JPH08510720A - Compositions and methods for transdermal drug delivery - Google Patents

Compositions and methods for transdermal drug delivery

Info

Publication number
JPH08510720A
JPH08510720A JP6518085A JP51808594A JPH08510720A JP H08510720 A JPH08510720 A JP H08510720A JP 6518085 A JP6518085 A JP 6518085A JP 51808594 A JP51808594 A JP 51808594A JP H08510720 A JPH08510720 A JP H08510720A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
pharmaceutical agent
skin
nucleotide
oligonucleotide
dna
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP6518085A
Other languages
Japanese (ja)
Inventor
イー． セリック，ハロルド
アール． オールデンバーグ，ケビン
Original Assignee
アフィマックス テクノロジーズ ナームロゼ フェンノートシャップ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by アフィマックス テクノロジーズ ナームロゼ フェンノートシャップ filed Critical アフィマックス テクノロジーズ ナームロゼ フェンノートシャップ
Publication of JPH08510720A publication Critical patent/JPH08510720A/en
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A61K31/568—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in positions 10 and 13 by a chain having at least one carbon atom, e.g. androstanes, e.g. testosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/541—Organic ions forming an ion pair complex with the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6957—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a device or a kit, e.g. stents or microdevices
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0002—Galenical forms characterised by the drug release technique; Application systems commanded by energy
    • A61K9/0009—Galenical forms characterised by the drug release technique; Application systems commanded by energy involving or responsive to electricity, magnetism or acoustic waves; Galenical aspects of sonophoresis, iontophoresis, electroporation or electroosmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids

Abstract

(57)【要約】 本発明はイオン電気導入を用いて患者の真皮又は皮ふ層といった膜を横切ってヌクレオチドベースの薬学的作用物質を送り出す方法に関する。   (57) [Summary] The present invention relates to a method of delivering nucleotide-based pharmaceutical agents across a membrane, such as the dermis or skin layer of a patient, using iontophoresis.

Description

【発明の詳細な説明】 経皮的薬物送り出しのための組成物及び方法 関連出願に対するクロスリファレンス 本出願は、1993年１月27日に提出された米国出願第08／009463号の一部継続出 願である1993年６月14日提出の出願第08／077786号の一部継続出願である1993年 ８月16日提出の出願第08／107329号の一部継続出願である。本出願は同様に、19 93年６月14日提出の米国出願第08／077296号の一部継続出願でもある。上述の出 願は全て本書にあらゆる目的のための参考文献として内含されている。 発明の背景 本発明は一般に、患者の真皮又は皮ふ層といった膜を横断して薬学的作用物質 を送り出す方法に関する。より特定的には、本発明はイオン電気導入によりヌク レオチドベースの薬学的作用物質を送り出すための方法に関する。 これまでアプタマー、リボザイム、アンチセンス化合物及び３重らせん薬物と いったヌクレオチドベースの薬物は、一部にはそれらの安全性及び送り出しに関 連する問題のため、治療用作用物質としてはその成功が制限あるものであった。 ヌクレオチドベースの薬学的作用物質は、ヌクレアーゼによる分解に対し敏感な ホスホジエステル基を含む。かかる分解は、その認識特異性に関し配列の無欠性 に依存している薬学的作用物質としてのオリゴヌクレオチド又は核酸の使用に対 し重大な障害となる。従って、天然に発生するオリゴヌクレオチド及び核酸は往 々にして、適切な条件を選ぶべく注意が払われるのでないかぎりインビボさらに はインビトロでさえそれら を分解することになるヌクレアーゼに対する耐性をそれらに付与するべく、化学 的に修正されなくてはならない。 ヌクレオチドベースの薬学的作用物質を含む薬学的又は治療用の作用物質の治 療上の効力は、作用部位に対する適当な用量の薬学的作用物質の送り出しに依存 している。例えば腸内（経口）、非経口（筋内、静脈内、皮下）及び局所的投与 といったものを含む数多くの送り出し様式が開発されてきた。ほとんどの場合に おいて、信頼性の高い用量の送り出し及び便利さを考えて、投与システムが選択 される。 標準的には、調合薬を患者に送り出す最も信頼性の高い手段は、非経口投与で ある。Goodman et al.，Goodman及びGilman“治療学の薬学的基礎”Pergmon Pre ss，Elmsford，New York（1990）及びPratt et al．薬学作用の原理。薬学の基 礎 。Churchill Livingstone，New York，New York（1990）を参照のこと。各々 の非経口メカニズムは、規定用量の薬学的作用物質が、それを輸送できる体内の 流動性区画の中へと確実に挿入されうるようにする。これらの送り出し様式の欠 点は、それが侵入性の手順を必要とするということにある。投与の侵入性は、不 便で、痛みを起し、感染性汚染を受けやすいものである。 腸内及び局所投与は、より便利で一般に無痛であり、感染を受けやすくない。 しかしながら、両方共に制限がある。胃腸及び皮ふの表面は、輸送に対する多大 なバリヤとなり、従ってこれらの表面を横切って吸収されない薬学的作用物質も ある。 患者特異的投与様式（腸内、局所及び皮下）に対するもう１つの欠点はコンプ ライアンスである。短い半減期を有する薬学的作用物質は、回数の多い一日用量 を必要とする。用量回数が増えるにつれて、患者のコンプライアンス及び治療効 力は減少する。単純化され た及び／又は頻繁でない投与計画は、患者のコンプライアンスを最適化する上で 助けとなる。Wilson et al（1991）Harrisonの内科原理、第12版、McGraw-Hill ．Inc．New York，New York。 薬学的投与のより有効かつ便利な様式を開発しようという研究努力により、経 皮的送り出しシステムの開発が行なわれるに至った。数多くの現行の経皮的薬学 的作用物質送り出しシステムは、不活性担体と混合された時点で吸収される薬学 的作用物質に依存するものである。Cooper et al（1987）「浸透エンハンサー」 （“薬物経皮送り出し”第２巻中）Kuodonieus et al.，Eds.，CRC Press，Boca Raton，Floridaを参照のこと。このプロフィールに適合する薬学的作用物質は わずかであり、適合しているものもつねに予想可能な形で吸収されるわけではな い。 その上、皮ふは、水溶性物質の浸透に対する効果的なバリヤであり、経皮的な 薬学的作用物質の吸収速度は、脂質可溶性及び極性によって決定される。きわめ て極性又は水溶性の高い薬学的作用物質は、有効に遮断される。非常に脂質親和 性の高い薬学的作用物質でさえ、細胞膜を横切っての浸透率に比べてきわめて緩 慢に真皮に浸透する。前出のPratt et al.参照。脂質親和性を増強するもののよ うなさまざまな形の化学的エンハンサが、或る種の治療用作用物質と混合された 時点で経皮的輸送を改善し、より予想可能な吸収を提供する目的で、開発されて きた。例えば米国特許4,645,502号、4,788,062号、4,816,258号、4,900,555号、 3,472,931号、4,006,218号及び5,053,227号を参照のこと。担体も同様に、細胞 内輸送を増強させるため薬学的作用物質に結合されてきた。Ames et al．（1973 ）Proc.Natl.Acad.Sci．USA．70；456-458及び（1988）Proc.int.Symp.Cont.Rel .Bioact，Mater，15：142参照。 同様に、経皮的な薬学的作用物質の送り出しを増強させるため、 電気勾配も使用されてきた。Chien et al（1989）薬学ジャーナル、78（5）；35 3-354及びBanga et al．（1988）J.Controlled Release（制御下での放出），7 ：1-14を参照のこと。イオン電気導入として知られているこの技術は、皮ふを通 してのイオン化された薬学的作用物質の送り出し速度を増強するのに、静電力を 用いている。イオン電気導入のためには、薬物分子は、正又は負の電荷を伴って イオン化された状態になくてはならない。 イオン電気導入における薬物送り出し速度は、システム電流に正比例する。す なわち、電流が大きくなればなるほど、駆動力及び薬学的作用物質の送り出しは 大きくなる。標準的には、皮ふ近くのタンク内に薬学的作用物質を保持し、薬学 的作用物質と皮ふの界面をとり囲む電界を生成し皮ふを通して作用物質を駆動さ せる装置が使用される。イオン強度も又、イオン電気導入の薬物送り出し速度に 影響を与える。前出のBangaを参照のこと。イオン強度は、タンク内の薬学的作 用物質の溶液中に存在するさまざまなイオンの濃度に関係づけされる。イオン強 度が大きくなればなるほど（すなわち単位体積あたりのイオン化された粒子が多 くなればなるほど）、イオン濃度は高くなり、電流に対する競争は大きくなる。 送り出し速度に影響を及ぼしうるその他の要因としては、pH、濃度、外来性イオ ン（例えば緩衝溶液からの）、伝導率及び電子的要因が含まれる。 核酸を送り出す方法としては電気穿孔法が使用されてきた。この方法では、組 織透過性の過渡的増大を生成するのに充分な電圧及び時間の電気エネルギーの単 数又は複数のパルスが、組織の１領域に対して適用される。このとき分子を透過 可能にされた組織を横断して移動させるため、温度勾配、圧力勾配、濃度勾配又 は音響又は光学的圧力によって提供されるもののような、電気的、物理的又は化 学的力といった駆動力が利用される。 ヌクレオチドベースの薬物に関連する潜在的な治療上の利点及びその送り出し に関連する問題点のため、制御された形でこれらの薬学的作用物質を送り出すた めの改良型方法、そして特にこれらの薬学的作用物質の生物学的利用能又はその 他の薬学的物性を改善する送り出し方法に対する多大なニーズが存在している。 本発明は、これらのニーズを満たすものである。 発明の要約 本発明は、患者に対し治療上有効な用量で薬学的作用物質を送り出すための方 法において、 −イオン電気導入装置内で、イオン的に帯電した治療上有効な量のヌクレオチド ベースの薬学的作用物質と、患者の皮ふを接触させる段階、及び −薬学的作用物質が経皮的に送り出されるように皮ふとイオン電気導入装置の界 面に電界を適用する段階 を含む方法を提供している。本書に記述されている組成物及び方法は、治療上の 指示に応じて、ヌクレオチドベースの薬学的作用物質を全身的に又は局所的に投 与するために利用することができる。 本発明の好ましい実施態様に従うと、イオン電気導入装置内でヌクレオチドベ ースの薬学的作用物質を送り出すために約0.1〜0.5mAmp／cm2の間の電界が適用 される。この実施態様の結果、約20cm2のドナータンクを有するイオン電気導入 装置について24時間約0.1〜20mg好ましくは0.1〜10mgの薬学的作用物質が送り出 されることになる。 本書に記述されている方法を用いて送り出すことのできるヌクレオチドベース の薬学的作用物質は一般に、約２個〜100個のヌクレオチド、好ましくは約２個 〜50個のヌクレオチド、より好ましくは 約10個〜40個のヌクレオチドを有する核酸及びオリゴヌクレオチドを含むことに なる。代表的な薬学的作用物質としてはアプタマー、リボザイム、アンチセンス 化合物及び３重らせん薬物が含まれる。いくつかの実施態様に従うと、ヌクレオ チドベースの薬学的作用物質は、その送り出しに先立ってLipofectinTMといった リポゾーム製剤と接触させられる。 図面の簡単な説明 図１は、時間（時）の関数としての、流束（ナノグラム（ng）／cm2・時）に 対する塩化ナトリウムのさまざまな濃度の影響を表わすグラフである。 図２は、時間（時）の関数としての流束（ng／cm2・時）に対するオリゴヌク レオチドのサイズの影響を表わすグラフである。 図３は、時間（時）の関数としての流束（ng／cm2・時）に対するオリゴヌク レオチドの濃度の影響を表わすグラフである。 図４は、時間（時）の関数としての流束（ng／cm2・時）に対するLipofectinT M 濃度の影響を表わすグラフである。 図５は、トロンビンアプタマーd(GGTTGGTGTGGTTGG)の構造を表わす。 図６は、時間（時）の関数としての流束（ng／cm2・時）に対するオリゴヌク レオチドのコンホーメーションの影響を表わすグラフである。 発明の詳細な説明 目次 Ｉ．用語法 II．ヌクレオチドベースの薬物のイオン電気導入による送り出し Ａ．概要 Ｂ．アプタマー Ｃ．リボザイム Ｄ．アンチセンス化合物 Ｅ．３重らせん薬物 Ｆ．類似体及び誘導体 Ｇ．二次構造 III．ヌクレオチドベースの調合薬 IV．ヌクレオチドベースの薬学的作用物質のインビトロ試験 Ｖ．ヌクレオチドベースの薬学的作用物質のインビボ送り出し Ａ．治療上の指示事項 Ｂ．用量 Ｃ．イオン電気導入による送り出し Ｉ．用語法 以下の用語は、次の一般的意味をもつよう意図されている。 「薬学的作用物質又は薬物」というのは、患者に適切に投与された時点で望ま しい治療効果を誘発することのできるあらゆる化学的及び生物学的物質、化合物 又は組成物のことである。薬物の中には、不活性形態で販売され、インビボで薬 学的活性をもつ代謝産物に転換されるものもある。本発明においては、「薬学的 作用物質」及び「薬物」というのは、不活性薬物及び活性代謝産物の両方を包含 している。 「経皮的送り出し」とは、物質が毛細血管と接触しその中に吸収される可能性 のある皮ふ又は粘膜といった表皮及び真皮を横切っての物質の輸送のことを言う 。或る種の場合においては、この送り出しは、その他の膜を横切って増強される ことになる。 「増強された経皮的送り出し」というのは、増強されていない経 皮的送り出しに比べて、輸送される物質の等モルプールを利用して一定の表面積 を通して一単位時間あたりに輸送されるモル体積単位での絶対増加及び経皮的送 り出しの簡易化の両方を指す。 「イオン電気導入」又は「イオン電気導入の」という語は、イオン化可能な化 学的化合物と皮ふ又は粘膜の間の界面に対する電界の適用による皮ふ又は粘膜を 通してのイオン化可能な化学物質の導入のことを指す。 「透過性」というのは、バリヤ、膜又は皮ふ層を通して浸透し、全体に広がり 、又拡散する、作用物質又は物質の能力のことである。 「薬学的又は治療上有効な用量又は量」とは、望ましい生物学的結果を誘発す るのに充分な用量レベルのことである。この結果は、薬学的作用物質の経皮的送 り出し又は、疾病の症状、症候群又は原因の緩和、又はその他の望まれる全ての 生物学的系統の変化であると考えられる。 「ヌクレオチド」は、複素環式窒素塩基のＮ−グリコシドのリン酸エステルの ことを指し、非環式及び環式の両方の誘導体を包括するものとする。リン酸エス テルは、位置２′，３′及び／又は５′に存在し得る。一般にグリコシド成分は ペントースであるが、いくつかの実施態様においては、ヘキソースを利用するこ とになる。窒素塩基は、標準的には、アデニン、グアニン、ヒポクサンチン、ウ ラシル、サイトシン及びチミン、及びそれらの類似体又は化学的修正物から成る グループの中から選択される。 「ヌクレオチドベースの薬学的作用物質」又は「ヌクレオチドベースの薬物」 は、オリゴヌクレオチド又は核酸を含む薬学的作用物質又は薬物のことを言う。 「オリゴヌクレオチド」というのは、一般に、標準的に合成的手 段によって調製されるホスホジエステル結合によって連結されたヌクレオチドの 線形配列である。各々のヌクレオチドユニットの位置３′はリン酸エステル基を 介して次のユニットの位置５′に連鎖されている。終端ユニットでは、それぞれ の３′及び５′位置は自由であってもよいし（例えば遊離ヒドロキシル基）又は リン酸化されていてもよい。本発明で利用されるようなオリゴヌクレオチドは、 長さが大幅に変化し、一般に２個〜100個のヌクレオチドである。オリゴヌクレ オチド及び核酸は、その長さ単位で記述することができる。例えば20個のヌクレ オチドを含むオリゴヌクレオチドは「20-mer」と呼ばれ、一方30個のヌクレオチ ドを有するオリゴヌクレオチドは「30-mer」と呼ばれる。 Beaucage及びCarruthers，Tetra.Letts．22：1859-1862（1981）により記述さ れたホスホラミダイト法、又はMatteucci et al.，J.Am.Chem.Soc.，103：3185 （1981）に従ったトリエステル方法、又は市販の自動オリゴヌクレオチド合成装 置といったその他の方法によって、適切なオリゴヌクレオチドを作ることができ る。オリゴヌクレオチドは又、天然に発生するオリゴヌクレオチド骨格の化学的 修正も含むものとする。かかる修正には、シトシン環外アミンでの修正、５−ブ ロモウラシルの置換、バックボーン修正、塩基類似体、メチル化などが含まれる がこれらに制限されるわけではない。以下参照。 「核酸」というのは、１本鎖又は２本鎖の如何に関わらずデオキシリボ核酸（ DNA）又はリボ核酸（RNA）のいずれか、及びそのあらゆる化学的修正のことであ る。かかる修正にはシトシン環外アミンでの修正、５−ブロモウラシルの置換、 バックボーン修正、塩基類似体、メチル化、通常でない塩基対合組合せなどが含 まれるが、これらに制限されるわけではない。以下参照。 「リン酸エステル」というのは、Ｒ，Ｒ′及びＲ″が、水素、アルキル、アリ ル、アリルアルキル及びヘテロアリルから独立して選択されるものとして、一般 構造式RO(PO)(OR′)(OR″)をもつ化合物のことである。 「ホスホジエステル」というのは、リン酸の２つのヒドロキシル基が有機残基 つまり、Ｒ′及びＲ″が水素、アルキル、アリル、アリルアルキル又はヘテロア リルから成るグループの中から独立して選択されるものとしてR′O-PO2H- OR″ でエステル化されている、リン酸エステルのことである。オリゴヌクレオチド及 び核酸は標準的には、近隣のペントースユニットの３′及び５′の位置がリン酸 エステル残基でのエステル化によって連鎖されているホスホジエステルである。 「ホスホラミデート」は、単数又は複数のヒドロキシル基がアミノ基で置換さ れているホスホジエステルのことである。 II．ヌクレオチドベースの薬物のイオン電気導入による送り出し Ａ．概要 本発明の一態様に従うと、制御された形で皮ふといった膜を横切ってヌクレオ チドベースの薬学的作用物質を送り出すための新しい方法が提供されており、か かる方法は、イオン電気導入の使用を通して、アプタマー、リボザイム、アンチ センス化合物及び３重らせん薬物といったヌクレオチドベースの薬学的作用物質 の増強された経皮的輸送を提供している。 ヌクレオチドは、複素環式塩基のグリコシドのリン酸エステルであり、オリゴ ヌクレオチド及び核酸の両方の構造的ユニットである。ヌクレオチド、オリゴヌ クレオチド又は核酸の中に見られる各々のリン酸エステルの官能性は、分子に対 し負の電荷を付与することができる。例えば、20個のヌクレオチドの１本鎖DNA は、約6500と いう分子量及び325ダルトンにつき約１の負の電荷又は−21の正味電荷を有する ことになる。 経皮的電気輸送に適したヌクレオチドベースの薬学的作用物質は、例えば１日 につき50ミリグラム未満といった低い濃度で有効な又は局所的に投与される作用 物質である。腸内で吸収度が低いか又は広範な初回通過の肝臓不活性化を受ける ような薬学的作用物質については、薬学的作用物質の生物学的利用能における著 しい改善を期待することができる。 本発明のシステムによって送り出すことのできるヌクレオチドベースの薬学的 作用物質の例としては、鎮痛剤、麻酔剤、抗真菌薬、抗生物質、抗炎症剤、駆虫 薬、解毒剤、鎮吐薬、抗ヒスタミン剤、血圧降下薬、抗マラリア薬、抗菌剤、抗 精神病薬、解熱薬、防腐薬、抗関節炎薬、抗結核薬、鎮咳薬、抗ウイルス薬、心 臓作用薬、下剤、化学療法剤、抗うつ薬、抑制薬、診断補助剤、利尿剤、去痰薬 、催眠薬、副交感神経興奮薬、鎮静剤、剌激剤、交感神経興奮薬、精神安定剤、 尿路抗感染症薬、血管収縮剤、血管拡張剤などが含まれる。 本発明のヌクレオチドベースの薬物には、アプタマー、リボザイム、アンチセ ンス化合物及び３重らせん薬物が含まれる。ヌクレオチドベースの薬物は標準的 には、約350以上の分子量を有し、約２個から最高約100個のヌクレオチド、好ま しくは約２個〜50個のヌクレオチド、さらに好ましくは約10個〜40個のヌクレオ チドという範囲に及ぶ可能性がある。本書で記述されている方法を用いると、DN Aの電気輸送流束速度は、DNAの分子量によって左右され、DNAの分子量が低いほ ど高い流束速度が起こる。しかしながら、より小さい分子量の薬物で見られるも のに比較できる効率で輸送されうる、特異的コンホーメーションをもつより大き い分子量のオリゴヌク レオチドベースの薬物の副次集団も存在しうるということにも留意すべきである 。 より小さいヌクレオチドベースの薬物の例としては、インフルエンザウイルス に対する潜在的治療活性をもつジヌクレオチド類似体であるGS375といったジ− 及びトリヌクレオチドが含まれるがこれに制限されるわけではない（Gilead Sci ences，Inc.，Foster City，CA）。特に好ましい実施態様においては、ヌクレオ チドベースの薬学的作用物質には、アプタマー、リボザイム、アンチセンス化合 物又は３重らせん薬物が含まれる。 Ｂ．アプタマー アプタマー（又は核酸抗体）は、標準的に長さが約10〜50ヌクレオチド、好ま しくは約15〜30ヌクレオチドである１本鎖又は２本鎖のDNA又は１本鎖RNA分子で ある。アプタマーの例としては、Gileadの抗トロンビン阻害物質GS522及びその 誘導体（Gilead Sciences，Foster City，CA）がある。Macava et al（1993）Pr oc.Natl.Acad.Sci．USA 90 3745-9；Bock et al.（1992）Nature（London）355 ：564-566及びWang et al.（1993）Biochem．32：1899-904も同様に参照のこと 。 アプタマーは、特異的分子標的を結合し、特にレセプター拮抗物質として「タ ンパク質エピトープターゲティング」のために役に立つ。一般に、アプタマーは 、血液中を循環する標的のプールに結合することによって分子標的の作用を阻害 することにより機能する。標準的には、標的はタンパク質を含み、アプタマーは 、競合的結合を通して正常なタンパク質−タンパク質及びタンパク質−レセプタ ー相互作用を分断することになる。細胞表面レセプタに対する拮抗物質として、 アプタマーは、細胞膜に浸透する必要なくその効果を発揮することができる。 分子標的は、外因性又は内因性のいずれかの物質を含むことができる。標準的 には、外因性分子標的を利用する実施態様については、アプタマーと分子標的の 非共有結合によって結びつけられた複合体が生成されることになり、この複合体 は、本書に記述された方法に従って、イオン電気導入により送り出されることに なる。これらの非共有結合で結びつけられた複合体のための解離定数は、標準的 には、塩、２価イオン濃度及び温度の生理学的条件下で、約10-3〜10-15、好ま しくは約10-6〜10-12、さらに好ましくは約10-8〜10-10モル濃度である。解離定 数を測定するための技術は、当該技術分野において周知のものである。例えばPC T公報第WO91／19813号を参照のこと。 一定の与えられた生物分子に対して特異的であり、本書に記されている方法を 用いて送り出すことのできるアプタマーは、当該技術分野において既知の技術を 用いて同定することができる。例えばToole et al.（1992）PCT公報第WO92／148 43号；Tuerk及びGold（1991）のPCT公報第WO91／19813号；Weintraub及びHutchi nson（1992）のPCT公報第92／05285号及びEllington及びSzostak（1990）Nature 346 ：818を参照のこと。簡単に言うと、これらの技術には標準的に、オリゴヌ クレオチドの無作為混合物を用いた分子標的の複合体形成が関与している。アプ タマー分子標的複合体は、複合体形成されていないオリゴヌクレオチドから分離 される。 アプタマーは、分離された複合体から回収され増幅される。このサイクルは、 分子標的に対する最高の親和力をもつアプタマー配列を同定するべく反復して行 なわれる。 Ｃ．リボザイム リボザイムは、ホスホジエステル結合の分割といった化学反応の触媒として作 用することのできる構造化されたRNA分子である。Sy mons（1992）Ann.Rev.Biochem. 71：641-671；Kruger et al.（1982）Cell 31 ：147-157；Zaug及びCech（1986）Science 231：470；Cech et al.（1982）Cel l 31：147-157；Altman，Adv.Enzymol．62，1-36（1989）内の「リボヌクレア ーゼＰ：触媒RNAサブユニットを伴う酵素」中。より特定的に言うと、リボザイ ムは、適切な標的mRNAに対して分子を向けることのできるアンチセンス配列なら びに触媒RNアーゼ活性を含む２機能性RNA分子を含むことができる。リボザイム は、標準的に30〜50ヌクレオチドの長さをもつ。 リボザイムは、望ましいあらゆる１本鎖DNA配列を分割するべく容易に変性又 は合成させることができ、かくして認識される部位についてのわずかな制約条件 があるだけで実質にはあらゆるRNA写しをターゲティングしDNA分子を特徴づけす るために使用することのできるものである。例えばKirn et al.（1987）Proc.Na tl.Acad.Sci．USA 84：8788-8792；Haseloff et al.（1988）Nature 234：585 -591；Cech（1988）JAMA 260：3030-3034；Jeffries et al.（1989）Nucleic A cids Research 17：1371-1377を参照のこと。これらのリボザイム誘導体として は、デオキシリボヌクレアーゼ活性をもつ既知のあらゆるリホザイムの活性部位 を有するあらゆるRNA分子が含まれる。この活性部位は、望まれる一本鎖RNA配列 を特異的に分割するべく変性させることができるものである。このようなRNA分 子は、リボザイムのうちデオキシリボヌクレアーゼ活性のために必要な必須部分 を含んでいることだけが必要である。このようなリボザイムは、当業者であれば 、標準的な技法をいくつでも用いることにより容易に設計することのできるもの であり、これらのリボザイムのうちのどれが活性であるかを決定するのに過度な 実験は全く必要とされない。Cech et al．PCT／US887／03161及びWO88／04300； Lampowitz（1989）Cell 56：323；及びVan der Veen （1986）Cell 44：225；及びMurphy及びCech（1990）Proc.Natl.Acad.Sci．USA 86：9218〜9222を参照のこと。例えば、当該技術分野においては、既知の適切 な条件下でインキュベートさた時特定のホスホジエステル結合にて分割されるも のを１つ含めた２つの別々のオリゴリボヌクレオチドの相互作用によってリボザ イムを構築することができるというのは周知の事実である。例えばUhlenbeck（1 987）Nature 328：590-600；Haseloff及びGerlach（1988）Nature 334：585-5 91を参照のこと。 Ｄ．アンチセンス化合物 遺伝子の不適切な発現の結果もたらされる疾病については、かかる遺伝子の発 現の特異的予防又は減少が理想的な治療法である。原則的には、mRNA内のアクセ ス可能な配列、又は前−mRNA処理にとって必須のものである写し内の配列又は遺 伝子自体の中の配列に対し相補的な一本鎖デオキシヌクレオチド又はリボデオキ シヌクレオチドのハイブリダイゼーションによって、特定の遺伝子産物の産生を 阻害、減少又は制止することが可能である。遺伝子制御に対するこのパラダイム は、往々にしてアンチセンス又はアンチジーン阻害と呼ばれる。 アンチセンス化合物は、特定のタンパク質の生成の原因であるmRNAと結合しそ の産生をできなくする又は防止するよう設計されているオリゴヌクレオチドであ る。アンチセンス化合物には、個々のmRNA種に対して特異的にハイブリッド形成 できmRNA種の転写及び／又はRNA処理及び／又はコードされたポリペプチドの翻 訳を妨げかくしてそれぞれのコードされたポリペプチドの量の減少を行なうこと のできるアンチセンスRNA又はDNA、１本鎖又は２本鎖オリゴヌクレオチド又はそ れらの類似体が含まれる。Ching et al．Proc.Natl.Acad.Sci．USA. 86：10006 -10010（1989）；Broder et al．Ann. Int.Med. 113；604-618（1990）；Loreau et al．FEBS Letters 274：53-56（ 1990）；Holcenberg et al．WO91／11535；USSN．07／530165（「新しいヒトCRI PTO遺伝子」）；WO91／09865；WO91／04753；WO90／13641；WO91／13080，WO91 ／06629及びEP386563）。 アンチセンス化合物は、疾病をひきおこすか又は疾病に関与する単数又は複数 のタンパク質の形成をインビボで阻害することにより治療的機能を提供する。或 る種の遺伝子伝令RNA又はウイルス配列に対して相補的なアンチセンス化合物が 、ウイルス及びレトロウイルス感染性作用物質に関連する疾病の蔓延を阻害する ものであるということが報告されてきた。（例えばMatsukura et al（1987）Pro c.Natl.Acad.Sci．USA 84：7706及びその中で引用されている参考文献を参照の こと）。 アンチセンス化合物は標準的に少なくとも約15の連続するヌクレオチドの配列 を含んでいるものの、本書に記されている方法を用いると、さまざまな長さのア ンチセンス化合物を送り出すことができる。アンチセンス化合物の例としては、 G1128（Genta.Inc．San Diego，CA），OL（1）p53（Lynx Pharmaceuticals），A mpligen（Hemm Pharmaceuticals），Isis 1082及びIsis 2105（Isis Pharmaceut icals，Carisbad，CA）が含まれる。 Ｅ．３重らせん薬物 オリゴヌクレオチドは同様に、３重らせん形成を介して２重鎖のDNAに結合し 、転写及び／又はDNA合成を阻害することもできる。例えば、Maher et al．（19 89）Science 245：725-730を参照のこと。３重らせん薬物（３本鎖薬物とも呼ば れる）は、２本鎖DNAの配列に結合し、例えばHIV及び単純ヘルペスウイルスなど のウイルス遺伝子及びガン遺伝子といった疾病の原因となる遺伝子の転写を 選択的に阻害することを目的とするオリゴヌクレオチドである。すなわち、これ らは、細胞核においてタンパク質の産生を停止させるのである。これらの薬物は 、細胞のゲノムの中で２本鎖DNAに直接結合して３重らせんを形成し、かくして 細胞が標的タンパク質を作るのを防ぐ。例えば、PCT公報第WO92／10590，WO92／ 09705，WO91／06626号及び米国特許第5176996号を参照のこと。標準的には、３ 重らせん薬物は約20〜40ヌクレオチドの範囲内でDNAオリゴヌクレオチドを含む ことになる。 Ｆ．類似体と誘導体 オリゴヌクレオチド（例えばアプタマー、リボザイム、アンチセンス化合物及 び３重らせん薬物）の部位特異性は、ホスホジエステル結合の修正又はオリゴヌ クレオチド末端の化学的修正によって著しく影響されない。その結果、これらの オリゴヌクレオチドは化学的に修正され得、全体的結合安定性を増強し、化学的 分解に関する安定性を増大し、オリゴヌクレオチドが細胞内に輸送される速度を 増大させ、分子に対して化学的反応性を付与することになる。アンチセンス療法 において役立つさまざまなオリゴヌクレオチドを構築するための一般的アプロー チは、ファンデルKrol et al（1988）Biotechniques 6：958-976及びStein et al．（1988）Cancer Res．48：2659-2668によって再検討されてきた。 従って、アプタマー、リボザイム、アンチセンス化合物及び３重らせん薬物は 同様に、関連する標的配列に対する特異的ハイブリダイゼーション又はこの配列 との連合がオリゴヌクレオチドの機能的特性として保持されるかぎり、ヌクレオ チドの置換、付加、欠失又は転位を含むこともできる。例えば、いくつかの実施 態様は、その天然に発生するリン酸ジエステル相対物に比べてヌクレアーゼによ る分解に対してさらに耐性をもちかくしてインビボでのより高い持 久性及びより大きい潜在能をもつことが予想されるホスホロチオエート類似体を 利用することになる。（例えば、Camphell et al，（1990），J.Biochem.Biophy s.Methods 20，259-267参照）。オリゴヌクレオチドのホスホルアミデート誘導 体も又、相補的ポリヌクレオチドに対し結合し共有結合形付着されたリガンド種 を収納する付加的な能力をもつことが知られており、本発明の方法に基づいて考 慮することができるだろう。例えば、Froehler et al.（1988）Nucleic Acids R es. 16（11）：4831を参照のこと。 いくつかの実施態様においては、ヌクレオチドベースの薬学的作用物質は、Ｏ −メチルリボヌクレオチドを含むことになる（EP公報第360609号）。キメラオリ ゴヌクレオチドも同様に使用できる（Dagle et al．（1990）Nucleic Acids Res . 18：4751）。いくつかの応用分野については、薬学的作用物質はポリアミド 核酸（Nielsen et al．（1991）Science 254：1497及びPCT公報第WO90／15065 号）又はその他のカチオン性誘導体（Letsinger et al（1988）J.Am.Chem.Soc. 110：4470-4471）を含むことになる。その他の応用分野では、ホスホジエステ ル結合のうちの単数又は複数のものが、PCT公報第WO92／05186及び91／06556号 に記述されているとおり２−４原子の長さのヌクレオシド間結合といった同配体 基又はホルムアセタル基（Matteucci et al.（1991），J.Am.Chem.Soc. 113：7 767-7768）又はアミド基（Nielsen et al．（1991）Science 254：1497-1500） により置換されているような、オリゴヌクレオチドが利用される可能性がある。 さらに、例えば、糖又は塩基が化学的に修正されているヌクレオチド類似体を 、本発明において利用することができる。プリン及びピリミジンの「類似の」形 態とは、当該技術分野において一般に知られているものであり、その多くが化学 療法剤として用いられる。 網羅的でない一覧表の例として挙げられるものには、４−アセチルシトシン、５ −（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブ ロモウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カ ルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、Ｎ6−イ ソペンテニルアデニン、１−メチルアデニン、１−メチルプソイドウラシル、１ −メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチ ルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、 Ｎ6−メチルアデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル 、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオ シン、５′メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メ チルチオ−Ｎ6−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエ ステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン、シュードウラシ ル、キューオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チ オウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキ シ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、シュードウラシル、 キューオシン、２−チオシトシン、及び２，６−ジアミノプリンが含まれる。さ らに、ハロゲン化された塩基により従来の塩基が置換されている。その上、塩基 上の２′−フラノース位置は帯電していない粗大基の置換を有する可能性がある 。帯電していない粗大基の例としては、有枝アルキル、糖及び有枝糖がある。 末端修正は同様に、オリゴヌクレオチド薬学的作用物質についての細胞型特異 性、薬物速度論、核透過性及び絶対細胞摂取率を修正するのに有用な手順をも提 供する。例えば、５′及び３′末端での置換には、細胞摂取を改善する粗大基及 びその他の種に対するヌク レオチドベースの薬学的作用物質の共有橋がけ結合を可能にする反応基が含まれ る。例えば、オリゴデオキシヌクレオチド：遺伝子発現のアンチセンス阻害物質 （1989）Cohen，Ed.，CRC Press：ガン及びエイズのためのアンチセンス核酸療 法の見通し （1991），Wickstrom.Ed.，Wiley-Liss：遺伝子調節：アンチセンスR NA及びDNAの生物学 （1992），Erickson及びIzant，Eds.，Raven Press：及びア ンチセンスRNA及びDNA （1992），Murray，Ed.，Wiley-Lissを参照のこと。アン チセンス化合物に関係する一般的方法については、アンチセンスRNA及びDNA，（ 1988），D.A.Melton，Ed.，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harb or，NYを参照のこと）。 Ｇ．DNAの二次構造 ポリヌクレオチド鎖は、自由な回転が回りに存在する複数の結合を含んでいる 。鎖間の相互作用が全く存在しない状態で、各々の単量体は、その隣接する単量 体との関係において自由に回転することになる。かかる鎖の３次元形態は、ラン ダムコイルと呼ばれる；これは、連続的に形状を変える幾分かコンパクトで球状 の構造である。しかしながら、鎖の要素の間の数多くの相互作用（例えば水素結 合、疎水性相互作用、イオン結合、ファンデルワールス相互作用及びジスルフィ ド結合）のため、ランダムコイルとしては、わずかな核酸分子しか存在しない。 DNA構造はきわめて変化に富んでいる。２本鎖Ｂらせんが支配的な形であるも のの、Ａらせん、Ｚらせん、円形及び球形DNAを含む、付加的ならせん及びその 他の形態が存在する。さらに、tRNAは、ストランド間塩基対合及びループの形成 を可能にする下流セグメントとの高度の塩基相補性をもつセグメントを含むリボ 核酸の１本鎖で構成されている。その結果、tRNAは、４つの軸が相補的塩基配列 及び水素結合した塩基から成る２本鎖のらせんセグメントを表わし ているクローバーの葉に似た塩基対合した２重らせんセグメントで構成された高 度の二次構造を含んでいる。 以下の理論による束縛を望む者ではないが、ポリアクリルアミド及びアガロー スゲル電気泳動での類推によると、オリゴヌクレオチドベースの薬学的作用物質 のコンホーメーションは、拡張したコンホーメーションの「締まりのない」コン ホーメーションに比べてコンパクトなオリゴヌクレオチドほど皮ふをより容易に 横断して、オリゴヌクレオチドの電気輸送速度に対し影響を及ぼすと予想するこ とができる。換言すると、拡張したコンホーメーションは、コンパクトな又はコ ンホーメーションに制約のあるオリゴヌクレオチドの輸送がその比較的大きい横 断面積のために遅くなる可能性がある一方で、角質層内の流路を通って振り切っ て突き進んでいる可能性がある。 このコンホーメーションの効果は、アプタマーが密に折り畳まれた構造を採用 するものとして示唆されてきたことから、重大なものでありうる（Wang et al（ 1993）Biochemistry 32：1899-1904参照）。一方、リボザイムは標準的に、相補 的なヘヤピン触媒性の、ならびに構造化されていない１本鎖のアンチセンス領域 の両方で構成されることになる（Zaug et al（1986）Nature 324：429〜433参 照）。又これとは対照的に、個々のアンチセンス化合物は、標準的にいかなる固 有の二次構造も有さない。かくして、これらのヌクレオチドベースの薬学的作用 物質は、そのコンホーメーションに応じて異なる電気輸送挙動を示す可能性があ ると考えられる。驚くべきことに、我々は、オリゴヌクレオチドのコンホーメー ションが、電気輸送流束速度に対し著しい影響を及ぼさないように思われるとい うことを発見した。これらの結果は、図６に示されている。 III．ヌクレオチドベースの調合薬の組成物 ヌクレオチドベースの薬学的作用物質のイオン電気導入による送り出しに適用 されるように、本発明は、薬学的作用物質が治療上有効な量で送り出されうるよ うにする電荷対質量比をもつヌクレオチドベースの薬学的作用物質を提供する。 標準的には、このような組成物の電荷対質量比は5000ダルトンあたり１個の電荷 、より標準的には2500ダルトンあたり１個の電荷を上回ることになる。好ましく は、電荷対質量比は、1000ダルトンあたり１個の電荷、より好ましくは500ダル トンあたり１個の電荷に等しいか又はそれ以上である。 ヌクレオチドベースの薬学的作用物質は、水性アルコール、プロピレングリコ ール及びジメチルスルフォキシドなど受容可能な生理学的担体溶液と混合して、 組成物を皮ふとの接触及びイオン電気導入による送り出しに適したものにするこ とができる。受容可能な生理学的担体には、有効成分の有効度又は生物学的活性 と干渉せずしかも投与対象の宿主に対し有毒でない溶液が含まれている。適切な 担体を選択し適切な混合物を処方するための周知の技術は、本書中に参考文献と して内含されているBanga et al.前出；Lattin et al（1991）Ann.N.Y.Acad.Sci .，618：450；及びRemington's Pharmaceutical Science、第15版、Mack Publis hing Company，Easton，Pennsylvania（1980）の中で例示されている。 標準的には、担体溶液は、オリゴヌクレオチドに加えてその他のイオン種も含 む。例えば、これらのイオン種は、溶液のpHを維持するために存在することので きる緩衝溶液から生じ得る。電気輸送のクーロンメカニズムから予想されるよう に、最高の輸送効率を達成するためには、オリゴヌクレオチド又は、DNA自体は 別にして、全てのイオン種の濃度が最小限におさえられなければならない。より 特定的に言うと、担体溶液中の塩濃度を増大することにより、結果 としてDNAの電気輸送速度の明確な減少がもたらされるということを我々は発見 した。これらの結果は表１に示されている。 いくつかの実施態様に従うと、LipofectinTM（BRL.Gaithersburg，Mdから入手 可能、Felgner et al．（1987）Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：7413を参照）、 つまりDOTMA（Ｎ−（１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ， Ｎ−トリメチルアンモニウム塩化物）が、ヌクレオチドベースの薬学的作用物質 と組合わせて利用されることになる。LipofectinTMは、DNAと相互作用して脂質 −DNA複合体を形成するカチオン性及び中性の脂質のリポソーム製剤である。例 えば、Felgner et al．（1989）Nature 337：387参照。脂質−DNA複合体と細胞 の融合は、見かけ上、細胞内へのDNAの効率の良い移送という結果をもたらし、 これは一般に培養中の哺乳動物の細胞のトランスフェクション効率を増大するた めに用いられる。驚くべきことに、我々は、DNAに対し少量のLipofectinTMを付 加することによってDNAの電気輸送がわずかに増強されることを発見した。これ らの結果は図４に示されている。 その他の実施態様に従うと、その他のリポソーム製剤、例えばジオレオイルホ スファチジルエタノールアミンと組合わせた３−β〔Ｎ−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル −アミノエタン）−カルバモイル〕コレステロール（Gas及びHuang（1991）Bioc hem.Biophys.Res.Commun ，179；280-5参照）；又はリポポリリジン（すなわちＮ −グルタリルホスファチジルエタノールアミンに接合され平均してPLL分子１つ につき２つのリン脂質を含む低分子量（Mr約3000）のポリ（Ｌ−リジン）（PLL ）、Zhou et al（1991）Biochem.Biophys.Acta．1065：8-14を参照）を含むもの が使用されることになる。リポソーム製剤は同様に、pH−感応性リポソーム（例 えば２：１のモル比でコレステリルヘミスクシネート及びジオレオイルホスファ チジルエタノー ルアミンから成る）又はpH感応性でないリポソームを含むこともできる。 LipofectinTM又はもう１つのリポソーム製剤が本書に記述されている組成物及 び方法と組合わせて使用される場合、添加物は、標準的には約１μｇ〜100μｇ ／ml好ましくは約２〜50μｇ／ml、より好ましくは約２〜25μｇ／mlの量でドナ ータンク内に存在することになる。 ヌクレオチドベースの薬学的作用物質に加えて、組成物は、染料、顔料、不活 性充てん材又はその他の透過性エンハンサー、賦形剤及び当該技術分野において 既知の薬学製品及び経皮的治療系の従来の成分といったその他の物質を含むこと ができる。従って本発明のいくつかの実施態様に従うと、化学的エンハンサー（ すなわち浸透又は透過エンハンサー）がイオン電気導入装置のドナータンク内に 取り込まれ、イオン電気導入輸送速度を変えるために利用される。例えば、皮ふ に対するオレイン酸の同時塗布は、透過性や輸送に対し逆比例する皮ふのインピ ーダンス又は抵抗の大幅な減少をひき起こす。Potts et al（1992），Solid Sta te Ionics 53-56；165-169を参照のこと。かくして、シャント経路（例えば小 胞及び汗管など）をまず最初に通過する電流に代わって、電流を構成するイオン （例えばヌクレオチドベースの薬学的作用物質）は、より低い電流密度で角質層 の脂質環境により均質に透過することができる。代替的には、化学的エンハンサ ーの使用は、化学的エンハンサーが無い状態で同じ電流密度において見られる輸 送速度と比べて、増大したヌクレオチドベースの薬学的作用物質のイオン電気導 入輸送速度を可能にすることだろう。 本書に記述した組成物及び方法を使用すると、ヌクレオチドベースの薬学的作 用物質の電気輸送流束速度は、濃度に依存した形で増 大することが発見された。これらの結果は、図３に示されている。一般にヌクレ オチドベースの薬学的作用物質は、約１〜約500mg／ml好ましくは約５〜約200mg ／mlの範囲内の量でイオン電気導入装置のタンク内に存在し、装置は、約20cm2 のドナータンクをもつイオン電気導入装置について24時間の時間中、約0.1〜20m g好ましくは約0.1及び10mgのヌクレオチドベースの薬学的作用物質を送り出すこ とができるだろう。 IV．ヌクレオチドベースの薬学的作用物質のインビトロ試験 薬学的作用物質のインビトロ皮ふ透過速度は、拡散セルを用いて測定すること ができる。角質層がドナー区画に面した状態で、拡散セルの下半分上にヒト、マ ウス又はブタの皮ふを置く。ドナー区画は、薬学的作用物質と、陰極を収納して いる。レシーバ区画は、緩衝溶液と陽極を収納している。電流が印加され、輸送 された薬物の量を計算することができる（μｇ／cm2・時）。代替的には、角質 層上に、試験すべき薬学的作用物質を収納するイオン電気導入装置を置くことが できる。レシーバ区画は再び緩衝溶液を含むことになる。装置は起動され、輸送 された薬物の量を計算することができる（μｇ／cm2・時）。 薬学的作用物質のインビトロ皮ふ透過速度を測定するためには、従来のフロー ・スルー拡散セルを使用することもできる。標準的には、これらのセルの有効面 積は１cm2であり、受入れ体積は３mlである。一般に等張食塩水又は緩衝溶液で あるレセプタ流体は、セル内へ又これを通して、ぜん動ポンプにより圧送される 。自動分画収集装置内に配置されたガラスのバイアル内に、試料を収集すること ができる。皮ふを横切って透過する薬物の量（μｇ／cm2・時）は累加的放出か ら計算される。 薬学的作用物質の電気輸送挙動は、従来の分析技法及びゲル又は 毛管電気泳動法を用いて評価することもできる。従来の拡散セル試験において切 除された皮ふに対し調製物測定を行なうこともできる。Lattin et al．前出を参 照のこと。 Ｖ．ヌクレオチドベースの薬学的作用物質のインビボ送り出し Ａ．治療上の指示事項 本書中で記述されている組成物及び方法は、制限的な意味なく以下に記述され たものを含むさまざまな疾病の治療において用いられる。本書に記述されている 組成物及び方法は、治療上の指示事項に応じて、ヌクレオチドベースの薬学的作 用物質の全身的又は局所的投与のいずれかのために利用できる。 例えば、ヌクレオチドベースの薬学的作用物質は、ガン遺伝子、真菌遺伝子及 び皮ふ内で特異的に活性化されることがわかっているその他のあらゆる遺伝子を 含むさまざまな潜在的標的遺伝子の発現を防止するよう設計することができる。 これらの薬学的作用物質はこのとき、黒色腫、カポージ肉腫、乾癬病巣、及び真 菌に感染した皮ふなどに直接送り出すことができる。本書に記述されている組成 物及び方法は、ヒト乳頭腫ウイルスによってひき起こされる性器ゆうぜい及びヘ ルペスウイルスによってひき起こされる感染を含む、皮ふ及び粘膜のウイルス、 真菌及び細菌性の感染症の治療において用いられる。 さらに、本発明は、サイトカイン、成長因子、細胞付着分子又はそれらのリガ ンド及びそのレセプタならびに炎症に通じる経路内の主要酵素を含む、炎症の媒 介物質を遮断するため直接ヌクレオチドベースの薬学的作用物質の治療用組成物 の送り出しを提供する。より特定的にいうと、これらの遮断作用には、サイトカ イン（例えばIL−１）、成長因子（例えばTGF−α及びEGF）又は細胞付着分子（ 例えばELAM及びICAM）；又はサイトカイン（例えばIL−１）、成長 因子又は細胞付着分子に対するレセプタの発現を妨げることが含まれる。発現が 遮断されうる主要酵素には、タンパク質キナーゼＣ及びホスホリパーゼＡ又はＣ が含まれる。かくして、本発明の１つの態様に従うと、本書に記されている複合 体の局所的又は経皮的製剤は、炎症等を緩和するため直接ひざ又はその他の関節 に塗布される。 さらにもう１つの態様においては、乾癬（例えば、IL−１、TGF−α、アンフ ィレグリン又はIL−６の発現を遮断することによる）、アトピー性皮ふ炎及び湿 疹（例えばIgEの過剰発現を遮断することによる）；リウマチ様関節炎；アレル ギー性鼻炎（例えばIL−４の発現を遮断することによる）、などといった不適切 な免疫又は炎症応答が関与していた状態の治療のために、本書に記述されている 組成物及び方法を使用することができる。さらにもう１つの態様においては、本 書に記述されている組成物及び方法は、例えば、細胞の成長及び／又は付着を促 進し転移に関与すると考えられている或る種の因子の発現を遮断することによっ て、黒色腫、菌状息肉腫及び偏平上皮ガン（頸部ガンを含む）といった皮ふ及び 粘膜の或る種のガンを治療するために利用できる。 本書中に記述されている組成物及び方法は同様に、「経皮的ゲノキュレーショ ン」のためにも使用できる。Watanabe et al（1993）Proc.Natl.Acad.Sci 90： 4523-4527及びBiowaris Today「ゲノキュレーションがマウス体内で免疫応答を 誘発する」1993年５月17日、を参照のこと。より特定的に言うと、進行した黒色 腫を患う宿主に、リポソーム外被内に取り込まれた不適合なヒト主要組織適合遺 伝子複合体（MHC）遺伝子を接種した。誘発形の結腸腺ガン又は腺維肉腫をもつB ALB／ｃマウスにおいて、腫瘍を誘発する数日前にMHC遺伝子で動物を予備処理し ておくことにより、生存日数が２倍にな るということがわかった。この「ゲノキュレーション」は、MHCタグそしてさら に重要なことに通常免疫系が見えずしかも体の免疫応答が悪性組織を認識及び破 壊するのを妨げている腫瘍抗原に対する、細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘発するもの と考えられている。従って、本発明の１つの態様は、免疫応答をillict（？）す るためMHC遺伝子のイオン電気導入による送り出しを提供している。 Ｂ．用量 本発明に従うと、治療上又は薬学的に有効な量のヌクレオチドベースの薬学的 作用物質が、かかる作用物質を必要とする患者に対してイオン電気導入によって 送り出される。本書に記述されている組成物及び方法は、予防及び／又は治療を 目的として利用することができる。治療用としては、これらの組成物は、上述の とおり、すでに疾病に苦しむ患者に対して、その疾病及びその合併症の兆候を治 ゆするか又は少なくとも部分的に停止させるのに充分な量で投与される。これを 達成するのに適切な量は「治療上有効な量又は用量」として定義される。この使 用のために有効な量は、疾病の重症度及び経過、以前の療法、患者の健康状態及 び薬物応答、そして治療担当医の判断によって左右される。従来のヌクレオチド ベースの薬学的作用物質の標準的用量については、例えばPhysicians Desk Refe rence （1992年度版）及び米国医学協会（1992）Drug Evaluations Subscription s を参照のこと。 予防目的の場合には、ヌクレオチドベースの薬学的作用物質は、特定の疾病に かかりやすい又はその危険性のある患者に対して投与される。かかる量は、「予 防上有効な量又は用量」として定義づけされている。この使用においても、精確 な量は、患者の健康状態、体重などにより左右される。 患者の状態にひとたび改善が見られたならば、必要に応じて維持 用量を投与することができる。その後、投与の用量又は頻度又はその両方を、症 状に応じて、改善された状態が保持されるレベルまで低減させることができる。 症状が望ましいレベルまで緩和された時点で、治療を止めることができる。しか しながら、患者は、疾病の症状が再発した時点で長期ベースで間欠的治療を必要 とする可能性がある。 一般に、本書に記述された方法に従ってイオン電気導入により送り出すことの できる適切な有効用量のヌクレオチドベースの薬学的作用物質は、20cm2のドナ ータンクを有するイオン電気導入装置及び約0.5mAmps／cm2未満の電流を用いて 一日あたり一受容個体につき約0.1〜約10ミリグラム（mg）の範囲の量、好まし くは一日あたり約0.5〜約５mgの範囲内そして最も好ましくは約0.5〜約１mgの量 である。 Ｃ．イオン電気導入による送り出し 本書に記述されているヌクレオチドベースの薬学的作用物質は、イオン電気導 入を用いて経皮的に投与可能である。この形の投与には、標準的に、患者の体循 環中への薬物の経皮的通過のための薬学的作用物質の送り出しが関与する。しか しながらヌクレオチドベースの薬学的作用物質は同様に、類似体の局所的投与の ためのイオン電気導入を用いて病的な又は罹患した組織に直接送り込むこともで きる。皮ふの部位には、前腕、腹部、胸部、背部、殿部、乳頭様部域などにより 代表される、薬物を経皮的に投与するための解剖学的領域が含まれる。 治療用組成物は、標準的なイオン電気導入装置によって送り出すことができる 。一般にイオン電気導入というのは、可溶性の塩のイオンを体の組織内へと電流 を用いて導入することである。より特定的に言うと、イオン電気導入は、適当な 電極極性の適用時点で、送 り出すべきイオン分子（又はこれらのイオンの前駆物質）を含む電解質溶液を通 しての電流の通過により組織（例えば患者の皮ふを通して）内にイオンの（帯電 した）種を移送することが関与するプロセス及び技術である。すなわち、イオン は、電解質タンクに起電力を印加することにより、電解質タンクから組織内へと 移送される。イオン電気導入システムにおいては、放出速度はまず電圧又は電流 によって制御される。 現在さまざまなイオン電気導入装置が知られている。例えば、Phipps et al， 米国特許第4744788号；Phipps et al．米国特許第4747819号；Tapper et al．欧 州特許出願公報第0318776号；Jacobsen et al．欧州特許出願公報第0299631号； Petelenz et al．米国特許第4752,285号；Sanderson et al.米国特許第4722726 号；Phipps et al．米国特許第5125,894号及びParsi米国特許第4731,049号；Bad zinski et al．（1993）米国特許第5207752号；Gvory et al.（1993）米国特許 第5203768号；Gvory et al．（1992）米国特許第5162,042号；Phipps（1992）PC T公報第WO 92／17239号；Landran et al（1992）PCT公報第WO 92／15365号；Gvo ry et al．（1992）カナダ特許公報第2042994号；Gvory et al．（1992）米国特 許第5158,537号；Gvory et al.（1992）PCT公報第WO 92／07618号；Myers et al ．（1992）米国特許第5147297号；Gvory et al．（1992）米国特許第5147297号 ；Gvory et al．（1991）カナダ特許公報第2015597号；Gvory et al．（1992） 米国特許第5084006号；Gvory et al，米国特許第5162,043号；Haak et al.（199 2）米国特許第5167616号；Gvory et al.（1990）PCT公報番号90／09413号；Thee uwes et al（1992）米国特許第5080646号；Theeuwes et al.（1992）米国特許第 5147,296号；Theeuwes et al（1992），米国特許第5169,382号；Theeuwes et al .（1992）米国特許第5169383号；Theeuwes（1990 ）米国特許第4978337号；Moodie et al（1992）米国特許第5125894号；Haak et al.（1990）米国特許第4927408号；を参照のこと。なおこれらの各々の開示はそ の全体が参考として本書に内含されている。 標準的な従来の電気輸送又はイオン電気導入装置においては、一般に２つの電 極が使用される。両方の電極共、皮ふと電極の間を移動するにつれて間に電流が 通過する２つの遠隔した電解質収納タンクを標準的に用いて、患者（ヒト又は動 物）のいずれかの部分（標準的には皮ふ）と密に電気接触するように配置されて いる。一般に、活性電極は、帯電したイオン又は帯電したイオンに対する前駆物 質として治療用種を含んでおり、輸送は、帯電した治療用種に対する起電力の印 加を通して起こる。適切な電位が、皮ふとの電気的接触状態で２つの電極システ ム（陽極と陰極）の間で開始される。皮ふを通して正に帯電した薬物が送り出さ れなくてはならない場合、陽極と結びつけられたタンクで正に帯電した薬物種を 方向づけすることによって、適切な起電力を発生させることができる。同様にし て、皮ふを横切って移送されるべきイオンが負に帯電している場合、陰極にタン ク内の薬物を位置づけすることにより、適当な起電力を生成させることができる 。当然のことながら、一定の与えられた時間に、正に帯電した薬物と負に帯電し た薬物の両方を患者の体内に移送するために単一のシステムを利用することもで きるし、又、選択された作業の間、単一のシステムから１つ以上の陰極薬物及び ／又は１つ以上の陽極薬物を送り出すこともできる。 電極と電気的に接触した患者の皮ふと共に、回路は、直流としての電気エネル ギーの供給源例えばバッテリー又は適切に修正された交流供給源に対して２つの 電極を接続することによって補完される。イオン電気導入についての一般的論述 に関しては、Tyle（1989）J.Pharm.Sci 75：318：Burnette，「Transdermal Drug Delivery（経皮的薬物 送り出し）」中のイオン電気導入（第II章）Hadgratt及びGuv（eds.）Marcel De kker.Inc.：New York，NY；Phipps et al（1988）Solid State Ionics（固相イ オン）28-30：1778-1783：Phipps et al（1989），J.Pharm．Sciences 78：365 -369：及びChrin et al.（1988）．J.Controlled Release ７：1-24を参照のこ と。なおこれらの開示はその全体が本書に参考として内含されている。 「電極」というのは、作業中電流が中を通過する導電性の部材のことである。 白金から銀−塩化銀に至るさまざまな電極材料がこれらの装置のために利用可能 である。これらの材料における主たる差異は、皮ふを横断して電位を生成するそ の能力にあるのではなく、むしろこの機能に関するそれらの性能に付随する或る 種の特徴にある。例えば、白金電極は、水を加水分解して水素イオンを遊離し、 その後pHが変わる。明らかにpHの変化は、治療用作用物質のイオン化状態及び結 果として得られるそのイオン電気導入輸送速度に影響を及ぼしうる。一方、銀− 塩化銀電極は、水を加水分解しない。しかしながらこれらの電極は、電流に誘発 される輸送に対し競合し得る塩化物イオンの存在を必要とする。 電気輸送装置は一般に、体内へと移動されるか又は導入されるべき種（又はか かる種の前駆物質）の供給源としてのタンクを必要とする。タンクは標準的には 、電解質溶液例えば水性電解質溶液又は親水性で電解質を含有したゲル又はゲル マトリクス、半固体、泡、又は吸収性材料のプールを含むことになる。このよう な薬学的作用物質のタンクは、イオン電気分解装置の陽極又は陰極に電気的に接 続された場合、電気輸送のための単数又は複数のイオン種の供給源を提供する。 数多くのイオン電気導入装置が、選択的に透過性ある膜を利用する。この膜の 組成は、システムの特別なニーズに応じて変化し、電解質タンクの組成すなわち 薬学的作用物質の性質、タンクの外への電流の移動及び特定のタイプの帯電した 及び帯電していない種の輸送に対する望ましい選択性によって左右される。当該 技術分野において知られているような微孔性重合体又はヒドロゲルを利用するこ とが可能である。例えば、米国特許第4927,408号参照のこと。 望まれる透過性の度合、複合体の性質及び装置の構成に関連する機械的考慮事 項に基づいて、適切な透過性膜材料を選択することができる。透過性膜材料の例 としては、さまざまな天然及び合成の重合体、例えば、ポリジメチルシロクサン （シリコンゴム）、エチレンビニルアセテート共重合体（EVA）、ポリウレタン 、ポリウレタン−ポリエーテル共重合体、ポリエチレン、ポリアミド、ポリ塩化 ビニル（PVC）、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリテトラフルオロエチ レン（PTFE）、セルロース材料、例えば三酢酸セルロース及び硝酸セルロース／ 酢酸セルロース及びヒドロゲル例えば２−ヒドロキシエチルメタクリレート（HE MA）が含まれる。 一般に、タンクの環境を電極と同じ電荷に維持するべくタンク内に緩衝液もと り込まれることになる。標準的には、電流に対する競合を最小限におさえるため 、薬物と反対の電荷をもつ緩衝液が利用される。例えば、いくつかの状況の下で は、適切な塩が使用されるとき、薬物はそれ自体の緩衝液として作用することが できる。輸送速度に影響を及ぼしうるその他の変数としては、薬物濃度、緩衝液 濃度、イオン強度、非水性助溶剤及び製剤中のその他のあらゆる成分が含まれる 。しかしながら、以上で論述したとおり、最高の輸送効率を達成するためには、 薬学的作用物質を除く全てのイオン種の濃度は最小限におさえられる。 薬物送り出しシステムの裏当て又はエンクロージャは主としてタンク又はマト リクスのための機械的支持体として意図されている。最も単純なケースにおいて は、マトリクスは宿主の皮ふ又は膜に対し直接露呈され、裏当ては、標準的にマ トリクスが接着材として作用している状態で、皮ふに対して固定することのでき るストリップ又はパッチである。このような構造において、裏当ては通常複合体 に対して不透過性のものである。この不透過性により、複合材の損失は抑制され る。適当な裏当て材料は、一般に薄く可とう性であるフィルム例えば織布及び不 織布及び重合体フィルム例えばポリエチレン、ポリプロピレン、及びシリコンゴ ム；金属フィルム及び金属箔などである。 送り出し装置は、それが皮ふを通しての薬学的作用物質の輸送を可能にするか ぎりにおいて、マトリクスの接着材、マトリクスの周囲に沿った接着剤、テープ 又はゴム又はその他のあらゆる手段により、所定の位置に保持することができる 。装置は、腕、腹部、大腿部などといった皮ふ又は真皮表面のあらゆる部分に設 置することができる。その上、装置はさまざまな形状をしていてよく、単数又は 複数の複合体及び／又は輸送部域で構成されていてよい。望ましい装置の特性に 応じて、治療用製品のその他の従来の構成要素といった他の品目を装置内に収納 することができる。 イオン電気導入による従来の局所的治療においては、治療すべき皮ふ領域のサ イズに対応するサイズをもつ湿性パッドタイプの電極を通して直流が印加される 。完全な接触を行ない、あらゆる皮ふの熱傷を防ぎ、皮ふ抵抗を克服し、金属板 表面上に形成された焼灼性の金属化合物を皮ふが吸収しないようにするためには 、電極板と皮ふの間の湿性パッドの介在が必要である。 薬物は、それと同じ電荷をもつ電極を通して投与され、反対の電 荷をもつ薬物への戻り電極が体表面上の中性部位に置かれる。このとき、オペレ ータは、患者の苦痛閾値レベルよりも低い電流の強さを選択し、適当な長さの時 間、電流を通す。電流が皮ふ組織から戻り電極まで進む間、皮ふを通して移送さ れたイオンが、真皮−表皮接合部において微小循環により取り上げられる。電流 密度はゆっくりと増大し、治療時間中維持され、次に治療の終りでゆっくりと減 少する。電流は、一般に電極表面１cm2につき0.5mAmp未満である電流密度で、患 者の快適な忍耐の範囲内になければならない。 治療用組成物は標準的なイオン電気導入装置により送り出すことができる。利 用可能なイオン電気導入装置の差異のため、使用手順も変動しうる。適切な薬学 的作用物質の送り出しのためには、メーカーの使用説明書を遵守しなければなら ない。輸送及び生物変換の有効性を測定するために、複合体にされていない薬学 的作用物質の体液又は血液レベルが決定されることになる。 本発明の一態様は、ヌクレオチドベースの薬学的作用物質の局所的投与のため 病的な又は罹患した組織にこのヌクレオチドベースの薬学的作用物質の治療的組 成物の送り出しを提供している。ヌクレオチドベースの薬学的作用物質は、ガン 遺伝子、真菌遺伝子及び皮ふ内で特異的に活性化されるべきものとして知られて いるその他のあらゆる遺伝子を含むさまざまな潜在的標的遺伝子の発現を妨げる ように設計することができる。これらの薬学的作用物質はこのとき、本書で記述 されている方法を用いて、黒色腫、カポージ肉腫、乾癬病巣、及び真菌感染した 皮ふなどに直接送り出すことができる。さらに、本発明は、炎症などを緩和する べくひざ又はその他の関節に対するヌクレオチドベースの薬学的作用物質の治療 用組成物の直接的送り出しを提供する。 本発明は、以下の例を参照することによりさらに完全に記述及び 理解できることだろう。これらの例は、例示のみを目的として示されるものであ り、制限的意味は全くない。当業者であれば、基本的に類似の結果を生み出すよ うに変更又は修正可能なさまざまな重要でないパラメータを容易に評価できるこ とだろう。 実験 材料 オリゴヌクレオチドは、市販のものを入手するか、又は市販のオリゴヌクレオ チド合成装置（例えばApplied Biosystems 394型オリゴヌクレオチド合成装置） 及びシアノエチルホスホルアミダイト化学を用いて得られた。DNAを32Ｐ及びＴ ４ポリヌクレオチドキナーゼで末端標識づけし、逆相クロマトグラフィにより、 取込まれていないATPから厳重に精製した。 さらに、当該技術分野において周知の技術を用いて、無作為のサイズの放射線 標識づけされた１本鎖のオリゴヌクレオチド及び核酸の収集物を生成することが できる。例えば、Taq DNAポリメラーゼ、ジデオキシヌクレオチドトリホスフェ ート及び32Ｐで標識付けされたオリゴヌクレオチドプライマ又は32Ｐ，33又は35 Ｓで標識付けされたデオキシヌクレオシドのいずれかを用いたDNA鋳型からの多 数回のDNA合成を行なうことができる。Promegaのプロトコルと応用指針、第２版 Promega Corp.Madison，WI（1991）を参照のこと。 さらに、DNAポリメラーゼなどによる放射線標識付けされたデオキシヌクレオ シドの取込みのためのプライマ−鋳型接合部を作り上げるべく、それぞれDnase １又はランダムオリゴヌクレオチドプライマを使用する放射線標識付けつまり「 ニックトランスレーション」又は「ランダムプライマ合成」が後に続くDNAのBal 31ヌクレアーゼ消化を含む、さまざまなその他の方法のいずれかを使用すること ができる。標識付けされたDNAは、より高次の高分子構造が確実 に形成されるようにするため、その鋳型に対し充分余剰のモル数で存在しなくて はならず、又検出可能な構造が全く欠如していなくてはならない（鋳型配列へと 技術処理されているのでないかぎり）。標識付けされたフラグメントの混合物の 試料のサイズ分布は、標準DNA配列決定ゲル及びオートラジオグラフィを用いて 電気泳動により査定することができる。Sambrook et al．molecular Cloning（ 分子クローニング）を参照のこと。標準的には約５−200のヌクレオチドから延 びる均等に標識付けされたフラグメントの分布が作り出される。 当該技術分野において既知の技術により、合成膜、無毛のモルモット、不毛の マウス又はヒト（生体又は死体の）の皮ふを調製することができる。本書で記述 する実験ではあつらえのテフロン拡散セルが利用されていたが、当業者であれば 、従来の市販の拡散セルで使用するように方法を容易に修正することが可能であ る、ということがわかるであろう。 無作為の20-merが、室温でPBS中６時間のインキュベーションの間インビトロ での調製されたばかりの無毛のマウスの皮ふの真皮又は表皮表面のいずれかによ り分解に対して耐性があることがわかった。インビトロでの無毛マウスの皮ふを 通してイオン電気導入された無作為の20-merは、ポリアクリルアミドゲルの電気 泳動とそれに続くオートラジオグラフィ及び対照のDNA標準との比較により判断 されるとおり、無傷であることが示された。 例１ 一般的方法 0.2mlのドナー及びレセプタ体積をもつあつらえのテフロン製セルの中に、室 温で無毛マウスの皮ふ１cm2につき0.3mAmpの定電流で、無毛マウスの皮ふを挿入 した。テストすべき化合物を、皮ふ又 は膜の外側で「ドナー」チャンバ内の適切な緩衝液中に置いた。適切な緩衝液を 含む「カウンタ」チャンバが皮ふ又は膜の内側に置かれる。ドナーチャンバには 、塩化銀（AgCl）陰極が収納され、レセプタチャンバには銀（Ag）陽極が収納さ れていた。陽極からのDNAの送り出しを試みる実験が行なわれた。しかしながら 測定可能な流束速度は全く見られなかった。同様にして、いかなる電流も印加さ れない受動輸送実験も行なった。ここでもDNAの測定可能な流束は全く発見され なかった。 電流の印加に続いて、カウンタチャンバから試料を抜きとり分析する。試料採 取は、まず最初に望まれる細胞内で緩衝液を混合し、0.025mlの溶液をとり除き 、直ちにその代りに0.025mlの作りたての緩衝液を入れることによって行なわれ た。気づいた場合を除いて、全てのドナーセルは、30ミリモル（mM）の塩化ナト リウム（NaCl）、50mMのMOPS、pH６及び50mg／mlの32Ｐ−標識付けされたオリゴ ヌクレオチドを含み、レセプタはオリゴヌクレオチド以外の同じものを含んでい た。 DNA輸送の程度は、オリゴヌクレオチドのキナーゼ末端標識付けの後計算され た比活性の値を用いてシンチレーション計数に従って決定された。全ての流束実 験は、３回行なわれ、平均値をプロットした。輸送は又、抗体媒介反応、活性検 定を用いて、又はテスト化合物を、酵素的に又は代謝的に放射線予備標識付けし 放射能を監視することによっても評価できる。 例２ 塩濃度の影響 ３つの異なるNaCl（６mM，30mM及び150mM）濃度での無作為の20-mer DNAの電 気輸送をテストした。ドナー及びレセプタセルは等量のNaClを収納していた。DN A自体が実際に電流を運ぶことによって輸 送される電気輸送のクーロンメカニズム（DNAが溶剤の流れと共に運ばれる受動 的電気浸透メカニズムとは異なる）から予想されるとおり、塩濃度を増大させか くして電流コンダクタンスに対するDNAのわずかな貢献を減少させることにより 、DNA流束が著しく減少するという結果がもたらされた。テストされた最低のNaC l濃度において（６mM）、DNA流束は、おそらくはレセプタセル内のイオン枯濁を 理由として４時間のタイムポイントの後劇的に降下した。これらの結果は図１に 示されている。 例３ オリゴヌクレオチドのサイズの影響 無作為DNAの３つの異なるサイズ（20-mer，30-mer及び40-mer）についての電 気輸送流束速度が決定された。DNAの３つのサイズクラスの各々についての電荷 密度は事実上同一であったが、DNAの分子量には6500〜13000ダルトンの幅があっ た。流束速度は分子量の増大と共に急速に減少し、40-merは20-merの速度の約５ 分の１の速度で輸送していることがわかった。これらの結果は図２に示されてい る。 例４ オリゴヌクレオチド濃度の影響 ３つの異なるドナーDNA濃度（５mg／ml，50mg／ml及び200mg／ml）での無作為 20-merの電気輸送流束速度を測定した。流束速度は、濃度に依存する形で増大す ることがわかっており、テストされた最高の濃度（200mg／ml）は亜飽和である と思われる。この実験は、150mMのNaCl濃度で行なわれた。30mMのNaCl濃度を説 明するべく補正される場合、１mg／cm2・時を上回る流束速度が、無作為20-mer 1mlにつき200mgのドナー濃度について予想されることになる。これらの結果は図 ３に示されている。 例５ LipofectinTM濃度の影響 LipofectinTMとして市販されている〔１−（２，３−ジオレイロキシ）プロピ ル〕−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアンモニウム塩化物は、DNAと相互作用して脂質 −DNA複合体を形成する中性脂質とカチオン性脂質のリポソーム製剤である。例 えばFelgner et al（1989）Nature 337-387を参照のこと。受動的経皮薬物送り 出しのための送り出しビヒクルと同じ量のリポソームが使用されてきており、我 々はDNAとLipofectinTMとの複合体形成により複合体は角質層内で疎水性経路に 対しよりアクセス可能なものとなる可能性があり、かくして流束の増強という結 果がもたらされると考えた。代替的には、LipofectinTMは直接透過性エンハンサ ーとして作用している可能性もある。 ドナーセル内で無作為DNA 20-merに対しLipofectinTMを付加した。LipofectinTM はDNAの電気輸送をわずかに増強することがわかった。これらの結果は、図４ に示されている。 例６ DNAコンホーメーションの影響 15−ヌクレオチドのトロンビンアプタマーｄ（GGTTGGTGTGGTTGG）配列番号１ の電気輸送速度（Bock et al.（1992）Nature 355：564-566）を無作為DNA 20- merのものと比較した。堆積されたＧ四分染色体と３ループの対で構成されるア プタマーの構造は、NMR分析により演繹され図５で示されている。DNAのコンホー メーションは電気輸送流束速度に対して評価できる影響を全く与えないと思われ た。これらの結果は図６に示されている。 以上の記述は例示的なものであり制限的なものではないということを理解すべ きである。以上の記述を再検討した時点で、当業者に は数多くの実施態様が明らかになることだろう。従って本発明の範囲は、以上の 記述を参照してではなく添付のクレームならびにかかるクレームに付与されてい る最大の等価物範囲を参考にして決定されるべきである。 本発明は、明確さと理解を目的として幾分か詳しく以上で記述されてきた。特 許公報を含む全ての論文及び参考文献の開示は、本書中に参考として内含されて いる。添付のクレームの範囲内で、変更及び修正を行なうことが可能である。 Detailed Description of the Invention Compositions and methods for transdermal drug delivery Cross reference to related application   This application is a continuation of a portion of US application Serial No. 08/009463 filed January 27, 1993. 1993, a continuation-in-part application of application 08/0877786 filed on June 14, 1993 It is a partial continuation application of application 08/107329 filed on August 16th. This application also It is also a partial continuation application of US application No. 08/077296 filed on June 14, 1993. The above mentioned All applications are incorporated herein by reference for all purposes. BACKGROUND OF THE INVENTION   The present invention generally relates to pharmaceutical agents across a membrane such as the dermis or skin layer of a patient. Regarding how to send out. More specifically, the present invention provides A method for delivering a reotide-based pharmaceutical agent.   Until now, with aptamers, ribozymes, antisense compounds and triple helix drugs These nucleotide-based drugs are related in part to their safety and delivery. Due to a series of problems, its success as a therapeutic agent has been limited. Nucleotide-based pharmaceutical agents are sensitive to nuclease degradation. Contains a phosphodiester group. Such degradation is due to the integrity of the sequence with respect to its recognition specificity. To the use of oligonucleotides or nucleic acids as pharmaceutical agents depending on It becomes a serious obstacle. Therefore, naturally occurring oligonucleotides and nucleic acids are In vivo, unless care is taken to select the appropriate conditions Even those in vitro Chemistry to confer on them resistance to nucleases that will degrade the Must be corrected.   Treatment of pharmaceutical or therapeutic agents, including nucleotide-based pharmaceutical agents. Therapeutic efficacy depends on the delivery of appropriate doses of pharmaceutical agent to the site of action are doing. For example enteral (oral), parenteral (intramuscular, intravenous, subcutaneous) and topical administration A number of delivery modalities have been developed, including, among others. In most cases The dosing system is selected in consideration of reliable delivery of dose and convenience. To be done.   Typically, parenteral administration is the most reliable means of delivering pharmaceuticals to patients. is there. Goodman et al.,Goodman and Gilman “Pharmaceutical Basis of Therapeutics”Pergmon Pre ss, Elmsford, New York (1990) and Pratt et al.The principle of pharmaceutical action. Basis of pharmacy Foundation . See Churchill Livingstone, New York, New York (1990). Each The parenteral mechanism of is that in the body a prescribed dose of a pharmaceutical agent can transport it. Make sure it can be inserted into the fluid compartment. Lack of these sending styles The point is that it requires an intrusive procedure. The invasiveness of administration is It is a stool and is painful and susceptible to infectious contamination.   Enteral and topical administration is more convenient, generally painless, and less susceptible to infection. However, both have limitations. The surface of the gastrointestinal and skin is very Barriers, and therefore pharmaceutical agents that are not absorbed across these surfaces. is there.   Another drawback to patient-specific modes of administration (enteral, topical and subcutaneous) is comp It is a Alliance. Pharmaceutical agents with short half-lives are often used in frequent daily doses Need. As the number of doses increases, patient compliance and therapeutic efficacy The power decreases. Simplified And / or infrequent dosing regimens may help optimize patient compliance. It helps. Wilson et al (1991)Harrison's Internal Medicine Principles, 12th Edition, McGraw-Hill ． Inc. New York, New York.   Through research efforts to develop more effective and convenient modes of pharmaceutical administration, Development of a skin delivery system has been carried out. Many current transdermal pharmaceuticals The active agent delivery system is a pharmaceutical system that is absorbed when mixed with an inert carrier. It depends on the active substance. Cooper et al (1987) “Penetration enhancer” (“Transdermal drug delivery”Volume 2) Kuodonieus et al., Eds., CRC Press, Boca  See Raton, Florida. Pharmaceutical agents that fit this profile Slight and not always conformingly absorbed in a predictable way Yes.   Moreover, the skin is an effective barrier against the penetration of water-soluble substances, The rate of absorption of pharmaceutical agents is determined by lipid solubility and polarity. Fine Highly polar or water soluble pharmaceutical agents are effectively blocked. Very lipophilic Even highly active pharmaceutical agents have a very low rate of penetration across cell membranes. Pervasively penetrates the dermis. See Pratt et al., Supra. That enhances lipophilicity Various forms of chemical enhancers mixed with certain therapeutic agents Developed at the point of time to improve transdermal transport and provide more predictable absorption Came. For example, U.S. Pat.Nos. 4,645,502, 4,788,062, 4,816,258, 4,900,555, See 3,472,931, 4,006,218 and 5,053,227. Similarly for carriers, cells It has been linked to pharmaceutical agents to enhance internal transport. Ames et al. (1973 ) Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 70; 456-458 and (1988) Proc.int.Symp.Cont.Rel See Bioact, Mater, 15: 142.   Similarly, to enhance transdermal drug delivery, Electrical gradients have also been used. Chien et al (1989) Pharmaceutical Journal, 78 (5); 35. 3-354 and Banga et al. (1988) J. Controlled Release, 7 : See 1-14. This technique, known as iontophoresis, cuts through the skin. Electrostatic force to enhance the delivery rate of ionized pharmaceutical agents Used. For iontophoresis, the drug molecule carries a positive or negative charge. It must be in the ionized state.   The drug delivery rate in iontophoresis is directly proportional to system current. You That is, the greater the current, the more the driving force and the delivery of the pharmaceutical agent. growing. Typically, the pharmaceutical agent is retained in a tank near the skin and An electric field that surrounds the interface between the active agent and the skin is generated to drive the active agent through the skin. Device is used. Ionic strength also affects the drug delivery rate of iontophoresis. Influence. See Banga, supra. Ionic strength depends on the pharmaceutical activity in the tank. It is related to the concentration of various ions present in the solution of the substance of interest. Ionic strength The greater the degree (i.e. the more ionized particles per unit volume The higher the ion concentration, the greater the competition for current. Other factors that can affect the delivery rate are pH, concentration, and exogenous ion. (E.g. from a buffer solution), conductivity and electronic factors.   Electroporation has been used as a method for delivering nucleic acids. In this way, Of electrical energy of sufficient voltage and time to produce a transient increase in fabric permeability. Several or more pulses are applied to one area of tissue. At this time, the molecule penetrates To move across the enabled tissue, temperature gradients, pressure gradients, concentration gradients or Is electrical, physical or chemical, such as that provided by acoustic or optical pressure. A driving force such as a scientific force is used.   Potential therapeutic benefits associated with nucleotide-based drugs and their delivery Due to problems associated with the delivery of these pharmaceutical agents in a controlled manner Improved method for, and especially the bioavailability of these pharmaceutical agents or There is a great need for delivery methods that improve other pharmaceutical properties. The present invention meets these needs. SUMMARY OF THE INVENTION   The present invention provides a method for delivering a pharmaceutical agent to a patient in a therapeutically effective dose. In law, -In the iontophoresis device, an ionically charged therapeutically effective amount of nucleotides. Contacting the patient's skin with the base pharmaceutical agent, and The field of skin and iontophoresis devices so that the medicinal agent is transdermally delivered. Applying an electric field to a surface Is provided. The compositions and methods described herein are therapeutic Administer nucleotide-based pharmaceutical agents systemically or locally as directed. It can be used to give.   According to a preferred embodiment of the present invention, the nucleotide probe is placed in an iontophoresis device. About 0.1 ~ 0.5mAmp / cm to deliver the pharmaceutical active substance2Electric field between is applied To be done. The result of this embodiment is about 20 cm.2Ion introduction with multiple donor tanks The device delivers about 0.1-20 mg, preferably 0.1-10 mg, of the pharmaceutical agent for 24 hours. Will be done.   Nucleotide bases that can be delivered using the methods described herein The pharmaceutical agents of are generally about 2 to 100 nucleotides, preferably about 2 nucleotides. ~ 50 nucleotides, more preferably To include nucleic acids and oligonucleotides having about 10-40 nucleotides Become. Typical pharmaceutical agents are aptamers, ribozymes, antisense Compounds and triple helix drugs are included. According to some embodiments, the nucleo Cid-based pharmaceutical agents can be delivered by Lipofectin prior to their delivery.TMsuch as Contacted with a liposome formulation. Brief description of the drawings   Figure 1 shows the flux (nanograms (ng) / cm) as a function of time (hours).2・ When 6 is a graph showing the effect of various concentrations of sodium chloride on sodium chloride.   Figure 2 shows the flux (ng / cm) as a function of time (hours).2・ Time) 5 is a graph showing the effect of leotide size.   Figure 3 shows the flux (ng / cm) as a function of time (hours).2・ Time) It is a graph showing the influence of the concentration of reotide.   Figure 4 shows the flux (ng / cm) as a function of time (hours).2・ Time) against LipofectinT M It is a graph showing the influence of concentration.   FIG. 5 represents the structure of the thrombin aptamer d (GGTTGGTGTGGTTGG).   Figure 6 shows the flux (ng / cm) as a function of time (hours).2・ Time) 6 is a graph showing the effect of leotide conformation. Detailed Description of the Invention                                 table of contents I. Terminology II. Delivery of nucleotide-based drugs by iontophoresis   A. Overview   B. Aptamer   C. Ribozyme   D. Antisense compound   E. FIG. Triple helix drug   F. Analogs and derivatives   G. Secondary structure III. Nucleotide-based pharmaceuticals IV. In vitro testing of nucleotide-based pharmaceutical agents V. In vivo delivery of nucleotide-based pharmaceutical agents   A. Treatment instructions   B. dose   C. Delivery by ion electric introduction I.Terminology   The following terms are intended to have the following general meanings.   “Pharmaceutical agent or drug” is desired when properly administered to a patient. Any chemical or biological substance or compound capable of inducing a new therapeutic effect Alternatively, it means a composition. Some drugs are sold in an inactive form and are Some are converted to biologically active metabolites. In the present invention, “pharmaceutical "Agent" and "drug" include both inactive drugs and active metabolites. are doing.   "Percutaneous delivery" means that a substance may come into contact with and be absorbed by capillaries. Refers to the transport of a substance across the epidermis and dermis, such as dermal skin or mucous membranes. . In some cases, this delivery is enhanced across other membranes It will be.   "Enhanced percutaneous delivery" is a non-enhanced process. Constant surface area using equimolar pool of transported material compared to skin delivery Absolute increase and percutaneous delivery in molar volume units delivered per unit time through It refers to both the simplification of the start.   The terms "ion electrotransfer" or "ion electrotransfer" refer to ionizable The skin or mucous membrane by the application of an electric field to the interface between the biological compound and the skin or mucous membrane. Refers to the introduction of ionizable chemicals through.   "Permeable" means that it penetrates through the barrier, membrane or skin layer and spreads throughout It also refers to the ability of an agent or substance to diffuse.   "Pharmaceutically or therapeutically effective dose or amount" induces a desired biological result. Dose level sufficient to control The result is a transdermal delivery of the pharmaceutical agent. Relief or alleviation of disease symptoms, syndromes or causes, or any other desired It is considered to be a change in biological system.   “Nucleotide” refers to a phosphate ester of a N-glycoside of a heterocyclic nitrogen base. It is meant to include both acyclic and cyclic derivatives. Phosphate es Tells may be present at positions 2 ', 3'and / or 5'. In general, the glycoside component is Pentose, but in some embodiments, hexose may be utilized. Becomes Nitrogen bases are typically adenine, guanine, hypoxanthine, Consists of racil, cytosine and thymine, and their analogues or chemical modifications Selected from the group.   "Nucleotide-based pharmaceutical agent" or "nucleotide-based drug" Refers to a pharmaceutical agent or drug containing an oligonucleotide or nucleic acid.   The term "oligonucleotide" generally refers to a standard synthetic procedure. Of nucleotides linked by phosphodiester bonds prepared by steps It is a linear array. Position 3'of each nucleotide unit has a phosphate group It is linked to position 5'of the next unit via. In the termination unit, 3'and 5'positions may be free (eg free hydroxyl groups) or It may be phosphorylated. Oligonucleotides as utilized in the present invention include The length varies significantly, generally from 2 to 100 nucleotides. Oligonucle Otides and nucleic acids can be described in their length units. For example, 20 pieces Oligonucleotides containing octides are called "20-mers", while 30 nucleotides Oligonucleotides with nucleotides are called "30-mers".   Beaucage and Carruthers, Tetra. Letts. 22: 1859-1862 (1981). Phosphoramidite method, or Matteucci et al., J. Am. Chem. Soc., 103: 3185. (1981) triester method, or commercially available automated oligonucleotide synthesis equipment. Other methods, such as It Oligonucleotides are also chemically derived from the naturally occurring oligonucleotide backbone. Modifications shall also be included. Such modifications include modifications with cytosine exocyclic amines, 5-bu Includes lomouracil substitution, backbone modification, base analogs, methylation, etc. Are not limited to these. See below.   "Nucleic acid" refers to deoxyribonucleic acid (whether single-stranded or double-stranded) DNA) or ribonucleic acid (RNA), and any chemical modifications thereof. It Such modifications include modifications with cytosine exocyclic amines, substitution of 5-bromouracil, Includes backbone modification, base analogs, methylation, unusual base pairing combinations, etc. However, it is not limited to these. See below.   "Phosphate ester" means that R, R'and R "are hydrogen, alkyl, ari. Independently selected from aryl, allylalkyl and heteroaryl, A compound having the structural formula RO (PO) (OR ') (OR ").   "Phosphodiester" means that the two hydroxyl groups of phosphoric acid are organic residues. That is, R'and R "are hydrogen, alkyl, allyl, allylalkyl or heteroaryl. R'O-PO as independently selected from the group consisting of lil2H- OR ″ Is a phosphoric acid ester that has been esterified with. Oligonucleotide and And nucleic acids typically have a phosphate at the 3'and 5'positions of neighboring pentose units. It is a phosphodiester linked by esterification at an ester residue.   “Phosphoramidate” refers to the replacement of one or more hydroxyl groups with amino groups. Phosphodiester. II.Delivery of nucleotide-based drugs by iontophoresis A.Overview   In accordance with one aspect of the present invention, nucleos are controlled across membranes such as skin in a controlled manner. New methods are provided to deliver tide-based pharmaceutical agents The method of administration is through the use of iontophoresis, aptamers, ribozymes, Nucleotide-based pharmaceutical agents such as sense compounds and triple helix drugs Providing enhanced transdermal delivery of   Nucleotides are phosphate esters of glycosides of heterocyclic bases, It is a structural unit of both nucleotides and nucleic acids. Nucleotides, oligonunes The functionality of each phosphate ester found in the cleotide or nucleic acid is associated with the molecule. However, a negative charge can be imparted. For example, a single-stranded DNA of 20 nucleotides Is about 6500 Has a negative charge of about 1 per 325 daltons or a net charge of -21 per 325 daltons It will be.   Nucleotide-based pharmaceutical agents suitable for transdermal electrotransport include, for example, 1 day Effective or locally administered effects at concentrations as low as less than 50 milligrams per It is a substance. Poorly absorbed or undergoes extensive first-pass liver inactivation in the intestine Such pharmacological agents are described in Bioavailability of Pharmaceutical Agents. You can expect new improvements.   Nucleotide-based pharmaceuticals deliverable by the system of the invention Examples of agents are analgesics, anesthetics, antifungals, antibiotics, anti-inflammatory agents, anthelmintic Drug, antidote, antiemetic, antihistamine, antihypertensive, antimalarial, antibacterial, anti Psychotic, antipyretic, antiseptic, antiarthritic, antituberculous, antitussive, antiviral, heart Visceral agents, laxatives, chemotherapeutic agents, antidepressants, inhibitors, diagnostic aids, diuretics, expectorants , Hypnotics, parasympathomimetics, sedatives, stimulants, sympathomimetics, tranquilizers, It includes urinary tract anti-infectives, vasoconstrictors, vasodilators and the like.   The nucleotide-based drugs of the present invention include aptamers, ribozymes, antisep Compounds and triple helix drugs. Nucleotide-based drugs are standard Has a molecular weight of about 350 or more, preferably from about 2 up to about 100 nucleotides, preferably Preferably about 2 to 50 nucleotides, more preferably about 10 to 40 nucleotides. It can reach the range of chid. Using the method described in this document, the DN The electrotransport flux rate of A depends on the molecular weight of DNA, and the molecular weight of DNA is low. High flux rates occur. However, the ones found in smaller molecular weight drugs Larger size with a specific conformation that can be transported with comparable efficiency to High molecular weight oligonuc It should also be noted that there may be a subpopulation of reotide-based drugs .   Examples of smaller nucleotide-based drugs include influenza virus Dinucleotides such as GS375, a dinucleotide analogue with potential therapeutic activity against And trinucleotides, but are not limited thereto (Gilead Sci. ences, Inc., Foster City, CA). In a particularly preferred embodiment, the nucleo Tide-based pharmaceutical agents include aptamers, ribozymes, antisense compounds. Thing or triple helix drug is included. B.Aptamer   Aptamers (or nucleic acid antibodies) are typically about 10-50 nucleotides in length, preferably Preferably single- or double-stranded DNA or single-stranded RNA molecules of about 15 to 30 nucleotides is there. Examples of aptamers include Gilead's antithrombin inhibitor GS522 and its There is a derivative (Gilead Sciences, Foster City, CA). Macava et al (1993)Pr oc.Natl.Acad.Sci. USA   90 3745-9; Bock et al. (1992)Nature(London)355 : 564-566 and Wang et al. (1993)Biochem. 32See also: 1899-904 .   Aptamers bind specific molecular targets, especially as receptor antagonists. Useful for "protein epitope targeting". In general, aptamers Inhibits the action of molecular targets by binding to a pool of targets circulating in the blood To work. Typically, the target will contain the protein and the aptamer will , Normal protein-protein and protein-receptor through competitive binding -It will disrupt the interaction. As an antagonist to the cell surface receptor, Aptamers can exert their effects without having to penetrate the cell membrane.   Molecular targets can include substances that are either exogenous or endogenous. Standard For an embodiment utilizing an exogenous molecular target, the A non-covalently bound complex will be created, and this complex will Is to be delivered by iontophoresis according to the method described in this document. Become. The dissociation constants for these non-covalently bound complexes are standard Under physiological conditions of salt, divalent ion concentration and temperature, there are about 10-3~Ten-15, Preferred About 10-6~Ten-12, And more preferably about 10-8~Ten-TenMolar concentration. Dissociation Techniques for measuring numbers are well known in the art. PC for example See T Publication WO 91/19813.   Specific to a given biomolecule, the methods described in this document are Aptamers that can be delivered using known techniques in the art. Can be used to identify. For example, Toole et al. (1992) PCT Publication No. WO92 / 148 43; Tuerk and Gold (1991) PCT Publication No. WO 91/19813; Weintraub and Hutchi. nson (1992) PCT Publication No. 92/05285 and Ellington and Szostak (1990)Nature 346 : See 818. Simply put, these techniques are standard Involvement of complexation of molecular targets with a random mixture of cleotide. Up Tamer molecular targeting complex separated from uncomplexed oligonucleotide To be done.   The aptamer is recovered and amplified from the separated complex. This cycle is Iteratively performed to identify the aptamer sequence with the highest affinity for the molecular target. Be played. C.Ribozyme   Ribozymes are engineered to catalyze chemical reactions such as cleavage of phosphodiester bonds. It is a structured RNA molecule that can be used. Sy mons (1992)Ann.Rev.Biochem.  71: 641-671; Kruger et al. (1982)Cell  31 : 147-157; Zaug and Cech (1986).Science  231: 470; Cech et al. (1982)Cel l   31: 147-157; Altman, Adv. Enzymol. 62, 1-36 (1989) Pase: an enzyme with a catalytic RNA subunit ”. More specifically, rebosai Is an antisense sequence that directs the molecule to the appropriate target mRNA. And bifunctional RNA molecules that contain catalytic RNase activity. Ribozyme Typically has a length of 30-50 nucleotides.   Ribozymes are easily denatured or split to split any desired single-stranded DNA sequence. Can be synthesized and thus has slight constraints on the sites recognized Characterizes DNA molecules by targeting virtually any RNA transcript It can be used to Kirn et al. (1987)Proc.Na tl.Acad.Sci. USA   84: 8788-8792; Haseloff et al. (1988)Nature  234: 585 -591; Cech (1988)JAMA  260: 3030-3034; Jeffries et al. (1989)Nucleic A cids Research   17: See 1371-1377. As these ribozyme derivatives Is the active site of any known lipozyme with deoxyribonuclease activity. Any RNA molecule having This active site is the desired single-stranded RNA sequence. Can be modified so as to be specifically divided. Such RNA content The offspring are essential parts of the ribozyme that are required for deoxyribonuclease activity. Need only be included. Such ribozymes are , That can be easily designed by using any number of standard techniques And is excessive in determining which of these ribozymes are active. No experiment is needed. Cech et al. PCT / US887 / 03161 and WO88 / 04300; Lampowitz (1989)Cell 56: 323; and Van der Veen (1986)Cell  44: 225; and Murphy and Cech (1990).Proc.Natl.Acad.Sci. USA   86: See 9218-9222. For example, any suitable known in the art When it is incubated under various conditions, it is split by a specific phosphodiester bond. By the interaction of two separate oligoribonucleotides, including one of It is a well known fact that im can be constructed. For example Uhlenbeck (1 987)Nature  328: 590-600; Haseloff and Gerlach (1988)Nature  334: 585-5 See 91. D.Antisense compound   For diseases resulting from inappropriate expression of genes, the expression of such genes is Current specific prevention or reduction is the ideal treatment. In principle, access within mRNA Possible sequences, or sequences or transcripts within the transcript that are essential for pre-mRNA processing. A single-stranded deoxynucleotide or ribodeoxy nucleotide complementary to the sequence in the gene itself. The production of a specific gene product by hybridization of sinucleotides It is possible to inhibit, reduce or arrest. This paradigm for gene regulation Is often referred to as antisense or antigene inhibition.   Antisense compounds bind to the mRNA responsible for the production of a particular protein. An oligonucleotide designed to prevent or prevent the production of It Antisense compounds hybridize specifically to individual mRNA species Transcription of mRNA species and / or RNA processing and / or transcription of encoded polypeptide Performing a reduction in the amount of each encoded polypeptide in an impediment Capable of producing antisense RNA or DNA, single-stranded or double-stranded oligonucleotide or These analogs are included. Ching et al.Proc.Natl.Acad.Sci. USA.  86: 10006 -10010 (1989); Broder et al.Ann. Int.Med.   113604-618 (1990); Loreau et al.FEBS Letters  274: 53-56 ( 1990); Holcenberg et al. WO91 / 11535; USSN. 07/530165 ("New Human CRI PTO gene "); WO91 / 09865; WO91 / 04753; WO90 / 13641; WO91 / 13080, WO91 / 06629 and EP386563).   An antisense compound is a compound or compounds that cause or contribute to disease. It provides a therapeutic function by inhibiting the formation of the protein in vivo. Some Antisense compounds complementary to certain gene messenger RNA or viral sequences Inhibits the spread of diseases associated with infectious agents, viruses and retroviruses It has been reported that it is a thing. (For example Matsukura et al (1987) Pro c.Natl.Acad.Sci. See USA 84: 7706 and references cited therein. thing).   Antisense compounds typically have a sequence of at least about 15 contiguous nucleotides. However, using the method described in this document, The antisense compound can be delivered. Examples of antisense compounds include: G1128 (Genta. Inc. San Diego, CA), OL (1) p53 (Lynx Pharmaceuticals), A mpligen (Hemm Pharmaceuticals), Isis 1082 and Isis 2105 (Isis Pharmaceut icals, Carisbad, CA). E. FIG.Triple helix drug   Oligonucleotides also bind to double-stranded DNA via triple helix formation , Transcription and / or DNA synthesis can also be inhibited. For example, Maher et al. (19 89)Science 245: See 725-730. Triple helix drug (also called triple chain drug Is bound to the sequence of double-stranded DNA, such as HIV and herpes simplex virus. Transcription of genes that cause diseases such as viral genes and oncogenes in It is an oligonucleotide intended to selectively inhibit. Ie this Et al. Stop protein production in the cell nucleus. These drugs , Directly binds to double-stranded DNA in the cell's genome to form a triple helix, thus Prevents cells from making target proteins. For example, PCT publication Nos. WO92 / 10590, WO92 / See 09705, WO91 / 06626 and US Pat. No. 5,176,996. Standard is 3 Heavy helix drugs contain DNA oligonucleotides in the range of about 20-40 nucleotides It will be. F.Analogs and derivatives   Oligonucleotides (eg aptamers, ribozymes, antisense compounds and And triple helix drug) site specificity depends on the modification of the phosphodiester bond or the oligonucleotide. Not significantly affected by chemical modification of the cleotide end. As a result, these Oligonucleotides can be chemically modified to enhance overall binding stability, chemically Increases stability against degradation and increases the rate at which oligonucleotides are transported intracellularly It will increase and impart chemical reactivity to the molecule. Antisense therapy A general approach for constructing a variety of oligonucleotides useful in J. van der Krol et al (1988)Biotechniques  6: 958-976 and Stein et al. (1988)Cancer Res． 48: 2659-2668.   Therefore, aptamers, ribozymes, antisense compounds and triple helix drugs are Similarly, specific hybridization to this related target sequence or this sequence As long as the association with and is retained as a functional property of the oligonucleotide, the nucleo It may also include substitution, addition, deletion or rearrangement of tide. For example, some implementations Embodiments rely on nucleases as compared to their naturally occurring phosphodiester counterparts. More resistant to degradation and thus higher in vivo Phosphorothioate analogs expected to have longevity and greater potency Will be used. (For example, Camphell et al, (1990),J. Biochem. Biophy s.Methods   20, 259-267). Induction of phosphoramidate by oligonucleotides The body also binds to the complementary polynucleotide and is a covalently attached ligand species It is known to have the additional ability to store You can think about it. For example, Froehler et al. (1988)Nucleic Acids R es.   16 (11): 4831.   In some embodiments, the nucleotide-based pharmaceutical agent is O -Will contain methylribonucleotides (EP Publication No. 360609). Chimera Ori Gonucleotides can be used as well (Dagle et al. (1990).Nucleic Acids Res .   18: 4751). For some applications, the pharmaceutical agent is polyamide Nucleic acid (Nielsen et al. (1991)Science  254: 1497 and PCT Publication No. WO90 / 15065 No.) or other cationic derivatives (Letsinger et al (1988)J.Am.Chem.Soc.   110: 4470-4471) will be included. In other applications, phosphodiester One or more of the two bond combinations are described in PCT Publication Nos. WO92 / 05186 and 91/06556. Isotopes such as internucleoside linkages of 2-4 atoms in length as described in Group or form acetal group (Matteucci et al. (1991),J.Am.Chem.Soc.  113: 7 767-7768) or amide group (Nielsen et al. (1991)Science  254: 1497-1500) , Oligonucleotides such as   Furthermore, for example, nucleotide analogues in which the sugar or base is chemically modified Can be utilized in the present invention. "Similar" forms of purines and pyrimidines The states are those generally known in the art, most of which are chemical. Used as a therapeutic agent. Examples of non-exhaustive lists include 4-acetylcytosine, 5 -(Carboxyhydroxylmethyl) uracil, 5-fluorouracil, 5-bu Lomouracil, 5-carboxymethylaminomethyl-2-thiouracil, 5-ca Ruboxymethylaminomethyluracil, dihydrouracil, inosine, N6-A Sopentenyl adenine, 1-methyl adenine, 1-methyl pseudouracil, 1 -Methylguanine, 1-methylinosine, 2,2-dimethylguanine, 2-methyi Luadenine, 2-methylguanine, 3-methylcytosine, 5-methylcytosine, N6-Methyladenine, 7-methylguanine, 5-methylaminomethyluracil , 5-methoxyaminomethyl-2-thiouracil, β-D-mannosyl cueo Syn, 5'methoxycarbonylmethyluracil, 5-methoxyuracil, 2-me Chilthio-N6-Isopentenyl adenine, uracil-5-oxyacetic acid methyl ester Stell, uracil-5-oxyacetic acid (v), wibutoxin, pseudouracil Le, queuosine, 2-thiocytosine, 5-methyl-2-thiouracil, 2-thi Auracil, 4-thiouracil, 5-methyluracil, N-uracil-5-oki Siacetic acid methyl ester, uracil-5-oxyacetic acid (v), pseudouracil, Includes cuocosine, 2-thiocytosine, and 2,6-diaminopurine. It Moreover, conventional bases are replaced by halogenated bases. Besides, the base The upper 2'-furanose position may have an uncharged bulk group substitution . Examples of uncharged bulky groups include branched alkyls, sugars and branched sugars.   The end modification is also cell type specific for the oligonucleotide pharmaceutical agent. It also provides useful procedures for modifying sex, pharmacokinetics, nuclear permeability and absolute cell uptake. To serve. For example, substitutions at the 5'and 3'termini have macroscopic consequences that improve cell uptake. And other species Includes reactive groups that allow covalent cross-linking of reotide-based pharmaceutical agents It For example,Oligodeoxynucleotides: antisense inhibitors of gene expression (1989) Cohen, Ed., CRC Press:Antisense nucleic acid therapy for cancer and AIDS Outlook of law (1991), Wickstrom.Ed., Wiley-Liss:Gene regulation: Antisense R NA and DNA biology (1992), Erickson and Izant, Eds., Raven Press: andA Antisense RNA and DNA (1992), Murray, Ed., Wiley-Liss. Ann For general methods involving thisense compounds, see antisense RNA and DNA, ( 1988), D.A. Melton, Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harb or, NY). G.Secondary structure of DNA   Polynucleotide strands contain multiple bonds with free rotation around . In the absence of any chain-chain interactions, each monomer is It will rotate freely in relation to the body. The three-dimensional morphology of such chains is Called a dam coil; it is a somewhat compact, spherical shape that continuously changes shape. Is the structure of. However, many interactions between chain elements (eg hydrogen bonds) , Hydrophobic interactions, ionic bonds, van der Waals interactions and disulfi Because of random binding, only a few nucleic acid molecules are present as a random coil.   DNA structure is highly variable. Although the double-stranded B helix is the dominant form, Of additional helices, including A-helix, Z-helix, circular and spherical DNA, and Other forms exist. In addition, tRNAs are capable of interstrand base pairing and loop formation. Containing a segment with a high degree of base complementarity with the downstream segment that enables It is composed of a single strand of nucleic acid. As a result, tRNA has four bases with complementary nucleotide sequences. And a double-stranded helical segment consisting of hydrogen-bonded bases A high helix composed of base-paired double helix segments resembling leaf of clover Contains secondary structure of degree.   Although not wishing to be bound by the theory below, polyacrylamide and agarose Oligonucleotide-based pharmaceutical agents by analogy with sgel electrophoresis The conformation is a "non-tight" conformation of the expanded conformation. Smaller oligonucleotides make skin easier than conformation Across, one can expect to affect the electrotransport rate of the oligonucleotide. You can In other words, the extended conformation is compact or Conformation-constrained oligonucleotide transport is relatively large Shaking through channels in the stratum corneum while slowing down due to cross-sectional area May be pushing forward.   The effect of this conformation is to adopt a structure in which aptamers are tightly folded. It has been suggested that it could be significant (Wang et al ( 1993)Biochemistry 32: 1899-1904). On the other hand, ribozymes are typically complementary Hairpin-catalyzed as well as unstructured single-stranded antisense region (Zaug et al (1986)Nature  324: 429 ~ 433 See). Also, in contrast, individual antisense compounds typically It also has no secondary structure. Thus, these nucleotide-based pharmaceutical effects A substance may exhibit different electrotransport behavior depending on its conformation. It is thought to be. Surprisingly, we find that the conformation of the oligonucleotide Option does not seem to have a significant effect on the electrotransport flux velocity. I found that. These results are shown in FIG. III.Nucleotide-based pharmaceutical composition   Applied to the delivery of nucleotide-based pharmaceutical agents by iontophoresis As such, the present invention provides that the pharmaceutical agent can be delivered in a therapeutically effective amount. Provided are nucleotide-based pharmaceutical agents having a charge-to-mass ratio. Typically, such compositions have a charge to mass ratio of one charge per 5000 daltons. , More typically more than one charge per 2500 daltons. Preferably Has a charge-to-mass ratio of one charge per 1000 daltons, more preferably 500 daltons Equal to or greater than one charge per ton.   Nucleotide-based pharmaceutical agents include hydroalcoholic, propylene glycol. And an acceptable physiological carrier solution such as dimethyl sulfoxide, The composition should be suitable for contact with skin and for delivery by iontophoresis. You can Acceptable physiological carriers include the degree of effectiveness or biological activity of the active ingredient. Solution that does not interfere with and is not toxic to the host to which it is administered. Appropriate Well-known techniques for selecting carriers and formulating suitable mixtures are found in the references and herein. Banga et al., Supra; Lattin et al (1991) Ann.N.Y.Acad.Sci. ., 618: 450; and Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Edition, Mack Publis. Hing Company, Easton, Pennsylvania (1980).   Typically, the carrier solution will contain other ionic species in addition to the oligonucleotide. Mu. For example, because these ionic species are present to maintain the pH of the solution, Buffer solution. As expected from the Coulomb mechanism of electrical transport In addition, the oligonucleotide or DNA itself must be Apart from this, the concentration of all ionic species must be kept to a minimum. Than Specifically, increasing the salt concentration in the carrier solution results in We found that as a result a clear decrease in the electrotransport rate of DNA did. The results are shown in Table 1.   According to some embodiments, LipofectinTM(Obtained from BRL.Gaithersburg, Md. Yes, Felgner et al. (1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA  84: 7413), That is, DOTMA (N- (1- (2,3-dioleyloxy) propyl) -N, N, N-trimethylammonium chloride) is a nucleotide-based pharmaceutical agent It will be used in combination with. LipofectinTMIs a lipid that interacts with DNA -A liposome preparation of cationic and neutral lipids that form a DNA complex. An example For example, Felgner et al. (1989)Nature  337: 387. Lipid-DNA complex and cells The fusion of apparently results in efficient transfer of DNA into cells, This generally increased the transfection efficiency of mammalian cells in culture. It is used for Surprisingly, we found that a small amount of Lipofectin was added to the DNA.TMWith It was found that the addition slightly enhances the electrotransport of DNA. this The results are shown in FIG.   According to other embodiments, other liposomal formulations such as dioleoylpho 3-β [NN ′, N′-dimethyl in combination with sphatidylethanolamine -Aminoethane) -carbamoyl] cholesterol (Gas and Huang (1991)Bioc hem.Biophys.Res.Commun ,179280-5); or lipopolylysine (ie N -Glutaryl phosphatidyl ethanolamine conjugated to one PLL molecule on average Low molecular weight poly (L-lysine) (PLL) containing 2 phospholipids per ), Zhou et al (1991)Biochem.Biophys.Acta．1065: See 8-14) Will be used. Liposome formulations are also similar to pH-sensitive liposomes (eg For example, cholesteryl hemisuccinate and dioleoylphosphate in a 2: 1 molar ratio. Tidyl Ethan (Comprising ruamine) or pH-insensitive liposomes can also be included.   LipofectinTMOr another liposome formulation, wherein the composition and composition described herein And when used in combination with the method, the additive typically ranges from about 1 μg to 100 μg. / Ml, preferably about 2 to 50 μg / ml, more preferably about 2 to 25 μg / ml. -It will be in the tank.   In addition to the nucleotide-based pharmaceutical agent, the composition contains dyes, pigments, inert Fillers or other permeability enhancers, excipients and in the art Including other substances such as known pharmaceutical products and conventional components of transdermal therapeutic systems Can be. Therefore, according to some embodiments of the present invention, chemical enhancers ( Ie, permeation or permeation enhancer) in the donor tank of the iontophoresis device. Incorporated and used to alter the rate of iontophoretic transport. For example, skin Simultaneous application of oleic acid to skin impairs skin impedance, which is inversely proportional to permeability and transport. Cause a significant reduction in dance or resistance. Potts et al (1992),Solid Sta te Ionics   53-56165-169. Thus, the shunt path (eg small Ions that make up the current instead of first passing through the cell (E.g., nucleotide-based pharmaceutical agents) can be used at lower current densities It can be permeated homogeneously by the lipid environment. Alternatively, a chemical enhancer The use of an ionizer is similar to that found at the same current density in the absence of chemical enhancers. Increased ionic conductivity of nucleotide-based pharmaceutical agents compared to delivery rate It would allow incoming and outgoing speeds.   Using the compositions and methods described herein, nucleotide-based pharmaceutical formulations are available. The electric transport flux rate of the substance to be used increases in a concentration-dependent manner. It was discovered to be a big deal. These results are shown in FIG. Nucle in general The octide-based pharmaceutical agent is about 1 to about 500 mg / ml, preferably about 5 to about 200 mg. Present in the tank of the iontophoresis device in an amount in the range of / ml, the device being approximately 20 cm2 Ion electric introduction device with donor tank of about 0.1 ~ 20m during 24 hours g preferably delivering about 0.1 and 10 mg of the nucleotide-based pharmaceutical agent. You will be able to IV.In vitro testing of nucleotide-based pharmaceutical agents   In vitro skin permeation rate of pharmaceutical agents should be measured using a diffusion cell. Can be. The human, mouse is placed on the lower half of the diffusion cell with the stratum corneum facing the donor compartment. Put the skin of the mouse or pig. The donor compartment houses the pharmaceutical agent and the cathode There is. The receiver compartment contains a buffer solution and an anode. Electric current is applied and transported The amount of drug delivered can be calculated (μg / cm2·Time). Alternatively, horny On top of the layer can be placed an iontophoresis device containing the pharmaceutical agent to be tested. it can. The receiver compartment will again contain the buffer solution. The device is activated and transported The amount of drug delivered can be calculated (μg / cm2·Time).   To determine the in vitro skin permeation rate of pharmaceutical agents, conventional flow -Through diffusion cell can also be used. Normally, the effective surface of these cells Product is 1 cm2And the receiving volume is 3 ml. Generally isotonic saline or buffer solution Some receptor fluid is pumped by a peristaltic pump into and through the cell. . Collecting the sample in a glass vial placed in the automatic fraction collection device Can be. Amount of drug that penetrates across the skin (μg / cm2・ Hour) is a cumulative release Calculated from   The electrotransport behavior of pharmaceutical agents is determined by conventional analytical techniques and gels or It can also be evaluated using a capillary electrophoresis method. In the conventional diffusion cell test Preparation measurements can also be performed on the removed skin. Lattin et al. See above Teru. V.In vivo delivery of nucleotide-based pharmaceutical agents A.Treatment instructions   The compositions and methods described herein are described below without limitation. It is used in the treatment of various diseases, including Described in this book The compositions and methods provide nucleotide-based pharmaceutical formulations, depending on the therapeutic instructions. It can be used for either systemic or local administration of substances.   For example, nucleotide-based pharmaceutical agents include oncogenes, fungal genes and All other genes known to be specifically activated in the skin. It can be designed to prevent expression of a variety of potential target genes, including. These pharmaceutical agents are then found to be melanoma, Kaposi's sarcoma, psoriatic lesions, and true tumors. It can be sent directly to skin infected with fungi. Composition described in this document Objects and methods include genital ulcers and hepatitis caused by the human papillomavirus. Skin and mucosal viruses, including infections caused by the rupesvirus, Used in the treatment of fungal and bacterial infections.   Furthermore, the present invention relates to cytokines, growth factors, cell adhesion molecules or their derivatives. And its receptors and key enzymes in the pathways leading to inflammation. Direct nucleotide-based pharmaceutical agent therapeutic composition for blocking mediators Provide delivery of. More specifically, these blockades are In (eg IL-1), growth factors (eg TGF-α and EGF) or cell adhesion molecules (eg ELAM and ICAM); or cytokines (eg IL-1), growth Preventing the expression of receptors for factors or cell adhesion molecules is included. Expression The major enzymes that can be blocked are protein kinase C and phospholipase A or C Is included. Thus, according to one aspect of the present invention, the composites described herein are Topical or transdermal preparations on the body should be used directly on the knees or other joints to reduce inflammation. Applied to.   In yet another embodiment, psoriasis (eg, IL-1, TGF-α, amphiphile By blocking the expression of iregulin or IL-6), atopic dermatitis and dampness Rash (eg by blocking overexpression of IgE); rheumatoid arthritis; allele Inadequate, such as ghee rhinitis (eg by blocking the expression of IL-4) Described herein for the treatment of conditions involving various immune or inflammatory responses The compositions and methods can be used. In yet another aspect, the book The compositions and methods described in the publications, for example, promote growth and / or attachment of cells. By blocking the expression of certain factors that are thought to be involved in progression and metastasis Skin and melanoma, mycosis fungoides and squamous cell carcinoma (including cervical cancer) It can be used to treat certain cancers of the mucosa.   The compositions and methods described herein also apply to "transdermal genomics." Can also be used for Watanabe et al (1993) Proc.Natl.Acad.Sci  90: 4523-4527 andBiowaris Today"Genoculation creates an immune response in the mouse Provoking, "May 17, 1993. More specifically, advanced black Incompatible Human Major Histocompatibility Incorporated into the Liposome Envelope for Hosts with Tumors The gene complex (MHC) gene was inoculated. B with induced colon adenocarcinoma or adenosarcoma Pretreatment of animals with MHC gene in ALB / c mice a few days before tumor induction Doubles the number of days to live I found out that This "genoculation" is MHC tag and Importantly, the immune system is usually invisible and the body's immune response recognizes and destroys malignant tissue. Those that induce a cytotoxic T cell response to a tumor antigen that prevents it from being destroyed It is believed that. Accordingly, one aspect of the present invention is to illict (?) Immune responses. Therefore, it provides delivery of the MHC gene by iontophoresis. B.dose   According to the invention, a therapeutically or pharmaceutically effective amount of a nucleotide-based pharmaceutical The agent is ion-introduced to a patient in need of such agent. Sent out. The compositions and methods described herein prevent and / or treat. It can be used as a purpose. For therapeutic use, these compositions are described above. As described above, for patients who are already suffering from the disease, the symptoms of the disease and its complications are treated. Administered in an amount sufficient to shake or at least partially stop. this An amount adequate to achieve is defined as a "therapeutically effective amount or dose." This messenger An amount effective for use is determined by the severity and course of the disease, previous therapy, patient health and And drug response, and the judgment of the treating physician. Conventional nucleotide For standard doses of the base pharmaceutical agent, for example:Physicians Desk Refe rence (1992 edition) and American Medical Association (1992)Drug Evaluations Subscription s checking ...   For prophylactic purposes, nucleotide-based pharmaceutical agents may It is administered to patients who are susceptible or at risk. This amount is "Defensively effective amount or dose". Accurate even in this use The amount depends on the health condition and weight of the patient.   Maintain as needed once the patient's condition has improved A dose can be administered. Thereafter, the dose and / or frequency of administration Depending on the situation, it can be reduced to a level where the improved condition is retained. Treatment can be stopped once the symptoms have been alleviated to the desired level. Only However, patients require intermittent treatment on a long-term basis once the symptoms of the disease have recurred. There is a possibility that   In general, delivery of ions by iontophoresis according to the methods described in this document. A suitable effective dose of nucleotide-based pharmaceutical agent2Donna -Ion electric introduction device with tank and about 0.5mAmps / cm2With current less than Amounts in the range of about 0.1 to about 10 milligrams (mg) per recipient per day, preferred Or in the range of about 0.5 to about 5 mg per day, and most preferably about 0.5 to about 1 mg. Is. C.Delivery by ion electric introduction   The nucleotide-based pharmaceutical agents described in this document are based on ionic conductivity. It can be administered transdermally using This form of administration typically involves patient circulation. It involves delivery of the pharmaceutical agent for transdermal passage of the drug into the ring. Only While nucleotide-based pharmaceutical agents are also available for topical administration of analogs as well. Can also be delivered directly to diseased or diseased tissue using iontophoresis for Wear. The skin area depends on the forearm, abdomen, chest, back, buttocks, nipple-like area, etc. An anatomical area for transdermal administration of drugs is included, which is representative.   Therapeutic compositions can be delivered by standard iontophoresis devices . In general, iontophoresis is the current flow of soluble salt ions into the body's tissues. Is to be introduced using. More specifically, iontophoresis is suitable When the electrode polarity is applied, the The electrolyte solution containing the ionic molecules to be ejected (or the precursors of these ions) is passed through. The passage of an electric current through the inside of the tissue (eg through the patient's skin) The processes and techniques involved in transferring species. That is, ion Applies electromotive force to the electrolyte tank to drive it from the electrolyte tank into the tissue. Be transferred. In an iontophoresis system, the rate of release is first determined by voltage or current. Controlled by.   Currently, various ion electric introduction devices are known. For example, Phipps et al, U.S. Pat. No. 4,744,788; Phipps et al. U.S. Patent No. 4747819; Tapper et al. Europe State Patent Application Publication No. 0318776; Jacobsen et al. European Patent Application Publication No. 0299631; Petelenz et al. US Pat. No. 4752,285; Sanderson et al. US Pat. No. 4722726. Issue; Phipps et al. US Pat. No. 5125,894 and Parsi US Pat. No. 4731,049; Bad zinski et al. (1993) US Pat. No. 5,207,752; Gvory et al. (1993) US patent. No. 5203768; Gvory et al. (1992) US Pat. No. 5162,042; Phipps (1992) PC. T publication WO 92/17239; Landran et al (1992) PCT publication WO 92/15365; Gvo ry et al. (1992) Canadian Patent Publication No. 2042994; Gvory et al. (1992) US special Xu 5158,537; Gvory et al. (1992) PCT publication WO 92/07618; Myers et al. ． (1992) U.S. Pat. No. 5,147,297; Gvory et al. (1992) US Patent No. 5147297 Gvory et al. (1991) Canadian Patent Publication No. 2015597; Gvory et al. (1992) U.S. Pat. No. 5,084,006; Gvory et al, U.S. Pat. No. 5,162,043; Haak et al. (199 2) U.S. Pat. No. 5,167,616; Gvory et al. (1990) PCT Publication No. 90/09413; Thee. uwes et al (1992) U.S. Pat. No. 5,080,646; Theeuwes et al. (1992) U.S. Pat. 5147,296; Theeuwes et al (1992), US Pat. No. 5169,382; Theeuwes et al. (1992) US Pat. No. 5,169,383; Theeuwes (1990 ) U.S. Pat. No. 4,978,337; Moodie et al (1992) U.S. Pat. No. 5,125,894; Haak et. al. (1990) U.S. Pat. No. 4,927,408; Disclosure of each of these Is included in this document for reference only.   In a standard conventional electrotransport or iontophoresis device, there are generally two Poles are used. Both electrodes produce a current between them as they move between the skin and the electrodes. Two remote electrolyte storage tanks passing through are typically used to Placed in close electrical contact with any part of the object (typically skin) There is. Generally, the active electrode is a charged ion or a precursor to a charged ion. It contains therapeutic species as a quality and transport is a sign of electromotive force for charged therapeutic species. Happens through addition. Appropriate potential is applied to the two electrode system in electrical contact with the skin. Between the anode (anode and cathode). Positively charged drug is delivered through the skin If required, a tank associated with the anode can be used to store positively charged drug species. Proper electromotive force can be generated by directing. In the same way Therefore, if the ions to be transported across the skin are negatively charged, the It is possible to generate an appropriate electromotive force by positioning the drug inside . Naturally, at a given time, positively charged drugs and negatively charged It is also possible to use a single system to deliver both of these drugs into the patient's body. And during a selected operation, one or more cathodic drug and It is also possible to deliver one or more anodic drug.   With the patient's skin in electrical contact with the electrodes, the circuit is Two sources for energy sources, eg batteries or appropriately modified AC sources Complemented by connecting the electrodes. General discussion about iontophoresis Regarding Tyle (1989)J.Pharm.Sci   75: 318: Burnette, "Transdermal Drug Delivery(Transdermal drug Introducing Ion Electricity (Chapter II) Hadgratt and Guv (eds.) Marcel De kker.Inc .: New York, NY; Phipps et al (1988)Solid State Ionics(Solid phase a on)28-30: 1778-1783: Phipps et al (1989),J. Pharm. Sciences  78: 365 -369: and Chrin et al. (1988).J. Controlled Release  7: See 1-24 When. The entire disclosures of these are incorporated herein by reference.   An "electrode" is a conductive member through which an electric current passes during operation. Various electrode materials from platinum to silver-silver chloride are available for these devices Is. The main difference in these materials is that they create an electric potential across the skin. Are not in their capabilities, but rather in some of their capabilities associated with this feature. In the characteristics of the species. For example, platinum electrodes hydrolyze water to release hydrogen ions, Then the pH changes. Apparently, the change in pH is related to the ionization state and binding of the therapeutic agent. It can affect the resulting ionic electrotransport transport rate. On the other hand, silver- Silver chloride electrodes do not hydrolyze water. However, these electrodes are electrically induced It requires the presence of chloride ions that can compete for the transported transport.   Electrotransport devices are generally species (or or) to be transferred or introduced into the body. It requires a tank as a source of varieties of precursors). The tank is typically , Electrolyte solutions such as aqueous electrolyte solutions or hydrophilic or electrolyte-containing gels or gels It will include a matrix, semi-solid, foam, or pool of absorbent material. like this A tank of active pharmaceutical agent is electrically connected to the anode or cathode of the ion electrolyzer. When followed, it provides a source of ionic species or species for electrotransport.   Many iontophoresis devices utilize selectively permeable membranes. Of this membrane The composition will vary depending on the particular needs of the system, namely that of the electrolyte tank. The nature of the pharmacological agent, the transfer of electric current out of the tank and certain types of charged And the desired selectivity for transport of uncharged species. Concerned Utilization of microporous polymers or hydrogels as known in the art. And are possible. See, eg, US Pat. No. 4,927,408.   Mechanical considerations related to the desired degree of permeability, composite properties and device configuration. A suitable permeable membrane material can be selected based on the terms. Examples of permeable membrane materials Includes various natural and synthetic polymers such as polydimethyl siroxane. (Silicon rubber), ethylene vinyl acetate copolymer (EVA), polyurethane , Polyurethane-polyether copolymer, polyethylene, polyamide, polychlorinated Vinyl (PVC), polypropylene, polycarbonate, polytetrafluoroethyl Ren (PTFE), cellulosic materials such as cellulose triacetate and cellulose nitrate / Cellulose acetate and hydrogels such as 2-hydroxyethyl methacrylate (HE MA) is included.   In general, buffer solution should be used in the tank to maintain the same environment as the electrodes in the tank. Will be involved. Typically to minimize contention for current , A buffer with an opposite charge to the drug is used. For example, under some circumstances The drug may act as its own buffer when the appropriate salt is used. it can. Other variables that can affect transport rates include drug concentration and buffer. Concentration, ionic strength, non-aqueous co-solvents and any other ingredients in the formulation are included . However, as discussed above, in order to achieve maximum transport efficiency, The concentration of all ionic species except pharmaceutical agents is kept to a minimum.   The backing or enclosure of a drug delivery system is primarily a tank or mat. Intended as a mechanical support for ricks. In the simplest case The matrix is exposed directly to the host's skin or membrane and the lining is typically a matrix. It can be fixed to the skin with the Trix acting as an adhesive. Strip or patch. In such structures, the backing is usually a composite Impermeable to. This impermeability limits composite loss. It Suitable backing materials are generally thin and flexible films such as woven fabrics and non-woven fabrics. Woven and polymeric films such as polyethylene, polypropylene, and silicone A metal film or metal foil.   Does the delivery device allow it to transport the pharmaceutical agent through the skin? Glue, matrix adhesive, adhesive around matrix, tape Or it can be held in place by rubber or any other means . Place the device on any part of the skin or dermis surface, such as the arm, abdomen, or thigh. Can be placed. Moreover, the device may be of various shapes, either singular or It may be composed of multiple composites and / or transport zones. To the desired device characteristics Depending on the product, other items such as other conventional components of therapeutic products can be stored in the device can do.   In conventional topical treatment with iontophoresis, the skin area to be treated is Direct current is applied through a wet pad type electrode having a size corresponding to the size . Makes perfect contact, prevents any skin burns, overcomes skin resistance, metal plate To prevent the skin from absorbing cauterizing metal compounds formed on the surface, , Interposition of a moist pad between the electrode plate and the skin is required.   The drug is administered through an electrode that has the same charge as it, and the opposite charge is applied. A return electrode for the loaded drug is placed at a neutral site on the body surface. At this time Selects a current strength below the patient's distress threshold level and at an appropriate length. Pass the current for a while. Transport of current through the skin as current travels from the skin tissue to the return electrode. The captured ions are picked up by microcirculation at the dermal-epidermal junction. Electric current The density increases slowly, is maintained for the duration of the treatment, and then decreases slowly at the end of treatment. Less. Current is generally 1 cm on the electrode surface2At a current density of less than 0.5 mAmp per Must be within the comfort of the person.   Therapeutic compositions can be delivered by standard iontophoresis devices. Profit Due to the differences in the iontophoresis devices that can be used, the usage procedure can also vary. Proper pharmacy The manufacturer's instructions for use must be observed for the delivery of active substances. Absent. Uncomplexed pharmacy to measure transport and biotransformation efficacy Fluid or blood levels of the active agent will be determined.   One aspect of the invention is for the topical administration of nucleotide-based pharmaceutical agents. Therapeutic set of this nucleotide-based pharmaceutical agent for pathological or diseased tissues We provide delivery of products. Nucleotide-based pharmaceutical agents Known to be specifically activated in genes, fungal genes and skin Interfere with the expression of various potential target genes, including all other genes Can be designed as. These pharmaceutical agents are then described in this document. Melanoma, Kaposi's sarcoma, psoriatic lesions, and fungal infections using known methods It can be sent directly to the skin. Furthermore, the present invention reduces inflammation and the like Nucleotide-based pharmaceutical agent treatment for knees or other joints It provides a direct delivery of the pharmaceutical composition.   The present invention is more fully described and described by reference to the following examples. You can understand. These examples are provided for illustrative purposes only. There is no restrictive meaning at all. Those skilled in the art will basically produce similar results. It is easy to evaluate various non-critical parameters that can be changed or modified. I suppose.                                 Experiment                                 material   Oligonucleotides are commercially available, or are commercially available. Tide synthesizer (eg Applied Biosystems 394 type oligonucleotide synthesizer) And cyanoethyl phosphoramidite chemistry. DNA32P and T End-labeled with 4 polynucleotide kinase and by reverse phase chromatography Strictly purified from unincorporated ATP.   In addition, random size radiation is used using techniques well known in the art. It is possible to produce a collection of labeled single-stranded oligonucleotides and nucleic acids it can. For example, Taq DNA polymerase, dideoxynucleotide triphosphe And32Oligonucleotide primer labeled with P or32P,33Or35 Poly from DNA templates using either of the S-labeled deoxynucleosides Several rounds of DNA synthesis can be performed.Promega protocol and application guidelines, 2nd edition See Promega Corp. Madison, WI (1991).   Furthermore, radiolabeled deoxynucleosides such as DNA polymerase In order to create a primer-template junction for the uptake of sid, each Dnase Radiolabeling using 1 or random oligonucleotide primers Bal of DNA followed by "nick translation" or "random primer synthesis" Using any of a variety of other methods, including 31 nuclease digestion Can be. Labeled DNA ensures higher-order macromolecular structures In order to be formed in And must be completely devoid of detectable structure (to the template sequence) Unless technically processed). Of a mixture of labeled fragments Sample size distribution was determined using standard DNA sequencing gels and autoradiography. It can be assessed by electrophoresis. Sambrook et al.molecular Cloning( Molecular cloning). Typically extends from about 5-200 nucleotides A distribution of evenly labeled fragments is created.   Synthetic membranes, hairless guinea pigs, and barren hair are prepared by techniques known in the art. Mouse or human (living or cadaveric) skin can be prepared. Described in this document Although a custom Teflon diffusion cell was used in the experiment, , The method can be easily modified for use in conventional commercial diffusion cells You will see that   Random 20-mer in vitro during 6 hours incubation in PBS at room temperature By either the dermis or epidermal surface of freshly prepared hairless mouse skin at It was found to be resistant to degradation. In vitro hairless mouse skin Random 20-mer electrophoresed through a polyacrylamide gel Judged by electrophoresis followed by autoradiography and comparison with a control DNA standard As shown, it was shown to be intact.                                 Example 1                              General method   Chamber in a custom Teflon cell with a donor and receptor volume of 0.2 ml. 1 cm of skin of a hairless mouse at warm temperature2Insert hairless mouse skin with a constant current of 0.3 mAmp per did. The compound to be tested Were placed outside the membrane in an appropriate buffer in a "donor" chamber. Appropriate buffer A containing "counter" chamber is placed inside the skin or membrane. Donor chamber , A silver chloride (AgCl) cathode is housed, and a silver (Ag) anode is housed in the receptor chamber. It was An experiment was conducted to try to send out the DNA from the anode. However No measurable flux velocity was seen. Similarly, no current is applied. A passive transport experiment was also conducted. Again, no measurable flux of DNA was discovered There wasn't.   Following the application of current, the sample is drawn from the counter chamber and analyzed. Sample collection First, mix the buffer solution in the desired cells and remove 0.025 ml of the solution. , By immediately adding 0.025 ml of fresh buffer instead. It was Unless noted, all donor cells contained 30 millimolar (mM) sodium chloride. Lithium (NaCl), 50 mM MOPS, pH 6 and 50 mg / ml32P-labeled oligo Contains nucleotides and the receptor contains the same except oligonucleotides It was   The extent of DNA transport is calculated after oligonucleotide kinase end labeling. Determined according to scintillation counting using specific activity values. All flux The test was performed 3 times and the average value was plotted. Transport also includes antibody-mediated reactions, activity assays. Assay, or the test compound was radiolabeled enzymatically or metabolically. It can also be evaluated by monitoring radioactivity.                                   Example 2                               Effect of salt concentration   Random charge of 20-mer DNA at three different NaCl (6 mM, 30 mM and 150 mM) concentrations. Tested pneumatic transport. The donor and receptor cells contained equal amounts of NaCl. DN A itself does not actually carry current Coulomb mechanism of electric transport (passage in which DNA is carried along with solvent flow) (As opposed to the dynamic electroosmosis mechanism), increase the salt concentration as expected. By reducing the small contribution of DNA to current conductance , Resulting in a significant decrease in DNA flux. Lowest NaC tested At 1 concentration (6 mM), the DNA flux probably caused ion depletion within the receptor cell. The reason was a dramatic drop after the 4 hour time point. These results are shown in Figure 1. It is shown.                                 Example 3                  Effect of oligonucleotide size   Random DNA for three different sizes (20-mer, 30-mer and 40-mer) The air transport flux velocity was determined. Charge for each of the three size classes of DNA Although the densities were virtually identical, the molecular weight of DNA ranged from 6500 to 13000 daltons. It was Flux rate decreases rapidly with increasing molecular weight, 40-mer is about 5 times 20-mer rate. It turned out that it was transporting at a speed of one-half. These results are shown in Figure 2. It                                 Example 4                    Effect of oligonucleotide concentration   Random at 3 different donor DNA concentrations (5 mg / ml, 50 mg / ml and 200 mg / ml) The 20-mer electrotransport flux velocity was measured. The flux velocity increases in a concentration-dependent manner. The highest concentration tested (200 mg / ml) is subsaturated I think that the. This experiment was performed at a NaCl concentration of 150 mM. Explanation of NaCl concentration of 30 mM 1 mg / cm when corrected for clarity2・ Random 20-mer with a higher flux rate than time It would be expected for a donor concentration of 200 mg per ml. These results are 3 is shown.                                 Example 5                       Effect of Lipofectin TM concentration   LipofectinTMCommercially available as [1- (2,3-dioleyloxy) propyi ] -N, N, N-triethylammonium chloride interacts with DNA to -A liposome preparation of a neutral lipid and a cationic lipid forming a DNA complex. An example For example, Felgner et al (1989)Nature See 337-387. Passive transdermal drug delivery The same amount of liposomes as the delivery vehicle for delivery has been used. DNA and LipofectinTMThe complex forms a hydrophobic pathway in the stratum corneum by complex formation with However, it may be more accessible, thus increasing flux. I thought it would bring fruit. Alternatively, LipofectinTMIs a direct permeability enhancer It may be acting as   Lipofectin against random DNA 20-mers in donor cellsTMWas added. LipofectinTM Was found to slightly enhance the electrotransport of DNA. These results are shown in FIG. Is shown in.                                 Example 6                     Effects of DNA conformation   15-nucleotide thrombin aptamer d (GGTTGGTGTGGTTGG) SEQ ID NO: 1 Transport rate of water (Bock et al. (1992)Nature  355: 564-566) random DNA 20- Compared with that of the mer. A composed of a pair of deposited G quadrants and 3 loops The structure of the ptamer is deduced by NMR analysis and is shown in FIG. DNA Conhoe Mation seems to have no appreciable effect on electrotransport flux velocities It was These results are shown in FIG.   It should be understood that the above description is illustrative and not restrictive. It is. Upon reviewing the above description, one of ordinary skill Numerous embodiments will be apparent. Therefore, the scope of the present invention is as follows. It is attached to the attached claims and such claims not by reference to the description. It should be determined with reference to the maximum equivalent range.   The invention has been described above in some detail for purposes of clarity and understanding. Special The disclosures of all articles and references, including patent publications, are included herein by reference. There is. Changes and modifications may be made within the scope of the appended claims.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号 ０８／０７７，７８６ (32)優先日 1993年６月14日 (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ０８／１０７，３２９ (32)優先日 1993年８月16日 (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ，ＵＳ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continued front page    (31) Priority claim number 08 / 077,786 (32) Priority date June 14, 1993 (33) Priority claiming countries United States (US) (31) Priority claim number 08 / 107,329 (32) Priority date August 16, 1993 (33) Priority claiming countries United States (US) (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, M C, NL, PT, SE), AU, CA, JP, US

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １．患者に対し治療上有効な用量で薬学的作用物質を送り出すための方法にお いて −イオン電気導入装置内で、オリゴヌクレオチド又は核酸を含みイオン的に帯電 した治療上有効な量の薬学的作用物質と患者の皮ふを接触させる段階；及び −電界が経皮的に薬学的作用物質を送り出すように、装置と皮ふの界面に電界を 適用する段階 を含む方法。 ２．イオン電気導入装置内の薬学的作用物質が直接病理組織又は局在性炎症部 域に適用される、請求の範囲第１項に記載の方法。 ３．薬学的作用物質が2個〜100個のヌクレオチドをもつ核酸又はオリゴヌクレ オチドを含む、 求の範囲第１項に記載の方法。 ４．薬学的作用物質が15個〜50個のヌクレオチドをもつ核酸又はオリゴヌクレ オチドを含む請求の範囲第１項に記載の方法。 ５．薬学的作用物質がアプタマー、リボザイム、アンチセンス化合物又は３重 らせん薬物を含む、請求の範囲第３項に記載の方法。 ６．薬学的作用物質がアプタマーｄ（GGTTGGTGTGGTTGG）を含む、請求の範囲 第５項に記載の方法。 ７．イオン電気導入装置中の薬学的作用物質がさらにLipofectinTMを含み、Li pofectinTMは、それが無い場合の薬学的作用物質の輸送速度に比べてこの輸送速 度を増強するのに充分な量で存在している、請求の範囲第１項に記載の方法。 ８．約0.1／cm2と0.5mAmp／cm2の間の電界が適用される、請求の範囲第１項に 記載の方法。 ９．薬学的作用物質は、20cm2のドナータンクを有するイオン電 気導入装置を用いて24時間あたり0.1〜10mgの量で薬学的作用物質が経皮的に送 り出される、請求の範囲第１項に記載の方法。 10．ヌクレオチドベースの薬学的作用物質を送り出すためのシステムにおいて 、 （ａ）皮ふ又は粘膜組織の選択された無傷の部域を通して送り出されるべきヌク レオチドベースの薬学的作用物質の供給源及び （ｂ）前記供給源を含むイオン電気導入装置 を含むシステム。 11．薬学的作用物質が２個〜100個のヌクレオチドを有する核酸又はオリゴヌ クレオチドを含む、請求の範囲第10項に記載のシステム。 12．薬学的作用物質が15個〜50個のヌクレオチドをもつ核酸又はオリゴヌクレ オチドを含んでいる、請求の範囲第11項に記載のシステム。 13．薬学的作用物質がアプタマー、リボザイム、アンチセンス化合物又は３重 らせん薬物を含む、請求の範囲第10項に記載のシステム。 14．薬学的作用物質がアプタマーｄ（GGTTGGTGTGGTTGG）を含む、請求の範囲 第13項に記載のシステム。 15．システムはさらにLipofectinTMが含まれ、LipofectinTMは、それが無い場 合の薬学的作用物質の輸送速度に比べてこの輸送速度を増強するのに充分な量で 存在している、請求の範囲第10項に記載のシステム。 16．イオン電気導入装置が約0.1〜0.5mAmp／cm2の間の電界を適用できる、請 求の範囲第10項に記載のシステム。 17．薬学的作用物質が、20cm2のドナータンクをもつイオン電気導入装置を用 いて24時間あたり0.1mg〜10mgの量で経皮的に送り出 される、請求の範囲第10項に記載のシステム。[Claims] 1. In a method for delivering a therapeutically effective dose of a pharmaceutical agent to a patient-in an iontophoresis device, an ionically charged therapeutically effective amount of a pharmaceutical agent containing an oligonucleotide or nucleic acid and the patient Contacting the skin of the device; and-applying an electric field at the interface of the device and the skin such that the electric field transdermally delivers the pharmaceutical agent. 2. The method according to claim 1, wherein the pharmaceutical agent in the iontophoresis device is applied directly to the pathological tissue or localized inflammatory area. 3. The method of claim 1 wherein the pharmaceutical agent comprises a nucleic acid or oligonucleotide having 2 to 100 nucleotides. 4. The method of claim 1 wherein the pharmaceutical agent comprises a nucleic acid or oligonucleotide having 15 to 50 nucleotides. 5. 4. The method of claim 3, wherein the pharmaceutical agent comprises an aptamer, ribozyme, antisense compound or triple helix drug. 6. The method of claim 5, wherein the pharmaceutical agent comprises aptamer d (GGTTGGTGTGGTTGG). 7. The pharmaceutical agent in the iontophoresis device further comprises Lipofectin ™ , and Li pofectin ™ is present in an amount sufficient to enhance this rate of transport of the pharmaceutical agent in the absence thereof. The method of claim 1, wherein: 8. The method of claim 1 wherein an electric field of between about 0.1 / cm 2 and 0.5 mAmp / cm 2 is applied. 9. The pharmaceutical agent is transdermally delivered in an amount of 0.1-10 mg per 24 hours using an iontophoresis device having a 20 cm 2 donor tank. Method. Ten. A system for delivering a nucleotide-based pharmaceutical agent, comprising: (a) a source of the nucleotide-based pharmaceutical agent to be delivered through a selected intact area of skin or mucosal tissue, and (b) said source. A system including an iontophoresis device including. 11. 11. The system of claim 10, wherein the pharmaceutical agent comprises a nucleic acid or oligonucleotide having 2-100 nucleotides. 12. 12. The system of claim 11, wherein the pharmaceutical agent comprises a nucleic acid or oligonucleotide having 15 to 50 nucleotides. 13. 11. The system of claim 10, wherein the pharmaceutical agent comprises an aptamer, ribozyme, antisense compound or triple helix drug. 14. 14. The system of claim 13, wherein the pharmaceutical agent comprises aptamer d (GGTTGGTGTGGTTGG). 15. The system further comprises Lipofectin ™ , wherein Lipofectin ™ is present in an amount sufficient to enhance the rate of delivery of the pharmaceutical agent relative to the rate of delivery of the pharmaceutical agent in the absence thereof. The system described in the section. 16． Can apply an electric field between about 0.1~0.5mAmp / cm 2 is iontophoretic device, system according to paragraph 10 claims. 17. Pharmaceutical agent is an iontophoretic device having a donor reservoir of 20 cm 2 through the skin to fed in an amount of 0.1mg~10mg per 24 hours using, according to Section 10 claims system.
JP6518085A 1993-01-27 1994-01-26 Compositions and methods for transdermal drug delivery Pending JPH08510720A (en)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US946393A 1993-01-27 1993-01-27
US08/009,463 1993-01-27
US7729693A 1993-06-14 1993-06-14
US7778693A 1993-06-14 1993-06-14
US08/077,786 1993-06-14
US08/077,296 1993-06-14
US10732993A 1993-08-16 1993-08-16
US08/107,329 1993-08-16
PCT/US1994/000896 WO1994017792A2 (en) 1993-01-27 1994-01-26 Compositions and methods for transdermal drug delivery

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH08510720A true JPH08510720A (en) 1996-11-12

Family

ID=27485882

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP6518085A Pending JPH08510720A (en) 1993-01-27 1994-01-26 Compositions and methods for transdermal drug delivery

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP0683668A4 (en)
JP (1) JPH08510720A (en)
AU (1) AU6764794A (en)
CA (1) CA2153243A1 (en)
WO (1) WO1994017792A2 (en)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6348449B1 (en) 1993-09-21 2002-02-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of inducing mucosal immunity
US5942395A (en) * 1997-05-09 1999-08-24 Universite De Montreal Hybrid ribozymes and methods of use
DE19814257A1 (en) * 1998-03-31 1999-10-07 Asta Medica Ag effervescent formulations
JP2002523442A (en) * 1998-09-01 2002-07-30 イデア アクチェンゲゼルシャフト Electrically controlled transport of charged permeants across barriers
JP2010507361A (en) 2006-07-31 2010-03-11 キュアバック ゲーエムベーハー Specifically, a nucleic acid represented by the general formula (I): GlXmGn or the general formula (II): ClXmCn as an immunostimulant / adjuvant
US8530436B2 (en) 2007-01-29 2013-09-10 Transderm, Inc. Methods and compositions for transdermal delivery of nucleotides
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
PT2176408E (en) 2008-01-31 2015-04-23 Curevac Gmbh Nucleic acids comprising formula (nugixmgnnv)a and derivatives thereof as an immunostimulating agents /adjuvants
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
US20110053829A1 (en) 2009-09-03 2011-03-03 Curevac Gmbh Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids
DK2449113T3 (en) 2010-07-30 2016-01-11 Curevac Ag Complex formation of nucleic acids with the disulfide cross-linked cationic components for transfection and immunostimulation
WO2013113326A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Curevac Gmbh Pharmaceutical composition comprising a polymeric carrier cargo complex and at least one protein or peptide antigen
WO2015024668A2 (en) 2013-08-21 2015-02-26 Curevac Gmbh Respiratory syncytial virus (rsv) vaccine
EP3129050A2 (en) 2014-04-01 2017-02-15 CureVac AG Polymeric carrier cargo complex for use as an immunostimulating agent or as an adjuvant

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5042975A (en) * 1986-07-25 1991-08-27 Rutgers, The State University Of New Jersey Iontotherapeutic device and process and iontotherapeutic unit dose
AU609769B2 (en) * 1987-02-10 1991-05-09 Drug Delivery Systems Inc. Electrolytic transdermal delivery of proteins
US5085749A (en) * 1989-03-14 1992-02-04 Massachusetts Institute Of Technology Dynamically controlled membrane
AU5418290A (en) * 1989-03-31 1990-11-05 University Patents Inc. Polynucleotide phosphorodithioates as therapeutic agents for retroviral infections
US5248670A (en) * 1990-02-26 1993-09-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotides for inhibiting herpesviruses

Also Published As

Publication number Publication date
WO1994017792A3 (en) 1994-09-29
EP0683668A4 (en) 1997-12-29
EP0683668A1 (en) 1995-11-29
AU6764794A (en) 1994-08-29
WO1994017792A2 (en) 1994-08-18
CA2153243A1 (en) 1994-08-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH08510720A (en) Compositions and methods for transdermal drug delivery
Akhtar et al. Interactions of antisense DNa oliginucletide analogs with phospholid membranes (liposomes)
Capaccioli et al. Cationic lipids improve antisense oligonucleotide uptake and prevent degradation in cultured cells and in human serum
AU749927B2 (en) Liposomes containing oligonucleotides
TWI225412B (en) Liposome-entrapped polynucleotide composition and method
US6858226B2 (en) Fusogenic lipids and vesicles
US6287591B1 (en) Charged therapeutic agents encapsulated in lipid particles containing four lipid components
EP1059092B1 (en) Use of complexes among cationic liposomes and polydeoxyribonucleotides as medicaments
Dujardin et al. Topical gene transfer into rat skin using electroporation
Wilson et al. Effects of intravenous and subcutaneous administration on the pharmacokinetics, biodistribution, cellular uptake and immunostimulatory activity of CpG ODN encapsulated in liposomal nanoparticles
WO2003010538A1 (en) Method and apparatus for increasing, flux during reverse iontophoresis
US6559129B1 (en) Cationic liposomal delivery system and therapeutic use thereof
JP2008518998A (en) Improvements in or relating to pharmaceutical compositions comprising oligonucleotides as active substances
WO1998013024A2 (en) Hyaluronic drug delivery system
KR100723852B1 (en) Neutral-cationic lipid for nucleic acid and drug delivery
JP5674923B2 (en) Pharmaceutical compositions containing antisense oligonucleotides and methods of using the same
US7262173B2 (en) Chemosensitizing with liposomes containing oligonucleotides
Soni et al. Biodistribution, stability, and antiviral efficacy of liposome‐entrapped phosphorothioate antisense oligodeoxynucleotides in ducks for the treatment of chronic duck hepatitis B virus infection
KR102306384B1 (en) Composition for Preventing or Treating Atopic Dermatitis Comprising Skin Permeable Nucleic Acid Complex
WO2000021370A1 (en) Oligonucleotide delivery systems for camptothecins
Nolen III et al. Percutaneous penetration of methyl phosphonate antisense oligonucleotides
EP1280516A1 (en) Method for transdermal or intradermal delivery of molecules
Preat et al. Topical delivery of nucleic acids in the skin
JP2000511541A (en) Enhancing the effectiveness of liposome antisense delivery
Wielbo et al. Antisense inhibition of angiotensinogen in hepatoma cell culture is enhanced by cationic liposome delivery