JPH08508877A

JPH08508877A - プロテインチロシンホスファターゼｐｔｐ−ｓ３１

Info

Publication number: JPH08508877A
Application number: JP6520671A
Authority: JP
Inventors: モラー，ニールズ，ピー．エイチ．; モラー，カリン，ビー; ウルリッヒ，アクセル
Original assignee: マックス−プランク−ゲゼルシャフトツールフェルデルングデルヴィッセンシャフテンエー．ヴェー．
Priority date: 1993-03-23
Filing date: 1994-03-23
Publication date: 1996-09-24
Also published as: DE69435020T2; CA2158939A1; EP0690918B1; DE69435020D1; AU6429394A; ATE372384T1; EP0690918A1; US6492495B1; WO1994021800A3; WO1994021800A2; US20030138932A1; US5952212A; US5585233A; IL109090A0

Abstract

(57)【要約】ＰＴＰ−Ｓ３１と命名されたプロテインチロシンホスファターゼおよびそのサブファミリーが同定され、それをコードする核酸分子も同定される。このファミリーには、既知のプロテインチロシンホスファターゼの触媒ホスファターゼドメイン中の以前に規定されたコンセンサス配列において１、２または３個のアミノ酸が変化しているＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質が含まれる。ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質は組換え手段によって生産され得る。ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質に対する抗体およびそれをコードする核酸構築物、ならびにＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質に結合してその酵素活性を阻害または刺激することができる分子のスクリーニング法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】プロテインチロシンホスファターゼＰＴＰ−Ｓ３１１．序論本発明は、生化学および細胞分子生物学の分野に属し、ＰＴＰ−Ｓ３１と命名された、新規なプロテインチロシンホスファターゼ（ＰＴＰアーゼまたはＰＴＰ）タンパク質または糖タンパク質、薬学的製剤における当該分子の使用、ならびにＰＴＰ−Ｓ３１またはその機能性誘導体を含有する医薬組成物に関するものである。本発明はまた、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質またはその機能性誘導体をコードする核酸分子、当該核酸分子を保有する組換え発現ベクター、当該組換え発現ベクターを含む細胞、ＰＴＰ−Ｓ３１またはそれをコードするＤＮＡの生産および同定方法、ＰＴＰ−Ｓ３１に特異的な抗体、ならびにＰＴＰ−Ｓ３１のプロテインチロシンホスファターゼ酵素活性に結合して当該活性を阻害または刺激することができる化合物のスクリーニング法にも向けられる。２．発明の背景タンパク質のリン酸化は多岐にわたる細胞プロセスを調節するための基本的な機構である。大多数のタンパク質リン酸化はセリン残基とトレオニン残基で起こるが、多くの癌遺伝子産物および増殖因子受容体が固有のプロテインチロシンキナーゼ活性を有するという発見以来、チロシン残基でのリン酸化に関心が集中している。増殖因子のシグナル伝達、細胞周期の進行および悪性形質転換に際してのプロテインチロシンリン酸化の重要性は今や明確に確立されるに至った［Hunterら，Ann．Rev．Biochem．54:987-930（1985）；Ullrichら，Cell 61:203-212（1990）；Nurse，Nature 344:503-508（1990）；Cantleyら，Cell 64:281-302（1991）］。生化学的研究により、種々の細胞性タンパク質のチロシン残基でのリン酸化はリン酸化反応と脱リン酸化反応が競合する動的プロセスであることが分かっている。プロテインチロシンリン酸化の調節は、プロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫアーゼまたはＰＴＫ）とプロテインチロシンホスファターゼ（ＰＴＰ）の相互作用によって媒介される。チロシンリン酸化反応はＰＴＫが触媒する。チロシンリン酸化されたタンパク質はＰＴＰの作用によって特異的に脱リン酸化され得る。細胞内物質のプロテインチロシンリン酸化のレベルはＰＴＫ活性とＰＴＰ活性のバランスで決まる［Hunter，T.，Cell 58:1013-1016（1989）］。 2.1. ＰＴＫ類プロテインチロシンキナーゼ類（ＰＴＫ；ＡＴＰ：プロテイン−チロシンＯ− ホスホトランスフェラーゼ、EC 2.7.1.112）は、多くの増殖因子受容体および潜在的癌遺伝子を含む大きなタンパク質ファミリーを構成している［Hanksら，Sci ence 241:42-52（1988）］。多数のＰＴＫは細胞周期の誘導に必要な初期シグナルに結合している［Weaverら，Mol．and Cell．Biol．11（9）:4415-4422（1991 ）］。ＰＴＫはセリン／トレオニンに特異的なプロテインキナーゼと共通の祖先を有するが、それらとは大きく相違する別個の酵素ファミリーを構成している（Hanksら，前掲）。ＰＴＫ活性を変化させる作用機構は、膜貫通トポロジーを有する受容体型ＰＴＫの場合に最もよく理解されている（Ullrichら，前掲）。受容体型ＰＴＫのメンバーの細胞外ドメインに特異的リガンドが結合すると、それらのオリゴマー化が誘導されて、チロシンキナーゼ活性の増加とシグナル伝達経路の活性化が生じると考えられている［Ullrichら，（1990）前掲］。突然変異または過剰発現によるキナーゼ活性の調節解除は、細胞形質転換の確立された機構である［Hunterら，（1985）前掲；Ullrichら，（1990）前掲］。 2.2. ＰＴＰ類プロテインホスファターゼ類は少なくとも２つの明らかに異なるファミリー［ Hunter，T（1989）前掲］を構成しており、プロテインセリン／トレオニンホスファターゼとプロテインチロシンホスファターゼ（ＰＴＰ；プロテイン−チロシン−ホスフェートホスホヒドロラーゼ、EC 3.13.48）である。ＰＴＰは１つのタンパク質ファミリーであるが、２つのサブグループに分けられる。第一のサブグループは、単一の保存された触媒ホスファターゼドメインを含む低分子量の細胞内酵素から成っている。既知の細胞内型ＰＴＰはすべて、単一の保存された触媒ホスファターゼドメインを含むものである。第一のグループに含まれるＰＴＰの例として、（１）胎盤ＰＴＰ１Ｂ［Charbonneauら，Proc．Natl．Acad．Sci． USA 86:5252-5256（1989）；Chernoffら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 87:2735 -2789（1990）］、（２）Ｔ細胞ＰＴＰ［ Coolら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86:5257-5261（1989）］、（３）ラット脳ＰＴＰ［Guanら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 87:1501-1502（1990）］、（４）ニューロンホスファターゼ（ＳＴＥＰ）［Lombrosoら，Proc．Natl．Acad． Sci．USA 88:7242-7246（1991）］、および（５）細胞骨格タンパク質と相同な領域を含む細胞質ホスファターゼ［Guetら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:58 67-5871（1991）；Yangら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:5949-5953（1991）］を挙げることができる。第二のサブグループは高分子量の受容体結合ＰＴＰから成っており、ＲＰＴＰと称する。ＲＰＴＰは（ａ）細胞内触媒領域、（ｂ）単一の膜貫通セグメントおよび（ｃ）推定上のリガンド結合性細胞外ドメインから構成される。ＲＰＴＰの推定上のリガンド結合性細胞外「受容体」ドメインの構造および大きさは非常に異なっている。これに対して、ＲＰＴＰの細胞内触媒領域は高度に相同である。すべてのＲＰＴＰはタンデム連結された２つの触媒ホスファターゼ相同ドメインを有するが、例外として、ＨＰＴＰβと称するＲＰＴＰはただ１つの触媒ホスファターゼドメインを有する［Tsaiら，J．Biol．Chem．2 66:10534-10543（1991）］。ＲＰＴＰの一例は白血球共通抗原（ＬＣＡ）と名づけられたタンパク質ファミリーであり［Ralph，S.J.，EMBO J．6:1251-1257（1987）］、ＬＣＡは全白血球とその造血前駆細胞の表面に発現される高分子量の糖タンパク質である［Thomas ，Ann．Rev．Immunol．7:339-369（1989）］。数種の生物種由来のＬＣＡの配列には顕著な類似性が存在する［Charbonneauら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 85 :7182-7186（1988）］。ＬＣＡは文献中では異なった名称で呼ばれており、例えばＴ２００［Trowbridgeら，Eur．J．Immunol ．6:557-562（1962）］、Ｂリンパ球型についてはＢ２２０［Coffmanら，Nature 289:681-683（1981）］、マウス・アロタイプマーカーＬｙ−５［Komuroら，Im munogenetics 1:452-456（1975）］、最近ではＣＤ４５［Cobboldら，Leucocyte Typing III，A.J．McMichaelら編集，pp．788-803（1987）］などである。ＣＤ４５はＴ細胞の活性化において非常に重要な役割を担っているようである［Weiss A.，Ann．Rev．Genet．25:487-510（1991）中で検討された］。例えば、化学的突然変異を誘発させて、ＣＤ４５を発現できないものを選択したＴ細胞クローンは、Ｔ細胞受容体刺激に対する応答が損なわれていた（Weaverら，前掲）。これらのＴ細胞クローンは、Ｔ細胞抗原受容体を介して伝達されるシグナルに対するその応答（標的の細胞溶解、増殖、リンホカインの生産など）が機能的に欠損していた（Weaverら，前掲）。他の研究は、ＣＤ４５のＰＴＰ活性がリンパ球特異的ＰＴＫであるｐｐ５６^lckの活性化において何らかの役割を果たしていることを示す［Mustelinら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86:6302-6306（198 9）；Ostergaardら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86:8959-8963（1989）］。これらの著者らは、ＣＤ４５のホスファターゼ活性がＣ末端チロシン残基の脱リン酸化によりｐｐ５６^lckを活性化し、これがその後のＴ細胞の活性化に関係すると仮定した。ＲＰＴＰのもう一つの例は、最初はＬＣＡの相同体として同定された、白血球共通抗原関連分子（ＬＡＲ）である［Streuliら， J．Exp．Med．168:1523-1530（1988）］。ＬＡＲ分子の細胞内触媒領域は２つの触媒ホスファターゼ相同ドメイン（ドメインＩとドメインII）を含んでいるが、突然変異分析によると、ドメインＩだけが触媒ホスファターゼ活性をもち、ドメインIIは酵素的に不活性であることが示唆された［Streuliら，EMBO J．9(8):23 99-2407（1990）］。アミノ酸位置１３７９のチロシンをフェニルアラニンに変えた、化学的に誘導されたＬＡＲ変異体は温度感受性であった［Tsaiら，J．Bio l．Chem．266(16):10534-10543（1991）］。最近クローン化された、ｍＲＰＴＰμと称するマウスＲＰＴＰは、いくつかの構造モチーフをＬＡＲと共有する細胞外ドメインをもつことが見いだされた［Ge bbink，M.F.B.G．ら，FEBS Lett．290:123-130（1991）］。これらの著者はＲＰＴＰμのヒト相同体もクローン化し、この遺伝子がヒト染色体１８にあることを見いだした。ＤＬＡＲおよびＤＰＴＰと呼ばれる、２つのショウジョウバエＰＴＰがｃＤＮＡクローンの配列に基づいて予想された［Streuliら，Proc．Natl．Acad．Sci． USA 86:8698-8702（1989）］。また、ＤＰＴＰ９９Ａと呼ばれる別のショウジョウバエＲＰＴＰをコードするｃＤＮＡがクローン化されて、その特性付けが行われた［Hariharanら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:11266-11270（1991）］。ＲＰＴＰの他の例としては、ＲＰＴＰ−α、β、γおよびζが含まれる［Krue gerら，EMBO J．9:3241-3252（1990）；Sapら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 87 :6112-6116（1990）；Kaplanら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 87:7000-7004（1 990）；Jirikら， FEBS Lett．273:239-242（1990）；Mathewら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 87: 4444-4448（1990）；Ohagiら，Nucl．Acids Res．18:7159（1990）］。Schlessi ngerのＰＣＴ公開WO92/01050（1992年１月23日）は、ヒトＲＰＴＰ−α、βおよびγを開示し、これら３種のＲＰＴＰとこのタンパク質ファミリーの他のメンバーの保存ドメイン間の構造的相同性を記述した。マウスＲＰＴＰ−αは７９４個のアミノ酸を有し、一方、ヒトＲＰＴＰ−αは８０２個のアミノ酸を有する。ＲＰＴＰ−αは他のチロシンホスファターゼの触媒ドメインに対して相同性を示す細胞内ドメインをもっている。１４２個のアミノ酸から成る細胞外ドメイン（ＲＰＴＰ−αのシグナルペプチドを含む）はセリンとトレオニンの含量が高く（３２％）、８つの可能なＮ−グリコシル化部位を有する。ＲＰＴＰ−αをコードするｃＤＮＡクローンが作製され、真核細胞宿主からはＲＰＴＰ−αが発現された。種々の細胞および組織におけるＲＰＴＰ−αの自然発現を同定するためにノーザン分析が用いられた。ＲＰＴＰ−αの合成ペプチドを用いた免疫感作により作られた、ＲＰＴＰ−αに対するポリクローナル抗体は、ＲＰＴＰ−αの一部をコードするｃＤＮＡクローンでトランスフェクションした細胞において１３０ｋＤａのタンパク質を同定した。ＬＣＡの２つのＰＴＰドメインをコードするプローブを用いて、肝芽細胞腫細胞系ＨｅｐＧ２から誘導されたｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって、別のＲＰＴＰであるＨｅＰＴＰ［Jirikら，FASEB J．4:82082（1990 ）Abstract 2253］が発見された。ＨｅＰＴＰ遺伝子はヒトおよびマウスのさまざまな細胞系および組織で発現されるようであった。ＰＴＰの最初の精製、配列決定およびクローニングが行われて以来、追加の潜在ＰＴＰが急激な速さで同定されてきている。同定された異なるＰＴＰの数は着実に増加しており、このファミリーがＰＴＫファミリーと同程度に大きいものであることを推測させる［Hunter（1989）前掲］。既知のＰＴＰの触媒ドメインには「共通配列」と呼ばれる保存されたアミノ酸配列が同定された［Kruegerら，EMBO J．9:3241-3252（1990）およびYiら，Mol ．Cell．Biol．12:836-846（1992）；これらの文献は参考としてここに組み入れる］。Yiらは次のＰＴＰ：つまりＬＣＡ、ＰＴＰＩＢ、ＴＣＰＴＰ、ＬＡＲ、ＤＬＡＲ、およびＨＰＴＰα、ＨＰＴＰβおよびＨＰＴＰγの触媒ホスファターゼドメイン配列のアラインメント（整列化）を行った。このアラインメントは下記の「共通配列」を含んでいる〔Yiら，前掲、図２（Ａ）〕： KruegerらはＰＴＰ１Ｂ、ＴＣＰＴＰ、ＬＡＲ、ＬＣＡ、ＨＰＴＰα、β、８、εおよびζ、ＤＬＡＲおよびＤＰＴＰの触媒ホスファターゼドメイン配列のアラインメントを行った。このアラインメントは下記の「共通配列」を含んでいる〔Kruegerら，前掲、図７〕：チロシン残基の脱リン酸化はそれ自体で重要な調節機構として機能しうることが明らかになりつつある。チロシンキナーゼのｓｒｃファミリーでは、Ｃ末端チロシン残基の脱リン酸化がチロシンキナーゼ活性を活性化することが見いだされた［Hunter，T．Cell 49:1-4（1987）］。チロシンの脱リン酸化は、成熟促進因子（ＭＰＦ）キナーゼの有糸分裂活性化における必須段階であることが示唆された［Morlaら，Cell 58:193-203（1989）］。これらの観察は、チロシンホスファターゼ活性を調節する作用機構を理解することの、当技術分野における必要性を指摘するものである。シグナル伝達、細胞周期の進行および細胞増殖、そして悪性形質転換の機構を理解するには、ＰＴＰ類の構造−機能の関係の更なる分析が必要となることが明らかである。かかる理解はこれらのプロセスを調節しかつその調節障害と関連した疾患を治療するのに有効な薬剤を提供するだろう。３．発明の概要本発明者らは、ＰＴＰ−Ｓ３１と命名された、新規なＰＴＰの同定をここに記述するものである。この新規なＰＴＰはこれまでに報告されたＰＴＰ類と構造的にかなり相違している。さらに、このＰＴＰの数種の変異体が同定された。従って、本発明は、ＰＴＰであるかまたはＰＴＰに存在することが知られている構造的特徴を含むＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質、ならびにその変異体を提供する。本発明のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質は、それが天然に存在するものである場合、それが自然界で結合している他のタンパク質または糖タンパク質を実質的に含まないものである。本発明の実質的に純粋なＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質は、生化学的精製により、化学的手段により、または原核または真核細胞宿主による組換え手段により生産することができ、それが自然界で結合している他のタンパク質類を実質的に含まない状態で得られる。ＰＴＰ−Ｓ３１は修飾アミノ酸を含んでいてもよい。本発明はさらに、次のタンパク質に関する：（１）ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の断片；（２）追加のアミノ酸を有するＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質；（３）置換アミノ酸を有するＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質；および（４）欠失アミノ酸、追加のアミノ酸または置換アミノ酸の任意の組合せを有するＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質。どのような場合にも、修飾ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質またはその断片は所望の生物学的活性を有する。本発明はさらに、本発明によるＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子に関する。この核酸分子はｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。また、本発明は発現ベクターの形の核酸構築物に関する。かかる発現ベクターを保有する原核および真核宿主細胞も提供される。本発明には本発明のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質を調製する方法も含まれ、当該方法は、（ａ）ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質を発現することができる宿主を培養条件下で培養し、（ｂ）ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質を発現させ、そして（ｃ）培養物からＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質を回収する、ことを含んでいる。さらに、本発明は、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質に対して、あるいはＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質のエピトープに対して特異的なポリクローナル、モノクローナルまたはキメラ抗体に関する。本発明はさらに、サンプル（好ましくは、被験者から得られた細胞または生物学的サンプル）中のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の存在を検出し、またはその量を測定する方法に関し、当該方法は、（ａ）サンプル（例えば、細胞調製物またはその抽出物）を、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質のエピトープに対して特異的な抗体と接触させ、そして（ｂ）サンプル物質への当該抗体の結合を検出するか、または結合した抗体の量を測定し、その結果として、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の存在を検出し、その量を測定することを含んでいる。本発明はまた、サンプル（好ましくは、被験者から得られた細胞または生物学的サンプル）中の正常または変異型ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質をコードする核酸の存在を検出する方法に関し、当該方法は、（ａ）サンプル（例えば、細胞またはその抽出物）を、正常または変異型ＰＴＰ −Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の少なくとも一部をコードするオリゴヌクレオチドプローブとハイブリダイゼーション条件下で接触させ、そして（ｂ）細胞の核酸への当該プローブのハイブリダイゼーションを測定し、その結果として、当該核酸の存在を検出することを含んでいる。サンプルの核酸は、アッセイに先立って、例えばポリメラーゼ連鎖反応を用いることにより、選択的に増幅することができる。本発明はまた、サンプル（好ましくは、化学的または生物学的サンプル）においてＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質と結合することができる化合物を同定または単離する方法に関し、当該方法は、（ａ）固相マトリックスまたは担体にＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質またはその化合物結合部分を結合させ、（ｂ）サンプルを固相マトリックスに結合させたＰＴＰ−Ｓ３１と接触させて化合物をＰＴＰ−Ｓ３１に結合させ、未結合物質を洗い流し、そして（ｃ）固相に結合した化合物の存在を検出する、ことを含んでいる。単離を目的とする場合は、結合した化合物を次の段階（ｄ）にかける：（ｄ）結合した化合物を溶出し、これにより当該化合物を単離する。本発明は、ＰＴＰ−Ｓ３１の酵素活性を刺激または阻害することができる作用剤分子を同定する方法を包含し、当該方法は、（ａ）作用剤を、純粋な形で、膜調製物としてまたは生存もしくは固定全細胞として存在していてもよい、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質またはその断片と接触させ、（ｂ）段階（ａ）の混合物を十分な時間インキュベートし、（ｃ）ＰＴＰ−Ｓ３１の酵素活性を測定し、（ｄ）その酵素活性を、作用剤の不在下でインキュベートしたＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の酵素活性と比較し、その結果として、当該作用剤がＰＴＰ−Ｓ３１の酵素活性を刺激するものなのか、阻害するものなのかを判定することを含んでいる。さらに、本発明は、（ａ）ＰＴＰ−Ｓ３１とその標的分子との、または（ｂ）ＰＴＰ−Ｓ３１とその酵素活性を調節する分子との、相互作用を変調する作用剤の能力に基づいて、ＰＴＰ−Ｓ３１作用のアゴニストまたはアンタゴニストを同定する方法を提供する。かかる方法で同定された化合物は、ＰＴＰ−Ｓ３１機能障害または損傷を受けたシグナル伝達と関連した疾患を治療するのに有用でありうる。４．図面の説明図１は、ＰＣＲ断片からなるＰＴＰ−Ｓ３１の部分ｃＤＮＡ配列〔配列番号３〕および推定アミノ酸配列〔配列番号４〕を表す。図２は、図１に示したＰＴＰ−Ｓ３１のＰＣＲ断片の推定アミノ酸配列〔配列番号４〕とＰＴＰ１Ｂのアミノ酸配列〔配列番号５〕（Cherno ffら，前掲）との比較を示す。ＧＡＰアラインメント法を採用した［Needleman ら，J．Mol．Biol．48:443-453（1970）］。図３は、ＲＤ細胞ｃＤＮＡライブラリー（＃１）から得られたｃＤＮＡクローン（１．２０．４）、ＰＴＰ−Ｓ３１ＣのｃＤＮＡ配列〔配列番号６〕および推定アミノ酸配列〔配列番号７〕を表す。この部分ｃＤＮＡ配列は図１に示したＰＣＲ断片のｃＤＮＡ配列を含むものである。図４は、図３に示したＰＴＰ−Ｓ３１ＣのｃＤＮＡクローンの推定アミノ酸配列とＰＴＰ１Ｂのアミノ酸配列との比較を示す。ＧＡＰアラインメント法を採用した（Needlemanら，前掲）。図５は、オリゴヌクレオチド番号２２３および２２４を用いて得られたＰＣＲ断片のｃＤＮＡ配列〔配列番号８〕および推定アミノ酸配列〔配列番号９〕を表す。図６は、ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄの結合されたｃＤＮＡ配列〔配列番号１０〕および推定アミノ酸配列〔配列番号１１〕を表す。このｃＤＮＡ配列は図５に示したＰＣＲ断片のｃＤＮＡ配列を含むものである。図７は、ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄのアミノ酸配列とＰＴＰ１Ｂ、ＣＤ４５の第１ＰＴＰドメイン〔配列番号１２〕［Ralphら，EMBO J．6:1251-1257（1987）］およびＬＡＲ〔配列番号１３〕［Streuliら，J．Exp．Med．168:1523-1530（1988）］のそれぞれの配列との比較を示す。ＣＬＵＳＴＡＬプログラムを採用した［Hi ggins，C．ら，Multiple Sequence Alignment；CABIOS（1991）］。図８は、基質としてｐ−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰ−Ｐ）を用いるＰＴＰ酵素アッセイの結果を示す。グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）／ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ融合タンパク質の活性と、ＧＳＴ／ＰＴＰ−Ｓ３１Ｃ融合タンパク質およびグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（陰性対照）の活性とを比較してある。図９は、ヒト骨格筋ｍＲＮＡから作製されたｃＤＮＡライブラリー（＃２）より単離された最長ＰＴＰ−Ｓ３１ＤｃＤＮＡクローン（Ｓ３１Ｄ−６３）のｃＤＮＡ配列〔配列番号１４〕および推定アミノ酸配列〔配列番号１５〕を表す。このクローンの５’末端はＲＤｃＤＮＡライブラリーから単離されたＰＴＰ−Ｓ３１Ｃクローン（図３）の５’末端と異なっている。矢印は、このクローンがＰＴＰ−Ｓ３１Ｃと異なる位置を示す。図１０は、ヒト骨格筋ｃＤＮＡライブラリー＃２および＃３において同定された異なるタイプのＰＴＰ−Ｓ３１クローンの模式図を表す。ＰＴＰ−Ｓ３１ＣのｃＤＮＡクローン（図３）と異なる５’末端のみを示してある。図１１は、Ｓ３１−１４〔配列番号１６〕、Ｓ３１−２〔配列番号１７〕、Ｓ３１−５〔配列番号１８〕、Ｓ３１−６３〔配列番号１９〕およびＳ３１−ＩＩＩ〔配列番号２０〕を含む、ヒト骨格筋において見いだされたＰＴＰ−Ｓ３１変異体の推定アミノ酸配列を表す。図１２は、ＲＤλＺＡＰＩＩｃＤＮＡライブラリー（ライブラリー＃１４）から単離されたｃＤＮＡクローン、ＰＴＰＳ３１−ＲＤ＃２の部分ｃＤＮＡ配列〔配列番号２１〕および推定アミノ酸配列〔配列番号２２〕を表す。推定上の膜貫通領域には下線が引いてある。図１３は、ＰＴＰＳ３１−ＲＤ＃２のアミノ酸配列の一部とインターロイキン２受容体β鎖〔配列番号２３〕とのアラインメントを示す。膜貫通領域に隣接する細胞外ドメインの部分のみを示してある。図１４は、ＰＴＰ−Ｓ３１の細胞外領域のフィブロネクチンIII型様ドメインを示す。最もＣ末端側のドメインはＳ３１−ＦＮ−１で表され、最もＮ末端側のドメインがＳ３１−ＦＮ−４である。ＦＮ様ドメインをヒトフィブロネクチンの III型ドメイン（ＦＮ−IIIと記す）〔配列番号２４〕［Kornblihttら，EMBO J． 4:1755-1759（1985）］に整列させてある。図１５は、ＰＴＰＳ３１−ＲＤ＃２の細胞外領域の一部のアミノ酸配列（図面ではＰＴＰＳ３１と記す）とヒトインスリン受容体（ＩＲ）〔配列番号２５〕、ヒトインスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ１Ｒ）〔配列番号２６〕およびヒトインスリン関連受容体（ＩＲＲ）〔配列番号２７〕とのアラインメントを表す。５．発明の詳細な説明組換えＤＮＡ法の使用により、本発明者らは、ＰＴＰ−Ｓ３１と命名された、ヒト由来の新規な哺乳動物プロテインチロシンホスファターゼ（ＰＴＰ；EC 3.1 .3.48）および数種のその誘導体を同定した。本発明者らは、この新規なタンパク質をコードするｃＤＮＡクローンを作製し、大腸菌および真核生物２９３細胞においてこのタンパク質を発現させた。ノーザン分析により、種々の細胞および組織における当該タンパク質の自然界での発現が確認された。さらに、ＰＴＰ−Ｓ３１変異体のＰＴＰ−Ｓ３１Ｄを含む組換え融合タンパク質を用いる免疫感作により、当該タンパク質に対するポリクローナル抗体が得られた。 5.1. ＰＴＰ活性を変調する作用剤の同定酵素活性を有するＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質またはその誘導体は、ホスファターゼ活性を増強または阻害しうる化合物を試験するために使用することができる。ホスファターゼ活性を変更する試験化合物の能力はin v itro系で検査することができ、この系では、精製されたＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質またはその酵素活性誘導体に試験化合物が添加され、そして酵素活性に及ぼす効果が当業者に公知の標準酵素学的手法により測定される。また、ＰＴＰに対する化合物の作用は、生細胞、固定細胞、または生細胞や固定細胞から誘導された画分を用いる全細胞調製物で測定することもできる。この方法は当該タンパク質、特に当該タンパク質の酵素部分に作用する化合物のスクリーニングに有用である。試験化合物は、トランスフェクションしたＣＯＳまたはＮＩＨ−３Ｔ３細胞のような、本発明のＰＴＰを多量に発現する細胞とともに、または当該細胞から誘導される調製物とともにインキュベートされる。細胞性ホスホチロシンの量は当技術分野で公知の方法を用いて測定される［Honeggerら，Cell 51:199-209（1987）；Margolisら，Cell 51:1101-1107（1989）］。その結果を試験化合物の不在下で、または既知のＰＴＰ活性化剤の不在下もしくは存在下で得られた結果と比較する。こうした実験では、活性化剤チロシンキナーゼの存在下での試験化合物の作用も測定される。ＰＴＰ活性を刺激する化合物はホスホチロシン量の純減少をもたらすであろうが、ＰＴＰ活性を阻害する化合物はホスホチロシン量の純増加をもたらすであろう。 5.2. ＰＴＰ機能または機能障害と関連した疾患の治療本発明はまた、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質の異常発現と関連した疾患または症状の治療を意図した医薬組成物中での、斯く同定されたアンタゴニストまたはアゴニストの使用に関するものである。また、この医薬組成物は、ＰＴＰ−Ｓ３１は正常であるがシグナル伝達経路の下流の１以上の欠損と関連した疾患または症状の治療に、あるいは下流の欠損を伴わない症状の治療にさえも用いることができる。当該組成物は一般的に全身または局所の注射または注入に適する剤形で、注射または注入用の担体を用いて製剤化される。本発明はまた、ＰＴＰ−Ｓ３１の活性化を伴う疾患または症状を予防または治療する方法に関し、当該方法は、かかる予防または治療を必要とする患者に、有効投与量の本発明のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質、あるいは本発明の抗体または本発明のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質の酵素活性を刺激または阻害する分子を投与することを含んでなる。上皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体および血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）受容体のような、チロシンキナーゼである増殖因子受容体の場合には、チロシンのリン酸化が細胞増殖および癌形質転換に関連している。脱リン酸化をもたらすＰＴＰの活性化は、増殖を防止または阻止する逆の調節機構として働き、癌に対する内因性調節機構として作用するかもしれない。従って、この受容体／酵素系の調節の突然変異が癌になるのを促進するのかもしれない。インスリン受容体もチロシンキナーゼであり、インスリン受容体を保有する細胞でのチロシンのリン酸化はインスリンに関係した正常な生理学的機能と関連しているだろう。インスリン受容体の細胞内側にある３個のチロシン残基は、インスリンが細胞外ドメインに結合されるとリン酸化される。同時に、インスリン受容体はそれ自体または他のタンパク質をチロシン残基においてリン酸化しうる活性酵素となる。インスリン受容体の３個すべての細胞内チロシンのリン酸化は、十分なチロシンキナーゼ活性にとって必要であるらしい。十分に活性なインスリン受容体は細胞内タンパク質をリン酸化することによって細胞（例えば、骨格筋、肝臓など）にシグナルを伝達し、リン酸化によって活性化されたタンパク質はインスリンシグナル伝達経路を経てさらに下流に情報を伝える。従って、よく知られたインスリンの生理学的作用はリン酸化現象のカスケードから生じるものである。インスリンシグナル伝達は、チロシンキナーゼを脱リン酸化する（インスリン受容体の場合には、非活性化する）ことができるＰＴＰクラスの酵素によってしっかりと制御されている。インスリン受容体に対する活性を有するＰＴＰの存在は簡単に実証され得る。この情況において、ＰＴＰの活性化はインスリン作用を打ち消し、一方、ＰＴＰの阻害はインスリン作用を模倣するはずである。実際、ＰＴＰを阻害するペルバナデートで骨格筋や脂肪細胞のような全細胞を処理すると、ほぼ完全なインスリン応答が誘導される［Fantus，I.G.ら，Bi ochemistry 28:8864-8871（1989）；Leighton，B.ら，Biochem．J．276:289-292 （1989）］。いったんインスリン受容体に特異的に作用するＰＴＰが同定されると、そのＰＴＰは、ペルバナデートのような、ホスファターゼを阻害してインスリンの作用を模倣する化合物を同定するための、高処理量スクリーニング系で、または合理的なドラッグデザインのために使用される。ＰＴＰの過剰活性または不適切な活性化は、細胞に対するインスリンの作用を抑制または全体的に阻害して（インスリン抵抗性の）糖尿病を起こすことが予想されるだろう。従って、糖尿病に罹りやすいということは、ＰＴＰの調節障害と関連していて、ＰＴＰ−Ｓ３１を含むＰＴＰ活性の測定により診断できるかもしれない。かくして、正常または変異型のＰＴＰ−Ｓ３１遺伝子を同定するための、あるいは細胞または組織に関係したＰＴＰ−Ｓ３１の量または活性を測定するための本発明の方法は、癌や糖尿病、または細胞性ホスホチロシン代謝の変調と関連した他の疾患への罹病性を確認する方法として有用でありうる。さらに、ＰＴＰ− Ｓ３１タンパク質、その機能性誘導体、それにＰＴＰ−Ｓ３１酵素活性を変調（活性化または阻害）する作用剤は、癌や糖尿病のような疾患の発症を処置または予防するために使用できるかもしれない。 5.3. ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または核酸の検出および測定本発明は、被験者における正常または変異型のＰＴＰ−Ｓ３１の存在およびレベルを評価するための方法を提供する。個体におけるＰＴＰ−Ｓ３１の不在、より一般的にはＰＴＰ−Ｓ３１の低レベル発現、または変異型ＰＴＰ−Ｓ３１の存在は、癌形質転換を起こしやすいこと、そして癌を発症することの重要な指標として役に立つかもしれない。また、ＰＴＰ−Ｓ３１の過度の発現（おそらく、負の調節に無感応性の変異型受容体／酵素系によるか、またはあり余るほどの刺激因子が生体中に存在することによる）は糖尿病に罹りやすいことの重要な指標として役に立つかもしれない。ＰＴＰ−Ｓ３１のさまざまな部分をコードするオリゴヌクレオチドプローブを用いて、ＰＴＰをコードするＤＮＡまたはＲＮＡ配列の存在について被験者由来の細胞を試験することができる。プレプローブは本発明のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の少なくとも４個のアミノ酸残基、好ましくは少なくとも５個のアミノ酸残基をコードする核酸配列に向けられたものであるだろう。定性または定量アッセイはこうしたプローブを用いて行うことができる。例えば、細胞または組織調製物中のＰＴＰｍＲＮＡの発現を測定するためには、ノーザン分析（下記実施例を参照）を用いる。かかる方法は、個体から得られたＤＮＡがきわめて少量であっても、選択的な増幅技術を採用した後で使用することができる。精製した核酸断片を増幅しうる組換えＤＮＡ方法論はすでに久しく認められている。一般的に、こうした方法論はＤＮＡまたはＲＮＡベクターへの核酸断片の導入、当該ベクターのクローン増幅、そして増幅された核酸断片の回収を含むものである。こうした方法論は、例えばCohenら（米国特許第4,237,224号）、Sambrookら，Molecular Cloning：A Laboratory Manua l，第２版，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，NY（1989）に提示されており、これらの開示内容を参考としてここに組み入れる。目的の核酸分子の濃度を高めることができるin vitro酵素的方法は「ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）」と呼ばれているものである〔Mullisら，Cold Spring Harbor Symp．Quant．Biol．51:263-273（1986）；Erlichら，EP 50,424；EP 84 ,796，EP 258,017，EP 237,362；Mullis，K.，EP 201,184；Mullisら，US 4,683 ,202；Erlich，H.，US 4,582,788；およびSaikiら，US 4,683,194〕。ＰＣＲは、特定の核酸配列が前もって精製されておらず、特定サンプル中に単一コピーで存在しているにすぎないときでさえ、その配列の濃度を選択的に増大させる方法を提供する。この方法は一本鎖と二本鎖のいずれのＤＮＡを増幅するためにも使用できる。この方法の本質は、目的とする核酸分子の鋳型依存性ポリメラーゼ媒介複製のプライマーとして作用する２つのオリゴヌクレオチドプローブを使用することにある。ＰＣＲ法を成功させるためには、用いる２つのオリゴヌクレオチドプローブの正確な本性が最も重要となる。周知であるように、ＤＮＡまたはＲＮＡの分子はこの分子のリン酸基の５’−３’結合により与えられる方向性を有する。ＤＮＡまたはＲＮＡの配列は、１つの配列の末端５’リン酸基と第２の配列の末端３’ ヒドロキシル基の間のホスホジエステル結合の形成により一緒に結合されている。核酸分子の３’ヒドロキシル末端への５’ヌクレオチド三リン酸のポリメラーゼ依存性増幅。従って、ポリメラーゼの作用は核酸分子の３’末端を伸長する。ＰＣＲのオリゴヌクレオチドプローブを選択する際には、これらの固有の性質が利用される。ＰＣＲのプローブのオリゴヌクレオチド配列は、それらが増幅しようとする特定の核酸配列の両末端に隣接する配列と同一のまたは相補的な配列を含むように選択される。より詳細には、「第１」プローブのオリゴヌクレオチド配列は、それが目的の配列の３’側にあるオリゴヌクレオチド配列とハイブリダイズできるように選ばれ、一方、「第２」プローブのオリゴヌクレオチド配列は、それが目的の領域の５’側に存在する配列と同一のオリゴヌクレオチド配列を含むように選ばれる。両プローブとも３’ヒドロキシ基を有し、それゆえに核酸合成のプライマーとして働くことができる。ＰＣＲでは、ハイブリダイゼーションおよび核酸重合へ導く反応条件と、二本鎖分子を変性させる反応条件とが周期的に繰り返し用いられる。第１の反応段階において、存在しうる二本鎖分子を変性させるために、サンプルの核酸を一時的に加熱し、その後冷却する。続いて、「第１」および「第２」のプローブを、目的の核酸分子の濃度をはるかに超える濃度でサンプルに加える。このサンプルをハイブリダイゼーションおよび重合へ導く条件下でインキュベートすると、「第１」プローブは増幅しようとする配列の３’側の位置でサンプルの核酸分子にハイブリダイズするだろう。サンプルの核酸分子が初めに二本鎖であったならば、「第２」プローブが増幅しようとする配列の相補鎖である配列の３’ 側の位置で核酸分子の相補鎖にハイブリダイズするだろう。ポリメラーゼを添加すると、「第１」および（核酸分子が二本鎖である場合には）「第２」のプローブの３’末端が伸長されるだろう。「第１」プローブの伸長は目的の核酸の正確な配列を有するオリゴヌクレオチドの合成をもたらすこととなり、「第２」プローブの伸長は目的の核酸の相補鎖の正確な配列を有するオリゴヌクレオチドの合成をもたらすこととなる。ＰＣＲ反応は特定の核酸配列の指数的増幅を可能とするものである。なぜならば、「第１」プローブの伸長産物は必然的に「第２」プローブの配列に相補的な配列を含み、従って、「第２」プローブの伸長産物を作るための鋳型として働くことができるからである。同様に、「第２」プローブの伸長産物は必然的に「第１」プローブの配列に相補的な配列を含み、従って、「第１」プローブの伸長産物を作るための鋳型として働くことができる。こうして、ハイブリダイゼーション、重合および変性のサイクルを実施することにより、目的の核酸分子の濃度の幾何学的増加が達成される。ＰＣＲの総説については、Mullisら，Cold Spring Harbor Symp．Quant．Biol．51:263-273（1986）；Saikiら，Bio/Technology 3: 1008-1012（1985）；およびMullisら，Meth．Enzymol．155:335-350（1987）を参照されたい。 5.4. ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質および機能性誘導体ある実施態様において、本発明は、天然に存在する哺乳動物ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質に関する。別の実施態様において、本発明は、組換え体の哺乳動物ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質に関する。本発明の好ましいＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質はヒトに由来するものである。本発明は、自然界で結合している他のタンパク質を実質的に含まない天然に存在する分子を提供する。「他のタンパク質を実質的に含まない」とは、そのタンパク質が、自然界で結合している他のタンパク質および糖タンパク質の少なくとも９０％（重量基準）、それどころか、少なくとも９９％を失って精製されており、それゆえ、実質的にそれらを含まないことを指す。これは、ＲＰＴＰを含む細胞、組織または体液を標準的なタンパク質精製技術、例えば当該タンパク質と反応性のモノクローナル抗体を担持する免疫吸着カラムにかけることによって達成される。アフィニティー精製の他の形態は、ＰＴＰドメインと結合しうる固相支持体、または受容体ドメインに結合しうるリガンドを利用することができる。また、硫酸アンモニウム沈殿、分子ふるいクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーといった標準的方法を組み合わせても精製することができる。他の実施態様において、本発明は、ＰＴＰ−Ｓ３１またはその少なくとも９連続アミノ酸、好ましくは少なくとも１０、１５、２０または３０連続アミノ酸に相当するアミノ酸配列を有するペプチドに関する。本発明の哺乳動物ＰＴＰ−Ｓ３１はさまざまな細胞または組織の供給源から生化学的に精製し得ることが理解されよう。天然に存在するＰＴＰ−Ｓ３１の調製のためには、哺乳動物の骨格筋、特にヒト由来のものが好適である。また、ＰＴＰ−Ｓ３１をコードする核酸分子は単離または合成することが可能であるので、所望であれば、原核生物または哺乳動物以外の真核生物において、自然界で結合している他のタンパク質または糖タンパク質を実質的に含まないポリペプチドを合成することができる。本発明が意図するところの、哺乳動物細胞（例えば、トランスフェクションしたＣＯＳ、ＮＩＨ−３Ｔ３、ＣＨＯ、２９３細胞など）内で産生される組換えＰＴＰ−Ｓ３１分子は天然に存在するタンパク質配列またはその機能性誘導体である。天然に存在するタンパク質が組換え手段によって産生される場合、それは、それが自然界で結合している他のタンパク質および糖タンパク質を実質的に含まない形態で提供される。また、固相支持体上で目的の配列のポリペプチドを合成し、その後それを支持体から分離する方法も公知である。更なる実施態様において、本発明はＰＴＰ−Ｓ３１の「機能性誘導体」を提供する。「機能性誘導体」とは、ＰＴＰ−Ｓ３１の「断片」、「変異体」、「類似体」または「化学的誘導体」を指し、これらの用語は以下で定義することにする。機能性誘導体はＰＴＰ−Ｓ３１の機能の少なくとも一部、例えば特異的抗体への結合またはホスファターゼ酵素活性、を保持する。ＰＴＰ−Ｓ３１の「断片」は当該分子の任意のサブセット、すなわち、より短いペプチドを指す。「断片」という用語は、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を適切に修飾して当該天然配列のＣ末端、Ｎ末端または内部の１以上の部位で１個以上のアミノ酸の欠失を生じさせることにより、天然に存在するタンパク質配列を有するＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質から誘導されたポリペプチドを示すために使用される。ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の断片は、アンタゴニストやアゴニスト（以下で定義する）の化合物をスクリーニングするのに有用である。ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質のこのような断片は天然ＰＴＰ−Ｓ３１の特徴的な部分を保持しうることが理解されよう。特に、こうした断片は無傷のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質に特徴的な生物学的活性または機能を１以上保持すべきである。ＰＴＰ−Ｓ３１断片の例として、ａ）触媒ドメイン、ｂ）無傷の細胞において他の分子と相互作用するＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の領域、ｃ）ＰＴＰ−Ｓ３１の調節部分が挙げられるが、これらの例は本発明の範囲をいかなる場合も限定するものではない。ＰＴＰ−Ｓ３１の「変異体」は、完全なペプチドまたはその断片に実質的に類似している分子を指す。変異型ペプチドは、当技術分野で公知の方法を用いて、変異型ペプチドの直接化学合成を行うことにより有利に製造することができる。別法として、ペプチドのアミノ酸配列変異体は、合成ペプチドをコードするＤＮＡの突然変異によっても製造することができる。こうした変異体は例えばアミノ酸配列内の残基の欠失、挿入または置換を含む。最終構築物が所望の活性を保有するという前提で、最終構築物に至るまでに欠失、挿入、置換を任意に組み合わせてもよい。明らかなことであるが、変異型ペプチドをコードするＤＮＡに対して行われる突然変異はリーディングフレームを変更するものであってはならず、また、二次ｍＲＮＡ構造を形成しうる相補領域が生じないようにすることが好ましい（欧州特許公開EP 75,444を参照のこと）。更なる態様において、本発明は、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を適切に修飾して当該天然配列のＣ末端、Ｎ末端または内部の１以上の部位で１個以上のアミノ酸の付加を生じさせることにより、天然に存在するＰＴＰ −Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質から誘導された、追加のアミノ酸を有するＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質を提供する。追加のアミノ酸を有するＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質は、天然のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の特徴的な部分を保持しうることが理解されよう。特に、このような追加のアミノ酸を有するＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質は、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質に特徴的な生物学的活性または機能を１以上保持すべきであり、その例として、（ａ）触媒活性、（ｂ）基質特異性、（ｃ）無傷の細胞中の他の分子との相互作用、（ｄ）調節機能を挙げることができる。これらの例は本発明の範囲をいかなる場合も限定するものではない。更なる態様において、本発明は、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質をコードするＤＮＡ配列を適切に修飾するかまたは変異を起こさせて天然アミノ酸配列のＣ末端、Ｎ末端または内部の１以上の部位で１個以上のアミノ酸の置換を生じさせることにより、天然に存在するＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質から誘導された、置換アミノ酸を有するＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質を提供する。このような置換アミノ酸を有するＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質はＰＴＰ−Ｓ３１の特徴的な部分を保持し、好ましくは、無傷のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質に特徴的な生物学的活性または機能を１以上保持すべきであることが理解されよう。例えば、（ａ）触媒活性、（ｂ）基質特異性、（ｃ）無傷の細胞中の他の分子との相互作用、（ｄ）調節機能などが挙げられるが、これらの例は本発明の範囲をいかなる場合も限定するものではない。ＰＴＰ−Ｓ３１機能性誘導体の最終構築物が無傷のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質に存在する所望の活性または機能、例えば（ａ）触媒活性、（ｂ）基質特異性、（ｃ）in vitroおよびin vivoでの他の分子との相互作用、（ｄ）調節機能、を保有するという前提で、最終構築物に至るまでに欠失、挿入、置換を任意に組み合わせることができる。欠失、挿入、置換を任意に組み合わせた後では、このような活性または機能のただ１つを保持する必要がある。これらの例は本発明の範囲をいかなる場合も限定するものではない。明らかなことであるが、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質をコードするＤＮＡに対して行われる修飾または突然変異はリーディングフレームを変更するものであってはならず、また、二次ｍＲＮＡ構造を形成しうる相補領域が生じないようにすることが好ましい（欧州特許公開EP 75,444を参照のこと）。通常、これらの変異体は、遺伝子レベルで、ペプチド分子をコードするＤＮＡ中のヌクレオチドに〔Adelmanら，DNA 2 :183（1983）に例示される〕部位特異的突然変異を誘起させて変異体をコードするＤＮＡを作製し、その後、組換え細胞培養物において当該ＤＮＡを発現させることにより得られる（下記参照）。変異体は一般的には非変異型ペプチドと定性的に同じ生物学的活性を示す。ＰＴＰ−Ｓ３１の「類似体」は完全な分子またはその断片に実質的に類似した非天然分子を指す。ＰＴＰ−Ｓ３１の「化学的誘導体」は、普通はそのペプチドの一部ではない追加の化学成分を含むものである。本発明の範囲にはペプチドの共有結合修飾が含まれる。このような修飾は、ペプチドの標的アミノ酸残基を、所定の側鎖または末端残基と反応し得る有機誘導体化剤と反応させることにより、当該分子に導入することができる。最も一般的には、システイニル残基をクロロ酢酸やクロロアセトアミドのようなα−ハロアセテート（または対応アミン）と反応させると、カルボキシメチルまたはカルボキシアミドメチル誘導体が得られる。また、システイニル残基はブロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５−イミダゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルホスフェート、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２− ピリジルジスルフィド、メチル２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロメルクリベンゾエート、２−クロロメルクリ−４−ニトロフェノール、またはクロロ−７ −ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾールとの反応により誘導体化される。ヒスチジル残基はジエチルピロカルボネートとｐＨ５．５〜７．０で反応させることにより誘導体化される。この試薬はヒスチジル側鎖に対して割合に特異的である。ｐ−ブロモフェナシルブロミドも有用である。この反応は０．１Ｍのカコジル酸ナトリウム中でｐＨ６．０で行うことが好ましい。リシニル残基およびアミノ末端残基はコハク酸または他のカルボン酸の無水物と反応しうる。これらの試薬による誘導体化はリシニル残基の電荷を反対にする効果を有する。α−アミノ含有残基を誘導体化するのに適した他の試薬として、メチルピコリンイミデートのようなイミドエステル類、ピリドキサルリン酸、ピリドキサール、クロロボロハイドライド、トリニトロベンゼンスルホン酸、Ｏ−メチルイソ尿素、２，４−ペンタンジオン、およびグリオキシル酸とのトランスアミナーゼ触媒反応を挙げることができる。アルギニル残基は１種以上の慣用試薬、中でも、フェニルグリオキサール、２，３−ブタンジオン、１，２−シクロヘキサンジオンおよびニンヒドリンとの反応により誘導体化される。アルギニン残基の誘導体化は、グアニジン官能基の高いｐＫ_aのために反応をアルカリ性条件下で行う必要がある。さらに、これらの試薬はアルギニンのε−アミノ基だけでなくリシンのアミノ基とも反応しうる。チロシル残基は化学的修飾のための、特に、芳香族ジアゾニウム化合物またはテトラニトロメタンとの反応によりチロシル残基へ分光標識を導入するための、公知の部位である。最も一般的には、Ｏ−アセチルチロシル種および３−ニトロ誘導体を形成させるために、それぞれ、Ｎ−アセチルイミダゾールおよびテトラニトロメタンが用いられる。カルボキシル側基（アスパルチルまたはグルタミル）はカルボジイミド類（Ｒ ’−Ｎ−Ｃ−Ｎ−Ｒ’）、例えば１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル −４−エチル）カルボジイミドまたは１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４ −ジメチルペンチル）カルボジイミドとの反応により選択的に修飾される。さらに、アスパルチルおよびグルタミル残基はアンモニウムイオンとの反応によりアスパラギニルおよびグルタミニル残基に変換される。グルタミニルおよびアスパラギニル残基はしばしば対応するグルタミルおよびアスパルチル残基に脱アミド化される。また、これらの残基は弱酸性条件下でも脱アミド化される。これらの残基のいずれの形態も本発明の範囲に含まれる。二官能性試薬による誘導体化はペプチドを水不溶性の支持体マトリックスまたは他の巨大分子担体へ架橋させるのに有用である。慣用の架橋剤としては、例えば１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタン；グルタルアルデヒド；Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、例えば４−アジドサリチル酸とのエステル；ホモ二官能性イミドエステル、例えば３，３’−ジチオビス（スクシンイミジル−プロピオネート）のようなジスクシンイミジルエステル；および二官能性マレイミド、例えばビス−Ｎ−マレイミド−１，８−オクタンなどがある。メチル−３−〔（ｐ−アジドフェニル）ジチオ〕プロピオイミデート中間体のような誘導体化剤は光線の存在下で架橋を形成することが可能である。また、臭化シアン活性化炭水化物のような水不溶性の反応性マトリックスおよび米国特許第 3,969,287号、第3,691,016号、第4,195,128号、第4,247,642号、第4,229,537号、および第4,330,440号に記載される反応性支持体はタンパク質の固定化に使用される。その他の修飾には、プロリンまたはリシンのヒドロキシル化、セリルまたはトレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニンおよびヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化［T.E．Creighton，Proteins：Structure and Molecule Properties，W.H．Free man & Co.，Francisco，pp．79-86（1983）］、Ｎ末端のアセチル化、そして、ある場合には、Ｃ末端カルボキシル基のアミド化が含まれる。このような誘導体化成分は溶解性、吸着、生物学的半減期などを改善しうる。また、これらの成分はタンパク質などの望ましくない副作用をなくしたり、弱めたりすることができる。こうした効果を仲介し得る成分は、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences，16th ed.，Hack Publishing Co.，Easton，PA（1980 ）に記載されている。 5.5. キメラＰＴＰ−Ｓ３１分子更なる態様において、本発明は、他のＰＴＰから構成された、いわゆるキメラ分子を提供し、キメラ分子は１以上の特定アミノ酸配列が他のＰＴＰタンパク質または糖タンパク質由来の相同配列で置き換えられたものである。キメラ分子は、例えば、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の一部にグラフトされたリガンド結合性細胞外ドメインを有する受容体型ＰＴＰ（ＲＰＴＰ）タンパク質または糖タンパク質を含むことができる。本発明の範囲に含まれる他のキメラ分子には、触媒ホスファターゼドメインがＰＴＰ−Ｓ３１由来のホスファターゼドメインで置き換えられたＰＴＰが含まれる。この場合、好ましいアミノ酸の数は２２０〜２６０である。「相同配列」とは、一次配列において同様に位置づけられた、配列相同性を示しうる、２以上のＰＴＰ中の配列と定義される。「相同配列」は高い相同度を有する場合に限るべきでないことが強調されるべきである。キメラ分子は構造と機能の関係を解明しかつ特定の化合物（薬剤）を確認するための重要な道具である。かくして、最も有用なキメラはしばしば、しかし常にそうとは限らないが、ある分子のある部分が、他の点では相同な別の配列に由来する同様に位置づけられた異なる配列で置き換えられた分子である。従って、交換される部分はしばしば、それらが最大限度相違している分子の部分に相当するだろう。５．６．ＰＴＰ−Ｓ３１に特異的な抗体、およびＰＴＰ−Ｓ３１の検出または測定におけるそれらの使用本発明はまた、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の（最も好ましくはヒトＰＴＰ−Ｓ３１の）エピトープに特異的な抗体、ならびに、細胞、細胞あるいは組織抽出物、または生物学的流体中におけるＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の存在の検出、または量あるいは濃度の測定のためのそのような抗体の使用に向けられている。「抗体」という用語はポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、キメラ抗体および抗イディオタイプ（抗-Id）抗体を含むものである。ポリクローナル抗体は、抗原によって免疫感作された動物の血清から誘導された抗体分子の異種集団である。モノクローナル抗体は、特定の抗原に対する抗体の実質的に同種の集団である。ｍＡｂは当業者に公知の方法で得ることができる。例えば、KohlerおよびMils tein，Nature 256:495-497（1975）および米国特許第4,376,110号を参照されたい。このような抗体は、IgG，IgM，IgE，IgAおよびIgDを含む任意のイムノグロブリンクラスおよびその任意のサブクラスのものでありうる。本発明のｍＡｂを産生するハイブリドーマは、in vitroまたはin vivoで培養できる。in vivoでの高力価なｍＡｂの産生は、この方法を現在における好ましい産生方法としている。簡単に述べると、個々のハイブリドーマ由来の細胞をプリスタンを投与したBA LB/cマウスの腹腔内に注入し、所望のｍＡｂを高濃度で含む腹水を生成させる。イソタイプIgMまたはIg GのｍＡｂは、このような腹水から、または培養上清から、当業者に周知のカラムクロマトグラフィー法によって精製することができる。キメラ抗体は、その異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。例えば、マウスｍＡｂ由来の可変部とヒトイムノグロブリン定常部を有する分子である。キメラ抗体およびその作製方法は当分野では公知である［Cabillyら，Proc．N atl．Acad．Sci．USA 81:3273-3277（1984）；Morrisonら，Proc．Natl．Acad． Sci．USA 81:6851-6855（1984）；Boulianneら，Nature 312:643-646（1984）； Neubergerら，Nature 314:268-270（1985）；Taniguchiら，ヨーロッパ特許出願第171496号（1985年２月19日）；Morrisonら，ヨーロッパ特許出願第173494号（ 1986年３月５日）；Neubergerら，PCT出願WO86/01533（1986年３月13日）；Kudo ら，ヨーロッパ特許出願第184187号（1986年６月11日公開）；Sahaganら，J.Imm unol．137:1066-1074（1986）；Robinsonら，国際特許広報＃PCT/US86/02269（1 987年５月７日公開）；Liuら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 84:3439-3443（198 7）；Sunら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 84:214-218（1987）；Betterら，Sci ence 240:1041-1043（1988）］。これらの文献は参考としてここに組み入れる。抗イディオタイプ（抗-Id）抗体は、一般に抗体の抗原結合部位と関係した特異な決定基を認識する抗体である。抗-Id抗体は、ｍＡｂの供給源としての同一種で同一遺伝子型の動物（例えばマウス系統）を、ｍＡｂ（これに対して抗-Id 抗体が調製される）で免疫感作して調製することができる。免疫感作された動物は免疫感作抗体のイディオタイプ決定基を認識し、これらイディオタイプ決定基に対する抗体（抗-Id抗体）を産生することによって応答する。抗-Id抗体は、別の動物中に免疫応答を誘導し、いわゆる抗-抗-Id抗体を産生させるための「免疫原」としても使用できる。この抗-抗-Id抗体は、抗-Id抗体を誘導した最初のｍＡｂとエピトープ的に同一でありうる。したがって、ｍＡｂのイディオタイプ決定基に対する抗体を使用することによって、同一の特異性を有する抗体を発現する他のクローンを同定することが可能である。したがって、ＰＴＰ−Ｓ３１に対して作製されたｍＡｂは、適切な動物（例えばBALB/cマウス）中に抗-Id抗体を誘導するために使用できる。このような免疫感作マウス由来の脾細胞は、抗-Id ｍＡｂを分泌する抗-Idハイブリドーマを作製するのに使用される。さらに、抗-Id ｍＡｂをキーホールリンペットヘモシアニン（KLH）等の担体に結合させ、さらなるBALB/cマウスを免疫感作するのに使用することができる。これらのマウス由来の血清は、ＰＴＰ−Ｓ３１エピトープに特異的な最終ｍＡｂの結合特性を有する抗-抗-Id抗体を含有する。したがって抗-Id ｍＡｂはそれ自身のイディオタイプエピトープ、または本明細書によって評価されるエピトープ、例えばＰＴＰ−Ｓ３１エピトープと構造的に類似した「イディオトープ」を有する。「抗体」という用語はまた、完全な分子およびその断片の両方を含むものである。断片の例としては、抗原と結合可能なFa bおよびF(ab')₂があげられる。FabおよびF(ab')₂断片は、完全な抗体のFc断片を欠き、循環系からより迅速に消失する；また、完全な抗体に較べ、非特異的組織結合が少ない場合がある［Wahlら，J.Nucl.Med．24:316-325（1983）］。本発明において有用なFab、F(ab')₂およびその他の断片は、本明細書に開示する完全な抗体分子に対する検出・定量方法にしたがって、ＰＴＰ−Ｓ３１の検出および定量に使用できることが理解されるであろう。このような断片は典型的にはパパイン（Fab断片を作製のため）またはペプシン（F(ab')₂断片作製のため）等の酵素を用いるタンパク質分解開裂により作製される。抗体は、ある分子と特異的反応が可能で、それによってその分子を抗体に結合させるならば、その分子と「結合可能」であるといわれる。「エピトープ」という用語は、任意の分子における抗体によって結合されうる部分で、その抗体によって認識されうる部分を指すものである。エピトープまたは抗原決定基は通常アミノ酸または糖側鎖等の化学的に活性な表面グルーピング（groupings）からなり、特定の３次元構造および特定の電荷に特徴を有する。「抗原」とは抗体によって結合されうる分子または分子の一部であり、これはさらに動物のうちに該抗原のエピトープと結合可能な抗体の産生を誘導することが可能である。抗原は１つまたはそれ以上のエピトープを有する。上記に言及した特異的反応は、抗原は高度に選択的な方法で対応する抗体と反応するが、他の抗原によって引き出される多数の他の抗体とは反応しないことを示すものである。本発明において有用な抗体または抗体断片は、ＰＴＰ−Ｓ３１を発現する細胞の存在を定量的に検出するために使用できる。この検出は、蛍光標識抗体（下記参照）を用いる免疫蛍光技法と光学顕微鏡、フローサイトメトリーまたは蛍光定量法による検出を組み合わせることによって実施できる。本発明において有用な抗体（またはその断片）は免疫電子顕微鏡法の免疫蛍光に用いるなど、ＰＴＰ−Ｓ３１のin situ検出のために組織学的に使用することができる。in situ検出は、患者から組織学的標本を採取し、その標本に本発明の標識化抗体を給供することにより実施することができる。抗体（またはその断片）は、好ましくは生物学的試料に標識化抗体（またはその断片）をアプライまたは重層させることにより供される。このような手順を用いることにより、ＰＴＰの存在のみならず検査組織におけるその分布も測定可能である。当業者は、このようなin situ検出を実施するために本発明を用いて多様な組織学的方法の任意のもの（例えば染色法）を改変しうることが容易に分かるであろう。ＰＴＰ− Ｓ３１のこのようなアッセイは、生物学的試料（例えば生物学的流体）、組織抽出物、新たに回収した細胞（例えばリンパ球または白血球）、または組織培養で培養された細胞を、ＰＴＰ−Ｓ３１を同定することのできる検出可能に標識された抗体の存在下でインキュベートし、当分野で周知の多数の技法のうち任意の技法により上記抗体を検出することからなる。生物学的試料は、ニトロセルロース等の固相支持体、または細胞、細胞微粒子あるいは可溶性タンパク質を固定化できる他の固相支持体で処理することができる。次に、支持体を適切な緩衝液で洗浄し、その後、検出可能に標識されたＰＴＰ−Ｓ３１特異的抗体で処理することができる。次に緩衝液を用いて固相支持体に２度目の洗浄をほどこし未結合抗体を除去することができる。次に、該固相支持体上の結合標識の量を従来の手段により検出できる。「固相支持体」という用語は、抗原または抗体と結合可能な任意の支持体を意味する。周知の支持体または担体には、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然および変性セルロース、ポリアクリルアミド、斑糲岩および磁鉄鉱が含まれる。本発明の目的のためには、担体の性質はある程度可溶性でも、または不溶性でもよい。支持体材料は、そこに結合される分子が抗原または抗体と結合可能でありさえすれば、事実上取りうる任意の構造的配置を取ってよい。したがって支持体の配置はビーズにおけるように球状でも、試験管の内側表面または棒の外側表面におけるように円柱状でもよい。または、支持体の表面はシートまたは試験片等のように平坦であってもよい。好ましい支持体にはポリスチレンビーズが含まれる。当業者は抗体または抗原を結合させるための他の適切な担体を多数知っているか、または通常の実験を行なうことによってそれらを知ることができるであろう。所定のロットの抗ＰＴＰ−Ｓ３１抗体の結合活性は、周知の方法により測定することができる。当業者は、通常の実験を行なうことによって各測定に対する具体的および最適アッセイ条件を決定することが可能であろう。上記アッセイに、通例のように、または特定の状況に応じて、洗浄、攪拌、振とう、濾過等の他の工程を加えることができる。ＰＴＰ−Ｓ３１特異的抗体を検出可能に標識する方法の１つは、該抗体を酵素に連結し、エンザイムイムノアッセイ（ＥＩＡ）に使用するものである。この酵素は後に適切な基質に暴露されたとき、分光測光的、蛍光定量法的、または視覚的手段により検出されうる化学的成分を生ずるような方法で基質と反応する。抗体を検出可能に標識するために使用できる酵素は以下のものを含むがそれらだけに限定されない。すなわち、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ−５−ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、α−グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼおよびアセチルコリンエステラーゼである。検出は該酵素に対する色原体基質を用いる比色法によって実施できる。検出はまた、同様に調製された標準品と較べての基質の酵素反応の度合いを視覚的に比較することによっても実施できる。検出は、他の種々のイムノアッセイの任意のものを用いて実施できる。たとえば、抗体または抗体断片を放射性標識することにより、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を用いてＲＰＴＰを検出することが可能である（例えば、Work，T.S.ら，Laboratory Techniques and Biochemistry in Molecular Biology，North Holland Publishing Company ，New York，1978参照。これは参考としてここに組み入れる）。放射性同位体はガンマカウンターまたはシンチレーションカウンターの使用等の手段により、またはオートラジオグラフィーにより検出できる。また、抗体を蛍光化合物で標識することも可能である。蛍光標識された抗体が適切な波長の光に暴露されると、蛍光のためにその存在が検出できる。最もよく使用される蛍光化合物には、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ο-フタルアルデヒドおよびフルオレサミンがあげられる。抗体は、¹⁵²Ｅｕまたはランタニド系列の他の金属等の蛍光発光金属を用いても検出可能に標識することができる。これらの金属は、ジエチレントリアミン５酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン４酢酸（ＥＤＴＡ）等の金属キレート化剤を用いて抗体に結合させることができる。抗体は、化学発光化合物と結合させることによっても検出可能に標識することができる。化学発光化合物を付けられた抗体の存在は、化学反応の進行中に生ずる発光の存在を検出することにより確認される。特に有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、セロマティック（theromatic）アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩およびシュウ酸エステルである。同様に、生物発光化合物も本発明の抗体を標識するのに使用できる。生物発光は生物学的系に見いだされる一種の化学発光で、そこでは触媒となるタンパク質が化学発光反応の効率を増大させる。生物発光タンパク質の存在は、発光の存在を検出することにより確認される。標識の目的にとって重要な生物発光化合物は、ルシフェリン、ルシフェラーゼおよびエクオリンである。本発明の抗体分子は、「２部位」または「サンドイッチ」アッセイとして知られている免疫測定アッセイに使用するために適合させることが可能である。典型的な免疫測定アッセイにおいては、ある量の非標識抗体（または抗体断片）を固相支持体に結合させ、ある量の検出可能に標識された可溶性抗体を添加して、固相抗体、抗原および標識化抗体の間で形成される３成分複合体の検出および／または定量を可能とする。典型的で、かつ好ましい免疫測定アッセイには、固相支持体に結合した抗体をまず試験すべき試料に接触させて、２成分の固相抗原−抗体複合体の形成により試料から抗原を抽出する「前進（forward）」アッセイが含まれる。適切なインキュベーション期間の後、固相支持体を洗浄し、もしあれば未反応抗原を含む流体試料の残留物を除去し、次に未知の量の標識化抗体（これは「リポーター分子」として機能する）を含有する溶液に接触させる。標識化抗体が非標識抗体を介して固相支持体に結合した抗原に結合するのを可能とする第２のインキュベーション期間の後、固相支持体に２回目の洗浄をほどこし、未反応の標識化抗体を除去する。本発明の抗原にとって有用でありうる別のタイプの「サンドイッチ」アッセイにおいては、所謂「同時」および「逆（reverse）」アッセイが用いられる。同時アッセイは、固相支持体に結合した抗体と標識化抗体の両方を試験すべき試料に同時に加えるので、インキュベーション工程を１回のみ含む。インキュベーションの完了後、固相支持体を洗浄して流体試料の残留物および未結合の標識化抗体を除去する。次に、固相支持体と結び付いた標識化抗体の存在を従来の「前進」サンドイッチアッセイの場合と同様に検出する。「逆」アッセイにおいては、まず標識化抗体の溶液を流体試料に添加し、次に適切なインキュベーション期間の後に固相支持体に結合した非標識抗体を添加するという段階的添加が使用される。第２のインキュベーション後、固相支持体を従来の方法で洗浄して、それから試験すべき試料の残留物および未反応標識化抗体の溶液を除去する。次に、固相支持体に結合された標識化抗体の測定が、「同時」および「前進」アッセイの場合と同様に実施される。被験者における正常に機能するＰＴＰ−Ｓ３１の存在もまた直接酵素アッセイ、好ましくはチロシンホスファターゼ活性のアッセイを用いて試験することができる。このような生化学的測定は、精製した酵素を用いて、酵素活性の正確な測定を可能にして、または正味ホスホチロシンレベルを測定する際には膜調製物あるいは全細胞を用いてin vitroで実施することができる。５．７．ＰＴＰ−Ｓ３１をコードする核酸分子本発明のさらなる態様において、ＰＴＰ−Ｓ３１分子をコードするＤＮＡ配列および該ＤＮＡ配列の発現方法が提供される。当業者は、本発明の遺伝子配列およびオリゴヌクレオチドを用いることにより、過度の実験をすることなく、いかにしてヒトまたは他の哺乳動物種の、本明細書に記述されるＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質およびその機能的誘導体に対し配列相同性を有するさらなるＰＴＰ分子を同定し、クローン化すべきかを知るであろう。１つの態様において、本発明はＰＴＰ−Ｓ３１のアミノ酸配列を有する、またはそのうちの少なくとも９個、好ましくは少なくとも１０、１５、２０または３０個の連続するアミノ酸を有する、ポリペプチドをコードする単離された核酸分子に向けられている。好ましい態様において、この単離された核酸は配列番号４のアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはその突然変異体もしくは種変異体をコードする。別の好ましい態様においては、単離された核酸配列は配列番号３、またはそのうちの少なくとも２７個、好ましくは少なくとも３０、３５、４０または５０個の連続するヌクレオチドからなる。本発明の遺伝子構築物の操作は、ＲＰＴＰの特定のリガンド結合受容体ドメインおよび膜貫通ドメインをＰＴＰ−Ｓ３１の触媒部位へグラフトすることを可能とし、これはキメラ分子をもたらす。このようなキメラ分子の非制限的例は、受容体が上皮増殖因子受容体、線維芽細胞増殖因子受容体、などであるＰＴＰを含む。例えばＰＴＰ−Ｓ３１とＰＴＰαまたはＰＴＰεの間のＰＴＰ−ＰＴＰキメラもまた意図される。遺伝子工学的に作製されたキメラ受容体は当分野で公知である（例えば、Riedel，H.ら，Natu re 324:628-670（1986）参照）。ＰＴＰ−Ｓ３１をコードする遺伝子構築物、その機能的誘導体、および上記のようなキメラ分子は遺伝子治療に使用できる。病気に帰着する異常な、または機能障害のＰＴＰ−Ｓ３１は、正常なＰＴＰ−Ｓ３１をコードするＤＮＡでトランスフェクトした所望の系列の細胞（例えば造血細胞）の注入によって置き換えることができる。代わりに、または付加的に、選択したリガンド（例えばＥＧＦ）の受容体を有するキメラＲＰＴＰを担持する細胞を上記のような遺伝子治療に使用できる。本発明の組換えＤＮＡ分子は、種々の手段のうち任意のものを用いて作製できる。例えば、ＤＮＡあるいはＲＮＡ合成、またはより好ましくは組換えＤＮＡ技法の適用によって作製できる。このような分子の合成技法は、例えばWu，R.ら（ Prog．Nucl．Acid．Res．Molec．Biol．21:101-141（1978）によって開示されている。上記の方法にしたがって組換え分子を構築する手順はSambrookら（前掲）によって開示されている。本発明の組換え分子の３’末端は、重合に不適となるように処理されていることが好ましい。このような処理は、該末端を化学的手段でブロックすることにより、または末端部分の塩基をそれらがポリメラーゼ作用を立体的に妨害するように修飾することにより実施される。好ましい態様においては、このような処理は３’末端を固相支持体（例えば、ガラス、プラスチック、ラテックス等）に結合させる等により固定化する事によって実施される。支持体の形状はいかなるものであってもよい（すなわち、シート、棒、球、卵形、等である）。このような固定化の手順は当業者には周知である。最も好ましい態様においては、組換え分子の３’末端を固相支持体に共有結合させる。スペーサー領域は、（１）それが組換え分子のいかなる機能または特徴をも立体的に妨げない限り、また（２）スペーサー領域の配列がアッセイのハイブリダイゼーション反応または重合反応に参加しない限り、プローブを固相支持体から外へ伸ばすのに使用できる。一般的には、数個の、好ましくは多数のこのような組換え分子を支持体に固定することが望ましい。ＰＴＰ−Ｓ３１の一部を表すオリゴヌクレオチドは、このようなタンパク質をコードする遺伝子の存在をスクリーニングするのに、およびＰＴＰ−Ｓ３１遺伝子のクローン化のために有用である。このようなオリゴヌクレオチドを合成するための技法は、例えばWu，R.ら（Prog．Nucl．Acid．Res．Molec．Biol．21:101 -141（1978）によって開示されている。タンパク質分子は臭化シアン、またはパパイン、キモトリプシン、トリプシン等のプロテアーゼを用いて断片化される［Oike，Y.ら，J．Biol．Chem．257:975 1-9758（1982）；Liu，C.ら，Int.J．Pept．Protein Res．21:209-215（1983）］。遺伝暗号の縮重により、ある特定のアミノ酸をコードするのに１つ以上のコドンが使用されうる［Watson，J.D.，Molecular Biology of the Gene，第４版，Benjamin/Cummings Publishing Co.，Inc.，Menlo Park，CA（1987）］。その遺伝暗号を用いて、１つまたはそれ以上の異なるオリゴヌクレオチドが同定されうる。そして、その各々が上記のアミノ酸をコードする可能性がある。ある特定のオリゴヌクレオチドが事実、ＸＸＸをコードする実際の配列を構成する確率は、異常な塩基対関係および特定のコドンが（特定のアミノ酸をコードするために）真核細胞中で実際に使用される頻度を考慮することによって推定できる。このような「コドン使用ルール」は、Lethe，R.ら，J．Molec．Biol．1 83:1-12（1985）によって開示されている。Latheの「コドン使用ルール」を用いて、ＰＴＰ−Ｓ３１配列をコード可能な、理論的に「最も確からしい」ヌクレオチド配列を含有する１個の、または１組のオリゴヌクレオチドが同定される。あるアミノ酸配列がただ１つのオリゴヌクレオチドによってコードされることもあるが、しばしばアミノ酸配列は１組の類似したオリゴヌクレオチドの任意のものによってコードされる。重要なことは、この組のすべてのメンバーがペプチド断片をコードしうるオリゴヌクレオチドを含有し、そしてその結果、可能性としてペプチド断片をコードする遺伝子と同一のオリゴヌクレオチドを含みうるのに対し、この組のただ１つのメンバーだけが遺伝子のヌクレオチド配列と同一のヌクレオチド配列を含有することである。このメンバーが組内に存在するために、そして組の他のメンバーの存在下でもＤＮＡとハイブリダイズできるため、ペプチドをコードする遺伝子をクローン化するのに１つのオリゴヌクレオチドを使用するのと同じ方法で、１組の分画化していないオリゴヌクレオチドを使用することが可能となる。ＰＴＰ−Ｓ３１断片をコード可能な、理論的に「最も確からしい」ヌクレオチド配列を含有する１つまたは１組のオリゴヌクレオチドは、「最も確からしい」配列または１組の配列にハイブリダイズ可能な１つまたは１組の相補的オリゴヌクレオチドの配列を同定するために使用される。このような相補的配列を含有するオリゴヌクレオチドは、ＰＴＰ−Ｓ３１遺伝子を同定し単離するためのプローブとして使用しうる（Sambrookら，前掲）。ＰＴＰ−Ｓ３１遺伝子の断片をコード可能な適切な１つまたは１組のオリゴヌクレオチド、（またはそれに相補的な１つまたは１組のオリゴヌクレオチド）は、（上記の手順を用いて）同定され、合成され、そして当分野で周知の手段によりＰＴＰ−Ｓ３１遺伝子を発現可能な細胞から誘導したＤＮＡ、またはより好ましくはｃＤＮＡ調製物とハイブリダイズされる。「最も確からしい」ＰＴＰ−Ｓ３１ペプチドをコードする配列に相補的な１本鎖オリゴヌクレオチド分子は、当業者に周知の手順を用いて合成することができる［Belagajeら，J．Biol．Chem ．in the Control of Gene Expression；Nierlichら，編，Acad．Press，NY（19 76）；Wuら，Prog．Nucl．Acid．Res．Molec．Biol．21:101-141（1978）；Khor ana，R.G.，Science 203:614-625（1974）］。さらに、ＤＮＡ合成は自動合成機を用いて行なうことができる。核酸ハイブリダイゼーションの技法は、Sambrook ら（前掲）およびHaymesら［Nucleic Acid Hybridization，A Practical Approa ch，IRL Press，Washington，DC（1985）］により開示されている。これらの文献は参考としてここに組み入れる。これらに記述されているような技法またはそれに類似した技法は、ヒトアルデヒドデヒドロゲナーゼの遺伝子［Hsu ら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 833771-3775（1985）］、フィブロネクチン［ Suzukiら，EMBO J．4:2519-2524（1985）］、ヒトエストロゲン受容体遺伝子［W alterら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 82:7889-7893（1985）］、組織プラスミノーゲンアクチベーター［Pennicaら，Nature 301:214-221（1983）］、およびヒト妊娠末期胎盤アルカリホスファターゼ相補的ＤＮＡ［Damら，Proc．Natl．A cad．Sci．U.S.A．82:715-8719（1985）］のクローン化を成功裏に成し遂げた。ＰＴＰ−Ｓ３１遺伝子をクローン化する別の方法においては、ＤＮＡ、またはより好ましくはｃＤＮＡ（ＰＴＰ−Ｓ３１を発現可能な細胞由来のもの）を発現ベクター中にクローン化することにより、発現ベクターのライブラリーが作製される。次に、抗ＰＴＰ−Ｓ３１抗体に結合し、かつＰＴＰ−Ｓ３１と同一のアミノ酸配列またはその断片を有するポリペプチドをコード可能なヌクレオチド配列を持つタンパク質を発現可能なメンバーについて、上記のライブラリーをスクリーニングする。この態様において、ＤＮＡ、またはより好ましくはｃＤＮＡは、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質を発現可能な細胞から抽出し、精製される。精製されたｃＤＮＡは、ＤＮＡまたはｃＤＮＡ断片のプールを作製するために断片化される（剪断、エンドヌクレアーゼ消化、等による）。次に、クローン化されたユニークＤＮＡまたはｃＤＮＡ断片を含有する発現ベクターのゲノムライブラリーを作製するため、このプール由来のＤＮＡまたはｃＤＮＡ断片は発現ベクター中にクローン化される。「発現ベクター」とは、（適切な転写および／または翻訳制御配列の存在ゆえに）ベクター中にクローン化されたＤＮＡ（またはｃＤＮＡ）分子を発現することができ、そしてそれによってポリペプチドまたはタンパク質を産生できるベクターである。クローン化された配列の発現は、発現ベクターが適切な宿主細胞に導入されると起こる。原核生物用発現ベクターを使用する場合は、適切な宿主細胞はクローン化配列を発現可能な原核細胞となろう。同様に、真核生物用発現ベクターを使用する場合は、適切な宿主細胞はクローン化配列を発現可能な真核細胞となろう。重要なことは、真核生物のＤＮＡは介在配列を含むことがあるので、またそのような配列は原核細胞では正しくプロセシングすることができないので、原核生物ゲノム発現ベクターライブラリーを作製するためには、ＰＴＰ−Ｓ３１を発現可能な細胞由来のｃＤＮＡを使用することである。ｃＤＮＡの調製およびゲノムライブラリーの作製のための手順はSambrookら（前掲）によって開示されている。ＰＴＰ−Ｓ３１またはその機能性誘導体をコードするＤＮＡ配列は、ベクターＤＮＡを用いて従来の技法にしたがって組み換えることが可能である。この技法には、連結のための平滑末端および互い違いの末端、適切な末端を提供するための制限酵素による切断、付着末端の適切な修復、望ましくない結合を防ぐためのアルカリホスファターゼ処理、および適切なリガーゼによる連結が含まれる。このような操作技法は、Sambrookら（前掲）によって開示されており、当分野で周知である。ＤＮＡのような核酸分子は、それが転写および翻訳制御情報を含有するヌクレオチド配列を含有し、かつこのような配列がポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に「機能しうる形で」連結されているならば、ポリペプチドを「発現可能」であるといえる。機能しうる連結とは、制御ＤＮＡ配列および発現されるべきＤＮＡ配列が遺伝子発現を可能とするような方法で連結されているものである。遺伝子発現に必要とされる制御領域の正確な性質は生物ごとに変わるかもしれないが、一般的にはプロモーター領域を含む。この領域は、原核生物では、プロモーター（これはＲＮＡ転写の開始を指示する）と、ＲＮＡに転写された時にタンパク質合成の開始を信号で知らせるＤＮＡ配列の両方を含有する。このような領域は普通、ＴＡＴＡボックス、キャッピング配列、ＣＡＡＴ配列等の転写および翻訳の開始に関与する５’非コード配列を含む。所望であれば、前述の方法によりタンパク質をコードする遺伝子配列の３’側の非コード領域を得ることができる。この領域は、終結およびポリアデニル化等の転写終結制御配列のゆえに保持することができる。したがって、天然ではタンパク質をコードするＤＮＡ配列に隣接する３’領域を保持することにより、転写終結シグナルを提供することができる。発現宿主細胞において転写終結シグナルが十分に機能しない場合は、宿主細胞において機能的な３’領域と取り換えることができる。２つのＤＮＡ配列（例えば、プロモーター領域配列とＰＴＰ−Ｓ３１をコードする配列）は、これら２つのＤＮＡ配列の間の連結の性質が（１）フレームシフト突然変異の導入に帰着せず、（２）Ｒ−ＰＴＰ遺伝子配列の転写を引き出すプロモーター領域配列の能力を妨害せず、また（３）プロモーター領域配列によって転写されるＲ−ＰＴＰ遺伝子配列の能力を妨害しないものであれば、機能しうる形で連結されているといえる。プロモーターがＤＮＡ配列の転写をもたらすことが可能であれば、プロモーター領域は機能しうる形でＤＮＡ配列に連結しているであろう。したがって、タンパク質を発現するためには、適切な宿主によって認識される転写および翻訳シグナルが必要である。プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼと結合可能で、「機能しうる形で連結された」核酸配列の転写を促進することができる２本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡ配列である。本明細書で用いている「プロモーター配列」とは、ＲＮＡポリメラーゼによって転写される方のＤＮＡまたはＲＮＡの鎖上に見いだされるプロモーターの配列である。「プロモーター配列相補体」とは、その配列が「プロモーター配列」の相補体である核酸分子である。よって、１本鎖「プロモーター配列相補体」または「プロモーター配列」に隣接するプライマーＤＮＡまたはＲＮＡの伸長の結果、もしその伸長が「プロモーター配列」または「プロモーター配列相補体」に向かって進行するならば、機能性プロモーターを含有する２本鎖分子が作製される。この機能性プロモーターは、２本鎖分子の「プロモーター配列」を含有する方の鎖に機能しうる形で連結されている核酸配列の転写を引き出す。ある種のＲＮＡポリメラーゼはこのようなプロモーターに対し高い特異性を示す。バクテリオファージＴ７、Ｔ３およびＳＰ−６のＲＮＡポリメラーゼは特に良く特徴付けられており、高いプロモーター特異性を示す。これらＲＮＡポリメラーゼのそれぞれに特異的なプロモーター配列もまた、二重鎖ＤＮＡ鋳型である２本鎖のうち１本のみを転写するようポリメラーゼに指示する。どちらの鎖が転写されるかの選択は、プロモーター配列の向きによって決定される。この選択は転写の方向を決定する。なぜならＲＮＡは３’末端水酸基へのヌクレオチド５’−リン酸の付加によってのみ酵素的に重合されるからである。核酸分子の２つの配列は、両方の配列が同一のＲＮＡ転写物に転写されることを可能とする方法、または片方の配列で始まったＲＮＡ転写物が第２の配列に伸長していくことを可能とする方法で相互に連結されているとき、「機能しうる形で連結されている」という。したがって、ＤＮＡまたはＲＮＡの２つの配列（例えば、プロモーター配列および他の任意の「第２」配列）は、もしプロモーター配列で始まる転写が機能しうる形で連結されている第２配列のＲＮＡ転写物をもたらすならば、機能しうる形で連結されている。「機能しうる形で連結される」ためには、２つの配列が相互に直接接している必要はない。本発明のプロモーター配列は真核生物のものでも、原核生物のものでも、ウイルスのものでもよい。適切なプロモーターは抑制可能で、または、より好ましくは構成性（constitutive）である。適切な真核生物プロモーターの例には、Ｔ４ポリメラーゼを認識できるプロモーター［Malik，S.ら，J．Biol．Chem．263:11 74-1181（1984）；Roserberg，A.H.ら，Gene 59:191-200（1987）；Shinedling ，S.ら，J．Molec．Biol．195:471-480（1987）；Hu，M.ら，Gene 42:21-30（19 86）］、Ｔ３、Ｓｐ６およびＴ７ポリメラーゼを認識できるプロモーター［Cham berl in，M.ら，Nature 228:227-231（1970）；Bailey，J.N.ら，Proc．Natl．Acad． Sci．U.S.A．80:2814-2818（1983）；Davanloo，P.ら，Proc．Natl．Acad．Sci ．U.S.A．81:2035-2039（1984）］；バクテリオファージラムダのＰ_RおよびＰ_L プロモーター［The Bacteriophag O Lambda，Harshey，A.D.，編，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，NY（1973）；Lambda II，Hendrix，R.W.，編，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，NY（1980）］；大腸菌のｔｒｐ、ｒｅｃＡ、熱ショックおよびｌａｃＺプロモーター；枯草菌のα−アミラーゼ［Ulmanen，I.ら，J．Bacteriol．162:176-182（1985）］およびσ-28-特異的プロモーター〔Gilman，M.Z.ら，Gene 32:11-20（1984）］；バシラス属細菌のバクテリオファージのプロモーター［Gryczan，T.J.，The Molecular Biolo gy of the Bacilli，Academic Press，Inc.，NY（1982）］；ストレプトミセス属細菌のプロモーター［Ward，J.M.ら，Mol．Gen．Genet．203:468-478（1986）］；バクテリオファージラムダのｉｎｔプロモーター；ｐＢＲ３２２のβ−ラクタマーゼ遺伝子のｂｌａプロモーター、およびｐＰＲ３２５のクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子のＣＡＴプロモーター、等がある。原核生物のプロモーターは、Glick，B.R．［J．Ind．Microbiol．1:277-282（1987）］；Cenatiempo，Y．［Biochimie 68:505-516（1986）］；Watson，J.D.ら［Mol ecular Biology of the Gene，第４版，Benjamin Cummins，Menlo Park，CA（19 87）］；およびGottesman，S．［Ann．Rev．Genet．18:415-442（1984）］によって総説されている。好ましい真核生物プロモーターには、マウスメタロチオネインＩ遺伝子のプロモーター［Hamer，D.ら，J．Mol．Appl．Gen ．1:273-288（1982）］；ヘルペスウイルスのＴＫプロモター［McKnight，S.，C ell 31-355-365（1982）］；ＳＶ４０初期プロモーター［Benoist，C.ら，Natur e（London）290:304-310（1981）］；および酵母ｇａ１４遺伝子プロモーター［ Johnston，S.A.ら，Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．79:6971-6975（1982）；Si lver，P.A.ら，Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．81:5951-5955（1984）］が含まれる。上に掲げたすべての文献は参考としてここに組み入れる。強力なプロモーターが好ましい。そのようなプロモーターの例は、Ｔ３、ＳＰ６およびＴ７ポリメラーゼを認識するプロモーター、Ｐ_L プロモーターおよびマウスメタロチオネインＩ遺伝子のプロモーターである。ＰＴＰ−Ｓ３１の真核細胞による発現に最も好ましいプロモーターは、ｐＬＳＶベクター中で転写を推進するようなＳＶ４０プロモーターである［Livneh，E.ら，J．Biol．Chem．261:1 2490-12497（1986）］。このようなポリメラーゼ認識部位の配列はWatson，J.D. ら［Molecular Biology of the Gene，第４版，Benjamin/Cummings Publishing Co.，Inc.，Menlo Park，CA（1987）］によって開示されている。ここまで本発明を全般的に記述してきたが、以下の実施例を参照することにより本発明はより容易に理解されるであろう。これらの実施例は説明のために提供されているもので、特にそうと明記しない限り本発明を制限することを意図するものではない。６．実施例：ポリメラーゼ連鎖反応を用いた新規ＰＴＰの同定インスリン感受性組織中の新規ＰＴＰを同定するため、本発明者らはＰＣＲ技法を使用した。骨格筋由来の第１鎖ｃＤＮＡを鋳型として用い、高度に保存された領域に対応する縮重オリゴヌクレオチドをプライマーとして用いた。多数のすでに特徴付けられているＰＴＰ（ＲＰＴＰα、ＲＰＴＰβ、ＲＰＴＰγ、ＰＴＰ１Ｂ、Ｔ細胞ＰＴＰ、ＭＥＧ１、等）が以下に記述するアプローチを用いて同定された。更に、ＰＴＰ−Ｓ３１と名付けられた新規なＰＴＰが見いだされた。グアニジニウムチオシアネート／ＣｓＣｌ法によりヒト骨格筋から全ＲＮＡを単離した［Chirgwinら，Biochem．18:5293-5299（1979）］。オリゴ（dT）セルロースカラムを用いてポリ（Ａ）⁺ＲＮＡを単離した［Avivら，Proc．Natl．Aca d．Sci．U.S.A．58:1408-1412（1972）］。オリゴ（dT）プライマーおよびGIBCO BRL（Gaithersburg，MD，USA）製のモロニーマウス白血病ウイルスＲＮアーゼＨ^-逆転写酵素を用いて、製造者の指示にしたがって、２μｇのポリ（Ａ）⁺ＲＮＡから第１鎖ｃＤＮＡを合成した。骨格筋中に発現されるＰＴＰに対応するｃＤＮＡをＰＣＲの後で単離した〔Sa ikiら，Science 239:487-491（1988）］。上記のように取得したヒト骨格筋第１鎖ｃＤＮＡ（約50ngに相当）を、以下に記述する１組の混合縮重オリゴヌクレオチドプライマーを使用し、Gene Ampキット（Perkin Elmer Cetus，Norwalk，CT ，USA）を用いて増幅した。センスプライマー（オリゴヌクレオチド番号５８）：これはＰＴＰアミノ酸共通配列：ＦＷＸＭＸＷに対応する。アンチセンスプライマー（オリゴヌクレオチド番号５７）：これはＰＴＰアミノ酸共通配列：ＨＣＳＡＧ（Ｓ／Ｉ／Ｖ）Ｇに対応する。各ＰＣＲサイクルは、９４℃で１分間の変性工程、３７℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で２分間の伸長工程よりなった。３０〜４０サイクルが実施された。反応産物をアガロースゲル電気泳動にかけた。予想された大きさ（すでに記述されているＰＴＰの構造に基づく）の断片を単離し、ＴＡクローニングシステム（Invitrogen，San Diego，California）を用いてサブクローン化し、Sangerら（Proc．Natl．Acad．Sci．U.S.A．74:5463-5467（1977）］に記述されている酵素チェーンターミネーション法により（Sequenase，U.S．Biochemica ls）、標準的技法（Ausubelら，編，Current Protocols in Molecular Biology ，John Wiley & Son，New York，1988）を用いて配列決定した。ＰＴＰ−Ｓ３１と名付けられたＰＣＲ断片のＤＮＡ部分配列および推定されるアミノ酸配列を図１に示す。図２においては、ＧＡＰアラインメント法（Needlemanら、前掲）を用いてＰＴＰ−Ｓ３１の推定アミノ酸配列がＰＴＰ１Ｂ（Chernoffら、前掲）と比較されている。ＰＴＰ−Ｓ３１は明らかに他の公知のＰＴＰと相同的であるが、驚くべきことに、このクラスの酵素についていまだ記述されていない特徴を有する。この特徴はウイスコンシン大学のGenetic Computer Groupプログラムにより分析された。ＰＴＰ−Ｓ３１のこのユニークな特徴を、以前に記述された公知ＰＴＰの共通配列と比較して以下に示す（相違に下線を付してある）。７．実施例：ＰＴＰ−Ｓ３１サブファミリーのメンバーのｃＤＮＡクローニング上記第６節に述べた方法で横紋筋肉腫細胞系ＲＤ（ATCC ＃CCL 136）よりｍＲＮＡを調製した。OkayamaおよびBerg［Mol．Cell．Biol．2:161-170（1982）；M ol．Cell．Biol．3:280-289（1983）］により記述された方法を用いて、ｃＤＮＡライブラリー（ライブラリー＃１）を構築した。プライマー断片を調製するため、pCDVI-PLベクターを使用した［Nomaら，Natu re 319:640-646（1986）］。第２鎖プライマーとして、短い合成アダプターを使用した［Boelら，BioTechniques 11:26-28（1991）］。大腸菌ＤＨ５α（Gibco BRL，Gaithersburg，MD，USA）を形質転換用に使用した［Inoue，H.ら，Gene 96 :23-28（1990）］。形質転換の後、細胞をＬＢプレート（ミリリットルあたり５０μｇのアンピシリンを含有）に濃度が15,000〜20,000コロニー／プレートとなるようにまいた。ニトロセルロースレプリカフィルター（Schleicher & Schuell，BA85）を標準的コロニーハイブリダイゼーション技法によりスクリーニングした［Sambrook， J.ら，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第２版，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，NY（1989）］。下記のオリゴヌクレオチド（＃18 5）を合成し、Ｔ₄ポリヌクレオチドキナーゼおよび〔γ−³²Ｐ〕ＡＴＰ（Amersh am）を用いて５’末端に標識し、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングに使用した：このオリゴヌクレオチドは、第６節に記述したＰＴＰ−Ｓ３１ＰＣＲ断片のアミノ酸配列Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕに対応する。５０ｍｌのハイブリダイゼーション溶液（6 x SSC，5x Denhardt液，0.05% SDS）（A usubelら、前掲）に入れた１０pmolの標識化オリゴヌクレオチドをレプリカニトロセルロースフィルターに加え、４２℃で３時間ハイブリダイズさせた。次にフィルターを6 x SSC，0.05% SDSを用いて室温で３回、４２℃で１回、最後に４８ ℃で１回洗浄した。オートラジオグラフィーにより１個の陽性コロニー（クローン1.20.4）が同定され、単離され、標準的技法により配列決定された（Sambrook ら、前掲）。ＰＴＰ−Ｓ３１Ｃと名付けられたこのクローンのヌクレオチド配列〔配列番号６〕および推定されるアミノ酸配列〔配列番号７〕を図３に示す。この配列は、上記のＰＣＲ断片の配列を含み、したがってこの単離されたｃＤＮＡクローンの同一性を確証する。このクローンＰＴＰ−Ｓ３１Ｃの大きさは約２３００bpである。このクローンは約３９kDaのタンパク質をコードするオープンリーディングフレームを従えた２個の推定上の同一フレーム内メチオニン開始コドンを有する。最初のＡＴＧは共通翻訳開始配列［Kozak，M．Nucleic Acids Research 15:8125-8148（1984）］と一致する。さらに、ＰＴＰドメインの５’末端（Ｎ（Ｋ／Ｒ）ＸＸＸＮＲ）から開始コドンまでの距離は他のＰＴＰ、例えばＰＴＰ１Ｂ（Chernoffら、前掲）およびＰＥＰ（Matthewsら、前掲）における距離と類似している。しかし、このクローンには最初のＡＴＧの５’側に同一フレーム内終止コドンがない。したがって、ＰＴＰ−Ｓ３１Ｃは全長クローンではない可能性がある。ＰＴＰ−Ｓ３１Ｃは他のＰＴＰに見いだされる保存されたアミノ酸の殆どを含有する。アミノ酸配列は以前に記述されたＰＴＰに約４５％一致する。ＰＴＰ− Ｓ３１はシグナルペプチドおよび膜貫通領域を欠いており、それゆえ小型の細胞内ＰＴＰのクラスに属しているかもしれない。しかし、予期せぬことに、触媒的に必須であるシステイン残基の周囲の推定アミノ酸配列は共通配列ＨＣＳＸＧＸＧＲＸＧ〔配列番号３２〕と著しく相違していた。特に注目すべきことは、他のＰＴＰにおける活性部位システインから６番目のＣ末端側のアルギニンが、ＰＴＰ−Ｓ３１Ｃではフェニルアラニンに置換されていることである。このアルギニン残基は、殆どのＰＴＰに共通の他の多くの特徴を欠くＰＴＰ〔例えばｃｄｃ２５（Sahduら、前掲）およびワクシニアウイルスによってコードされるチロシン／セリンホスファターゼ（Guanら、前掲）］を含む以前に記述されたすべてのＰＴＰにおいて保存されていることが判明している。さらに、Ｃ末端の残りの部分は公知のＰＴＰとごくわずかしか一致しない。ＰＴＰ１Ｂ（Chernoffら、前掲）およびＰＴＰ−Ｓ３１Ｃのアラインメントを図４に示す。８．実施例：新規ＰＴＰの別な形であるＰＴＰ−Ｓ３１Ｄの同定第７節に開示した所見（これらは最初本発明者らを幾分当惑させるものであった）を、活性部位システイン周囲の配列を注意深く分析することにより検討した。この分析は、異なるリーディングフレームでは、ＰＴＰドメインのＣ末端部分に共通に見られるモチーフ：ＱＹＩＦＸＸＸＸＸＸＤ［Kruegerら，EMBO J．9:3 241-3252（1990）］を示した。これがクローン化による人為的結果なのか、または代替スプライシングによる非常に稀な形なのかを分析するため、下記のように２組のＰＣＲプライマー（活性部位システインの各側につき２個）を設計した。プライマーセット＃１センスプライマー（オリゴヌクレオチド番号２２３）アンチセンスプライマー（オリゴヌクレオチド番号２２４）プライマーセット＃２センスプライマー（オリゴヌクレオチド番号１８５）アンチセンスプライマー（オリゴヌクレオチド番号２２５）ＰＴＰ−Ｓ３１ＣｃＤＮＡを用いたＰＣＲは、プライマーセット＃１を使用すると４５０bp周辺に、またプライマーセット＃２を使用すると４３０bp周辺にバンドを生じた。もし欠失または代替スプライシングという現象が起こったのならば、ＲＤ細胞系および／または骨格筋由来の第１鎖ｃＤＮＡを直接用いるＰＣＲによって付加的バンドを検出することができるであろう。このバンドの予想される大きさは４３０／４５０bpプラスＰＴＰにおいて活性部位システインとＱＹＩＦモチーフの間に普通見られる距離（すなわち約１３０bp）である。横紋筋肉腫細胞系ＲＤ（American Tissue Type Collection CCL 136）およびヒト骨格筋より第６節に記述する方法によりｍＲＮＡおよび第１鎖ｃＤＮＡを調製した。約５０ｎｇの第１鎖ｃＤＮＡを上記のプライマーと共に使用した。各ＰＣＲサイクルは、９４℃で１分間の変性工程、３７℃で２分間のアニーリング工程、および７２℃で２分間の伸長工程よりなった。３０〜４０サイクルが実施された。ＰＣＲ断片を標準的アガロースゲル電気泳動により分析した（Ausubelら、前掲）。プライマーセット＃１は、ＲＤ細胞系由来のｃＤＮＡを鋳型として用いて、予想された大きさの２本のバンドをもたらした。プライマーセット＃２は、ＲＤ細胞系のｃＤＮＡを用いた時も骨格筋ｃＤＮＡを用いた時も、予想された大きさの２本のバンドをもたらした。プライマーセット＃１を用いて取得したＲＤ細胞系由来のバンドを両方ともクローン化し、配列決定した。予想されたように、下方のバンドはＰＴＰ−Ｓ３１Ｃ配列に対応することが判明した。上方のバンドもＰＴＰ−Ｓ３１Ｃ配列と同一の配列を有するが、１３３bpの挿入配列を伴っている（図５参照）。プライマーセット＃２と骨格筋ｃＤＮＡを用いて取得した上方のバンドを、アンチセンスプライマーオリゴヌクレオチド番号２２５を使用して直接配列決定した。同一の配列がＲＤ細胞系および骨格筋に見いだされた。この領域の推定されるアミノ酸配列は、ＨＣＳＸＧＸＧＲ配列を含むＰＴＰの通常の特徴を示し、またＰＴＰ−Ｓ３１Ｃの５’末端と同じフレームにある。ＰＴＰのこの新規な形はＰＴＰ−Ｓ３１Ｄと名付けられた。ＰＴＰ−Ｓ３１ＣとＰＴＰ−Ｓ３１Ｄの組み合わせ配列を図６に示す。図７はＰＴＰ−Ｓ３１Ｄと、ＣＤ４５（Ralphら、前掲）およびＬＡＲ（Streu liら、前掲）の最初のＰＴＰドメインとの、またＰＴＰ１Ｂ（Chernoffら、前掲）のＰＴＰドメインとのアラインメントを示す。CLUSTALプログラム（Higgins ら、前掲）を使用した。９．実施例：Ｓ３１Ｄ断片のＰＴＰ−Ｓ３１Ｃへの挿入以下の３つの基本的工程を採用した。１．ＰＴＰ−Ｓ３１Ｃの最初のＡＴＧの位置にＢｓｐＨＩ部位を導入した。２．ＰＴＰ−Ｓ３１Ｃのコード領域をベクターｐＳＰ７２（Promega）中に移入するために、このＢｓｐＨＩ部位を使用した。３．Ｓ３１Ｄ配列をＰＴＰ−Ｓ３１配列に導入した。工程１異なるクローニングベクターへのＰＴＰ−Ｓ３１配列の導入を容易にするため、ＢａｍＨＩおよびＢｓｐＨＩ部位を（ＰＣＲを用いて）ＰＴＰ−Ｓ３１Ｃ配列の最初のＭｅｔの上流に導入した。センスプライマー（オリゴヌクレオチド番号２０２：ＢａｍＨＩ／ＢｓｐＨＩ）：アンチセンスプライマー（オリゴヌクレオチド番号２０３：ＸｂａＩ）：ＰＴＰ−Ｓ３１Ｃ（クローン1.20.4）由来のプラスミドＤＮＡ約１００ｎｇを鋳型として使用した。各ＰＣＲサイクルは、９４℃で１分間の変性工程、５０℃ で２分間のアニーリング工程、および７２℃で２分間の伸長工程よりなる。１０サイクルが実施された。ＰＣＲ断片を標準的アガロースゲル電気泳動により分析し、BamHIおよびAlwNIで切断し、標準的技法を用いて４７０bp断片を単離した（ Ausubelら、前掲）。この断片はＰＴＰ−Ｓ３１Ｃの５’末端に対応し、最初のメチオニンから始まるＰＴＰ−Ｓ３１のコード領域を含有する。工程２標準的技法を用いて、AlwNIおよびEcoRVで切断することにより、最初のＰＴＰ −Ｓ３１Ｃクローン（1.20.4）から９４０bp断片を単離した。この断片を工程１で単離したＰＣＲ断片と組み合わせて、BamHIおよびEcoRVで切断したｐＳＰ７２ベクター（Promega）に連結する。得られたプラスミドをｐＳＰ−Ｓ３１Ｃと称する。工程３第８節に記述するＰＣＲ（プライマーセット＃１）で得られた上方バンド（Ｓ３１Ｄ配列を含んで約５８０bp）を、プライマー（それぞれオリゴヌクレオチド番号２２３および２２４に含まれる）に含まれる好都合な制限部位（BamHI/XbaI ）を用いてpBluescript KS+ベクター（Stratagene，La Jolla，CA）中にクローン化した。得られたプラスミドは次にDraIIIおよびNcoIで切断され、Ｓ３１Ｄ配列にまたがる３３０bp断片をもたらした。この断片を、同じ酵素（DraIII/NcoI ）で切断したプラスミドｐＳＰ−Ｓ３１Ｃ（工程２）に挿入した。得られたプラスミドをｐＳＰ−Ｓ３１Ｄと称する。１０．実施例：ＰＴＰ−Ｓ３１ＤのＰＴＰ酵素活性の分析１０．１．原核生物用発現ベクターｐＧＥＸの改変ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ由来のｃＤＮＡ断片（下記参照）を入れるため、標準的技法を用いてｐＧＥＸ２Ｔベクター（Pharmacia，Uppsala，Sweden）のクローニング部位を改変した（Current Protocols in Molecular Biology，F.M．Ausubelら、編、John Willey & Sons，New York，1988）。ｐＧＥＸ２Ｔベクターを制限酵素BamHIおよびEcoRI で切断し、単離した。以下のオリゴヌクレオチドを切断したｐＧＥＸ２Ｔベクターに連結した。それによって以下のクローニング部位を有するベクターｐＧＥＸ−ＡＫ２を作製した：５’EcoRI，NcoI，BamHI，StuI，XbaI，HindIII ３’ １０．２．ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄコード領域のｐＧＥＸ−ＡＫ２への導入プラスミドｐＳＰ−Ｓ３１Ｄ（第９節参照）をBamHIおよびEcoRVで切断し、同じ酵素で切断したｐｃＤＮＡＩベクター（Invitrogen）に導入した。得られたプラスミドｐｃ−Ｓ３１Ｄを次にBspHIおよびXbaIで切断し、約１５００bpの断片をもたらした。次にＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ断片をｐＧＥＸ−ＡＫ２（NcoIおよびXb aIで切断されている）に連結した。得られたプラスミドをｐ１６（ｐＧＥＸ−ＡＫ２／ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ）と名付け、以下に記述する発現試験に使用した。ｐ１６はグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼとＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ（最初のメチオニンから始まる）の融合タンパク質をコードし、さらに約５００ｂｐのＰＴＰ− Ｓ３１Ｃ（およびＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ）の３’非翻訳領域を含有する。ＰＴＰ−Ｓ３１ＣをｐＧＥＸ−ＡＫ２に導入するために同じ戦略を使用した。ただし、ｐｃＤＮＡＩに基づくプラスミドｐｃ−Ｓ３１Ｃを作製するためにｐＳＰ−３１Ｃを用いた。出来上がったプラスミドをｐ１７（ｐＧＥＸ−ＡＫ２／ＰＴＰ−Ｓ３１Ｃ）と名付けた。１０．３．大腸菌におけるＧＳＴ−ＰＴＰＳ３１融合タンパク質の発現グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）とＰＴＰ−Ｓ３１ＤまたはＰＴＰ−Ｓ３１Ｃとの融合タンパク質をそれぞれコードするｐＧＥＸ−ＡＫ２／ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄベクター構築物（ｐ１６）およびｐＧＥＸ−ＡＫ２／ＰＴＰ− Ｓ３１Ｃベクター構築物（ｐ１７）を［Smithら，Proc．Natl．Acad．Sci．U.S. A．83:87-3-8707（1988）］、大腸菌ＤＨ５α株（カタログ番号8263SA，Bethesd a Research Laboratories，Gaithersburg，MD）およびＳＵＲＥ^TM株（カタログ番号200294，Stratagene，La Jolla，CA 92037）に導入した。形質転換した大腸菌を一晩培養した培養物をＬＢ培地で増殖させ、新鮮な培地で１:10に希釈し（4 5mlの一晩培養物プラス405mlのアンピシリン含有LB培地）、37℃で１時間増殖させた。イソプロピル-1-チオ-β−Ｄ−ガラクトピラノシド（IPTG）を最終濃度が 0.2mM（DH5α）および５mM（SURE）となるように添加し、培養物をさらに４時間インキュベートした。各培養物から400mlを取り、Sorvall GS3ローターを用いて４℃で10分間、5000rpmで遠心した。ペレットを液体窒素中で凍結させ、次に３m lの溶菌緩衝液［0.03 M Tris HCl，pH8. 0，2.5mM EDTA，10μg/mlアプロチニン（aprotinin），１mMフェニルメチルスルホニルフルオリド（PMSF），1%（v/v）2-メルカプトエタノール］中で融解させ、氷上で超音波処理した［M.S.E.超音波ジスインテグレーター100 W型（カタログ番号7100）：30秒３サイクル、最大設定］。超音波処理の後、溶解物を遠心にかけ、上清を0.45μｍのフィルター（Millipore）で濾過した。対照は、（1）IP TGを添加した、および添加しないｐＧＥＸ−ＡＫ２；ならびに（2）IPTGを添加しないｐ１６およびｐ１７であった。ＧＳＴ−ＰＴＰ−Ｓ３１ＤおよびＧＳＴ− ＰＴＰ−Ｓ３１Ｃ融合タンパク質、ならびにＧＳＴを可溶性タンパク質として単離した。この単離は、グルタチオン-Sepharose 4Bアフィニティークロマトグラフィー（カタログ番号17-0756-01，Pharmacia，Uppsala，Sweden）により、製造者の指示に従って、超音波処理し無菌濾過した溶解物１ミリリットルあたり150 μｌのグルタチオン-Sepharose 4Bを使用し、ゆっくり回転させながら４℃で１時間インキュベートすることにより実施した。Sepharoseビーズをリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄し、最後に250μｌの溶菌緩衝液（上記参照）に再懸濁した。ＧＳＴ−ＰＴＰ−Ｓ３１ＤおよびＧＳＴ−ＰＴＰ−Ｓ３１Ｃ融合タンパク質のそれぞれの発現、ならびにグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼの発現をドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）により標準的技法を用いて確認した（Ausubelら、前掲）。ＧＳＴ− ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ、ＧＳＴ−ＰＴＰ−Ｓ３１ＣおよびＧＳＴ（対照）を含有する様々な量のグルタチオン-Sepharoseビーズ懸濁液を酵素活性について以下に記述するように分析した。１０．４．ＧＳＴ−ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ融合タンパク質の酵素活性の分析基質ｐ−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰ−Ｐ）に対するＰＴＰ−Ｓ３１Ｄの活性を、Tonksら［J．Biol．Chem．263:6731-6737（1988）］が記述する方法に本質的にしたがって測定した。ＧＳＴ／ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ、ＧＳＴ／ＰＴＰ −Ｓ３１ＣおよびＧＳＴをそれぞれ含有するグルタチオン-Sepharoseビーズを、その量を徐々に増やしながらｐＮＰ−Ｐと共に室温で反応混合物〔50mM 2-（N- モルホリノ）エタンスルホン酸（MES）pH5.5，10mMジチオトレイトールおよび５ mMエチレンジアミン４酢酸（EDTA）を含有］中でインキュベートした。反応は同じ容量の0.4M NaOHを添加することにより停止させた。遠心にかけた後、上清をマイクロタイタープレートに移し、405nmでの吸光度をDynatech MR5000リーダーを用いて読んだ。このホスファターゼアッセイにおいて、ＧＳＴ／ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄのみが活性を示した（図８参照）。１１．実施例：ＰＴＰ−Ｓ３１のノーザンブロット分析数個のヒト組織（脾臓、胎盤、肺、腎臓、結腸、肝臓、および正常な骨格筋ならびに糖尿病患者骨格筋の２つの供給源由来）および細胞系［KGl（ATCC CCL 24 6）；MOLT-4（ATCC CRL 1582）；Raji（ATCC CCL 86）；K-562（ATCC CCL 243）；MEG01；Hep G2（HB8065）；Ea.hy（Dr．Cora-Jean S．Edgell，University of North Carolina，Chapel Hill，NCより入手）；A673（ATCC CRL 1598）；RD（ATCC CCL 136）］より、Puissantら［BioTechniques 8:148-149（1990）］により記述されている酸グアニジニウムチオシアネート−フェノール−クロロホルム抽出手順により全ＲＮＡを単離した。オリゴ（ｄＴ）カラムを用いてポリ（Ａ）⁺ＲＮＡを単離した［Avivら，Proc ．Natl．Acad．Sci．U.S.A．69:1408-1412（1972）］。標準的技法を用いて（Au subelら、前掲）、２μｇのポリ（Ａ）⁺ＲＮＡをレーンに適用し、アガロース− ホルムアルデヒドゲル中で分離し、ナイロンフィルター（Stratagene，La Jolla ）にブロットした。フィルターを〔α³²Ｐ〕ｄＡＴＰで標識したＰＴＰ−Ｓ３１ＰＣＲ断片（第６節に記述されている）とハイブリダイズさせた。³²Ｐによる標識はランダムプライマーＤＮＡ標識システム（カタログ番号8187SA，Bethesda Research Laboratories，Gaithersburg，MD 20877，USA）を使用して製造者の指示にしたがって実施した。次に、フィルターをストリンジェント条件下で洗浄し、Ｘ線フィルムに適用した。ノーザンブロット分析は、骨格筋ポリ（Ａ）⁺ＲＮＡのうちの１つにおいて広範囲のＰＴＰ−Ｓ３１転写物（約2.1から2.8kb）を示したが、他の正常な骨格筋試料においては発現は殆ど検出できなかった。このノーザンブロットにおける広範なバンドは、同一の遺伝子から誘導されたｍＲＮＡに数個の形（例えば代替スプライシング）が存在することを示しているのかもしれない。ＰＴＰ−Ｓ３１の発現は、II型糖尿病患者の骨格筋においても実証された。驚くべきことに、RD細胞系における主要転写物の大きさは約4.4kbである。さらに、比較的広いがより弱いバンド（2.1〜2.4kb）、および約６kbの弱いバンドがRD細胞系において見いだされる。骨格筋ＲＮＡを用いたノーザンブロットの長時間暴露は、RD細胞系におけるのと同様に約4.4kbのマイナーな転写物が存在することを示す。肺組織においては、約８kbに弱いシグナルが見いだされる。ノーザンブロット分析を用いると、他のいかなる組織または細胞系も、測定可能なレベルのＰＴＰ−Ｓ３１発現を示さなかった。しかし、感度の高いＰＣＲ技法を用いると、ＰＴＰ−Ｓ３１は以下の組織および細胞系において発現されることが判明した。すなわち、肝臓（妊娠中の）；胎盤；骨格筋；腎臓；末梢血リンパ球； HepG2細胞（ATCC CCL 86）（殆ど専らＰＴＰ−Ｓ３１Ｃの形で）；RD細胞（ATCC CCL 136）；A673細胞（ATCC CRL 1598）；IM9細胞（ATCC CCL 159）；CEM細胞（ATCC CCL 119）；U937細胞（ATCC CRL 1593）；A549細胞（ATCC CCL 185）；およびKLE細胞（ATCC CRL 1622）である。１２．実施例：ＰＴＰ−Ｓ３１の付加的サブタイプのクローニングＲＤ細胞系および骨格筋における主要なＰＴＰ−Ｓ３１転写物の間に認められる大きさの差異ゆえに、さらなる実験を実施した。この実験は、それぞれ低いおよび高い発現レベル（第１１節に記述するノーザンブロット分析に基づく）を示す正常な骨格筋の２つの供給源由来のＰＴＰ−Ｓ３１のｃＤＮＡクローニングを含んでいた。上記第１１節に記述するように、ポリ（Ａ）⁺ＲＮＡをヒト骨格筋の２つの供給源より単離した。これらポリ（Ａ）⁺ＲＮＡ調製物の５μｇを用いて、製造者の指示にしたがって（Stratagene，La Jolla，CA）２つのλ ZAP II ｃＤＮＡライブラリーを作製した。ＰＴＰ−Ｓ３１の発現レベルが低いＲＮＡから構築されたライブラリーをライブラリー＃２と名付けた。ＰＴＰ−Ｓ３１の発現レベルが高いＲＮＡから構築されたライブラリーをライブラリー＃３と名付けた。標準的フィルターハイブリダイゼーション技法（Ausubelら、前掲）を用いて、合計２ｘ１０⁶個のプラークを各ライブラリーからスクリーニングした。２通りのHybon d N⁺フィルター（Amersham）を、上記第11節で使用したのと同じ³²Ｐ標識化ＰＣＲ断片とハイブリダイゼさせた。 ³²Ｐによる標識はランダムプライマーＤＮＡ標識システム（カタログ番号8187 SA，Bethesda Research Laboratories，Gaithersburg，MD 20877，USA）を使用して製造者の指示にしたがって実施した。フィルターを高ストリンジェンシー（ 0.1 x SSC，0.05% SDS）で洗浄し、次にＸ線フィルムに適用した。ライブラリー＃２から３個の陽性クローンが同定され、単離され、製造者の指示にしたがってin vivo切り出しに付され、配列決定によって分析された。ライブラリー＃３から合計９個の陽性クローンが単離され、分析された。最長のクローン（Ｓ３１Ｄ−６３）はｃＤＮＡライブラリー＃２から単離された。このクローンのヌクレオチド配列および予測されるアミノ酸配列を図９に示す。驚くべきことに、このクローンも分析された他のいずれのクローンも、ＲＤｃＤＮＡライブラリー（ライブラリー＃１）から単離されたＰＴＰ−Ｓ３１Ｃクローン（クローン1.20.4）の５’末端を含有していなかった。その代わり、骨格筋ｃＤＮＡライブラリー由来のすべてのクローンは公知のいかなる配列にも似ていない５’末端を含有していた。クローンはいずれも全長クローンではないように思われた。なぜなら、そこでこれらのクローンがクローン1.20.4と異なるというヌクレオチドから上流には同一フレーム内ＡＴＧコドンが存在しなかったからである。同定された種々の形を図１０に模式的に示す。ライブラリー＃３からの付加的、部分的クローンの単離は、代替スプライシングに起因するものと思われるＰＴＰ−Ｓ３１のさらなる変異体を示した。これら変異体の推定されるアミノ酸配列を図１１に示す。 λ ZAP II ｃＤＮＡクローニング手順（Stratagene，La Jolla，CA）を用いて先に記述した方法で、ＲＤ細胞系由来のポリ（Ａ）⁺ＲＮＡから新たなｃＤＮＡライブラリー（ライブラリー＃１４）を構築した。合計１ x 10⁶個のプラークを標準的フィルターハイブリダイゼーション技法を用いてスクリーニングした（Au subelら、前掲）。２通りのHybond Nフィルター（Amersham）を、上記第11節で使用したのと同じ³²Ｐ標識化ＰＣＲ断片とハイブリダイズさせた。³²Ｐによる標識はランダムプライマーＤＮＡ標識システム（カタログ番号8187SA，Bethesda R esearch Laboratories，Gaithersburg，MD）を使用して製造者の指示にしたがって実施した。フィルターを高ストリンジェンシー（0.1 x SSC，0.05% SDS）で洗浄し、次にＸ線フィルムに適用した。ライブラリー＃１４から合計７個の陽性クローンが同定され、単離され、製造者の指示にしたがってin vivo切り出しに付され、分析された。ライブラリー＃１４由来のクローンのうち２個は、５’末端において塩基２〜３個分短い点を除いて、クローン1.20.4と同一である（すなわち、両方ともＰＴＰ−Ｓ３１Ｃである）。上記のうち５個のクローンがＳ３１Ｄ−６３に類似していることが判明したが、それらは５’末端で相違していた。これらのクローンのうち最長の２個を配列決定により特徴付けた。クローンＳ３１−ＲＤ＃２はＰＴＰ−Ｓ３１のＤ形に対応する。他方、Ｓ３１−ＲＤ＃２より５’末端で約２５０塩基対短いクローンＳ３１−ＲＤ＃６はＣ形に対応する。ＰＴＰ−Ｓ３１ＲＤ＃２の部分ヌクレオチド（配列番号２１）および推定されるアミノ酸配列（配列番号２２）を図１２に示す。驚くべきことに、ＰＴＰ−Ｓ３１のこの形は、膜貫通ドメインを含有していた。それゆえ、ＰＴＰ−Ｓ３１は細胞内型ＰＴＰと受容体型ＰＴＰの両方として存在しうる。現在までだだ１つの哺乳動物膜貫通ＰＴＰ、すなわちＲＰＴＰβのみしか１つのＰＴＰアーゼドメインを含有することが判明していなかったことは注目するに足る（Kruegerら、前掲）。ＲＰＴＰβと同様に、ＰＴＰＳ３１−ＲＤ＃２はだだ１つのＰＴＰアーゼドメインを持つ。さらに、推定上の膜貫通領域に隣接するＰＴＰＳ３１−ＲＤ＃２のアミノ酸配列はインターロイキン２受容体β鎖および他のサイトカイン受容体と類似性を有する［Miyajamaら，Annu．Rev．Immunol．10:295-3331（1992）］。この領域はまたIII型フィブロネクチン（FN-III）ドメインと若干の相同性を有する［Patthy，L.，Cell 61:13-1 4（1990）］。 III型フィブロネクチンに似たドメインに共通する構造的特徴の幾つかがＰＴＰＳ３１−ＲＤ＃２の細胞外ドメインに見いだしうる。図２に示すアミノ酸配列（配列番号２２）において、合計４個のFN-IIIに似たドメインを同定できる（図１４参照）。これらのドメインはＳ３１−ＦＮ−１（最もＣ末端寄りで、したがって膜貫通領域に隣接している）からＳ３１−ＦＮ−４（最もＮ末端寄り）と称される。これらのFN-IIIに似たドメインは、比較的多数のシステイン残基を含有する。これはＬＡＲ（Streuliら、前掲）およびサイトカイン受容体（patthy，前掲）のFN-IIIに似たドメインと対照的である。また、Ｓ３１−ＦＮ−２においては、他では高度に保存されているトリプトファン残基がフェニルアラニン残基と置換されている。さらに、各FN-IIIドメインの間の境界は、ＲＰＴＰβにおけるようによく保存されているとは言えない。ＰＴＰ−Ｓ３１の細胞外ドメインには潜在的なＮ結合グリコシル化部位が数個ある。驚くべきことに、ＰＴＰＳ３１−ＲＤ＃２のアミノ酸約１００個にわたる部分が、インスリン受容体のαサブユニットの一部分と比較的高い配列類似性を示している（図１５参照）。ＰＴＰＳ３１−ＲＤ＃２のインスリン受容体ならびにサイトカイン受容体との類似性は、膜貫通形態のＰＴＰ−Ｓ３１がホルモンまたはサイトカインによって制御されている可能性を示している。または、FN-IIIに似たドメインはＰＴＰ−Ｓ３１が細胞−細胞相互作用に関与していることを示しているのかもしれない。１３．実施例：細胞におけるＰＴＰ−Ｓ３ｌタンパク質の検出および測定１３．１．ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄに特異的な抗体の作製標準的技法によりＰＴＰ−Ｓ３１Ｄに特異的な抗血清を作製した［Hudsonら， Practical Immunology，第３版，Blackwell，Oxford，（1989）］。簡単に述べると、200μｌのリン酸緩衝化生理食塩水に溶解した200μｇのGST-PTP S31D融合タンパク質（第10節参照）を等容量の完全フロイントアジュバント（Sigma，カタログ番号F5881）と混合し、２匹のニュージーランドウサギの皮膚内に注射した。各ウサギは100μｇの融合タンパク質を投与された。１回目の注射の２週間後に、フロイントアジュバントを使用せずにブースター注射を行なった。その２週間後に、各ウサギから20mlの血液を採血し、室温で約１時間、試験管内で凝固させた。試験管から取り出した血餅を遠心にかけ、血清を新しい試験管に分注し、使用時まで−２０℃で保存した。グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）に特異的な抗体を除去するため、第10節に記述した手順を用いて、血清をグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼで飽和させたグルタチオン-Sepharose 4Bカラムに通した。ＧＳＴタンパク質を作製するためにｐＧＥＸ−ＡＫ２構築物を使用した。抗−ＧＳＴ抗体の完全な除去を確かにするため、血清を上記カラムに３回通した。除去の効率を後述のようにウエスタンブロット法により評価した。１３．２．細胞系におけるＰＴＰ−Ｓ３１Ｄの検出および測定抗−ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ抗体は哺乳動物細胞におけるＰＴＰ−Ｓ３１の発現を検出するのに使用できる。標準的免疫蛍光技法は、特定細胞系および組織におけるこのタンパク質の発現に関する情報を与えてくれる。より重要なことに、この抗体調製物は細胞系および組織における上記タンパク質の量を測定するのに使用できる。抗−ＰＴＰ−Ｓ３１抗体の後者の使用法の例として、ＲＤ細胞系（ATCC C CL 136）におけるＰＴＰ−Ｓ３１の検出が以下に記述される。この実施例は、この抗体の使用に関して何ら制限するものではないことを強調しなければならない。この抗体は他の細胞および組織におけるＰＴＰ−Ｓ３１の検出にも使用できるのである。同様に、この抗体調製物は天然に存在するＰＴＰ−Ｓ３１または組換えＰＴＰ−Ｓ３１の精製、および他の種類の検出アッセイの確立のために使用できる。標準的技法を用いて、アミノ酸およびビタミン類の濃度を通常の２倍にし、かつハンクス均衡塩溶液および10％ウシ胎児血清（FCS）（GIBCO-BRL）を補充したイーグルの最小必須培地（カタログ番号041-022570，GIBCO Life Technologies Ltd.，Paisley，Scotland）を使用してＲＤ細胞系を培養する。細胞をリン酸緩衝化生理食塩水（PBS）で２回洗浄し、上清を除去する。１個の組織培養プレート（直径10cm）より得られる細胞を800μｌのTriton X-100溶菌緩衝液［20mM HEPES pH7.5，50mM NaCl，10％グリセリン，1.0％Triton X-100 ，1.5mM MgCl₂，４mMエチレングリコール-ビス-（β-アミノエチルエチルエーテル）N,N,N',N'-4酢酸（EGTA；Sigma ED2SS），10μg/mlアプロチニン，１mMフェニルメチルスルホニルフルオリド（PMSF）］中で溶菌する。溶解物を遠心にかけ、上清を新しい試験管に分注し、使用時まで− ８０℃で保存する。試験のために、標準的技法を使用して、この溶解物の１〜50μｌを25μｌのSD Sサンプル緩衝液［62.5mM Tris HCl，pH7.0，3.0%（v/v）SDS，10%（v/v）グリセリン，10% 2-メルカプトエタノール、および0.05%（w/v）ブロモフェノールブルー］と混合し、５分間煮沸し、7.5% SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離し、ニトロセルロース上にブロットする［Burnette，W.N.，Anal．Bioc hem．112:195-201（1981）］。ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ定量用の標準曲線は、規定量の、精製された、大腸菌によって産生されたGST-PTP-S31D融合タンパク質をRD細胞溶解物と平行して用いて作成する。非特異的結合をブロックするため、ニトロセルロースフィルターをPBS１リットルあたり２ｇの粉ミルク（Carnation無脂粉乳，Carnation，Los Angeles，CA ）と共に30分間インキュベートし、0.02%（v/v）Tween-20（Sigma，P1379）（PB S-Tween）および0.2%（w/v）ゼラチン（BioRadカタログ番号170-6537，Richmond ，California）を含有するPBSで１回洗浄し、PBS-Tweenで３回洗浄し、最後に上記の抗PTP-S31D抗血清調製物の1:200希釈物（PBS-Tween中）と共に４時間インキュベートする。PBS-Tweenで３回洗浄した後、フィルターを西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ヒツジ抗ウサギIgG（カタログ番号170-6525，BioRad）と共にインキュベートする。フィルターをPBS-Tweenで３回洗浄し、結合したウサギ抗体の量（これはＰＴＰ−Ｓ３１Ｄの量を示す）を増強化学発光（ECL）技法により製造者の指示（カタログ番号RPN 2106，Amersh am，UK）にしたがって測定する。RD細胞系より得られたシグナルと、大腸菌によって産生されたGST-PTP S31D融合タンパク質を用いて得られた標準曲線の比較は、RD細胞系によって産生されたＰＴＰ−Ｓ３１Ｄの量の測定を可能とする。１４．実施例：ＰＴＰ−Ｓ３１の酵素活性を刺激または阻害する作用剤の同定酵素活性の潜在的モジュレーターを評価するため、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質の２つの異なる供給源が使用される：１．第１０節に記述されているGST-PTP-S31D（およびC）融合タンパク質２．以下に記述する２９３細胞において一過性に発現されるＰＴＰ−Ｓ３１。ＰＴＰ−Ｓ３１（ＣまたはＤ）の全コード領域またはその機能的部分を含有するｃＤＮＡを、標準的技法（Ausubelら、前掲）を用いて哺乳動物用発現ベクター pcDNA I（カタログ番号V490-20，Invitrogen，San Diego）に挿入する。酵素的に活性なＰＴＰ−Ｓ３１を産生させるため、Gormanら，Virology 171:377-385 （1989）によって記述されている293細胞一過性発現系を使用する。標準的技法を用いて、10％FCSを補充したダルベッコ改良イーグル培地（カタログ番号a041- 02430，GIBCO，Life Technologies Ltd.，Paisley，Scotland）を使用し、5％ C O₂雰囲気下で37℃で293細胞を培養する。 Chenら，Mol．CellBiol．7:2745-2752（1987）に記述されている方法にしたがって、10μｇのプラスミド構築物PTP-S31D/pcDNA I（またはPTP- S31C/pcDNA I）を0.5mlの0.25mM CaCl₂および0.5mlの2xBBS［50mM N,N-ビス（2- ヒドロキシエチル）-2-アミノエタン-スルホン酸（BES），280mM NaCl，1.５mM Na₂HPO₄］と混合して、10cmのペトリ皿を使用する1.5ｘ10⁶個の293細胞のトランスフェクションに使用する。リン酸カルシウム−ＤＮＡ沈降物を添加した後、細胞を37℃で3％CO₂のもとで24時間インキュベートし、次に10%FCSを補充したDMEM で1回洗浄し、新鮮な培地中でさらに24時間、37℃で5%CO₂のもとでインキュベートする。培地を除去し、細胞を1.0mlの溶菌緩衝液（20mM HEPES pH 7.5，150 mM NaCl，10％グリセリン，1.0%Triton X-100，1.5mM MgCl₂，4mM EGTA，10μg/ml アプロチニン，１mMPMSF）中で溶菌する。細胞溶解物を2500ｘｇで２分間４℃で遠心する。上清を除去し、100 μｌアリコートを液体窒素中で急速凍結させ、使用時まで-70℃で保存する。溶解物中のＰＴＰ−Ｓ３１は、アニオン交換クロマトグラフィーおよびゲル濾過等の従来のクロマトグラフィー技法を用いて部分精製することができる。ＰＴＰ−Ｓ３１ホスファターゼ活性の潜在的モジュレーターを評価するため、３つの異なる基質を使用する：（1）p-ニトロフェニルホスフェート（pNP-P；Sigma 104-0）；（2）³²P標識化 Raytide（Oncogene Science社，Manhasset，NY）；および（3）³²P標識化ウシミエリン塩基性タンパク質（MBP）。これらの基質の１つまたはそれ以上に対するＰＴＰ−Ｓ３１の活性を減少または増大させる物質をさらに分析する。１４．１．Raytideおよびミエリン塩基性タンパク質の³²Ｐによる標識 GST-PTP-S31D（およびＣ）融合タンパク質（第１０節参照）、ならびに完全な、かつ好ましくは半精製されたＰＴＰ−Ｓ３１Ｄタンパク質または糖タンパク質、もしくは293細胞に発現されるその機能性部分の、³²Ｐ標識化Raytide^TMに対する活性を、Kruegerら［EMBO J．9:3241-3252（1990）］の記述する方法に本質的に従って測定する。チロシンキナーゼｐ６０^c-srcを用いて製造者の指示（Oncog ene Science）にマイナーな修正を加えたものに従って、合成ペプチドRaytide^TM を³²Ｐで標識する。簡単に述べると、２μlのｐ６０^c-srcを20μｌのRaytide（1 mg/ml）および108μlのキナーゼ緩衝液［10 mM MgCl₂，0.2%（v/v）β-メルカプトエタノール，30μM ATPおよび50ｐCi［γ-³²P］ATPを含有する50mM HEPES， pH 7.5］と混合する。混合物を37℃で16時間インキュベートし、20 mM NaH₂PO₄ に溶解した500μｌの20%（w/v）トリクロロ酢酸（TCA）および100μｌの５mg/ml アセチル化ウシ血清アルブミンを添加することにより反応を停止させる。混合物を遠心にかけ、沈降物を20% TCA/20 mM NaH₂PO₄を用いて３回洗浄し、最後に0.2 M Tris-HCl，pH 8.0に再溶解する。 Raytideに使用したのと類似の手順を用いて、ミエリン塩基性タンパク質（Sig ma）を標識する［Guanら，Nature 350:359-362（1991）］。30μｇのMBPを以下の成分を含む60μｌの反応溶液中で標識する。すなわち、50 mM HEPES緩衝液、pH 7.5，10 mM MgCl₂，0.067%β-メルカプトエタノール，150 μCi［γ-³²P］ATPを ience）である。この混合物を30℃で60分間インキュベートし、氷冷 TCAを最終濃度20%まで添加することにより反応を停止させる。30分間氷上に置き、沈降物を20% TCAで３回洗浄し、100μlの水に再溶解する。１４．２．基質ｐＮＰ−Ｐを用いたＰＴＰ活性の評価ｐＮＰ−Ｐに対するGST/PTP-S31D融合タンパク質の活性を上記１０節に記述するように測定する。ホスファターゼ活性を刺激または阻害する能力を分析すべき物質を、ｐＮＰ−Ｐ添加の５分前にGST/PTP-S31D融合タンパク質に加える。293 細胞において発現されるＰＴＰ−Ｓ３１Ｄに対しても同様の手順を使用するが、ここではPTP-S31D/293細胞溶解物を直接使用する。下に掲げる表Ｉは、第10節に記述されるようにグルタチオン-Sepharoseビーズに結合したGST/PTP-S31融合タンパク質のＰＴＰ活性に及ぼす幾つかの作用剤の効果を示す。表示された作用剤の濃度は、基質ｐＮＰ−Ｐを添加した後の反応混合物中での最終濃度である。ホスファターゼアッセイ混合物は、50 mM 2-（モルホリノ）エタンスルホン酸（MES）pH 5.5、10 mMジチオトレイトール、25 nM pN P-Pおよび２μｌのGST/PTP-S31-Sepharose懸濁液を含有していた。オルトバナデート酸塩、ポリ（Glu/Tyr）4:1およびポリ-L-リシンを試験する際は、５mM EDTA を反応混合物に含有させた。反応は室温で実施され、30分後に等容量の0.4m M NaOHを添加することにより停止させた。遠心にかけた後、上清をマイクロタイタープレートに移し、405 nmにおける吸光度をDynatech MR5000プレートリーダーを用いて読んだ。比較のため、表Ｉは基質としてRaytideを使用した時のPTPβ およびLARの活性に関する発表されたデータを含んでいる［Itoh ら，J．Biol．C hem．267:12356-12363（1992）］。上記の実施例は本発明の範囲を制限することを意図するものでは全くないことを強調しなければならない。１４．３．基質RaytideまたはＭＢＰを用いたＰＴＰ活性の評価５μｌの10xPTP緩衝液（250 mM HEPES，pH 7.3，50 mM EDTA，100 mMジチオトレイトール）を（a）５μｌの³²P標識化RaytideまたはMBP（10〜20Ｘ10⁴cpmに相当）、（b）それぞれ5,10および25μｌのPTP-S31D/293細胞溶解物、または0.5，１および５μｌのグルタチオン-Sepharoseビーズに結合したGST-PTPS31D融合タンパク質の懸濁液（第１０節参照）、および（c）最終容量を50μｌとする水と混合する。反応は30分後に37℃で停止させる。Raytideを用いる時は、反応は0.7 5 mlの酸性木炭混合物［Kreugerら，EMBO J．9:3241-3252（1990）］［0.9 M HC l，90 mMピロリン酸ナトリウム，２mM NaH₂PO₄，4%（v/v）Norit A（Sigma）］を添加することにより停止させる。混合し、遠心にかけた後、400μｌの上清を取り出し、放射能の量を測定する。MBPを使用する時は、20%TCA（最終量）を用いて反応を停止させる。次に上清中の³²Pの量を測定する。モジュレーター活性について分析すべき物質を、アッセイ開始の５分前にPTP- S31/293細胞溶解物に加える。上に引用した文献は、具体的に組み入れたものもそうでないものもすべて参考としてここに組み入れてある。本発明を十分に記述したので、当業者は広範な等価のパラメーター、濃度、および条件の範囲内で発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、また過度の実験なしで本発明を実施できることが分かるであろう。本発明を特定の態様と結び付けて記述してきたが、さらなる変更が可能であることが理解されよう。本願は、全般に本発明の原理に従い、また当分野で公知または習慣的な実践の範囲内にあるような、および添付の請求の範囲に記載される本質的特徴に適用可能であるような本開示からの逸脱を含む、本発明の任意の変更、使用、または適応をカバーするものとする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ１２Ｎ 9/18 9358−4ＢＣ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 9284−4ＣＡ６１Ｋ 39/395 Ｅ // Ａ６１Ｋ 39/395 9284−4ＣＴ 6807−4ＢＣ１２Ｑ 1/42 Ｃ１２Ｑ 1/42 9453−4Ｂ 1/68 Ａ 1/68 8310−2ＪＧ０１Ｎ 33/53 ＤＧ０１Ｎ 33/53 8310−2ＪＹ 8310−2Ｊ 33/573 Ａ 33/573 9455−4ＣＡ６１Ｋ 37/54 ＡＥＤ (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 9/18 Ｃ１２Ｒ 1:19） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＶ，ＭＤ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＵＡ，ＵＺ (72)発明者モラー，カリン，ビードイツ連邦共和国ディー―81373 ミュンヘン５，ハイテルヴァンガーシュトラーセ 32番地 (72)発明者ウルリッヒ，アクセルドイツ連邦共和国ディー―8033 マーチンスリート，アムクロプファーピッツ 18 エイ

Claims

【特許請求の範囲】１．ヒト・プロテインチロシンホスファターゼＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質、その機能性誘導体、またはヒト以外の哺乳動物におけるその相同体からなる分子であって、当該分子が天然に存在するものであるとき、それが自然界で結合している他のタンパク質または糖タンパク質を実質的に含まない、上記の分子。２．天然に存在しない、請求項１に記載の分子。３．天然に存在し、それが自然界で結合している他のタンパク質または糖タンパク質を実質的に含まない、請求項１に記載の分子。４．配列番号４のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の分子。５．ＰＴＰ−Ｓ３１の変異体である、請求項１に記載の分子。６．ＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ（配列番号１１）、ＰＴＰＳ３１−１４（配列番号１６）、ＰＴＰＳ３１−２（配列番号１７）、ＰＴＰＳ３１−５（配列番号１８）、ＰＴＰＳ３１−６３（配列番号１９）、ＰＴＰＳ３１−III（配列番号２０）およびＰＴＰＳ３１−ＲＤ＃２（配列番号２２）より成る群から選ばれる、請求項５に記載の分子。７．請求項１に記載のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質、またはその機能性誘導体もしくは相同体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、当該タンパク質またはその機能性誘導体もしくは相同体が天然に存在するものであるとき、当該タンパク質またはその機能性誘導体もしくは相同体が自然界で結合しているタンパク質をコードするヌクレオチド配列を実質的に含まない、上記の核酸分子。８．ｃＤＮＡ配列である、請求項７に記載の核酸分子。９．ゲノムＤＮＡ配列である、請求項７に記載の核酸分子。 10．配列番号３のヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子である、請求項７に記載の核酸分子。 11．前記の機能性誘導体がＰＴＰ−Ｓ３１Ｄ（配列番号１１）、ＰＴＰＳ３１− １４（配列番号１６）、ＰＴＰＳ３１−２（配列番号１７）、ＰＴＰＳ３１−５（配列番号１８）、ＰＴＰＳ３１−６３（配列番号１９）、ＰＴＰＳ３１−III （配列番号２０）およびＰＴＰＳ３１−ＲＤ＃２（配列番号２２）より成る群から選ばれる、請求項７に記載の核酸分子。 12．発現ベクターである、請求項７に記載の核酸分子。 13．前記の発現ベクターがプラスミドである、請求項12に記載の核酸分子。 14．請求項12に記載の核酸分子で形質転換またはトランスフェクションされた宿主細胞。 15．原核細胞である、請求項14に記載の宿主細胞。 16．真核細胞である、請求項14に記載の宿主細胞。 17．請求項１に記載のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質を調製する方法であって、（ａ）ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質分子を発現することができる宿主を培養条件下で培養し、（ｂ）ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質分子を発現させ、そして（ｃ）培養物からＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質分子を回収する、ことを含む、上記の方法。 18．請求項１のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質分子に特異的な抗体。 19．モノクローナルである、請求項18に記載の抗体。 20．サンプル中のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の存在を検出し、またはその量を測定する方法であって、（ａ）サンプルをＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質に特異的な抗体と接触させ、そして（ｂ）サンプル物質への当該抗体の結合を検出するか、または結合した抗体の量を測定し、その結果として、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の存在を検出し、その量を測定することを含む、上記の方法。 21．核酸含有サンプル中の正常または変異型ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質をコードする核酸の存在を検出する方法であって、（ａ）サンプルを、正常または変異型ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質の少なくとも一部をコードするオリゴヌクレオチドプローブとハイブリダイゼーション条件下で接触させ、そして（ｂ）サンプルの核酸への当該プローブのハイブリダイゼーションを測定し、その結果として、当該核酸の存在を検出することを含む、上記の方法。 22．段階（ａ）の前に、（ｃ）ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質をコードするＤＮＡの量を選択的に増幅させる、ことをさらに含む、請求項21に記載の方法。 23．サンプル中のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質と結合することができる化合物を検出する方法であって、（ａ）固相マトリックスまたは担体にＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質またはその化合物結合性部分を結合させて、固定化されたＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質を形成し、（ｂ）サンプルを固定化ＰＴＰ−Ｓ３１と接触させて化合物を固定化ＰＴＰ− Ｓ３１に結合させ、かつ未結合物質を洗い流し、それにより固定化された化合物を形成し、そして（ｃ）固定化された化合物の存在を検出する、ことを含む、上記の方法。 24．請求項１に記載のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質、糖タンパク質または機能性誘導体と結合することができる化合物を複雑な混合物から単離する方法であって、（ａ）固相マトリックスまたは担体にＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質またはその化合物結合性部分を結合させて、固定化されたＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質を形成し、（ｂ）複雑な混合物を固定化ＰＴＰ−Ｓ３１と接触させて化合物を固定化ＰＴＰ−Ｓ３１に結合させ、かつ未結合物質を洗い流し、それにより固定化された化合物を形成し、そして（ｃ）固定化ＰＴＰ−Ｓ３１から固定化化合物を溶出し、その結果として、当該化合物を単離することを含む、上記の方法。 25．ＰＴＰ−Ｓ３１の酵素活性を刺激または阻害することができる作用剤を同定する方法であって、（ａ）作用剤をＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質またはその断片（ＰＴＰ−Ｓ３１は純化された形態であっても、膜調製物または生存もしくは固定全細胞中に存在していてもよい）と接触させて混合物を形成し、（ｂ）段階（ａ）の混合物を十分な時間インキュベートし、（ｃ）ＰＴＰ−Ｓ３１の酵素活性を測定し、（ｄ）その酵素活性を、作用剤の不在下でインキュベートしたＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の酵素活性と比較して、その作用剤がＰＴＰ−Ｓ３１の酵素活性を刺激するものなのか、阻害するものなのかを判定し、その結果として、作用剤を同定することを含む、上記の方法。 26．ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質またはその機能性誘導体と他の細胞性タンパク質との結合を阻止または増強することができる化合物を複雑な混合物中で同定する方法であって、（ａ）当該化合物を含むと想定される複雑な混合物を、純化された形態の、または膜調製物もしくは全細胞中のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質、糖タンパク質または機能性誘導体と接触させ、（ｂ）段階（ａ）で形成された混合物を十分な時間インキュベートし、（ｃ）ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質、糖タンパク質または機能性誘導体と細胞性タンパク質との結合を測定し、そして（ｄ）段階（ｃ）の結合を、当該化合物の不在下で測定したＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質、糖タンパク質または機能性誘導体と細胞性タンパク質との結合と比較して、ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質、糖タンパク質または機能性誘導体が当該結合を増強するものなのか、阻止するものなのかを判定し、その結果として、当該化合物を同定することを含む、上記の方法。 27．異常なＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質と関連した疾患を治療または予防するのに有用な医薬組成物であって、（ａ）有効量のＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質もしくは糖タンパク質またはその機能性誘導体、および（ｂ）製剤学的に許容される担体、を含有する、上記の医薬組成物。 28．異常なＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質と関連した疾患を治療または予防するのに有用な医薬組成物であって、（ａ）ＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の酵素活性を刺激または阻害する、有効量の作用剤、および（ｂ）製剤学的に許容される担体、を含有する、上記の医薬組成物。 29．異常なＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質と関連した疾患を治療または予防するのに有用な医薬組成物であって、（ａ）標的細胞性タンパク質へのＰＴＰ−Ｓ３１タンパク質または糖タンパク質の結合を刺激または阻害する、有効量の作用剤、および（ｂ）製剤学的に許容される担体、を含有する、上記の医薬組成物。