ｌｏｎｇｕｓ）ＯＣｈ１０１がより好まし
い。

【００１０】エリスロバクター・ロンガスのフィトエン
デヒドロゲナーゼ遺伝子およびリコピンサイクラーゼ遺
伝子のクローニング方法は特に限定されるものではない
が、他の細菌類のフィトエンデヒドロゲナーゼ遺伝子を
プローブとしたプラークハイブリダイゼーション法を用
いることができる。本発明に用いられるロドバクター属
光合成細菌の形質転換に用いられるベクタープラスミド
はロドバクター属光合成細菌内で安定に存在し、かつ発
現するものであればよい。

【００１１】ロドバクター属光合成細菌に導入されるベ
クタープラスミドにはエリスロバクター属光合成細菌の
フィトエンデヒドロゲナーゼ遺伝子とリコピンサイクラ
ーゼ遺伝子の２つが組み込まれていることが必要であ
る。ロドバクター属細菌にフィトエンデヒドロゲナーゼ
遺伝子を導入するとリコピンを生成するが、生成したリ
コピンは開環型であるためにロドバクター属光合成細菌
の持つ他の酵素群によって直ちに代謝され、安定してリ
コピンを生産させることはできなかった（ＷＯ９１／１
３０７８）。しかし、フィトエンデヒドロゲナーゼ遺伝
子とリコピンサイクラーゼ遺伝子を同時に導入すること
により、生成したリコピンは速やかにβ−カロチンに変
化する。生成したβ−カロチンは閉環型カロチノイドで
あるためロドバクター属光合成細菌の持つ酵素群によっ
て代謝されることなく安定してロドバクター属光合成細
菌内に蓄積される。

【００１２】ロドバクター属光合成細菌に上記ベクター
プラスミドを導入して形質転換させる方法は特に限定さ
れるものではなく、接合伝達等の公知の方法が利用でき
る。本発明の形質転換に用いられるロドバクター属光合
成細菌はロドバクター・スファロイデス（Ｒｈｏｄｏｂ
ａｃｔｅｒ ｓｈｐａｅｒｏｉｄｅｓ）、ロドバクター
・カプシュラータス（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｃａｐ
ｓｕｌａｔｕｓ）が好ましく、ロドバクター・スファロ
イデスがより好ましい。

【００１３】形質転換体の培養は宿主であるロドバクタ
ー属細菌の培養条件が適用できる。β−カロチンの抽出
方法は特に限定されるものではなく、メタノール、アセ
トン等を用いた通常の方法で抽出できる。

【００１４】

【実施例】次に実施例により本発明を示すが、これは一
例であり、本発明はこれに限定されるものではない。

【００１５】

【実施例１】 （１）エリスロバクター・ロンガストータルＤＮＡの調
製 トータルＤＮＡは、エリスロバクター・ロンガス（Ｅｒ
ｙｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｌｏｎｇｕｓ）ＯＣｈ１０１
ＡＴＣＣ １４１２６を１００ミリリットルのエリス
ロバクター用の培地（原島らの培地 Ｐｌａｎｔ ａ
ｎｄ ＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌ．２１（７）：１２８３
−１２９４（１９８０））で増殖させた菌体から調製し
た。集菌後凍結し、４０ミリリットルのｌｙｓｉｓ ｂ
ｕｆｆｅｒ（１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ１ｍＭＥＤＴＡ
１％ＳＤＳｐＨ８．０）に懸濁し、４５℃でインキュ
ベートした。さらに、１００μｇ／ミリリットルになる
ようにＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫを加え、よく混合した
後、１時間インキュベートした。フェノール／クロロホ
ルム抽出を２回行った後、等量のイソプロパノール、１
／１０量の３モル酢酸ナトリウム溶液を加えながら析出
してきたトータルＤＮＡをガラス棒に巻き付け、７０％
エタノールでリンスした後、上澄みを除いて風乾させ
た。４ミリリットルのＴＥ緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ
−ＨＣｌ, ０．１ｍＭ ＥＤＴＡ）に溶かし、３７℃で
１２時間インキュベートした。これに１００μｇ/ｍｌ
になるようにＲＮａｓｅＡを加え、３７℃で１時間イン
キュベートし、続けて５０μｇ／ミリリットルになるよ
うにＰｒｏｔｅｉｎａｓｅＫを加え、３７℃で３０分間
インキュベートした。さらにエチジウムブロミド−セシ
ウムクロライド（ＥｔＢｒ−ＣｓＣｌ）密度勾配遠心分
離によりＤＮＡを精製した。

【００１６】（２）大腸菌ゲノムライブラリーの作成 トータルＤＮＡ１０μｇに対して１．２ユニットの制限
酵素Ｓａｕ３ＡＩを用い、３７℃、３０分間インキュベ
ートした後、ＥＤＴＡを加え反応を止め、フェノール／
クロロホルムで酵素を失活させた。この条件で６〜２０
キロ塩基対付近に多くのＳａｕ３ＡＩ部分分解断片が得
られた。この反応液層のエタノール沈澱を行った後、ア
ルカリフォスファターゼ処理を行った。この反応液の１
／１０量を用い、ラムダファージベクターλＥＭＢＬ３
１μｌ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社製）と混ぜ、全量１
０μｌで４℃で１２時間、Ｔ４ＤＮＡリガーゼにより連
結反応を行った。この連結反応を行ったＤＮＡを用い、
ギガパック・ゴールド（Ｇｉｇａｐａｃｋ ＩＩ Ｇｏ
ｌｄ Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ社製）によりインビトロ・
パッケージングを行い、ゲノム・ライブラリーを作るの
に十分量のファージ粒子を得た。このファージ粒子を大
腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＬＥ３９２
に感染させた後、１プレート当たり約１０００個になる
ように希釈し、ＬＢ培地（１％トリプトン、０．５％イ
ーストエクストラクト、１％ＮａＣｌ）プレートにプレ
ーティングし３７℃で１晩培養した。

【００１７】（３）プラークハイブリダイゼーション法
によるフィトエンデヒドロゲナーゼ遺伝子、リコピンサ
イクラーゼ遺伝子の取得 エルビニア・ハービコラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｈｅｂｉｃ
ｏｌａ） ＡＴＣＣ３９３６８からフィトエンデヒドロ
ゲナーゼ遺伝子を含む１．０３ｋｂの断片を制限酵素Ｂ
ｇｌ ＩＩとＰｓｔＩ消化により切り出し、ＤＩＧ法に
よるＤＮＡラベリング ディテクションキット（ベーリ
ンガー・マンハイム社製）により標識しプローブＤＮＡ
とした。このプローブＤＮＡを用いて、作成したゲノム
ライブラリーについて前述のＤＮＡラベリング ディテ
クションキットを用いたプラークハイブリダイゼーショ
ンを行った。ハイブリダイゼーションは５×ＳＳＣ、
０．０２％ＳＤＳ、３０％ホルムアミド、３７℃、１２
時間行った。標識プローブを４２℃で洗った結果、約１
１０個に１個の割合で弱くハイブリダイズしたプラーク
が得られた。ハイブリダイズしたプラークのひとつから
ラムダＤＮＡを抽出し、制限酵素ＳａｌＩとＢｇｌ Ｉ
Ｉ消化後、上記プローブＤＮＡを用いてＤＮＡハイブリ
ダイゼーションを行い、強くハイブリダイズした約５０
０ｂｐの断片を得た。次いでこの５００ｂｐ断片前後の
塩基配列をＭ１３（ニッポンジーン社製）を用いたダイ
プライマー法により決定した。その結果２つのオープン
リーディングフレーム（ＯＲＦ１、ＯＲＦ２）が存在す
ることを確認した。２つのオープンリーディングフレー
ムを図１に示す。ＯＲＦ２は配列表１に示す５２６個の
アミノ酸をコードする塩基対１５７８ｂｐのＤＮＡ鎖で
あり、フィトエンをリコピンに転換する酵素活性を有し
ており、フィトエンデヒドロゲナーゼ遺伝子であった。
ＯＲＦ１は配列表２に示す４３４個のアミノ酸をコード
する塩基対１３０２ｂｐのＤＮＡ鎖で、リコピンをβー
カロチンに転換する酵素活性を有しており、リコピンサ
イクラーゼ遺伝子であった。

【００１８】

【実施例２】 （１）ベクタープラスミドの構築 エリスロバクター・ロンガスのフィトエンデヒドロゲナ
ーゼ遺伝子とリコピンサイクラーゼ遺伝子を含む約４Ｋ
ｂのＤＮＡ断片を制限酵素ＥｃｏＲＶ消化により切り出
し、予めカナマイシン耐性遺伝子をＥｃｏＲＶ部位に挿
入したプラスミドベクターｐＲＫ４１５（ＧＥＮＥ、７
０、１９１−１９７、１９８８）のＳｔｕＩ部位に連結
することによりハイブリッドプラスミドｐＲＫＣＤを作
成した。

【００１９】（２）ロドバクター属細菌の形質転換 上記ベクタープラスミドｐＲＫＣＤを用いて大腸菌Ｓ１
７−１（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１、７８４−７
９１、１９８３）を形質転換した後、該形質転換体とロ
ドバクター・スファロイデス（Ｒｏｄｏｂａｃｔｅｒ
ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ）ＡＴＣＣ１７０２３を１対１
００の割合でＬＢ培地に懸濁し、５％の寒天を含有する
ＬＢ培地上で３２℃で６時間培養し、接合伝達により、
ロドバクター・スファロイデスを形質転換した。

【００２０】次いで、上記ＬＢ培地から菌を集め、２０
μｇ／ｍｌのカナマイシン存在下、塩化ナトリウムを含
有しないＲＣＶＢＮ培地（Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ．、１２９、３３５−３４０、１９８１）で培養し、
ベクタープラスミドｐＲＫＣＤを用いて形質転換された
ロドバクター・スファロイデスを得た。なお、上記ｐＲ
ＫＣＤを導入した大腸菌ＤＨ５（東洋紡社製）およびロ
ドバクター・スファロイデスは、それぞれ茨城県つくば
市東１丁目１番３号の工業技術院生命工学工業技術研究
所に、平成６年９月２日付けで：ＦＥＲＭ Ｐ−１４５
０３およびＦＥＲＭ Ｐ−１４５０４として寄託されて
いる。

【００２１】

【実施例３】実施例２で得られたロドバクター・スファ
ロイデス形質転換体を２０μｇ／ｍｌのカナマイシン存
在下、塩化ナトリウムを含まないＲＣＶＢＮ培地で３２
℃で培養した後、形質転換体を遠心分離により集菌し
た。色素をメタノールで抽出した後、ｎ−ヘキサンに移
行させ、Ｃ１８シリカゲル逆相カラム（Ｖｙｄａｃ社製
２１８ＴＰ）を用い、アセトニトリル／メタノール＝９
／１、流量０．７ｍｌ／分、カラム温度４０℃の条件で
ＨＰＬＣ分析した。保持時間１４．５分に最大吸収４５
０ｎｍのピークが得られ、βーカロチンの標準品（シグ
マ社製）と保持時間、吸収スペクトルが一致し、βーカ
ロチンであることを確認した。

【００２２】

【発明の効果】本発明の遺伝子を用いることで光合成細
菌の光合成能力を利用することにより天然品β−カロチ
ンを生産性よく安定して製造することができる。

【００２３】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：１５７８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：エリスロバクター・ロンガス（Erythrobacter
longus） 株名：ATCC 14126 ATG AAC GCC GAT CAA AAC ATC GCT ACA GGG CTC AAC TTT GCG CCA GCC 48 Met Asn Ala Asp Gln Asn Ile Ala Thr Gly Leu Asn Phe Ala Pro Ala AAT ACT GGC GAG CGC GGC ATT AAT CCG GTG ATC GCC GAA AAA TAC AAA 96 Asn Thr Gly Glu Arg Gly Ile Asn Pro Val Ile Ala Glu Lys Tyr Lys GGC CGC ACC GCC TGT GTG ATC GGT TCC GGT TTT GGC GGC TTG GCG CTA 144 Gly Arg Thr Ala Cys Val Ile Gly Ser Gly Phe Gly Gly Leu Ala Leu GCA CTG CGG CTG CAA TCG CAT GGC ATT CAA ACG ACC ATC GTC GAA GCG 192 Ala Leu Arg Leu Gln Ser His Gly Ile Gln Thr Thr Ile Val Glu Ala CGC GAC AAG CCC GGT GGC CGC GCC TAT TTC TGG GAA AAA GAC GGC TTT 240 Arg Asp Lys Pro Gly Gly Arg Ala Tyr Phe Trp Glu Lys Asp Gly Phe ACC TTC GAT GCT GGC CCC ACG GTC ATC ACC GAC CCG CCG TGT TTG AAA 288 Thr Phe Asp Ala Gly Pro Thr Val Ile Thr Asp Pro Pro Cys Leu Lys GAA CTG TGG GAG CTG ACC GGC CAC GAC ATT TCC GAA GAT GTC GAG CTG 336 Glu Leu Trp Glu Leu Thr Gly His Asp Ile Ser Glu Asp Val Glu Leu ATG AAG GTT CAC CCT TTC TAC CGC CTC AAC TGG CCC GAT GGC ACA AAC 384 Met Lys Val His Pro Phe Tyr Arg Leu Asn Trp Pro Asp Gly Thr Asn TTC GAT TAT TCG AAC GTT GAT GAG GAA TTG AAC GCC GAA ATC GCG AAG 432 Phe Asp Tyr Ser Asn Val Asp Glu Glu Leu Asn Ala Glu Ile Ala Lys CTC AAT CCT GAC GAT GTG ATC GGC TAT CAA AAA TTC CTC GAA TAT TCG 480 Leu Asn Pro Asp Asp Val Ile Gly Tyr Gln Lys Phe Leu Glu Tyr Ser GCG CGC GTG CAC GAG GAA GGC TAT GTG AAG CTT GGC ACG GTG CCG TTC 528 Ala Arg Val His Glu Glu Gly Tyr Val Lys Leu Gly Thr Val Pro Phe CTC GAT TTC AAG TCG ATG CTG AAA GCC GCC CCT GCC CTT GTT AAA GAG 576 Leu Asp Phe Lys Ser Met Leu Lys Ala Ala Pro Ala Leu Val Lys Glu CGC GCA TGG CGC AGC GTT TAC GAT ATG GTC TCA AGC TAC ATC AAG GAT 624 Arg Ala Trp Arg Ser Val Tyr Asp Met Val Ser Ser Tyr Ile Lys Asp GAG CGC CTG CGC GAA GCG TTC AGC TTC CAC ACG CTG CTT GTC GGC GGC 672 Glu Arg Leu Arg Glu Ala Phe Ser Phe His Thr Leu Leu Val Gly Gly TCG CCG ATG AAG ACC AGC GCC ATT TAT GCG TTG ATC CAC AAG CTT GAA 720 Ser Pro Met Lys Thr Ser Ala Ile Tyr Ala Leu Ile His Lys Leu Glu AAA GAC GGC GGT GTC TGG TGG GCG CGC GGC GGG ACC AAC CGG TTG ATC 768 Lys Asp Gly Gly Val Trp Trp Ala Arg Gly Gly Thr Asn Arg Leu Ile GCC GGA ATG GTG CGC CAT TTT GAA CGC CTC GGC GGC ACG ATG CGC ATC 816 Ala Gly Met Val Arg His Phe Glu Arg Leu Gly Gly Thr Met Arg Ile GGC GAT CCG GTG GTT CAG GTC CAC ACC CAA GGG ACC AAA GCG ACC GAG 864 Gly Asp Pro Val Val Gln Val His Thr Gln Gly Thr Lys Ala Thr Glu GTT GAA ACG AAG AGC GGT TGG AAA GAG CGC TTT GAC GCG GTG TGT TCA 912 Val Glu Thr Lys Ser Gly Trp Lys Glu Arg Phe Asp Ala Val Cys Ser AAC GCC GAC ATC ATG CAC TCT TAC AAG GAA CTT CTG GGC GAA TCC GAC 960 Asn Ala Asp Ile Met His Ser Tyr Lys Glu Leu Leu Gly Glu Ser Asp CGT GGC AGA AAA TAC GCT AAG TCA TTG GCT CGC AAA AGC TAT TCG CCT 1008 Arg Gly Arg Lys Tyr Ala Lys Ser Leu Ala Arg Lys Ser Tyr Ser Pro TCG CTA TTC GTC GTA CAC TTT GGG CTT GAG GGG TCG TGG CCC GGT ATT 1056 Ser Leu Phe Val Val His Phe Gly Leu Glu Gly Ser Trp Pro Gly Ile GCC CAC CAC ATG ATC CTG TTT GGC CCA CGT TAC AAG GAA CTG GTC GAC 1104 Ala His His Met Ile Leu Phe Gly Pro Arg Tyr Lys Glu Leu Val Asp GAC ATC TAC AAG CAC GGC GTT CTG CCG CAG GAT TTT TCG ATC TAT CTT 1152 Asp Ile Tyr Lys His Gly Val Leu Pro Gln Asp Phe Ser Ile Tyr Leu CAC CAC CCG ACC GTC ACC GAC CCA TCG ATG GCG CCC AAG GGC ATG AGC 1200 His His Pro Thr Val Thr Asp Pro Ser Met Ala Pro Lys Gly Met Ser ACA TTC TAC GCG CTT GTC CCC GTC GCC CAC CTT GGC AAG ATG CCG ATT 1248 Thr Phe Tyr Ala Leu Val Pro Val Ala His Leu Gly Lys Met Pro Ile GAT TGG GAC GTC GAA GGA CCC AAG TTT GAA AAG GCG ATT TTG GAC GAG 1296 Asp Trp Asp Val Glu Gly Pro Lys Phe Glu Lys Ala Ile Leu Asp Glu ATC GGT CGC CGC CTG ATC CCC GAC ATC CAC GAC CGG ATC GTC ACC AAA 1344 Ile Gly Arg Arg Leu Ile Pro Asp Ile His Asp Arg Ile Val Thr Lys TTC AGC TAC GCA CCA AAG GAC TTT CAG GCA GAC CTC AAC GCC CAT ATG 1392 Phe Ser Tyr Ala Pro Lys Asp Phe Gln Ala Asp Leu Asn Ala His Met GGC AGC GCG TTC AGC CTT GAG ACG GTC CTG TGG CAA AGC GCC TAC ATG 1440 Gly Ser Ala Phe Ser Leu Glu Thr Val Leu Trp Gln Ser Ala Tyr Met CGC GGC CAC AAC CGC GAC GAT GTG ATC GAC AAT TTC TAC CTC GTG GGC 1488 Arg Gly His Asn Arg Asp Asp Val Ile Asp Asn Phe Tyr Leu Val Gly GCA GGG ACA CAC CCG GGC GCT GGT ATC CCC GGA GTG GTC GGT AGC GCG 1536 Ala Gly Thr His Pro Gly Ala Gly Ile Pro Gly Val Val Gly Ser Ala AAG GCA ACG GCG GGG CTG ATG CTT GAA GAT CTG TCG GTC AAA TAA 1578 Lys Ala Thr Ala Gly Leu Met Leu Glu Asp Leu Ser Val Lys ***

【００２４】

【配列表】

配列番号：２ 配列の長さ：１３０２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：エリスロバクター・ロンガス（Erythrobacter
longus） 株名：ATCC 14126 ATG AGC GAC TCA GAA ATC GAT AGC GTC CCC AAT GAC GAT AGT TGC GAC 48 Met Ser Asp Ser Glu Ile Asp Ser Val Pro Asn Asp Asp Ser Cys Asp TGC GCA ATC GTT GGC GGC GGA CTT GCT GGC GGG TTG ATT GCG CTT GCG 96 Cys Ala Ile Val Gly Gly Gly Leu Ala Gly Gly Leu Ile Ala Leu Ala CTC CAA CGT GCG CGG CCC GAA TTT CGC ATC CGC GTG ATC GAG GCA GGG 144 Leu Gln Arg Ala Arg Pro Glu Phe Arg Ile Arg Val Ile Glu Ala Gly CGC ACC ATC GGC GGC AAT CAC CGG TGG AGC TGG TTT GAC AGC GAC CTC 192 Arg Thr Ile Gly Gly Asn His Arg Trp Ser Trp Phe Asp Ser Asp Leu TCC GAC GCC GGC CGT GCG CTA CTT GCC GAC TTT CGC CAG ACC GAT TGG 240 Ser Asp Ala Gly Arg Ala Leu Leu Ala Asp Phe Arg Gln Thr Asp Trp GAG GGC GGA TAC GAG GTG CGC TTT CCC AAA TAT CGC CGC AAG CTG AAG 288 Glu Gly Gly Tyr Glu Val Arg Phe Pro Lys Tyr Arg Arg Lys Leu Lys ACC GCC TAT CGC TCG ATG GCA TCG ACC GAT TTC CAC GAA GGG CTT TTG 336 Thr Ala Tyr Arg Ser Met Ala Ser Thr Asp Phe His Glu Gly Leu Leu CGC GCT CTG CCC GAA GGA TCG GTA ATC CTG GGG CGC AAA GCG GTG GGT 384 Arg Ala Leu Pro Glu Gly Ser Val Ile Leu Gly Arg Lys Ala Val Gly TTG GAC GCG CGC GGC GTG GAT TTG GCG CCG TCG CAA TAT GGC CCC GCA 432 Leu Asp Ala Arg Gly Val Asp Leu Ala Pro Ser Gln Tyr Gly Pro Ala ACC CGC ATC AAC GCG CGC AGT GTC ATC GAC TGC CGC AGC TTC AAA CCA 480 Thr Arg Ile Asn Ala Arg Ser Val Ile Asp Cys Arg Ser Phe Lys Pro AGC GCG CAT CTC AAG GGC GGC TGG CAG GTG TTT CTT GGC CGA CAT ATG 528 Ser Ala His Leu Lys Gly Gly Trp Gln Val Phe Leu Gly Arg His Met CGG CTG CAA GAA CCG CAC GGG GTG GAA AAT CCG GTC ATC ATG GAC GCA 576 Arg Leu Gln Glu Pro His Gly Val Glu Asn Pro Val Ile Met Asp Ala ACC GTC GAC CAG CTT GCG CCG CAC GGT AAT GGC GGT TCA TAC CGG TTC 624 Thr Val Asp Gln Leu Ala Pro His Gly Asn Gly Gly Ser Tyr Arg Phe GTC TAT GTT CTT CCC TTG GGA AGC CAC GAT GTC TTT ATC GAA GAC ACC 672 Val Tyr Val Leu Pro Leu Gly Ser His Asp Val Phe Ile Glu Asp Thr TAT TAC GCC GAT GAC CCG CTG CTT GAC CGC AAT GCC TTG TCG GGC CGG 720 Tyr Tyr Ala Asp Asp Pro Leu Leu Asp Arg Asn Ala Leu Ser Gly Arg ATA GAC CAA TAT GCC CGC GCA AAC GGT TGG GAG AAC GGC ACG CCC GTT 768 Ile Asp Gln Tyr Ala Arg Ala Asn Gly Trp Glu Asn Gly Thr Pro Val CAT CAC GAA GCA GGC GTC TTG CCG GTC CTG ACG GGC GGC GAT TTT TCC 816 His His Glu Ala Gly Val Leu Pro Val Leu Thr Gly Gly Asp Phe Ser GCC TAT CAG GAC GAA GTG CGC ATT CCC GGC GTT GCC ATT GCG GGC GCG 864 Ala Tyr Gln Asp Glu Val Arg Ile Pro Gly Val Ala Ile Ala Gly Ala CGC GGC GGG TTT ACC CAT CCG CTG ACC AGC TAC ACC ATG TGC GTC GCG 912 Arg Gly Gly Phe Thr His Pro Leu Thr Ser Tyr Thr Met Cys Val Ala GTC GAA AAC GCG CTT GCC ATG GCC GAG CAA CCT GAC CTC TCG GGC GAG 960 Val Glu Asn Ala Leu Ala Met Ala Glu Gln Pro Asp Leu Ser Gly Glu CAA TTG GCG GCC TTT TTT GAC AGC CGC GCA CGC CGC CAT TGG TCA AAG 1008 Gln Leu Ala Ala Phe Phe Asp Ser Arg Ala Arg Arg His Trp Ser Lys ACG GGA TAC TAC CGG CTG CTT GCG CGT TTC TTG TTC TTC GCG GCC AAG 1056 Thr Gly Tyr Tyr Arg Leu Leu Ala Arg Phe Leu Phe Phe Ala Ala Lys CCG GAG AAG CGC GTC AAG GTG TTC CAA CGC TTT TAC GGA CTT CGC GAA 1104 Pro Glu Lys Arg Val Lys Val Phe Gln Arg Phe Tyr Gly Leu Arg Glu GGG TTG ATC GAG CGG TTC TAT GCC GCG CGC TCA AAC ACC TTC GAT AAG 1152 Gly Leu Ile Glu Arg Phe Tyr Ala Ala Arg Ser Asn Thr Phe Asp Lys GTG CGC GTC CTA TGG GGG GAG CCC CCC GTA GCT ATA CAC TCG GCC ATC 1200 Val Arg Val Leu Trp Gly Glu Pro Pro Val Ala Ile His Ser Ala Ile CTG GCC ATG TTC AAA TCG GGT CCG GCG CTC AAG TCG GAA AAA TCC GAC 1248 Leu Ala Met Phe Lys Ser Gly Pro Ala Leu Lys Ser Glu Lys Ser Asp AGG GGG GTC GCT CAG GCG GCG CTC GAT GAA GAA TTG CAA ACG GAG AAA 1296 Arg Gly Val Ala Gln Ala Ala Leu Asp Glu Glu Leu Gln Thr Glu Lys AGG CCA TGA 1302 Arg Pro ***

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のエリスロバクター・ロンガスＯＣｈ１
０１のＯＲＦ１及びＯＲＦ２付近の制限酵素地図。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｎ 9/02 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:01） Ｃ１２Ｒ 1:01）

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 エリスロバクター属光合成細菌由来のフ
   ィトエンデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子。
2. 【請求項２】 エリスロバクター属光合成細菌由来のリ
   コピンサイクラーゼをコードする遺伝子。
3. 【請求項３】 特許請求項１及び２に記載の遺伝子を含
   有するベクタープラスミド。
4. 【請求項４】 特許請求項３に記載のベクタープラスミ
   ドによって形質転換されたロドバクター属光合成細菌。
5. 【請求項５】 特許請求項４に記載の形質転換体を用い
   ることを特徴とするβ−カロチンの製造方法