JPH08503706A - Interleukin-3 (IL-3) multiple mutant polypeptide - Google Patents

Interleukin-3 (IL-3) multiple mutant polypeptide

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JPH08503706A JP6513248A JP51324894A JPH08503706A JP H08503706 A JPH08503706 A JP H08503706A JP 6513248 A JP6513248 A JP 6513248A JP 51324894 A JP51324894 A JP 51324894A JP H08503706 A JPH08503706 A JP H08503706A
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バウアー，エス．クリストファー
アレン エイブラムズ，マーク
− ゴールドバーグ サラ ルス ブラフォード
ヘレナ キャパロン，マイアー
マイクル イーストン，アラン
クアー クレイン，バーバラ
キァーン，ジョン パトリック マック
オー． オリンズ，ピーター
パイク，クムナン
ウオレン トーマス，ジョン
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ジー．ディー．サール アンド カンパニー
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Abstract

The present invention relates to recombinant human interleukin-3 (hIL-3) variant or mutant proteins (muteins). These hIL-3 muteins contain one or more amino acid substitutions and may also have amino acid deletions at both the N- and C- termini. The invention also relates to pharmaceutical compositions containing the hIL-3 muteins and methods for using them. Additionally, the present invention relates to recombinant expression vectors comprising nucleotide sequences encoding the hIL-3 muteins, related microbial expression systems, and processes for making the hIL-3 muteins using the microbial expression systems. <??>Included in the present invention are deletion mutants of hIL-3 in which from 1 to 14 amino acids have been deleted from the N-terminus, and from 1 to 15 amino acids (corresponding to residues 119 to 133) have been deleted from the C-terminus, and which also contain one to three amino acid substitutions in the polypeptide. These hIL-3 mutant polypeptides may have biological activities similar to or better than hIL-3 and, in some cases, may also have an improved side effect profile.

Description

【発明の詳細な説明】 インターロイキン−３（ＩＬ−３）多重変異ポリペプチド 本発明は，１９９２年１１月２４日付にて出願された米国特許出願一連番号第 ０７／９８１０４４号の一部継続出願である．原出願は参考として，本明細書に 導入する 発明の分野 本発明は，多重アミノ酸置換を含有し，ネイティブｈＩＬ−３分子に欠失部分 があってもよいヒトインターロイキン−３（ｈＩＬ−３）の突然変異体または変 異体に関する．これらのｈＩＬ−３多重変異ポリペプチドはネィティブｈＩＬ− ３の１もしくは２以上の活性を維持し，さらに改良された造血細胞刺激活性およ び／またはネイティブｈＩＬ−３に関連する望ましくない生物活性の低下を含む 改良された活性プロファイルを示すこともある． 発明の背景 骨髄細胞の分化および／または増殖を刺激するコロニー刺激因子（ＣＳＦ）は 造血幹細胞由来細胞のレベルの低下を回復させるそれらの治療的可能性により多 大の興味をひいている．ヒトおよびマウス両系において複数のＣＳＦがこれまで に同定され，それらの活性によって識別されている．たとえば，顆粒球−ＣＳＦ （Ｇ−ＣＳＦ）およびマクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）はそれぞれ中性好 性顆粒球およびマクロファージコロニーのインビトロ形成を刺激するが，ＧＭ− ＣＳＦおよびインターロイキン−３（ＩＬ−３）はもっと広範囲な活性を有し， マクロファージ，中性好性顆粒球および酸好性顆粒球コロニーのいずれの形成を も刺激する．ＩＬ−３はまた，肥満細胞，巨核球ならびに純粋および混合赤血球 コロニーの形成も刺激する． 多くの異なる細胞種を刺激する能力ならびに前駆細胞の成長および増殖を支持 する能力により，ＩＬ−３には，疾患または放射線および化学療法のような治療 処置によって造血細胞数が低下した場合に，その細胞を正常量に回復させる治療 的用途の可能性がある． インターロイキン−３（ＩＬ−３）は，造血細胞の生残，増殖および分化を促 進できる性質をもつ造血細胞成長因子である．ＩＬ−３の生物学的性質中には， 以下の能力がある．すなわち（ａ）すべてのまたは事実上すべての血液細胞系統 を担当する前駆細胞の増殖および分化を支持する能力；（ｂ）初期多能性幹細胞 と相互作用する能力；（ｃ）多潜能力前駆細胞の増殖を維持する能力；（ｄ）慢 性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の増殖を刺激する能力；（ｅ）肥満細胞，好酸球 および好塩基球の増殖を刺激する能力；（ｆ）ヒト急性骨髄性白血球（ＡＭＬ） 細胞によるＤＮＡ合成を刺激する能力；（ｇ）細胞のロイコトリエンおよびヒス タミン産生を刺激する能力；（ｈ）白血球走化性を誘導する能力；および（ｉ） 白血球接着に必要な細胞表面分子を誘導する能力である． 成熟ヒトインターロィキン−３（ｈＩＬ−３）は１３３個のアミノ酸から構成 される．１個のジスルフィド橋および２個のグリコシレーション可能部位を有す る［Ｙａｎｇら，ＣＥＬＬ ４７：３（１９８６）］． マウスＩＬ−３（ｍＩＬ−３）は最初，Ｔ細胞関連酵素，２０−ヒドロキシス テロイドデヒドロゲナーゼの発現を誘導する因子としてＩｈｌｅらによって同定 された［Ｊ．ＩＭＭＵＮＯＬ．１２６：２１８４（１９８１）］．この因子は均 一に精製され．初期造血細胞およびリンパ系前駆細胞の多数のサブクラスの増殖 および分化を調節することが明らかにされた． １９８４年には，マウスＩＬ−３をコードするｃＤＮＡクローンが単離された ［Ｆｕｎｇら，ＮＡＴＵＲＥ ３０７：２３３（１９８４）およびＹｏｋｏｔａ ら，ＰＲＯＣ．ＮＡＴＬ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．ＵＳＡ ８１：１０７０（１９８ ４）］．このマウスＤＮＡ配列はシグナルペプチドの候補を含め１６６アミノ酸 のアミノ酸のポリペプチドをコードする． 手長ザルのＩＬ−３配列は手長ザルｃＤＮＡ発現ライブラリーを用いて得られ た．ついで，手長ザルのＩＬ−３配列は，ヒトＩＬ−３配列を得るためにヒトゲ ノムライブラリーに対してプローブとして使用された． マウスＩＬ−３配列の手長ザルおよびヒトゲノムＤＮＡ同族体はＹａｎｇら， ＣＥＬＬ ４７：３（１９８６）によって開示された．Ｙａｎｇらによって報告 されたヒト配列は成熟タンパク質配列の位置８にセリン残基を含んでいた．この 発見に続き，他の研究者がタンパク質配列の位置８にプロリンを有するＰｒｏ8 ｈＩＬ−３ｃＤＮＡの単離を報告した．すなわち，ｈＩＬ−３には，２つの対立 形質の存在することが明らかである． Ｄｏｒｓｓｅｒｓら［ＧＥＮＥ ５５：１１５（１９８７）］はヒトｃＤＮＡ ライブラリーからｍＩＬ−３とハイブリダイズするクローンを見出した．このハ イブリダイゼーションは，ｍＩＬ−３とｈＩＬ−３の３’−非コード領域の間の 高度なホモロジーの結果であった．このｃＤＮＡはｈＩＬ−３（Ｐｒｏ8）配列 をコードしていた． 米国特許第４，８７７，７２９号および米国特許第４，９５９，４５４号には ，ヒトＩＬ−３および手長ザルＩＬ−３ｃＤＮＡならびにそれらがコードするタ ンパク質配列が開示されている．開示されたこのｈＩＬ−３はタンパク質配列中 の位置８はプロリンよりもむしろセリンであった． Ｃ１ａｒｋ−Ｌｅｗｉｓら［ＳＣＩＥＮＣＥ ２３１：１３４（１９８６）］ は自動ペプチドシンセサイザーで合成したマウスＩＬ−３同族体の機能解析を実 施した．この著者らは完全な活性にはその完全分子の安定な三次構造が必要であ ると結論している．ジスルフィド橋の役割に関する研究では４つのシステインす べてをアラニンに置換するとネイティブ分子の１／５００の活性を有する分子が 得られることが明かにされた．４つのＣｙｓ残基の２つをアラニンで置換すると （Ｃｙｓ79，Ｃｙｓ140→Ａｌａ79，Ａｌａ140）活性の上昇が生じた．著者らは マウスＩＬ−３では，生理学的レベルにほぼ匹敵する生物活性を得るためにはシ ステイン１７と８０の間の１個のジスルフィド橋が必要で，この構造がおそらく タンパク質の三次構造を安定化し，機能的に最適なコンフォーメーションを与え ると結論している［Ｃｌａｒｋ−Ｌｅｗｉｓら，ＰＲＯＣ．ＮＡＴＬ．ＡＣＡＤ ．ＳＣＩ．ＵＳＡ，８５：７８９７（１９８８）］． 国際特許出願（ＰＣＴ）ＷＯ８８／００５９８号には，手長ザル様およびヒト 様ＩＬ−３が開示されている．このｈＩＬ−３はＳｅｒ8→Ｐｒｏ8置換を含有す る．ＣｙｓをＳｅｒで置換してジスルフィド橋を破壊し，グリコシレーション部 位の１または２以上のアミノ酸を置換することが示唆されている． ＥＰ−Ａ−０２７５５９８号（ＷＯ８８／０４６９１号）には，Ａｌａ1を欠 失させても，生物活性は保持されることが例示されている．いくつかの突然変異 ｈＩＬ−３配列，たとえば２つの二重突然変異体，Ａｌａ1→Ａｓｐ1，Ｔｒｐ13 →Ａｒｇ13（ｐＧＢ／ＩＬ−３０２）と，Ａｌａ1→Ａｓｐ1，Ｍｅｔ3→Ｔｈｒ3 （ｐＧＢ／ＩＬ−３０４），ならびに１つの三重突然変異体Ａｌａ1→Ａｓｐ1， Ｌｅｕ9→Ｐｒｏ9，Ｔｒｐ13→Ａｒｇ13（ｐＧＢ／ＩＬ−３０３）が提供されて いる． ＷＯ８８／０５４６９号は脱グリコシレーション突然変異体がどのようにして 得られるを述べ，Ａｒｇ54Ａｒｇ55およびＡｒｇ108Ａｒｇ109Ｌｙｓ110突然変 異体ではビール酵母菌（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ） 中での発現に際して，ＫＥＸ２プロテアーゼによるタンパク分解を回避できる可 能性を示唆している．突然変異タンパク質はまったく開示されていない．この場 合，グリコシレーションおよびＫＥＸ２プロテアーゼ活性は酵母中での発現に際 してのみ重要である． ＷＯ８８／０６１６１号には，理論上，コンフォーメーション的および抗原的 に中性と考えられる様々な突然変異体が記載されている．実際に行われた突然変 異はＭｅｔ2→Ｉｌｅ2およびＩｌｅ131→Ｌｅｕ131のみである．これら２つの突 然変異によって，意図された中性状態が達成されたか否かについては開示されて いない． ＷＯ９１／００３５０号には非グリコシル化ｈＩＬ−３類縁タンパク質，たと えばｈＩＬ−３（Ｐｒｏ8Ａｓｐ15Ａｓｐ70），Ｍｅｔ3ｒｈｕｌ−３（Ｐｒｏ8 Ａｓｐ15Ａｓｐ70）；Ｔｈｒ4ｒｈｕＬ−３（Ｐｒｏ8Ａｓｐ15Ａｓｐ70）および Ｔｈｒ6ｒｈｕＩＬ−３（Ｐｒｏ8Ａｓｐ15Ａｓｐ70）が開示されている．これら のタンパク質組成物ではネイティブｈＩＬ−３に関連するある種の有害な副作用 たとえば肥満細胞およびリンパ球の真皮への浸潤に原因する蕁麻疹が表れないと いわれている．開示された類縁ｈＩＬ−３タンパク質はＮ末端にＭｅｔ3，Ｔｈ ｒ4またはＴｈｒ6をもっていてもよい． ＷＯ９１／１２８７４号には天然に存在するアミノ酸残基の少なくとも１個が Ｃｙｓ残基で置換されたＩＬ−３のシステイン付加変異体（ＣＡＶ）が開示され ている． 発明の概要 本発明は組換えヒトインターロイキン−３（ｈＩＬ−３）の変異または突然変 異タンパク質（ムテイン）に関する．これらのｈＩＬ−３ムテインはアミノ酸置 換を含有し，またＮ−末端とＣ−末端の一方または両者にアミノ酸欠失があって もよい．好ましくは，本発明のこれらの突然変異ポリペプチドは，ネイティブな ｈＩＬ−３ポリペプチドの相当する位置に見られるアミノ酸とは異なるアミノ酸 ４個以上を含有する．本発明はまたｈＩＬ−３ムテインを含有する医薬組成物， そのムテインをコードするＤＮＡおよびそのムテインを使用する方法に関する． さらに，本発明は．ｈＩＬ−３ムテインをコードするヌクレオチド配列からなる 組換え発現ベクター，関連の微生物発現系，およびその微生物発現系を使用する ｈＩＬ−３ムテインの製造方法に関する． 本発明はＮ−末端から１〜１４アミノ酸の欠失および／またはＣ−末端から１ 〜１５アミノ酸の欠失を含み，多重アミノ酸置換が行われたｈＩＬ−３の突然変 異体を包含する．本発明の好ましいムテインは，Ｎ−末端からアミノ酸１〜１４ が欠失し，Ｃ−末端からアミノ酸１２６〜１３３が欠失し，さらにポリペプチド 配列中に約４個〜約２６個のアミノ酸置換を含有する突然変異体である．これら のｈＩＬ−３多重突然変異ポリペプチドは．ｈＩＬ−３に類似のまたはそれより 優れた生物活性を有する場合があり，また場合によっては改善された副作用プロ ファイルを有し，すなわち，一部のムテインはネイティブｈＩＬ−３よりも良好 な治療系数を有する．本発明はまた，ＩＬ−３アンタゴニストとして，またはイ ムノアッセイまたは免疫療法プロトコールに有用な抗体の製造用の分離された抗 原フラグメントとして機能できるムテインを提供する．本発明のｈＩＬ−３多重 突然変異ポリペプチドのインビボでの使用に加えて，インビトロでの使用には， 患者への注入前における脊髄および血液細胞の活性化および増殖の刺激能の利用 が考えられる． ｈＩＬ−３のアンタゴニストは，ＡＭＬ，ＣＭＬおよびある型のＢリンパ球癌 のようなある種の癌細胞の増殖阻害にとくに有用と思われる．アンタゴニストが 有用と考えられるその他の状態には，ある種の血液細胞が異常に多量に産生され るかまたは内因性リガンドにより活性化されている状態が包含される．アンタゴ ニストは，ＩＬ−３受容体複合体への結合能によって癌細胞の増殖を誘発または 増強する可能性が考えられる，おそらくは天然に存在するヘモポエチン，それら に限定されるものではないが，たとえばＩＬ−３，ＧＭ−ＣＦＳおよびＩＬ−５ と効率的に競合して，リガンド固有の活性化作用を低下させるものと思われる． ＩＬ−３，ＧＭ−ＣＳＦおよび／またはＩＬ−５はまたある種の喘息反応に重要 な役割を果たしている．ＩＬ−３受容体のアンタゴニストは炎症細胞の受容体− 媒介活性化および増強を遮断することによって，この疾患に対して有用性を有す るものと考えられる． 図面の簡単な説明 図１は，大腸菌内において発現される，天然の（野生型）ヒトＩＬ−３［配列 番号：１２８］のポリペプチド配列とイニシエーターのメチオニンをコードする 大腸菌内発現用ヒトＩＬ−３遺伝子（ｐＭＯＮ５８７３）であり，アミノ酸には 天然ｈＩＬ−３のＮ−末端からの番号を付してある． 図２：ＣｌａＩ〜ＮｓｉＩ置換フラグメント．図２には，ｈＩＬ−３遺伝子の ＣｌａＩおよびＮｓｉＩ部位の間に用いられる置換フラグメントのヌクレオチド 配列を示す．フラグメント中に用いられたコドン選択は高度に発現する大腸菌遺 伝子中に見出されるコドン選択（Ｇｏｕｙ ＆ Ｇａｕｔｌｅｒ，１９８２）に相 当する．３つの新しい唯一の制限部位，ＥｃｏＲＶ，ＸｈｏＩおよびＰｓｔＩは 合成遺伝子フラグメントの挿入の目的で導入された．示されるコード配列部分は ｈＩＬ−３アミノ酸２０〜７０をコードしている． 図３には，ｐＭＯＮ５８７３中の遺伝子のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を ＮｃｏＩからＨｉｎｄIIIまで延長された配列として示す．アミノ酸１〜１４お よび１０７〜１３３をコードするのに用いられたコドン選択は高度に発現する大 腸菌遺伝子中に見出される選択に相当する． 図４は，［Ｍｅｔ−（１−１３３）ｈＩＬ−３（Ａｒｇ129）］をコードする プラスミドベクターｐＭＯＮ５８４６の構築を示す． 図５は，［Ｍｅｔ−（１−１３３）ｈＩＬ−３（Ａｒｇ129）］をコードする プラスミドベクターｐＭＯＮ５８４７（ＡＴＣＣ６８９１２）の構築を示す． 図６は［Ｍｅｔ−（１５−１３３）ｈＩＬ−３（Ａｒｇ129）］をコードする プラスミドベクターｐＭＯＮ５８５３の構築を示す． 図７は，［Ｍｅｔ−（１−１３３）ｈＩＬ−３（Ａｒｇ129）］をコードする プラスミドベクターｐＭＯＮ５８５４の構築を示す． 図８はＬａｍＢシグナルペプチドのＤＮＡ配列およびそれから得られるアミノ 酸配列を示す． 図９はＭｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３をコードするプラスミド ベクターｐＭＯＮ５９７８の構築を示す． 図１０はＭｅｔ−Ａｌａ（１５−１２５）ｈＩＬ−３をコードするプラスミド ベクターｐＭＯＮ５９８８の構築を示す． 図１１はＭｅｔ−（１−１２５）ｈＩＬ−３をコードするプラスミドベクター ｐＭＯＮ５８８７の構築を示す． 図１２は（１５−１２５）ｈＩＬ−３をコードするｐＭＯＮ６４５７の構築を 示す．これは変異ｈＩＬ−３アミノ酸１５−１２５に融合したａｒａＢＡＤプロ モーターおよびＬａｍＢシグナルペプチドを含有する． 図１３は，ｐＭＯＮ６４５８の構築を示す．これは，変異ｈＩＬ−３アミノ酸 １５−１２５に融合したａｒａＢＡＤプロモーターおよびＬａｍＢシグナルペプ チドを含有する． 図１４はｐＭＯＮ１３３５９の構築を示す． 図１５はｐＭＯＮ１３３５２の構築を示す． 図１６はｐＭＯＮ１３３６０の構築を示す． 図１７はｐＭＯＮ１３３６３の構築を示す． 図１８はｐＭＯＮ１３３６４の構築を示す． 図１９はｐＭＯＮ１３３６５の構築を示す． 図２０はｐＭＯＮ１３２８７の構築を示す． 図２１はｐＭＯＮ１３２８８の構築を示す． 図２２はｐＭＯＮ１３２８９の構築を示す． 図２３はｐＭＯＮ５７２３の構築を示す． 図２４はｐＭＯＮ１３４３８の構築を示す． 発明の詳細な説明 本発明は，ポリペプチドのアミノ酸配列中の４カ所以上の位置にアミノ酸置換 が行われたヒトインターロイキン−３（ｈＩＬ−３）のムテインおよび実質的に 同一の構造および実質的に同じ生物活性を有するムテインに関する．本発明の好 ましいムテインはＮ−末端でアミノ酸１〜１４およびＣ−末端でアミノ酸１２６ 〜１３３が欠失し，さらにそのポリペプチド中に４個以上のアミノ酸置換有する （１５−１２５）ｈＩＬ−３欠失突然変異体，ならびに実質的に同一の構造およ び実質的に同一の生物活性を有するムテインである．とくに好ましいムテインは ２６個のアミノ酸置換を有するムテインである．ここで用いられるヒトインター ロイキン−３は図１に示されるアミノ酸配列（１−１３３）に対応し，（１５− １２５）ｈＩＬ−３はｈＩＬ−３ポリペプチドの１５〜１２５のアミノ酸配列に 対応する．翻訳後に修飾される（たとえばグリコシレーション）変異ｈＩＬ−３ 分子のような，ｈＩＬ−３ポリペプチドアミノ酸の天然に存在する変異体（たと えば，ｈＩＬ−３ポリペプチド配列における位置８がセリンでなくプロリンであ る対立形質）も，本発明に包含される． 本発明はまた，突然変異ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列，実質的に同一 で実質的に同一機能を果たすＤＮＡ配列，および遺伝子コードの縮重のみによっ て本発明のムテインをコードするＤＮＡとは異なるＤＮＡ配列を包含する． ネイティブなヒトインターロイキン−３ポリペプチドのＣ−末端からアミノ酸 １２６〜１３３が欠失し，ネイティブなヒトインターロイキン−３ポリペプチド のＮ−末端からアミノ酸１〜１４が欠失し，さらに，ポリペプチドは４個以上の アミノ酸置換をそのポリペプチド配列中に有するほかは，ネイティブなヒトイン ターロイキン−３のアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる新規な突然変異 ヒトインターロイキン−３ポリペプチドが本発明に包含される． 本発明にはまた，本発明のムテインをコードするＤＮＡ配列；突然変異ＤＮＡ の構築に用いられるオリゴヌクレオチド中間体；およびこれらのオリゴヌクレオ チドによってコードされるポリペプチドが包含される．これらのポリペプチドは アンタゴニストとしてまたはイムノアッセイおよび免疫療法プロトコールに有用 な抗体の製造用の抗原フラグメントとして有用な場合がある． 本発明の突然変異ｈＩＬ−３ポリペプチドは，Ｎ−末端に挿入されたメチオニ ン，アラニン，またはメチオニン−アラニン残基をもっていてもよい． 本発明は，式Ｉ ［式中，位置１７のＸａａはＳｅｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｍｅｔ，Ｇｌｎ またはＡｒｇであり， 位置１８のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ａｒｇまた はＧｌｎであり， 位置１９のＸａａは，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｇｌｙ，Ａｌａまた はＣｙｓであり， 位置２０のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＡｌａであり， 位置２１におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｙ ，Ｇｌｕ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｔｈｒ，ＳｅｒまたはＶａｌであり， 位置２２におけるＸａａはＧｌｕ，Ｔｒｐ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｈｉｓ ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，ＶａｌまたはＧｌｙであり， 位置２３におけるＸａａはＩｌｅ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ｔｒｐ ，Ｌｙｓ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，ＳｅｒまたはＡｒｇであり， 位置２４のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ｐｈｅまた はＬｅｕであり， 位置２５のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＡｌａであり， 位置２６のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，Ａｌａまた はＴｒｐであり， 位置２７のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，ＳｅｒまたはＡｌａ であり， 位置２８におけるＸａａはＬｙｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏ ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置２９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，ＡｒｇまたはＶａｌ であり， 位置３０におけるＸａａはＰｒｏ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ．Ｇｌｎ ，Ｓｅｒ，ＬｅｕまたはＬｙｓであり， 位置３１のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｌｅｕまた はＧｌｎであり， 位置３２におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ ，ＡｌａまたはＧｌｕであり， 位置３３のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ａｌａ，ＴｈｒまたはＧｌｕ であり， 位置３４におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｕ ，Ｇｌｎ，Ｔｈｒ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置３５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｇｌｎまた はＶａｌであり， 位置３６のＸａａは，Ａｓｐ，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置３７のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，ＴｒｐまたはＩｌｅであり， 位置３８のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置４０のＸａａは，Ｌｅｕ，ＴｒｐまたはＡｒｇであり， 位置４１のＸａａは，Ａｓｎ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔまた はＰｒｏであり， 位置４２におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｉｌｅ，Ｍｅｔ，または Ａｌａであり， 位置４３におけるＸａａはＧｌｕ，Ａｓｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｐｈｅ，Ａｓｐ ，Ａｌａ，Ｃｙｓ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，ＧｌｙまたはＳｅｒであり， 位置４４におけるＸａａはＡｓｐ，Ｓｅｒ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置４５におけるＸａａはＧｌｎ，Ｐｒｏ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ ，Ｔｈｒ，Ｌｙｓ，Ｔｒｐ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｉｌｅ ，ＧｌｕまたはＨｉｓであり， 位置４６におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，または Ｇｌｙであり， 位置４７のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＨｉｓであり， 位置４８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ，Ｈｉｓ ，Ｐｈｅ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｍｅｔ，ＶａｌまたはＡｓｎであ り， 位置４９におけるＸａａはＭｅｔ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏ，Ａｓｎ ， ＨｉｓまたはＡｓｐであり， 位置５０におけるＸａａはＧｌｕ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ ，Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ．Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，Ｍｅｔ，または Ｇｌｎであり， 位置５１のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置５２のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ．Ｇｌｙ，Ｓｅｒまた はＴｈｒであり， 位置５３におけるＸａａはＬｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ ，Ｌｙｓ，ＳｅｒまたはＭｅｔであり， 位置５４におけるＸａａはＡｒｇ，Ａｓｐ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ｔｈｒ ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，ＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置５５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，ＬｅｕまたはＧｌｙ であり， 位置５６におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｃｙｓ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，または Ｌｙｓであり， 位置５７のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｙであり， 位置５８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｖａｌまた はＣｙｓであり， 位置５９のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，ＰｒｏまたはＡｒｇ であり， 位置６０のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ｔｙｒ，ＡｓｎまたはＴｈｒ であり， 位置６１のＸａａは，Ｐｈｅ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ，Ａｒｇまた はＳｅｒであり， 位置６２におけるＸａａはＡｓｎ，Ｈｉｓ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ ，ＡｓｐまたはＩｌｅであり， 位置６３におけるＸａａはＡｒｇ，Ｔｙｒ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ｈｉｓ ， ＰｒｏまたはＶａｌであり， 位置６４のＸａａは，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置６５のＸａａは，Ｖａｌ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｐｈｅまた はＳｅｒであり， 位置６６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，Ｇｌｕまた はＳｅｒであり， 位置６７におけるＸａａはＳｅｒ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ ，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＨｉｓであり， 位置６８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ ，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置６９におけるＸａａはＧｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ ，Ｔｒｐ，ＧｌｙまたはＬｅｕであり， 位置７０のＸａａは，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，ＰｒｏまたはＡｌａ であり， 位置７１におけるＸａａはＡｌａ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｇｌｕ ，Ｔｈｒ，Ｇｌｎ，ＴｒｐまたはＡｓｎであり， 位置７２におけるＸａａはＳｅｒ，Ｇｌｕ，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ａｓｎ ，ＡｒｇまたはＡｓｐであり， 位置７３におけるＸａａはＡｌａ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ ，ＴｈｒまたはＡｒｇであり， 位置７４におけるＸａａはＩｌｅ，Ｍｅｔ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｇｌｙ またはＡｌａであり， 位置７５におけるＸａａはＧｌｕ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｔｒｐ ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，ＧｌｎまたはＬｅｕであり， 位置７６におけるＸａａはＳｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｔｒｐ，Ｇｌｕ ，Ｐｒｏ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置７７のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ａｒｇ，ＴｈｒまたはＬｅｕであり， 位置７８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙまた はＡｒｇであり， 位置７９におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｈｒ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置８０におけるＸａａはＡｓｎ，Ｔｒｐ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置８１におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ ，ＶａｌまたはＬｙｓであり， 位置８２におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ ，ＭｅｔまたはＶａｌであり， 位置８３のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｔｒｐ，ＡｒｇまたはＭｅｔ であり， 位置８４のＸａａは，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，ＭｅｔまたはＶａｌ であり， 位置８５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，ＶａｌまたはＧｌｎであり， 位置８６のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＬｙｓであり， 位置８７のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，ＴｒｐまたはＧｌｙであり， 位置８８のＸａａは，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置８９におけるＸａａはＴｈｒ，Ａｓｐ，Ｃｙｓ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ ，Ｈｉｓ，ＡｓｎまたはＳｅｒであり， 位置９０におけるＸａａはＡｌａ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ ，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置９１におけるＸａａはＡｌａ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置９２におけるＸａａはＰｒｏ，Ｐｈｅ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置９３におけるＸａａはＴｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ ，ＬｅｕまたはＡｒｇであり， 位置９４におけるＸａａはＡｒｇ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置９５におけるＸａａはＨｉｓ，Ｇｌｎ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｔｒｐ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ またはＴｙｒであり， 位置９６のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｇｌｙ，ＩｌｅまたはＴｈｒ であり， 位置９７のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置９８におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｐｈｅ，Ｍｅｔ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ ，ＴｙｒまたはＰｒｏであり， 位置９９におけるＸａａはＩｌｅ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置１００のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ， Ｓｅｒ，ＧｌｎまたはＰｒｏであり， 位置１０１のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ， Ｖａｌ，Ｔｙｒ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕま たはＧｌｎであり， 位置１０２のＸａａは，Ｇｌｙ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒま たはＰｒｏであり， 位置１０３のＸａａは，ＡｓｐまたはＳｅｒであり， 位置１０４のＸａａは，Ｔｒｐ，Ｖａｌ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ， Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ａｌａ，ＰｈｅまたはＧｌｙであり， 位置１０５のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ， Ｇｌｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置１０６のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｉｌｅ， ＧｌｙまたはＰｒｏであり， 位置１０８のＸａａは，Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ｉｌｅ， Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置１０９のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ， ＳｅｒまたはＧｌｙであり， 位置１１０のＸａａは，Ｌｙｓ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ， Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置１１１のＸａａはＬｅｕ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，ＡｓｐまたはＭｅｔであり， 位置１１２のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｇｌｎ，Ｔｙｒ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ， ＳｅｒまたはＰｈｅであり， 位置１１３のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｔｒｐ， Ｔｙｒ，Ａｓｐ，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＡｓｎであり， 位置１１４のＸａａは，Ｔｙｒ，Ｃｙｓ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ，Ａｒｇま たはＬｅｕであり， 位置１１５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ａｌａ， Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，ＴｒｐまたはＭｅｔであり， 位置１１６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ，Ａｓｐ， ｖａｌ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ａｌａ，Ｔｙｒ， Ｐｈｅ，ＧｌｎまたはＩｌｅであり， 位置１１７のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓま たはＰｒｏであり， 位置１１８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｇｌｕ，Ｃｙｓ， ＡｓｐまたはＴｙｒであり， 位置１１９のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ， ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置１２０のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｖａｌま たはＧｌｎであり， 位置１２１のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ， ＡｓｐまたはＧｌｙであり， 位置１２２のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｐｈｅ， Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，ＴｙｒまたはＣｙｓであり， 位置１２３のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ， ＴｙｒまたはＬｅｕであり， またさらに位置１におけるアミノ酸に先行するＭｅｔ−をもっていてもよく； Ｎ−末端から１〜１４アミノ酸および／またはＣ−末端から１〜１５アミノ酸が 欠失していてもよく；Ｘａａで示されている４〜４４個のアミノ酸はネイティブ な（１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なってい る］のヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチドを包含する． 本発明には，式II ［式中， 位置１７のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，ＭｅｔまたはＧｌｎであり， 位置１８のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ａｒｇまた はＧｌｎであり， 位置１９のＸａａは，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置２０のＸａａは，ＩｌｅまたはＰｒｏであり， 位置２１のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置２３のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ａｌａ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置２４のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，ＰｈｅまたはＬｅｕであり， 位置２５のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＡｌａであり， 位置２６のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙ，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置２８のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，ＰｒｏまたはＶａｌ であり， 位置２９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，ＡｒｇまたはＶａｌであり， 位置３０のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，ＧｌｙまたはＧｌｎであり， 位置３１のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｌｅｕまた はＧｌｎであり， 位置３２のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａまた はＧｌｕであり， 位置３３のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，ＡｌａまたはＧｌｕであり， 位置３４におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ａｌａ ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＴｈｒまたはＭｅｔであり， 位置３５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＧｌｎまたはＶａｌ であり， 位置３６のＸａａは，ＡｓｐまたはＬｅｕであり， 位置３７のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，ＴｒｐまたはＩｌｅであり， 位置３８のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置４１のＸａａは，Ａｓｎ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，ＭｅｔまたはＰｒｏ であり， 位置４２におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，Ｔｙｒ，ＶａｌまたはＡｒｇであり， 位置４４のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置４５におけるＸａａはＧｌｎ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ｌｙｓ ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，ＳｅｒまたはＴｒｐであり， 位置４６におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ，または Ｇｌｙであり， 位置４７のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａ１またはＨｉｓであり， 位置４９のＸａａは，Ｍｅｔ，ＡｓｎまたはＡｓｐであり， 位置５０のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＡｓｐ であり， 位置５１のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置５２のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｙであり， 位置５３のＸａａは，Ｌｅｕ，ＭｅｔまたはＰｈｅであり， 位置５４のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置５５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置５６におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｃｙｓ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ａｌａ ，Ａｒｇ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＬｙｓであ り， 位置５９のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，ＬｅｕまたはＡｒｇであり， 位置６０のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＡｓｎまたはＴｈｒであり， 位置６１のＸａａは，ＰｈｅまたはＳｅｒであり， 位置６２のＸａａは，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ，ＴｈｒまたはＩｌｅであり， 位置６３のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，ＨｉｓまたはＶａｌ であり， 位置６４のＸａａは，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置６５のＸａａは，Ｖａｌ，Ｔｈｒ，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置６６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，Ｇｌｕまた はＳｅｒであり， 位置６７のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｉｌｅまた はＨｉｓであり， 位置６８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｉｌｅ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置６９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇまた はＧｌｙであり， 位置７０のＸａａは，ＡｓｎまたはＰｒｏであり， 位置７１のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｇｌｕ，Ｔｈｒまた はＧｌｎであり， 位置７２におけるＸａａはＳｅｒ，Ｇｌｕ，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ａｓｎ ，ＡｒｇまたはＡｓｐであり， 位置７３におけるＸａａはＡｌａ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ ，Ｔｈｒ，ＡｒｇまたはＰｒｏであり， 位置７４のＸａａは，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置７５のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，ＳｅｒまたはＧｌｎであり， 位置７６におけるＸａａはＳｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置のＸａａは，Ｉｌｅ，ＳｅｒまたはＬｅｕであり， 位置７９におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ ，Ｉｌｅ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置８０のＸａａは，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕまた はＡｒｇであり， 位置８１のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置８２におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｔｙｒ，または Ｖａｌであり， 位置８３のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，ＴｒｐまたはＭｅｔであり， 位置８５のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置８７のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置８８のＸａａは，Ａｌａ，ＡｒｇまたはＴｒｐであり， 位置８９のＸａａは，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｇｌｕ．Ｈｉｓ，ＡｓｎまたはＳｅｒ であり， 位置９０のＸａａは，Ａｌａ，ＡｓｐまたはＭｅｔであり， 位置９１のＸａａは，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕまた はＡｓｐであり， 位置９２のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置９３のＸａａは，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｌｅｕまた はＡｒｇであり， 位置９５におけるＸａａはＨｉｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＳｅｒまたはＴｈｒであり， 位置９６のＸａａは，ＰｒｏまたはＴｙｒであり， 位置９７のＸａａは，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＡｌａであり， 位置９８におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ ，ＶａｌまたはＰｒｏであり， 位置９９のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，ＶａｌまたはＰｈｅであり， 位置１００のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ，Ｇｌｎ， ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置１０１のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ， Ｖａｌ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒであり， 位置１０２のＸａａはＧｌｙ，Ｇｌｕ，ＬｙｓまたはＳｅｒであり， 位置１０４のＸａａはＴｒｐ，Ｖａｌ，Ｔｙｒ，ＭｅｔまたはＬｅｕであり， 位置１０５のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ， Ｇｌｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置１０６のＸａａはＧｌｕ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＧｌｙであり， 位置１０８のＸａａはＡｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｎ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置１０９のＸａａはＡｒｇ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，ＳｅｒまたはＧｌｙ であり， 位置１１２のＸａａはＴｈｒ，Ｖａｌ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，ＨｉｓまたはＳｅｒ であり， 位置１１４のＸａａは，ＴｙｒまたはＴｒｐであり， 位置１１５のＸａａは，ＬｅｕまたはＡｌａであり， 位置１１６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ， Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，またはＩ ｌｅであり， 位置１１７のＸａａは，Ｔｈｒ，ＳｅｒまたはＡｓｎであり， 位置１１９のＸａａはＧｌｕ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，ＴｈｒまたはＴｙｒ であり， 位置１２０のＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，ＶａｌまたはＧｌｎ であり， 位置１２１のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ， ＡｓｐまたはＧｌｙであり， 位置１２２のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｐｈｅ， Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，ＴｙｒまたはＣｙｓであり， 位置１２３のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ， ＴｙｒまたはＬｅｕであり， またさらに位置１におけるアミノ酸に先行するＭｅｔ−をもっていてもよく； Ｎ−末端から１〜１４アミノ酸および／またはＣ−末端から１〜１５アミノ酸が 欠失していてもよく；Ｘａａで示されている４〜４４個のアミノ酸はネイティブ な（１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なってい る］のヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチドが包含される． 本発明には，式III ［式中， 位置１７のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，ＭｅｔまたはＧｌｎであり， 位置１８のＸａａは，Ａｓｎ，ＨｉｓまたはＩｌｅであり， 位置１９のＸａａは，ＭｅｔまたはＩｌｅであり， 位置２１のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置２３のＸａａは，Ｉｌｅ，Ａｌａ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置２４のＸａａは，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＬｅｕであり， 位置２５のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，ＧｌｎまたはＡｌａであり， 位置２６のＸａａは，ＨｉｓまたはＡｌａであり， 位置２９のＸａａは，Ｇｌｎ，ＡｓｎまたはＶａｌであり， 位置３０のＸａａは，Ｐｒｏ，ＧｌｙまたはＧｌｎであり， 位置３１のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，ＧｌｙまたはＧｌｎであり， 位置３２のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａまた はＧｌｕであり， 位置３３のＸａａは，ＰｒｏまたはＧｌｕであり， 位置３４におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ａｌａ ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＴｈｒまたはＭｅｔであり， 位置３５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＧｌｎまたはＶａｌ であり， 位置３７のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，ＰｒｏまたはＴｒｐであり， 位置３８のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置４２におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置４４のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置４５におけるＸａａはＧｌｎ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置４６におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，ＶａｌまたはＣｙｓであ り， 位置５０のＸａａは，Ｇｌｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＡｓｐであり， 位置５１のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置５４のＸａａは，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置５４のＸａａは，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置５５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置５６におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ａｒｇ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＬｙｓであり， 位置６０のＸａａは，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置６２のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＴｈｒまたはＩｌｅであり， 位置６３のＸａａは，ＡｒｇまたはＬｙｓであり， 位置６４のＸａａは，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置６５のＸａａは，ＶａｌまたはＴｈｒであり， 位置６６のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置６７のＸａａは，Ｓｅｒ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置６８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置６９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇまた はＧｌｙであり， 位置７１のＸａａは，Ａｌａ，ＰｒｏまたはＡｒｇであり， 位置７２のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，ＡｒｇまたはＡｓｐであり， 位置７３のＸａａは，ＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置７６のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏまた はＧｌｙであり， 位置７７のＸａａは，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置７９におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ ，Ｉｌｅ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置８０のＸａａは，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置８２におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｔｙｒ またはＶａｌであり， 位置８３のＸａａは，ＰｒｏまたはＴｈｒであり， 位置８５のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置８７のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置８８のＸａａは，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置９１のＸａａは，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置９３のＸａａは，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｌｅｕまた はＡｒｇであり， 位置９５におけるＸａａはＨｉｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ ，Ａｓｎ，Ｐｈｅ，ＳｅｒまたはＴｈｒであり， 位置９６のＸａａは，ＰｒｏまたはＴｙｒであり， 位置９７のＸａａは，ＩｌｅまたはＶａｌであり， 位置９８におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｔｈｒ ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ またはＰｒｏであり， 位置９９のＸａａは，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置１００のＸａａはＬｙｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ，Ｇｌｎ，ＰｒｏまたはＳｅｒ であり， 位置１０１のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ， Ｐｒｏ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒであり， 位置１０４のＸａａは，ＴｒｐまたはＬｅｕであり， 位置１０５のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ，Ｇｌｎ， Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置１０６のＸａａは，ＧｌｕまたはＧｌｙであり， 位置１０８のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置１０９のＸａａはＡｒｇ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置１１２のＸａａは，Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＧｌｎであり， 位置１１４のＸａａは，ＴｙｒまたはＴｒｐであり， 位置１１５のＸａａは，ＬｅｕまたはＡｌａであり， 位置１１６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ａｌａ， Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，ＴｙｒまたはＩｌｅであり， 位置１１７のＸａａは，ＴｈｒまたはＳｅｒであり， 位置１２０のＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，ＶａｌまたはＧｌｎ であり， 位置１２１のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｓｐま たはＧｌｙであり， 位置１２２のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｐｈｅ， Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，ＴｙｒまたはＣｙｓであり， 位置１２３のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ， ＴｙｒまたはＬｅｕであり， またさらに位置１におけるアミノ酸に先行するＭｅｔ−をもっていてもよく； Ｎ−末端から１−１４アミノ酸および／またはＣ−末端から１〜１５アミノ酸が 欠失していてもよく；Ｘａａで示されている４〜３５個のアミノ酸はネイティブ な（１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なってい る］のヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチドが包含される． 本発明には，式IV ［式中， 位置１７のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，ＡｓｐまたはＧｌｎであり， 位置１８のＸａａは，Ａｓｎ，ＨｉｓまたはＩｌｅであり， 位置２３のＸａａは，Ｉｌｅ，Ａｌａ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置２５のＸａａは，Ｔｈｒ，ＨｉｓまたはＧｌｎであり， 位置２６のＸａａは．ＨｉｓまたはＡｌａであり， 位置２９のＸａａは，ＧｌｎまたはＡｓｎであり， 位置３０のＸａａは，ＰｒｏまたはＧｌｙであり， 位置３２のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置３４におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ ，Ｇｌｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＴｈｒまたはＭｅｔであり， 位置３５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，ＡｓｎまたはＰｒｏであり， 位置３８のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置４２におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置４５におけるＸａａはＧｌｎ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，ＧｌｕまたはＬｙｓであり， 位置４６におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ ，ＶａｌまたはＴｈｒであり， 位置５０のＸａａは，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＡｓｐであり， 位置５１のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置５５のＸａａは，Ａｒｇ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置５６におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｖａｌ ，ＬｅｕまたはＧｌｎであり， 位置６２のＸａａは，Ａｓｎ，ＰｒｏまたはＴｈｒであり， 位置６４のＸａａは，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置６５のＸａａは，ＶａｌまたはＴｈｒであり， 位置６７のＸａａは，ＳｅｒまたはＰｈｅであり， 位置６８のＸａａは，ＬｅｕまたはＰｈｅであり， 位置６９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｌａ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置７６のｘａａは，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，ＰｒｏまたはＧｌｙであり， 位置７７のＸａａは，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置７９のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ，Ｉｌｅまた はＧｌｙであり， 位置８０のＸａａは，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置８２におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ａｓｎ ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，ＴｙｒまたはＶａｌであ り， 位置８７のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置８８のＸａａは，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置９１のＸａａは，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置９３のＸａａは，Ｔｈｒ，ＡｓｐまたはＡｌａであり， 位置９５におけるＸａａはＨｉｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ ，ＳｅｒまたはＴｈｒであり， 位置９８におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｇｌｎ ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，ＶａｌまたはＬｅｕであり， 位置９９のＸａａは，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置１００のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置１０１のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ， Ｐｒｏ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒであり， 位置１０５のＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，ＩｌｅまたはＡｓｐであり， 位置１０８のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置１０９のＸａａはＡｒｇ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置１１２のＸａａは，ＴｈｒまたはＧｌｎであり， 位置１１６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ， ＴｙｒまたはＩｌｅであり， 位置１１７のＸａａは，ＴｈｒまたはＳｅｒであり， 位置１２０のＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，ＶａｌまたはＧｌｎ であり， 位置１２１のＸａａはＡｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＡｓｎであり， 位置１２２のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ｐｈｅ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ， ＩｌｅまたはＴｙｒであり， 位置１２３のＸａａはＡｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，ＳｅｒまたはＬｅｕであり， またさらに位置１におけるアミノ酸に先行するＭｅｔ−をもっていてもよく； Ｎ−末端から１〜１４アミノ酸および／またはＣ−末端から１〜１５アミノ酸が 欠失していてもよく；Ｘａａで示されている４〜４４個のアミノ酸はネイティブ な（１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なってい る］のヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチドが包含される． 本発明には，式Ｖ ［式中， 位置３のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｍｅｔ，Ｇｌｎまたは Ａｒｇであり， 位置４のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ａｒｇまたは Ｇｌｎであり， 位置５のＸａａは，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｇｌｙ，Ａｌａまたは ｃｙｓであり， 位置６のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまたは Ａｌａであり， 位置７のＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｇｌｕ ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｔｈｒ，ＳｅｒまたはＶａｌであり， 位置８のＸａａはＧｌｕ，Ｔｒｐ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ａｓｐ ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，ＶａｌまたはＧｌｙであり， 位置９のＸａａはＩｌｅ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，ＳｅｒまたはＡｒｇであり， 位置１０のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ｐｈｅまた はＬｅｕであり， 位置１１のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＡｌａであり， 位置１２のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，Ａｌａまた はＴｒｐであり， 位置１３のＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ａｌａであり ， 位置１４におけるＸａａはＬｙｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏ ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置１５のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，ＡｒｇまたはＶａｌ であり， 位置１６におけるＸａａはＰｒｏ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｇｌｎ ，Ｓｅｒ，ＬｅｕまたはＬｙｓであり， 位置１７のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｌｅｕまた はＧｌｎであり， 位置１８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ ，ＡｌａまたはＧｌｕであり， 位置１９のＸａａはＰｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕであり ， 位置２０におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｕ ，Ｇｌｎ，Ｔｈｒ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置２１のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｇｌｎまた はＶａｌであり， 位置２２のＸａａは，Ａｓｐ，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置２３のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，ＴｒｐまたはＩｌｅであり， 位置２４のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置２６のＸａａは，Ｌｅｕ，ＴｒｐまたはＡｒｇであり， 位置２７のＸａａは，Ａｓｎ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔまた はＰｒｏであり， 位置２８におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ，Ｌｙｓ ，Ａｓｎ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｉｌｅ，または Ｍｅｔであり， 位置２９におけるＸａａはＧｌｕ，Ａｓｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｐｈｅ，Ａｓｐ ，Ａｌａ，Ｃｙｓ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，ＧｌｙまたはＳｅｒであり， 位置３０におけるＸａａはＡｓｐ，Ｓｅｒ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置３１におけるＸａａはＧｌｎ，Ｐｒｏ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ ，Ｔｈｒ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｇｌｕ ，ＨｉｓまたはＴｒｐであり， 位置３２におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，または Ｇｌｙであり， 位置３３のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＨｉｓであり， 位置３４におけるＸａａはＬｅｕ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ，Ｈｉｓ ，Ｐｈｅ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｍｅｔ，ＶａｌまたはＡｓｎであ り， 位置３５におけるＸａａはＭｅｔ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏ，Ａｓｎ ，ＨｉｓまたはＡｓｐであり， 位置３６におけるＸａａはＧｌｕ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ ，Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，Ｍｅｔ，または Ｇｌｎであり， 位置３７のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置３８のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒまた はＴｈｒであり， 位置３９におけるＸａａはＬｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ ，Ｌｙｓ，ＳｅｒまたはＭｅｔであり， 位置４０におけるＸａａはＡｒｇ，Ａｓｐ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ｔｈｒ ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，ＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置４１のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，ＬｅｕまたはＧｌｙ であり， 位置４２におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｃｙｓ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，または Ｌｙｓであり， 位置４３のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｙであり， 位置４４のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｖａｌまた はＣｙｓであり， 位置４５のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，ＰｒｏまたはＡｒｇ であり， 位置４６のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ｔｙｒ，ＡｓｎまたはＴｈｒ であり， 位置４７のＸａａは，Ｐｈｅ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ，Ａｒｇまた はＳｅｒであり， 位置４８におけるＸａａはＡｓｎ，Ｈｉｓ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ ，ＡｓｐまたはＩｌｅであり， 位置４９におけるＸａａはＡｒｇ，Ｔｙｒ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ｈｉｓ ，ＰｒｏまたはＶａｌであり， 位置５０のＸａａは，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置５１のＸａａは，Ｖａｌ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｐｈｅまた はＳｅｒであり， 位置５２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，Ｇｌｕまた はＳｅｒであり， 位置５３におけるＸａａはＳｅｒ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ ，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＨｉｓであり， 位置５４におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ ，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置５５におけるＸａａはＧｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ ，Ｔｒｐ，ＧｌｙまたはＬｅｕであり， 位置５６のＸａａは，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，ＰｒｏまたはＡｌａ であり， 位置５７におけるＸａａはＡｌａ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｇｌｕ ，Ｔｈｒ，Ｇｌｎ，ＴｒｐまたはＡｓｎであり， 位置５８におけるＸａａはＳｅｒ，Ｇｌｕ，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ａｓｎ ，ＡｒｇまたはＡｓｐであり， 位置５９におけるＸａａはＡｌａ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ ，ＴｈｒまたはＡｒｇであり， 位置６０におけるＸａａはＩｌｅ，Ｍｅｔ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｇｌｙ またはＡｌａであり， 位置６１におけるＸａａはＧｌｕ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｔｒｐ ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，ＧｌｎまたはＬｅｕであり， 位置６２におけるＸａａはＳｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｔｒｐ，Ｇｌｕ ，Ｐｒｏ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置６３のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ａｒｇ，ＴｈｒまたはＬｅｕであり， 位置６４のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙまた はＡｒｇであり， 位置６５におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ ，ＩｌｅまたはＡｓｐであり， 位置６６におけるＸａａはＡｓｎ，Ｔｒｐ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置６７におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ ，ＶａｌまたはＬｙｓであり， 位置６８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ ，ＭｅｔまたはＶａｌであり， 位置６９のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｔｒｐ，ＡｒｇまたはＭｅｔ であり， 位置７０のＸａａは，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，ＭｅｔまたはＶａｌ であり， 位置７１のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，ＶａｌまたはＧｌｎであり， 位置７２のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＬｙｓであり， 位置７３のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，ＴｒｐまたはＧｌｙであり， 位置７４のＸａａは，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置７５におけるＸａａはＴｈｒ，Ａｓｐ，Ｃｙｓ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ ，Ｈｉｓ，ＡｓｎまたはＳｅｒであり， 位置７６におけるＸａａはＡｌａ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ ，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置７７におけるＸａａはＡｌａ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置７８におけるＸａａはＰｒｏ，Ｐｈｅ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置７９におけるＸａａはＴｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ ，ＬｅｕまたはＡｒｇであり， 位置８０におけるＸａａはＡｒｇ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置８１におけるＸａａはＨｉｓ，Ｇｌｎ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｔｒｐ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ またはＴｙｒであり， 位置８２のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｇｌｙ，ＩｌｅまたはＴｈｒ であり， 位置８３のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置８４におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｐｈｅ，Ｍｅｔ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ ，ＴｙｒまたはＰｒｏであり， 位置８５におけるＸａａはＩｌｅ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置８６におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ ，Ｓｅｒ，ＧｌｎまたはＰｒｏであり， 位置８７におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ ，Ｖａｌ，Ｔｙｒ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ またはＧｌｎであり， 位置８８のＸａａは，Ｇｌｙ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒまた はＰｒｏであり， 位置８９のＸａａは，ＡｓｐまたはＳｅｒであり， 位置９０におけるＸａａはＴｒｐ，Ｖａｌ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ａｌａ，ＰｈｅまたはＧｌｙであり， 位置９１におけるＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ ，Ｇｌｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置９２におけるＸａａはＧｌｕ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｉｌｅ ，ＧｌｙまたはＰｒｏであり， 位置９４におけるＸａａはＡｒｇ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ｉｌｅ ，Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置９５におけるＸａａはＡｒｇ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ ，ＳｅｒまたはＧｌｙであり， 位置９６におけるＸａａはＬｙｓ，Ａｓｎ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置９７のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，ＡｓｐまたはＭｅｔであり， 位置９８におけるＸａａはＴｈｒ，Ｖａｌ，Ｇｌｎ，Ｔｙｒ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ ，ＳｅｒまたはＰｈｅであり， 位置９９におけるＸａａはＰｈｅ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｔｒｐ ，Ｔｙｒ，Ａｓｐ，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＡｓｎであり， 位置１００のＸａａは，Ｔｙｒ，Ｃｙｓ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ，Ａｒｇま たはＬｅｕであり， 位置１０１のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ａｌａ， Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，ＴｒｐまたはＭｅｔであり， 位置１０２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ，Ａｓｐ， Ｖａｌ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ａｌａ，Ｔｙｒ， Ｐｈｅ，ＧｌｎまたはＩｌｅであり， 位置１０３のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓま たはＰｒｏであり， 位置１０４のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｇｌｕ，Ｃｙｓ， ＡｓｐまたはＴｙｒであり， 位置１０５のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ， ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置１０６のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｖａｌま たはＧｌｎであり， 位置１０７のｘａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ， ＡｓｐまたはＧｌｙであり， 位置１０８のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｐｈｅ， Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，ＴｙｒまたはＣｙｓであり， 位置１０９のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ， ＴｙｒまたはＬｅｕであり， またさらに位置１のアミノ酸に先行するＭｅｔ−またはＭｅｔ−Ａｌａ−をも っていてもよく；Ｘａａで示されている４〜４４個のアミノ酸は（１−１３３） ヒトインターロイキン−３の相当するネイティブアミノ酸とは異なる］の（１５ −１２５）ヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチド，または実質的に同 一の構造および実質的に同一の生物活性を有するポリペプチドが包含される． 本発明には，式VI ［式中， 位置３のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ．ＭｅｔまたはＧｌｎであり， 位置４のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ａｒｇまたは Ｇｌｎであり， 位置５のＸａａは，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置６のＸａａは，ＩｌｅまたはＰｒｏであり， 位置７のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置９のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ａｌａ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置１０のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，ＰｈｅまたはＬｅｕであり， 位置１１のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＡｌａであり， 位置１２のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙ，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置１４のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，ＰｒｏまたはＶａｌ であり， 位置１５のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，ＡｒｇまたはＶａｌであり， 位置１６のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，ＧｌｙまたはＧｌｎであり， 位置１７のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｌｅｕまた はＧｌｎであり， 位置１８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａまた はＧｌｕであり， 位置１９のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，ＡｌａまたはＧｌｕであり， 位置２０のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ａｌａ，Ａ ｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＴｈｒまたはＭｅｔであり， 位置２１のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＧｌｎまたはＶａｌ であり， 位置２２のＸａａは，ＡｓｐまたはＬｅｕであり， 位置２３のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，ＴｒｐまたはＩｌｅであり， 位置２４のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置２７のＸａａは，Ａｓｎ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，ＭｅｔまたはＰｒｏ であり， 位置２８のＸａａは，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｉ ｌｅ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置３０のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置３１のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ｌｙｓ，Ａ ｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，ＳｅｒまたはＴｒｐであり， 位置３２のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ，Ａ ｓｎ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ，またはＧｌ ｙであり， 位置３３のＸａａは，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＨｉｓであり， 位置３５のＸａａは，Ｍｅｔ，ＡｓｎまたはＡｓｐであり， 位置３６のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＡｓｐ であり， 位置３７のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置３８のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｙであり， 位置３９のＸａａは，Ｌｅｕ，ＭｅｔまたはＰｈｅであり， 位置４０のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置４１のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置４２のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｇｌｙ，Ｃｙｓ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ａｌａ， Ａｒｇ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＬｙｓであり ， 位置４５のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，ＬｅｕまたはＡｒｇであり， 位置４６のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＡｓｎまたはＴｈｒであり， 位置４７のＸａａは，ＰｈｅまたはＳｅｒであり， 位置４８のＸａａは，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ，ＴｈｒまたはＩｌｅであり， 位置４９のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，ＨｉｓまたはＶａｌ であり， 位置５０のＸａａは，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置５１のＸａａは，Ｖａｌ，Ｔｈｒ，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置５２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，Ｇｌｕまた はＳｅｒであり， 位置５３のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｉｌｅまた はＨｉｓであり， 位置５４のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｉｌｅ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置５５のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇまた はＧｌｙであり， 位置５６のＸａａは，ＡｓｎまたはＰｒｏであり， 位置５７のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｇｌｕ，Ｔｈｒまた はＧｌｎであり， 位置５８のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ａｓｎ，Ａ ｒｇまたはＡｓｐであり， 位置５９のＸａａは，Ａｌａ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｔ ｈｒ，ＡｒｇまたはＰｒｏであり， 位置６０のＸａａは，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置６１のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，ＳｅｒまたはＧｌｎであり， 位置６２のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ，Ｇ ｌｙまたはＡｓｐであり， 位置６３のＸａａは，Ｉｌｅ，ＳｅｒまたはＬｅｕであり， 位置６５のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ，Ｉ ｌｅまたはＡｓｐであり， 位置６６のＸａａは，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕまた はＡｒｇであり， 位置６７のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置６８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ．Ａｌａ，Ａ ｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｔｙｒ，またはＶａ ｌであり， 位置６９のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，ＴｒｐまたはＭｅｔであり， 位置７１のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置７３のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置７４のＸａａは，Ａｌａ，ＡｒｇまたはＴｒｐであり， 位置７５のＸａａは，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，ＡｓｎまたはＳｅｒ であり， 位置７６のＸａａは，Ａｌａ，ＡｓｐまたはＭｅｔであり， 位置７７のＸａａは，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕまた はＡｓｐであり， 位置７８のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置７９のＸａａは，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｌｅｕまた はＡｒｇであり， 位置８１のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ａ ｓｎ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＳｅｒまたはＴｈｒであり， 位置８２のＸａａは，ＰｒｏまたはＴｙｒであり， 位置８３のＸａａは，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＡｌａであり， 位置８４のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｔ ｈｒ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｖａｌまた はＰｒｏであり， 位置８５のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，ＶａｌまたはＰｈｅであり， 位置８６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ，Ｇｌｎ，Ｐ ｒｏまたはＳｅｒであり， 位置８７のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｖ ａｌ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒであり， 位置８８のＸａａは，Ｇｌｙ，Ｇｌｕ，ＬｙｓまたはＳｅｒであり， 位置９０のＸａａは，Ｔｒｐ，Ｖａｌ，Ｔｙｒ，ＭｅｔまたはＬｅｕであり， 位置９１のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ，Ｇ ｌｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置９２のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＧｌｙであり， 位置９４のＸａａは，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｎ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置９５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，ＳｅｒまたはＧｌｙ であり， 位置９８のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，ＨｉｓまたはＳｅｒ ，であり， 位置１００のＸａａは，ＴｙｒまたはＴｒｐであり， 位置１０１のＸａａは，ＬｅｕまたはＡｌａであり， 位置１０２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ， Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，またはＩ ｌｅであり， 位置１０３のＸａａは，Ｔｈｒ，ＳｅｒまたはＡｓｎであり， 位置１０５のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，またはＴ ｙｒであり， 位置１０６のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｖａｌ，またはＧ ｌｎであり， 位置１０７のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ， ＡｓｐまたはＧｌｙであり， 位置１０８のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｐｈｅ， Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，ＴｙｒまたはＣｙｓであり， 位置１０９のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ， ＴｙｒまたはＬｅｕであり， またさらに位置１のアミノ酸に先行するＭｅｔ−またはＭｅｔ−Ａｌａ−をも っていてもよく；Ｘａａによって示されている４〜４４個のアミノ酸はネイティ ブな（１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる］ の（１５−１２５）ヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチド，または実 質的に同一構造および実質的に同一生物活性を有するポリペプチドが包含される ． 本発明には，式VII ［式中， 位置３のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，ＭｅｔまたはＧｌｎであり， 位置４のＸａａは，Ａｓｎ，ＨｉｓまたはＩｌｅであり， 位置５のＸａａは，ＭｅｔまたはＩｌｅであり， 位置７のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置９のＸａａは，Ｉｌｅ，Ａｌａ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置１０のＸａａは，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＬｅｕであり， 位置１１のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，ＧｌｎまたはＡｌａであり， 位置１２のＸａａは，ＨｉｓまたはＡｌａであり， 位置１５のＸａａは，Ｇｌｎ，ＡｓｎまたはＶａｌであり， 位置１６のＸａａは，Ｐｒｏ，ＧｌｙまたはＧｌｎであり， 位置１７のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，ＧｌｙまたはＧｌｎであり， 位置１８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａまた はＧｌｕであり， 位置１９のＸａａは，ＰｒｏまたはＧｌｕであり， 位置２０におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ａｌａ ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＴｈｒまたはＭｅｔであり， 位置２１のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＧｌｎまたはＶａｌ であり， 位置２３のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，ＰｒｏまたはＴｒｐであり， 位置２４のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置２８におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置３０のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置３１におけるＸａａはＧｌｎ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置３２におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，ＶａｌまたはＣｙｓであ り， 位置３６のＸａａは，Ｇｌｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＡｓｐであり， 位置３７のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置４０のＸａａは，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置４１のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置４２におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ａｒｇ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＬｙｓであり， 位置４６のＸａａは，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置４８のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＴｈｒまたはＩｌｅであり， 位置４９のＸａａは，ＡｒｇまたはＬｙｓであり， 位置５０のＸａａは，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置５１のＸａａは，ＶａｌまたはＴｈｒであり， 位置５２のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置５３のＸａａは，Ｓｅｒ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置５４のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置５５におけるＸａａはＧｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ ，またはＧｌｙであり， 位置５７のＸａａは，Ａｌａ，ＰｒｏまたはＡｒｇであり， 位置５８のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，ＡｒｇまたはＡｓｐであり， 位置５９のＸａａは，ＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置６２のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏまた はＧｌｙであり， 位置６３のＸａａは，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置６５におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ ，Ｉｌｅ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置６６のＸａａは，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置６８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｔｙｒ またはＶａｌであり， 位置６９のＸａａは，ＰｒｏまたはＴｈｒであり， 位置７１のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置７３のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置７４のＸａａは，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置７７のＸａａは，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置７９のＸａａは，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｌｅｕまた はＡｒｇであり， 位置８１におけるＸａａはＨｉｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ ，Ａｓｎ，Ｐｈｅ，ＳｅｒまたはＴｈｒであり， 位置８２のＸａａは，ＰｒｏまたはＴｙｒであり， 位置８３のＸａａは，ＩｌｅまたはＶａｌであり， 位置８４におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｔｈｒ ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ またはＰｒｏであり， 位置８５のＸａａは，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置８６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ，Ｇｌｎ，ＰｒｏまたはＳｅｒ であり， 位置８７におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒであり， 位置９０のＸａａは，ＴｒｐまたはＬｅｕであり， 位置９１におけるＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ，Ｇｌｎ ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置９２のＸａａは，ＧｌｕまたはＧｌｙであり， 位置９４のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置９５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置９８のＸａａは，Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＧｌｎであり， 位置１００のＸａａは，ＴｙｒまたはＴｒｐであり， 位置１０１のＸａａは，ＬｅｕまたはＡｌａであり， 位置１０２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ａｌａ， Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，ＴｙｒまたはＩｌｅであり， 位置１０３のＸａａは，ＴｈｒまたはＳｅｒであり， 位置１０６のＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，ＶａｌまたはＧｌｎ であり， 位置１０７のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｓｐま たはＧｌｙであり， 位置１０８のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｐｈｅ， Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，ＴｙｒまたはＣｙｓであり， 位置１０９のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ， ＴｙｒまたはＬｅｕであり， また，さらに位置１のアミノ酸に先行するＭｅｔ−またはＭｅｔ−Ａｌａ−を もっていてもよく；Ｘａａで示されている４〜３５個のアミノ酸はネイティブな （１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当アミノ酸とは異なる］の（１５ −１２５）ヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチドが包含される． 本発明は，式VIII ［式中， 位置３のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，ＡｓｐまたはＧｌｎであり， 位置４のＸａａは，Ａｓｎ，ＨｉｓまたはＩｌｅであり， 位置９のＸａａは，Ｉｌｅ，Ａｌａ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置１１のＸａａは，Ｔｈｒ，ＨｉｓまたはＧｌｎであり， 位置１２のＸａａは，ＨｉｓまたはＡｌａであり， 位置１５のＸａａは，ＧｌｎまたはＡｓｎであり， 位置１６のＸａａは，ＰｒｏまたはＧｌｙであり， 位置１８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置２０におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ ，Ｇｌｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＴｈｒまたはＭｅｔであり， 位置２１のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，ＡｓｎまたはＰｒｏであり， 位置２４のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置２８におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置３１におけるＸａａはＧｌｎ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，ＧｌｕまたはＬｙｓであり， 位置３２におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ ，Ｈｉｓ，ＶａｌまたはＴｈｒであり， 位置３６のＸａａは，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＡｓｐであり， 位置３７のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置４１のＸａａは，Ａｒｇ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置４２におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｖａｌ ， ＬｅｕまたはＧｌｎであり， 位置４８のＸａａは，Ａｓｎ，ＰｒｏまたはＴｈｒであり， 位置５０のＸａａは，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置５１のＸａａは，ＶａｌまたはＴｈｒであり， 位置５３のＸａａは，ＳｅｒまたはＰｈｅであり， 位置５４のＸａａは，ＬｅｕまたはＰｈｅであり， 位置５５のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｌａ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置６２のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，ＰｒｏまたはＧｌｙであり， 位置６３のＸａａは，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置６５のＸａａは，Ｌｙｓ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ，ＩｌｅまたはＧｌｙ であり， 位置６６のＸａａは，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置６８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ａｓｎ ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，ＴｙｒまたはＶａｌであ り， 位置７３のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置７４のＸａａは，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置７７のＸａａは，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置７９のＸａａは，Ｔｈｒ，ＡｓｐまたはＡｌａであり， 位置８１におけるＸａａはＨｉｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ ，ＳｅｒまたはＴｈｒであり， 位置８４におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ａｒｇ ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，ＶａｌまたはＬｅｕであ り， 位置８５のＸａａは，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置８６のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置８７におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｐｒｏ ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒであり， 位置９１のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，ＩｌｅまたはＡｓｐであり， 位置９４のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置９５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置９８のＸａａは，ＴｈｒまたはＧｌｎであり， 位置１０２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｖａｌ，ＴｒｐまたはＩｌｅであり， 位置１０３のＸａａはＴｈｒ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，ＴｙｒまたはＳｅｒ であり， 位置１０６のＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，ＶａｌまたはＧｌｎ であり， 位置１０７のＸａａはＡｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＡｓｐであり， 位置１０８のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ｐｈｅ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ， ＩｌｅまたはＴｙｒであり， 位置１０９のＸａａはＡｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，ＳｅｒまたはＬｅｕであり， また，さらに位置１のアミノ酸に先行するＭｅｔ−またはＭｅｔ−Ａｌａ−を もっていてもよく；Ｘａａによって示されている４〜２６個のアミノ酸はネイテ ィブ（１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる］ の（１５−１２５）ヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチド，または実 質的に同一構造および実質的に同一生物活性を有するポリペプチドが包含される ． 本発明は，式 （式中， ｍは０または１であり， 位置１８のＸａａは，ＡｓｎまたはＩｌｅであり， 位置１９のＸａａは，Ｍｅｔ，ＡｌａまたはＩｌｅであり， 位置２０のＸａａは，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＩｌｅであり， 位置２３のＸａａは，Ｉｌｅ，ＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置２５のＸａａは，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置２９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，ＶａｌまたはＩｌｅであり， 位置３２のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，ＡｓｎまたはＡｒｇであり， 位置３４のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置３７のＸａａは，Ｐｈｅ，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置３８のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置４２のＸａａは，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＡｓｐまたはＡｓｎであり， 位置４５のＸａａは，Ｇｌｎ，ＶａｌまたはＭｅｔであり， 位置４６のＸａａは，ＡｓｐまたはＳｅｒであり， 位置４９のＸａａは，Ｍｅｔ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＡｓｐであり， 位置５０のＸａａは，ＧｌｕまたはＡｓｐであり， 位置５１のＸａａは，Ａｓｎ，ＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置５５のＸａａは，Ａｒｇ，ＬｅｕまたはＴｈｒであり， 位置５６のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置５９のＸａａは，ＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置６０のＸａａは，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置６２のＸａａは，Ａｓｎ，ＶａｌまたはＰｒｏであり， 位置６３のＸａａは，ＡｒｇまたはＨｉｓであり， 位置６５のＸａａは，ＶａｌまたはＳｅｒであり， 位置６７のＸａａは，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，ＨｉｓまたはＧｌｎであり， 位置６９のＸａａは，ＧｌｎまたはＧｌｕであり， 位置７３のＸａａは，ＡｌａまたはＧｌｙであり， 位置７６のＸａａは，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置７９のＸａａは，Ｌｙｓ，ＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置８２のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置８５のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置８７のＸａａは，Ｌｅｕ，ＳｅｒまたはＴｙｒであり， 位置８８のＸａａは，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置９１のＸａａは，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置９３のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置９５のＸａａは，ＨｉｓまたはＴｈｒであり， 位置９８のＸａａは，Ｈｉｓ，ＩｌｅまたはＴｈｒであり， 位置１００のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置１０１のＸａａは，Ａｓｐ，ＡｌａまたはＭｅｔであり， 位置１０５のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｕであり， 位置１０９のＸａａは，Ａｒｇ，ＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置１１２のＸａａは，ＴｈｒまたはＧｌｎであり， 位置１１６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｖａｌ，ＴｒｐまたはＳｅｒであり， 位置１１７のＸａａは，ＴｈｒまたはＳｅｒであり， 位置１２０のＸａａは，Ａｓｎ，ＧｌｎまたはＨｉｓであり， 位置１２３のＸａａは，ＡｌａまたはＧｌｕである． ただしＸａａで示されている４個〜２６個のアミノ酸はネイティブなヒトイン ターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる）のポリペプチドまたは実質的 に同一の構造および実質的に同一の生物活性を有するポリペプチドを包含する． 本発明の好ましいポリペプチドは，式 ［式中， ｍは０または１であり， ｎは０または１であり， ｐは０または１であり， 位置４のＸａａは，ＡｓｎまたはＩｌｅであり， 位置５のＸａａは，Ｍｅｔ，ＡｌａまたはＩｌｅであり， 位置６のＸａａは，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＬｅｕであり， 位置９のＸａａは，Ｉｌｅ，ＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置１１のＸａａは，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置１５のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，ＶａｌまたはＩｌｅであり， 位置１８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，ＡｓｎまたはＡｒｇであり， 位置２０のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置２３のＸａａは，Ｐｈｅ，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置２４のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置２８のＸａａは，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＡｓｐまたはＡｓｎであり， 位置３１のＸａａは，Ｇｌｎ，ＶａｌまたはＭｅｔであり， 位置３２のＸａａは，ＡｓｐまたはＳｅｒであり， 位置３５のＸａａは，Ｍｅｔ，ＩｌｅまたはＡｓｐであり， 位置３６のＸａａは，ＧｌｕまたはＡｓｐであり， 位置３７のＸａａは，Ａｓｎ，ＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置４１のＸａａは，Ａｒｇ，ＬｅｕまたはＴｈｒであり， 位置４２のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置４５のＸａａは，ＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置４６のＸａａは，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置４８のＸａａは，Ａｓｎ，ＶａｌまたはＰｒｏであり， 位置４９のＸａａは，ＡｒｇまたはＨｉｓであり， 位置５１のＸａａは，ＶａｌまたはＳｅｒであり， 位置５３のＸａａは，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，ＨｉｓまたはＧｌｎであり， 位置５５のＸａａは，ＧｌｎまたはＧｌｕであり， 位置５９のＸａａは，ＡｌａまたはＧｌｙであり， 位置６２のＸａａは，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置６５のＸａａは，Ｌｙｓ，ＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置６７のＸａａは，Ｌｅｕ，ＧｌｕまたはＶａｌであり， 位置６８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置７１のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置７３のＸａａは，Ｌｅｕ，ＳｅｒまたはＴｙｒであり， 位置７４のＸａａは，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置７７のＸａａは，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置７９のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置８１のＸａａは，ＨｉｓまたはＴｈｒであり， 位置８４のＸａａは，Ｈｉｓ，ＩｌｅまたはＴｈｒであり， 位置８６のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置８７のＸａａは，Ａｓｐ，ＡｌａまたはＭｅｔであり， 位置９１のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｕであり， 位置９５のＸａａは，Ａｒｇ，ＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置９８のＸａａは，ＴｈｒまたはＧｌｎであり， 位置１０２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｖａｌ，ＴｒｐまたはＳｅｒであり， 位置１０３のＸａａは，ＴｈｒまたはＳｅｒであり， 位置１０６のＸａａは，Ａｓｎ，ＧｌｎまたはＨｉｓであり， 位置１０９のＸａａは，ＡｌａまたはＧｌｕである． ただし，Ｘａａで示されている４〜２６個のアミノ酸はネイティブな（１５− １２５）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる］のポリペプ チド，または実質的に同一の構造および実質的に同一の生物活性を有するポリペ プチドである． 「突然変異アミノ酸配列」，「突然変異タンパク質」または「突然変異ポリペ プチド」の語は，ネイティブな配列から変異したアミノ酸配列またはネイティブ な配列から意図的に変異させたヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸 配列を有するポリペプチド意味する．「突然変異タンパク質」，「変異タンパク 質」または「ムティン」の語は，突然変異アミノ酸配列からなるタンパク質を意 味し，アミノ酸欠失，置換またはその両者によりネイティブなｈＩＬ−３のアミ ノ酸配列とは異なるポリペプチドを包含する．「ネイティブ配列」の語は，野生 型または天然型の遺伝子またはタンパク質と同一のアミノ酸配列または核酸配列 を意味する． ヒトＩＬ−３は，ヒト造血前駆細胞によるコロニー形成を刺激するその能力に よって特徴づけられる．形成されるコロニーは，赤血球，顆粒球，巨核球，顆粒 球マクロファージおよびそれらの混合物が包含される．ヒトＩＬ−３には最初は 霊長類でついでヒトで行われた研究において，骨髄機能おおび末梢血液細胞集団 を治療的に有益なレベルまで回復させる能力が証明されている［Ｇａｌｌｉｏ， Ａ．Ｐ．ら（１９９０）；Ｇａｎｓｅｒ，Ａ．ら（１９９０）；およびＦａｌｋ ，Ｓ．ら（１９９１）］．ｈＩＬ−３のその他の活性には，白血球遊走および走 化 性を刺激する能力；ヒト白血球に高レベルの炎症メディエーターたとえばロイコ トリエンおよびヒスタミンの産生を開始させる能力；白血球の接着に必要な分子 の細胞表面における発現を誘導する能力；ならびに皮膚炎症反応および発熱を誘 発する能力がある．ｈＩＬ−３のこれらの生物活性の多くまたはすべてに，シグ ナル伝達および高親和性受容体結合が関与している．本発明の突然変異ポリペプ チドは，ネイティブなｈＩＬ−３と比較して同様のもしくはより強力な生物活性 を有するか，半減期の改善もしくは有害副作用の低減またはこれらの両者のよう な有用な性質を表す場合がある．それらはまた，アンタゴニストとして有用な場 合がある．ネイティブなｈＩＬ−３と比較した場合極めて低い活性しか示さない かまたは全く活性をもたないｈＩＬ−３突然変異ポリペプチドでも，アンタゴニ ストとして，免疫学または免疫療法に使用するための抗体産生用の抗原として， または他の有用なｈＩＬ−３ムテインの構築に用いられる中間体として有用な場 合がある．ｈＩＬ−３はその受容体に結合し，セカンドメッセンジャーを起動し て適格ナシグナル伝達を生じることによって機能するので，本発明のｈＩＬ−３ ムテインは，どの特定のアミノ酸配列がこれらの活性に関与するかの決定の補助 に有用な場合もある． 本発明の新規なｈＩＬ−３突然変異ポリペプチドは好ましくは，ヒトＩＬ−３ もしくはＩＬ−３様成長因子の少なくとも１つの生物学的性質を有し，また２以 上のＩＩ−３様生物学的性質，または改良された性質，もしくはヒトＩＬ−３の 望ましくない生物学的性質の減弱を示してもよい．本発明の一部の突然変異ポリ ペプチドはまた，改善された副作用プロファイルを示すこともある．たとえば， ネイティブなｈＩＬ−３または（１５−１２５）ｈＩＬ−３に比較して，ロイコ トリエンの放出またはヒスタミンの放出の低下を示す場合がある．このようなｈ ＩＬ−３またはｈＩＬ−３様の生物学的性質には，以下に挙げる１または２以上 の生物学的特性ならびにインビボおよびインビトロ活性が包含される． このような性質の１つは，赤血球，リンパ球および骨髄系統担当の前駆細胞の 憎殖および分化の支持である．たとえば，標準的ヒト骨髄アッセイにおいては， ＩＬ−３様の生物学的性質は顆粒球型コロニー，巨核球型コロニー，単球／マク ロファージ型コロニー，および赤芽球コロニー群の刺激である．他のＩＬ−３様 の性質には，初期多能性幹細胞との相互作用，多潜能力前駆細胞の増殖の支持， 慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞増殖の刺激能，肥満細胞の増殖刺激，様々な因 子依存性細胞系の増殖の支持能，および未成熟骨髄細胞前駆細胞を誘発する能力 がある．本技術分野においてはＩＬ−３の他の生物学的性質も開示されてきた． ヒトＩＬ−３にはまた，場合によっては望ましくない生物学的性質，たとえばロ イコトリエン放出の刺激能，脾臓および培養骨髄ならびにインビボにおけるヒス タミン合成の刺激能がある． ｈＩＬ−３および本発明のｈＩＬ−３突然変異体タンパク質の生物学的活性は ヒト急性骨髄性白血病細胞（ＡＭＬ）によるＤＮＡ合成によって測定される．因 子依存性細胞系ＡＭＬ１９３は生物活性の試験用に適合された． 本発明の一つの目的は，ポリペプチド配列に４個以上のアミノ酸置換を有し， ネイティブなｈＩＬ−３またはネイティブな（１５−１２５）ｈＩＬ−３と同様 のまたはその改良された生物活性を有するｈＩＬ−３ムテインおよびｈＩＬ−３ 欠失ムテインを提供することにある． 本発明は，最小限ｈＩＬ−３のアミノ酸残基１５〜１１８からなりＮ−末端お よび／またはＣ−末端がさらに付加的なアミノ酸で延長されていてもよく，さら にポリペプチドのアミノ酸配列中に４個以上のアミノ酸置換を含有する突然変異 ポリペプチドを包含する．（１５−１２５）ｈＩＬ−３突然変異体は，大腸菌の 細胞質中で発現された場合，ｈＩＬ−３よりも溶解性が高く，このタンパク質は 大腸菌の周辺質にネイティブなｈＩＬ−３に比較して高レベルに分泌されること が見出されている． 大腸菌の細胞質内で発現された場合には，本発明の上述の突然変異ｈＩＬ−３ ポリペプチドは，発現時にＭｅｔが切断されてＮ−末端にＡｌａを残すために， Ｎ−末端がＭｅｔ−Ａｌａ−で構成されている場合もある．これらの突然変異ｈ ＩＬ−３ポリペプチドは大腸菌内でＮ−末端にシグナルペプチドを融合して発現 されることもある．このシグナルペプチドは分泌過程の一部としてポリペプチド から切断される．大腸菌における分泌は，シグナルペプチダーゼの精密な性質に より，Ｎ−末端が正しいアミノ酸［たとえば（１５−１２５）ｈＩＬ−３ポリペ プチドにおけるＡｓｎ15］を得るために使用することができる．これは大腸菌の 細胞質内で発現したタンパク質のＮ−末端にしばしば認められる不均一性と対照 的である． 本発明のｈＩＬ−３突然変異ポリペプチドはｈＩＬ−３活性またはｈＩＬ−３ 様活性を有する場合がある．たとえば，それらは，ネイティブなｈＩＬ−３の１ または２以上の生物活性を有し，ヒトまたは霊長類前駆細胞による造血細胞の産 生の刺激に有用な場合がある．本発明のｈＩＬ−３ムテインおよびそれらを含有 する医薬組成物は，造血細胞集団が疾患または放射線もしくは化学療法のような 処置によって減少または破壊された状態の処置に有用である． 本発明のｈＩＬ−３ムテインはまた，ｈＩＬ−３受容体に特異的に結合してア ゴニストの結合を阻止することにより，ｈＩＬ−３受容体を遮断するアンタゴニ ストとして有用な場合がある． 本発明の（１５−１２５）ｈＩＬ−３ムテイン，とくにネイティブなｈＩＬ− ３の場合と同様のまたはそれより優れた活性を維持しているムテインの一つの利 点の可能性は，所望の治療効果を達成するためにより少量の生物活性ムテインの 使用が可能になることである．これは所望の治療効果を得るために必要な処置回 数を減らすことを可能にする．より少量の使用はまた，あり得る抗原作用や他の 考えられる望ましくない副作用の可能性を低下させることができる．たとえば， より少量のポリペプチドによって所望の治療効果が達成できるならば，ネイティ ブなＩＬ−３の投与に伴う副作用たとえばロイコトリエンおよび／またはヒスタ ミン放出の刺激を低下または消失させることが可能になる．本発明のｈＩＬ−３ ムテインはまた，受容体数の少ない幹細胞や前駆細胞の活性化に有用な場合があ る．本発明の（１５−１２５）ｈＩＬ−３ムテインを含有する医薬組成物は，非 経口的に，静脈内または皮下に投与することができる． 本発明は他の態様として，ヒトＩＬ−３ムテインの新規なファミリーを製造す るための新規な方法を提供する．本発明の方法は，新規なｈＩＬ−３突然変異ポ リペプチドの発現のためのＤＮＡ配列コードを含有するベクターで形質転換され ている適当な細胞または細胞系の培養を包含する．適当な細胞または細胞系は細 菌細胞である．たとえば，バイオテクノロジーの分野においては，大腸菌の様々 な株が宿主細胞としてよく知られている．このような株の例としては，大腸菌株 ＪＭ１０１［Ｙａｎｉｓｈ−Ｐｅｒｒｏｎら（１９８５）］ならびにＭＯ１０５ ［Ｏｂｕｋｏｗｉｃｚら（１９９２）］がある．枯草菌の様々な株もこの方法に 使用することができる．本技術分野の熟練者に知られている多くの酵母株の細胞 も本発明のポリペプチドの発現に宿主細胞として利用できる． たとえばチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）のような哺乳類細胞も本 発明における使用に適している．哺乳類細胞における異種遺伝子の発現の一般的 な方法は，Ｋａｕｆｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（１９８７）：Ｈｉｇｈ ｌｅｖｅｌ ｐｒ ｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌ ｓ．ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａ ｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ，９巻，Ｊ．Ｋ．Ｓｅｔｌｏｗ編，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓ ｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに総説がある．発現ベクターは哺乳類細胞中で機能できる 強力なプロモーターが真核細胞分泌シグナルペプチドのコード領域の転写を駆動 し，それがｈＩＬ−３変異体のコード領域に翻訳可能に融合するように構築され る．たとえば，ｐｃＤＮＡ Ｉ／Ｎｅｏ，ｐＲｃ／ＲＳＶ，ならびにｐＲｃ／Ｃ ＭＶのようなプラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ.，Ｓａｎ Ｄｉｅｇ ｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから入手）が使用できる．真核性分泌シグナルペプチ ドのコード領域は，ｈＩＬ−３遺伝子自体からのものでも，また他の分泌される 哺乳類タンパク質からのものであってもよい［Ｂａｙｎｅ，Ｍ．Ｌ．ら（１９８ ７）：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，２６３８−２６ ４２］．ｈＩＬ−３変異遺伝子を含有するベクターの構築後，ベクターＤＮＡを 哺乳類細胞中にトランスフェクトする．このような細胞は，たとえばＣＯＳ７， ＨｅＬａ，ＢＨＫ，ＣＨＯ，またはマウスＬ細胞系とすることができる．細胞は たとえば，ＤＭＥＭ培地（ＪＲＨ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で培養することが できる．培地中に分泌されるｈＩＬ−３変異体は，細胞のトランスフェクション 後の２４〜７２時間の一時的発現に続き，またはネオマイシン抵抗性での選択に より安定な細胞系を確立した後，標準的生化学アプローチによって回収すること ができる適当な哺乳類宿主細胞の選択ならびに形質転換，培養，増幅，スクリー ニングおよび生成物の産生，精製の方法は，本技術分野においてよく知られてい る．たとえば，Ｇｅｔｈｉｎｇ ＆ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｎａｔｕｒｅ，２９３： ６２０− ６２５（１９８１），またはＫａｕｆｍａｎら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ. ，５（７）：１７５０−１７５９（１９８５）もしくはＨｏｗｌｅｙら，米国特 許第４，４１９，４４６号を参照されたい．他の適当な哺乳類細胞系はサルＣＯ Ｓ−１細胞系である．同様に有用な哺乳類細胞系はＣＶ−１細胞系である． 所望により本発明の方法における宿主細胞として昆虫細胞を使用することがで きる．たとえば，Ｍｉｌｌｅｒら，Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，８ ：２７７−２９８（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）およびそれに引用 された参考文献を参照されたい．さらにバキュロウイルスベクターを用いる昆虫 細胞中での異種遺伝子の発現に関する一般的方法がＳｕｍｍｅｒｓ，Ｍ．Ｄ．＆ Ｓｍｉｔｈ，Ｇ．Ｅ．（１９８７）Ａｍａｎｕａｌ ｏｆ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏ ｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｉｎｓｅｃｔ ｃｅｌｌ ｃ ｕｌｔｕｒｅ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ，Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ．１５５５に記 載されている．発現ベクターは，強力なバキュロウイルスプロモーター（たとえ ばポリヘドロンプロモーター）が真核性分泌シグナルペプチドのコード領域の転 写を駆動しそれがｈＩＬ−３変異ポリペプチドのコード領域に翻訳可能に融合す るバキュロウイルストランスファーベクターからなるように構築される．たとえ ばプラスミドｐＶＬ１３９２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ.，Ｓａｎ Ｄｉ ｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから入手）が使用できる．ｈＩＬ−３変異体遺伝 子を有するベクターの構築後に，このＤＮＡの２μｇを１μｇのバキュロウイル スＤＮＡとともに，昆虫細胞，株ＳＦ９中にコトランスフェクトする（Ｓｕｍｍ ｅｒｓ ＆ Ｓｍｉｔｈ，１９８７）．ｈＩＬ−３変異体を含有する純粋な組換え バキュロウイルスを，たとえばＥｘｃｅｌｌ ４０１無血清培地（ＪＲＨ Ｂｉｏ ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｅｎｅｘａ，Ｋａｎｓａｓ）中で培養した細胞への感染に 使用する．培地中に分泌されるｈＩＬ−３変異体は標準的な生化学アプローチに よって回収される． 本発明の他の態様では，これらの新規なｈＩＬ−３ムテインの発現方法に使用 するプラスミドＤＮＡベクターが提供される．これらのベクターは，本発明の新 規なポリペプチドをコードする上述の新規なＤＮＡ配列を含有する．ｈＩＬ−３ ムテインを発現可能な微生物に形質転換することができる適当なベクターには， ｈＩＬ−３ムテインをコードするヌクレオチド配列を，用いられる宿主細胞に応 じて選択された転写調節配列および翻訳調節配列に連結してなる発現ベクターが 包含される． 上述のような修飾配列を導入するベクターは本発明に包含され，ｈＩＬ−３変 異ポリペプチドの製造に有用である．この方法に用いられるベクターはまた，本 発明のＤＮＡコード配列と機能的に関連し，選択された宿主細胞中でのそれらの 複製および発現を指示できる選ばれた調節配列を含有する． その他の詳細は同時に出願された代理人事件番号２７１３／１の米国特許出願 に記載されている．この特許出願の全記載を参考として本明細書に導入する． 本明細書に引用されたすべての参考文献，特許または出願はその全記載が参考 として導入されるものである． 本発明はまた，正しくフォールディングされた活性なポリペプチドの蓄積に至 適化された分泌ベクター中の４個以上のアミノ酸置換を有する（１５−１２５） ヒトインターロイキン−３ムテインの構築および発現を包含する．多くの異種タ ンパク質が大腸菌内で分泌されてはきたが，依然として予測不可能性は大きく， 成功は限られている（Ｓｔａｄｅｒ ＆ Ｓｉｌｈａｖｙ，１９９０）．完全長の ｈＩＬ−３は，大腸菌内でタンパク質を分泌させる試みでは低分泌レベルしか生 じなかったタンパク質である．本発明の変異（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異ポ リペプチドの，ＬａｍＢのようなシグナルペプチドとの融合体としての分泌は， 浸透圧ショック分画により，大腸菌の周辺質から分離可能な正しくフォールディ ングされたタンパク質を生じる．変異（１５−１２５）ｈＩＬ−３ムテインのこ の性質は，粗製の浸透圧ショック分画中の分泌物質の生物活性の直接および迅速 なスクリーニングを可能し，これは重要な利点である．さらにそれはｈＩＬ−３ 分子の構造活性相関（ＳＡＲ）研究を実施するために（１５−１２５）ｈＩＬ− ３ムテインを用いる手段を提供するものである．ＬａｍＢシグナルペプチドに融 合した（１５−１２５）ｈＩＬ−３ムテインの分泌の更なる利点は，分泌過程の 一部としてのシグナルペプチダーゼによるシグナルペプチドの切断の精密な性質 により，分泌されるポリペプチドは正しいＮ−末端アミノ酸（Ａｓｎ）をもつこ とである． 本発明の（１５−１２５）ｈＩＬ−３ムテインにはそのＮ−末端にＭｅｔ−， Ａｌａ−またはＭｅｔ−Ａｌａ−が結合しているｈＩＬ−３ポリペプチドを包含 する．このムテインが大腸菌の細胞質内で発現された場合には，そのＮ−末端に Ｍｅｔが結合しているポリペプチドと結合していないポリペプチドが得られる． メチオニンは，場合によりメチオニンアミノペプチダーゼによって除去される． 大腸菌内で作成されたｈＩＬ−３ムテインのアミノ末端の配列は，Ｈｕｎｋａ ｐｉｌｌａｒら（１９８３）によって記載された方法を用いて決定された．大腸 菌内でＭｅｔ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３をコードする遺伝子から製造された ｈＩＬ−３タンパク質はＭｅｔ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３として単離される ことが明らかにされた．Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３をコード する遺伝子から製造されたタンパク質はＡｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３と して産生された．大腸菌の細胞質内で作成されたタンパク質のＮ−末端は，メチ オニンアミノペプチダーゼ（Ｂｅｎ−Ｂａｓｓａｔら，１９８７）および多分， 他のペプチダーゼによる翻訳後プロセッシングによって影響される． 好ましいｈＩＬ−３（１５−１２５）変異遺伝子を創製する一つの方法にカセ ット突然変異誘発がある［Ｗｅｌｌｓら（１９８５）］．これはプラスミド中の ｈＩＬ−３のコード配列の一部分を，２つの制限部位の間の遺伝子部分における 所望のアミノ酸置換をコードする合成オリゴヌクレオチドによって置換する方法 である．同様にして，アミノ酸置換は，完全長ｈＩＬ−３遺伝子，またはＮ−末 端から１〜１４個のアミノ酸の欠失および／もしくはＣ−末端から１〜１５個の アミノ酸の欠失を有するｈＩＬ−３の変異体をコードする遺伝子中に行うことが できる．適正に組み立てれば，これらのオリゴヌクレオチドは，所望のアミノ酸 置換ならびに／またはＮ−末端および／もしくはＣ−末端からの欠失を有するｈ ＩＬ−３変異体をコードすることになる．これらのおよび他の突然変異は，本技 術分野の熟練者によれば，他の突然変異誘発法たとえばオリゴヌクレオチド特異 的突然変異［Ｚｏｌｌｅｒ ＆ Ｓｍｉｔｈ（１９８２，１９８３，１９８４）， Ｓｍｉｔｈ（１９８５），Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５），ならびにＴａｙｌｏｒら （１９８５），Ｄｅｎｇ ＆ Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ（１９９２）］，またはポリメ ラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）［Ｓａｉｋｉ（１９８５）］によって創製することが 可能であろう． ｈＩＬ−３遺伝子のアミノ末端の部分をコードする相補性の合成オリゴヌクレ オチドの対を作成して互いにアニーリングさせることができる．このような対は 一方の端にはＮｃｏＩとのリゲーションに適合する突出端をもたせる．ＮｃｏＩ 部位はイニシエーターのメチオニンのコドンを含有する．オリゴヌクレオチド対 の他の端には，突出（またはブラント）末端がｈＩＬ−３遺伝子のコード配列内 に存在する制限部位と適合させる．このオリゴヌクレオチドのＤＮＡ配列はその 配列の置換部分および欠失部分を除いてｈＩＬ−３のアミノ酸配列をコードする ことになる． ＮｃｏＩ酵素および他の選ばれた制限酵素は，選択されたプラスミドのＤＮＡ 内に認識部位が１個のみ存在するものでなければならない．プラスミドＤＮＡは 選ばれた制限エンドヌクレアーゼで処理し，ついでアニーリングされたオリゴヌ クレオチドにリゲートさせることができる．リゲートされた混合物は，コンピー テントなＪＭ１０１細胞を適当な抗生物質に抵抗性に形質転換するために使用で きる．単一のコロニーを採取して，プラスミドＤＮＡを制限解析および／または ＤＮＡ配列決定によって調べ，突然変異ｈＩＬ−３遺伝子をもつプラスミドを同 定することができる． ｈＩＬ−３遺伝子のコード配列内を切断する制限酵素の一例には，その認識部 位がコドン２０および２１に存在するＣｌａＩがある．ｈＩＬ−３の配列の切断 にＣｌａＩを使用するためには，プラスミドＤＮＡをＧＡＴＣ認識部位における ＤＮＡ中のアデニンをメチル化しない大腸菌株から単離する必要がある．これは ＣｌａＩの認識部位，ＡＴＣＧＡＴがｈＩＬ−３遺伝子中のコドン１９，２０お よび２１に存在する配列ＧＡＴＣＧＡＴ内に存在するからである．ＧＡＴＣ配列 中のＡは，大部分の大腸菌宿主細胞中ではメチル化される．このメチル化はその 特定の配列でのＣｌａＩの切断を防止する．アデニンをメチル化しない株の例に はＧＭ４８がある． ｈＩＬ−３（１５−１２５）中の単一アミノ酸突然変異体の活性の説明 表６および９に例示するように，ｈＩＬ−３（１５−１２５）分子中には置換 に不耐性の位置があり，これらの位置における大部分またはすべての置換が生物 活性の著しい低下を生じた．このような「下方突然変異」には２つのクラスが考 えられる．すなわち全体的なタンパク質構造に影響する突然変異，およびＩＬ− ３分子とその受容体の間の相互作用に直接干渉する突然変異である．タンパク質 の三次元構造に影響する突然変異は一般にタンパク質の内側にあり，一方，受容 体結合に影響する突然変異は一般的にタンパク質の表面に存在する．ＩＬ−３の 三次元構造は不明であるが，その構造の予測の助けになる単純なアルゴリズムが ある．このようなアルゴリズムの一つは「ヘリカルホイール」［Ｋａｉｓｅｒ， Ｅ．Ｔ． ＆ Ｋｅｚｄｙ，Ｆ．Ｔ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２３：２４９-２５５ （１９８４）］の使用である．この方法では，α−ヘリックスタンパク質構造の 存在がそれらの両親媒性によって予測される．球状タンパク質中のヘリックスは 共通して，露出した親水性サイドと埋め込まれた疎水性サイドを有する．一般的 な普遍化では，球状タンパク質においては，疎水性残基ハタンパク質の内部に存 在し，親水性残基はその表面上に存在する．このような「ヘリカルホイール」上 にタンパク質のアミノ酸配列を表示することによって，α−ヘリックス中のどの アミノ酸が露出し，どれがタンパク質のコア中に埋め込まれているかのモデルを 誘導することができる．ｈＩＬ−３（１５−１２５）分子のこのような解析から は，以下のヘリックス残基がコア中に埋め込まれることが予測される．すなわち Ｍ１９，１２０，１２３，１２４，Ｌ２７，Ｌ５８，Ｆ６１，Ａ６４，Ｌ６８， Ａ７１，１７４，１７７，Ｌ７８，Ｌ８１，Ｗ１０４，Ｆ１０７，Ｌ１１１，Ｙ １１４，Ｌ１１５，Ｌ１１８である． さらに，位置１６および８４におけるシステイン残基はジスルフィド結合によ って連結し，これがタンパク質の全体構造または「フォールデイング」に重要で ある．最後に，タンパク質構造の大きな崩壊を生じる突然変異は，本発明者らの 研究で用いられた分泌系では，様々な理由により低レベルでしか発現されない． すなわち，ミスフォールディングされたタンパク質は細胞の分泌機構によって貧 弱な認識しか受けない；タンパク質のミスフォールディングは凝集を生じ，その 結果タンパク質は細胞から容易には抽出できない；またはミスフォールディング されたタンパク質は細胞のプロテアーゼによる分解を受けやすい，からである． したがって，分泌の障害は，正しいタンパク質構造の維持にはＩＬ−３分子中の どの位置が重要かを指示する可能性がある． ＩＬ−３の変異体の活性を維持するためには，そのタンパク質の構造的統合性 の維持と受容体接触に重要な特異的残基の維持の両者が必要である．したがって 生物活性を保存するために保持されなけれならないｈＩＬ−３（１５−１２５） 中の特異的アミノ酸残基を決定することが可能である． 受容体との相互作用に重要と推測される残基には，Ｄ２１，Ｅ２２，Ｅ４３， Ｄ４４，Ｌ４８，Ｒ５４，Ｒ９４，Ｄ１０３，Ｋ１１０，Ｆ１１３がある． 構造的に重要と推測される残基はＣ１６，Ｌ５８，Ｆ６１，Ａ６４，Ｉ７４， Ｌ７８，Ｌ８１，Ｃ８４，Ｐ８６，Ｐ９２，Ｐ９６，Ｆ１０７，Ｌ１１１，Ｌ１ １５，Ｌ１１８である． 本発明のｈＩＬ−３ムテインは造血系の骨髄性，赤血球系，リンパ球系もしく は巨核球細胞のいずれかまたはそれらの組合せでのレベル低下によって特徴づけ られる疾患の処置に有用な可能性がある．さらに，それらは成熟骨髄性および／ またはリンパ性細胞の活性化に有用な可能性がある．本発明のポリペプチドでの 処置に感受性の状態には，白血病，末梢血液中の循環白血球数の低下がある．白 血病はある種のウイルスまたは放射線への暴露によって誘発されることがある． それは様々な型の癌治療たとえば化学療法剤への暴露の副作用，および感染また は出血によるものであることが多い．本発明のｈＩＬ−３変異ポリペプチドによ る白血病の治療は，現在用いられている薬剤での処置によって起こされる望まし くない副作用を回避できる可能性がある． 本発明のｈｌＬ−３ムテインは，好中球減少症の処置に，たとえば再生不良性 貧血，周期性好中球減少症，医原性好中球減少症，チェディアック−東症侯群， 全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ），白血病，骨髄異形成症侯群および骨髄線維 症のような状態の処置に有用な可能性がある． 多くの薬剤が骨髄抑制または造血欠損を引き起こすことがある．このような薬 剤の例には，化学療法に用いられるＡＺＴ，ＤＤＩ，アルキル化剤および代謝拮 抗剤，抗生物質たとえばクロラムフェニコール，ペニシリンおよびサルファ剤， フェノチアゾン，トランキライザーたとえばメプロバメートならびに利尿剤があ る．本発明のｈＩＬ−３ムテインはこれらの薬剤によって処置された患者に起こ ることが多い骨髄抑制または造血欠損の予防または処置に有用な可能性がある． 造血欠損はまた，ウイルス，微生物または寄生虫感染の結果として，さらに腎 疾患または腎不全の処置たとえば透析の結果として起こることがある．本発明の ｈＩＬ−３ムテインはこのような造血欠損の処置に有用な可能性がある． 造血欠損の処置には，ｈＩＬ−３ムテインを含有する医薬的組成物のｈＩＬ− ３ムテインの患者への投与が包含される．本発明のｈＩＬ−３ムテインはまた， 造血前駆細胞を，患者への注射に先立って本発明のムテインによってインビトロ で処理することによるこれらの細胞の活性化および増幅に有用な可能性もある． たとえばＴおよび／またはＢリンパ球における様々な免疫不全または免疫疾患 たとえば慢性関節リウマチも，本発明のｈＩＬ−３変異ポリペプチドでの処置に より有利に影響される可能性がある．免疫不全はウイルスたとえばＨＴＬＶＩ， ＨＴＬＶII，ＨＴＬＶIIIの感染，放射線への重度の被曝，癌化学療法または他 の薬剤処置の結果であってもよい．本発明のｈＩＬ−３変異ポリペプチドはまた ，単独でまたは他のヘマトポエチンと併用して，他の血液細胞欠損たとえば栓球 減少症（血小板減少症），または貧血の処置に使用できる．これらの新規なポリ ペプチドの他の用途には，骨髄移植から回復中の患者のインビボおよびエクスビ ボにおける処置，ならびに診断的または治療的使用のために標準方法によって製 造されるモノクローナルおよびポリクローナル抗体の産生がある． 本発明の他の態様は上述の状態の処置のための方法および治療組成物である． このような組成物は，本発明のｈＩＬ−３ムテインの１種または２種以上の治療 有効量を医薬的に許容される担体と混合して構成される．この組成物は非経口的 に，静脈内に，または皮下に投与できる．投与に際しては，本発明に用いられる 組成物はパイロジェンを含まない非経口的投与に許容されるタンパク質溶液の形 態とすることが好ましい．ｐＨ，等張性，安定性等について適切に考慮された非 経口的投与が可能なこのようなタンパク質溶液の製造は，本分野における技術の 範囲内にある． 上述の状態の処置方法に関しての投与量基準は，薬剤の作用を修飾する様々な 因子，たとえば患者の状態，体重，性別および食餌，感染があればその重篤度， 投与時間ならびに他の臨床的因子を考慮して，担当医によって決定されることに なる．一般的に，１日の投与量基準は体重１ｋｇあたり非グリコシル化ＩＬ−３ タンパク質，０．２〜１５０μｇ／ｋｇの範囲とすることができる．この投与量 は，ネイティブなＩＬ−３が本明細書に記載のＡＭＬ増殖アッセイにおいて一般 に１０ピコモルまたは約１０〜１００ピコモルのＥＣ50を有するとされている標 準レベルの生物活性を参考したものである．したがって，投与量は，与えられた ムテインの活性とネイティブな（対照）ＩＬ−３の活性の比によって調整され， 投与量基準を１日に体重１ｋｇあたり最低０．１μｇから最高１ｍｇと設定する ことは不適切ではないと考えられる．ほかにＩＬ−３ムテインの投与量が体重１ ｋｇあたり１０〜２００μｇの範囲よりも高くまたは低く調整される特殊な場合 がある．それには他のＣＳＦもしくは成長因子との共投与；化学療法剤および／ または放射線との共投与；グリコシル化ＩＬ−３ムテインの使用；ならびにこの 項において上述した各種の患者に関連する問題が包含される．上に指摘したよう に，治療方法および組成物には他のヒト因子との共投与が包含される．本発明の ポリペプチドと同時にまたは連続して共投与される他の適当なヘマトポエチン， ＣＳＦおよびインターロイキンとしては，それらに限定されるものではないが， ＧＭ−ＣＳＦ，ＣＳＦ−１，Ｇ−ＣＳＦ，Ｍｅｇ−ＣＳＦ，Ｍ−ＣＳＦ，エリス ロポエチン（ＥＰＯ），ＩＬ−１，ＩＬ−４，ＩＬ−２，ＩＬ−５，ＩＬ−６， ＩＬ−７，ＩＬ−８，ＩＬ−９，ＩＬ−１０，ＩＬ−１１，ＬＩＦ，Ｂ−細胞成 長因子，Ｂ−細胞分化因子，および好酸球分化因子，スチール因子もしくはｃ−ｋｉｔ リガンドとしても知られる幹細胞因子（ＳＣＦ），またはそれらの組合せ を挙げることができる．上述した投与量は，治療組成物中のこのような添加成分 を相殺して調整されることになる．処置患者の経過は血液学的プロファイルたと えば血球分類等の定期的な評価によってモニタリングできる． 大腸菌内でのｈＩＬ−３ムテインの発現のための材料および方法 とくに指示のない限り，すべての特殊試薬はＳｉｇｍａ社（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ ，ＭＯ）から入手した．制限エンドヌクレアーゼ，Ｔ４ポリヌクレオチドキナー ゼ，大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＩ大フラグメント（クレノウ）およびＴ４’ＤＮ ＡリガーゼはＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａｓ ｓａ ｃｈｕｓｅｔｔｓ）から入手した． 大腸菌株 ＪＭ１０１株：ｄｅｌｔａ（ｐｒｏ ｌａｃ），ｓｕｐＥ，ｔｈｉ，Ｆ’（ｔ ｒａＤ３６，ｒｐｏＡＢ，ｌａｃＩ−Ｑ，ｌａｃＺｄｅｌｔａＭ１５）（Ｍｅｓ ｓｉｎｇ，１９７９）．この株は，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），１２３０１ Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖ ｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ ２０８５２，受入番号３３８７６ 号から入手できる．ＭＯＮ１０５（Ｗ３１１０ ｒｐｏＨ３５８）はＷ３１１０ の派生菌（Ｂａｃｈｍａｎｎ，１９７２）であって，ＡＴＣＣ受入番号５５２０ ４号として寄託されている．ＧＭ４８株：ｄａｍ−３，ｄｃｍ−６，ｇａｌ，ａ ｒａ，ｌａｃ，ｔｈｒ，ｌｅｕ，ｔｏｎＡ，ｔｓｘ（Ｍａｒｉｎｕｓ，１９７３ ）が配列ＧＡＴＣでメチル化されないプラスミドＤＮＡの作製に使用された． 遺伝子およびプラスミド ｈＩＬ−３の大腸菌内での産生に用いられた遺伝子はＢｒｉｔｉｓｈ Ｂｉｏ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ．Ｅｎ ｇｌａｎｄ，型録番号ＢＢＧ１４から入手した．この遺伝子はｐＰ０５１８と命 名されているｐＵＣベースのプラスミドに保持されている． ｈＩＬ−３の大腸菌内での産生に用いられたプラスミドは，その使用が以前に 記載されている（Ｏｌｉｎｓら，１９８８；Ｏｌｉｎｓ ＆ Ｒａｎｇｗａｌａ， １９９０）遺伝子要素を含有する．使用されたレプリコンは細胞中に約１００の コピー数で維持される（Ｓｏｂｅｒｏｎら，１９８０）ｐＢＲ３２７（Ｃｏｖａ ｒｒｕｂｉａｓら，１９８１）のレプリコンである．β−ラクタマーゼタンパク 質をコードする遺伝子がこのプラスミド上に存在する．このタンパク質が細胞に アンピシリン抵抗性を付与する．この抵抗性は，細胞中におけるこのプラスミド の存在を示す選択可能な表現型として有効である． 細胞質内発現ベクター用には，転写プロモーターは大腸菌のｒｅｃＡ遺伝子か ら誘導された（Ｓａｎｇｅｒら，１９８０）．ｐｒｅｃＡと命名されているこの プロモーターは，ＲＮＡポリメラーゼ結合部位およびｌｅｘＡレプレッサー結合 部位（オペレーター）を包含する．このＤＮＡセグメントは，ｒｅｃＡプロモー ターがプラスミド上にある場合でもｐＢＲ３２７複製起源で調節される高レベル の転写を提供する（Ｏｌｉｎｓら，１９８８；参考として本明細書に導入）． 分泌発現プラスミドにおいては，転写プロモーターは大腸菌のａｒａ Ｂ．Ａ およびＤ遺伝子から誘導された（Ｇｒｅｅｎｆｌｅｌｄ，１９７８）．このプロ モーターはｐＡｒａＢＡＤと命名され，３２３塩基対のＳａｃII，ＢｇｌII制限 フラグメント上に含有される．ＬａｍＢ分泌リーダー（Ｗｏｎｇら，１９８８， Ｃｌｅｍｅｎｔら．１９８１）はｈＩＬ−３遺伝子のＮ−末端に，酵素ＮｃｏＩ の認識配列（５’ＣＣＡＴＧＧ３’）で融合された．用いられたｈＩＬ−３遺伝 子はその遺伝子のコード領域に続いてＨｉｎｄIII認識部位（５’ＡＡＧＣＴＴ ３’）をもつように操作した． これらのｈＩＬ−３変異体は，図８に示すＬａｍＢシグナルペプチドとの融合 体としてａｒａＢＡＤプロモーター（Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，１９７８）および ｇ１０−Ｌリボソーム結合部位（Ｏｌｉｎｓら，１９８８）と操作性に連結され て発現された．プロセッシングを受けた形態では，周辺質から浸透圧ショックに よって，正しくフォールディングされ完全に活性な分子として選択的に放出され た．（１５−１２５）ｈＩＬ−３の分泌は，低インデューサー（アラビノース） 濃度を用い，３０℃で増殖させることによって，さらに至適化された．これらの 条件によりプロセッシングされないＬａｍＢシグナルペプチド（１５−１２５） ｈＩＬ−３融合体の蓄積レベルの低下，プロセッシングされた（１５−１２５） ｈＩＬ−３の最大蓄積レベルおよび浸透圧ショック分画による（１５−１２５） ｈＩＬ−３の選択的放出が達成された．転写レベルしたがって発現レベルを修飾 できる厳密に調節されたプロモーターたとえばａｒａＢＡＤの使用は，（１５− １２５）ｈＩＬ−３の分泌の至適化を可能にした． 用いたリボソーム結合部位はファージＴ７の遺伝子１０からの結合部位である （Ｏｌｉｎｓら，１９８８）．これはｐｒｅｃＡに隣接して位置する１００塩基 対（ｂｐ）フラグメント中にコードされている．ここで使用されるプラスミドで は，酵素ＮｃｏＩの認識配列（ＣＣＡＴＧＧ）がｇ１０−Ｌに続く．ｈＩＬ−３ 遺伝子がプラスミドに連結されるのはこのＮｃｏＩ部位においてである．この接 合部におけるヌクレオチド配列が，ｍＲＮＡ中で翻訳の機能性開始部位として， 認識されることになるものと期待される（Ｏｌｉｎｓら，１９８８）用いられる ｈＩＬ−３遺伝子は，その遺伝子のコード配列の下流に，ＨｉｎｄIII認識部位 （ＡＡＧＣＴＴ）をもつように操作された．このＨｉｎｄIII部位に一本鎖ファ ージｆ１の複製起源を含有する５１４塩基対のＲｓａＩフラグメントが配置され る（Ｄｅｎｔｅら，１９８３；Ｏｌｉｎｓら，１９９０，いずれも参考として本 明細書に導入）．これらの要素を含むプラスミドがｐＭＯＮ２３４１である．こ れらの要素を含む他のプラスミドｐＭＯＮ５８４７はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐ ｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１２３０１ Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒ ｉｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ ２０８５２に受入番号ＡＴＣ Ｃ６８９１２号として寄託されている． オリゴヌクレオチドの合成 オリゴヌクレオチドはＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ３８０ Ａまたは３８０Ｂ型（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．Ｆｏｓ ｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ製）で合成した．オリゴヌクレオチド は０．５×トリスホウ酸塩緩衝液（０．０４５Ｍトリス．０．０４５Ｍホウ酸お よび１．２５ｍＭＥＤＴＡ）中１２〜２０％濃度（１９：１架橋）でのポリアク リルアミドゲル電気泳動，ついで，ＰＲＥＰ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｓａｍｐｌｅ Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ（ＤｕＰｏｎｔ，Ｃｏ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｄｅｌ ａｗａｒｅ）を使用して，Ｎｅｎｓｏｒｂカラム（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕ ｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓから入手）を通過させ ることにより精製した． 合成オリゴヌクレオチドの定量 合成オリゴヌクレオチドは，水に再懸濁し，１ｃｍ×１ｍｍの石英キューベッ トを使用して，Ｂｅｃｋｍａｎ ＤＵ４０ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ （Ｉｒｖｉｎｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）により２６０ｎｍにおける吸収を読み 取って定量した（Ｍａｎｉａｔｉｓ，１９８２）．濃度は吸光係数の１×１０4 を使用して決定した（Ｖｏｅｔら，１９６３，Ｍａｈｌｅｒ ＆ Ｃｏｒｄｅｓ， １９６６）．ついでオリゴヌクレオチドを所望の濃度に希釈した． 合成ＤＮＡフラグメントの定量もキナーゼ緩衝液（２５ｍＭトリスｐＨ８．０ ， １０ｍＭ ＭｇＣｌ2，１０ｍＭＤＴＴおよび２ｍＭスペルミジン）含有溶液に１ ０〜１００ピコモルのＤＮＡを添加することによって達成できる．反応混合物に ．ＡＴＰを２０マイクロモル濃度，γ−リン酸が放射標識された（５０００〜１ ０，０００ｄｐｍ／ｐｍｏｌ）ＡＴＰおよび５単位のＴ４ポリヌクレオチドキナ ーゼを加える．放射標識された試薬はＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ（ Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）から入手する．１０μｌの混合物 を３７℃で１時間インキュベートする．混合物のアリコート１μｌを０．３Ｍ炭 酸水素アンモニウム中ＤＥＡＥろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ）上クロマトグラフィーに 付した．原点に残ったカウントを用いて合成ＤＮＡの濃度を決定した． 組換えＤＮＡ法 大腸菌培養液からのプラスミドＤＮＡの単離は，既述（Ｂｉｒｎｂｏｉｍ ＆ Ｄｏｌｙ，１９７９）のようにして実施した．一部のＤＮＡは，Ｐｒｏｍｅｇａ （Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）から入手できるＭａｇｉｃTMカラムに よって精製した． 精製したプラスミドＤＮＡは製造業者の指示書に従って制限エンドヌクレアー ゼで処理した．制限酵素処理で生成したＤＮＡフラグメントの解析はアガロース またはポリアクリルアミドゲル電気泳動によって行った．アガロース（ＤＮＡ用 ，Ｆｉｓｈｅｒ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）は，トリス酢酸塩の流出用緩衝 液（０．０４Ｍトリス酢酸塩，０．００１Ｍ ＥＤＴＡ）中１．０％濃度で使用 した．ポリアクリルアミド（ＢｉｏＲａｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ）は０．５ ×トリス−ホウ酸塩緩衝液（０．０４５Ｍトリス，０．０４５Ｍホウ酸，および １．２５ｍＭＥＤＴＡ）中６％濃度（１９：１架橋）で用いた．以下ＰＡＧＥと いう． ＤＮＡポリメラーゼＩ，大フラグメント，クレノウ酵素は，製造業者の指示書 に従い，突出末端を残す制限酵素で処理されたＤＮＡフラグメントの５’から３ ’へのモノヌクレオチドの付加の触媒として使用した．反応混合物は６５℃で１ ０分間インキュベートしてクレノウ酵素を熱失活させた． 合成オリゴヌクレオチドは５’もしくは３’末端リン酸をもたない形で作製さ れた．このようなオリゴヌクレオチドを末端同士リゲートさせる場合には，オリ ゴヌクレオチドは，１０ピコモル／μｌの濃度で，以下の緩衝液：２５ｍＭトリ ス ｐＨ８．０，１０ｍＭ ＭｇＣｌ2，１０ｍＭジチオスレイトール，２ｍＭスペル ミジン，１ｍＭ ｒＡＴＰ中，Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼで処理した．３０ 分間３７℃でインキュベートしたのち，サンプルを６５℃で５分間インキュベー トしてキナーゼを熱失活させた． 合成遺伝子のアッセンブリー （１５−１２５）ｈＩＬ−３遺伝子は５個の好都合な制限部位によって分離さ れる４つの領域に分割された．４つの領域のそれぞれについて．合成オリゴヌク レオチドはそれらが突出した一本鎖末端で相補性対にアニーリングし，それらの 対が適正に組み合わされた場合にはｈＩＬ−３遺伝子の部分をコードするＤＮＡ 配列が生じるように設計された．ｈＩＬ−３遺伝子中のアミノ酸置換はオリゴヌ クレオチドが所望の置換をコードするように設計して作製された．相補性オリゴ ヌクレオチドは，リゲーション緩衝液プラス５０ｍＭ ＮａＣｌ中１ピコモル／ μｌの濃度でアニーリングさせた．サンプルは，沸騰水を含む１００ｍｌのビー カー中で加熱し，徐々に室温まで冷却させた．アニーリングしたオリゴヌクレオ チド対それぞれの１ピコモルを，適当な制限酵素で消化したプラスミドＤＮＡ約 ０．２ピコモルと，リゲーション緩衝液（２５ｍＭトリス，ｐＨ８．０，１０ｍ ＭＭｇＣｌ2，１０ｍＭジチオスレイトール，１ｍＭ ＡＴＰ，および２ｍＭスペ ルミジン）中，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａ ｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）から入手したＴ４ＤＮＡリガーゼを用いて，総容量２ ０μｌ，室温で一夜リゲートさせた． ＤＮＡフラグメントはＳｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ Ｓｃｈｕｅｌｌ（Ｋｅｅｎｅ ，Ｎｅｗ Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ）からのＤＥＡＥ膜に，製造業者の指示書に従っ て制限フラグメントを捕獲し，ついでＤＮＡを１０ｍＭトリス，１ｍＭ ＥＤＴ Ａ，１Ｍ ＮａＣｌ中５５℃で１時間溶出することによって，アガロースから単 離された．ＤＮＡフラグメントを含有する溶液は，Ａｍｉｃｏｎ（Ｗ．Ｒ．Ｇｒ ａｃｅ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）製のＣｅｎｔｒｉｃｏｎ３０濃縮装置を用い， 製造業者の指示書に従って濃縮し，脱塩した．リゲーションは１５℃で一夜，そ の他は上述のように，リゲーション緩衝液中で実施した． ポリメラーゼ連鎖反応 ポリメラーゼ連鎖反応（以下ＰＣＲという）法（Ｓａｉｋｉ，１９８５）には Ｐｅｒｋｉｎ-Ｅｌｍｅｒ Ｃｅｔｕｓ（Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ）製の試薬キット および熱サイクラーを使用した．ＰＣＲはＴｈｅｒｍｕｓ ａｑｕａｔｉｃｕｓ からの熱安定性ＤＮＡポリメラーゼに基づくものである．ＰＣＲ法は，ＤＮＡ分 子の数が各サイクル後に２倍になる天然のＤＮＡ複製過程を模倣した，インビボ における複製と同様の方法でのＤＮＡ増幅方法である．ＤＮＡポリメラーゼによ って媒介される延長は５’から３’の方向に行われる．この場合に用いられる「 プライマー」の語は，末端を提供するオリゴヌクレオチド配列を意味し，この末 端にＤＮＡポリメラーゼは，あるヌクレオチド配列に相補性のヌクレオチドを付 加ずることができる．このあるヌクレオチド配列が「鋳型」と呼ばれ，これにプ ライマーがアニーリングする．増幅されたＰＣＲ生成物は延長プライマーの５’ 末端の間からなる領域として同定される．プライマーは特定の配列を有するので ，生成物はプライマー配列に相当する不連続末端をもつことになる．プライマー 延長反応は各オリゴヌクレオチド２０ピコモル（ｐｍｏｌ）および１ｐｇの鋳型 プラスミドＤＮＡを用い，３５サイクル（１サイクルは，９４℃１分，５０℃２ 分および７２℃３分と定義される）行った．反応混合物を等容量のフェノール／ クロロホルム（５０％フェノールおよび５０％クロロホルム，容量比）で抽出し てタンパク質を除去した．増幅されたＤＮＡを含む水相および溶媒相を，微小遠 心分離機（５４１４型，Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）で５分間 遠心分離して分離した．増幅されたＤＮＡを沈殿させるために水相を分離し，新 たな試験管に移し，これに１／１０容の３Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．２）およ び２．５容のエタノール（１００％，−２０℃に保存）を加えた．溶液を混合し ，ドライアイス上に２０分間置いた．ＤＮＡを微小遠心分離機で１０分間遠心分 離してペレットとし，溶液をペレットから除去した．ＤＮＡペレットを７０％エ タノールで洗浄し，エタノールを除去し，ついで高速真空濃縮機（Ｓａｖａｎｔ ，Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）で乾燥した．ペレットを２５μ ｌのＴＥ（２０ｍＭトリス塩酸塩ｐＨ７．９，１ｍＭ ＥＤＴＡ）中に再懸濁し た．別法として，ＤＮＡは等容量の４Ｍ酢酸アンモニウムと１容量のイソプロパ ノールを添加して沈殿させた（Ｔｒｅｃｏら，１９８８）．溶液を混合し室温で １０ 分間インキュベートし，遠心分離した．これらの条件は，約２０塩基より大きい ＤＮＡフラグメントを選択的に沈殿させ，オリゴヌクレオチドプライマーの除去 に使用された．４分の１の反応混合物を制限酵素で消化して（Ｈｉｇｕｃｈｉ， １９８９），完了後７０℃に加熱して酵素を不活性化した． リゲーション混合物からの組換えプラスミドの回収 大腸菌ＪＭ１０１細胞をＤＮＡを取り込ませるためにコンピーテントにした． 通常，２０〜１００ｍｌの細胞をＬＢ培地中で約１５０Ｋｌｅｔｔ単位の濃度に 増殖させたのち遠心分離で収集した．細胞を半培養液容量の５０ｍＭ ＣａＣｌ2 に再懸濁し，４℃に１時間保持した．細胞を再度遠心分離して集め，１０分の１ 培養液容量の５０ｍＭ ＣａＣｌ2に再懸濁した．これらの細胞１５０μｌ容量に ＤＮＡを添加し，そのサンプルを４℃に３０分間保持した．サンプルを４２℃に １分間シフトさせ，１ｍｌのＬＢを加え，サンプルを３７℃で１時間振盪した． これらのサンプルからの細胞をアンピシリンを含むプレート上に播いてトランス フォーマントを選択した．プレートを３７℃で一夜インキュベートした．単一の コロニーを採取し，アンピシリン補充ＬＢ培地中３７℃で一夜振盪して増殖させ た．これらの培養液から，制限解析のためにＤＮＡを単離した． 培養培地 ＤＮＡ単離用の細胞の増殖にはＬＢ培地（Ｍａｎｉａｔｉｓら，１９８２）を 使用した．１．０％カサミノ酸，酸加水分解カゼインを補充したＭ９最小培地， Ｄ１ｆｃｏ（Ｄｅｔｒｏｉｔ，Ｍｉｃｈｉｇａｎ）を培養液に使用して，組換え ｈＩＬ−３を産生させた．Ｍ９培地中の成分は，３ｇ／ＬのＫＨ2ＰＯ4，６ｇ／ ＬのＮａ2ＨＰＯ4，０．５ｇ／ＬのＮａＣｌ，１ｇ／ＬのＮＨ4Ｃｌ，１．２ｍ ＭＭｇＳＯ4，０．０２５ｍＭ ＣａＣｌ2，０．２％グルコース（ＡｒａＢＡＤ プロモーターを含む０．２％グリセロール），１％カサミノ酸，０．１ｍｌ／Ｌ 微量鉱質（１Ｌあたり１０８ｇのＦｅＣｌ3・６Ｈ2Ｏ，４．０ｇのＺｎＳＯ4・ ７Ｈ2Ｏ，７．０ｇのＣｏＣｌ2・２Ｈ2Ｏ，７．０ｇのＮａ2ＭｏＯ4・２Ｈ2Ｏ， ８．０ｇのＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ，２．０ｇのＨ3ＢＯ3，５．０ｇのＭｎＳＯ4・ Ｈ2Ｏ，１００ｍｌの濃塩酸）とした．固体培地にはバクトアガールを用い，ア ンピシリンは液体および固体ＬＢ培地の両者に２００μｇ／ｍｌを添加した． ＤＮＡ配列解析 プラスミドＤＮＡのヌクレオチド配列決定は，ＤｕＰｏｎｔ（Ｗｉｌｍｉｎｇ ｔｏｎ，Ｄｅｌａｗａｒｅ）から入手したＧｅｎｅｓｉｓ２０００シーケンサー を用い，Ｐｒｏｂｅｒら（１９８７）およびＳａｎｇｅｒら（１９７７）の方法 に従って実施した．一部のＤＮＡ配列決定はＳｅｑｕｅｎａｓｅTMポリメラーゼ （Ｕ．Ｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，Ｏｈｉｏ）を用い， 製造業者の指示書に従って行った． ｒｅｃＡプロモーターを用いたベクターによる大腸菌内での組換えｈＩＬ−３ ムテインの製造 興味あるプラスミドを繋留した大腸菌株をＭ９プラスカサミノ酸培地中３７℃ において，Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｅｄｉｓｏｎ， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ）製Ｇｙｒｏｔａｒｙ水浴Ｇ７６型中で振盪して増殖させ た．増殖はＫｌｅｔｔ Ｍｆｇ．Ｃｏ．（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ） 製Ｋｌｅｔｔ Ｓｕｍｍｅｒｓｏｎ計（緑色５４フィルター）でモニタリングし た．Ｋｌｅｔｔ値約１５０で培養液のアリコート（通常１ｍｌ）をタンパク質分 析用に採取した．残りの培養液には０．１ＮのＮａＯＨ中ナリジキシン酸（１０ ｍｇ／ｍｌ）を加え，最終濃度５０μｇ／ｍｌとした．ナリジキシン酸の添加後 ，培養液を３７℃で３〜４時間振盪した．所望の遺伝子産物の最大産生を達成す るために，細菌の増殖中を通して高度の通気を維持した．細胞を光学顕微鏡下に 検査して屈折小体（ＲＢ）の存在を調べた．タンパク質含量の分析には培養液１ ｍｌのアリコートを採取した． 大腸菌中ｐＡｒａＢＡＤプロモーターからの組換えｈＩＬ−３の製造 関心プラスミドを繋留した大腸菌株をＭ９培地プラスカサミノ酸およびグリセ ロール中３０℃で振盪して増殖させた．増殖はＫｌｅｔｔ Ｓｕｍｍｅｒｓｏｎ 比色計により，緑色５４フィルターを用いて，モニタリングした．Ｋｌｅｔｔ値 約１５０で培養液のアリコート（通常１ｍｌ）をタンパク質分析用に採取した． 残りの培養液には２０％アラビノースを加え，最終濃度０．０５％とした．培養 液は，アラビノース添加後，３０℃で３〜４時間振盪した．所望の遺伝子産物の 最大産生を達成するために，細菌の増殖中を通して高度の通気を維持した．培養 液の１ｍｌアリコートをタンパク質含量の分析のために採取した． 分泌および浸透圧ショック 誘導３時間後のサンプルを，浸透圧ショックによって分画化した（Ｎｅｕ ＆ Ｈｅｐｐｅｌ，１９６５）．培養液の光学密度（Ｋｅｔｔｅ値）を測定し，細胞 １ｍｌを１．５ｍｌのスナップトップの微小遠心管に取り，Ｓｉｇｍａ微小遠心 分離機（西独）２０２ＭＫ型により１０，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した． 細胞ペレットを，室温のスクロース溶液（２０％スクロースｗ／ｖ，３０ｍＭト リス塩酸塩ｐＨ７．５，１ｍＭ ＥＤＴＡ）中にピペットで極めて静かに加えて 再懸濁して，１μｌ／ｌ Ｋｌｅｔｔ単位を用いた．室温で１０分間インキュベ ートしたのち，細胞を１０，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した．細胞ペレット からスクロース分画を注意深く除去した．ついで．細胞ペレットを氷冷蒸留水中 にピペットで極めて静かに加えて再懸濁し，１μｌ／ｌ Ｋｌｅｔｔ単位を用い た．氷上で１０分間インキュベートしたのち，細胞を１２，０００ｒｐｍで，５ 分間遠心分離した．水分画を注意深く除去した．等容量のスクロースおよび水分 画をプールし，アリコートを活性のスクリーニング用サンプルとして使用した． ｈＩＬ−３変異ポリペプチド産生大腸菌培養液中のタンパク質含量の分析 上述のように処理した培養液からの細菌細胞を，培地の遠心分離により収集し た．これらの細胞のアリコートをＳＤＳ負荷緩衝液［４×：６ｇのＳＤＳ，１０ ｍｌのβ−メルカプトエタ．ノール，２５ｍｌの上部トリスゲル保存液（０．５ Ｍトリス塩酸塩ｐＨ６．８，０．４％ＳＤＳ）をグリセロールで５０ｍｌとし， これに０．２％ブロモフェノールブルーを添加］中にＫｌｅｔｔ単位あたり１μ ｌの濃度に再懸濁した．これらのサンプルを８５℃で５分間インキュベートし， 渦状に撹拌した．これらのサンプル５または１０μｌのアリコートをＬａｅｍｍ ｌｉ（１９７０）の方法によって調製した１５％ポリアクリルアミドゲル上に負 荷した．タンパク質バンドは，前もって最終濃度１％にクーマッシーブルーを添 加した酢酸，メタノールおよび水の５：１：５（容量比）溶液でゲルを染色して 可視化した．染色後，ゲルを，クーマッシーブルーを含まない同じ溶液で洗浄し ，ついで７％酢酸，５％メタノールの溶液により洗浄した．ゲルは，Ｈｏｅｆｆ ｅｒ（Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）製ＳＥ１１６０型 ゲル 乾燥機によって乾燥した．染色されたタンパク質の量はＪｏｙｃｅ−Ｌｏｅｂｌ （Ｇａｔｅｓｈｅａｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ）製の濃度記録計を用いて測定した．得 られた値は，細菌細胞の総染色タンパク質と比較したｈＩＬ−３染色タンパク質 量の尺度となった． 大腸菌内で産生されたｈＩＬ−３ムテインのウエスタンブロット分析 ｈＩＬ−３を産生する一部の大腸菌では，ｈＩＬ−３タンパク質の蓄積レベル は総細菌タンパク質の５％未満の場合がある．このレベルで産生されたｈＩＬ− ３の検出にはウエスタンブロット分析を使用した．ナリジキシン酸またはアラビ ノースで誘導された培養液からのタンパク質を，負荷するサンプルの容量を適当 なシグナルを生じるように調整した以外は上に述べたのと同様にしてポリアクリ ルアミドゲル上に流した．電気泳動後，Ｒｅｎａｒｔら（１９７９）の方法に従 い，タンパク質をＡＰＴ紙，Ｔｒａｎｓａ−ｂｉｎｄ（Ｓｃｈｌｅｉｄｅｒ ＆ Ｓｃｈｕｅｌｌ，Ｋｅｅｎｅ，Ｎｅｗ Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ）に電気ブロットし た．これらのブロットを調べるために用いた抗血清は免疫原としてｈＩＬ−３の アミノ酸２０〜４１と９４〜１１８の配列のペプチドを用い．ウサギで作成され た．結合抗体の存在はＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ（Ｂｏｓｔｏｎ， Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）から入手した125Ｉ放射標識スタフィロコッカス プロテインＡで検出した． 大腸菌細胞が産生した細胞質中のｈＩＬ−３タンパク質の分画 大腸菌培養液からの，ｈＩＬ−３ムテインを産生するプラスミドが繋留された 細胞をナリジキシン酸で誘導した．３時間後，ｈＩＬ−３ムテインは屈折小体に 蓄積した．ｈＩＬ−３ムテインの精製の第一工程は細胞の超音波処理であった． 細胞ペレットから培養液のアリコートを超音波処理緩衝液：１０ｍＭトリスｐＨ ８．０，１ｍ ＭＥＤＴＡ，５０ｍＭ ＮａＣｌおよび０．１ｍＭ ＲＭＳＦ中に 再懸濁した．これらの再懸濁細胞を，Ｈｅａｔ Ｓｙｓｔｅｍｓ−Ｕｌｔｒａｓ ｏｎｉｃｓ Ｉｎｃ．（Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）製超音波処 理細胞破壊装置Ｗ−３７５型のマイクロチップを用い，数回反復して超音波バー ストに付した．超音波処理の程度は光学顕微鏡下にホモジネートを検査してモニ タリングした．ほぼすべての細胞が破壊されたならば，ホモジネートを遠心分離 に よって分画した．大部分の屈折小体を含有するペレットにｈＩＬ−３ムテインが 高度に濃縮される． 方法：大腸菌内にて屈折小体として発現されたインターロイキン−３（ＩＬ− ３）ムテインの抽出，再フォールディングおよび精製 屈折小体（ＲＢ）の抽出 １ｇのＲＢ（通常１ｇは大腸菌培養液３００ｍｌから得られる）に対し，６Ｍ グアニジン塩酸塩（ＧｎＨＣｌ）含有溶液５ｍｌ，５０ｍＭの２−Ｎ−シクロヘ キシルアミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）ｐＨ９．５および２０ｍＭのジチオ スレイトール（ＤＴＴ）を添加した．ＲＢはＢｉｏ−Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒで １５〜３０秒間抽出し，５℃で２時間穏やかに振盪してタンパク質を完全に還元 し，変性させた． ＩＬ−３ムテインの再フォールディング タンパク質溶液を透析チューブ（１０００分子量カットオフ）に移し，少なく とも１００容量の４Ｍ ＧｎＨＣｌ−５０ｍＭ ＣＨＥＳ，ｐＨ８．０に対して透 析した．透析は，穏やかに撹拌しながら，５℃で一夜継続した．ついで，透析を 少なくとも１００容量の２Ｍ ＧｎＨＣｌ−５０ｍＭ ＣＨＥＳ，ｐＨ８．０に対 して継続し，穏やかに撹拌しながら，５℃で一夜透析した． ＩＬ−３ムテインの精製 タンパク質溶液を透析チューブから取り出して，これに４０％アセトニトリル （ＣＨ3ＣＮ）−０．２％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を添加して最終濃度が２ ０％ＣＨ3ＣＮ−０．１％ＴＦＡの酸性とした．これを，遠心分離（１６，００ ０×ｇ，５分間）して澄明とし，上清を，予め２０％ＣＨ3ＣＮ−０．１％ＴＦ Ａ中に平衡化したＶｙｄａｃ Ｃ−１８逆相カラム（１０×２５０ｍｍ，Ｖｙｄ ａｃ，Ｈｅｓｐｅｒｉａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから入手可能）上に負荷した． カラムを４０〜５０％ＣＨ3ＣＮ−０．１％ＴＦΛの直線勾配（０．２％ＣＨ3Ｃ Ｎ／分）により３ｍｌ／分の流速で溶出し，１．５ｍｌの分画を捕集した．分画 をポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分析し，適当 な分画をプールした．プールした材料を凍結乾燥またはＳｐｅｅｄ Ｖａｃ濃縮 器によって乾燥した．乾燥粉末を１０ｍＭ炭酸水素アンモニウムｐＨ７．５で再 構築し， 遠心分離（１６，０００×ｇ，５分間）して澄明とし，ウシ血清アルブミンを標 準として，Ｂｒａｄｆｏｒｄ（１９７６）の方法によりタンパク質濃度を検定し た．このタンパク質はその他の方法，たとえばＳＤＳ−ＰＡＧＥ，電気スプレー 質量分析，逆相ＨＰＬＣ，毛細管ゾーン電気泳動，アミノ酸組成分析，ならびに ＥＬＩＳＡ（酵素連結イムノソルベントアッセイ）によりさらに分析することが できる． ｈＩＬ−３サンドイッチＥＬＩＳＡ ＩＬ−３タンパク質濃度は，アフィニティー精製ポリクローナルヤギ抗−ｒｈ ＩＬ−３に基づくサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて定量することができる．マイ クロタイタープレート（Ｄｙｎａｔｅｃｈ Ｉｍｍｕｌｏｎ II）を，１００ｍＭ のＮａＨＣＯ3，ｐＨ８．２中，約１μｇ／ｍｌ濃度のヤギ−抗−ｒｈＩＬ−３ ，１５０ｐｌでコートした．プレートを湿度１００％に保持した室内において室 温で一夜インキュベートした．ウエルを空にし，プレート上の残った反応部位を ，１０ｍＭ ＰＢＳ，３％ＢＳＡおよび０．０５％ツイーン２０，ｐＨ７．４を 含有する溶液２００μｌによって３７℃，湿度１００％下に１時間でブロックし た．ウエルを空にして，０．０５％ツイーン２０含有１５０ｍＭ ＮａＣｌ（洗 浄緩衝液）で４回洗浄した．ついで，各ウエルに，ｒｈＩＬ−３標準，対照もし くはサンプルを含む希釈緩衝液（０．１％ＢＳＡ．０．０１％ツイーン２０，ｐ Ｈ７．４含有１０ｍＭ ＰＢＳ）または希釈緩衝液単独１５０μｌを加えた．ｒ ｈＩＬ−３の保存溶液（濃度はアミノ酸組成分析により測定）を用い，０．１２ ５ｎｇ／ｍｌ〜５ｎｇ／ｍｌの濃度範囲で標準曲線を作成した．プレートを３７ ℃，湿度１００％で２．５時間インキュベートした．ウエルを空にして，各プレ ートを洗浄緩衝液で４回洗浄した．各ウエルについで，西洋ワサビペルオキシダ ーゼに接合したヤギ抗−ｒｈＩＬ−３の至適希釈溶液（チェッカーボードアッセ イフォーマットにより決定）１５μｌを加えた．プレートを３７℃，湿度１００ ％で，１．５時間インキュベートした．ウエルを空にし各プレートを洗浄緩衝液 により４回洗浄した．各ウエルについで，ＡＢＴＳ基質溶液（Ｋｉｒｋｅｇａａ ｒｄ ＆ Ｐｅｒｒｙ）１５０μｌを添加した．プレートを室温で，５ｎｇ／ｍｌ のｒｈＩＬ−３を含有する標準ウエルにＤｙｎａｔｅｃｈマイクロタイタープレ ート リーダーでの試験波長４１０ｎｍと対照波長５７０ｎｍにおける読みが０．５〜 １．０の吸収を生じるのに十分な発色が得られるまでインキュベートした．未知 サンプル中の免疫反応性ｒｈＩＬ−３の濃度はプレートリーダーに付属のソフト ウエアを用いて標準曲線から計算した． 生物活性ヒトインターロイキン−３のＡＭＬ増殖アッセイ 因子依存性細胞系ＡＭＬ１９３はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手した ．急性骨髄性白血病の患者から確立されたこの細胞系は，ＧＭ／ＣＳＦ補充培地 中で増殖の促進を示す成長因子依存性細胞である（Ｌａｎｇｅ，Ｂ．ら，１９８ ７；Ｖａｌｔｉｅｒｉ，Ｍ．ら，１９８７）．ＡＭＬ１９３細胞のヒトＩＬ−３ 存在下における増殖能も明らかにされている（Ｓａｎｔｏｌｉ，Ｄ．ら，１９８ ７）．成長因子を除去し，サイトカイン依存性ＡＭＬ１９３細胞を２４時間成長 因子欠乏状態に置くことによりＩＬ−３中での長期増殖に適合させた変異細胞系 ，ＡＭＬ１９３ １．３を使用した．細胞をついで，１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−３ を含む培地中，２４ウエルのプレートに１×１０５細胞／ウエルの割合で再プレ ーティングした．細胞がＩＬ−３中で迅速に増殖するようになるまでに約２カ月 を要した．これらの細胞をついで，組織培養培地（以下参照）にヒトＩＬ−３を 補充することによってＡＭＬ１９３ １．３として維持させた． ＡＭＬ１９３ １．３細胞は細胞懸濁液を２５０×ｇで１０分間遠心分離した のち上清を傾瀉することにより，冷ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ，Ｇｉｂｃｏ ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中において６回洗浄した．ペレット化した 細胞をＨＢＳＳ中に再懸濁し，この操作を６回の洗浄サイクルが完了するまで反 復した．この操作で６回洗浄した細胞を組織培養培地に２×１０5〜５×１０5生 存細胞／ｍｌの密度範囲で再懸濁した．この培地は，Ｉｓｃｏｖｅの改良Ｄｕｌ ｂｅｃｃｏ培地（ＩＭＤＭ，Ｈａｚｌｅｔｏｎ，Ｌｅｎｅｘａ，ＫＳ）に，アル ブミン，トランスフェリン，脂質および２−メルカプトエタノールを補充して調 製した．ウシアルブミン（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｉｎｄｉ ａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）は５００μｇ／ｍｌになるように加え，ヒトトランス フェリン（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉ ｓ， ＩＮ）は１００μｇ／ｍｌを加え，大豆脂質（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎ ｈｅｉｍ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）は５０μｇ／ｍｌを加え，２−メ ルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）は５×１０-5Ｍに なるように添加した． ヒトインターロイキン−３もしくはヒトインターロイキン−３変異タンパク質 （ｈＩＬ−３ムテイン）の希釈系列は，上述のように補充した組織培養培地中， ９６ウエルＣｏｓｔａｒ３５９６組織培養プレートに三重系列として作成した． 希釈系列が完成されると，各ウエルにはインターロイキン−３またはインターロ イキン−３変異タンパク質を含む培地５０μｌが含有された．対照のウエルには 組織培養培地のみを添加した（陰性対照）．上述のようにして調製されたＡＭＬ １９３ １．３細胞懸濁液はウエルあたり５０μｌ（２．５×１０4細胞）をピペ ットにより各ウエルに添加した．組織培養プレートは，５％ＣＯ2含有加湿空気 下に３７℃で３日間インキュベートした．３日目に，０．５μＣｌの3Ｈ−チミ ジン（２Ｃｉ／ｍＭ，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ， ＭＡ）を組織培養培地５０μｌ中に取って加えた．培養液を５％ＣＯ2含有加湿 空気下３７℃で１８〜２４時間インキュベートした．細胞ＤＮＡを，水洗浄サイ クル，ついで７０％エタノール洗浄サイクルを使用するＴＯＭＴＥＣ細胞ハーベ スター（ＴＯＭＴＥＣ，Ｏｒａｎｇｅ，ＭＤ）を用いることによりガラスフィル ターマット（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，ＬＫＢ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ） 上に収穫した．フィルターマットを風乾してサンプルバッグに取り，これにシン チレーション液（ＳｃｉｎｔｉｖｅｒｓｅII，Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆ ｉｃ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯまたはＢｅｔａＰｌａｔｅ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａ ｔｉｏｎ Ｆｌｕｉｄ，Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ ，ＭＤ）を添加した．各組織培養ウエルからのサンプルのβ−照射をＬＫＢ Ｂ ｅｔａｐｌａｔｅ１２０５型シンチレーションカウンター（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）でカウントし，データは各組織培 養ウエルから細胞中に取り込まれた3Ｈ−チミジンの１分あたりのカウントとし て表した．各ヒトインターロイキン−３プレパレーションまたはヒトインターロ イキン−３変異体プレパレーションの活性は，段階的濃度のインターロイキン− ３またはイ ンターロイキン−３変異体によって誘導された細胞増殖（3Ｈ−チミジンの取り 込み）の測定によって定量された．通常これらのアッセイでは，０．０５ｐＭ〜 １０5ｐＭの濃度範囲で定量が行われる．活性は，５０％最大増殖を与えるイン ターロイキン−３もしくはインターロイキン−３変異体の用量［ＥＣ50＝０．５ ×（試験されたすべてのインターロイキン−３濃度での三重培養において取り込 まれたは3Ｈ−チミジンの１分あたりの最大平均カウント−インターロイキン− ３を欠く三重培養に認められた3Ｈ−チミジンの取り込みによって測定されたバ ックグランド増殖）］の測定によって決定した．このＥＣ50値はまた１単位の生 物活性に等しい．すべてのアッセイは，相対的な活性レベルを帰納できるように ネイティブなインターロイキン−３を標準対照として実施した． 本発明のＩＬ−３ムテインの生物活性比を表１に示す．ＩＬ−３変異体の生物 活性比は（１−１３３）ｈＩＬ−３のＥＣ50を変異体のＥＣ50で割ることによっ て計算する．生物活性比は反復アッセイの平均値の場合もある． 以下のアッセイは，ヒト単核細胞からのＩＬ−３媒介スルフィドロイコトリエ ンの放出を測定するために用いられる． ヒト単核細胞からのＩＬ−３媒介スルフィドロイコトリエンの放出 ヘパリン含有ヒト血液を収集し，そのまま使用できる培地（密度１．０７７ｇ ／ｍｌ）Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＃１７−０８４０− ０２）の等容量上に重ねた．Ｆｉｎｃｏｌｌは使用前に室温に加温し，５０ｍｌ の透明なポリスチレンチューブを使用した．Ｆｉｃｏｌｌ勾配をＳｏｒｖａｌｌ ＲＴ６０００Ｂ冷凍遠心分離機中Ｈ１０００Ｂローターを用い，室温，３００× ｇで３０分間遠心分離した．単核細胞を含有するバンドを注意深く取り出し，容 量をダルベッコのリン酸緩衝食塩溶液（Ｇｉｂｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ ，型録番号＃３１０−４０４０ＰＫ）により５０ｍｌに調整し，４００×ｇ，４ ℃で１０分間遠心分離して，上清を注意深く除去した．細胞ペレットを，ＨＡ緩 衝液［２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（Ｓｉｇｍａ＃Ｈ−３３７５），１２５ｍＭ ＮａＣ ｌ（Ｆｉｓｈｅｒ＃Ｓ２７１−５００），５ｍＭ ＫＣｌ（Ｓｉｇｍａ＃Ｐ−９ ５４１），０．５ｍＭグルコース（Ｓｉｇｍａ＃Ｇ５０００），０．０２５％ヒ ト血清アルブミン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ＃１２６６５４）］で２回洗浄し，３ ００×ｇ，４℃で１０分間遠心分離した．細胞をＨＡＣＭ緩衝液［１ｍＭ Ｃａ Ｃｌ2（Ｆｉｓｈｅｒ＃Ｃ７９−５００）ならびに１ｍＭ ＭｇＣｌ2（Ｆｉｓｈ ｅｒ＃Ｍ−３３）を補充したＨＡ緩衝液］中に１×１０6細胞／ｍｌ濃度で再懸 濁し，１８０μｌを９６ウエル組織培養プレートの各ウエルに加えた．細胞は３ ７℃で１５分間，馴化させた．各ウエルに，様々な濃度のサイトカインの２０× 保存液１０μｌを加え（通常は１０００００，２００００，４０００，８００， １６０，３２，６．４，１．２８，０ｆＭ ＩＬ３）細胞を感作した．細胞を３ ７℃で１５分間インキュベートした．スルフィドロイコトリエンの放出を２０× （１０００ｎＭ）ｆｍｅｔ−ｌｅｕ−ｐｈｅ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ＃３４４２ ５２）１０μｌ，最終濃度５０ｎＭ ＦＭＬＰの添加により活性化し，３７℃で １０分間インキュベートした．プレートを３５０×ｇ，４℃で２０分間遠心分離 した．上清を除去し，ＣａｙｍａｎのロイコトリエンＣ４ＥＩＡキットを用い（ 型録番号＃４２０２１１），製造業者の指示書に従ってスルフィドロイコトリエ ンをアッセ イした．アッセイ毎にネイティブ（１５−１２５）ｈＩＬ−３を標準対照として 用いた． ネイティブなｈＩＬ−３はかなりの炎症活性をもっていて，アラキドン酸代謝 物ＬＴＣ4，ＬＴＤ4およびＬＴＥ4の合成，ヒスタミンの合成，ならびにヒスタ ミンの放出を刺激することが明らかにされている．ネイティブｈＩＬ−３のヒト 臨床試験では炎症反応が証明されている［Ｂｉｅｓｍａら，ＢＬＯＯＤ，８０： １１４１−１１４８（１９９２）；Ｐｏｓｔｍｕｓら，Ｊ．ＣＬＩＮ．ＯＮＣＯ Ｌ．１０：１１３１−１１４０（１９９２）］．最近の研究ではロイコトリエン がインビボでのＩＬ−３の作用に関与し，ＩＬ−３処置の生物学的効果に有意に 寄与している可能性が示唆されている［Ｄｅｎｚｌｉｎｇｅｒ，Ｃ．ら，ＢＬＯ ＯＤ，８１：２４６６−２４７０（１９９３）］． 本発明の一部のムテインは，ネイティブｈＩＬ−３または（１５−１２５）ｈ ＩＬ−３に比べて改良された治療プロファイルを有する．たとえば本発明の一部 のムテインは，ネイティブｈＩＬ−３または（１５−１２５）ｈＩＬ−３と比較 して同様のまたはより強力な成長因子活性を有し，しかもロイコトリエンまたは ヒスタミンの刺激には同様のまたは相当する増大を示さない．これらのムテイン は，所望の成長因子活性（たとえば細胞増殖）を達成するために必要なポリペプ チドの投与量でのロイコトリエンもしくはヒスタミン刺激作用は低下するので， より好ましい治療プロファイルを有することが期待される．ネイティブｈＩＬ− ３の研究では，炎症因子の刺激がその処置の望ましくない副作用とされてきた． 炎症のメディエーターの刺激の低下または消失はネイティブｈＩＬ−３の使用に 優る利点を提供するものである． ｐＭＯＮ１３２８８ポリペプチドはＡＭＬ１９３細胞増殖アッセイにおいて， ネイティブなｈＩＬ−３に比較して，より強力な成長因子活性を示し（ｐＭＯＮ １３２８８のＥＣ50＝０．８〜３．８ｐＭに対し，ネイティブｈＩＬ−３のＥＣ50 ＝３０．２ｐＭ），しかもロイコトリエンＣ4（ＬＴＣ4）産生およびヒスタミ ン放出の刺激に相当する増大は認められなかった．すなわち，それはＬＴＣ4産 生およびヒスタミン放出を，ネイティブｈＩＬ−３の場合と同様の強度で刺激す るが，ネイティブｈＩＬ−３に比較して細胞増殖の刺激能は改良されている．し た がってｐＭＯＮ１３２８８ポリペプチドによれば，望ましくない炎症メディエー ターの刺激は低下させて，所望の治療反応たとえば細胞増殖の発現が可能になる ことが期待される． 本発明の一部のムテインはネイティブｈＩＬ−３とは異なる抗原性プロファイ ルを有する．たとえば，アフィニティー精製ポリクローナルヤギ抗−ｈＩＬ−３ 抗体を用いる競合ＥＬＩＳＡにおいて，ネイティブなｈＩＬ−３は標識ｈＩＬ− ３のポリクローナル抗−ｈＩＬ−３抗体への結合を有意に遮断したが，ｐＭＯＮ １３２８８はｈＩＬ−３の抗−ｈＩＬ−３抗体への結合を遮断しなかった． 表２には，本発明のムテインの製造に用いられる一部のオリゴヌクレオチドの 配列を掲げる． 表３には，ネイティブ（１５−１２５）ｈＩＬ−３（ペプチド＃１）のアミノ 酸配列および本発明の一部の変異ポリペプチドのアミノ酸配列を掲げる．配列は ネイティブｈＩＬ−３（図１）の場合に相当するアミノ酸番号を付してある． 表４には，本発明の変異ポリペプチドをコードする一部のＤＮＡ配列のヌクレ オチド配列を掲げる． ペプチド＃２；ｐＭＯＮ１３３４４（例８）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ａ，３７Ｐ，４２Ａおよび４５Ｖ） ペプチド＃３；ｐＭＯＮ１３３４５（例９）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ａ，３７Ｐ，４２Ｓおよび４５Ｍ） ペプチド＃４；ｐＭＯＮ１３３４６（例１０）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｖ，３２Ａ，３７Ｓ，４２Ｓおよび４５Ｍ） ペプチド＃５；ｐＭＯＮ１３３４７（例１２）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （５１Ｒ，５５Ｌ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｎおよび６９Ｅ） ペプチド＃６；ｐＭＯＮ１３３４８（例１３）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （５１Ｒ，５５Ｌ，６０Ｓ，６７Ｎおよび６９Ｅ） ペプチド＃７；ｐＭＯＮ１３３４９（例１４）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （５１Ｒ，５５Ｔ，５９Ｌ，６７Ｈおよび６９Ｅ） ペプチド＃８；ｐＭＯＮ１３３５０（例１６）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （７３Ｇ，７６Ａ，７９Ａ，９３Ｓ，９８１，１０１Ａおよび１０５Ｑ） ペプチド＃９；ｐＭＯＮ１３３５５（例１７）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１０５Ｑ） ペプチド＃１０；ｐＭＯＮ１３３５２（例１９）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （１０９Ｅ，１１６Ｖおよび１２３Ｅ） ペプチド＃１１；ｐＭＯＮ１３３５４（例２０）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （１０９Ｅ，１１６Ｖ，１１７Ｓ，１２０Ｈおよび１２３Ｅ） ペプチド＃１２；ｐＭＯＮ１３３６０（例２１）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｑ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８１，１０１Ａ，１０ ５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑおよび１２３Ｅ） ペプチド＃１３；ｐＭＯＮ１３３６１（例２２）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１０５Ｑ， １０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑおよび１２３Ｅ） ペプチド＃１４；ｐＭＯＮ１３３６２（例２３）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ．８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１０ ５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１１７Ｓ，１２０Ｈおよび１２３Ｅ） ペプチド＃１５；ｐＭＯＮ１３３６３（例２４）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３７Ｐ，４２Ａ，４５Ｖ，５１Ｒ，５５Ｌ，６０Ｓ ，６２Ｖ，６７Ｎおよび６９Ｅ） ペプチド＃１６；ｐＭＯＮ１３３６４（例２５）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ｎ，３７Ｐ，４２Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５Ｔ ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｈおよび６９Ｅ） ペプチド＃１７；ｐＭＯＮ１３３６５（例２６）；（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （１８１，２５Ｈ，２９Ｖ，３２Ａ，３７Ｓ，４２Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５Ｌ ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｎおよび６９Ｅ） ペプチド＃１８；ｐＭＯＮ１３２９８（例２７）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｑ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｉ ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑおよび１２３Ｅ） ペプチド＃１９；ｐＭＯＮ１３２９９（例２８）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑおよび１２３Ｅ） ペプチド＃２０；ｐＭＯＮ１３３００（例２９）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１１７Ｓ，１２０Ｈ，および１２ ３Ｅ） ペプチド＃２１；ｐＭＯＮ１３３０１（例３０）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ａ，３７Ｐ，４２Ａ，４５Ｖ ，５１Ｒ，５５Ｌ，６０Ｓ，６２Ｖ，６７Ｎおよび６９Ｅ） ペプチド＃２２；ｐＭＯＮ１３３０２（例３１）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ｎ，３７Ｐ，４２Ｓ，４５Ｍ ，５１Ｒ，５５Ｔ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｈおよび６９Ｅ）； ペプチド＃２３；ｐＭＯＮ１３３０３（例３２）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｖ，３２Ａ，３７Ｓ，４２Ｓ，４５Ｍ ，５１Ｒ，５５Ｌ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｎおよび６９Ｅ）； ペプチド＃２４；ｐＭＯＮ１３２８７（例３３）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ａ，３７Ｐ，４２Ａ，４５Ｖ ，５１Ｒ，５５Ｌ，６０Ｓ，６２Ｖ，６７Ｎ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ ，８２Ｑ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｉ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ ，１２０Ｑおよび１２３Ｅ）； ペプチド＃２５；ｐＭＯＮ１３２８８（例３４）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ｎ，３７Ｐ，４２Ｓ，４５Ｍ ，５１Ｒ，５５Ｔ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｈ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ ，８２Ｑ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｉ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ ，１２０Ｑおよび１２３Ｅ）； ペプチド＃２６；ｐＭＯＮ１３２８９（例３５）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｖ，３２Ａ，３７Ｓ，４２Ｓ，４５Ｍ ，５１Ｒ，５５１，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｎ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ ，８２Ｑ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｉ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ ，１２０Ｑおよび１２３Ｅ）； ペプチド＃２７；ｐＭＯＮ１３２９０（例３６）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ａ，３７Ｐ，４２Ａ，４５Ｖ ，５１Ｒ，５５Ｌ，６０Ｓ，６２Ｖ，６７Ｎ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６ Ｖ，１２０Ｑおよび１２３Ｅ）； ペプチド＃２８；ｐＭＯＮ１３２９２（例３７）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ａ，３７Ｓ，４２Ｓ，４５Ｍ ，５１Ｒ，５５Ｌ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｎ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ ，１２０Ｑおよび１２３Ｅ）； ペプチド＃２９；ｐＭＯＮ１３２９４（例３８）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ｎ，３７Ｐ，４２Ｓ，４５Ｍ ，５１Ｒ，５５Ｔ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｈ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ ，１１７Ｓ，１２０Ｈおよび１２３Ｅ）； ペプチド＃３０；ｐＭＯＮ１３２９５（例３９）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｖ，３２Ａ，３７Ｓ，４２Ｓ，４５Ｍ ，５１Ｒ，５５Ｌ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｎ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ ，１１７Ｓ，１２０Ｈおよび１２３Ｅ）； ペプチド＃３１；ｐＭＯＮ１３３１２（例４０）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３（１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ｎ，３７Ｐ，４２Ｓ，４５Ｍ ，５１Ｒ，５５Ｔ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｈ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ ，１２０Ｑおよび１２３Ｅ）； ペプチド＃３２；ｐＭＯＮ１３３１３（例４１）；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５− １２５）ｈＩＬ−３（１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ａ，３７Ｐ，４２Ａ，４５ Ｖ，５１Ｒ，５５Ｌ，６０Ｓ，６２Ｖ，６７Ｎ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９ Ｒ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６ Ｖ，１１７Ｓ，１２０Ｈおよび１２３Ｅ）； ペプチド＃Ａ３：ｐＭＯＮ１３２８５Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ −３（４２Ｄ，４５Ｍ，４６Ｓ，５０Ｄ）； ペプチド＃Ａ４；ｐＭＯＮ１３２８６Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ −３（４２Ｄ，４５Ｍ，４６Ｓ）； ペプチド＃Ａ５；ｐＭＯＮ１３３２５Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ −３（４２Ｄ，４５Ｍ，４６Ｓ，１１６Ｗ）； ペプチド＃Ａ６；ｐＭＯＮ１３３２６Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ −３（４２Ｄ，４５Ｍ，４６Ｓ，５０Ｄ，１１６Ｗ）； ペプチド＃Ａ７ｐＭＯＮ１３３３０Ｍｅｔ−Ａｌａ−ＩＬ−３（４２Ｄ，４５Ｍ ，４６Ｓ，５５０Ｄ，９５Ｒ，９８１，１００Ｒ，１１６Ｗ）； ペプチド＃Ａ８；ｐＭＯＮ１３３２９Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ −３（４２Ｄ，４５Ｍ，４６Ｓ，９８１，１００Ｒ，１１６Ｗ）； ペプチド＃Ｂ１；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４０６ ペプチド＃Ｂ２；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４１４ ペブチド＃Ｂ３；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４０７ ペプチド＃Ｂ４；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４０５ ペプチド＃Ｂ５；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４１５ ペプチド＃Ｂ６；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４０８ ペプチド＃Ｂ７；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４０９ ペプチド＃Ｂ８；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４１０ ペプチド＃Ｂ９；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４２２ ペプチド＃Ｂ１０；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４２３ ペプチド＃Ｂ１１；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４２４ ペプチド＃Ｂ１２；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４２５ ペプチド＃Ｂ１３；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４２６ ペプチド＃Ｂ１４；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４２９ ペプチド＃Ｂ１５；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３６８ ペプチド＃Ｂ１６；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３８０ ペプチド＃Ｂ１７；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４７５ ペプチド＃Ｂ１８；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３６６ ペプチド＃Ｂ１９；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３６７ ペプチド＃Ｂ２０；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３６９ ペプチド＃Ｂ２１；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３７０ ペプチド＃Ｂ２２；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３７８ ペプチド＃Ｂ２３；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３７４ ペプチド＃Ｂ２４；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３７５ ペプチド＃Ｂ２５；Ｍｅｔ−Ａｓｐ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３７６ ペプチド＃Ｂ２６；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３７７ ペプチド＃Ｂ２７；Ｍｅｔ−Ａｓｐ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３７８ ペプチド＃Ｂ２８；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３７９ ペプチド＃Ｂ２９；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３８５ ペプチド＃Ｂ３０；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３８１ ペプチド＃Ｂ３１；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３８３ ペプチド＃Ｂ３２；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３８４ ペプチド＃Ｂ３３；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３８８ ペプチド＃Ｂ３４；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３８９ ペプチド＃Ｂ３５；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３９１ ペプチド＃Ｂ３６；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３９２ ペプチド＃Ｂ３７；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３９３ ペプチド＃Ｂ３８；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３９４ ペプチド＃Ｂ３９；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３９５ ペプチド＃Ｂ４０；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３９６ ペプチド＃Ｂ４１；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３９７ ペプチド＃Ｂ４２；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３９８ ペプチド＃Ｂ４３；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３９９ ペプチド＃Ｂ４４；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４０４ ペプチド＃Ｂ４５；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３８７ ペプチド＃Ｂ４６；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４１６ ペプチド＃Ｂ４７；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４１７ ペプチド＃Ｂ４８；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４２０ ペプチド＃Ｂ４９；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４２１ ペプチド＃Ｂ５０；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４３２ ペプチド＃Ｂ５１；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３８２ ペプチド＃Ｂ５２；Ｍｅｔ−Ａｓｐ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４７６ ペプチド＃Ｂ５３；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４４６ ペプチド＃Ｂ５４；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３３９０ ペプチド＃Ｃ−２；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４００ ペプチド＃Ｃ−３；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４０２ ペプチド＃Ｃ−１０；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４４０ ペプチド＃Ｃ−１１；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４５１ ペプチド＃Ｃ−４；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４０３ ペプチド＃Ｃ−５；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４１１ ペプチド＃Ｃ−６；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１１８）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４１２ ペプチド＃Ｃ−７；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４１３ ペプチド＃Ｃ−８；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４１９ ペプチド＃Ｃ−１；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４１８ ペプチド＃Ｃ−９；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４２８ ペプチド＃Ｃ−１２；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４５９ ペプチド＃Ｃ−１３；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４６７ ペプチド＃Ｃ−１４；Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ ｐＭＯＮ １３４９２ ４個以上のアミノ酸置換を含有する（１−１３３）ｈＩＬ−３からなる［配列 番号：１２９］に相当するポリペプチドは，上述の操作および以下の例の操作を 使用して，適当なオリゴヌクオチドに出発し，ついでポリペプチドをコードする ＤＮＡを構築し，それを適当な宿主細胞中で発現させることにより作成すること ができる．同様にして，［配列番号：１３０］に相当し，また４個以上のアミノ 酸置換を有し，さらにＮ−末端より１〜１４のアミノ酸が順次欠失しているかも しくはＣ−末端より１〜１５のアミノ酸が欠失しているか，またはＮ−末端およ びＣ−末端両者にアミノ酸の欠失があるポリペプチドもまた，適当な出発原料か ら開始し，上述のおよび以下の例における操作によって作成することができる． 本技術分野の熟練者に知られているその他の詳細はＴ．Ｍａｎｉａｔｉｓら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８２）， およびそれに引用された文献（本明細書に参考として導入する）；ならびに，Ｊ ．Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａ ｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ ｏｒａｔｏｒｙ（１９８９）およびその引用文献（本明細書に参考として導入） に見出すことができる． 以下の実施例は本発明をさらに詳細に例示するものであって，これらの特定の 例によって本発明が限定されるものではないことを理解すべきである． 本明細書においてはアミノ酸は以下の一文字または三文字の略語で表される． 略称 アミノ酸 Ａ Ａｌａ アラニン Ｃ Ｃｙｓ システイン Ｄ Ａｓｐ アスパラギン酸 Ｅ Ｇｌｕ グルタミン酸 Ｆ Ｐｈｅ フェニルアラニン Ｇ Ｇｌｙ グリシン Ｈ Ｈｉｓ ヒスチジン Ｉ Ｉｌｅ イソロイシン Ｋ Ｌｙｓ リジン Ｌ Ｌｅｕ ロイシン Ｍ Ｍｅｔ メチオニン Ｎ Ａｓｎ アスパラギン Ｐ Ｐｒｏ プロリン Ｑ Ｇｌｎ グルタミン Ｒ Ａｒｇ アルギニン Ｓ Ｓｅｒ セリン Ｔ Ｔｈｒ スレオニン Ｖ Ｖａｌ バリン Ｗ Ｔｒｐ トリプトファン Ｙ Ｔｙｒ チロシン 本技術分野の熟練者であれば，本発明の開示の読後には，本発明の精神および 範囲を逸脱することなく他の多様な例が自明であろう．このような他の例はすべ て添付された請求の範囲内に包含されることを意図するものである． 参考文献 Adams，S.P.，Kavka，K.S.，Wykes，E.J.，Holder，S.B．and Galluppi，G.R．Hindered Dialkyamino Nucleoside Phosphate reaqents in the synthesis of two DNA51-mers．J.Am． Chem．Soc.，105, 661-663 (1983)． Atkinson，T．and Smith，M.，in Gait，M.J.， Oliqonucleotide Sythesis (1984) (IRL Press，Oxford Enqland)． Bachmann，B.，Pediqrees of some mutant strains of Escherichia coli K-12，Bacteriological Reviews,36:525- 557 (1972)． Bayne，M. 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ＢＲ３２８（Ｃｏｖａｒｒｕｂｉａｓら，１９８１）からのクロラムフェニコー ルアセチルトランスフェラーゼ（ｃａｔ）遺伝子がＢａｍＨＩ部位に挿入された ＢｃｌＩフラグメントをもつファージｍｐ１８（Ｙａｎｉｓｃｈ-Ｐｅｒｒｏｎ ，１９８５）から構成されている．ｐＭＯＮ２４２９中のｃａｔ遺伝子は，ｐＢ Ｒ３２８中の遺伝子から特定部位の突然変異により変換されている（Ｋｕｎｋｅ ｌ， １９８５）．ネイティブ遺伝子中に存在するＮｃｏＩおよびＥｃｏＲＩの認識部 位は，これらの２つの制限酵素がも早これらの部位を認識しないように変換され た．この変化は遺伝子によって特定されるタンパク質を変化させなかった．また ，ＮｃｏＩ部位がコード配列のＮ−末端に，イニシエーターのメチオニンのコド ンと重複するように導入された． ｐＭＯＮ２４２９構築の各工程を以下に掲げる． （１）ｐＭＯＮ５５１５およびｐＭＯＮ２４２９のＤＮＡを，ＮｃｏＩおよび ＨｉｎｄIIIで処理した．これらのフラグメントをリゲートして，コンピーテン トな大腸菌をアンピシリン抵抗性に形質転換するのに用いた．これらのコロニー から，一部にクロラムフェニコール抵抗性のコロニーが同定された．これらのコ ロニーの一つからｐＭＯＮ５５１５のラットアトリオペプチゲン遺伝子がｐＭＯ Ｎ２４２９からのｃａｔ遺伝子含有ＮｃｏＩ−ＨｉｎｄIIIフラグメントによっ て置換されたプラスミドＤＮＡが単離された．このフラグメントはｍｐ１８の多 重リンカー領域に由来する部分に数種の制限酵素の認識部位を含有する．この新 しいプラスミドはｐＭＯＮ２４１２と命名された． （２）ｐＭＯＮ２４１２は，このＤＮＡのｐＢＲ３２７由来部分を１つの位置 で切断する酵素ＣｌａＩで処理した．突出端を，ヌクレオチド前駆体の存在下ク レノウで処理してブラントにした．このＤＮＡをｐＥＭＢＬ８（Ｄｅｎｔｅら， １９８３）由来の単離された５１４ｂｐのＲｓａＩフラグメントと混合した．こ のＲｓａIフラグメントはファージｆ１の複製起源を含有する．このリゲーショ ン混合物を用いてコンピーテントな大腸菌細胞をアンピシリン抵抗性に形質転換 した．これらの細胞から単離されたプラスミドＤＮＡ中にｐＭＯＮ５５７８があ った．このプラスミドはｐＭＯＮ２４１２の構造を有し，そのＣｌａＩ部位内に ｆ１の複製起源が挿入されている．これは図面中およびＯｌｉｎｓ ＆ Ｒａｎｇ ｗａｌａ（１９９０）に例示されている． （３）ｐＭＯＮ５５７８のＤＮＡを制限酵素ＨｉｎｄIIIおよびＭｓｔIIで処 理した．このＤＮＡをついでヌクレオチド前駆体の存在下にクレノウ酵素で処理 して末端をブラントとした．この処理ＤＮＡをリゲートして，コンピーテントな 大腸菌をアンピシリン抵抗性に形質転換するために使用した．アンピシリン抵抗 性 コロニーから，ＨｉｎｄIIIとＭｓｔIIの間の部分が存在しない１つのプラスミ ドが回収された．この欠失によって，プラスミドから多くの制限エンドヌクレア ーゼ部位によって認識される配列が除去された．この新しいプラスミドはｐＭＯ Ｎ５５８２と命名された． （４）ｐＭＯＮ５５８２のＤＮＡをＳｓｔIIおよびＢｃｌIIで処理し以下に示 す配列をもつアニーリングされたオリゴヌクレオチドの存在下にリゲートした． この配列は，転写開始部位とｌｅｘＡレプレッサー結合部位（オペレーター） を含む大腸菌のｒｅｃＡプロモーターの必須要素をコードする（Ｓａｎｃａｒ， １９８０）．リゲーション混合物から回収されたプラスミドはｐＭＯＮ５５８２ （およびｐＭＯＮ５５１５）中のプロモーターに代わってこのｒｅｃＡプロモー ターを含有していた．ｒｅｃＡプロモーターの機能性についてはＯｌｉｎｓ ＆ Ｒａｎｇｗａｌａ（１９９０）によって例証された．この新しいプラスミドは， ｐＭＯＮ５５９４と命名された． （５）ｐＭＯＮ５５９４中の唯一のＥｃｏＲＩ部位を消失させるために，この ＤＮＡをＥｃｏＲＩ，ついでヌクレオチド前駆体の存在下にクレノウで処理して 末端をブラントにし，ついでＤＮＡをリゲートさせた．このリゲーション混合物 から，ＤＮＡがＥｃｏＲＩでは切断されないプラスミドが回収された．このプラ スミドはｐＭＯＮ５６３０と命名された． （６）ＰｓｔＩの唯一の認識部位を変化させるためには，プラスミドｐＭＯＮ ５６３０を特定部位の突然変異に付した（Ｋｕｎｋｅｌ，１９８５）．この操作 に用いられたオリゴヌクレオチドは以下の配列を有する． この操作の結果，ｐＭＯＮ５６３０とはβ−ラクタマーゼ遺伝子中のＰｓｔＩ 部位がＰｓｔＩによってはも早認識されないように変化した点で異なるｐＭＯＮ ２３４１が構築された．１個のヌクレオチドの変化はβ−ラクタマーゼタンパク 質のアミノ酸配列は変化させない． （ｂ）［Ｍｅｔ−（１−１３３）ｈＩＬ−３（Ａｒｇ129）をコードするｐＭ ＯＮ５８４７（図５）の構築 ｈＩＬ−３遺伝子に由来するｃＤＮＡから大腸菌内でｈＩＬ−３を製造するた めに用いるプラスミドのレプリコン，プロモーター，リボソーム結合部位，転写 ターミネーターおよび抗生物質抵抗性マーカーを供給するためには，プラスミド ｐＭＯＮ２３４１を使用した． プラスミドｐＭＯＮ２３４１を制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIで処理し た．複製起源を含有する制限フラグメントを精製した．プラスミドｐＭＯＮ５８ ４６のＤＮＡをＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIで処理した．ｈＩＬ−３遺伝子を含 む制限フラグメントをゲル精製した．これらの精製制限フラグメントを混合して リゲートさせた．このリゲーション混合物を用いてコンピーテントなＪＭ１０１ 細胞をアンピシリン抵抗性に形質転換した．コロニーを採取し，プラスミドＤＮ Ａを精製し，制限酵素を用いて分析した．ｐＭＯＮ５８４７はｐＭＯＮ２３４１ のレプリコンと，クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子に代 えてｈＩＬ−３遺伝子を有するプラスミドとして同定された．このプラスミドを 繋留するＪＭ１０１細胞をＭ９培地中で培養し，上述のようにナリジキシン酸で 処理した．培養液のサンプルについてタンパク質含量を調べた．このｈＩＬ−３ ムテインは，クーマッシー染色ポリアクリルアミドゲル上で測定すると，総細胞 タンパク質の約６％産生されたことが明らかにされた． 例３ ［Ｍｅｔ−（１−１３３）ｈＩＬ−３（Ａｒｇ129）をコードするｐＭＯＮ５ ８５４（図７）の構築 大腸菌内へのｈＩＬ−３の蓄積を増大させるために，タンパク質のアミノ末端 部分のコード配列を，高レベルのタンパク質を産生する大腸菌遺伝子中に見出さ れるコドンの偏り（Ｇｏｕｙ ＆ Ｇａｕｔｉｅｒ，１９８２）をより厳密に反映 するように変化させた．遺伝子のアミノ末端部分のコード配列を変化させるため には，コード配列内のＮｃｏＩおよびＨｐａＩ部位の間に，１対の合成オリゴヌ クレオチドを挿入した．プラスミドｐＭＯＮ５８４７のＤＮＡ（例２）約０．５ μｇをＮｃｏＩとＨｐａＩで処理した．このＤＮＡを，以下の配列をもつアニー リングされたオリゴヌクレオチド対と混合した． フラグメントをリゲートさせた．リゲーション混合物を用いてコンピーテント なＪＭ１０１をアンピシリン抵抗性に形質転換した．コロニーをブロス中に採取 した．培養液から，プラスミドＤＮＡを作成し，合成配列中には存在するが，ｐ ＭＯＮ５８４７の配列中のＮｃｏＩとＨｐａＩ部位の間には存在しないＤｄｅＩ 部位（ＣＴＮＡＧ）の存在について調べた．新しい組換えプラスミドはｐＭＯＮ ５８５４と命名された．ｐＭＯＮ５８５４中のｈＩＬ−３遺伝子のアミノ末端部 分のコード配列内のＤＮＡのヌクレオチド配列を，ＤＮＡ配列決定によって決定 してリゲーションに用いられた合成オリゴヌクレオチドの場合と同一であること が見出された．このプラスミドを繋留するＪＭ１０１細胞の培養液を増殖させ， ナリジキシン酸で処理してｈＩＬ−３変異タンパク質の産生を誘導した．クーマ ッシーゲル上でのタンパク質分析により，ｈＩＬ−３ムテインの蓄積はｐＭＯＮ ５８５４を繋留する培養液中の総細胞タンパク質の約２５％で，これはｐＭＯＮ ５８４７を繋留する培養液の場合に比し有意に高値であった． 例４ Ｍｅｔ−（１−１２５）ｈＩＬ−３をコードするｐＭＯＮ５８８７（図１２） の構築 ｐＭＯＮ５８５４（例３）のプラスミドＤＮＡをＥｃｏＲＩ（５ＨｉｎｄIII で処理し，大フラグメントゲルを精製した．このＤＮＡ約０．５μｇをｈＩＬ− ３のアミノ酸１０７〜１２５をコードするアニーリングされたオリゴヌクレオチ ド対１ピコモルにリゲートさせた．これらオリゴヌクレオチドの配列を以下に示 す． ＥｃｏＲＩ〜ＨｉｎｄIII リゲーション後，そのＤＮＡを用いて，コンピーテントＪＭ１０１細胞をアン ピシリン抵抗性に形質転換した．コロニーをブロス中に採取しプラスミドＤＮＡ を各培養液から単離した．プラスミドＤＮＡの制限解析によりｐＭＯＮ５８５４ の場合よりも短いＥｃｏＲＩ〜ＨｉｎｄIIIフラグメントの存在が示された．こ のＥｃｏＲＩとＨｉｎｄIII部位の間のコード配列の部分のヌクレオチド配列は ，置換された配列の正確度を確認するために決定された．以下のアミノ酸配列を 有するＭｅｔ−（１−１２５）ｈＩＬ−３をコードするこの新プラスミドはｐＭ ＯＮ５８８７と命名された． 例５ ［Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３］をコードするｐＭＯＮ５９ ６７の構築 大腸菌株ＧＭ４８（ｄａｍ−）から単離されたｐＭＯＮ５８８７のプラスミド ＤＮＡをＮｃｏＩとＣｌａＩで切断し，アミノ酸［ＭｅｔＡｌａ（１５−２０） ｈＩＬ−３をコードするアニーリングされたオリゴヌクレオチド対１ピコモルに リゲートさせた．これらのオリゴヌクレオチドの配列を以下に示す． 得られたリゲーション混合物を用いて，コンピーテントな大腸菌ＪＭ１０１細 胞をアンピシリン抵抗性コロニーに形質転換した．これらの細胞からプラスミド ＤＮＡを単離し，ＮｃｏＩおよびＮｓｉＩを用いた制限解析により，挿入された フラグメントのサイズがｐＭＯＮ５８８７のフラグメントよりも小さいことが確 認された．ＮｃｏＩとＣｌａＩの間の領域のヌクレオチド配列を決定しそれが合 成オリゴヌクレオチドの配列であることを認めた．この新プラスミドはｐＭＯＮ ５９６７と命名され，それを含有する細胞ではタンパク質産生が誘導された．超 音波処理細胞ペレットおよび上清をタンパク質の精製およびバイオアッセイに使 用した． 例６ ［Ｍｅｔ−Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３］をコードするｐＭＯＮ５９ ７８の構築 大腸菌株ＧＭ４８（ｄａｍ−）から単離されたｐＭＯＮ５９６７のプラスミド ＤＮＡをＣｌａＩとＮｓｉＩで切断し，ｈＩＬ−３アミノ酸２０〜７０（図２） をコードする６個のオリゴヌクレオチドのアニーリングしたアッセンブリ−１ピ コモルにリゲートさせた．この合成フラグメントは，３種の唯一の制限部位であ る，ＥｃｏＲＶ，ＸｈｏＩおよびＰｓｔＩをコードする．これらのオリゴヌクレ オチドの配列は図２に示す． 得られたリゲーション混合物を用いて，コンピーテントな大腸菌ＪＭ１０１細 胞をアンピシリン抵抗性コロニーに形質転換した．プラスミドＤＮＡを単離し， 新たな制限部位ＥｃｏＲＶの存在を，ＸｂａＩおよびＥｃｏＲＶでスクリーニン グした．ＣｌａＩとＮｓｉＩの間の領域のＤＮＡ配列を決定して，合成オリゴヌ クレオチドの配列と同一であることを見出した．この新プラスミドは，ｐＭＯＮ ５９７８と命名され，それを含有する細胞ではタンパク質産生が誘導された．超 音波処理した細胞ペレットおよび上清をタンパク質の精製およびバイオアッセイ に使用した． プラスミドｐＭＯＮ５９７８は，以下に示すアミノ酸配列を有する［Ｍｅｔ− Ａｌａ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３］をコードする． 例７ ｐＭＯＮ１３３５６の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９８８のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩとＥｃｏＲＶで消化 した．得られた４１９０塩基対のＮｃｏＩ，ＥｃｏＲＶフラグメントは以下の遺 伝子要素，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３２７複製の起源，転写 ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源，ｐＡｒａＢＡＤプロモーター， ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リーダー，および（１５−１２５） ｈＩＬ−３のアミノ酸４７〜１２５をコードする塩基を含有する．ｐＭＯＮ５９ ８８からの４１９０塩基対ＮｃｏＩ，ＥｃｏＲＶ制限フラグメントは表２からの 以下のアニーリングした相補性オリゴヌクレオチドにリゲートさせた． オリゴ＃１３［配列番号：２７］ オリゴ＃１４［配列番号：２８］ リゲーション反応混合物を用いて大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換し， トランスフォーマント細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．ＬＢ培地 中で増殖させたコロニーからプラスミドＤＮＡを単離し，挿入されたフラグメン トのサイズを，制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIを用いて二重消化する制限 解析によって決定した．得られたプラスミド中では，（１５−１２５）ｈＩＬ− ３遺伝子内におけるＮｃｏＩとＥｃｏＲＶ制限部位の間の９９塩基は上述のオリ ゴヌクレオチドからの２２塩基で置換されている．このリンカーはまたＮｄｅＩ 認識配列も含有する． 例８ ｐＭＯＮ１３３４４の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３５６のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩとＥｃｏＲＶで消 化した．得られた４１９０塩基対ＮｃｏＩ，ＥｃｏＲＶフラグメントは以下の遺 伝子要素，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３２７複製の起源，転写 ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源，ｐＡｒａＢＡＤプロモーター， ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リーダー，および（１５−１２５） ｈＩＬ−３のアミノ酸４７〜１２５をコードする塩基を含有する．第二のＤＮＡ フラグメントは，重複末端を有する以下の相補性オリゴヌクレオチド対を用いた 合成遺伝子アッセンブリーによって生成させた． オリゴ＃１ ［配列番号：１５］ オリゴ＃２ ［配列番号：１６］ オリゴ＃３ ［配列番号：１７］ オリゴ＃４ ［配列番号：１８］ オリゴ＃９ ［配列番号：２３］ オリゴ＃１０［配列番号：２４］ 組み立てられたオリゴヌクレオチドには，ＮｃｏＩおよびＥｃｏＲＶ制限末端 ならびに，以下のアミノ酸置換，すなわち，１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ａ， ３７Ｐ，４２Ａ，および４５Ｖを有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸 １５〜４６をコードするＤＮＡ配列が創製される．（１５−１２５）ｈＩＬ−３ のアミノ酸１５〜４６をコードするコドンは，アミノ酸置換が行われた位置を除 いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見出されるコドンである．ｐＭＯＮ１３３５６か らの４１９０塩基対ＮｃｏＩ，ＥｃｏＲＶ制限フラグメントをアニーリングされ たオリゴヌクレオチド対とリゲートさせた．リゲーション反応生成物をＮｄｅＩ で消化し，ついでこれを用いて大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．ト ランスフォーマント細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．ＬＢ培地中 で増殖させたコロニーからプラスミドＤＮＡを単離した．ＤＮＡ配列はオリゴヌ クレオチドの配列であることが決定された．プラスミドｐＭＯＮ１３３４４は， 以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃２ ＤＮＡ配列＃１０［配列番号：１０６］は上述のｐＭＯＮ１３３４４ポリペプ チドをコードする． 例９ ｐＭＯＮ１３３４５の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３５６からの４１９０塩基対ＮｃｏＩ，ＥｃｏＲＶ制 限フラグメントを，以下のアニーリングされた相補性オリゴヌクレオチド対にリ ゲートさせた． オリゴ＃１ ［配列番号：１５］ オリゴ＃２ ［配列番号：１６］ オリゴ＃５ ［配列番号：１９］ オリゴ＃６ ［配列番号：２０］ オリゴ＃１１［配列番号：２５］ オリゴ＃１２［配列番号：２６］ 組み立てられたオリゴヌクレオチドには，ＮｃｏＩおよびＥｃｏＲＶ制限末端 ならびに，以下のアミノ酸置換すなわち１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ｎ，３７ Ｐ，４２Ｓおよび４５Ｍを有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜 ４６をコードするＤＮＡ配列が創製される．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミ ノ酸１５〜４６をコードするコドンは，アミノ酸置換が行われた位置を除いて， ｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．リゲーション反応生成物を， ＮｄｅＩで消化し，これを大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１の形質転換に使用した． トランスフォーマント細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．ＬＢ培地 中で増殖させたコロニーからプラスミドＤＮＡを単離した．ＤＮＡの配列決定に よりその配列はオリゴヌクレオチドの配列であることが決定された．プラスミド ｐＭＯＮ１３３４５は，以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ− ３変異体をコードする． ペプチド＃３ ＤＮＡ配列＃１１［配列番号：１０７］は上述のｐＭＯＮ１３３４５ポリペプ チドをコードする． 例１０ ｐＭＯＮ１３３４６の構築 ｐＭＯＮ１３３５６からの４１９０塩基対，ＮｃｏＩ，ＥｃｏＲＶ制限フラグ メントを，以下のアニーリングされた相補性オリゴヌクレオチド対にリゲートさ せた． オリゴ＃１ ［配列番号：１５］ オリゴ＃２ ［配列番号：１６］ オリゴ＃７ ［配列番号：２１］ オリゴ＃８ ［配列番号：２２］ オリゴ＃１１［配列番号：２５］ オリゴ＃１２［配列番号：２６］ 組み立てられたオリゴヌクレオチドには，ＮｃｏＩおよびＥｃｏＲＶ制限末端 ならびに，以下のアミノ酸置換すなわち１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｖ，３２Ａ，３７ Ｓ，４２Ｓおよび４５Ｍを有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜 ４６をコードするＤＮＡ配列が創製される．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミ ノ酸１５〜４６をコードするコドンは，アミノ酸置換が行われた位置を除いて， ｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．リゲーション反応生成物を， ＮｄｅＩで消化し，これを大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１の形質転換に使用した． トランスフォーマント細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．ＬＢ培地 中で増殖させたコロニーからプラスミドＤＮＡを単離し，ＤＮＡの配列決定によ りその配列はオリゴヌクレオチドの配列であることが決定された．プラスミド， ｐＭＯＮ１３３４６は，以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ− ３変異体をコードする． ペプチド＃４ ＤＮＡ配列＃１２［配列番号：１０８］は上述のｐＭＯＮ１３３４６ポリペプ チドをコードする． 例１１ ｐＭＯＮ１３３５７の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９８８のＤＮＡを制限酵素ＥｃｏＲＶおよびＮｓｉＩで 消化した．得られた４２１８塩基対ＥｃｏＲＶ，ＮｓｉＩフラグメントは，以下 の遺伝子要素，すなわち，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３２７複 製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源，ｐＡｒａＢＡＤ プロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リーダー，ならびに （１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜４６，および７２〜１２５をコー ドする塩基を含有する．ｐＭＯＮ５９８８からの４２１８塩基対のＥｃｏＲＶ， ＮｓｉＩ制限フラグメントを，以下のアニーリングした相補性オリゴヌクレオチ ドにリゲートさせた． オリゴ＃１９［配列番号：３３］ オリゴ＃２０［配列番号：３４］ リゲーション反応混合物を使用して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換し た．トランスフォーマント細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．ＬＢ 培地中で増殖させたコロニーからプラスミドＤＮＡを単離し，挿入されたフラグ メントのサイズを，制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIを用いて二重消化する 制限解析によって決定した．得られたプラスミド中では（１５−１２５）ｈＩＬ −３遺伝子内におけるＥｃｏＲＶとＮｓｉＩ制限部位の間の７１塩基は上述のオ リゴヌクレオチドからの２２塩基で置換されている．このリンカーはまたＮｄｅ Ｉ認識配列を含有する． 例１２ ｐＭＯＮ１３３４７の構築 ｐＭＯＮ１３３５７からの４２１８塩基対ＥｃｏＲＶ，ＮｓｉＩ制限フラグメ ントを以下のアニーリングされた相補性オリゴヌクレオチド対にリゲートした． オリゴ＃２１［配列番号：３５］ オリゴ＃２２［配列番号：３６］ オリゴ＃２５［配列番号：３９］ オリゴ＃２６［配列番号：４０］ オリゴ＃３１［配列番号：４５］ オリゴ＃３２［配列番号：４６］ 組み立てられたオリゴヌクレオチドには，ＥｃｏＲＶおよびＮｓｉＩ制限末端 ならびに，以下のアミノ酸置換すなわち５１Ｒ，５５Ｌ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７ Ｎ，および６９Ｅを有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸４７〜７１を コードするＤＮＡ配列が創製される．（１５−１２５）ｈＩＬ−３の４７〜７１ アミノ酸をコードするコドンは，アミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ− ３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．リゲーション反応生成物をＮｄｅＩで 消化し，これを大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１の形質転換に使用した．トランスフ ォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．ＬＢ培地中で増殖 させたコロニーからプラスミドＤＮＡを単離した．ＤＮＡ配列決定によりその配 列はオリゴヌクレオチドの配列であることが決定された．プラスミド，ｐＭＯＮ １３３４７は，以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体 をコードする． ペプチド＃５ ＤＮＡ配列＃１３［配列番号：１０９］は上述のｐＭＯＮ１３３４７ポリペプ チドをコードする． 例１３ ｐＭＯＮ１３３４８の構築 ｐＭＯＮ１３３５７からの４２１８塩基対ＥｃｏＲＶ，ＮｓｉＩ制限フラグメ ントを以下のアニーリングされた相補性オリゴヌクレオチド対にリゲートした． オリゴ＃２１［配列番号：３５］ オリゴ＃２２［配列番号：３６］ オリゴ＃２７［配列番号：４１］ オリゴ＃２８［配列番号：４２］ オリゴ＃３１［配列番号：４５］ オリゴ＃３２［配列番号：４６］ 組み立てられたオリゴヌクレオチドには，ＥｃｏＲＶおよびＮｓｉＩ制限末端 ならびに，以下のアミノ酸置換すなわち５１Ｒ，５５Ｌ，６０Ｓ，６２Ｖ，６７ Ｎ，および６９Ｅを有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸４７〜７１を コードするＤＮＡ配列が創製される．（１５−１２５）ｈＩＬ−３の４７〜７１ アミノ酸をコードするコドンは，アミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ− ３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．リゲーション反応生成物をＮｄｅＩで 消化し，これを大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１の形質転換に使用した．トランスフ ォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．ＬＢ培地中で増殖 させたコロニーからプラスミドＤＮＡを単離した．ＤＮＡ配列決定によりその配 列はオリゴヌクレオチドの配列であることが決定された．プラスミド，ｐＭＯＮ １３３４８は，以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体 をコードする． ペプチド＃６ ＤＮＡ配列＃１４［配列番号：１１０］は上述のｐＭＯＮ１３３４８ポリペプ チドをコードする． 例１４ ｐＭＯＮ１３３４９の構築 ｐＭＯＮ１３３５７からの４２１８塩基対ＥｃｏＲＶ，ＮｓｉＩ制限フラグメ ントを以下のアニーリングされた相補性オリゴヌクレオチド対にリゲートした． オリゴ＃２３［配列番号：３７］ オリゴ＃２４［配列番号：３８］ オリゴ＃２５［配列番号：３９］ オリゴ＃２６［配列番号：４０］ オリゴ＃２９［配列番号：４３］ オリゴ＃３０［配列番号：４４］ 組み立てられたオリゴヌクレオチドには，ＥｃｏＲＶおよびＮｓｉＩ制限末端 ならびに，以下のアミノ酸置換すなわち５１Ｒ，５５Ｔ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７ Ｈ，および６９Ｅを有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸４７〜７１を コードするＤＮＡ配列が創製される．（１５−１２５）ｈＩＬ−３の４７〜７１ アミノ酸をコードするコドンは，アミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ− ３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．リゲーション反応生成物をＮｄｅＩで 消化し，これを大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１の形質転換に使用した．トランスフ ォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．ＬＢ培地中で増殖 させたコロニーからプラスミドＤＮＡを単離し，そのＤＮＡ配列決定によりその 配列はオリゴヌクレオチドの配列であることが決定された．プラスミドｐＭＯＮ １３３４９は，以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体 をコードする． ペプチド＃７ ＤＮＡ配列＃１５［配列番号：１１１］は上述のｐＭＯＮ１３３４９ポリペプ チドをコードする． 例１５ ｐＭＯＮ１３３５８の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９８８のＤＮＡを制限酵素ＮｓｉＩおよびＥｃｏＲＩで 消化した．得られた４１７８塩基対ＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＩフラグメントは，以下 の遺伝子要素，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３２７複製の起源， 転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起源，ｐＡｒａＢＡＤプロモー ター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リーダー，ならびに（１５− １２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜７１および１０６〜１２５をコードする塩 基を含有する．ｐＭＯＮ５９８８からの４１７８塩基対ＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＩ制 限フラグメントを，以下のアニーリングした相補性オリゴヌクレオチドにリゲー トした． オリゴ＃１５［配列番号：２９］ オリゴ＃１６［配列番号：３０］ リゲーション反応混合物を使用して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換し た．トランスフォーマント細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．ＬＢ 培地中で増殖させたコロニーからプラスミドＤＮＡを単離し，挿入されたフラグ メントのサイズを，制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIを用いて二重消化する 制限解析によって決定した．得られたプラスミド中では（１５−１２５）ｈＩＬ −３遺伝子内におけるＮｓｉＩとＥｃｏＲＩ制限部位の間の１１１塩基は，上述 のオリゴヌクレオチドからの２４塩基によって置換されている．このリンカーは またＮｄｅＩ認識配列を含有する． 例１６ ｐＭＯＮ１３３５０の構築 ｐＭＯＮ１３３５８からの４１７８塩基対ＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＩ制限フラグメ ントを以下のアニーリングされた相補性オリゴヌクレオチド対にリゲートした． オリゴ＃４１［配列番号：５５］ オリゴ＃４２［配列番号：５６］ オリゴ＃３９［配列番号：５３］ オリゴ＃４０［配列番号：５４］ オリゴ＃３５［配列番号：４９］ オリゴ＃３６［配列番号：５０］ オリゴ＃４３［配列番号：５７］ オリゴ＃４４［配列番号：５８］ 組み立てられたオリゴヌクレオチドには，ＮｓｉＩおよびＥｃｏＲＩ制限末端 ならびに，以下のアミノ酸置換すなわち７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｑ，８７ Ｓ，９３Ｓ，９８１，１０１Ａ，１０５Ｑをもつ（１５−１２５）ｈＩＬ−３の アミノ酸７２〜１０５をコードするＤＮＡ配列が創製される．（１５−１２５） ｈＩＬ−３のアミノ酸７２〜１０５をコードするコドンは，アミノ酸置換が行わ れた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．リゲーショ ン反応生成物をＮｄｅＩで消化し，これを大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１の形質転 換に使用した．トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選 択した．ＬＢ培地中で増殖させたコロニーから，プラスミドＤＮＡを単離した． そのＤＮＡの配列決定によりその配列はオリゴヌクレオチドの配列であることが 決定された．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３５０は，以下のアミノ酸配列を有する （１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃８ ＤＮＡ配列＃１６［配列番号：１１２］は上述のｐＭＯＮ１３３５０ポリペプ チドをコードする． 例１７ ｐＭＯＮ１３３５５の構築 ｐＭＯＮ１３３５８からの４１７８塩基対ＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＩ制限フラグメ ントを以下のアニーリングされた相補性オリゴヌクレオチド対にリゲートした． オリゴ＃４１［配列番号：５５］ オリゴ＃４２［配列番号：５６］ オリゴ＃３７［配列番号：５１］ オリゴ＃３８［配列番号：５２］ オリゴ＃３３［配列番号：４７］ オリゴ＃３４［配列番号：４８］ オリゴ＃４３［配列番号：５７］ オリゴ＃４４［配列番号：５８］ 組み立てられたオリゴヌクレオチドには，ＮｓｉＩおよびＥｃｏＲＩ制限末端 ならびに，以下のアミノ酸置換すなわち７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ，８７ Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１０５Ｑをもつ（１５−１２５）ｈＩＬ−３の アミノ酸７２〜１０５をコードするＤＮＡ配列が創製される．（１５−１２５） ｈＩＬ−３のアミノ酸７２〜１０５をコードするコドンは，アミノ酸置換が行わ れた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．リゲーショ ン反応生成物をＮｄｅＩで消化し，これを大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１の形質転 換に使用した．トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選 択した．ＬＢ培地中で増殖させたコロニーから，プラスミドＤＮＡを単離した． そのＤＮＡの配列決定により，その配列はオリゴヌクレオチドの配列であること が決定された．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３５５は以下のアミノ酸配列を有する （１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃９ ＤＮＡ配列＃１７［配列番号：１１３］は上述のｐＭＯＮ１３３５５ポリペプ チドをコードする． 例１８ ｐＭＯＮ１３３５９の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９８８のＤＮＡを制限酵素ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄII Iで消化した．得られた４２２５塩基対ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは ，以下の遺伝子要素，すなわちβ−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３２ ７複製の起源，転写ターミネーターとしてのファージｆ１の複製の起源，ｐＡｒ ａＢＡＤプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リーダーお よび（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜１０５をコードする塩基を含 有する．ｐＭＯＮ５９８８からの４２２５塩基対ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄIII制限 フラグメントを以下のアニーリングした相補性オリゴヌクレオチドにリゲートし た． オリゴ＃１７［配列番号：３１］ オリゴ＃１８［配列番号：３２］ リゲーション反応生成物を使用して，大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換 した．トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した． ＬＢ培地中で増殖させたコロニーからプラスミドＤＮＡを単離し，挿入されたフ ラグメントのサイズを，制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIを用いて二重消化 する制限解析によって決定した．得られたプラスミド中では，（１５−１２５） ｈＩＬ−３遺伝子内におけるＥｃｏＲＩとＨｉｎｄIII制限部位の間の６４塩基 は上述のオリゴヌクレオチドからの２０塩基で置換されている．このリンカーは またＮｄｅＩ認識配列を含有する． 例１９ ｐＭＯＮ１３３５２の構築 ｐＭＯＮ１３３５９からの４２２５塩基対ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄIII制限フラ グメントを以下のアニーリングした相補性オリゴヌクレオチド対にリゲートした ． オリゴ＃４５［配列番号：５９］ オリゴ＃４６［配列番号：６０］ オリゴ＃４９［配列番号：６３］ オリゴ＃５０［配列番号：６４］ 組み立てられたオリゴヌクレオチドには，ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄIII制限 末端ならびに，以下のアミノ酸置換すなわち１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑおよ び１２３Ｅを有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１０６〜１２５をコ ードするＤＮＡ配列が創製される．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１０ ６〜１２５をコードするコドンはアミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ− ３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．リゲーション反応生成物をＮｄｅＩで 消化して，これを大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１の形質転換に使用した．トランス フォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．ＬＢ培地中で増 殖させたコロニーから，プラスミドＤＮＡを単離した．ＤＮＡの配列決定により ，その配列はオリゴヌクレオチドの配列であることが決定された．プラスミド， ｐＭＯＮ１３３５２は以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３ 変異体をコードする． ペプチド＃１０ ＤＮＡ配列＃１８［配列番号：１１４］は上述のｐＭＯＮ１３３５２ポリペプ チドをコードする． 例２０ ｐＭＯＮ１３３５４の構築 ｐＭＯＮ１３３５９からの４２２５塩基対ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄIII制限フラ グメントを以下のアニーリングした相補性オリゴヌクレオチド対にリゲートした ． オリゴ＃４５［配列番号：５９］ オリゴ＃４６［配列番号：６０］ オリゴ＃４７［配列番号：６１］ オリゴ＃４８［配列番号：６２］ 組み立てられたオリゴヌクレオチドには，ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄIII制限 末端ならびに，以下のアミノ酸置換，すなわち，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１１７Ｓ ，１２０Ｈおよび１２３Ｅを有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１０ ６〜１２５をコードするＤＮＡ配列が創製される．（１５−１２５）ｈＩＬ−３ のアミノ酸１０６〜１２５をコードするコドンはアミノ酸置換が行われた位置を 除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．リゲーション反応生成 物をＮｄｅＩで消化して，これを大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１の形質転換に使用 した．トランスフォーマント細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．Ｌ Ｂ培地中で増殖させたコロニーから，プラスミドＤＮＡを単離した．そのＤＮＡ の配列決定により，配列はオリゴヌクレオチドの配列であることが決定された． プラスミド，ｐＭＯＮ１３３５４は以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５ ）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃１１ ＤＮＡ配列＃１９［配列番号：１１５］は上述のｐＭＯＮ１３３５４ポリペプ チドをコードする． 例２１ ｐＭＯＮ１３３６０の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３５２のＤＮＡを制限酵素ＮｓｉＩおよびＥｃｏＲII Iで消化し，４１７８塩基対ＮｓｉＩ，ＥｃｏＲIIIフラグメントを得た．ｐＭＯ Ｎ１３３５２から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源 ，ｐＡｒａＢＡＤプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リ ーダーならびに（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜７１および１０６ 〜１２５をコードする塩基である．プラスミドｐＭＯＮ１３３５０を，ＮｓｉＩ およびＥｃｏＲＩで消化した．得られた１１１塩基対ＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＩフラ グメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２〜１０５をコードする． 溶出した制限フラグメントを，Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ３０濃縮機を用いて濃縮し， 脱塩した．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合物を用いて大 腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマント細菌をアンピ シリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単離し，制限解析によっ て分析した．正しい挿入体を含むクローンはｐＭＯＮ１３３５２と比べてＸｍｎ Ｉ部位が消失していた．陽性クローンは６１５塩基対のＸｍｎＩフラグメントの 消失によって同定した．正しい挿入体を確認するためにＤＮＡの配列を決定した ．得られた（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は以下のアミノ酸置換７３Ｇ，７ ６Ａ，７９Ｒ，８２Ｑ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８１，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９ Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑ，および１２３Ｅを有する．（１５−１２５）ｈＩＬ− ３のアミノ酸７２〜１０５をコードするコドンは，アミノ酸置換が行われた位置 を除 いて，ｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．プラスミド，ｐＭＯＮ １３３６０は以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体を コードする． ペプチド＃１２ ＤＮＡ配列＃２３［配列番号：１１９］は上述のｐＭＯＮ１３３６０ポリペプ チドをコードする． 例２２ ｐＭＯＮ１３３６１の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３５２ＤＮＡを制限酵素ＮｓｉＩおよびＥｃｏＲＩで 消化し，４１７８塩基対のＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＩフラグメントを得た．ｐＭＯＮ １３３５２から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ）， ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源， ｐＡｒａＢＡＤプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リー ダーならびに（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜７１および１０６〜 １２５をコードする塩基である．プラスミドｐＭＯＮ１３３５５を，ＮｓｉＩお よびＥｃｏＲＩで消化した．得られた１１１塩基対ＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＩフラグ メントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２〜１０５をコードする．制 限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合物を用いて大腸菌Ｋ−１２ 株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有 プレート上で選択した．正しい挿入体を含むクローンはさらにＲｓａＩ部位を含 有し，これが１２００塩基対のＲｓａＩフラグメントを生じる．正しい挿入体を 確認するためにＤＮＡの配列を決定した．得られた（１５−１２５）ｈＩＬ−３ 変異体は，以下のアミノ酸置換７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３ Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑおよび１２３ Ｅを有する．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２〜１２５をコードする コドンは，アミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見ら れるコドンである．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３６１は以下のアミノ酸配列を有 する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃１３ ＤＮＡ配列＃２４［配列番号：１２０］は上述のｐＭＯＮ１３３６１ポリペプ チドをコードする． 例２３ ｐＭＯＮ１３３６２の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３５４ＤＮＡを制限酵素ＮｓｉＩおよびＥｃｏＲＩで 消化し，４１７８塩基対のＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＩフラグメントを得た．ｐＭＯＮ １３３５４から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ）， ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源， ｐＡｒａＢＡＤプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リー ダーならびに（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜７１および１０６〜 １２５をコードする塩基である．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３５５のＤＮＡを， ＮｓｉＩとＥｃｏＲＩで消化した．得られた１１１塩基対ＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＩ フラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２〜１０５をコードす る．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合物を使用して大腸菌 Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマントの細菌をアンピシ リン含有プレート上で選択した．正しい挿入体を含むクローンはさらにＲｓａＩ 部位を含有し，これにより１２００塩基対のＲｓａＩフラグメントを生じる．正 しい挿入体を確認するためにＤＮＡ配列を決定した．得られた（１５−１２５） ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ， ８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１１７Ｓ ，１２０Ｈおよび１２３Ｅを有する．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７ ２〜１２５をコードするコドンは，アミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ −３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３６２は 以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃１４ ＤＮＡ配列＃２５［配列番号：１２１］は上述のｐＭＯＮ１３３６２ポリペプ チドをコードする． 例２４ ｐＭＯＮ１３３６３の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３４４のＤＮＡを制限酵素ＮｓｉＩとＥｃｏＲＶで消 化して，４２１８塩基対のＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＶフラグメントを得た．ｐＭＯＮ １３３４４から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ）， ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源， ｐＡｒａＢＡＤプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リー ダー，ならびに（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜４６および７２〜 １２５をコードする塩基である．プラスミドｐＭＯＮ１３３４８ＤＮＡはＮｓｉ ＩおよびＥｃｏＲＶで消化した．得られた７１塩基対のＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＶフ ラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸４７〜７１をコードする． 制限フラグメントをＴ４リガーゼでリゲートさせ，リゲーション反応混合物を用 いて大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマントの細菌 をアンピシリン含有プレート上において選択した．正しい挿入体を含むクローン はＤｄｅＩ部位をさらに含有し，これによりｐＭＯＮ１３３４４中の９７３塩基 対に相当する８０６および１６７塩基対のＤｄｅＩ制限フラグメントを生じる． 正しい挿入体を確認するためＤＮＡ配列を決定した．得られた（１５−１２５） ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，１８１，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ａ， ３７Ｐ，４２Ａ，４５Ｖ，５１Ｒ，５５Ｌ，６０Ｓ，６２Ｖ，６７Ｎおよび６９ Ｅを有する．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜７１をコードするコ ドンは，アミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られ るコドンである．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３６３は，以下のアミノ酸配列を有 する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃１５ ＤＮＡ配列＃２０［配列番号：１１６］は上述のｐＭＯＮ１３３６３ポリペプ チドをコードする． 例２５ ｐＭＯＮ１３３６４の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３４５のＤＮＡを制限酵素ＮｓｉＩとＥｃｏＲＶで消 化して，４２１８塩基対のＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＶフラグメントを得た．ｐＭＯＮ １３３４５から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ）， ｐＢＲ３２７複製の起源．転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源， ｐＡｒａＢＡＤプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リー ダー，ならびに（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜４６および７２〜 １２５をコードする塩基である．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３４９のＤＮＡを， ＮｓｉＩとＥｃｏＲＶで消化した．得られた７１塩基対のＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＶ フラグメントは，（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸４７〜７１をコードす る．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合物を使用して大腸菌 Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマントの細菌をアンピシ リン含有プレート上で選択した．正しい挿入体を含むクローンはさらにＤｄｅＩ 部位を含有し，これにより，ｐＭＯＮ１３３４４中の９７３塩基対に匹敵する， ８０６および１６７塩基対のＤｄｅＩ制限フラグメントを生じる．正しい挿入体 を確認するためにＤＮＡの配列を決定した．得られた（１５−１２５）ｈＩＬ− ３変異体は以下のアミノ酸置換１８１，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ｎ，３７Ｐ，４２ Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５Ｔ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｈおよび６９Ｅを有する． （１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜７１をコードするコドンは，アミ ノ酸置換が行われた位置を除いて，ｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンで ある．プラスミド．ｐＭＯＮ１３３６４は以下のアミノ酸配列を有する（１５− １２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃１６ ＤＮＡ配列＃２１［配列番号：１１７］は上述のｐＭＯＮ１３３６４ポリペプ チドをコードする． 例２６ ｐＭＯＮ１３３６５の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３４６のＤＮＡを制限酵素ＮｓｉＩとＥｃｏＲＶで消 化して，４２１８塩基対のＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＶフラグメントを得た．ｐＭＯＮ １３３４６から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ）， ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源， ｐＡｒａＢＡＤプロモーター，ｇ１０１，リボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リ ーダー，ならびに（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜４６および７２ 〜１２５をコードする塩基である．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３４７のＤＮＡを ，ＮｓｉＩとＥｃｏＲＶで消化した．得られた７１塩基対のＮｓｉＩ，ＥｃｏＲ Ｖフラグメントは，（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸４７〜７１をコード す る．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合物を使用して大腸菌 Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマントの細菌をアンピシ リン含有プレート上で選択した．正しい挿入体を含むクローンはさらにＤｄｅＩ 部位を含有し，これにより，ｐＭＯＮ１３３４４中における９７３塩基対に相当 する８０６および１６７塩基対のＤｄｅＩ制限フラグメントを生じる．正しい挿 入体を確認するために，ＤＮＡの配列を決定した．得られた（１５−１２５）ｈ ＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換１８１，２５Ｈ，２９Ｖ，３２Ａ，３７ Ｓ，４２Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５Ｌ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｎおよび６９Ｅを 有する．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜７１をコードするコドン は，アミノ酸置換が行われた位置を除いて，ｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られる コドンである．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３６５は以下のアミノ酸配列を有する （１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃１７ ＤＮＡ配列＃２２［配列番号：１１８］は上述のｐＭＯＮ１３３６５ポリペプ チドをコードする． 例２７ ｐＭＯＮ１３２９８の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９７８のＤＮＡを制限酵素ＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIII で 消化し，３７８９塩基対のＮｓｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭＯ Ｎ５９７８から誘導された遺伝子要素には，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源 ．ｐｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位および（１５−１２５ ）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜７１をコードする塩基がある．プラスミドｐＭＯ Ｎ１３３６０のＤＮＡを，ＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIで消化した．得られた１ ７５塩基対のＮｓｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは，（１５−１２５）ｈＩＬ −３のアミノ酸７２〜１２５をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リ ゲーション反応混合物を使用して，大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した ．トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラ スミドＤＮＡを単離し，制限解析によって分析し，配列を決定して正しい挿入体 を確認した．得られた（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置 換７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｑ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８１，１０１Ａ，１０ ５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑ，および１２３Ｅを有する．（１５−１２ ５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２〜１２５をコードするコドンは，アミノ酸置換が 行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．プラス ミド，ｐＭＯＮ１３２９８は以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩ Ｌ−３変異体をコードする． ペプチド＃１８ ＤＮＡ配列＃２９［配列番号：１２５］は上述のｐＭＯＮ１３２９８ポリペプ チドをコードする． 例２８ ｐＭＯＮ１３２９９の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９７８のＤＮＡを制限酵素ＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３７８９塩基対のＮｓｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭ ＯＮ５９７８から誘導された遺伝子要素には，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ ），ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起 源，ｐｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位および（１５−１２ ５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜７１をコードする塩基がある．プラスミドｐＭ ＯＮ１３３６１のＤＮＡを，ＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIで消化した．得られた １７５塩基対のＮｓｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは，（１５−１２５）ｈＩ Ｌ−３のアミノ酸７２〜１２５をコードする．制限フラグメントをリゲートし， リゲーション反応混合物を使用して，大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換し た．トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プ ラスミドＤＮＡを単離し，制限解析によって分析し，配列を決定して正しい挿入 体を確認した．得られた（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は以下のアミノ酸置 換，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１ ０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑ，および１２３Ｅを有する．（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２〜１２５をコードするコドンは，アミノ酸置換 が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．プラ スミド，ｐＭＯＮ１３２９９は以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈ ＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃１９ ＤＮＡ配列＃３０［配列番号：１２６］は上述のｐＭＯＮ１３２９９ポリペプ チドをコードする． 例２９ ｐＭＯＮ１３３００の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９７８のＤＮＡを制限酵素ＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３７８９塩基対のＮｓｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭ ＯＮ５９７８から誘導された遺伝子要素には，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ ），ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起 源，ｐｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位および（１５−１２ ５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜７１をコードする塩基がある．プラスミドｐＭ ＯＮ１３３６２のＤＮＡを，ＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIで消化した．得られた １７５塩基対のＮｓｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは，（１５−１２５）ｈＩ Ｌ−３のアミノ酸７２〜１２５をコードする．制限フラグメントをリゲートし， リゲーション反応混合物を使用して，大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換し た．トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プ ラスミドＤＮＡを単離し，制限解析によって分析し，配列を決定して正しい挿入 体を確認した．得られた（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は以下のアミノ酸置 換，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ，１ ０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１１７Ｓ，１２０Ｈ，および１２３Ｅを有する． （１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２〜Ｊ２５をコードするコドンは，ア ミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンで ある．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３００は以下のアミノ酸配列を有する（１５− １２５） ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃２０ ＤＮＡ配列＃３１［配列番号：１２７］は上述のｐＭＯＮ１３３００ポリペプ チドをコードする． 例３０ ｐＭＯＮ１３３０１の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９７８のＤＮＡを，制限酵素ＮｃｏＩおよびＮｓｉＩで 消化して，３７９４塩基対のＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントを得た．ｐＭＯＮ ５９７８から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐ ＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源，ｐ ｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位および（１５−１２５）ｈ ＩＬ−３のアミノ酸７２〜１２５をコードする塩基である．プラスミドｐＭＯＮ １３３６３のＤＮＡを，ＮｃｏＩおよびＮｓｉＩで消化した．得られた１７０塩 基対のＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ 酸１５〜７１をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応 混合物を使用して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォー マントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単 離し，制限解析によって分析し，配列を決定して正しい挿入体を確認した．得ら れた（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，１８１，２５ Ｈ，２９Ｒ，３２Ａ，３７Ｐ，４２Ａ，４５Ｖ，５１Ｒ，５５Ｌ，６０Ｓ，６２ Ｖ，６７Ｎおよび６９Ｅを有する．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５ 〜７１をコードするコドンはアミノ酸置換が行われた位置を除いて，ｈＩＬ−３ ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３０１は，以 下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃２１ ＤＮＡ配列＃２６［配列番号：１２２］は上述のｐＭＯＮ１３３０１ポリペプ チドをコードする． 例３１ ｐＭＯＮ１３３０２の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９７８のＤＮＡを，制限酵素ＮｃｏＩおよびＮｓｉＩで 消化して，３７９４塩基対のＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントを得た．ｐＭＯＮ ５９７８から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐ ＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源，ｐ ｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位および（１５−１２５）ｈ ＩＬ−３のアミノ酸７２〜１２５をコードする塩基である．プラスミドｐＭＯＮ １３３６４のＤＮＡを，ＮｃｏＩおよびＮｓｉＩで消化した．得られた１７０塩 基対のＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ 酸１５〜７１をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応 混合物を使用して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォー マントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単 離し，制限解析によって分析し，配列を決定して正しい挿入体を確認した．得ら れた（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，１８１，２５ Ｈ，２９Ｒ，３２Ｎ，３７Ｐ，４２Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５Ｔ，５９Ｌ，６２ Ｖ，６７Ｈおよび６９Ｅを有する。（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５ 〜７１をコードするコドンはアミノ酸置換が行われた位置を除いて，ｈＩＬ−３ ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３０２は以下 のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃２２ ＤＮＡ配列＃２７［配列番号：１２３］は上述のｐＭＯＮ１３３０２ポリペプ チドをコードする． 例３２ ｐＭＯＮ１３３０３の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９７８のＤＮＡを，制限酵素ＮｃｏＩおよびＮｓｉＩで 消化して，３７９４塩基対のＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントを得た．ｐＭＯＮ ５９７８から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐ ＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源，ｐ ｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位および（１５−１２５）ｈ ＩＬ−３のアミノ酸７２〜１２５をコードする塩基である．プラスミドｐＭＯＮ １３３６５のＤＮＡを，ＮｃｏＩおよびＮｓｉＩで消化した．得られた１７０塩 基対のＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ 酸１５〜７１をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応 混合物を使用して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォー マントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単 離し，制限解析によって分析し，配列を決定して正しい挿入体を確認した．得ら れた（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，１８１，２５ Ｈ，２９Ｖ，３２Ａ，３７Ｓ，４２Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５Ｌ，５９Ｌ，６２ Ｖ，６７Ｎおよび６９Ｅを有する．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５ 〜７１をコードするコドンはアミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃ ＤＮＡ配列に見られるコドンである．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３０３は以下の アミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃２３ ＤＮＡ配列＃２８［配列番号：１２４］は上述のｐＭＯＮ１３３０３ポリペプ チドをコードする． 例３３ ｐＭＯＮ１３２８７の構築 プラスミドｐＭＯＮ２３４１のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３６１９塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭ ＯＮ２３４１から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐＢＲ３２７複製の起源．転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源 ，ｐｒｅｃＡプロモーターおよびｇ１０Ｌリボソーム結合部位である．プラスミ ドｐＭＯＮ１３３６３のＤＮＡをＮｃｏＩおよびＮｓｉＩにより消化した．得ら れた１７０塩基対ＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ− ３のアミノ酸１５〜７１をコードする．プラスミドｐＭＯＮ１３３６０のＤＮＡ は，ＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIにより消化した．得られた１７５塩基対のＮｓ ｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２ 〜１２５をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合 物を使用して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマン トの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単離し ，制限解析によって分析し，配列を決定して正しい挿入体を確認した．得られた （１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，１８１，２５Ｈ， ２９Ｒ，３２Ａ，３７Ｐ，４２Ａ，４５Ｖ，５１Ｒ，５５Ｌ，６０Ｓ，６２Ｖ， ６７Ｎ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｑ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８１， １０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑ，および１２３Ｅを有する ．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜１２５をコードするコドンは， アミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドン である．プラスミド，ｐＭＯＮ１３２８７は以下のアミノ酸配列を有する（１５ −１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃２４ ＤＮＡ配列＃１［配列番号：９７］は上述のｐＭＯＮ１３２８７ポリペプチド をコードする． 例３４ ｐＭＯＮ１３２８８の構築 プラスミドｐＭＯＮ２３４１のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３６１９塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭ ＯＮ２３４１から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源 ，ｐｒｅｃＡプロモーターおよびｇ１０Ｌリボソーム結合部位である．プラスミ ドｐＭＯＮ１３３６４のＤＮＡはＮｃｏＩおよびＮｓｉＩによって消化した．得 られた１７０塩基対ＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ −３のアミノ酸１５〜７１をコードする．プラスミドｐＭＯＮ１３３６０のＤＮ ＡはＮｓｉＩとＨｉｎｄIIIで消化した．得られた１７５塩基対のＮｓｉＩ，Ｈ ｉｎｄIIIフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２〜１２５ をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合物を使用 して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマントの細菌 をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単離し，制限解 析によって分析し，配列を決定して正しい挿入体を確認した．得られた（１５− １２５）ｈＩＬ−３変異体は以下のアミノ酸置換１８１，２５Ｈ，２９Ｒ，３２ Ｎ，３７Ｐ，４２Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５Ｔ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｈ，６９ Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｑ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８１，１０１Ａ，１ ０５Ｑ， １０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑ，および１２３Ｅを有する．（１５−１２５）ｈ ＩＬ−３のアミノ酸１５〜１２５をコードするコドンは，アミノ酸置換が行われ た位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．プラスミド， ｐＭＯＮ１３２８８は以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３ 変異体をコードする． ペプチド＃２５ ＤＮＡ配列＃４［配列番号：１００］は上述のｐＭＯＮ１３２８８ポリペプチ ドをコードする． 例３５ ｐＭＯＮ１３２８９の構築 プラスミドｐＭＯＮ２３４１のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３６１９塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭ ＯＮ２３４１から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起 源，ｐｒｅｃＡプロモーターおよびｇ１０Ｌリボソーム結合部位である．プラス ミドｐＭＯＮ１３３６５のＤＮＡはＮｃｏＩおよびＮｓｉＩにより消化した．得 られた１７０塩基対ＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ −３のアミノ酸１５〜７１をコードする．ブラスミドｐＭＯＮ１３３６０のＤＮ Ａは ＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIにより消化した．得られた１７５塩基対のＮｓｉＩ ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２〜１ ２５をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合物を 使用して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマントの 細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単離し，制 限解析によって分析し，配列を決定して正しい挿入体を確認した．得られた（１ ５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，１８Ｉ，２５Ｈ，２９ Ｖ，３２Ａ，３７Ｓ，４２Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５Ｌ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７ Ｎ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｑ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８１，１０ １Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑ，および１２３Ｅを有する．（ １５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜１２５をコードするコドンは，アミ ノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンであ る．プラスミド，ｐＭＯＮ１３２８９は以下のアミノ酸配列を有する（１５−１ ２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃２６ ＤＮＡ配列＃７［配列番号：１０３］は上述のｐＭＯＮ１３２８９ポリペプチ ドをコードする． 例３６ ｐＭＯＮ１３２９０の構築 プラスミドｐＭＯＮ２３４１のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３６１９塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭ ＯＮ２３４１から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起 源，ｐｒｅｃＡプロモーターおよびｇ１０Ｌリボソーム結合部位である．プラス ミドｐＭＯＮ１３３６３のＤＮＡはＮｃｏＩおよびＮｓｉＩにより消化した．得 られた１７０塩基対ＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ −３のアミノ酸１５〜７１をコードする．プラスミドｐＭＯＮ１３３６１のＤＮ ＡはＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIにより消化した．得られた１７５塩基対のＮｓ ｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２ 〜１２５をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合 物を使用して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマン トの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単離し ，制限解析によって分析し，配列を決定して正しい挿入体を確認した．得られた （１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，１８Ｉ，２５Ｈ， ２９Ｒ，３２Ａ，３７Ｐ，４２Ａ，４５Ｖ，５１Ｒ，５５Ｌ，６０Ｓ，６２Ｖ， ６７Ｎ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ， １０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑ，および１２３Ｅを有する ．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜１２５をコードするコドンは， アミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドン である．プラスミド，ｐＭＯＮ１３２９０は以下のアミノ酸配列を有する（１５ −１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃２７ ＤＮＡ配列＃２［配列番号：９８］は上述のｐＭＯＮ１３２９０ポリペプチド をコードする． 例３７ ｐＭＯＮ１３２９２の構築 プラスミドｐＭＯＮ２３４１のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３６１９塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭ ＯＮ２３４１から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起 源，ｐｒｅｃＡプロモーターおよびｇ１０Ｌリボソーム結合部位である．プラス ミドｐＭＯＮ１３３６５のＤＮＡはＮｃｏＩおよびＮｓｉＩにより消化した．得 られた１７０塩基対ＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ −３のアミノ酸１５〜７１をコードする．プラスミドｐＭＯＮ１３３６１のＤＮ ＡはＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIにより消化した．得られた１７５塩基対のＮｓ ｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２ 〜１２５をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合 物を使用して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマン トの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単離し ，制限解叶によって分析し，配列を決定して正しい挿入体を確認した．得られた （１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，１８Ｉ，２５Ｈ， ２９Ｖ，３２Ａ，３７Ｓ，４２Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５Ｌ，５９Ｌ，６２Ｖ， ６７Ｎ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ， １０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑ，および１２３Ｅを有する ．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜１２５をコードするコドンは， アミノ酸置 換が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドンである．プ ラスミド，ｐＭＯＮ１３２９２は以下のアミノ酸配列を有する（１５−１２５） ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃２８ ＤＮＡ配列＃８［配列番号：１０４］は上述のｐＭＯＮ１３２９２ポリペプチ ドをコードする． 例３８ ｐＭＯＮ１３２９４の構築 プラスミドｐＭＯＮ２３４１のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３６１９塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭ ＯＮ２３４１から誘導された遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起 源，ｐｒｅｃＡプロモーターおよびｇ１０Ｌリボソーム結合部位である．プラス ミドｐＭＯＮ１３３６４のＤＮＡはＮｃｏＩおよびＮｓｉＩにより消化した．得 られた１７０塩基対ＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ −３のアミノ酸１５〜７１をコードする．プラスミドｐＭＯＮ１３３６２のＤＮ ＡはＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIにより消化した．得られた１７５塩基対のＮｓ ｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２ 〜１２５ をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合物を使用 して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマントの細菌 をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単離し，制限解 析によって分析し，配列を決定して正しい挿入体を確認した．得られた（１５− １２５）ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ， ３２Ｎ，３７Ｐ，４２Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５Ｔ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｈ， ６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１１７Ｓ，１２０Ｈおよび１２３Ｅを有する ．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜１２５をコードするコドンは， アミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドン である．プラスミド，ｐＭＯＮ１３２９４は以下のアミノ酸配列を有する（１５ −１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃２９ ＤＮＡ配列＃６［配列番号：１０２］は上述のｐＭＯＮ１３２９４ポリペプチ ドをコードする． 例３９ ｐＭＯＮ１３２９５の構築 プラスミドｐＭＯＮ２３４１のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIII で 消化し，３６１９塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭＯ Ｎ２３４１から誘導される遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ）， ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起源 ，ｐｒｅｃＡプロモーターおよびｇ１０Ｌリボソーム結合部位である．プラスミ ドｐＭＯＮ１３３６５のＤＮＡをＮｃｏＩおよびＮｓｉＩにより消化した．得ら れた１７０塩基対ＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ− ３のアミノ酸１５〜７１をコードする．プラスミドｐＭＯＮ１３３６２のＤＮＡ はＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIにより消化した．得られた１７５塩基対のＮｓｉ Ｉ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２〜 １２５をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合物 を使用して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマント の細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単離し， 制限解析によって分析し，配列を決定して正しい挿入体を確認した．得られた（ １５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，１８１，２５Ｈ，２ ９Ｖ，３２Ａ，３７Ｓ，４２Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５Ｌ，５９Ｌ，６２Ｖ，６ ７Ｎ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１ ０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１１７Ｓ，１２０Ｈおよび１２３Ｅを 有する．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜１２５をコードするコド ンは，アミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られる コドンである．プラスミド，ｐＭＯＮ１３２９５は以下のアミノ酸配列を有する （１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃３０ ＤＮＡ配列＃９［配列番号：１０５］は上述のｐＭＯＮ１３２９５ポリペプチ ドをコードする． 例４０ ｐＭＯＮ１３３１２の構築 プラスミドｐＭＯＮ２３４１のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３６１９塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭ ＯＮ２３４１から誘導される遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起 源，ｐｒｅｃＡプロモーターおよびｇ１０Ｌリボソーム結合部位である．プラス ミドｐＭＯＮ１３３６４のＤＮＡをＮｃｏＩおよびＮｓｉＩにより消化した．得 られた１７０塩基対ＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ −３のアミノ酸１５〜７１をコードする．プラスミドｐＭＯＮ１３３６１のＤＮ ＡはＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIにより消化した．得られた１７５塩基対のＮｓ ｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２ 〜１２５をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合 物を使用して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマン トの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単離し ，制限解析によって分析し，配列を決定して正しい挿入体を確認した．得られた （１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，１８Ｉ，２５Ｈ， ２９Ｒ，３２Ｎ，３７Ｐ，４２Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５Ｔ，５９Ｌ，６２Ｖ， ６７Ｈ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ， １０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑ，および１２３Ｅを有する ．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜１２５をコードするコドンは， アミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドン である．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３１２は以下のアミノ酸配列を有する（１５ −１２５） ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃３１ ＤＮＡ配列＃５［配列番号：１０１］は上述のｐＭＯＮ１３３１２ポリペプチ ドをコードする． 例４１ ｐＭＯＮ１３３１３の構築 プラスミドｐＭＯＮ２３４１のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３６１９塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭ ＯＮ２３４１から誘導される遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起 源，ｐｒｅｃＡプロモーターおよびｇ１０Ｌリボソーム結合部位である．プラス ミドｐＭＯＮ１３３６３のＤＮＡをＮｃｏＩおよびＮｓｉＩにより消化した．得 られた１７０塩基対ＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ −３のアミノ酸１５〜７１をコードする．プラスミドｐＭＯＮ１３３６２のＤＮ ＡはＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIにより消化した．得られた１７５塩基対のＮｓ ｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸７２ 〜１２５をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合 物を使用して大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマン トの細菌 をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単離し，制限解 析によって分析し，配列を決定して正しい挿入体を確認した．得られた（１５− １２５）ｈＩＬ−３変異体は，以下のアミノ酸置換，１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ， ３２Ａ，３７Ｐ，４２Ａ，４５Ｖ，５１Ｒ，５５Ｌ，６０Ｓ，６２Ｖ，６７Ｎ， ６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８２Ｖ，８７Ｓ，９３Ｓ，９８Ｔ，１０１Ａ ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１１７Ｓ，１２０Ｈおよび１２３Ｅを有する ．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜１２５をコードするコドンは， アミノ酸置換が行われた位置を除いてｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列に見られるコドン である．プラスミド，ｐＭＯＮ１３３１３は以下のアミノ酸配列を有する（１５ −１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃３２ ＤＮＡ配列＃３［配列番号：９９］は上述のｐＭＯＮ１３３１３ポリペプチド をコードする． 例４２ ｐＭＯＮ５９８７の構築 プラスミドｐＭＯＮ６４５８のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３９４０塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭ ＯＮ６４５８から誘導される遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐ ＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起源， ｐＡｒａＢＡＤプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位およびｌａｍＢ分泌 リーダーである．プラスミドｐＭＯＮ５９７８ＤＮＡはＮｃｏＩおよびＮｓｉＩ で消化した．得られた１７０塩基対ＮｃｏＩ，ＮｓｉＩフラグメントは（１５− １２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜７１をコードする．プラスミド，ｐＭＯＮ ５９７６のＤＮＡはＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIにより消化した．得られた１７ ５塩基対のＮｓｉＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントは（１５−１２５）ｈＩＬ−３ のアミノ酸７２〜１２５をコードする．制限フラグメントをリゲートし，リゲー ション反応混合物を用いて大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トラン スフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤ ＮＡを単離し，制限部位ＥｃｏＲＶおよびＮｈｅＩについてスクリーニングを行 い，ＤＮＡ配列を決定して正しい挿入体を確認した． 例４３ ｐＭＯＮ５９８８の構築 ｐＭＯＮ５９８７のプラスミドＤＮＡをＮｈｅＩとＥｃｏＲＩによって消化し て，３９０３塩基対のＮｈｅＩ，ＥｃｏＲＩフラグメントを得た．この３９０３ 塩基対ＮｈｅＩ，ＥｃｏＲＩフラグメントを以下のアニーリングされたオリゴヌ クレオチド１．０ピコモルにリゲートさせた． リゲーション反応混合物を用いて，大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換し て，トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プ ラスミドＤＮＡを単離し，配列決定により陽性クローンを確認した．このプラス ミドはｈＩＬ−３遺伝子（１５−１２５）におけるアラニン１０１をアスパラギ ン酸に変換するために構築された．このプラスミドはｐＭＯＮ５９８８と命名さ れた． 例４４ ［Ｍｅｔ−（１５−１３３）ｈＩＬ−３（Ａｒｇ129）］をコードするｐＭＯ Ｎ５８５３（図６）の構築 ｐＭＯＮ５８４７のプラスミドＤＮＡ（図２）をＮｃｏＩで処理した．制限酵 素は熱処理（６５℃，１０分間）によって失活させた．ついでＤＮＡを，４種の すべてのヌクレオチド前駆体の存在下にＤＮＡポリメラーゼＩ（クレノウ）の大 フラグメントで処理した．これは非重複端をもつＤＮＡ末端を産生させる．３７ ℃で５分間処理したのち，１０分間６５℃で熱処理してポリメラーゼを失活させ た．ＤＮＡをついで，非重複端を産生する酵素，ＨｐａＩで処理した．ＤＮＡを エタノールで沈殿させ，リゲートした．リゲーション反応混合物を用いて，コン ピーテントなＪＭ１０１細胞をアンピシリン抵抗性に形質転換した．コロニーを 採取し，プラスミドＤＮＡを制限解析によって分析した．ｐＭＯＮ５８５３と命 名されたプラスミドは，ｈＩＬ−３遺伝子のアミノ末端の１４のコドンの欠失を 含む遺伝子として同定された．リボソーム結合部位の（１５−１３３）ｈＩＬ− ３遺伝子への接合部のＤＮＡ配列は以下のように決定された． 下側の配列は１５−１３３ｈＩＬ−３遺伝子のアミノ末端のコード配列によっ て特定されるアミノ酸の一文字コードを示す．これらは，メチオニン，アスパラ ギン，システイン，セリンおよびアスパラギンである． このプラスミドを繋留するＪＭ１０１細胞の培養液をナリジキシン酸で誘導す ると，ｈＩＬ−３（１５−１３３）はｈＩＬ−３（ｐＭＯＮ５８４７）より高レ ベルに蓄積することが見出された． プラスミド，ｐＭＯＮ５８５３は以下のアミノ酸配列を有するＭｅｔ−（１５ −１３３）ｈＩＬ−３（Ａｒｇ129）をコードする． 例４５ ［Ｍｅｔ−（１−１３３）ｈＩＬ−３］をコードするｐＭＯＮ５８７３の構築 Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｔｄ．から入手した遺伝子 は，コドン位置１２９がアルギニンと指定されていた．ネイティブなｈＩＬ−３ ｃＤＮＡにおいて特定されたアミノ酸はセリンである．この位置にネイティブな 配列を有するタンパク質を製造するために，コドン１０６および１０７における ＥｃｏＲＩ部位とコドン１２９および１３０のＮｈｅＩ部位の間のコード配列の 部分を置換した．ｐＭＯＮ５８５４のプラスミドＤＮＡ（例３）およびｐＭＯＮ ５８５３のプラスミドＤＮＡ（例４４）を，ＥｃｏＲＩおよびＮｈｅＩで処理し た．それぞれの大きい方のフラグメントをゲル精製した．これらを以下の配列を 有するアニーリングされたオリゴヌクレオチド対にリゲートした． リゲーション反応混合物を用いて，コンピーテントなＪＭ１０１細胞をアンピ シリン抵抗性に形質転換した．コロニーを培地中に採取して増殖させた．プラス ミドＤＮＡを単離し，合成ＤＮＡ中には存在するが，ｐＭＯＮ５８５４およびｐ ＭＯＮ５８５３中には存在しない，新たなＳｔｙＩ認識部位の存在についてスク リーニングした．ＥｃｏＲＩとＮｈｅＩの間の領域における遺伝子のヌクレオチ ド配列を決定し，それが合成オリゴヌクレオチドの配列であることを見出した． 新たなプラスミドは，［Ｍｅｔ−（１−１３３）ｈＩＬ−３］をコードするプラ スミドがｐＭＯＮ５８７３，［Ｍｅｔ−（１５−１３３）ｈＩＬ−３］をコード するプラスミドがｐＭＯＮ５８７２と命名された． プラスミド，ｐＭＯＮ５８７３は以下のアミノ酸配列をもつ［Ｍｅｔ−（１− １３３）ｈＩＬ−３］をコードす． 例４６ ｐＭＯＮ６４５８の構築 プラスミドｐＭＯＮ６５２５を制限酵素ＨｉｎｄIIIおよびＳａｌＩで消化し ，得られた３１７２塩基対のフラグメントを１％アガロースゲルからインターセ プションによってＤＥＡＥ膜上に単離した．ｐＭＯＮ６５２５から誘導される遺 伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３２７複製の起源，お よび転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起源である（プラスミド， ｐＭＯＮ６５２５から誘導される遺伝子要素は，ｐＭＯＮ６４５８の構築にも使 用できたプラスミドｐＭＯＮ２３４１における遺伝子要素と同一である）．プラ スミドｐＭＯＮ６４５７は制限酵素ＨｉｎｄIIIおよびＳａｌＩで消化し，得ら れた１１１７塩基対フラグメントはＰＡＧＥならびに粉砕および浸漬溶出によっ て単離した．ｐＭＯＮ６４５７から誘導される遺伝子要素はｐＡｒａＢＡＤプロ モーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リーダー，ならびに（１ ５−１２５）ｈＩＬ−３遺伝子である．制限フラグメントをリゲートし，リゲー ション反応混合物を用いて大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質転換した．トラン スフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミドＤ ＮＡを単離し，制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIの二重消化を用いる制限解 析によって，挿入されたフラグメントのサイズを測定した．ｈＩＬ−３遺伝子（ アミノ酸１５〜１２５をコード）を含むクローンは３４５塩基対ＮｃｏＩ，Ｈｉ ｎｄIII制限フラグメントを含有した．この構築体はｐＭＯＮ６４５８と命名さ れた．このプラスミドはｐＭＯＮ６４５７内のｈＩＬ−３遺伝子コード領域の外 側にあるＥｃｏＲＩ制限部位を消失させるために構築された． 例４７ ［Ｍｅｔ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３（Ａｌａ101）をコードするｐＭＯＮ ５９７６の構築 ｄａｍ−大腸菌株ＧＭ４８から単離したｐＭＯＮ５９４１のプラスミドＤＮＡ をＣｌａＩおよびＮｓｉＩで切断し，ｈＩＬ−３のアミノ酸２０〜７０をコード する６個のオリゴヌクレオチドのアニーリングされたアッセンブリー（図２）， １ピコモルにリゲートした．この合成フラグメントは，３種の唯一の制限部位， ＥｃｏＲＶ，ＸｈｏＩおよびＰｓｔＩをコードしている．これらのオリゴヌクレ オチドの配列は図２に示す． 得られたリゲーション混合物を用いてコンピーテントな大腸菌ＪＭ１０１細胞 をアンピシリン抵抗性コロニーに形質転換した．プラスミドＤＮＡを単離して， 挿入されたフラグメントがＥｃｏＲＶおよびＮｈｅＩの両部位を有することを決 定した．ＣｌａＩおよびＮｓｉＩの間の領域のフクレオチド配列を決定し，それ が合成ヌクレオチドの配列であることを見出された．（１５−１２５）ｈＩＬ− ３をコードするヌクレオチド配列のコドン８６〜８７にＮｈｅＩ部位が導入され た．この変化をもつプラスミドはｐＭＯＮ５９４１と命名された．このプラスミ ドは位置１０１におけるアスパラギン酸のアラニンによる置換で変化したＭｅｔ −（１５−１２５）ｈＩＬ−３をコードする． プラスミドｐＭＯＮ５９７６は，以下のアミノ酸配列を有するＭｅｔ−（１５ −１２５）ｈＩＬ−３（Ａｌａ101）をコードする． 例４８ ［Ｍｅｔ−（１５−８８）ｈＩＬ−３］をコードするｐＭＯＮ５９１７の構築 ｐＭＯＮ５８５３のプラスミドＤＮＡをＮｓｉＩおよびＨｉｎｄIIIで切断し ，コドン８６〜８７に新たなＮｈｅＩエンドヌクレアーゼ制限部位をもつ（７０ −８８）ｈＩＬ−３をコードするアニーリングしたオリゴヌクレオチド対にリゲ ートした．これらのオリゴヌクレオチドの配列は例１８に示す． リゲーション混合物を用いてコンピーテントな大腸菌ＪＭ１０１細胞を形質転 換し，アンピシリン抵抗性のコロニーを採取した．個々のコロニーから単離され たプラスミドＤＮＡを新たなＮｈｅＩ制限部位の存在についてスクリーニングし た．この置換部分のヌクレオチド配列を決定し，それが合成ヌクレオチドの配列 であることを見出した．このコドン８６〜８７に新たなＮｈｅＩ部位を含有する Ｍｅｔ−（１５−８８）ｈＩＬ−３をコードする新たなプラスミドは，ｐＭＯＮ ５９１７と命名された． プラスミドｐＭＯＮ５９１７は以下のアミノ酸配列を有するＭｅｔ−（１５− ８８）ｈＩＬ−３をコードする． 例４９ ［Ｍｅｔ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３（Ａｌａ101）をコードするｐＭＯＮ ５９４１の構築 ｐＭＯＮ５９１７のプラスミドＤＮＡをＮｈｅＩおよびＨｉｎｄIIIで切断し ，ｈＩＬ−３のアミノ酸８６〜１０６および１０７〜１２５をコードする２種の アニーリングされたオリゴヌクレオチド対にリゲートした．これらのオリゴヌク レオチドの配列は以下に示すとおりである． ＮｈｅＩ〜ＥｃｏＲＩ ＥｃｏＲＩ〜ＨｉｎｄIII リゲーション混合物を用いてコンピーテントな大腸菌ＪＭ１０１細胞をアンピ シリン抵抗性のコロニーに形質転換した．これらの細胞からプラスミドＤＮＡを 単離し，ＮｈｅＩおよびＨｉｎｄIIIを用いた制限解析によって挿入されたフラ グメントのサイズはより大であることが決定された．ＡｓｐのＡｌａ１０１への 変化はＮｈｅＩ〜ＨｉｎｄIIIフラグメント上にコードされている．ＮｈｅＩお よびＨｉｎｄIII部位の間のコード領域の部分のヌクレオチド配列を決定し，そ れが合成ヌクレオチドの配列であることを見出した．この新たなプラスミドはｐ ＭＯＮ５９４１と命名された． このプラスミド，ｐＭＯＮ５９４１は，Ｍｅｔ−（１５−１２５）ｈＩＬ−３ （Ａｌａ101）をコードし，新たなＮｈｅＩ制限部位を含有する． 例５０ ｐＭＯＮ６４５５の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９０５を制限酵素ＨｉｎｄIIIおよびＮｃｏＩで消化し ，３９３６塩基対のフラグメントを得た．ｐＭＯＮ５９０５から誘導される遺伝 子要素はβ−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３２７複製の起源，ｐＡｒ ａＢＡＤプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ｌａｍＢ分泌リーダーお よび転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源である．ｐＭＯＮ５９０ ５から誘導される以下の遺伝子要素，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢ Ｒ３２７複製の起源，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位および転写ターミネーターと してのファージｆ１複製の起源はプラスミドｐＭＯＮ５５９４中のものと同じで ，このプラスミドもｐＭＯＮ６４５５の構築にも使用できた．ｐＡｒａＢＡＤプ ロ モーターは，ｐＭＯＮ６２３５に関連して記載したプロモーターと同一である． ｐＭＯＮ６４５５中に用いられるｌａｍＢシグナルペプチド配列は，ＮｃｏＩ部 位でｈＩＬ−３（１５−１２５）に融合して図８に示される配列である．プラス ミドｐＭＯＮ５８８７を制限酵素ＨｉｎｄIIIおよびＮｃｏＩで消化して，３８ ４塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．制限フラグメントをリ ゲートし，リゲーション反応混合物を用いて大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１を形質 転換した．トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択し た．プラスミドＤＮＡを単離し，制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIを用いる 二重消化制限解析によって挿入されたフラグメントのサイズを決定した．ｈＩＬ −３遺伝子（アミノ酸１−１２５をコード）を含む陽性のクローンは，３８４塩 基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIII制限フラグメントを含有した．この構築体はｐＭ ＯＮ６４５５と命名された． 例５１ ｐＭＯＮ６４５６の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９０５を制限酵素ＨｉｎｄIIIおよびＮｃｏＩで消化し ，３９３６塩基対のフラグメントを得た．ｐＭＯＮ５９０５から誘導される遺伝 子要素はβ−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３２７複製の起源，転写タ ーミネーターとしてのファージｆ１複製の起源，ｐＡｒａＢＡＤプロモーター， ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，およびｌａｍＢ分泌リーダーである．プラスミド ｐＭＯＮ５８７１を制限酵素ＨｉｎｄIIIおよびＮｃｏＩで消化し，３３０塩基 対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭＯＮ５８７１由来の遺伝 子要素には（１−１０７）ｈＩＬ−３遺伝子をコードする塩基が包含される．制 限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合物を用いて大腸菌Ｋ−１２ 株ＪＭ１０１を形質転換した．トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有 プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単離し，二重消化で制限酵素Ｎｃｏ ＩおよびＨｉｎｄIIIを用いる制限解析によって挿入されたフラグメントのサイ ズを決定した．ｈＩＬ−３遺伝子（アミノ酸１〜１０７をコードする）を含むク ローンは３３０塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIII制限フラグメントを含有した． この構築体はｐＭＯＮ６４５６と命名された． 例５２ ｐＭＯＮ６４５７の構築 大腸菌株ＧＭ４８（ｄａｍ−）中で増殖させたプラスミドｐＭＯＮ６４５５の ＤＮＡを，制限酵素ＮｃｏＩとＣｌａＩで消化し，４２６３塩基対のＮｃｏＩ， ＣｌａＩフラグメントを得た．制限フラグメントを，Ｍｅｔ Ａｌａ１４−２０ ｈＩＬ−３をコードする以下の配列を有するアニーリングされたオリゴヌクレオ チド１．０ピコモルにリゲートさせた． 得られたＤＮＡを大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１にトランスフォームして，トラ ンスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した．プラスミド ＤＮＡを単離し，二重消化で制限酵素ＸｂａＩおよびＥｃｏＲＩを用いた制限解 析により，挿入されたフラグメントのサイズを決定した．ｈＩＬ−３遺伝子（ｈ ＩＬ−３のアミノ酸１５〜１２５をコード）を含む陽性クローンは４３３塩基対 のＸｂａＩ，ＥｃｏＲＩ制限フラグメントを含有した．この構築体は，ｐＭＯＮ ６４５７と命名された．このプラスミドはｈＩＬ−３の最初の１４アミノ酸を欠 失させるために構築された．得られた遺伝子のコード配列は次のように始まる． 最初の２個のアミノ酸（メチオニン，アラニン）は，ｌａｍＢシグナルペプチ ドと（１５−１２５）ｈＩＬ−３の間にＮｃｏＩ制限部位とシグナルペプチダー ゼ切断部位を創製する．プラスミドｐＭＯＮ６４５７は配列番号：６５と指定さ れたアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３をコードする． 例５３ ｐＭＯＮ６２３５の構築 このプラスミドの創製に用いられたＤＮＡフラグメントの一つは，以下のオリ ゴヌクレオチドを使用して，上述のＰＣＲ法での特定部位の突然変異によって生 成させた．この操作には，オリゴ＃５１［配列番号：１５５］ならびにオリゴ＃ ５２［配列番号：１５６］をプライマーとして使用した．ＰＣＲ反応の鋳型は， Ｍａｎｉａｔｉｓ（１９８２）の記載に従って調製された大腸菌株Ｗ３１１０の 染色体ＤＮＡとした．オリゴヌクレオチドプライマーは，ＡｒａＢＡＤプロモー ターを増幅するように設計された（Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ，１９７８）．得られ たＤＮＡ生成物を制限酵素ＳａｃIIおよびＢｇｌIIで消化した．反応混合物を既 述のようにして精製した．プラスミドｐＭＯＮ５５９４のＤＮＡをＳａｃIIおよ びＢｇｌIIで消化し，以下の遺伝子要素，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ）， ｐＢＲ３２７複製の起源，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，転写ターミネーターと してファージｆ１複製の起源，およびクロラムフェニコールアセチルトランスフ ェラーゼ（ｃａｔ）遺伝子を含有する４４１６塩基対ＳａｃII，ＢｇｌII制限フ ラグメントを得た．ｐＭＯＮ５５９４からの４４１６塩基対ＳａｃII，ＢｇｌII 制限フラグメントをＰＣＲで生成したＳａｃII，ＢｇｌIIＤＮＡフラグメントに リゲートした．リゲーション混合物を用いて大腸菌Ｋ−１１２株ＪＭ１０１を形 質転換した．陽性クローンは３２３塩基対ＳａｃII，ＢｇｌIIフラグメントを含 み，ＤＮＡ配列決定でＳａｃII，ＢｇｌIIフラグメントはＡｒａＢＡＤプロモー ターであることが確認された．この構築体はｐＭＯＮ６２３５と命名された． 例５４ ｐＭＯＮ５６４７の構築 プラスミドｐＭＯＮ５５８５［本明細書に，その全記載を参考として導入する ＥＰ０２４１４４６の開示に従って製造）のＤＮＡを，制限酵素ＮｃｏＩおよび ＨｉｎｄIIIで消化し，３２７３塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを 得た．ｐＭＯＮ５５８５から誘導される遺伝子要素は，ｐＢＲ３２７複製の起源 ，ｐｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合タンパク質，ウシソマトト ロピン遺伝子（ｂＳＴ）部位，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ならびにＴ ７転写ターミネーターである．プラスミドｐＭＯＮ３２６７［ＥＰ０２４１４４ ６（参考として，その全文を本明細書に導入する）に開示されたようにして調製 ］ＤＮＡはＮｃｏＩとＨｉｎｄIIIで消化し，ブタソマトトロピン（ｐＳＴ）遺 伝子を含有する５８０塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．制 限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合物を用いて大腸菌株ＪＭ１ ０１を形質転換した．トランスフォーマントの細菌を，アンピシリン含有プレー ト上で 選択した．プラスミドＤＮＡを単離して，制限解析によって分析し，配列決定に より正しい挿入体を確認した． 例５５ ｐＭＯＮ７１０の構築 プラスミドｐＭＯＮ７０９はトランスポゾンＴＮ７の１６１４塩基対ＡｖａＩ ，ＥｃｏＲＩフラグメントから構成され，ストレプトマイシンアデニリルトラン スフェラーゼ遺伝子（Ｆｌｉｎｇら，１９８５）およびｐＵＣ１９のＨｉｎｄII IとＥｃｏＲＩ部位の間にクローン化されたｐＵＣ９リンカー（ＸｍａＩ，Ｈｉ ｎｄIII）を含有する．ストレプトマイシンアデニリルトランスフェラーゼ遺伝 子は，ストレプトマイシンおよびスペクチノマイシンに対する抵抗性を付与する ．プラスミドｐＭＯＮ７０９を特定オリゴヌクレオチド部位の突然変異（Ｚｏｌ ｌｅｒ＆ Ｓｍｉｔｈ，１９８２に記載された方法）によって突然変異させて， ストレプトマイシンアデニリルトランスフェラーゼ遺伝子の３’末端にＥｃｏＲ Ｖ部位を導入した．この操作でＥｃｏＲＶ部位を導入するためにはオリゴヌクレ オチド，オリゴ＃５３［配列番号：１５７］を使用した．得られたプラスミドは ｐＭＯＮ７１０と命名された． 例５６ ｐＭＯＮ５７２３の構築 プラスミドｐＭＯＮ５６４７のＤＮＡを制限酵素ＤｒａＩならびにＳｓｐＩで 消化して，２９１６塩基対のＤｒａＩ，ＳｓｐＩフラグメントを得た．ｐＭＯＮ ５６４７から誘導される遺伝子要素は，ｐＢＲ３２７の複製の起源，ｐｒｅｃＡ プロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合タンパク質，ブタソマトトロピン遺伝子 （ｐＳＴ），およびＴ７転写ターミネーター（Ｄｕｎｎ ＆ Ｓｔｒｕｄｉｅｒ， １９８３）である．プラスミドｐＭＯＮ７１０のＤＮＡを制限酵素ＨｉｎｃIIと ＥｃｏＲＶで消化して，ストレプトマイシンおよびスペクチノマイシンに対する 抵抗性を付与するストレプトマイシンアデニリルトランスフェラーゼ遺伝子を含 む９４０塩基対のＨｉｎｃII，ＥｃＯＲＶフラグメントを得た．制限フラグメン トをリゲートし，それぞれＧＡＴをＧＡＣにＡＴＣをＡＴＴとして，ＥｃｏＲＶ 認識部位を破壊した．ＥｃｏＲＶ部位を消失させるこの操作には，オリゴ＃５５ ［配列番号：１５９］を用いた．トランスフォーマントの細菌を，アンピシリン 含有プレート上で選択した．プラスミドＤＮＡを単離し，制限解析によっ分析し てＥｃｏＲＶ部位の消失を確認し，配列を決定して（１５−１２５）ｈＩＬ−３ 変異遺伝子の配列を確認した．プラスミドｐＭＯＮ１４０５８はペプチド＃２５ ［配列番号：８９］のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体 をコードする．ＤＮＡ配列＃３３［配列番号：１６１］は上述のｐＭＯＮ１４０ ５８ポリペプチドをコードする． 例５９ ｐＭＯＮ１３４３８の構築 プラスミドｐＭＯＮ５７２３のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３２７８ＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭＯＮ５７ ２３から誘導される遺伝子要素はｐＢＲ３２７複製の起源，ｐｒｅｃＡプロモー ター，ｇ１０Ｌリボソーム結合タンパク質，Ｔ７転写ターミネーターおよびスト レプトマイシンアデニリルトランスフェラーゼ遺伝子である．プラスミドｐＭＯ Ｎ１４０５８のＤＮＡをＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIで消化し，以下のアミノ酸 置換１８Ｉ，２５Ｈ，２９Ｒ，３２Ｎ，３７Ｐ，４２Ｓ，４５Ｍ，５１Ｒ，５５ Ｔ，５９Ｌ，６２Ｖ，６７Ｈ，６９Ｅ，７３Ｇ，７６Ａ，７９Ｒ，８３Ｑ，８７ Ｓ，９３Ｓ，９８Ｉ，１０１Ａ，１０５Ｑ，１０９Ｅ，１１６Ｖ，１２０Ｑおよ び１２３Ｅを有する３４５塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た ．制限フラグメントをリゲートし，リゲーション反応混合物を用いて大腸菌株Ｊ Ｍ１０１を形質転換した．トランスフォーマントの細菌を，スペクチノマイシン 含有プレート上て選択した．プラスミドＤＮＡを単離し，制限解析によって分析 し，配列決定によって正しい挿入体を確認した．プラスミドｐＭＯＮ１３４３８ はペプチド＃２５［配列番号：８９］のアミノ酸配列を有する（１５−１２５） ｈＩＬ−３変異体をコードする．ＤＮＡ配列＃３３［配列番号：１６１］は上述 のｐＭＯＮ１３４３８ポリペプチドをコードする． 例６０ ｐＭＯＮ１３２８５の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３２５２のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩとＥｃｏＲＶで消 化した．得られた３６６９塩基対のＮｃｏＩ，ＥｃｏＲＶフラグメントは以下の 遺伝子要素，ストレプトマイシンアデニリルトランスフェラーゼ遺伝子，ｐＢＲ ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源，ｒｅｃ Ａプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位およびアミノ酸置換５０Ｄをもつ （１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸４７〜１２５をコードする塩基を含有す る．ｐＭＯＮ１３２５２からの３６６９塩基対のＮｃｏＩ，ＥｃｏＲＶフラグメ ントを，以下のアニーリングされた相補性オリゴヌクレオチドにリゲートした． オリゴ＃１６５［配列番号：１６２］ オリゴ＃１６６［配列番号：１６３］ オリゴ＃１６７［配列番号：１６４］ オリゴ＃１６８［配列番号：１６５］ オリゴ＃１６９［配列番号：１６６］ オリゴ＃１７０［配列番号：１６７］ 組立てると，これらのオリゴヌクレオチドは，ＮｃｏＩおよびＥｃｏＲＶ制限 末端，ならびに，以下のアミノ酸置換，４２Ｄ，４５Ｍ，および４６Ｓを有する （１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜４６をコードするＤＮＡ配列を創 製する．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜４６をコードするコドン は，アミノ酸置換が行われた位置を除いて，ｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列中に見出さ れるコドンである．プラスミド，ｐＭＯＮ１３２８５は以下のアミノ酸配列を有 する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃Ａ３［配列番号：２５８］ ＤＮＡ配列＃Ａ３ ｐＭＯＮ１３２８５ ４２Ｄ，４５Ｍ，４６Ｓ，５０Ｄ 例６１ ｐＭＯＮ１３２８６の構築 プラスミドｐＭＯＮ５９７８のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩとＥｃｏＲＶで消化 した．得られた３８６５塩基対のＮｃｏＩ，ＥｃｏＲＶフラグメントは以下の遺 伝子要素，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３２７複製の起源，転写 ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起源，ｐｒｅｃＡプロモーター，ｇ １０Ｌリボソーム結合部位および（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸４７〜 １２５をコードする塩基を含有する．ｐＭＯＮ５９７８からの３８６５塩基対の ＮｃｏＩ，ＥｃｏＲＶフラグメントを，以下のアニーリングされた相補性オリゴ ヌクレオチドにリゲートした． オリゴ＃１６５［配列番号：１６２］ オリゴ＃１６６［配列番号：１６３］ オリゴ＃１６７［配列番号：１６４］ オリゴ＃１６８［配列番号：１６５］ オリゴ＃１６９［配列番号：１６６］ オリゴ＃１７０［配列番号：１６７］ 組立てると，これらのオリゴヌクレオチドは，ＮｃｏＩおよびＥｃｏＲＶ制限 末端，ならびに，以下のアミノ酸置換，４２Ｄ，４５Ｍ，および４６Ｓを有する （１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜４６をコードするＤＮＡ配列を創 製する．（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１５〜４６をコードするコドン は，アミノ酸置換が行われた位置を除いて，ｈＩＬ−３ｃＤＮＡ配列中に見出さ れるコドンである．プラスミド，ｐＭＯＮ１３２８６は以下のアミノ酸配列を有 する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコードする． ペプチド＃Ａ４［配列番号：２５９］ ＤＮＡ配列＃Ａ４ ｐＭＯＮ１３２８６ ４２Ｄ，４５Ｍ，４６Ｓ 例６２ ｐＭＯＮ１３３２５の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３２８６からの３７０４塩基対ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄII IＤＮＡフラグメントをプラスミドｐＭＯＮ１３２１５からの６４塩基対Ｅｃｏ ＲＩ，ＨｉｎｄIIIＤＮＡフラグメントにリゲートする．プラスミドｐＭＯＮ１ ３２８６からは以下の遺伝子要素，すなわちβ−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源 ，ｐｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位ならびに以下の変化， ４２Ｄ，４５Ｍ，および４６Ｓを有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３遺伝子のア ミノ酸１５〜１０５をコードする塩基が誘導される．ｐＭＯＮ１３２１５からは 変化１１６Ｗを有する（１５−１２５）遺伝子のアミノ酸１０６〜１２５をコー ドする塩基が誘導される．得られたプラスミドｐＭＯＮ１３３２５は以下のアミ ノ酸配列，ペプチド＃Ａ５［配列番号：２６１］を有する（１５−１２５）ｈＩ Ｌ−３変異体をコードする． 例６３ ｐＭＯＮ１３３２６の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３２１５からの３６８３塩基対ＮｃｏＩ，ＥｃｏＲＩ， ＤＮＡフラグメントをプラスミドｐＭＯＮ１３２８５からの２８１塩基対Ｎｃｏ Ｉ，ＥｃｏＲＩ，ＤＮＡフラグメントにリゲートする．プラスミドｐＭＯＮ１３ ２１５からは以下の遺伝子要素，すなわちβ−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ）， ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源， ｐｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ならびに以下の変化， すなわち１１６Ｗを有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３遺伝子のアミノ酸１０６ 〜１２５をコードする塩基が誘導される．ｐＭＯＮ１３２８５からは以下の変化 ，４２Ｄ，４５Ｍ，４６Ｓおよび５０Ｄを有する（１５−１２５）遺伝子のアミ ノ酸１５〜１０５をコードする塩基が誘導される．得られるプラスミド，ｐＭＯ Ｎ １３３２６には，アミノ酸配列，ペプチド＃Ａ６［配列番号：２６２］を有する （１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体がコードされる． 例６４ ｐＭＯＮ１３３３２の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３２６のＤＮＡを制限酵素ＮｓｉＩおよびＥｃｏＲＩ で消化する．得られる３８５３塩基対，ＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＩフラグメントは， 以下の遺伝子要素，すなわちβ−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３２７ 複製の起源，転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起源，ｒｅｃＡプ ロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ならびに以下の変化，すなわち４２ Ｄ，４５Ｍ，４６Ｓ，５０Ｄ，Ｉ１１６Ｗを有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３ 遺伝子のアミノ酸１５〜７１および１０６〜１２５をコードする塩基が誘導され る．ｐＭＯＮ１３３２６からの３８５３塩基対ＮｓｉＩ，ＥｃｏＲＩフラグメン トを以下のアニーリングされた相補性オリゴヌクレオチドにリゲートする． オリゴ＃１５（Ａ）［配列番号：１６８］ オリゴ＃１６（Ａ）［配列番号：１６９］ 得られるプラスミド中では，（１５−１２５）ｈＩＬ−３遺伝子内のＮｓｉＩ およびＥｃｏＲＩ制限部位の間の１１１塩基が上述のオリゴヌクレオチドからの ２４塩基で置換されている．このリンカーにはまた，ＮｄｅＩ認識配列が創製さ れる． 例６５ ｐＭＯＮ１３３３０の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３３２からの３８４６塩基対ＰｓｔＩ，ＥｃｏＲＩ， ＤＮＡフラグメントをプラスミドｐＭＯＮ１３３０５からの１１８塩基対ｐｓｔ Ｉ，ＥｃｏＲＩ，ＤＮＡフラグメントにリゲートする．プラスミドｐＭＯＮ１３ ３３２からは以下の遺伝子要素，すなわちβ−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ）， ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源， ｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ならびに以下の変化すな わち４２Ｄ，４５Ｍ，４６Ｓ，５０Ｄおよび１１６Ｗを有する（１５−１２５） ｈＩＬ−３遺伝子のアミノ酸１５〜６９，および１０６〜１２５をコードする塩 基が誘導される．ｐＭＯＮ１３３０５からは以下の変化，９５Ｒ，９８１および １００Ｒを有する（１５−１２５）遺伝子のアミノ酸７０〜１０５をコードする 塩基が誘導される．得られるプラスミドｐＭＯＮ１３３３０は以下のアミノ酸配 列，ペプチド＃Ａ７［配列番号：２６３］を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３ 変異体をコードする． 例６６ ｐＭＯＮ１３３２９の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３３２からの３８４６塩基対ＰｓｔＩ，ＥｃｏＲＩ， ＤＮＡフラグメントをプラスミドｐＭＯＮ１３３０４からの１１８塩基対Ｐｓｔ Ｉ，ＥｃｏＲＩ，ＤＮＡフラグメントにリゲートする．プラスミドｐＭＯＮ１３ ３３２からは以下の遺伝子要素，すなわちβ−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ）， ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてファージｆ１複製の起源， ｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，ならびに以下の変化，す なわち，４２Ｄ，４５Ｍ，４６Ｓ，１１６Ｗを有する（１５−１２５）ｈＩＬ− ３遺伝子のアミノ酸１５〜６９および１０６〜１２５をコードする塩基が誘導さ れる．ｐＭＯＮ１３３０４からは，以下の変化，９８１および１００Ｒを有する （１５−１２５）遺伝子のアミノ酸の７０−１０５をコードする塩基が誘導され る．得られるプラスミドｐＭＯＮ１３３２９は，以下のアミノ酸配列，ペプチド ＃Ａ８［配列番号：４０６］を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体をコー ドする． 例６７ ［Ｍｅｔ−（１５−１３３）ｈＩＬ−３（Ａｒｇ129）」をコードするｐＭＯ Ｎ５８５３（図６）の構築 ｐＭＯＮ５８４７のプラスミドＤＮＡ（例２）をＮｃｏＩで処理した．制限酵 素は熱処理（６５℃で１０分間）によって失活させた．このＤＮＡをついですべ ての４種のヌクレオチド前駆体の存在下に，ＤＮＡポリメラーゼＩ（クレノウ） の大フラグメントで処理した．これにより，非重複端をもつＤＮＡ末端が生成す る．３７℃に５分間置いたのち，ポリメラーゼを６５℃で１０分間熱処理して失 活させた．このＤＮＡをついで非重複端を生成する酵素，ＨｐａＩで処理した． リゲーション反応混合物を用いてコンピーテントなＪＭ１０１をアンピシリン抵 抗性に形質転換した．コロニーを採取し，プラスミドＤＮＡを制限解析によって 分析した．ｐＭＯＮ５８５３と命名されたプラスミドは，ｈＩＬ−３遺伝子のア ミノ末端の１４個のコドンの欠失を含むプラスミドとして同定された．（１５− １３３）ｈＩＬ−３遺伝子へのリボソーム結合部位の接合部のＤＮＡ配列は次の ように決定された． 下側の配列は１５−１３３ｈＩＬ−３遺伝子のアミノ末端のコード配列によっ て特定されるアミノ酸の一文字コードを示している．これらは，メチオニン，ア スパラギン，システイン，セリンおよびアスパラギンである． このプラスミドを繋留するＪＭ１０１細胞の培養液をナリジキシン酸で誘導し た場合，ｈＩＬ−３（１５−１３３）はｈＩＬ−３（ｐＭＯＮ５８４７）よりも 高レベルで蓄積することが見出された． プラスミドｐＭＯＮ５８５３は以下のアミノ酸配列を有するＭｅｔ−（１５− １３３）ｈＩＬ−３（Ａｒｇ129）をコードする． 例６８ ｐＭＯＮ１３２５２の構築 プラスミドｐＭＯＮ２３４１のＤＮＡを制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIII で消化し，３６１９塩基対のＮｃｏＩ／ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．ｐＭ ＯＮ２３４１から誘導される遺伝子要素は，β−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ） ，ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起 源， ｐｒｅｃＡ，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位である．ｈＩＬ−３（１５−１２５） Ａｓｐ(50)変異体をコードするプラスミドをＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIで消化 して，３４５塩基対のＮｃｏＩ／ＨｉｎｄIIIフラグメントを得た．この３４５ 塩基対ＮｃｏＩ／ＨｉｎｄIIIフラグメントをｐＭＯＮ２３４１からの３６１９ 塩基対フラグメントとリゲートし，リゲーション反応混合物を用いて大腸菌Ｋ− １２株ＪＭ１０１を形質転換した．プラスミドＤＮＡを単離し，ＮｃｏＩとＨｉ ｎｄIIIを用いた制限解析によってスクリーニングした．陽性クローンは３４５ 塩基対のＮｃｏＩ／ＨｉｎｄIIIフラグメントを含む．この構築体は，ｐＭＯＮ １３２５２と命名された．プラスミドｐＭＯＮ１３２５２は，以下のアミノ酸配 列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３の変異体をコードする． ペプチドＡ１０；（１５−１２５）ＨＩＬ−３Ａｓｐ(50)ｐＭＯＮ１３２５２ 例６９−７６ 表５における変異体は．材料および方法の項ならびに本明細書の実施例とくに 例５４〜５８に記載した方法を用い，カセット突然変異によって構築された．適 当な制限酵素（表５）で消化された母体プラスミドＤＮＡ（表５）を指示したア ニーリング相補性オリゴヌクレオチド対（表５）にリゲートした．組立てられた オリゴヌクレオチドには，適当な制限末端と（１５−１２５）ｈＩＬ−３遺伝子 配列の部分（ｐＭＯＮ１３２８８［配列番号：１００］）が創製される．個々の 単離体を制限解析によってスクリーニングし，（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異 体遺伝子中に所望の変化が生じたことをＤＮＡ配列の決定によって確認した．オ リゴヌクレオチドには変異ポリペプチド中の相当するアミノ酸置換をコードする （１５−１２５）ｈＩＬ−３遺伝子中の変化が創製される（表５）．ポリペプチ ド＃２５［配列番号：８９］における置換にさらに付加された置換および／また はそれとは異なるアミノ酸置換を表５に指示する．この表にはまた，プラスミド 名（ｐＭＯＮ番号），突然変異ＩＬ−３遺伝子のＤＮＡ配列同定番号および得ら れた変異ポリペプチドの同定番号を示す．表５中の変異体の一部についての生物 活性（ＡＭＬ１９３細胞における増殖促進活性）は表１に示す． 例７７−８２ 表６における変異体は，材料および方法の項ならびに本明細書の実施例とくに 例６０および６１に記載した方法によって構築された．適当な制限酵素（表６） で消化された母体プラスミドＤＮＡ（表６）を，指示した制限フラグメント（表 ６）にリゲートした．個々の単離体を制限解析によってスクリーニングし，また （１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体遺伝子中に所望の変化が生じたことをＤＮＡ 配列の決定により確認した．得られた突然変異（１５−１２５）ｈＩＬ−３遺伝 子は変異ポリペプチド中における相当する置換をコードする（表６）．ポリペプ チド＃２５［配列番号：８９］における置換にさらに付加された置換および／ま たはそれとは異なるアミノ酸置換を表６に指示する．この表にはまた，プラスミ ド名（ｐＭＯＮ番号），突然変異ＩＬ−３遺伝子のＤＮＡ配列同定番号，および 得られた変異ポリペプチドの同定番号を示す．表６中の変異体の一部についての 生物活性（ＡＭＬ１９３細胞における増殖促進活性）は表１に示す． 例８３ ｐＭＯＮ１３３６８の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３６８を構築するためのＤＮＡフラグメントの一つは 材料および方法の項ならびに本明細書の実施例とくに例５３に記載したＰＣＲ法 を用いる特定部位の突然変異によって生成された．ＰＣＲ反応の鋳型は，プラス ミド，ｐＭＯＮ１３２８９ＤＮＡとし，オリゴヌクレオチド，オリゴ＃Ｂ１３ １８Ｉ２３Ａ２５Ｈ［配列番号：１８２］およびオリゴ＃Ｂ１４ ２３４１ＨＩ Ｎ３［配列番号：１８３］をプライマーとして使用した．得られたＤＮＡ生成物 を酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIで消化した．完了後，消化物を７０℃に１５ 分間加熱して酵素を失活させた．制限フラグメントはフェノール／クロロホルム 抽出および２Ｍ ＮＨ4ＯＡｃの存在下での等容量のイソプロパノールによる沈殿 で精製した．オリゴヌクレオチド，オリゴ＃Ｂ１３ １８Ｉ２３Ａ２５Ｈ［配列 番号：１８２］は（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体遺伝子ｐＭＯＮ１３２８９ ［配列番号：１０３］の位置２３におけるコドンをＡＴＴからＧＣＡに（Ｉｌｅ をＡｌａに）変化させる．ｐＭＯＮ２３４１からの３６１９塩基対，ＮｃｏＩ， ＨｉｎｄIII制限フラグメントを，ＰＣＲによって生成したＮｃｏＩ，ＨｉｎｄI II制限フラグメントにリゲートした．個々の単離体を制限解析によってスクリー ニングし，またＤＮＡ配列の決定によって（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体遺 伝子中に所望の変化が生じたことを確認した．プラスミドｐＭＯＮ１３３６８は ，ボリペプチド＃Ｂ１５［配列番号：２７８］のアミノ酸の配列を有する（１５ −１２５）ｈＩＬ−３変異体ポリペプチドをコードする（１５−１２５）ｈＩＬ −３変異体遺伝子（ＤＮＡ配列＃Ｂ１５［配列番号：３４６］）を含有する． 例８４ ｐＭＯＮ１３３８０の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３３６８のＤＮＡを制限酵素ＥｃｏＲＩとＨｉｎｄIII で消化した．得られた３９００塩基対のＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメント は，以下の遺伝子要素，すなわちβ−ラクタマーゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３ ２７複製の起源，転写ターミネーターとしてのファージｆ１複製の起源，ｐｒｅ ｃＡ プロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位，および変異体ｐＭＯＮ１３３６８ のアミノ酸１５〜１０５をコードするＤＮＡ配列を含む．ｐＭＯＮ１３３６８か らの３９００塩基対ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄIII制限フラグメントを以下のアニー リングされた相補性オリゴヌクレオチドにリゲートした． オリゴ＃Ｂ４８ ９Ｅ１２Ｑ６Ｖ１［配列番号：２１７］ オリゴ＃Ｂ４９ ９Ｅ１２Ｑ６Ｖ３［配列番号：２１８］ オリゴ＃４９ １２０Ｑ１２３Ｅ２［配列番号：６３］ オリゴ＃５０ １２０Ｑ１２３Ｅ４［配列番号：６４］ 組立てると，これらのオリゴヌクレオチドは，ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄIII 制限末端ならびに以下のアミノ酸置換，１０９Ｅ，１１２Ｑ，１１６Ｖ，１２０ Ｑおよび１２３Ｅを有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３のアミノ酸１０６〜１２ ５をコードするＤＮＡ配列を創製する．（１５−１２５）ｈＩＬ−３遺伝子中に 用いられたコドンは，アミノ酸置換が行われた位置を除いて，ｈＩＬ−３ｃＤＮ Ａ配列中に見出されるコドンである．個々の単離体を制限解析によってスクリー ニングし，また（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体遺伝子中に所望の変化が作成 されたことを確認するために，ＤＮＡの配列決定を行った．プラスミド，ｐＭＯ Ｎ１３３８０はポリペプチド＃Ｂ１６［配列番号：２７９］のアミノ酸配列を有 する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異ポリペプチドをコードする（１５−１２５ ）ｈＩＬ−３変異遺伝子（ＤＮＡ配列＃１６［配列番号：３４７］を含有する． 例８５ ｐＭＯＮ１３４７６の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３４７６を構築するためのＤＮＡフラグメントの一つは 材料および方法の項ならびに本明細書の実施例とくに例５４に記載したＰＣＲ法 を用いる特定部位の突然変異によって発生させた．ＰＣＲ反応の鋳型は，プラス ミド，ｐＭＯＮ１３２８７ＤＮＡとし，オリゴヌクレオチド，オリゴ＃Ｂ１３１ ８Ｉ２３Ａ２５Ｈ［配列番号：１８２］およびオリゴ＃Ｂ１４ ２３４１ＨＩＮ ３［配列番号：１８３］をプライマーとして使用した．得られたＤＮＡ生成物を ，酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIで消化した．完了後，消化物を７０℃に１５ 分間加熱して酵素を失活させた．制限フラグメントはフェノール／クロロホルム 抽出および２Ｍ ＮＨ4ＯＡｃの存在下での等容量のイソプロパノールによる沈殿 で精製した．オリゴヌクレオチド，オリゴ＃Ｂ１３ １８Ｉ２３Ａ２５Ｈ［配列 番号：１８２］は（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異遺伝子ｐＭＯＮ１３２８７［ 配列番号：９７］の位置２３におけるコドンを，ＡＴＴからＧＣＡに（Ｉｌｅを Ａｌａに）変化させる．ｐＭＯＮ２３４１からの３６１９塩基対のＮｃｏＩ，Ｈ ｉｎｄIII制限フラグメントをＰＣＲによって生成したＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIII制 限フラグメントにリゲートした．個々の単離体を制限解析によってスクリーニン グし，またＤＮＡ配列の決定により（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体遺伝子中 に所望の変化が生じたことを確認した．得られたクローンはまた位置−１におけ るコドンをＧＣＴからＧＡＴに，アミノ酸をアラニンからアスパラギン酸に変化 させる突然変異オリゴヌクレオチド中には設計されていなかった変化も含有した ．プラスミドｐＭＯＮ１３４７６はポリペプチド＃Ｂ５２［配列番号：３１４］ のアミノ酸配列を有する（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体ポリペプチドをコー ドする（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異遺伝子（ＤＮＡ配列＃Ｂ５２［配列番号 ：３０３］）を含有する． 例８６−９２ 表７の変異体は，材料および方法の項ならびに本明細書の実施例とくに例５１ に記載した方法を用い，ＰＣＲ法によって構築された．変異体の創製には２回の 連続ＰＣＲ反応を使用した．第一のＰＣＲ反応においては，ｐＭＯＮ１３２８７ プラスミドＤＮＡが鋳型として作用し，表７に指示した２種のオリゴヌクレオチ ドがプライマーとして働いた．ＰＣＲ延長反応後，ＰＣＲ生成物は部分精製して 延長しなかったプライマーを除去した．第二のＰＣＲ反応においては，ｐＭＯＮ １３２８７プラスミドのＤＮＡは鋳型として作用し，第一のＰＣＲ反応からの精 製ＰＣＲ生成物がプライマーの一つとして，オリゴ＃Ｂ１４ ２３４１Ｈｉｎ３ ［配列番号：１８３］が第二のプライマーとして働いた．第二のＰＣＲ反応から の生成物を部分精製し，制限酵素ＮｃｏＩおよびＨｉｎｄIIIで消化し，ｐＭＯ Ｎ２３４１からの３６１９塩基対のＮｃｏＩ，ＨｉｎｄIIIフラグメントとリゲ ートした．個々の単離体を制限解析によってスクリーニングし，またＤＮＡ配列 の決定により（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体遺伝子中に所望の変化が生じた ことを確認した．ポリペプチド＃２４［配列番号：８８］におけるアミノ酸置換 にさ らに付加された置換および／またはそれとは異なる置換を表７に指示する．この 表にはまたプラスミド名（ｐＭＯＮ番号），突然変異ｈＩＬ−３遺伝子について のＤＮＡ配列同定番号，および得られた変異ポリペプチドの同定番号を示す．表 ７中の変異体の一部についてその生物活性（ＡＭＬ１９３細胞における増殖促進 活性）を表１に示す． 例９３−１２０ 表８の変異体は，材料および方法の項ならびに本明細書の実施例とくに例５４ 〜５８に記載した方法を用いカセット突然変異によって構築された．適当な制限 酵素（表８）で消化された母体のプラスミドＤＮＡ（表８）を，指示したアニー リング相補性オリゴヌクレオチド対（表８）にリゲートした．組立てられたオリ ゴヌクレオチドには，適当な制限末端と（１５−１２５）ｈＩＬ−３遺伝子配列 の部分（ｐＭＯＮ１３２８８［配列番号：１００］）が創製される．これらのオ リゴヌクレオチドにより，（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異遺伝子中に，相当す るアミノ酸置換，および／またはその変異ポリペプチドのＣ−末端からの欠失を コードする（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異遺伝子中の変化（表８）が創製され る．個々の単離体を制限解析によってスクリーニングし，また（１５−１２５） ｈＩＬ−３変異体遺伝子中に所望の変化が生じたことをＤＮＡ配列の決定によっ て確認した．ポリペプチド＃２５［配列番号：８８］におけるアミノ酸置換にさ らに付加された置換および／またはそれとは異なる置換を表８に示す．この表に はまたプラスミド名（ｐＭＯＮ番号），突然変異ｈＩＬ−３遺伝子のＤＮＡ配列 同定番号および得られた変異ポリペプチドの同定番号を示す．表５中の変異体の 一部の生物活性（ＡＭＬ１９３細胞における増殖促進活性）を表１に示す． 例１２１ ｐＭＯＮ１３４４６の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３２８７のＤＮＡ（大腸菌株ＧＭ４８｛ｄａｍ−｝から 精製）を制限酵素ＮｃｏＩおよびＣｌａＩで消化した．得られた３９４２塩基対 ＮｃｏＩ，ＣｌａＩフラグメントは以下の遺伝子要素，すなわちβ−ラクタマー ゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてのフ ァージｆ１複製の起源，ｐｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位 および（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体のアミノ酸２１〜１２５をコードする ＤＮＡ配列ｐＭＯＮ１３２８７を含有する．ｐＭＯＮ１３３６８からの３９４２ 塩基対ＮｃｏＩ，ＣｌａＩ制限フラグメントは以下のアニーリングされた相補性 オリゴヌクレオチドにリゲートした． オリゴ＃Ｂ５７ ３３８ＵＰ ［配列番号：２２６］ オリゴ＃Ｂ５６ ３３８ＤＯＷＮ ［配列番号：２２５］ 組立てると，これらのオリゴヌクレオチドは，ＮｃｏＩおよびＣｌａＩ制限末 端，ならびに以下の１４アミノ酸配列，すなわちＭｅｔ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｌｙｓを コードするＤＮＡ配列［配列番号：４０３］および（１５−１２５）ｈＩＬ−３ 変異遺伝子のアミノ酸１５〜２０をコードするＤＮＡ配列，ｐＭＯＮ１３２８７ ［配列番号：９７］を創製する．得られた変異ポリペプチドは（１５−１２５） ｈＩＬ−３変異ポリペプチド，ｐＭＯＮ１３２８８［配列番号：８８］に融合し た１４アミノ酸Ｎ−末端延長を有する．プラスミドｐＭＯＮ１３４４６はポリペ プチド＃Ｂ５３［配列番号：３１５］のアミノ酸配列を有する（１５−１２５） ｈＩＬ−３変異ポリペプチドをコードする（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異遺伝 子（ＤＮＡ配列＃Ｂ５３［配列番号：４０４］）を含有する． 例Ｂ５４ ｐＭＯＮ１３３９０の構築 プラスミドｐＭＯＮ１３２８８のＤＮＡ（大腸菌株ＧＭ４８｛ｄａｍ−｝から 精製）を制限酵素ＮｃｏＩおよびＣｌａＩで消化した．得られた３９４２塩基対 ＮｃｏＩ，ＣｌａＩフラグメントは以下の遺伝子要素，すなわちβ−ラクタマー ゼ遺伝子（ＡＭＰ），ｐＢＲ３２７複製の起源，転写ターミネーターとしてのフ ァージｆ１複製の起源，ｐｒｅｃＡプロモーター，ｇ１０Ｌリボソーム結合部位 および（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異体のアミノ酸２１〜１２５をコードする ＤＮＡ配列ｐＭＯＮ１３２８８を含有する．ｐＭＯＮ１３２８８からの３９４２ 塩基対ＮｃｏＩ，ＣｌａＩ制限フラグメントは以下のアニーリングされた相補性 オリゴヌクレオチドにリゲートした． オリゴ＃Ｂ５７ ３３８ＵＰ ［配列番号：２２６］ オリゴ＃Ｂ５６ ３３８ＤＯＷＮ ［配列番号：２２５］ 組立てると，これらのオリゴヌクレオチドは，ＮｃｏＩおよびＣｌａＩ制限末 端，ならびに以下の１４アミノ酸配列，すなわちＭｅｔ Ａｌａ Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｌｙｓを コードするＤＮＡ配列［配列番号：４０３］および（１５−１２５）ｈＩＬ−３ 変異遺伝子のアミノ酸１５〜２０をコードするＤＮＡ配列，ｐＭＯＮ１３２８８ ［配列番号：１００］を創製する．得られた変異体は（１５−１２５）ｈＩＬ− ３変異ポリペプチド，ｐＭＯＮ１３２８８［配列番号：８８］に融合した１４ア ミノ酸Ｎ−末端延長を有する．プラスミドｐＭＯＮ１３３９０はポリペプチド＃ Ｂ５４［配列番号：３１６］のアミノ酸配列をもつ（１５−１２５）ｈＩＬ−３ 変異ポリペプチドをコードする（１５−１２５）ｈＩＬ−３変異遺伝子（ＤＮＡ 配列＃Ｂ５４［配列番号：４０５］）を含有する． 例１３３−１３６ 表１０の変異体は，材料および方法の項ならびに本明細書の実施例，とくに例 ５４〜５８に記載した方法によって構築した．適当な制限酵素（表１０）で消化 された母体のプラスミドＤＮＡ（表１０）を，掲げた変化を含有する指示した制 限フラグメント（表１０）にリゲートした．得られた突然変異（１５−１２５） ＩＬ−３遺伝子は変異ポリペプチド中の相当するアミノ酸置換（表１０）をコー ドする．ポリペプチド＃２５［配列番号：８９］におけるアミノ酸置換にさらに 付加された置換および／またはそれとは異なる置換を表１０に指示する．表１０ 中の変異体の一部についての生物活性（ＡＭＬ１９３細胞での増殖促進活性）を 表１に示す． 例１２３−１３２ 表９の変異体は，材料および方法の項，ならびに本明細書の実施例５４〜５８ に記載された方法を用いてカセット突然変異によって構築された．適当な制限酵 素（表９）で消化された母体のプラスミドＤＮＡ（表９）を，指示したアニーリ ング相補性オリゴヌクレオチド対（表９）にリゲートした．組立てられたオリゴ ヌクレオチドには，これらの制限部位の間の（１５−１２５）ｈＩＬ−３遺伝子 （ｐＭＯＮ１３２８８［配列番号：１００］）内に挿入された適当な制限フラグ メントが創製される．（１５−１２５）ｈＩＬ−３遺伝子中のオリゴヌクレオチ ドによってコードされる欠失または置換は，変異ポリペプチド中のアミノ酸欠失 または置換に相当する（表９）．ポリペプチド＃２５［配列番号：８８］におけ るアミノ酸置換にさらに付加された置換および／またはそれとは異なる置換を表 ９に指示する．表９中の変異体の一部の生物活性（ＡＭＬ１９３細胞における増 殖促進活性）を表１に示す． 以下に示す式ＸＩは，（１５−１２５）ｈＩＬ−３ムテインの代表例であり， アミノ酸の上部に付加したボールド体の数字は，ネイティブな（１−１３３）ｈ ＩＬ−３においてはその位置にボールド体数字の下のアミノ酸が出現することを 示している［たとえば，式ＸＩの位置１におけるアミノ酸はネイティブな（１− １３３）ｈＩＬ−３で位置１５に出現するＡｓｎに相当する］．ボールド体で示 した数字はネイティブなＩＬ−３（１−１３３）に相当ずるアミノ酸を指示して いる．アミノ酸配列の下部のボールド体でない数字は配列同定整理番号である． このムテインを発現させた場合には，最初のアミノ酸はＭｅｔ−またはＭｅｔ− Ａｌａ−によって先行されることがある． Detailed Description of the Invention             Interleukin-3 (IL-3) multiple mutant polypeptide   The present invention is directed to United States Patent Application Serial No. 1 filed November 24, 1992. It is a partial continuation application of 07/981044. The original application is hereby incorporated by reference Introduce                               Field of the invention   The present invention includes multiple amino acid substitutions and deletions in the native hIL-3 molecule. There may be a mutant or variant of human interleukin-3 (hlL-3) Regarding different body. These hIL-3 multiple mutant polypeptides are native hIL- The activity of stimulating one or more of 3 and maintaining an improved hematopoietic cell stimulating activity and And / or a reduction in undesirable biological activity associated with native hIL-3 It may also show an improved activity profile.                               Background of the Invention   Colony-stimulating factor (CSF), which stimulates the differentiation and / or proliferation of bone marrow cells Due to their therapeutic potential to restore reduced levels of hematopoietic stem cell-derived cells I am very interested. Multiple CSFs in both human and mouse systems And their activity. For example, granulocyte-CSF (G-CSF) and macrophage-CSF (M-CSF) are neutral Stimulates the in vitro formation of sex granulocytes and macrophage colonies, but GM- CSF and interleukin-3 (IL-3) have a broader spectrum of activity, Formation of macrophages, neutral eosinophils and acidophile granulocyte colonies Also stimulates. IL-3 also includes mast cells, megakaryocytes and pure and mixed red blood cells It also stimulates colony formation.   Supports the ability to stimulate many different cell types and progenitor cell growth and proliferation IL-3, due to its ability to Treatment to restore the normal number of hematopoietic cells when the number of hematopoietic cells decreases due to the treatment There is a possibility of a potential use.   Interleukin-3 (IL-3) promotes survival, proliferation and differentiation of hematopoietic cells It is a hematopoietic cell growth factor that has the property of advancing. Among the biological properties of IL-3 are: It has the following capabilities. Ie (a) all or virtually all blood cell lines Ability to support proliferation and differentiation of progenitor cells in charge of (i) early pluripotent stem cells Ability to interact with; (c) ability to maintain proliferation of multipotent progenitor cells; (d) Ability to stimulate proliferation of myeloid leukemia (CML) cells; (e) mast cells, eosinophils And the ability to stimulate basophil proliferation; (f) human acute myeloid leukocytes (AML) Ability to stimulate DNA synthesis by cells; (g) cellular leukotrienes and hiss Ability to stimulate tamine production; (h) ability to induce leukocyte chemotaxis; and (i) The ability to induce cell surface molecules required for leukocyte adhesion.   Mature human interleukin-3 (hIL-3) is composed of 133 amino acids Be done. Has one disulfide bridge and two glycosylable sites [Yang et al., CELL47: 3 (1986)].   Mouse IL-3 (mIL-3) was the first T cell-related enzyme, 20-hydroxys Identified by Ihle et al. As a factor inducing the expression of teroid dehydrogenase [J. IMMUNOL.126: 2184 (1981)]. This factor is Purified to one. Proliferation of multiple subclasses of early hematopoietic and lymphoid progenitor cells It was also shown that it regulates differentiation.   A cDNA clone encoding mouse IL-3 was isolated in 1984. [Fung et al., NATURE307: 233 (1984) and Yokota. Et al., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA81: 1070 (198 4)]. This mouse DNA sequence contains 166 amino acids including candidate signal peptide. Encodes a polypeptide of amino acids.   The primate IL-3 sequence was obtained using a primate cDNA expression library. It was. The guinea pig IL-3 sequence is then cloned to obtain a human IL-3 sequence. It was used as a probe against the nom library.   Progenitor monkey and human genomic DNA homologues of the murine IL-3 sequence are described by Yang et al. CELL47: 3 (1986). Reported by Yang et al. The resulting human sequence contained a serine residue at position 8 of the mature protein sequence. this Following the discovery, other researchers have reported that Pro has a proline at position 8 in the protein sequence.8 The isolation of hIL-3 cDNA was reported. That is, hIL-3 has two conflicts. It is clear that the trait exists.   Dorssers et al. [GENE55: 115 (1987)] is human cDNA. A clone that hybridizes with mIL-3 was found in the library. This ha Hybridization is between the 3'-noncoding regions of mIL-3 and hIL-3. The result was a high degree of homology. This cDNA is hIL-3 (Pro8) Array Was coded.   U.S. Pat. No. 4,877,729 and U.S. Pat. No. 4,959,454 , Human IL-3 and primate IL-3 cDNAs and the tags they encode. Protein sequences are disclosed. This disclosed hIL-3 is in the protein sequence Position 8 of was serine rather than proline.   C1ark-Lewis et al. [SCIENCE231: 134 (1986)] Performed functional analysis of mouse IL-3 homologs synthesized by an automated peptide synthesizer. gave. The authors require a stable tertiary structure of the complete molecule for full activity. I conclude that. Studies on the role of disulfide bridges have Substituting all alanine for a molecule with 1/500 the activity of the native molecule It was revealed that it was possible to obtain. Substituting 2 of the 4 Cys residues with alanine (Cys79, Cys140→ Ala79, Ala140) An increase in activity occurred. The authors In mouse IL-3, in order to obtain a biological activity almost equivalent to the physiological level, One disulfide bridge between stains 17 and 80 is required and this structure is probably Stabilizes the tertiary structure of proteins and provides functionally optimal conformation [Clark-Lewis et al., PROC. NATL. ACAD ． SCI. USA,85: 7897 (1988)].   International patent application (PCT) WO88 / 00598 describes prosthesis and human IL-3 has been disclosed. This hIL-3 is Ser8→ Pro8Contains substitution The Substituting Ser for Cys to destroy the disulfide bridge, It has been suggested to replace one or more amino acids in position.   EP-A-0275598 (WO88 / 04691) describes Ala.1Missing It has been demonstrated that the biological activity is retained even if it is lost. Some mutations hIL-3 sequences, eg two double mutants, Ala1→ Asp1, Trp13 → Arg13(PGB / IL-302) and Ala1→ Asp1, Met3→ Thr3 (PGB / IL-304), as well as one triple mutant Ala1→ Asp1, Leu9→ Pro9, Trp13→ Arg13(PGB / IL-303) provided There is.   WO88 / 05469 describes how deglycosylation mutants are State what you get, Arg54Arg55And Arg108Arg109Lys110Sudden change In the variant, beer yeast (Saccharomyces cerevisiae) It is possible to avoid proteolysis by KEX2 protease during expression It suggests the ability. No mutein is disclosed. This place , Glycosylation and KEX2 protease activity are important for expression in yeast. It is important only then.   In WO88 / 06161, theoretically conformational and antigenic Various mutants considered to be neutral are described in. The sudden change that was actually made Difference is Met2→ Ile2And Ile131→ Leu131Only. These two bumps It was not disclosed whether the intended neutral state was achieved by the mutation. Not in.   WO91 / 00350 describes non-glycosylated hIL-3 related proteins, For example hIL-3 (Pro8AspFifteenAsp70), Met3rhul-3 (Pro8 AspFifteenAsp70); ThrFourrhuL-3 (Pro8AspFifteenAsp70)and Thr6rhuIL-3 (Pro8AspFifteenAsp70) Is disclosed. these Protein Compositions Contain Certain Harmful Side Effects Related to Native hIL-3 For example, if urticaria due to infiltration of mast cells and lymphocytes into the dermis does not appear It is said. The disclosed related hIL-3 proteins have Met at the N-terminus.3, Th rFourOr Thr6You may have.   WO 91/12874 contains at least one naturally occurring amino acid residue. Disclosed are cysteine-added variants of IL-3 (CAV) substituted with Cys residues. ing.                               Summary of the invention   The present invention provides a mutation or abrupt mutation of recombinant human interleukin-3 (hlL-3). Regarding foreign proteins (muteins). These hIL-3 muteins are amino acid And has an amino acid deletion at either or both of the N-terminus and the C-terminus. Good. Preferably, these mutant polypeptides of the invention are native Amino acids that differ from the amino acids found at the corresponding positions in the hIL-3 polypeptide Contains 4 or more. The present invention also relates to a pharmaceutical composition containing hIL-3 mutein, The present invention relates to DNA encoding the mutein and a method of using the mutein. Furthermore, the present invention is. Consists of a nucleotide sequence encoding the hIL-3 mutein Recombinant expression vector, related microbial expression system, and use of that microbial expression system A method for producing hIL-3 mutein.   The present invention includes deletion of 1 to 14 amino acids from the N-terminus and / or 1 from the C-terminus. Sudden changes in hIL-3 with multiple amino acid substitutions, including deletions of ~ 15 amino acids Includes variants. The preferred muteins of the invention are amino acids 1-14 from the N-terminus. Is deleted, amino acids 126 to 133 are deleted from the C-terminal, and the polypeptide Mutants containing about 4 to about 26 amino acid substitutions in the sequence. these HIL-3 multiple mutant polypeptide of. similar to or better than hIL-3 It may have excellent biological activity and, in some cases, improved side effect pro Have files, ie some muteins are better than native hIL-3 It has various therapeutic factors. The present invention also provides IL-3 antagonists, or Isolated anti-antibody for the production of antibodies useful in immunoassays or immunotherapy protocols Provides a mutein that can function as an original fragment. HIL-3 multiplex of the present invention In addition to in vivo use of the mutant polypeptide, in vitro use includes: Utilization of the ability to stimulate activation and proliferation of spinal cord and blood cells prior to patient infusion Can be considered.   Antagonists of hIL-3 are AML, CML and certain types of B lymphocyte cancer It seems to be particularly useful for inhibiting the growth of certain cancer cells such as. The antagonist Other conditions that may be useful include the abnormal production of certain blood cells Or activated by an endogenous ligand. Antago The nyst induces cancer cell proliferation by its ability to bind to the IL-3 receptor complex or Potentially potentiated, possibly naturally occurring hemopoietins, those For example, but not limited to IL-3, GM-CFS and IL-5 It seems that it efficiently competes with and reduces the activation effect specific to the ligand. IL-3, GM-CSF and / or IL-5 are also important for certain asthmatic reactions Plays a role. IL-3 receptor antagonists are inflammatory cell receptors Has utility against this disease by blocking mediated activation and enhancement It is considered to be one.                             Brief description of the drawings   FIG. 1 shows native (wild-type) human IL-3 [sequence expressed in E. coli. No .: 128] and encodes the initiator methionine Human IL-3 gene for expression in E. coli (pMON5873) Numbers are given from the N-terminus of native hIL-3.   Figure 2: ClaI to NsiI substitution fragment. FIG. 2 shows the hIL-3 gene Nucleotides of the replacement fragment used between the ClaI and NsiI sites Indicates an array. The codon choices used in the fragment are highly expressed in E. coli. Correlates with codon selection found in genes (Gouy & Gautler, 1982) Hit. The three new unique restriction sites, EcoRV, XhoI and PstI It was introduced for the purpose of inserting synthetic gene fragments. The code sequence portion shown is It encodes hIL-3 amino acids 20-70.   Figure 3 shows the nucleotide and amino acid sequences of the gene in pMON5873. Shown as an extended sequence from NcoI to HindIII. Amino acids 1-14 And the codon choices used to encode 107-133 are highly expressed large Corresponds to the selection found in the Enterobacteriaceae gene.   FIG. 4 shows [Met- (1-133) hIL-3 (Arg129)] Code 3 shows the construction of the plasmid vector pMON5846.   FIG. 5 shows [Met- (1-133) hIL-3 (Arg129)] Code 3 shows the construction of plasmid vector pMON5847 (ATCC68912).   FIG. 6 shows [Met- (15-133) hIL-3 (Arg129)] Code 2 shows the construction of the plasmid vector pMON5853.   FIG. 7 shows [Met- (1-133) hIL-3 (Arg129)] Code 2 shows the construction of plasmid vector pMON5854.   FIG. 8 shows the DNA sequence of the LamB signal peptide and the amino acid obtained therefrom. The acid sequence is shown.   FIG. 9: Plasmid encoding Met-Ala- (15-125) hIL-3 3 shows the construction of vector pMON5978.   FIG. 10: Plasmid encoding Met-Ala (15-125) hIL-3 3 shows the construction of vector pMON5988.   FIG. 11 is a plasmid vector encoding Met- (1-125) hIL-3. 3 shows the construction of pMON5887.   Figure 12 shows the construction of pMON6457 encoding (15-125) hIL-3. Show. This is the araBAD pro fused to the mutant hIL-3 amino acids 15-125. Contains a motor and LamB signal peptide.   FIG. 13 shows the construction of pMON6458. This is the mutant hIL-3 amino acid 15-125 fused to araBAD promoter and LamB signal pep Contains tide.   Figure 14 shows the construction of pMON13359.   Figure 15 shows the construction of pMON13352.   Figure 16 shows the construction of pMON13360.   Figure 17 shows the construction of pMON13363.   Figure 18 shows the construction of pMON13364.   Figure 19 shows the construction of pMON13365.   Figure 20 shows the construction of pMON13287.   Figure 21 shows the construction of pMON13288.   Figure 22 shows the construction of pMON13289.   FIG. 23 shows the construction of pMON5723.   Figure 24 shows the construction of pMON13438.                               Detailed Description of the Invention   The present invention provides amino acid substitutions at 4 or more positions in the amino acid sequence of a polypeptide. Of human interleukin-3 (hIL-3) mutein and substantially It relates to muteins having the same structure and substantially the same biological activity. The present invention The preferred mutein is amino acids 1-14 at the N-terminus and 126 amino acids at the C-terminus. ~ 133 deleted and further has 4 or more amino acid substitutions in the polypeptide (15-125) hIL-3 deletion mutants, and substantially identical structure and And a mutein having substantially the same biological activity. A particularly preferred mutein It is a mutein with 26 amino acid substitutions. Human interface used here Leukin-3 corresponds to the amino acid sequence (1-133) shown in FIG. 125) hIL-3 is the amino acid sequence of hIL-3 polypeptide from 15 to 125 Corresponding. Mutated hIL-3 that is post-translationally modified (eg glycosylation) Molecules, such as naturally-occurring variants of hIL-3 polypeptide amino acids. Position 8 in the hIL-3 polypeptide sequence is proline rather than serine. Alleles) are also included in the present invention.   The invention also provides a DNA sequence encoding a mutant polypeptide, which is substantially identical. DNA sequences that perform substantially the same function in And a DNA sequence different from the DNA encoding the mutein of the present invention.   Amino acids from the C-terminus of native human interleukin-3 polypeptide Native human interleukin-3 polypeptide lacking 126-133 Amino acids 1 to 14 are deleted from the N-terminal of In addition to having amino acid substitutions in the polypeptide sequence, native human A novel mutation consisting of a polypeptide having the amino acid sequence of Thaleukin-3 Human interleukin-3 polypeptides are included in the invention.   The present invention also includes a DNA sequence encoding the mutein of the present invention; a mutant DNA Oligonucleotide intermediates used in the construction of; and these oligonucleosides Polypeptides encoded by tide are included. These polypeptides are Useful as an antagonist or in immunoassays and immunotherapy protocols It may be useful as an antigen fragment for the production of various antibodies.   The mutant hIL-3 polypeptides of the present invention have a methionine inserted at the N-terminus. It may have an amino acid, an alanine, or a methionine-alanine residue.   The present invention provides formula I [In the formula, Xaa at position 17 is Ser, Lys, Gly, Asp, Met, Gln. Or Arg,   Xaa at position 18 is Asn, His, Leu, Ile, Phe, Arg or Is Gln,   Xaa at position 19 is Met, Phe, Ile, Arg, Gly, Ala or Is Cys,   Xaa at position 20 is Ile, Cys, Gln, Glu, Arg, Pro or Is Ala,   Xaa at position 21 is Asp, Phe, Lys, Arg, Ala, Gly , Glu, Gln, Asn, Thr, Ser or Val,   Xaa at position 22 is Glu, Trp, Pro, Ser, Ala, His , Asp, Asn, Gln, Leu, Val or Gly,   Xaa at position 23 is Ile, Val, Ala, Leu, Gly, Trp , Lys, Phe, Leu, Ser or Arg,   Xaa at position 24 is Ile, Gly, Val, Arg, Ser, Phe or Is Leu,   Xaa at position 25 is Thr, His, Gly, Gln, Arg, Pro or Is Ala,   Xaa at position 26 is His, Thr, Phe, Gly, Arg, Ala or Is Trp,   Xaa at position 27 is Leu, Gly, Arg, Thr, Ser or Ala. And   Xaa at position 28 is Lys, Arg, Leu, Gln, Gly, Pro. , Val or Trp,   Xaa at position 29 is Gln, Asn, Leu, Pro, Arg or Val. And   Xaa at position 30 is Pro, His, Thr, Gly, Asp. Gln , Ser, Leu or Lys,   Xaa at position 31 is Pro, Asp, Gly, Ala, Arg, Leu or Is Gln,   Xaa at position 32 is Leu, Val, Arg, Gln, Asn, Gly , Ala or Glu,   Xaa at position 33 is Pro, Leu, Gln, Ala, Thr or Glu. And   Xaa at position 34 is Leu, Val, Gly, Ser, Lys, Glu. , Gln, Thr, Arg, Ala, Phe, Ile or Met,   Xaa at position 35 is Leu, Ala, Gly, Asn, Pro, Gln or Is Val,   Xaa at position 36 is Asp, Leu or Val,   Xaa at position 37 is Phe, Ser, Pro, Trp or Ile,   Xaa at position 38 is Asn or Ala,   Xaa at position 40 is Leu, Trp or Arg,   Xaa at position 41 is Asn, Cys, Arg, Leu, His, Met or Is Pro,   Xaa at position 42 is Gly, Asp, Ser, Cys, Asn, Lys , Thr, Leu, Val, Glu, Phe, Tyr, Ile, Met, or Ala,   Xaa at position 43 is Glu, Asn, Tyr, Leu, Phe, Asp , Ala, Cys, Gln, Arg, Thr, Gly or Ser,   Xaa at position 44 is Asp, Ser, Leu, Arg, Lys, Thr , Met, Trp, Glu, Asn, Gln, Ala or Pro,   Xaa at position 45 is Gln, Pro, Phe, Val, Met, Leu , Thr, Lys, Trp, Asp, Asn, Arg, Ser, Ala, Ile. , Glu or His,   Xaa at position 46 is Asp, Phe, Ser, Thr, Cys, Glu , Asn, Gln, Lys, His, Ala, Tyr, Ile, Val, or Gly,   Xaa at position 47 is Ile, Gly, Val, Ser, Arg, Pro or Is His,   Xaa at position 48 is Leu, Ser, Cys, Arg, Ile, His , Phe, Glu, Lys, Thr, Ala, Met, Val or Asn. ,   Xaa at position 49 is Met, Arg, Ala, Gly, Pro, Asn , His or Asp,   Xaa at position 50 is Glu, Leu, Thr, Asp, Tyr, Lys , Asn, Ser, Ala, Ile, Val. His, Phe, Met, or Gln,   Xaa at position 51 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 52 is Asn, His, Arg, Leu. Gly, Ser again Is Thr,   Xaa at position 53 is Leu, Thr, Ala, Gly, Glu, Pro , Lys, Ser or Met,   Xaa at position 54 is Arg, Asp, Ile, Ser, Val, Thr. , Gln, Asn, Lys, His, Ala or Leu,   Xaa at position 55 is Arg, Thr, Val, Ser, Leu or Gly. And   Xaa at position 56 is Pro, Gly, Cys, Ser, Gln, Glu , Arg, His, Thr, Ala, Tyr, Phe, Leu, Val, or Lys,   Xaa at position 57 is Asn or Gly,   Xaa at position 58 is Leu, Ser, Asp, Arg, Gln, Val or Is Cys,   Xaa at position 59 is Glu, Tyr, His, Leu, Pro or Arg And   Xaa at position 60 is Ala, Ser, Pro, Tyr, Asn or Thr And   Xaa at position 61 is Phe, Asn, Glu, Pro, Lys, Arg or Is Ser,   Xaa at position 62 is Asn, His, Val, Arg, Pro, Thr , Asp or Ile,   Xaa at position 63 is Arg, Tyr, Trp, Lys, Ser, His. , Pro or Val,   Xaa at position 64 is Ala, Asn, Pro, Ser or Lys,   Xaa at position 65 is Val, Thr, Pro, His, Leu, Phe or Is Ser,   Xaa at position 66 is Lys, Ile, Arg, Val, Asn, Glu or Is Ser,   Xaa at position 67 is Ser, Ala, Phe, Val, Gly, Asn , Ile, Pro or His,   Xaa at position 68 is Leu, Val, Trp, Ser, Ile, Phe , Thr or His,   Xaa at position 69 is Gln, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg , Trp, Gly or Leu,   Xaa at position 70 is Asn, Leu, Val, Trp, Pro or Ala. And   Xaa at position 71 is Ala, Met, Leu, Pro, Arg, Glu , Thr, Gln, Trp or Asn,   Xaa at position 72 is Ser, Glu, Met, Ala, His, Asn , Arg or Asp,   Xaa at position 73 is Ala, Glu, Asp, Leu, Ser, Gly , Thr or Arg,   Xaa at position 74 is Ile, Met, Thr, Pro, Arg, Gly Or Ala,   Xaa at position 75 is Glu, Lys, Gly, Asp, Pro, Trp , Arg, Ser, Gln or Leu,   Xaa at position 76 is Ser, Val, Ala, Asn, Trp, Glu. , Pro, Gly or Asp,   Xaa at position 77 is Ile, Ser, Arg, Thr or Leu,   Xaa at position 78 is Leu, Ala, Ser, Glu, Phe, Gly or Is Arg,   Xaa at position 79 is Lys, Thr, Asn, Met, Arg, Ile. , Gly or Asp,   Xaa at position 80 is Asn, Trp, Val, Gly, Thr, Leu , Glu or Arg,   Xaa at position 81 is Leu, Gln, Gly, Ala, Trp, Arg , Val or Lys,   Xaa at position 82 is Leu, Gln, Lys, Trp, Arg, Asp , Glu, Asn, His, Thr, Ser, Ala, Tyr, Phe, Ile , Met or Val,   Xaa at position 83 is Pro, Ala, Thr, Trp, Arg or Met And   Xaa at position 84 is Cys, Glu, Gly, Arg, Met or Val And   Xaa at position 85 is Leu, Asn, Val or Gln,   Xaa at position 86 is Pro, Cys, Arg, Ala or Lys,   Xaa at position 87 is Leu, Ser, Trp or Gly,   Xaa at position 88 is Ala, Lys, Arg, Val or Trp,   Xaa at position 89 is Thr, Asp, Cys, Leu, Val, Glu , His, Asn or Ser,   Xaa at position 90 is Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Asp , Ile or Met,   Xaa at position 91 is Ala, Pro, Ser, Thr, Phe, Leu , Asp or His,   Xaa at position 92 is Pro, Phe, Arg, Ser, Lys, His , Ala, Gly, Ile or Leu,   Xaa at position 93 is Thr, Asp, Ser, Asn, Pro, Ala , Leu or Arg,   Xaa at position 94 is Arg, Ile, Ser, Glu, Leu, Val , Gln, Lys, His, Ala or Pro,   Xaa at position 95 is His, Gln, Pro, Arg, Val, Leu , Gly, Thr, Asn, Lys, Ser, Ala, Trp, Phe, Ile Or Tyr,   Xaa at position 96 is Pro, Lys, Tyr, Gly, Ile or Thr And   Xaa at position 97 is Ile, Val, Lys, Ala or Asn,   Xaa at position 98 is His, Ile, Asn, Leu, Asp, Ala. , Thr, Glu, Gln, Ser, Phe, Met, Val, Lys, Arg , Tyr or Pro,   Xaa at position 99 is Ile, Leu, Arg, Asp, Val, Pro , Gln, Gly, Ser, Phe or His,   Xaa at position 100 is Lys, Tyr, Leu, His, Arg, Ile, Ser, Gln or Pro,   Xaa at position 101 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr, Val, Tyr, Glu, Asn, Ser, Ala, Gly, Ile, Leu Or Gln,   Xaa at position 102 is Gly, Leu, Glu, Lys, Ser, Tyr. Is Pro,   Xaa at position 103 is Asp or Ser,   Xaa at position 104 is Trp, Val, Cys, Tyr, Thr, Met, Pro, Leu, Gln, Lys, Ala, Phe or Gly,   Xaa at position 105 is Asn, Pro, Ala, Phe, Ser, Trp, Gln, Tyr, Leu, Lys, Ile, Asp or His,   Xaa at position 106 is Glu, Ser, Ala, Lys, Thr, Ile, Gly or Pro,   Xaa at position 108 is Arg, Lys, Asp, Leu, Thr, Ile, Gln, His, Ser, Ala or Pro,   Xaa at position 109 is Arg, Thr, Pro, Glu, Tyr, Leu, Ser or Gly,   Xaa at position 110 is Lys, Ala, Asn, Thr, Leu, Arg, Gln, His, Glu, Ser, Ala or Trp,   Xaa at position 111 is Leu, Ile, Arg, Asp or Met,   Xaa at position 112 is Thr, Val, Gln, Tyr, Glu, His, Ser or Phe,   Xaa at position 113 is Phe, Ser, Cys, His, Gly, Trp, Tyr, Asp, Lys, Leu, Ile, Val or Asn,   Xaa at position 114 is Tyr, Cys, His, Ser, Trp, Arg. Or Leu,   Xaa at position 115 is Leu, Asn, Val, Pro, Arg, Ala, His, Thr, Trp or Met,   Xaa at position 116 is Lys, Leu, Pro, Thr, Met, Asp, val, Glu, Arg, Trp, Ser, Asn, His, Ala, Tyr, Phe, Gln or Ile,   Xaa at position 117 is Thr, Ser, Asn, Ile, Trp, Lys. Is Pro,   Xaa at position 118 is Leu, Ser, Pro, Ala, Glu, Cys, Asp or Tyr,   Xaa at position 119 is Glu, Ser, Lys, Pro, Leu, Thr, Tyr or Arg,   Xaa at position 120 is Asn, Ala, Pro, Leu, His, Val. Or Gln,   Xaa at position 121 is Ala, Ser, Ile, Asn, Pro, Lys, Asp or Gly,   Xaa at position 122 is Gln, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, His, Ile, Tyr or Cys,   Xaa at position 123 is Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr or Leu,   Still further, it may have a Met- preceding the amino acid at position 1; 1 to 14 amino acids from the N-terminus and / or 1 to 15 amino acids from the C-terminus May be deleted; the 4 to 44 amino acids designated Xaa are native (1-133) different from the corresponding amino acid of human interleukin-3 ]] Human interleukin-3 mutant polypeptide.   The present invention provides formula II [In the formula,   Xaa at position 17 is Ser, Gly, Asp, Met or Gln,   Xaa at position 18 is Asn, His, Leu, Ile, Phe, Arg or Is Gln,   Xaa at position 19 is Met, Phe, Ile, Arg or Ala,   Xaa at position 20 is Ile or Pro,   Xaa at position 21 is Asp or Glu,   Xaa at position 23 is Ile, Val, Ala, Leu or Gly,   Xaa at position 24 is Ile, Val, Phe or Leu,   Xaa at position 25 is Thr, His, Gly, Gln, Arg, Pro or Is Ala,   Xaa at position 26 is His, Phe, Gly, Arg or Ala,   Xaa at position 28 is Lys, Leu, Gln, Gly, Pro or Val. And   Xaa at position 29 is Gln, Asn, Leu, Arg or Val,   Xaa at position 30 is Pro, His, Thr, Gly or Gln,   Xaa at position 31 is Pro, Asp, Gly, Ala, Arg, Leu or Is Gln,   Xaa at position 32 is Leu, Arg, Gln, Asn, Gly, Ala or Is Glu,   Xaa at position 33 is Pro, Leu, Gln, Ala or Glu,   Xaa at position 34 is Leu, Val, Gly, Ser, Lys, Ala. , Arg, Gln, Glu, Ile, Phe, Thr or Met,   Xaa at position 35 is Leu, Ala, Asn, Pro, Gln or Val. And   Xaa at position 36 is Asp or Leu,   Xaa at position 37 is Phe, Ser, Pro, Trp or Ile,   Xaa at position 38 is Asn or Ala,   Xaa at position 41 is Asn, Cys, Arg, His, Met or Pro. And   Xaa at position 42 is Gly, Asp, Ser, Cys, Ala, Asn , Ile, Leu, Met, Tyr, Val or Arg,   Xaa at position 44 is Asp or Glu,   Xaa at position 45 is Gln, Val, Met, Leu, Thr, Lys , Ala, Asn, Glu, Ser or Trp,   Xaa at position 46 is Asp, Phe, Ser, Thr, Cys, Ala. , Asn, Gln, Glu, His, Ile, Lys, Tyr, Val, or Gly,   Xaa at position 47 is Ile, Va1 or His,   Xaa at position 49 is Met, Asn or Asp,   Xaa at position 50 is Glu, Thr, Ala, Asn, Ser or Asp And   Xaa at position 51 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 52 is Asn or Gly,   Xaa at position 53 is Leu, Met or Phe,   Xaa at position 54 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 55 is Arg, Thr, Val, Leu or Gly,   Xaa at position 56 is Pro, Gly, Cys, Ser, Gln, Ala. , Arg, Asn, Glu, His, Leu, Thr, Val or Lys. ,   Xaa at position 59 is Glu, Tyr, His, Leu or Arg,   Xaa at position 60 is Ala, Ser, Asn or Thr,   Xaa at position 61 is Phe or Ser,   Xaa at position 62 is Asn, Val, Pro, Thr or Ile,   Xaa at position 63 is Arg, Tyr, Lys, Ser, His or Val. And   Xaa at position 64 is Ala or Asn,   Xaa at position 65 is Val, Thr, Leu or Ser,   Xaa at position 66 is Lys, Ile, Arg, Val, Asn, Glu or Is Ser,   Xaa at position 67 is Ser, Phe, Val, Gly, Asn, Ile or Is His,   Xaa at position 68 is Leu, Val, Ile, Phe or His,   Xaa at position 69 is Gln, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg or Is Gly,   Xaa at position 70 is Asn or Pro,   Xaa at position 71 is Ala, Met, Pro, Arg, Glu, Thr or Is Gln,   Xaa at position 72 is Ser, Glu, Met, Ala, His, Asn , Arg or Asp,   Xaa at position 73 is Ala, Glu, Asp, Leu, Ser, Gly , Thr, Arg or Pro,   Xaa at position 74 is Ile or Met,   Xaa at position 75 is Glu, Gly, Asp, Ser or Gln,   Xaa at position 76 is Ser, Val, Ala, Asn, Glu, Pro , Gly or Asp,   The position Xaa is Ile, Ser or Leu,   Xaa at position 79 is Lys, Thr, Gly, Asn, Met, Arg , Ile, Gly or Asp,   Xaa at position 80 is Asn, Val, Gly, Thr, Leu, Glu or Is Arg,   Xaa at position 81 is Leu or Val,   Xaa at position 82 is Leu, Gln, Trp, Arg, Asp, Ala. , Asn, Glu, His, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr, or Val,   Xaa at position 83 is Pro, Ala, Thr, Trp or Met,   Xaa at position 85 is Leu or Val,   Xaa at position 87 is Leu or Ser,   Xaa at position 88 is Ala, Arg or Trp,   Xaa at position 89 is Thr, Asp, Glu. His, Asn or Ser And   Xaa at position 90 is Ala, Asp or Met,   Xaa at position 91 is Ala, Pro, Ser, Thr, Phe, Leu or Is Asp,   Xaa at position 92 is Pro or Ser,   Xaa at position 93 is Thr, Asp, Ser, Pro, Ala, Leu Is Arg,   Xaa at position 95 is His, Pro, Arg, Val, Leu, Gly , Asn, Ile, Phe, Ser or Thr,   Xaa at position 96 is Pro or Tyr,   Xaa at position 97 is Ile, Val or Ala,   Xaa at position 98 is His, Ile, Asn, Leu, Asp, Ala. , Thr, Leu, Arg, Gln, Glu, Lys, Met, Ser, Tyr , Val or Pro,   Xaa at position 99 is Ile, Leu, Val or Phe,   Xaa at position 100 is Lys, Leu, His, Arg, Ile, Gln, Pro or Ser,   Xaa at position 101 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr, Val, Asn, Ile, Leu or Tyr,   Xaa at position 102 is Gly, Glu, Lys or Ser,   Xaa at position 104 is Trp, Val, Tyr, Met or Leu,   Xaa at position 105 is Asn, Pro, Ala, Phe, Ser, Trp, Gln, Tyr, Leu, Lys, Ile, Asp or His,   Xaa at position 106 is Glu, Ser, Ala or Gly,   Xaa at position 108 is Arg, Ala, Gln, Ser or Lys,   Xaa at position 109 is Arg, Thr, Glu, Leu, Ser or Gly. And   Xaa at position 112 is Thr, Val, Gln, Glu, His or Ser And   Xaa at position 114 is Tyr or Trp,   Xaa at position 115 is Leu or Ala,   Xaa at position 116 is Lys, Thr, Met, Val, Trp, Ser, Leu, Ala, Asn, Gln, His, Met, Phe, Tyr, or I le,   Xaa at position 117 is Thr, Ser or Asn,   Xaa at position 119 is Glu, Ser, Pro, Leu, Thr or Tyr And   Xaa at position 120 is Asn, Pro, Leu, His, Val or Gln. And   Xaa at position 121 is Ala, Ser, Ile, Asn, Pro, Lys, Asp or Gly,   Xaa at position 122 is Gln, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, His, Ile, Tyr or Cys,   Xaa at position 123 is Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr or Leu,   Still further, it may have a Met- preceding the amino acid at position 1; 1 to 14 amino acids from the N-terminus and / or 1 to 15 amino acids from the C-terminus May be deleted; the 4 to 44 amino acids designated Xaa are native (1-133) different from the corresponding amino acid of human interleukin-3 ]] Human interleukin-3 mutant polypeptide.   The present invention provides formula III [In the formula,   Xaa at position 17 is Ser, Gly, Asp, Met or Gln,   Xaa at position 18 is Asn, His or Ile,   Xaa at position 19 is Met or Ile,   Xaa at position 21 is Asp or Glu,   Xaa at position 23 is Ile, Ala, Leu or Gly,   Xaa at position 24 is Ile, Val or Leu,   Xaa at position 25 is Thr, His, Gln or Ala,   Xaa at position 26 is His or Ala,   Xaa at position 29 is Gln, Asn or Val,   Xaa at position 30 is Pro, Gly or Gln,   Xaa at position 31 is Pro, Asp, Gly or Gln,   Xaa at position 32 is Leu, Arg, Gln, Asn, Gly, Ala or Is Glu,   Xaa at position 33 is Pro or Glu,   Xaa at position 34 is Leu, Val, Gly, Ser, Lys, Ala. , Arg, Gln, Glu, Ile, Phe, Thr or Met,   Xaa at position 35 is Leu, Ala, Asn, Pro, Gln or Val. And   Xaa at position 37 is Phe, Ser, Pro or Trp,   Xaa at position 38 is Asn or Ala,   Xaa at position 42 is Gly, Asp, Ser, Cys, Ala, Asn , Ile, Leu, Met, Tyr or Arg,   Xaa at position 44 is Asp or Glu,   Xaa at position 45 is Gln, Val, Met, Leu, Thr, Ala. , Asn, Glu, Ser or Lys,   Xaa at position 46 is Asp, Phe, Ser, Thr, Ala, Asn , Gln, Glu, His, Ile, Lys, Tyr, Val or Cys. ,   Xaa at position 50 is Glu, Ala, Asn, Ser or Asp,   Xaa at position 51 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 54 is Arg or Ala,   Xaa at position 54 is Arg or Ala,   Xaa at position 55 is Arg, Thr, Val, Leu or Gly,   Xaa at position 56 is Pro, Gly, Ser, Gln, Ala, Arg , Asn, Glu, Leu, Thr, Val or Lys,   Xaa at position 60 is Ala or Ser,   Xaa at position 62 is Asn, Pro, Thr or Ile,   Xaa at position 63 is Arg or Lys,   Xaa at position 64 is Ala or Asn,   Xaa at position 65 is Val or Thr,   Xaa at position 66 is Lys or Arg,   Xaa at position 67 is Ser, Phe or His,   Xaa at position 68 is Leu, Ile, Phe or His,   Xaa at position 69 is Gln, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg or Is Gly,   Xaa at position 71 is Ala, Pro or Arg,   Xaa at position 72 is Ser, Glu, Arg or Asp,   Xaa at position 73 is Ala or Leu,   Xaa at position 76 is Ser, Val, Ala, Asn, Glu, Pro or Is Gly,   Xaa at position 77 is Ile or Leu,   Xaa at position 79 is Lys, Thr, Gly, Asn, Met, Arg , Ile, Gly or Asp,   Xaa at position 80 is Asn, Gly, Glu or Arg,   Xaa at position 82 is Leu, Gln, Trp, Arg, Asp, Ala. , Asn, Glu, His, Ile, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr Or Val,   Xaa at position 83 is Pro or Thr,   Xaa at position 85 is Leu or Val,   Xaa at position 87 is Leu or Ser,   Xaa at position 88 is Ala or Trp,   Xaa at position 91 is Ala or Pro,   Xaa at position 93 is Thr, Asp, Ser, Pro, Ala, Leu Is Arg,   Xaa at position 95 is His, Pro, Arg, Val, Leu, Gly , Asn, Phe, Ser or Thr,   Xaa at position 96 is Pro or Tyr,   Xaa at position 97 is Ile or Val,   Xaa at position 98 is His, Ile, Asn, Leu, Ala, Thr. , Leu, Arg, Gln, Leu, Lys, Met, Ser, Tyr, Val. Or Pro,   Xaa at position 99 is Ile, Leu or Val,   Xaa at position 100 is Lys, Arg, Ile, Gln, Pro or Ser And   Xaa at position 101 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr, Pro, Asn, Ile, Leu or Tyr,   Xaa at position 104 is Trp or Leu,   Xaa at position 105 is Asn, Pro, Ala, Ser, Trp, Gln, Tyr, Leu, Lys, Ile, Asp or His,   Xaa at position 106 is Glu or Gly,   Xaa at position 108 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 109 is Arg, Thr, Glu, Leu or Ser,   Xaa at position 112 is Thr, Val or Gln,   Xaa at position 114 is Tyr or Trp,   Xaa at position 115 is Leu or Ala,   Xaa at position 116 is Lys, Thr, Val, Trp, Ser, Ala, His, Met, Phe, Tyr or Ile,   Xaa at position 117 is Thr or Ser,   Xaa at position 120 is Asn, Pro, Leu, His, Val or Gln. And   Xaa at position 121 is Ala, Ser, Ile, Asn, Pro, Asp. Or Gly,   Xaa at position 122 is Gln, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, His, Ile, Tyr or Cys,   Xaa at position 123 is Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr or Leu,   Still further, it may have a Met- preceding the amino acid at position 1; 1 to 14 amino acids from the N-terminal and / or 1 to 15 amino acids from the C-terminal May be deleted; the 4-35 amino acids designated Xaa are native (1-133) different from the corresponding amino acid of human interleukin-3 ]] Human interleukin-3 mutant polypeptide.   The present invention includes the formula IV [In the formula,   Xaa at position 17 is Ser, Gly, Asp or Gln,   Xaa at position 18 is Asn, His or Ile,   Xaa at position 23 is Ile, Ala, Leu or Gly,   Xaa at position 25 is Thr, His or Gln,   Xaa at position 26 is. His or Ala,   Xaa at position 29 is Gln or Asn,   Xaa at position 30 is Pro or Gly,   Xaa at position 32 is Leu, Arg, Asn or Ala,   Xaa at position 34 is Leu, Val, Ser, Ala, Arg, Gln. , Glu, Ile, Phe, Thr or Met,   Xaa at position 35 is Leu, Ala, Asn or Pro,   Xaa at position 38 is Asn or Ala,   Xaa at position 42 is Gly, Asp, Ser, Ala, Asn, Ile , Leu, Met, Tyr or Arg,   Xaa at position 45 is Gln, Val, Met, Leu, Ala, Asn , Glu or Lys,   Xaa at position 46 is Asp, Phe, Ser, Gln, Glu, His , Val or Thr,   Xaa at position 50 is Glu, Asn, Ser or Asp,   Xaa at position 51 is Asn, Arg, Pro, Thr or His,   Xaa at position 55 is Arg, Leu or Gly,   Xaa at position 56 is Pro, Gly, Ser, Ala, Asn, Val , Leu or Gln,   Xaa at position 62 is Asn, Pro or Thr,   Xaa at position 64 is Ala or Asn,   Xaa at position 65 is Val or Thr,   Xaa at position 67 is Ser or Phe,   Xaa at position 68 is Leu or Phe,   Xaa at position 69 is Gln, Ala, Glu or Arg,   Xaa at position 76 is Ser, Val, Asn, Pro or Gly,   Xaa at position 77 is Ile or Leu,   Xaa at position 79 is Lys, Gly, Asn, Met, Arg, Ile or Is Gly,   Xaa at position 80 is Asn, Gly, Glu or Arg,   Xaa at position 82 is Leu, Gln, Trp, Arg, Asp, Asn , Glu, His, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr or Val. ,   Xaa at position 87 is Leu or Ser,   Xaa at position 88 is Ala or Trp,   Xaa at position 91 is Ala or Pro,   Xaa at position 93 is Thr, Asp or Ala,   Xaa at position 95 is His, Pro, Arg, Val, Gly, Asn , Ser or Thr,   Xaa at position 98 is His, Ile, Asn, Ala, Thr, Gln. , Glu, Lys, Met, Ser, Tyr, Val or Leu,   Xaa at position 99 is Ile or Leu,   Xaa at position 100 is Lys or Arg,   Xaa at position 101 is Asp, Pro, Met, Lys, Thr, His, Pro, Asn, Ile, Leu or Tyr,   Xaa at position 105 is Asn, Pro, Ser, Ile or Asp,   Xaa at position 108 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 109 is Arg, Thr, Glu, Leu or Ser,   Xaa at position 112 is Thr or Gln,   Xaa at position 116 is Lys, Val, Trp, Ala, His, Phe, Tyr or Ile,   Xaa at position 117 is Thr or Ser,   Xaa at position 120 is Asn, Pro, Leu, His, Val or Gln. And   Xaa at position 121 is Ala, Ser, Ile, Pro or Asn,   Xaa at position 122 is Gln, Met, Trp, Phe, Pro, His, Ile or Tyr,   Xaa at position 123 is Ala, Met, Glu, Ser or Leu,   Still further, it may have a Met- preceding the amino acid at position 1; 1 to 14 amino acids from the N-terminus and / or 1 to 15 amino acids from the C-terminus May be deleted; the 4 to 44 amino acids designated Xaa are native (1-133) different from the corresponding amino acid of human interleukin-3 ]] Human interleukin-3 mutant polypeptide.   According to the invention, the formula V [In the formula,   Xaa at position 3 is Ser, Lys, Gly, Asp, Met, Gln or Arg,   Xaa at position 4 is Asn, His, Leu, Ile, Phe, Arg or Gln,   Xaa at position 5 is Met, Phe, Ile, Arg, Gly, Ala or cys,   Xaa at position 6 is Ile, Cys, Gln, Glu, Arg, Pro or Ala,   Xaa at position 7 is Asp, Phe, Lys, Arg, Ala, Gly, Glu , Gln, Asn, Thr, Ser or Val,   Xaa at position 8 is Glu, Trp, Pro, Ser, Ala, His, Asp , Asn, Gln, Leu, Val or Gly,   Xaa at position 9 is Ile, Val, Ala, Leu, Gly, Trp, Lys , Phe, Leu, Ser or Arg,   Xaa at position 10 is Ile, Gly, Val, Arg, Ser, Phe or Is Leu,   Xaa at position 11 is Thr, His, Gly, Gln, Arg, Pro or Is Ala,   Xaa at position 12 is His, Thr, Phe, Gly, Arg, Ala or Is Trp,   Xaa at position 13 is Leu, Gly, Arg, Thr, Ser, Ala ,   Xaa at position 14 is Lys, Arg, Leu, Gln, Gly, Pro. , Val or Trp,   Xaa at position 15 is Gln, Asn, Leu, Pro, Arg or Val. And   Xaa at position 16 is Pro, His, Thr, Gly, Asp, Gln. , Ser, Leu or Lys,   Xaa at position 17 is Pro, Asp, Gly, Ala, Arg, Leu Is Gln,   Xaa at position 18 is Leu, Val, Arg, Gln, Asn, Gly. , Ala or Glu,   Xaa at position 19 is Pro, Leu, Gln, Ala, Thr, Glu ,   Xaa at position 20 is Leu, Val, Gly, Ser, Lys, Glu. , Gln, Thr, Arg, Ala, Phe, Ile or Met,   Xaa at position 21 is Leu, Ala, Gly, Asn, Pro, Gln or Is Val,   Xaa at position 22 is Asp, Leu or Val,   Xaa at position 23 is Phe, Ser, Pro, Trp or Ile,   Xaa at position 24 is Asn or Ala,   Xaa at position 26 is Leu, Trp or Arg,   Xaa at position 27 is Asn, Cys, Arg, Leu, His, Met or Is Pro,   Xaa at position 28 is Gly, Asp, Ser, Cys, Ala, Lys , Asn, Thr, Leu, Val, Glu, Phe, Tyr, Ile, or Met,   Xaa at position 29 is Glu, Asn, Tyr, Leu, Phe, Asp , Ala, Cys, Gln, Arg, Thr, Gly or Ser,   Xaa at position 30 is Asp, Ser, Leu, Arg, Lys, Thr , Met, Trp, Glu, Asn, Gln, Ala or Pro,   Xaa at position 31 is Gln, Pro, Phe, Val, Met, Leu , Thr, Lys, Asp, Asn, Arg, Ser, Ala, Ile, Glu , His or Trp,   Xaa at position 32 is Asp, Phe, Ser, Thr, Cys, Glu , Asn, Gln, Lys, His, Ala, Tyr, Ile, Val, or Gly,   Xaa at position 33 is Ile, Gly, Val, Ser, Arg, Pro or Is His,   Xaa at position 34 is Leu, Ser, Cys, Arg, Ile, His , Phe, Glu, Lys, Thr, Ala, Met, Val or Asn. ,   Xaa at position 35 is Met, Arg, Ala, Gly, Pro, Asn , His or Asp,   Xaa at position 36 is Glu, Leu, Thr, Asp, Tyr, Lys , Asn, Ser, Ala, Ile, Val, His, Phe, Met, or Gln,   Xaa at position 37 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 38 is Asn, His, Arg, Leu, Gly, Ser or Is Thr,   Xaa at position 39 is Leu, Thr, Ala, Gly, Glu, Pro. , Lys, Ser or Met,   Xaa at position 40 is Arg, Asp, Ile, Ser, Val, Thr. , Gln, Asn, Lys, His, Ala or Leu,   Xaa at position 41 is Arg, Thr, Val, Ser, Leu or Gly. And   Xaa at position 42 is Pro, Gly, Cys, Ser, Gln, Glu , Arg, His, Thr, Ala, Tyr, Phe, Leu, Val, or Lys,   Xaa at position 43 is Asn or Gly,   Xaa at position 44 is Leu, Ser, Asp, Arg, Gln, Val or Is Cys,   Xaa at position 45 is Glu, Tyr, His, Leu, Pro or Arg And   Xaa at position 46 is Ala, Ser, Pro, Tyr, Asn or Thr And   Xaa at position 47 is Phe, Asn, Glu, Pro, Lys, Arg or Is Ser,   Xaa at position 48 is Asn, His, Val, Arg, Pro, Thr , Asp or Ile,   Xaa at position 49 is Arg, Tyr, Trp, Lys, Ser, His. , Pro or Val,   Xaa at position 50 is Ala, Asn, Pro, Ser or Lys,   Xaa at position 51 is Val, Thr, Pro, His, Leu, Phe or Is Ser,   Xaa at position 52 is Lys, Ile, Arg, Val, Asn, Glu or Is Ser,   Xaa at position 53 is Ser, Ala, Phe, Val, Gly, Asn , Ile, Pro or His,   Xaa at position 54 is Leu, Val, Trp, Ser, Ile, Phe , Thr or His,   Xaa at position 55 is Gln, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg , Trp, Gly or Leu,   Xaa at position 56 is Asn, Leu, Val, Trp, Pro or Ala. And   Xaa at position 57 is Ala, Met, Leu, Pro, Arg, Glu , Thr, Gln, Trp or Asn,   Xaa at position 58 is Ser, Glu, Met, Ala, His, Asn , Arg or Asp,   Xaa at position 59 is Ala, Glu, Asp, Leu, Ser, Gly , Thr or Arg,   Xaa at position 60 is Ile, Met, Thr, Pro, Arg, Gly Or Ala,   Xaa at position 61 is Glu, Lys, Gly, Asp, Pro, Trp , Arg, Ser, Gln or Leu,   Xaa at position 62 is Ser, Val, Ala, Asn, Trp, Glu. , Pro, Gly or Asp,   Xaa at position 63 is Ile, Ser, Arg, Thr or Leu,   Xaa at position 64 is Leu, Ala, Ser, Glu, Phe, Gly or Is Arg,   Xaa at position 65 is Lys, Thr, Gly, Asn, Met, Arg , Ile or Asp,   Xaa at position 66 is Asn, Trp, Val, Gly, Thr, Leu , Glu or Arg,   Xaa at position 67 is Leu, Gln, Gly, Ala, Trp, Arg , Val or Lys,   Xaa at position 68 is Leu, Gln, Lys, Trp, Arg, Asp , Glu, Asn, His, Thr, Ser, Ala, Tyr, Phe, Ile , Met or Val,   Xaa at position 69 is Pro, Ala, Thr, Trp, Arg or Met And   Xaa at position 70 is Cys, Glu, Gly, Arg, Met or Val. And   Xaa at position 71 is Leu, Asn, Val or Gln,   Xaa at position 72 is Pro, Cys, Arg, Ala or Lys,   Xaa at position 73 is Leu, Ser, Trp or Gly,   Xaa at position 74 is Ala, Lys, Arg, Val or Trp,   Xaa at position 75 is Thr, Asp, Cys, Leu, Val, Glu , His, Asn or Ser,   Xaa at position 76 is Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Asp , Ile or Met,   Xaa at position 77 is Ala, Pro, Ser, Thr, Phe, Leu , Asp or His,   Xaa at position 78 is Pro, Phe, Arg, Ser, Lys, His , Ala, Gly, Ile or Leu,   Xaa at position 79 is Thr, Asp, Ser, Asn, Pro, Ala , Leu or Arg,   Xaa at position 80 is Arg, Ile, Ser, Glu, Leu, Val , Gln, Lys, His, Ala or Pro,   Xaa at position 81 is His, Gln, Pro, Arg, Val, Leu , Gly, Thr, Asn, Lys, Ser, Ala, Trp, Phe, Ile Or Tyr,   Xaa at position 82 is Pro, Lys, Tyr, Gly, Ile or Thr And   Xaa at position 83 is Ile, Val, Lys, Ala or Asn,   Xaa at position 84 is His, Ile, Asn, Leu, Asp, Ala. , Thr, Glu, Gln, Ser, Phe, Met, Val, Lys, Arg , Tyr or Pro,   Xaa at position 85 is Ile, Leu, Arg, Asp, Val, Pro , Gln, Gly, Ser, Phe or His,   Xaa at position 86 is Lys, Tyr, Leu, His, Arg, Ile. , Ser, Gln or Pro,   Xaa at position 87 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr , Val, Tyr, Glu, Asn, Ser, Ala, Gly, Ile, Leu Or Gln,   Xaa at position 88 is Gly, Leu, Glu, Lys, Ser, Tyr or Is Pro,   Xaa at position 89 is Asp or Ser,   Xaa at position 90 is Trp, Val, Cys, Tyr, Thr, Met , Pro, Leu, Gln, Lys, Ala, Phe or Gly,   Xaa at position 91 is Asn, Pro, Ala, Phe, Ser, Trp , Gln, Tyr, Leu, Lys, Ile, Asp or His,   Xaa at position 92 is Glu, Ser, Ala, Lys, Thr, Ile , Gly or Pro,   Xaa at position 94 is Arg, Lys, Asp, Leu, Thr, Ile. , Gln, His, Ser, Ala or Pro,   Xaa at position 95 is Arg, Thr, Pro, Glu, Tyr, Leu , Ser or Gly,   Xaa at position 96 is Lys, Asn, Thr, Leu, Gln, Arg. , His, Glu, Ser, Ala or Trp,   Xaa at position 97 is Leu, Ile, Arg, Asp or Met,   Xaa at position 98 is Thr, Val, Gln, Tyr, Glu, His , Ser or Phe,   Xaa at position 99 is Phe, Ser, Cys, His, Gly, Trp , Tyr, Asp, Lys, Leu, Ile, Val or Asn,   Xaa at position 100 is Tyr, Cys, His, Ser, Trp, Arg. Or Leu,   Xaa at position 101 is Leu, Asn, Val, Pro, Arg, Ala, His, Thr, Trp or Met,   Xaa at position 102 is Lys, Leu, Pro, Thr, Met, Asp, Val, Glu, Arg, Trp, Ser, Asn, His, Ala, Tyr, Phe, Gln or Ile,   Xaa at position 103 is Thr, Ser, Asn, Ile, Trp, Lys. Is Pro,   Xaa at position 104 is Leu, Ser, Pro, Ala, Glu, Cys, Asp or Tyr,   Xaa at position 105 is Glu, Ser, Lys, Pro, Leu, Thr, Tyr or Arg,   Xaa at position 106 is Asn, Ala, Pro, Leu, His, Val. Or Gln,   Xaa at position 107 is Ala, Ser, Ile, Asn, Pro, Lys, Asp or Gly,   Xaa at position 108 is Gln, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, His, Ile, Tyr or Cys,   Xaa at position 109 is Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr or Leu,   In addition, Met- or Met-Ala- preceding the amino acid at position 1 4 to 44 amino acids represented by Xaa are (1-133) Different from the corresponding native amino acid of human interleukin-3]] (15 -125) human interleukin-3 mutant polypeptide, or substantially the same Polypeptides having one structure and substantially the same biological activity are included.   The present invention includes the formula VI [In the formula,   Xaa at position 3 is Ser, Gly, Asp. Met or Gln,   Xaa at position 4 is Asn, His, Leu, Ile, Phe, Arg or Gln,   Xaa at position 5 is Met, Phe, Ile, Arg or Ala,   Xaa at position 6 is Ile or Pro,   Xaa at position 7 is Asp or Glu,   Xaa at position 9 is Ile, Val, Ala, Leu or Gly,   Xaa at position 10 is Ile, Val, Phe or Leu,   Xaa at position 11 is Thr, His, Gly, Gln, Arg, Pro or Is Ala,   Xaa at position 12 is His, Phe, Gly, Arg or Ala,   Xaa at position 14 is Lys, Leu, Gln, Gly, Pro or Val. And   Xaa at position 15 is Gln, Asn, Leu, Arg or Val,   Xaa at position 16 is Pro, His, Thr, Gly or Gln,   Xaa at position 17 is Pro, Asp, Gly, Ala, Arg, Leu Is Gln,   Xaa at position 18 is Leu, Arg, Gln, Asn, Gly, Ala or Is Glu,   Xaa at position 19 is Pro, Leu, Gln, Ala or Glu,   Xaa at position 20 is Leu, Val, Gly, Ser, Lys, Ala, A rg, Gln, Glu, Ile, Phe, Thr or Met,   Xaa at position 21 is Leu, Ala, Asn, Pro, Gln or Val. And   Xaa at position 22 is Asp or Leu,   Xaa at position 23 is Phe, Ser, Pro, Trp or Ile,   Xaa at position 24 is Asn or Ala,   Xaa at position 27 is Asn, Cys, Arg, His, Met or Pro. And   Xaa at position 28 is Gly, Asp, Ser, Cys, Ala, Asn, I le, Leu, Met, Tyr or Arg,   Xaa at position 30 is Asp or Glu,   Xaa at position 31 is Gln, Val, Met, Leu, Thr, Lys, A la, Asn, Glu, Ser or Trp,   Xaa at position 32 is Asp, Phe, Ser, Thr, Cys, Ala, A sn, Gln, Glu, His, Ile, Lys, Tyr, Val, or Gl y,   Xaa at position 33 is Ile, Val or His,   Xaa at position 35 is Met, Asn or Asp,   Xaa at position 36 is Glu, Thr, Ala, Asn, Ser or Asp And   Xaa at position 37 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 38 is Asn or Gly,   Xaa at position 39 is Leu, Met or Phe,   Xaa at position 40 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 41 is Arg, Thr, Val, Leu or Gly,   Xaa at position 42 is Pro, Gly, Cys, Ser, Gln, Ala, Arg, Asn, Glu, His, Leu, Thr, Val or Lys ,   Xaa at position 45 is Glu, Tyr, His, Leu or Arg,   Xaa at position 46 is Ala, Ser, Asn or Thr,   Xaa at position 47 is Phe or Ser,   Xaa at position 48 is Asn, Val, Pro, Thr or Ile,   Xaa at position 49 is Arg, Tyr, Lys, Ser, His or Val. And   Xaa at position 50 is Ala or Asn,   Xaa at position 51 is Val, Thr, Leu or Ser,   Xaa at position 52 is Lys, Ile, Arg, Val, Asn, Glu or Is Ser,   Xaa at position 53 is Ser, Phe, Val, Gly, Asn, Ile or Is His,   Xaa at position 54 is Leu, Val, Ile, Phe or His,   Xaa at position 55 is Gln, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg or Is Gly,   Xaa at position 56 is Asn or Pro,   Xaa at position 57 is Ala, Met, Pro, Arg, Glu, Thr Is Gln,   Xaa at position 58 is Ser, Glu, Met, Ala, His, Asn, A rg or Asp,   Xaa at position 59 is Ala, Glu, Asp, Leu, Ser, Gly, T hr, Arg or Pro,   Xaa at position 60 is Ile or Met,   Xaa at position 61 is Glu, Gly, Asp, Ser or Gln,   Xaa at position 62 is Ser, Val, Ala, Asn, Glu, Pro, G ly or Asp,   Xaa at position 63 is Ile, Ser or Leu,   Xaa at position 65 is Lys, Thr, Gly, Asn, Met, Arg, I le or Asp,   Xaa at position 66 is Asn, Val, Gly, Thr, Leu, Glu or Is Arg,   Xaa at position 67 is Leu or Val,   Xaa at position 68 is Leu, Gln, Trp, Arg, Asp. Ala, A sn, Glu, His, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr, or Va l,   Xaa at position 69 is Pro, Ala, Thr, Trp or Met,   Xaa at position 71 is Leu or Val,   Xaa at position 73 is Leu or Ser,   Xaa at position 74 is Ala, Arg or Trp,   Xaa at position 75 is Thr, Asp, Glu, His, Asn or Ser And   Xaa at position 76 is Ala, Asp or Met,   Xaa at position 77 is Ala, Pro, Ser, Thr, Phe, Leu Is Asp,   Xaa at position 78 is Pro or Ser,   Xaa at position 79 is Thr, Asp, Ser, Pro, Ala, Leu Is Arg,   Xaa at position 81 is His, Pro, Arg, Val, Leu, Gly, A sn, Ile, Phe, Ser or Thr,   Xaa at position 82 is Pro or Tyr,   Xaa at position 83 is Ile, Val or Ala,   Xaa at position 84 is His, Ile, Asn, Leu, Asp, Ala, T hr, Arg, Gln, Glu, Lys, Met, Ser, Tyr, Val Is Pro,   Xaa at position 85 is Ile, Leu, Val or Phe,   Xaa at position 86 is Lys, Leu, His, Arg, Ile, Gln, P ro or Ser,   Xaa at position 87 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr, V al, Asn, Ile, Leu or Tyr,   Xaa at position 88 is Gly, Glu, Lys or Ser,   Xaa at position 90 is Trp, Val, Tyr, Met or Leu,   Xaa at position 91 is Asn, Pro, Ala, Phe, Ser, Trp, G ln, Tyr, Leu, Lys, Ile, Asp or His,   Xaa at position 92 is Glu, Ser, Ala or Gly,   Xaa at position 94 is Arg, Ala, Gln, Ser or Lys,   Xaa at position 95 is Arg, Thr, Glu, Leu, Ser or Gly And   Xaa at position 98 is Thr, Val, Gln, Glu, His or Ser , And   Xaa at position 100 is Tyr or Trp,   Xaa at position 101 is Leu or Ala,   Xaa at position 102 is Lys, Thr, Met, Val, Trp, Ser, Leu, Ala, Asn, Gln, His, Met, Phe, Tyr, or I le,   Xaa at position 103 is Thr, Ser or Asn,   Xaa at position 105 is Glu, Ser, Pro, Leu, Thr, or T yr,   Xaa at position 106 is Asn, Pro, Leu, His, Val, or G ln,   Xaa at position 107 is Ala, Ser, Ile, Asn, Pro, Lys, Asp or Gly,   Xaa at position 108 is Gln, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, His, Ile, Tyr or Cys,   Xaa at position 109 is Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr or Leu,   In addition, Met- or Met-Ala- preceding the amino acid at position 1 4 to 44 amino acids designated by Xaa may be Different from the corresponding amino acid of buna (1-133) human interleukin-3] (15-125) human interleukin-3 mutant polypeptide, or Polypeptides having qualitatively identical structure and substantially identical biological activity are included ．   The present invention includes the formula VII [In the formula,   Xaa at position 3 is Ser, Gly, Asp, Met or Gln,   Xaa at position 4 is Asn, His or Ile,   Xaa at position 5 is Met or Ile,   Xaa at position 7 is Asp or Glu,   Xaa at position 9 is Ile, Ala, Leu or Gly,   Xaa at position 10 is Ile, Val or Leu,   Xaa at position 11 is Thr, His, Gln or Ala,   Xaa at position 12 is His or Ala,   Xaa at position 15 is Gln, Asn or Val,   Xaa at position 16 is Pro, Gly or Gln,   Xaa at position 17 is Pro, Asp, Gly or Gln,   Xaa at position 18 is Leu, Arg, Gln, Asn, Gly, Ala or Is Glu,   Xaa at position 19 is Pro or Glu,   Xaa at position 20 is Leu, Val, Gly, Ser, Lys, Ala. , Arg, Gln, Glu, Ile, Phe, Thr or Met,   Xaa at position 21 is Leu, Ala, Asn, Pro, Gln or Val. And   Xaa at position 23 is Phe, Ser, Pro or Trp,   Xaa at position 24 is Asn or Ala,   Xaa at position 28 is Gly, Asp, Ser, Cys, Ala, Asn , Ile, Leu, Met, Tyr or Arg,   Xaa at position 30 is Asp or Glu,   Xaa at position 31 is Gln, Val, Met, Leu, Thr, Ala. , Asn, Glu, Ser or Lys,   Xaa at position 32 is Asp, Phe, Ser, Thr, Ala, Asn , Gln, Glu, His, Ile, Lys, Tyr, Val or Cys. ,   Xaa at position 36 is Glu, Ala, Asn, Ser or Asp,   Xaa at position 37 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 40 is Arg or Ala,   Xaa at position 41 is Arg, Thr, Val, Leu or Gly,   Xaa at position 42 is Pro, Gly, Ser, Gln, Ala, Arg , Asn, Glu, Leu, Thr, Val or Lys,   Xaa at position 46 is Ala or Ser,   Xaa at position 48 is Asn, Pro, Thr or Ile,   Xaa at position 49 is Arg or Lys,   Xaa at position 50 is Ala or Asn,   Xaa at position 51 is Val or Thr,   Xaa at position 52 is Lys or Arg,   Xaa at position 53 is Ser, Phe or His,   Xaa at position 54 is Leu, Ile, Phe or His,   Xaa at position 55 is Gln, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg , Or Gly,   Xaa at position 57 is Ala, Pro or Arg,   Xaa at position 58 is Ser, Glu, Arg or Asp,   Xaa at position 59 is Ala or Leu,   Xaa at position 62 is Ser, Val, Ala, Asn, Glu, Pro or Is Gly,   Xaa at position 63 is Ile or Leu,   Xaa at position 65 is Lys, Thr, Gly, Asn, Met, Arg , Ile, Gly or Asp,   Xaa at position 66 is Asn, Gly, Glu or Arg,   Xaa at position 68 is Leu, Gln, Trp, Arg, Asp, Ala. , Asn, Glu, His, Ile, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr Or Val,   Xaa at position 69 is Pro or Thr,   Xaa at position 71 is Leu or Val,   Xaa at position 73 is Leu or Ser,   Xaa at position 74 is Ala or Trp,   Xaa at position 77 is Ala or Pro,   Xaa at position 79 is Thr, Asp, Ser, Pro, Ala, Leu Is Arg,   Xaa at position 81 is His, Pro, Arg, Val, Leu, Gly. , Asn, Phe, Ser or Thr,   Xaa at position 82 is Pro or Tyr,   Xaa at position 83 is Ile or Val,   Xaa at position 84 is His, Ile, Asn, Leu, Ala, Thr. , Leu, Arg, Gln, Leu, Lys, Met, Ser, Tyr, Val. Or Pro,   Xaa at position 85 is Ile, Leu or Val,   Xaa at position 86 is Lys, Arg, Ile, Gln, Pro or Ser And   Xaa at position 87 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr , Asn, Ile, Leu or Tyr,   Xaa at position 90 is Trp or Leu,   Xaa at position 91 is Asn, Pro, Ala, Ser, Trp, Gln , Tyr, Leu, Lys, Ile, Asp or His,   Xaa at position 92 is Glu or Gly,   Xaa at position 94 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 95 is Arg, Thr, Glu, Leu or Ser,   Xaa at position 98 is Thr, Val or Gln,   Xaa at position 100 is Tyr or Trp,   Xaa at position 101 is Leu or Ala,   Xaa at position 102 is Lys, Thr, Val, Trp, Ser, Ala, His, Met, Phe, Tyr or Ile,   Xaa at position 103 is Thr or Ser,   Xaa at position 106 is Asn, Pro, Leu, His, Val or Gln. And   Xaa at position 107 is Ala, Ser, Ile, Asn, Pro, Asp. Or Gly,   Xaa at position 108 is Gln, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, His, Ile, Tyr or Cys,   Xaa at position 109 is Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr or Leu,   In addition, Met- or Met-Ala- preceding the amino acid at position 1 May have; the 4-35 amino acids designated Xaa are native (1-133) different from the corresponding amino acid of human interleukin-3]] (15 -125) human interleukin-3 mutant polypeptide is included.   The present invention provides formula VIII [In the formula,   Xaa at position 3 is Ser, Gly, Asp or Gln,   Xaa at position 4 is Asn, His or Ile,   Xaa at position 9 is Ile, Ala, Leu or Gly,   Xaa at position 11 is Thr, His or Gln,   Xaa at position 12 is His or Ala,   Xaa at position 15 is Gln or Asn,   Xaa at position 16 is Pro or Gly,   Xaa at position 18 is Leu, Arg, Asn or Ala,   Xaa at position 20 is Leu, Val, Ser, Ala, Arg, Gln. , Glu, Ile, Phe, Thr or Met,   Xaa at position 21 is Leu, Ala, Asn or Pro,   Xaa at position 24 is Asn or Ala,   Xaa at position 28 is Gly, Asp, Ser, Ala, Asn, Ile , Leu, Met, Tyr or Arg,   Xaa at position 31 is Gln, Val, Met, Leu, Ala, Asn , Glu or Lys,   Xaa at position 32 is Asp, Phe, Ser, Ala, Gln, Glu , His, Val or Thr,   Xaa at position 36 is Glu, Asn, Ser or Asp,   Xaa at position 37 is Asn, Arg, Pro, Thr or His,   Xaa at position 41 is Arg, Leu or Gly,   Xaa at position 42 is Pro, Gly, Ser, Ala, Asn, Val , Leu or Gln,   Xaa at position 48 is Asn, Pro or Thr,   Xaa at position 50 is Ala or Asn,   Xaa at position 51 is Val or Thr,   Xaa at position 53 is Ser or Phe,   Xaa at position 54 is Leu or Phe,   Xaa at position 55 is Gln, Ala, Glu or Arg,   Xaa at position 62 is Ser, Val, Asn, Pro or Gly,   Xaa at position 63 is Ile or Leu,   Xaa at position 65 is Lys, Asn, Met, Arg, Ile or Gly And   Xaa at position 66 is Asn, Gly, Glu or Arg,   Xaa at position 68 is Leu, Gln, Trp, Arg, Asp, Asn , Glu, His, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr or Val. ,   Xaa at position 73 is Leu or Ser,   Xaa at position 74 is Ala or Trp,   Xaa at position 77 is Ala or Pro,   Xaa at position 79 is Thr, Asp or Ala,   Xaa at position 81 is His, Pro, Arg, Val, Gly, Asn , Ser or Thr,   Xaa at position 84 is His, Ile, Asn, Ala, Thr, Arg , Gln, Glu, Lys, Met, Ser, Tyr, Val or Leu. ,   Xaa at position 85 is Ile or Leu,   Xaa at position 86 is Lys or Arg,   Xaa at position 87 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Pro , Asn, Ile, Leu or Tyr,   Xaa at position 91 is Asn, Pro, Ser, Ile or Asp,   Xaa at position 94 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 95 is Arg, Thr, Glu, Leu or Ser,   Xaa at position 98 is Thr or Gln,   Xaa at position 102 is Lys, Val, Trp or Ile,   Xaa at position 103 is Thr, Ala, His, Phe, Tyr or Ser And   Xaa at position 106 is Asn, Pro, Leu, His, Val or Gln. And   Xaa at position 107 is Ala, Ser, Ile, Pro or Asp,   Xaa at position 108 is Gln, Met, Trp, Phe, Pro, His, Ile or Tyr,   Xaa at position 109 is Ala, Met, Glu, Ser or Leu,   In addition, Met- or Met-Ala- preceding the amino acid at position 1 May have; the 4-26 amino acids designated by Xaa are (1-133) differs from the corresponding amino acid of human interleukin-3] (15-125) human interleukin-3 mutant polypeptide, or Polypeptides having qualitatively identical structure and substantially identical biological activity are included ．   The present invention has the formula (In the formula,   m is 0 or 1,   Xaa at position 18 is Asn or Ile,   Xaa at position 19 is Met, Ala or Ile,   Xaa at position 20 is Ile, Pro or Ile,   Xaa at position 23 is Ile, Ala or Leu,   Xaa at position 25 is Thr or His,   Xaa at position 29 is Gln, Arg, Val or Ile,   Xaa at position 32 is Leu, Ala, Asn or Arg,   Xaa at position 34 is Leu or Ser,   Xaa at position 37 is Phe, Pro or Ser,   Xaa at position 38 is Asn or Ala,   Xaa at position 42 is Gly, Ala, Ser, Asp or Asn,   Xaa at position 45 is Gln, Val or Met,   Xaa at position 46 is Asp or Ser,   Xaa at position 49 is Met, Ile, Leu or Asp,   Xaa at position 50 is Glu or Asp,   Xaa at position 51 is Asn, Arg or Ser,   Xaa at position 55 is Arg, Leu or Thr,   Xaa at position 56 is Pro or Ser,   Xaa at position 59 is Glu or Leu,   Xaa at position 60 is Ala or Ser,   Xaa at position 62 is Asn, Val or Pro,   Xaa at position 63 is Arg or His,   Xaa at position 65 is Val or Ser,   Xaa at position 67 is Ser, Asn, His or Gln,   Xaa at position 69 is Gln or Glu,   Xaa at position 73 is Ala or Gly,   Xaa at position 76 is Ser, Ala or Pro,   Xaa at position 79 is Lys, Arg or Ser,   Xaa at position 82 is Leu, Glu, Val or Trp,   Xaa at position 85 is Leu or Val,   Xaa at position 87 is Leu, Ser or Tyr,   Xaa at position 88 is Ala or Trp,   Xaa at position 91 is Ala or Pro,   Xaa at position 93 is Pro or Ser,   Xaa at position 95 is His or Thr,   Xaa at position 98 is His, Ile or Thr,   Xaa at position 100 is Lys or Arg,   Xaa at position 101 is Asp, Ala or Met,   Xaa at position 105 is Asn or Glu,   Xaa at position 109 is Arg, Glu or Leu,   Xaa at position 112 is Thr or Gln,   Xaa at position 116 is Lys, Val, Trp or Ser,   Xaa at position 117 is Thr or Ser,   Xaa at position 120 is Asn, Gln or His,   Xaa at position 123 is Ala or Glu.   However, the 4 to 26 amino acids represented by Xaa are native human Different from the corresponding amino acid of Thaleukin-3) polypeptide or substantially Include polypeptides having the same structure and substantially the same biological activity.   Preferred polypeptides of the present invention have the formula [In the formula,   m is 0 or 1,   n is 0 or 1,   p is 0 or 1,   Xaa at position 4 is Asn or Ile,   Xaa at position 5 is Met, Ala or Ile,   Xaa at position 6 is Ile, Pro or Leu,   Xaa at position 9 is Ile, Ala or Leu,   Xaa at position 11 is Thr or His,   Xaa at position 15 is Gln, Arg, Val or Ile,   Xaa at position 18 is Leu, Ala, Asn or Arg,   Xaa at position 20 is Leu or Ser,   Xaa at position 23 is Phe, Pro or Ser,   Xaa at position 24 is Asn or Ala,   Xaa at position 28 is Gly, Ala, Ser, Asp or Asn,   Xaa at position 31 is Gln, Val or Met,   Xaa at position 32 is Asp or Ser,   Xaa at position 35 is Met, Ile or Asp,   Xaa at position 36 is Glu or Asp,   Xaa at position 37 is Asn, Arg or Ser,   Xaa at position 41 is Arg, Leu or Thr,   Xaa at position 42 is Pro or Ser,   Xaa at position 45 is Glu or Leu,   Xaa at position 46 is Ala or Ser,   Xaa at position 48 is Asn, Val or Pro,   Xaa at position 49 is Arg or His,   Xaa at position 51 is Val or Ser,   Xaa at position 53 is Ser, Asn, His or Gln,   Xaa at position 55 is Gln or Glu,   Xaa at position 59 is Ala or Gly,   Xaa at position 62 is Ser, Ala or Pro,   Xaa at position 65 is Lys, Arg or Ser,   Xaa at position 67 is Leu, Glu or Val,   Xaa at position 68 is Leu, Glu, Val or Trp,   Xaa at position 71 is Leu or Val,   Xaa at position 73 is Leu, Ser or Tyr,   Xaa at position 74 is Ala or Trp,   Xaa at position 77 is Ala or Pro,   Xaa at position 79 is Pro or Ser,   Xaa at position 81 is His or Thr,   Xaa at position 84 is His, Ile or Thr,   Xaa at position 86 is Lys or Arg,   Xaa at position 87 is Asp, Ala or Met,   Xaa at position 91 is Asn or Glu,   Xaa at position 95 is Arg, Glu or Leu,   Xaa at position 98 is Thr or Gln,   Xaa at position 102 is Lys, Val, Trp or Ser,   Xaa at position 103 is Thr or Ser,   Xaa at position 106 is Asn, Gln or His,   Xaa at position 109 is Ala or Glu.   However, the 4 to 26 amino acids shown by Xaa are native (15- 125) different from the corresponding amino acid of human interleukin-3] Tide, or a polypeptide having substantially the same structure and substantially the same biological activity. It is Petit.   "Mutant amino acid sequence," "mutant protein," or "mutant polypeptide The term "peptide" means an amino acid sequence mutated from the native sequence or the native sequence. Amino acid encoded by a nucleotide sequence intentionally mutated from a unique sequence A polypeptide having a sequence. "Mutein", "Mutein" The term "quality" or "mutin" refers to a protein consisting of a mutated amino acid sequence. And amino acid deletion and / or substitution of native amino acids of native hIL-3. Includes polypeptides that differ from the no acid sequence. The term "native sequence" is wild Amino acid sequence or nucleic acid sequence identical to the native or native gene or protein Means.   Human IL-3 is due to its ability to stimulate colony formation by human hematopoietic progenitor cells. Therefore, it is characterized. Colonies formed are erythrocytes, granulocytes, megakaryocytes, and granules. Sphere macrophages and mixtures thereof are included. Human IL-3 was initially In a study conducted in primates and then in humans, bone marrow function and peripheral blood cell population Have been demonstrated to restore therapeutically beneficial levels to A. P. (1990); Ganser, A .; (1990); and Falk , S. (1991)]. Other activities of hIL-3 include leukocyte migration and chemotaxis Conversion The ability to stimulate sex; high levels of inflammatory mediators in human leukocytes such as leuco Ability to initiate triene and histamine production; molecules required for leukocyte adhesion Ability to induce expression on the cell surface; and induce skin inflammatory response and fever Has the ability to emit. Many or all of these biological activities of hIL-3 are It is involved in null transmission and high affinity receptor binding. Mutant Polypep of the Invention Tide has a similar or more potent bioactivity as compared to native hIL-3. Or have improved half-life or reduced adverse side effects or both It may represent a useful property. They may also be useful as antagonists. There is a match. Shows extremely low activity when compared to native hIL-3 HIL-3 mutant polypeptides with no or no activity As an antigen for producing antibodies for use in immunology or immunotherapy, Or other useful intermediates used in the construction of useful hIL-3 muteins. There is a match. hIL-3 binds to its receptor and activates a second messenger HIL-3 of the present invention because it functions by producing competent na signaling. Muteins help determine which specific amino acid sequences are involved in these activities. Can be useful for.   The novel hIL-3 mutant polypeptides of the invention are preferably human IL-3. Or has at least one biological property of an IL-3-like growth factor, and 2 or more II-3 like biological properties above, or improved properties, or human IL-3 It may show an undesirable diminution of biological properties. Some mutated polys of the invention Peptides may also show an improved side effect profile. For example, Compared to native hIL-3 or (15-125) hIL-3, leuco May show reduced triene release or histamine release. Such h IL-3 or hIL-3 like biological properties include one or more of the following: Biological properties as well as in vivo and in vitro activity.   One of these properties is that of red blood cells, lymphocytes and myeloid lineage progenitor cells. Supporting hatred and differentiation. For example, in a standard human bone marrow assay, IL-3 like biological properties are granulocyte type colonies, megakaryocyte type colonies, monocytes / macs It is a stimulation of rophage type colonies and erythroid colonies. Other IL-3 like Properties include the interaction with early pluripotent stem cells, support for proliferation of multipotent progenitor cells, Stimulation of chronic myelogenous leukemia (CML) cell proliferation, stimulation of mast cell proliferation, various causes Capacity to support growth of child-dependent cell lines and induce immature myeloid progenitor cells There is. Other biological properties of IL-3 have also been disclosed in the art. Human IL-3 also has some potentially unwanted biological properties, such as Stimulation of Icotriene Release, Spleen and Cultured Bone Marrow and His in Vivo It has the ability to stimulate the synthesis of tamine.   The biological activity of hIL-3 and hIL-3 mutant proteins of the invention is It is measured by DNA synthesis by human acute myelogenous leukemia cells (AML). Cause The offspring-dependent cell line AML193 was adapted for testing bioactivity.   One object of the invention is to have 4 or more amino acid substitutions in the polypeptide sequence, Similar to native hIL-3 or native (15-125) hIL-3 HIL-3 mutein and hIL-3 having or improved biological activity thereof To provide a deleted mutein.   The present invention consists of at least the amino acid residues 15 to 118 of hIL-3 at the N-terminal end. And / or the C-terminus may be further extended with additional amino acids, Mutations containing 4 or more amino acid substitutions in the amino acid sequence of the polypeptide Includes polypeptides. (15-125) hIL-3 mutant is When expressed in the cytoplasm, it is more soluble than hIL-3 and this protein Secreted at higher levels than hIL-3 native to the periplasm of E. coli Have been found.   The above-described mutant hIL-3 of the invention when expressed in the cytoplasm of E. coli. The polypeptide is cleaved by Met upon expression, leaving Ala at the N-terminus, In some cases, the N-terminus is composed of Met-Ala-. These mutations h IL-3 polypeptide is expressed in E. coli with a signal peptide fused to the N-terminus Sometimes it is done. This signal peptide is a polypeptide that is part of the secretory process. Disconnected from. Secretion in E. coli depends on the precise nature of the signal peptidase. The N-terminal correct amino acid [eg (15-125) hIL-3 polypeptide Can be used to obtain Asn15] in peptide. This is E. coli Contrast with heterogeneity often found at the N-terminus of proteins expressed in the cytoplasm Target.   The hIL-3 mutant polypeptides of the invention have hIL-3 activity or hIL-3. May have similar activity. For example, they are one of the native hIL-3s. Or the production of hematopoietic cells by human or primate progenitor cells having two or more biological activities. It may be useful for live stimulation. HIL-3 muteins of the present invention and containing them The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the hematopoietic cell population is associated with a disease or radiation or chemotherapy. It is useful for treating conditions that have been reduced or destroyed by treatment.   The hIL-3 muteins of the present invention also bind specifically to the hIL-3 receptor. Antagoni blocks hIL-3 receptors by blocking gonist binding It may be useful as a strike.   The (15-125) hIL-3 muteins of the present invention, especially the native hIL- One of the muteins that retains activity similar to or better than that of 3. The potential of the point is that smaller amounts of bioactive mutein are used to achieve the desired therapeutic effect. It is possible to use. This is the number of treatments needed to obtain the desired therapeutic effect. Allows you to reduce the number. The use of smaller amounts may also lead to possible antigenic effects and other It can reduce the likelihood of possible unwanted side effects. For example, If the desired therapeutic effect can be achieved with a smaller amount of polypeptide, nature Side effects associated with the administration of prominent IL-3, such as leukotriene and / or hista It is possible to reduce or eliminate the stimulation of min release. HIL-3 of the present invention Muteins may also be useful in activating stem and progenitor cells with low receptor numbers. The The pharmaceutical composition containing (15-125) hIL-3 mutein of the present invention is It can be given orally, intravenously or subcutaneously.   In another aspect, the invention produces a novel family of human IL-3 muteins. Provides a new way to do this. The method of the present invention comprises a novel hIL-3 mutant po Transformed with a vector containing the DNA sequence code for expression of the polypeptide Culturing a suitable cell or cell line. Suitable cells or cell lines are It is a fungal cell. For example, in the field of biotechnology, various E. coli Strains are well known as host cells. Examples of such strains include E. coli strains JM101 [Yanish-Perron et al. (1985)] and MO105. [Obukowicz et al. (1992)]. Various strains of Bacillus subtilis Can be used. Cells of many yeast strains known to those skilled in the art Can also be used as host cells for the expression of the polypeptides of the invention.   For example, mammalian cells such as Chinese hamster ovary cells (CHO) Suitable for use in invention. General expression of heterologous genes in mammalian cells The method described by Kaufman, R .; J. (1987): High level pr oduction of proteins in mammalian cell s. inGenetic Engineering,Principles a nd  Methods9, vol. K. Setlow, Plenum Pres s, New York has a review. Expression vectors can function in mammalian cells Strong promoter drives transcription of the coding region for eukaryotic secretory signal peptides And is constructed so that it is translatably fused to the coding region of the hIL-3 variant. The For example, pcDNA I / Neo, pRc / RSV, and pRc / C MV-like plasmids (Invitrogen Corp., San Diego o, obtained from California) can be used. Eukaryotic secretory signal peptide The coding region of the thyroid is either from the hIL-3 gene itself or is secreted by another It may be from a mammalian protein [Bayne, M .; L. (198 7):Proc．Natl．Acad．Sci．USA,84, 2638-26 42]. After constructing the vector containing the hIL-3 mutant gene, the vector DNA Transfect into mammalian cells. Such cells are, for example, COS7, It can be HeLa, BHK, CHO, or a mouse L cell line. Cells For example, culturing in DMEM medium (JRH Scientific) it can. HIL-3 mutants secreted into the medium were used to transfect cells. Followed by transient expression for 24-72 hours, or for selection in neomycin resistance After establishing a more stable cell line, recovering by standard biochemical approaches Of suitable mammalian host cells capable of transformation and transformation, culture, amplification, screen Methods for the production and purification of products and products are well known in the art. The For example, Getting & Sambrook,Nature,293: 620- 625 (1981), or Kaufman et al.,Mol．Cell．Biol. ,5(7): 1750-1759 (1985) or Howley et al. See Xu 4,419,446. Other suitable mammalian cell lines are monkey CO S-1 cell line. Similarly useful mammalian cell lines are the CV-1 cell lines.   If desired, insect cells can be used as host cells in the method of the invention. Wear. For example, Miller et al.Genetic Engineering,8 : 277-298 (Plenum Press, 1986) and cited therein. See the references cited. Insects using baculovirus vector General methods for expression of heterologous genes in cells are described in Summers, M. et al. D. &  Smith, G.M. E. FIG. (1987) Annual of methods fo r Baculovirus vectors and insect cell c ultra procedures, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No. Noted in 1555 It is listed. The expression vector contains a strong baculovirus promoter (eg (Eg, polyhedron promoter) transposes the coding region of the eukaryotic secretory signal peptide. Drives transcription and is translatably fused to the coding region of the hIL-3 mutant polypeptide Baculovirus transfer vector. for example For example, the plasmid pVL1392 (Invitrogen Corp., San Di ego, obtained from California) can be used. hIL-3 mutant inheritance After constructing the vector with the offspring, add 2 μg of this DNA to 1 μg of baculoyl. Co-transfected with insect DNA into the SF9 strain (Summ ers & Smith, 1987). Pure recombination containing hIL-3 variants Baculovirus was prepared using, for example, Excell 401 serum-free medium (JRH Bio infection of cells cultured in sciences, Lenexa, Kansas) use. HIL-3 variants secreted into the medium are a standard biochemical approach Therefore, it is recovered.   In another aspect of the invention, the method of expression of these novel hIL-3 muteins is used. A plasmid DNA vector is provided. These vectors are new to the present invention. It contains the novel DNA sequence described above which encodes a canonical polypeptide. hIL-3 Suitable vectors capable of transforming a mutein-expressing microorganism include: The nucleotide sequence encoding the hIL-3 mutein is tailored to the host cell used. The expression vector linked to the transcriptional and translational regulatory sequences Included.   Vectors incorporating modified sequences as described above are included in the present invention and include hIL-3 variants. It is useful for the production of foreign polypeptides. The vector used in this method is also Functionally related to the DNA coding sequences of the invention, their function in selected host cells It contains selected regulatory sequences capable of directing replication and expression.   Other details are US patent applications filed at the same time as attorney case number 2713/1 It is described in. The entire description of this patent application is incorporated herein by reference.   All references, patents or applications cited herein are incorporated by reference in their entirety. Is introduced as.   The present invention also leads to the accumulation of correctly folded, active polypeptides. Have 4 or more amino acid substitutions in the optimized secretion vector (15-125) Includes construction and expression of human interleukin-3 muteins. Many different types Although proteins have been secreted in E. coli, they are still highly unpredictable, Limited success (Stader & Silhavy, 1990). Full length hIL-3 produces low secretion levels in an attempt to secrete the protein in E. coli. It is a protein that has not been altered. The mutant (15-125) hIL-3 mutant of the present invention Secretion of a lipopeptide as a fusion with a signal peptide such as LamB By osmotic shock fractionation, correct folding that can be separated from the periplasm of E. coli. Produce a engulfed protein. Mutant (15-125) hIL-3 mutein The nature of soybeans directly and rapidly determines the bioactivity of secreted substances in the crude osmotic shock fraction. Screening is possible, which is an important advantage. Furthermore, it is hIL-3 To carry out molecular structure-activity relationship (SAR) studies (15-125) hIL- It provides a means to use 3 muteins. Fused to LamB signal peptide A further advantage of the secretion of combined (15-125) hIL-3 muteins is that the secretion process Precise nature of signal peptide cleavage by signal peptidases as part Ensures that the secreted polypeptide has the correct N-terminal amino acid (Asn). And.   The (15-125) hIL-3 mutein of the present invention contains Met-, at its N-terminus. Ala- or Met-Ala- linked hIL-3 polypeptides Do. When this mutein was expressed in the cytoplasm of E. coli, its N-terminus A polypeptide to which Met is bound and a polypeptide which is not bound to Met are obtained. Methionine is optionally removed by methionine aminopeptidase.   The amino-terminal sequence of the hIL-3 mutein produced in E. coli is Hunka It was determined using the method described by pillar et al. (1983). colon It was produced from the gene encoding Met- (15-125) hIL-3 in the bacterium. The hIL-3 protein is isolated as Met- (15-125) hIL-3 It was revealed. Codes for Met-Ala- (15-125) hIL-3 The protein produced from this gene is Ala- (15-125) hIL-3 Was produced. The N-terminal of the protein produced in the cytoplasm of E. coli has Onin aminopeptidase (Ben-Bassat et al., 1987) and possibly, It is affected by post-translational processing by other peptidases.   One method for creating a preferred hIL-3 (15-125) mutant gene is a cassette Muttulation [Wells et al. (1985)]. This is in the plasmid A portion of the coding sequence of hIL-3 is located in the gene portion between the two restriction sites. Method of Substitution with Synthetic Oligonucleotides Encoding Desired Amino Acid Substitutions Is. Similarly, amino acid substitutions can be made using the full-length hIL-3 gene, or N-terminal Deletion of 1 to 14 amino acids from the end and / or 1 to 15 amino acids from the C-terminus What can be done in a gene encoding a variant of hIL-3 with a deletion of amino acids it can. Properly assembled, these oligonucleotides will yield the desired amino acids. H with substitutions and / or deletions from the N-terminus and / or C-terminus It will encode an IL-3 variant. These and other mutations Other mutagenesis methods, such as oligonucleotide-specific, may be used by those skilled in the art. Mutation [Zoller & Smith (1982, 1983, 1984), Smith (1985), Kunkel (1985), and Taylor et al. (1985), Deng & Nickoloff (1992)], or polymer. It can be created by the enzyme-linked polymerase chain reaction (PCR) [Saiki (1985)]. It will be possible.   Complementary synthetic oligonucleotides encoding the amino-terminal portion of the hIL-3 gene You can create pairs of ochids and anneal to each other. Such a pair One end should have a protruding end that is compatible with ligation with NcoI. NcoI The site contains the initiator methionine codon. Oligonucleotide pair At the other end, the protruding (or blunt) end is located within the coding sequence of the hIL-3 gene. Match the restriction sites present in. The DNA sequence of this oligonucleotide is Encodes the amino acid sequence of hIL-3 except for substitutions and deletions in the sequence It will be.   NcoI enzyme and other selected restriction enzymes are selected from the DNA of selected plasmids. There must be only one recognition site inside. Plasmid DNA Oligonucleotides treated with selected restriction endonucleases and then annealed Can be cleated by a cleotide. The ligated mixture is Can be used to transform tent JM101 cells resistant to the appropriate antibiotics. Wear. Single colonies are picked for plasmid DNA restriction analysis and / or It was examined by DNA sequencing and a plasmid carrying the mutated hIL-3 gene was identified. Can be set.   An example of a restriction enzyme that cleaves within the coding sequence of the hIL-3 gene is its recognition site. There is ClaI at positions codons 20 and 21. Cleavage of the sequence of hIL-3 In order to use ClaI for It is necessary to isolate from an E. coli strain that does not methylate adenine in DNA. this is The recognition site for ClaI, ATCGAT, is codons 19, 20 in the hIL-3 gene. This is because it exists in the sequence GATCGAT existing in the sequences 21 and 21. GATC sequence A in is methylated in most E. coli host cells. This methylation is Prevents ClaI cleavage at specific sequences. For example, a strain that does not methylate adenine Has GM48.   Description of the activity of a single amino acid mutant in hIL-3 (15-125)   As illustrated in Tables 6 and 9, there are substitutions in the hIL-3 (15-125) molecule. Have intolerant positions and most or all substitutions at these positions are biological A marked decrease in activity occurred. Two classes are considered for such "down mutation". available. Mutations that affect the overall protein structure, and IL- Mutations that directly interfere with the interaction between the three molecules and their receptors. protein Mutations that affect the three-dimensional structure of the Mutations affecting somatic binding are commonly located on the surface of proteins. IL-3's The three-dimensional structure is unknown, but a simple algorithm to help predict that structure is is there. One such algorithm is the "helical wheel" [Kaiser, E. FIG. T. & Kezdy, F.M. T. , Science, 223: 249-255. (1984)]. In this method, the α-helix protein structure Existence is predicted by their amphipathic character. The helix in the globular protein is Commonly, it has an exposed hydrophilic side and an embedded hydrophobic side. general In generalization, in the globular protein, it exists inside the hydrophobic residue c protein. Exist and hydrophilic residues are present on its surface. On such a "helical wheel" By displaying the amino acid sequence of the protein in the α-helix A model of which amino acids are exposed and which are embedded in the protein core Can be guided. From such analysis of the hIL-3 (15-125) molecule Predicts that the following helix residues will be embedded in the core. Ie M19, 120, 123, 124, L27, L58, F61, A64, L68, A71, 174, 177, L78, L81, W104, F107, L111, Y 114, L115, and L118.   In addition, the cysteine residues at positions 16 and 84 are linked by disulfide bonds. Which is important for the overall structure or "folding" of the protein. is there. Finally, mutations that cause major disruption of protein structure are The secretory system used in the study is expressed at low levels for a variety of reasons. That is, misfolded proteins are poorly regulated by the cell's secretory machinery. Weakly recognized; protein misfolding causes aggregation, Resulting proteins are not easily extracted from cells; or misfolded This is because the proteins that are processed are susceptible to degradation by cellular proteases. Therefore, impaired secretion is impaired in maintaining the correct protein structure in the IL-3 molecule. It may indicate which position is important.   In order to maintain the activity of the mutant IL-3, the structural integrity of the protein is required. Both the maintenance of the and the specific residues important for receptor contact are required. Therefore HIL-3 (15-125) that must be retained to preserve biological activity It is possible to determine the specific amino acid residues in.   Residues presumed to be important for interaction with the receptor include D21, E22, E43, There are D44, L48, R54, R94, D103, K110, and F113.   Residues presumed to be structurally important are C16, L58, F61, A64, I74, L78, L81, C84, P86, P92, P96, F107, L111, L1 15, L118.   The hIL-3 mutein of the present invention is a hematopoietic myeloid, erythroid, or lymphocyte system. Is characterized by reduced levels in either megakaryocytes or combinations thereof It may be useful in the treatment of certain diseases. Furthermore, they are mature myeloid and / or Or it may be useful for activation of lymphoid cells. With the polypeptide of the invention Treatment-sensitive conditions include leukemia and decreased circulating white blood cell count in the peripheral blood. White Hematosis may be triggered by exposure to certain viruses or radiation. It is a side effect of exposure to various types of cancer treatments, such as chemotherapeutic agents, and infection or Is often due to bleeding. According to the hIL-3 mutant polypeptide of the present invention The treatment of leukemia is desirable by treatment with currently used drugs. It is possible to avoid unwanted side effects.   The hlL-3 muteins of the present invention are useful in the treatment of neutropenia, eg, aplastic. Anemia, periodic neutropenia, iatrogenic neutropenia, Chediak-East syndrome Hou group, Systemic lupus erythematosus (SLE), leukemia, myelodysplastic syndrome and bone marrow fibers It may be useful in treating conditions such as illness.   Many drugs can cause myelosuppression or hematopoietic defects. Drugs like this Examples of agents include AZT, DDI, alkylating agents and metabolic residues used in chemotherapy. Anti-drugs, antibiotics such as chloramphenicol, penicillin and sulfa drugs, Phenothiazone, tranquilizers such as meprobamate and diuretics The The hIL-3 muteins of the invention do not occur in patients treated with these agents. It may be useful in the prevention or treatment of myelosuppression or hematopoietic deficiency, which is often the case.   Hematopoietic deficiency can also occur in the kidneys as a result of viral, microbial or parasitic infections. Treatment of disease or renal failure may occur as a result of dialysis, for example. Of the present invention hIL-3 muteins may be useful in treating such hematopoietic defects.   For treatment of hematopoietic defects, a pharmaceutical composition containing hIL-3 mutein, hIL- Administration of 3 muteins to patients is included. The hIL-3 muteins of the present invention also include Hematopoietic progenitor cells are in vitro in vitro with the muteins of the invention prior to injection into a patient. It may also be useful for activation and expansion of these cells by treatment with.   Various immunodeficiencies or diseases, eg in T and / or B lymphocytes For example, rheumatoid arthritis may also be treated with the hIL-3 variant polypeptides of the invention. It may be affected more favorably. Immunodeficiency is caused by viruses such as HTLVI, HTVII, HTVIII infection, severe radiation exposure, cancer chemotherapy or others May be the result of drug treatment of. The hIL-3 variant polypeptides of the invention also include , Other blood cell defects such as thrombocytes, alone or in combination with other hematopoietins It can be used to treat anemia (thrombocytopenia) or anemia. These new polys Other uses for peptides include in vivo and ex vivo studies of patients recovering from bone marrow transplants. Manufactured by standard methods for treatment in bobs and for diagnostic or therapeutic use There is production of monoclonal and polyclonal antibodies produced.   Another aspect of the invention is methods and therapeutic compositions for the treatment of the conditions mentioned above. Such compositions provide for the treatment of one or more hIL-3 muteins of the invention. It is composed by mixing an effective amount with a pharmaceutically acceptable carrier. This composition is parenteral It can be given intravenously or subcutaneously. Used in the present invention upon administration The composition is in the form of a pyrogen-free, parenterally-acceptable protein solution. It is preferable to set the state. It is a non-consideration that has been properly considered for pH, isotonicity, stability, etc. The manufacture of such a protein solution that can be administered orally is well known in the art. It is within the range.   Dosage criteria for treatment of the above conditions may vary depending on the effect of the drug. Factors such as patient condition, weight, sex and diet, severity of any infection, To be decided by the attending physician, taking into account dosing time and other clinical factors Become. Generally, the daily dose standard is non-glycosylated IL-3 / kg body weight. Protein, can range from 0.2 to 150 μg / kg. This dose Native IL-3 was tested in the AML proliferation assay described herein. 10 picomoles or about 10-100 picomoles of EC50Is said to have It is based on the quasi-level biological activity. Therefore, the dose given Regulated by the ratio of mutein activity to native (control) IL-3 activity, Set the dosage standard from a minimum of 0.1 μg to a maximum of 1 mg per kg of body weight per day Things are not considered inappropriate. In addition, the dose of IL-3 mutein is 1 Special cases where higher or lower than the range of 10-200 μg / kg is adjusted There is. It includes co-administration with other CSFs or growth factors; chemotherapeutic agents and / or Or co-administration with radiation; use of glycosylated IL-3 muteins; and Issues related to the various types of patients described above in Section are included. As pointed out above In addition, treatment methods and compositions include co-administration with other human factors. Of the present invention Other suitable hematopoietin co-administered with the polypeptide simultaneously or sequentially, CSF and interleukins include, but are not limited to, GM-CSF, CSF-1, G-CSF, Meg-CSF, M-CSF, Ellis Ropoietin (EPO), IL-1, IL-4, IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, LIF, B-cell formation Long factor, B-cell differentiation factor, and eosinophil differentiation factor,steelFactor or c-kit Stem cell factor (SCF), also known as ligand, or a combination thereof Can be mentioned. The dosages mentioned above are such addition components in the therapeutic composition. Will be offset and adjusted. The course of the treated patient was a hematological profile For example, it can be monitored by periodic evaluation such as blood cell classification.   Materials and methods for expression of hIL-3 muteins in E. coli   Unless otherwise noted, all specialty reagents are Sigma (St. Louis , MO). Restriction endonuclease, T4 polynucleotide kinase , E. coli DNA polymerase I large fragment (Klenow) and T4'DN A ligase is New England Biolabs (Beverly, Mas sa Chusetts).   E. coli strain   JM101 strain: delta (pro lac), supE, thi, F '(t raD36, rpoAB, lacI-Q, lacZdeltaM15) (Mes sing, 1979). This strain is the American Type Culture  Collection (ATCC), 12301 Parklawn Drive e, Rockville, Maryland 20852, Accession number 33876 Available from the issue. MON105 (W3110 rpoH358) is W3110 ATCC accession number 5520, which is a derivative of Bachmann (1972) Deposited as No. 4. GM48 strain: dam-3, dcm-6, gal, a ra, lac, thr, leu, tonA, tsx (Marinus, 1973) ) Was used to make plasmid DNA that was not methylated with the sequence GATC.   Genes and plasmids   The gene used for the production of hIL-3 in E. coli is British Bio technology Incorporated, Cambridge. En gland, model number BBG14. This gene lives with pP0518 It is carried on the named pUC-based plasmid.   The plasmid used for the production of hIL-3 in E. coli was previously used (Olins et al., 1988; Olins & Rangwala, 1990) contains a genetic element. The replicon used was approximately 100 Maintained at copy number (Soberon et al., 1980) pBR327 (Cova rrubias et al., 1981). β-lactamase protein The quality-encoding gene is present on this plasmid. This protein in cells Adds ampicillin resistance. This resistance is due to this plasmid in cells It is effective as a selectable phenotype indicating the existence of.   For the cytoplasmic expression vector, is the transcription promoter the E. coli recA gene? (Sanger et al., 1980). This is named precA Promoter binds RNA polymerase binding site and lexA repressor Includes parts (operators). This DNA segment is a recA promoter High levels regulated by the pBR327 origin of replication even when the target is on the plasmid (Olins et al., 1988; incorporated herein by reference).   In the secretory expression plasmid, the transcription promoter is the E. coli araB. A And D gene (Greenfield, 1978). This pro The motor is named pAraBAD and has 323 base pairs of SacII and BglII restriction. It is contained on the fragment. Lamb secretory leader (Wong et al., 1988, Clement et al. 1981) has the enzyme NcoI at the N-terminal of the hIL-3 gene. Of the recognition sequence (5'CCATGG3 '). HIL-3 inheritance used The offspring follow the HindIII recognition site (5'AAGCTT) following the coding region of the gene. 3 ').   These hIL-3 mutants were fused with the LamB signal peptide shown in FIG. AraBAD promoter (Greenfield, 1978) and Operatively linked to the g10-L ribosome binding site (Olins et al., 1988). Was expressed. In the processed form, periplasm causes osmotic shock It is therefore correctly folded and selectively released as a fully active molecule. It was. Secretion of (15-125) hIL-3 is a low inducer (arabinose) It was further optimized by using concentrations and growing at 30 ° C. these LamB signal peptide (15-125) that is not processed under certain conditions Reduced accumulation levels of hIL-3 fusions, processed (15-125) by maximal accumulation level of hIL-3 and osmotic shock fractionation (15-125) Selective release of hIL-3 was achieved. Modifies transcription level and thus expression level The use of possible tightly regulated promoters such as araBAD is described in (15- 125) Optimized the secretion of hIL-3.   The ribosome binding site used is the binding site from gene 10 of phage T7. (Olins et al., 1988). This is 100 bases located adjacent to precA It is encoded in a pair (bp) fragment. In the plasmid used here Has a recognition sequence (CCATGG) of the enzyme NcoI following g10-L. hIL-3 It is at this NcoI site that the gene is ligated into the plasmid. This connection The nucleotide sequence at the junction, as the functional initiation site for translation in mRNA, Expected to be recognized (Olins et al., 1988) used The hIL-3 gene has a HindIII recognition site downstream of the coding sequence of the gene. Manipulated to have (AAGCTT). This HindIII site has a single chain A 514 base pair RsaI fragment containing the replication origin of gene f1 is located (Dente et al., 1983; Olins et al., 1990, both books for reference. Introduced in the specification). The plasmid containing these elements is pMON2341. This Another plasmid, pMON5847, containing these elements is the American Type eCulture Collection, 12301 Parklawn Dr accession number ATC at ive, Rockville, Maryland 20852 It has been deposited as C68912.   Oligonucleotide synthesis   Oligonucleotides are Nucleotide Synthesizer 380 Type A or 380B (Applied Biosystems, Inc. Fos) ter City, Calif.). Oligonucleotide Is 0.5 × Tris borate buffer (0.045M Tris.0.045M borate or And 1.25 mM EDTA) at a concentration of 12-20% (19: 1 cross-link). Rylamide gel electrophoresis, followed by PREP Automated Sample  Processor (DuPont, Co., Wilmington, Del. Aware) using a Nensorb column (New England Nu). clear, Boston, Massachusetts) It was purified by   Quantitation of synthetic oligonucleotides   Synthetic oligonucleotides are resuspended in water and a 1 cm x 1 mm quartz cuvette. Beckman DU40 Spectrophotometer Read the absorption at 260 nm by (Irvine, California) And quantified (Maniatis, 1982). Concentration is 1 x 10 of extinction coefficientFour (Voet et al., 1963, Mahler & Cordes, 1966). The oligonucleotide was then diluted to the desired concentration.   The quantification of synthetic DNA fragments was also determined by kinase buffer (25 mM Tris pH 8.0). , 10 mM MgCl2, 10 mM DTT and 2 mM spermidine) in solution containing 1 This can be achieved by adding 0-100 picomoles of DNA. To the reaction mixture ． 20 micromolar ATP and γ-phosphate were radiolabeled (5000-1 10,000 dpm / pmol) ATP and 5 units of T4 polynucleotide quina Add the enzyme. Radiolabeled reagents are New England Nuclear ( Boston, Massachusetts). 10 μl mixture Incubate at 37 ° C for 1 hour. Aliquot 1 μl of the mixture to 0.3 M charcoal For chromatography on DEAE filter paper (Whatman) in ammonium hydrogenate. Attached. The counts remaining at the origin were used to determine the concentration of synthetic DNA.   Recombinant DNA method   Isolation of plasmid DNA from E. coli culture has been described previously (Birnboim & Doly, 1979). Some DNA is Promega Magic available from (Madison, Wisconsin)TMOn the column Therefore, it was purified.   Purified plasmid DNA should be digested with restriction endonucleases according to the manufacturer's instructions. It was treated with ze. Analysis of DNA fragments generated by restriction enzyme treatment is performed using agarose. Alternatively, polyacrylamide gel electrophoresis was performed. Agarose (for DNA , Fisher, Pittsburgh, PA) is a tris-acetate efflux buffer. Used at 1.0% concentration in solution (0.04M Tris acetate, 0.001M EDTA) did. 0.5 for polyacrylamide (BioRad, Richmond, CA) X Tris-borate buffer (0.045M Tris, 0.045M boric acid, and Used at 6% concentration (19: 1 cross-link) in 1.25 mM EDTA). Below with PAGE Say.   DNA polymerase I, large fragment, Klenow enzyme, manufacturer's instructions According to the procedure, 5'to 3'of a DNA fragment treated with a restriction enzyme that leaves protruding ends. ′ Was used as a catalyst for the addition of mononucleotides. The reaction mixture is 1 at 65 ° C. The Klenow enzyme was heat-inactivated by incubating for 0 minutes.   Synthetic oligonucleotides were prepared without 5'or 3'terminal phosphates. It was. When ligating such oligonucleotides end-to-end, Gonucleotide was added at the concentration of 10 pmol / μl in the following buffer solution: 25 mM trinucleotide. Su pH 8.0, 10 mM MgCl2, 10 mM dithiothreitol, 2 mM spell Treatment with T4 polynucleotide kinase in midine, 1 mM rATP. 30 After incubating at 37 ° C for 5 minutes, incubate the sample at 65 ° C for 5 minutes. Heat inactivated the kinase.   Assembly of synthetic genes   The (15-125) hIL-3 gene is separated by 5 convenient restriction sites. It was divided into four regions. For each of the four areas. Synthetic oligonuc Reotide anneals to complementary pairs at the single-stranded ends where they project, DNA encoding part of the hIL-3 gene when the pairs are properly combined Designed to produce arrays. Amino acid substitutions in the hIL-3 gene are The cleotide was designed and produced to encode the desired substitution. Complementary oligo Nucleotides were 1 pmol / liter in ligation buffer plus 50 mM NaCl. Annealed at a concentration of μl. The sample is a 100 ml bee containing boiling water. It was heated in a car and gradually cooled to room temperature. Annealed oligonucleo About 1 pmol each of the tide pair was digested with an appropriate restriction enzyme 0.2 pmol and ligation buffer (25 mM Tris, pH 8.0, 10 m MMgCl2, 10 mM dithiothreitol, 1 mM ATP, and 2 mM sp Lumidine), New England Biolabs (Beverly, Ma) total volume of 2 using T4 DNA ligase obtained from Ssachusetts). 0 μl, ligated overnight at room temperature.   The DNA fragment is Schleicher & Schuell (Keene) , DEAE membranes from New Hampshire, according to the manufacturer's instructions. To capture the restriction fragments, then the DNA was added to 10 mM Tris, 1 mM EDT A, separated from agarose by elution in 1M NaCl at 55 ° C for 1 hour. I was separated. The solution containing the DNA fragment is Amicon (WR Gr Ace, Beverly, MA) Centricon 30 concentrator Concentrated and desalted according to the manufacturer's instructions. Ligation at 15 ℃ overnight Others were performed in ligation buffer as described above.   Polymerase chain reaction   The polymerase chain reaction (hereinafter referred to as PCR) method (Saiki, 1985) Reagent kit from Perkin-Elmer Cetus (Norwalk, CT) And a thermal cycler was used. PCR is Thermus aquaticus It is based on the thermostable DNA polymerase from E. coli. PCR method is In vivo, mimicking the natural DNA replication process in which the number of offspring doubles after each cycle This is a DNA amplification method similar to the replication method in. By DNA polymerase The mediated extension is in the 5'to 3'direction. Used in this case The term "primer" refers to an oligonucleotide sequence that provides a terminus. A DNA polymerase at the end has a nucleotide complementary to a nucleotide sequence. You can join. This certain nucleotide sequence is called the “template” and is Rimer anneals. The amplified PCR product was the 5'of the extension primer. It is identified as the region consisting of the ends. Because the primer has a specific sequence , The product will have discontinuous ends corresponding to the primer sequences. Primer The extension reaction was performed using 20 picomoles (pmol) of each oligonucleotide and 1 pg of template. 35 cycles (1 cycle: 94 ° C for 1 minute, 50 ° C for 2 cycles) using plasmid DNA Min and 72 ° C. for 3 min). The reaction mixture is mixed with an equal volume of phenol / Extract with chloroform (50% phenol and 50% chloroform, volume ratio) To remove the protein. Aqueous and solvent phases containing amplified DNA are 5 minutes with a heart separator (Type 5414, Eppendorf, Fremont, CA) It was separated by centrifugation. The aqueous phase is separated to precipitate the amplified DNA, Transfer to a test tube and add 1/10 volume of 3M sodium acetate (pH5.2) and And 2.5 volumes of ethanol (100%, stored at -20 ° C) were added. Mix the solution , Placed on dry ice for 20 minutes. Centrifuge DNA in a microcentrifuge for 10 minutes Separated into pellets and the solution was removed from the pellets. 70% DNA pellet Rinse with ethanol to remove ethanol, and then use a high-speed vacuum concentrator (Savant , Farmingdale, New York). Pellet 25μ resuspended in 1 TE (20 mM Tris hydrochloride pH 7.9, 1 mM EDTA) It was. Alternatively, DNA is an equal volume of 4M ammonium acetate and 1 volume of isopropanol. Precipitation was achieved by the addition of Nol (Treco et al., 1988). Mix the solutions at room temperature 10 Incubated for minutes and centrifuged. These conditions are greater than about 20 bases Removal of oligonucleotide primers by selective precipitation of DNA fragments Was used for. A quarter of the reaction mixture was digested with restriction enzymes (Higuchi, 1989), after completion, the enzyme was inactivated by heating to 70 ° C.   Recovery of recombinant plasmid from ligation mixture   E. coli JM101 cells were made competent for DNA uptake. Normally, 20 to 100 ml of cells are brought to a concentration of about 150 Klett units in LB medium. The cells were grown and then collected by centrifugation. Semi-culture medium volume of 50 mM CaCl2 The cells were resuspended in and kept at 4 ° C for 1 hour. Collect the cells by centrifugation again and 50 mM CaCl in culture solution volume2Resuspended in. Up to 150 μl volume of these cells DNA was added and the sample was kept at 4 ° C for 30 minutes. Sample at 42 ° C After shifting for 1 minute, 1 ml of LB was added, and the sample was shaken at 37 ° C for 1 hour. Cells from these samples were plated on plates containing ampicillin and trans We selected a formant. The plates were incubated overnight at 37 ° C. single Colonies were picked and grown in LB medium supplemented with ampicillin by shaking overnight at 37 ° C. It was. DNA was isolated from these cultures for restriction analysis.   Culture medium   LB medium (Maniatis et al., 1982) was used to grow cells for DNA isolation. used. M9 minimal medium supplemented with 1.0% casamino acid, acid hydrolyzed casein, Recombination using D1fco (Detroit, Michigan) as the culture medium hIL-3 was produced. Ingredients in M9 medium are 3 g / L KH2POFour, 6 g / L Na2HPOFour, 0.5 g / L NaCl, 1 g / L NHFourCl, 1.2m MMgSOFour, 0.025 mM CaCl2, 0.2% glucose (AraBAD 0.2% glycerol including promoter), 1% casamino acid, 0.1 ml / L Trace minerals (108g FeCl per liter3・ 6H2O, 4.0 g ZnSOFour・ 7H2O, 7.0 g CoCl2・ 2H2O, 7.0 g Na2MoOFour・ 2H2O, 8.0 g CuSOFour・ 5H2O, 2.0g H3BO3, 5.0 g MnSOFour・ H2O, 100 ml of concentrated hydrochloric acid). Bacto agar was used as the solid medium, and Ampicillin was added to both liquid and solid LB medium at 200 μg / ml.   DNA sequence analysis   Nucleotide sequencing of plasmid DNA is performed using DuPont (Wilming Genesis 2000 sequencer obtained from Ton, Delaware) Using the method of Prober et al. (1987) and Sanger et al. (1977). It was carried out according to. Some DNA sequencing is SequenaseTMPolymerase (US Biochemical, Cleveland, Ohio), The procedure was performed according to the manufacturer's instructions.   Recombinant hIL-3 in E. coli by vector using recA promoter Mutein production   E. coli strain harboring the plasmid of interest was incubated at 37 ° C in M9 plus casamino acid medium. At New Brunswick Scientific (Edison, Propagated by shaking in Gyrotary water bath type G76 manufactured by New Jersey It was. Proliferation was performed by Klett Mfg. Co. (New York, New York) Monitored with Klett Summerson meter (green 54 filter) It was. An aliquot of the culture solution (usually 1 ml) was added to the protein content at a Klett value of approximately 150 Collected for analysis. The remaining culture was nalidixic acid (10% in 0.1 N NaOH). (mg / ml) was added to give a final concentration of 50 μg / ml. After addition of nalidixic acid The culture was shaken at 37 ° C for 3 to 4 hours. Achieve maximum production of desired gene product Therefore, a high degree of aeration was maintained throughout the bacterial growth. Cells under light microscope Examination was done to check for the presence of refractive bodies (RB). Medium 1 for protein content analysis A ml aliquot was taken.   Production of recombinant hIL-3 from pAraBAD promoter in E. coli   The E. coli strain harboring the plasmid of interest was treated with M9 medium plus casamino acid and glycerin. The cells were grown in a roll by shaking at 30 ° C. Proliferation is Klett Summerson It was monitored by a colorimeter using a green 54 filter. Klett value At about 150, an aliquot of culture (usually 1 ml) was taken for protein analysis. 20% arabinose was added to the rest of the culture to give a final concentration of 0.05%. culture The solution was shaken at 30 ° C. for 3 to 4 hours after the addition of arabinose. Of the desired gene product High aeration was maintained throughout bacterial growth to achieve maximal production. culture A 1 ml aliquot of the liquor was taken for analysis of protein content.   Secretory and osmotic shock   Samples 3 hours after induction were fractionated by osmotic shock (Neu & Heppel, 1965). Measure the optical density (Kette value) of the culture solution and Transfer 1 ml to a 1.5 ml snap-top microcentrifuge tube and use Sigma microcentrifuge. It was centrifuged at 10,000 rpm for 5 minutes by a separator (West Germany) Model 202MK. The cell pellet was treated with a room temperature sucrose solution (20% sucrose w / v, 30 mM sucrose). Add squirrel hydrochloride pH 7.5, 1 mM EDTA) very gently with a pipette Resuspended and used 1 μl / l Klett unit. Incubate for 10 minutes at room temperature After centrifugation, the cells were centrifuged at 10,000 rpm for 5 minutes. Cell pellet The sucrose fraction was carefully removed from the. Incidentally. Cell pellet in ice-cold distilled water Pipet very gently and resuspend using 1 μl / l Klett unit It was. After incubating on ice for 10 minutes, the cells were incubated at 12,000 rpm for 5 minutes. Centrifuged for minutes. The water fraction was carefully removed. Equal volume of sucrose and water Fractions were pooled and aliquots used as activity screening samples.   Analysis of protein content in hIL-3 mutant polypeptide producing E. coli culture   Bacterial cells from the culture treated as described above were collected by centrifugation of the medium. It was. Aliquots of these cells were added to SDS loading buffer [4 ×: 6 g SDS, 10 ml of β-mercaptoeta. Nol, 25 ml upper Tris gel stock solution (0.5 M Tris hydrochloride pH 6.8, 0.4% SDS) to 50 ml with glycerol, Add 0.2% bromophenol blue to this] and add 1μ per Klett unit. resuspended to a concentration of l. Incubate these samples at 85 ° C for 5 minutes, The mixture was vortexed. Aliquot 5 or 10 μl of these samples to Laemm (15) polyacrylamide gel prepared by the method of Li (1970). I loaded it. The protein band had Coomassie blue added to a final concentration of 1% in advance. Stain the gel with a 5: 1: 5 (volume ratio) solution of acetic acid, methanol and water added. Visualized. After staining, wash the gel with the same solution without Coomassie blue. Then, it was washed with a solution of 7% acetic acid and 5% methanol. Gel is Hoeff er (San Francisco, California) SE1160 type gel It was dried by a dryer. The amount of stained protein is Joyce-Loebl It was measured using a density recorder manufactured by (Gatehead, England). Profit The values given are for hIL-3 staining protein compared to total staining protein in bacterial cells. It became a measure of quantity.   Western blot analysis of hIL-3 muteins produced in E. coli   In some E. coli producing hIL-3, the accumulation level of hIL-3 protein May be less than 5% of total bacterial protein. HIL-produced at this level Western blot analysis was used to detect 3. Nalidixic acid or arabic Appropriate volume of sample loaded with protein from culture medium induced by North A polyacrylonitrile is prepared in the same manner as described above, except that the Run on a luamide gel. After electrophoresis, follow the method of Renart et al. (1979). Protein, APT paper, Transa-bind (Schleider & Electroblot on Schuell, Keene, New Hampshire) It was. The antiserum used to examine these blots was tested for hIL-3 as an immunogen. Using peptides with the sequences of amino acids 20-41 and 94-118. Created with rabbits It was. The presence of bound antibody was determined by New England Nuclear (Boston, Obtained from Massachusetts)125I radiolabeled Staphylococcus It was detected with protein A.   Fractionation of hIL-3 protein in cytoplasm produced by E. coli cells   A hIL-3 mutein-producing plasmid from E. coli culture was tethered Cells were induced with nalidixic acid. After 3 hours, hIL-3 mutein becomes refractile bodies Accumulated. The first step in the purification of hIL-3 muteins was sonication of cells. Aliquot of culture from cell pellet sonication buffer: 10 mM Tris pH In 8.0, 1m MEDTA, 50mM NaCl and 0.1mM RMSF Resuspended. These resuspended cells were mixed with Heat Systems-Ultras. onics Inc. (Farmingdale, New York) ultrasonic treatment Using a microchip of W-375, a cell disruption device, repeat ultrasonic wave several times. Attached to the strike. The degree of sonication was determined by inspecting the homogenate under a light microscope. I talted. If almost all cells are destroyed, centrifuge homogenate To Therefore, it was fractionated. HIL-3 mutein was added to pellets containing most refractile bodies. It is highly concentrated.   Method: Interleukin-3 (IL-expressed as a refractile body in E. coli) 3) Mutein extraction, refolding and purification   Refractive body (RB) extraction   6M for 1g of RB (usually 1g is obtained from 300ml of E. coli culture) 5 ml of a solution containing guanidine hydrochloride (GnHCl), 50 mM 2-N-cyclohexyl Xylaminoethanesulfonic acid (CHES) pH 9.5 and 20 mM dithio Threitol (DTT) was added. RB is Bio-Homogenizer Extract for 15 to 30 seconds and shake gently at 5 ° C for 2 hours to completely reduce the protein And denatured.   Refolding of IL-3 muteins   Transfer protein solution to dialysis tubing (1000 molecular weight cutoff) Both are transparent to 100 volumes of 4M GnHCl-50 mM CHES, pH 8.0. Was analyzed. Dialysis was continued overnight at 5 ° C with gentle agitation. Then dialysis At least 100 volumes of 2M GnHCl-50 mM CHES, pH 8.0 Then, the mixture was dialyzed overnight at 5 ° C with gentle stirring.   Purification of IL-3 mutein   Remove the protein solution from the dialysis tube and add it to 40% acetonitrile. (CH3CN) -0.2% trifluoroacetic acid (TFA) was added to give a final concentration of 2 0% CH3It was made acidic with CN-0.1% TFA. This is centrifuged (1600 (0 × g, 5 minutes) to make clear, and the supernatant is preliminarily 20% CH3CN-0.1% TF Vydac C-18 reverse phase column (10 x 250 mm, Vyd equilibrated in A (available from ac, Hesperia, Calif.). 40 to 50% CH for the column3CN-0.1% TFΛ linear gradient (0.2% CH3C (N / min) at a flow rate of 3 ml / min and 1.5 ml fractions were collected. Fraction Was analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and The different fractions were pooled. Freeze-dry pooled material or concentrate Speed Vac Dried in a container. The dry powder was reconstituted with 10 mM ammonium hydrogen carbonate pH 7.5. Build, Centrifuge (16,000 xg, 5 minutes) to clarify and label with bovine serum albumin. As a standard, the protein concentration was assayed by the method of Bradford (1976). It was. This protein can be prepared by other methods such as SDS-PAGE, electrospray. Mass spectrometry, reverse phase HPLC, capillary zone electrophoresis, amino acid composition analysis, and Further analysis by ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) it can.   hIL-3 sandwich ELISA   IL-3 protein concentration is affinity purified polyclonal goat anti-rh It can be quantified using an IL-3 based sandwich ELISA. My Cloter plate (Dynatech Immulon II), 100 mM NaHCO3, Goat-anti-rhIL-3 at a concentration of about 1 μg / ml in pH 8.2 , 150 pl. In a room where the plate is kept at 100% humidity Incubate at room temperature overnight. Empty the wells and remove the remaining reaction sites on the plate. , 10 mM PBS, 3% BSA and 0.05% Tween 20, pH 7.4 Block with 200 μl of the solution containing at 37 ° C and 100% humidity for 1 hour. It was. Empty the wells and wash with 150 mM NaCl containing 0.05% Tween 20 (wash (Cleaning buffer). Then, in each well, rhIL-3 standard, control Dilution buffer containing 0.1% BSA, 0.01% Tween 20, p. H7.4-containing 10 mM PBS) or dilution buffer alone 150 μl was added. r Using a stock solution of hIL-3 (concentration measured by amino acid composition analysis), 0.12 A standard curve was prepared in the concentration range of 5 ng / ml to 5 ng / ml. Plate 37 Incubation was carried out for 2.5 hours at 100 ° C and 100% humidity. Empty the wells and The plate was washed 4 times with wash buffer. After each well, horseradish peroxida Optimal dilution of goat anti-rhIL-3 conjugated to enzyme (checkerboard assay 15 μl was added). Plate 37 ℃, humidity 100 % For 1.5 hours. Empty wells and wash each plate with wash buffer It was washed 4 times with. After each well, ABTS substrate solution (Kirkegaa) rd & Perry) 150 μl was added. Plate at room temperature at 5 ng / ml Of Dynatech microtiter plates into standard wells containing Out The reading at the test wavelength of 410 nm and the reference wavelength of 570 nm in the reader is 0.5- Incubation was performed until sufficient color was developed to give an absorption of 1.0. Unknown The concentration of immunoreactive rhIL-3 in the sample was determined by the software attached to the plate reader. Ware was used to calculate from the standard curve.   AML proliferation assay for bioactive human interleukin-3   The factor-dependent cell line AML193 is the American Type Culture.  Obtained from Collection (ATCC, Rockville, MD) ． This cell line, established from a patient with acute myeloid leukemia, was found to contain GM / CSF supplemented medium. Growth factor-dependent cells exhibiting accelerated proliferation in (Langer, B. et al., 198). 7; Valtieri, M .; Et al., 1987). Human IL-3 in AML193 cells Proliferative capacity in the presence has also been demonstrated (Santoli, D. et al., 198). 7). Remove growth factors and grow cytokine-dependent AML193 cells for 24 hours Mutant cell line adapted for long-term growth in IL-3 by placing it in a factor-deficient state , AML193 1.3 was used. The cells are then treated with 100 U / ml IL-3 Re-pre-plated in 24-well plate at 1 x 105 cells / well in culture medium containing Started. Approximately 2 months before cells grow rapidly in IL-3 Required. These cells are then loaded with human IL-3 in tissue culture medium (see below). It was maintained as AML 193 1.3 by supplementation.   For AML193 1.3 cells, the cell suspension was centrifuged at 250 xg for 10 minutes. After that, the supernatant is decanted to obtain a cold Hanks balanced salt solution (HBSS, Gibco , Grand Island, NY) 6 times. Pelletized Resuspend cells in HBSS and repeat this procedure until 6 wash cycles are complete. I restored it. The cells washed 6 times by this operation were added to the tissue culture medium at 2 × 10 5.Five~ 5 × 10FiveLiving The cells were resuspended in the density range of existing cells / ml. This medium is a modified Dul of Iscove. Becco medium (IMDM, Hazelton, Lenexa, KS) Prepare by supplementing with bumine, transferrin, lipids and 2-mercaptoethanol. Made. Bovine albumin (Boehringer-Mannheim, Indi anapolis, IN) was added to 500 μg / ml, and human trans was added. Ferrin (Boehringer-Mannheim, Indianapoli s, IN) was added to 100 μg / ml, soybean lipid (Boehringer-Mann (Heim, Indianapolis, IN) added 50 μg / ml, Lucaptoethanol (Sigma, St. Louis, MO) is 5 x 10-FiveTo M Was added so that   Human interleukin-3 or human interleukin-3 mutein A dilution series of (hIL-3 mutein) was prepared in tissue culture medium supplemented as described above, Created in triplicate in 96-well Costar 3596 tissue culture plates. Once the dilution series is completed, each well will have an interleukin-3 or interlokin. 50 μl of medium containing Ikin-3 mutant protein was included. In the control well Tissue culture medium alone was added (negative control). AML prepared as described above 193 1.3 50 μl of cell suspension per well (2.5 × 10FourPipe) Was added to each well. Tissue culture plate is 5% CO2Humidified air contained Incubated at 37 ° C for 3 days. On the third day, 0.5 μCl3H-Chimi Gin (2 Ci / mM, New England Nuclear, Boston, MA) was taken up in 50 μl of tissue culture medium and added. Add 5% CO to the culture2Humidification included Incubated at 37 ° C under air for 18-24 hours. Wash cell DNA with water And then a TOMTEC cell harvest using a 70% ethanol wash cycle. Glass fill by using Star (TOMTEC, Orange, MD) Termat (Pharmacia, LKB, Gaithersburg, MD) Harvested on top. Air dry the filter mat and place it in a sample bag. Chelation fluid (Scintiverse II, Fisher Scientific) ic, St. Louis, MO or BetaPlate Scintilla motion fluid, Pharmacia LKB, Gaithersburg , MD) was added. Β-irradiate samples from each tissue culture well with LKB B Etaplate 1205 type scintillation counter (Pharmacia  LKB, Gaithersburg, MD) and count the data for each tissue. Incorporated into cells from nutrient wells3H-thymidine counts per minute It was expressed. Each human interleukin-3 preparation or human interlo The activity of the Ikin-3 mutant preparation was increased by increasing the concentration of interleukin- 3 or a Cell proliferation induced by the interleukin-3 mutant (3Removal of H-thymidine It was quantified by the measurement of (). Usually in these assays 0.05 pM ~ 10FiveQuantitation is performed in the pM concentration range. Activity is 50% maximal growth Talleukin-3 or interleukin-3 variant dose [EC50= 0.5 × (uptake in triplicate cultures at all interleukin-3 concentrations tested I got caught3Maximum average counts of H-thymidine per minute-interleukin- Appears in triple culture lacking 33Ba-as measured by H-thymidine incorporation. C. gland growth)]. This EC50The value is also 1 unit of raw Equivalent to physical activity. All assays are capable of inducing relative activity levels Native interleukin-3 was performed as a standard control.   The biological activity ratio of the IL-3 mutein of the present invention is shown in Table 1. IL-3 mutant organism The activity ratio is (1-133) hIL-3 EC50EC of the mutant50By dividing by And calculate. The bioactivity ratio may be the average of replicate assays.   The following assay is based on the IL-3 mediated sulfide leukotriene from human mononuclear cells. It is used to measure the release of methane.   IL-3-mediated release of sulfide leukotrienes from human mononuclear cells   Medium that can collect and use human blood containing heparin (density 1.077 g / Ml) Ficoll-Paque (Pharmacia # 17-0840- 02) overlaid on the same volume. Fincoll is warmed to room temperature before use, 50 ml The transparent polystyrene tube of was used. Ficoll gradient is Sorvall Using H1000B rotor in RT6000B refrigeration centrifuge, room temperature, 300 × Centrifuged at 30 g for 30 minutes. Carefully remove the band containing the mononuclear cells and Dulbecco's Phosphate Buffered Saline Solution (Gibco Laboratories) , Model No. # 310-4040PK), adjusted to 50 ml, 400 × g, 4 The supernatant was carefully removed by centrifugation at 10 ° C for 10 minutes. Loosen the cell pellet with HA Immersion solution [20 mM Hepes (Sigma # H-3375), 125 mM NaC 1 (Fisher # S271-500), 5 mM KCl (Sigma # P-9) 541), 0.5 mM glucose (Sigma # G5000), 0.025% Serum albumin (Calbiochem # 126654)] twice, 3 Centrifugation was carried out at 00 × g at 4 ° C. for 10 minutes. Replace cells with HACM buffer [1 mM Ca Cl2(Fisher # C79-500) and 1 mM MgCl 2.2(Fish ER # M-33) supplemented with HA buffer]6Resuspend at cell / ml concentration It became turbid and 180 μl was added to each well of a 96-well tissue culture plate. 3 cells It was acclimated for 15 minutes at 7 ° C. 20x different concentrations of cytokines in each well Add 10 μl of stock solution (usually 100,000, 20000, 4000, 800, 160, 32, 6.4, 1.28, 0 fM IL3) cells were sensitized. 3 cells Incubated at 7 ° C for 15 minutes. 20x release of sulfide leukotrienes (1000 nM) fmet-leu-phe (Calbiochem # 3442 52) Activated by addition of 10 μl, final concentration 50 nM FMLP, at 37 ° C Incubated for 10 minutes. Centrifuge the plate at 350 xg for 20 minutes at 4 ℃. did. Remove the supernatant and use the Cayman leukotriene C4EIA kit ( Model number # 420211), according to the manufacturer's instructions Asse I did. Native (15-125) hIL-3 as standard control for each assay Using.   Native hIL-3 has considerable inflammatory activity and is responsible for arachidonic acid metabolism. Thing LTCFour, LTDFourAnd LTEFourOf histamine, histamine, and hista It has been shown to stimulate the release of min. Native hIL-3 human Clinical trials have demonstrated an inflammatory response [Biesma et al., BLOOD,80: 1141-1148 (1992); Postmus et al., J. Am. CLIN. ONCO L.10: 1131-1140 (1992)]. Recent studies show leukotrienes Is involved in the action of IL-3 in vivo and significantly affects the biological effects of IL-3 treatment. A possible contribution has been suggested [Denzlinger, C. et al. BLO OD,81: 2466-2470 (1993)].   Some muteins of the invention have native hIL-3 or (15-125) h It has an improved therapeutic profile compared to IL-3. Part of the invention Mutein compared to native hIL-3 or (15-125) hIL-3 Have similar or more potent growth factor activity, and also leukotriene or There is no similar or comparable increase in histamine stimulation. These muteins Is the polypeptide needed to achieve the desired growth factor activity (eg cell proliferation). Since the leukotriene or histamine-stimulating effect at the dose of tid is reduced, It is expected to have a more favorable therapeutic profile. Native hIL- In three studies, stimulation of inflammatory factors has been identified as an unwanted side effect of the treatment. Decreased or abolished stimulation of mediators of inflammation is associated with the use of native hIL-3 It offers superior advantages.   pMON13288 polypeptide was tested in the AML193 cell proliferation assay, Compared to native hIL-3, it shows more potent growth factor activity (pMON 13288 EC50= 0.8-3.8 pM for native hIL-3 EC50 = 30.2 pM), and also leukotriene CFour(LTCFour) Production and histology There was no increase corresponding to the stimulation of insulin release. That is, it is LTCFourProduction Stimulates raw and histamine release with an intensity similar to that of native hIL-3 However, the ability to stimulate cell proliferation is improved compared to native hIL-3. Shi Was Thus, the pMON13288 polypeptide provides undesired inflammatory mediators. Target stimulation is reduced to allow the desired therapeutic response, eg, cell proliferation, to be expressed It is expected.   Some muteins of the invention have different antigenic profiles than native hIL-3. Have For example, affinity purified polyclonal goat anti-hlL-3 In a competitive ELISA using antibodies, native hIL-3 was labeled with hIL- Binding of 3 to the polyclonal anti-hIL-3 antibody was significantly blocked, but pMON 13288 did not block the binding of hIL-3 to anti-hIL-3 antibody.   Table 2 shows some oligonucleotides used in the production of the muteins of the present invention. List the array.   Table 3 shows the amino acid of native (15-125) hIL-3 (peptide # 1). The acid sequences and the amino acid sequences of some mutant polypeptides of the invention are listed. The array is Amino acid numbers corresponding to those of native hIL-3 (Fig. 1) are given.   Table 4 shows the nucleotide sequences of some DNA sequences encoding the mutant polypeptides of the present invention. List the octido array. Peptide # 2; pMON13344 (Example 8); (15-125) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 32A, 37P, 42A and 45V) Peptide # 3; pMON13345 (Example 9); (15-125) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 32A, 37P, 42S and 45M) Peptide # 4; pMON13346 (Example 10); (15-125) hIL-3 (18I, 25H, 29V, 32A, 37S, 42S and 45M) Peptide # 5; pMON13347 (Example 12); (15-125) hIL-3 (51R, 55L, 59L, 62V, 67N and 69E) Peptide # 6; pMON13348 (Example 13); (15-125) hIL-3 (51R, 55L, 60S, 67N and 69E) Peptide # 7; pMON13349 (Example 14); (15-125) hIL-3 (51R, 55T, 59L, 67H and 69E) Peptide # 8; pMON13350 (Example 16); (15-125) hIL-3 (73G, 76A, 79A, 93S, 981, 101A and 105Q) Peptide # 9; pMON13355 (Example 17); (15-125) hIL-3 (73G, 76A, 79R, 87S, 93S, 98T, 101A, 105Q) Peptide # 10; pMON13352 (Example 19); (15-125) hIL-3 (109E, 116V and 123E) Peptide # 11; pMON13354 (Example 20); (15-125) hIL-3 (109E, 116V, 117S, 120H and 123E) Peptide # 12; pMON13360 (Example 21); (15-125) hIL-3 (73G, 76A, 79R, 82Q, 87S, 93S, 981, 101A, 10 5Q, 109E, 116V, 120Q and 123E) Peptide # 13; pMON13361 (Example 22); (15-125) hIL-3 (73G, 76A, 79R, 87S, 93S, 98T, 101A, 105Q, 109E, 116V, 120Q and 123E) Peptide # 14; pMON13362 (Example 23); (15-125) hIL-3 (73G, 76A, 79R.82V, 87S, 93S, 98T, 101A, 10 5Q, 109E, 116V, 117S, 120H and 123E) Peptide # 15; pMON13363 (Example 24); (15-125) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 37P, 42A, 45V, 51R, 55L, 60S , 62V, 67N and 69E) Peptide # 16; pMON13364 (Example 25); (15-125) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 32N, 37P, 42S, 45M, 51R, 55T , 59L, 62V, 67H and 69E). Peptide # 17; pMON13365 (Example 26); (15-125) hIL-3 (181, 25H, 29V, 32A, 37S, 42S, 45M, 51R, 55L , 59L, 62V, 67N and 69E). Peptide # 18; pMON13298 (Example 27); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (73G, 76A, 79R, 82Q, 87S, 93S, 98I , 101A, 105Q, 109E, 116V, 120Q and 123E) Peptide # 19; pMON13299 (Example 28); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (73G, 76A, 79R, 82V, 87S, 93S, 98T , 101A, 105Q, 109E, 116V, 120Q and 123E) Peptide # 20; pMON13300 (Example 29); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (73G, 76A, 79R, 82V, 87S, 93S, 98T , 101A, 105Q, 109E, 116V, 117S, 120H, and 12 3E) Peptide # 21; pMON13301 (Example 30); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 32A, 37P, 42A, 45V , 51R, 55L, 60S, 62V, 67N and 69E). Peptide # 22; pMON13302 (Example 31); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 32N, 37P, 42S, 45M , 51R, 55T, 59L, 62V, 67H and 69E); Peptide # 23; pMON13303 (Example 32); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (18I, 25H, 29V, 32A, 37S, 42S, 45M , 51R, 55L, 59L, 62V, 67N and 69E); Peptide # 24; pMON13287 (Example 33); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 32A, 37P, 42A, 45V , 51R, 55L, 60S, 62V, 67N, 69E, 73G, 76A, 79R , 82Q, 87S, 93S, 98I, 101A, 105Q, 109E, 116V , 120Q and 123E); Peptide # 25; pMON13288 (Example 34); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 32N, 37P, 42S, 45M , 51R, 55T, 59L, 62V, 67H, 69E, 73G, 76A, 79R , 82Q, 87S, 93S, 98I, 101A, 105Q, 109E, 116V , 120Q and 123E); Peptide # 26; pMON13289 (Example 35); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (18I, 25H, 29V, 32A, 37S, 42S, 45M , 51R, 551, 59L, 62V, 67N, 69E, 73G, 76A, 79R , 82Q, 87S, 93S, 98I, 101A, 105Q, 109E, 116V , 120Q and 123E); Peptide # 27; pMON13290 (Example 36); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 32A, 37P, 42A, 45V , 51R, 55L, 60S, 62V, 67N, 69E, 73G, 76A, 79R , 82V, 87S, 93S, 98T, 101A, 105Q, 109E, 116 V, 120Q and 123E); Peptide # 28; pMON13292 (Example 37); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 32A, 37S, 42S, 45M , 51R, 55L, 59L, 62V, 67N, 69E, 73G, 76A, 79R , 82V, 87S, 93S, 98T, 101A, 105Q, 109E, 116V , 120Q and 123E); Peptide # 29; pMON13294 (Example 38); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 32N, 37P, 42S, 45M , 51R, 55T, 59L, 62V, 67H, 69E, 73G, 76A, 79R , 82V, 87S, 93S, 98T, 101A, 105Q, 109E, 116V , 117S, 120H and 123E); Peptide # 30; pMON13295 (Example 39); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (18I, 25H, 29V, 32A, 37S, 42S, 45M , 51R, 55L, 59L, 62V, 67N, 69E, 73G, 76A, 79R , 82V, 87S, 93S, 98T, 101A, 105Q, 109E, 116V , 117S, 120H and 123E); Peptide # 31; pMON13312 (Example 40); Met-Ala- (15-1 25) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 32N, 37P, 42S, 45M , 51R, 55T, 59L, 62V, 67H, 69E, 73G, 76A, 79R , 82V, 87S, 93S, 98T, 101A, 105Q, 109E, 116V , 120Q and 123E); Peptide # 32; pMON13313 (Example 41); Met-Ala- (15- 125) hIL-3 (18I, 25H, 29R, 32A, 37P, 42A, 45 V, 51R, 55L, 60S, 62V, 67N, 69E, 73G, 76A, 79 R, 82V, 87S, 93S, 98T, 101A, 105Q, 109E, 116 V, 117S, 120H and 123E); Peptide # A3: pMON13285Met-Ala- (15-125) hIL -3 (42D, 45M, 46S, 50D); Peptide # A4; pMON13286Met-Ala- (15-125) hIL -3 (42D, 45M, 46S); Peptide # A5; pMON13325Met-Ala- (15-125) hIL -3 (42D, 45M, 46S, 116W); Peptide # A6; pMON13326Met-Ala- (15-125) hIL -3 (42D, 45M, 46S, 50D, 116W); Peptide # A7pMON13330Met-Ala-IL-3 (42D, 45M , 46S, 550D, 95R, 981, 100R, 116W); Peptide # A8; pMON13329Met-Ala- (15-125) hIL -3 (42D, 45M, 46S, 981, 100R, 116W); Peptide # B1; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13406 Peptide # B2; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13414 Peptide # B3; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13407 Peptide # B4; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13405 Peptide # B5; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13415 Peptide # B6; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13408 Peptide # B7; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13409 Peptide # B8; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13410 Peptide # B9; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13422 Peptide # B10; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13423 Peptide # B11; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13424 Peptide # B12; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13425 Peptide # B13; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13426 Peptide # B14; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13429 Peptide # B15; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13368 Peptide # B16; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13380 Peptide # B17; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13475 Peptide # B18; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13366 Peptide # B19; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13367 Peptide # B20; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13369 Peptide # B21; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13370 Peptide # B22; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13378 Peptide # B23; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13374 Peptide # B24; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13375 Peptide # B25; Met-Asp- (15-125) hIL-3 pMON 13376 Peptide # B26; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13377 Peptide # B27; Met-Asp- (15-125) hIL-3 pMON 13378 Peptide # B28; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13379 Peptide # B29; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13385 Peptide # B30; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13381 Peptide # B31; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13383 Peptide # B32; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13384 Peptide # B33; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13388 Peptide # B34; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13389 Peptide # B35; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13391 Peptide # B36; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13392 Peptide # B37; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13393 Peptide # B38; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13394 Peptide # B39; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13395 Peptide # B40; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13396 Peptide # B41; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13397 Peptide # B42; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13398 Peptide # B43; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13399 Peptide # B44; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13404 Peptide # B45; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13387 Peptide # B46; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13416 Peptide # B47; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13417 Peptide # B48; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13420 Peptide # B49; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13421 Peptide # B50; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13432 Peptide # B51; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13382 Peptide # B52; Met-Asp- (15-125) hIL-3 pMON 13476 Peptide # B53; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13446 Peptide # B54; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13390 Peptide # C-2; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13400 Peptide # C-3; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13402 Peptide # C-10; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13440 Peptide # C-11; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13451 Peptide # C-4; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13403 Peptide # C-5; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13411 Peptide # C-6; Met-Ala- (15-118) hIL-3 pMON 13412 Peptide # C-7; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13413 Peptide # C-8; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13419 Peptide # C-1; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13418 Peptide # C-9; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13428 Peptide # C-12; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13459 Peptide # C-13; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13467 Peptide # C-14; Met-Ala- (15-125) hIL-3 pMON 13492   [Sequence consisting of (1-133) hIL-3 containing 4 or more amino acid substitutions No .: 129] corresponds to the above-mentioned procedure and the following example. Use to start with the appropriate oligonucleotide and then encode the polypeptide Making by constructing DNA and expressing it in a suitable host cell Can be done. Similarly, it corresponds to [SEQ ID NO: 130] and also has 4 or more amino acids. It may have acid substitution, and 1 to 14 amino acids may be sequentially deleted from the N-terminal. Preferably, 1 to 15 amino acids are deleted from the C-terminal, or N-terminal and Polypeptides with amino acid deletions at both the C- and C-termini are also suitable starting materials. Can be created by the operations in the examples above and below.   Other details known to those skilled in the art can be found in T.W. Maniatis et al.,Molecular  Cloning,A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory (1982), And references cited therein (incorporated herein by reference); and J ． Sambrook et al.Molecular Cloning,A Labora tory  Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Lab oratory (1989) and references cited therein (incorporated herein by reference) Can be found in.   The following examples serve to illustrate the invention in more detail and to illustrate these particular It should be understood that the invention is not limited by the examples.   In the present specification, amino acids are represented by the following one-letter or three-letter abbreviations.       Abbreviation Amino acid       A Ala Alanine       C Cys Cysteine       D Asp Aspartic acid       E Glu Glutamic acid       F Phe Phenylalanine       G Gly Glycine       H His Histidine       I Ile Isoleucine       K Lys Lysine       L Leu Leucine       M Met Methionine       N Asn Asparagine       P Pro Proline       Q Gln glutamine       R Arg Arginine       S Ser Serine       T Thr Threonine       V Val Valin       W Trp Tryptophan       Y Tyr Tyrosine   Those skilled in the art, after reading the disclosure of the present invention, will understand the spirit of the present invention and Various other examples would be obvious without departing from the scope. All other examples like this It is intended to be included within the scope of the claims appended hereto.   References     Adams, S.P., Kavka, K.S., Wykes, E.J., Holder, S.B. and     Galluppi, G.R. Hindered Dialkyamino Nucleoside Phosphate     reaqents in the synthesis of two DNA51-mers. J. Am.     Chem. Soc., 105, 661-663 (1983).     Atkinson, T. and Smith, M., in Gait, M.J.,     Oliqonucleotide Sythesis (1984) (IRL Press, Oxford     Enqland).     Bachmann, B., Pediqrees of some mutant strains of     Escherichia coli K-12,Bacteriological Reviews,36: 525-     557 (1972).     Bayne, M.L., Expression of a synthetic gene encoding     human insulin-like growth facctor I in cultured mouse     fibroblasts.Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84， 2638-2642     (1987).     Ben-Bassat, A., K. Bauer, S-Y. Chang, K. Myambo,     A. Boosman and S. Ching. 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Inheritance in which the above-mentioned oligonucleotide sequence encodes the C-terminus Isolates with substituting offspring were identified. Within the new sequence, a new stop codon, A recognition site for TAA and the enzyme HindIII was generated. This new plasmid , PMON5846.                                   Example 2   (A)Construction of expression plasmid pMON2341   The plasmid pMON2341 contains hIL-3 and hIL- in E. coli. Specific replies used in the construction of many plasmids used in the production of 3 muteins Used to provide recon and expression elements. These expression elements are materials and methods It is described in the section. pMON2341 is called pMON5515 (Olins et al., 1988) and pMON2429. pMON2429 is p Chloramphenicol from BR328 (Covarrubias et al., 1981) Acetyltransferase (cat) Gene was inserted at the BamHI site Phage mp18 with BclI fragment (Yanisch-Perron , 1985). in pMON2429catGene is pB It is converted from the gene in R328 by mutation at a specific site (Kunke l, 1985). NcoI and EcoRI recognition sites present in the native gene The positions are converted so that these two restriction enzymes do not recognize these sites too early. It was. This change did not change the protein identified by the gene. Also , NcoI site at the N-terminus of the coding sequence It was introduced so that it overlaps with the code.   The steps for constructing pMON2429 are listed below.   (1) The DNAs of pMON5515 and pMON2429 were digested with NcoI and Treated with HindIII. You can ligate these fragments into a competent E. coli was used to transform ampicillin resistance. These colonies From this, some chloramphenicol-resistant colonies were identified. These The rat atriopeptigen gene of pMON5515 is pMO From N2429catThe gene-containing NcoI-HindIII fragment The replaced plasmid DNA was isolated. This fragment contains many of mp18 The part derived from the heavy linker region contains recognition sites for several restriction enzymes. This new The new plasmid was named pMON2412.   (2) pMON2412 has the pBR327-derived portion of this DNA at one position. It was treated with the enzyme ClaI, which cleaves with. The protruding end is cleaved in the presence of the nucleotide precursor. Treated with renou to make a blunt. This DNA was transformed into pEMBL8 (Dente et al., 1983) and an isolated 514 bp RsaI fragment. This The RsaI fragment of E. coli contains the replication origin of phage f1. This ligation Of competent E. coli cells with ampicillin resistance using a mixture of proteins did. PMON5578 was found in plasmid DNA isolated from these cells. It was. This plasmid has the structure of pMON2412 and is located within its ClaI site. The origin of replication of f1 is inserted. This is in the drawing and Olins & Rang wala (1990).   (3) Treat the DNA of pMON5578 with the restriction enzymes HindIII and MstII. I made sense. This DNA is then treated with Klenow enzyme in the presence of nucleotide precursors. The end was made a blunt. By ligating this treated DNA, It was used to transform E. coli to ampicillin resistance. Ampicillin resistance sex From the colony, a single plasmid without the region between HindIII and MstII The code was recovered. This deletion results in a large number of restriction endonucleases from the plasmid. The sequence recognized by the enzyme site was removed. This new plasmid is pMO It was named N5582.   (4) The DNA of pMON5582 was treated with SstII and BclII and shown below. Ligation in the presence of annealed oligonucleotides with the sequence   This sequence consists of a transcription initiation site and a lexA repressor binding site (operator). Encoding essential elements of the recA promoter of E. coli (Sancar, 1980). The plasmid recovered from the ligation mixture was pMON5582. (And pMON5515) the recA promoter instead of the promoter in Was included. Regarding the functionality of the recA promoter, Olins & Illustrated by Rangwala (1990). This new plasmid It was named pMON5594.   (5) To eliminate the unique EcoRI site in pMON5594 Treat the DNA with EcoRI and then with Klenow in the presence of nucleotide precursors The ends were blunted and then the DNA was ligated. This ligation mixture A plasmid was recovered from which the DNA was not cleaved with EcoRI. This plastic The Sumid was named pMON5630.   (6) To change the unique recognition site of PstI, use the plasmid pMON. 5630 was mutated at a specific site (Kunkel, 1985). This operation The oligonucleotide used for has the following sequence.   As a result of this operation, pMON5630 is PstI in the β-lactamase gene. PMON differs in that the site changed so that it was not recognized early even by PstI 2341 was built. A single nucleotide change is a β-lactamase protein The quality amino acid sequence is not changed.   (B)[Met- (1-133) pM encoding hIL-3 a (Arg 129) Construction of ON5847 (Fig. 5)   hIL-3 was produced in Escherichia coli from cDNA derived from hIL-3 gene. Plasmid replicon, promoter, ribosome binding site, transcription To supply the terminator and antibiotic resistance marker, plasmid pMON2341 was used.   Treatment of plasmid pMON2341 with restriction enzymes NcoI and HindIII It was. The restriction fragment containing the origin of replication was purified. Plasmid pMON58 Forty-six DNAs were treated with NcoI and HindIII. Includes hIL-3 gene The restriction fragment was gel purified. Mix these purified restriction fragments I ligated. Competent JM101 using this ligation mixture The cells were transformed to ampicillin resistance. Colonies are picked and plasmid DN A was purified and analyzed using restriction enzymes. pMON5847 is pMON2341 And the chloramphenicol acetyltransferase gene Therefore, it was identified as a plasmid having the hIL-3 gene. This plasmid Tethered JM101 cells were cultured in M9 medium and treated with nalidixic acid as described above. Processed. Protein content was examined in samples of the culture broth. This hIL-3 Muteins are total cells when measured on Coomassie stained polyacrylamide gels. It was revealed that about 6% of the protein was produced.                                   Example 3   [Met- (1-133) pMON5 encoding hIL-3 a (Arg 129) Construction of 854 (Fig. 7)   To increase the accumulation of hIL-3 in E. coli, the amino terminus of the protein A partial coding sequence was found in the E. coli gene which produces high levels of protein. More closely reflect the bias of codons (Gouy & Gautier, 1982) I changed it to do. To change the coding sequence of the amino-terminal part of the gene Contains a pair of synthetic oligonucleotides between the NcoI and HpaI sites within the coding sequence. I inserted cleotide. DNA of plasmid pMON5847 (Example 2) about 0.5 μg was treated with NcoI and HpaI. This DNA has the following sequence Mixed with the ringed oligonucleotide pair.   The fragment was ligated. Competent with ligation mixture JM101 was transformed into ampicillin resistance. Collect colonies in broth did. Plasmid DNA was prepared from the culture solution, and although it was present in the synthetic sequence, p DdeI not present between NcoI and HpaI sites in the sequence of MON5847 The presence of the site (CTNAG) was examined. The new recombinant plasmid is pMON It was named 5854. Amino-terminal part of the hIL-3 gene in pMON5854 The nucleotide sequence of the DNA within the minute coding sequence is determined by DNA sequencing Be identical to the synthetic oligonucleotides used for ligation Was found. Grow a culture of JM101 cells harboring this plasmid, Treatment with nalidixic acid induced the production of hIL-3 muteins. Cooma Accumulation of hIL-3 muteins was determined to be pMON by protein analysis on Approximately 25% of the total cellular protein in the culture that anchors 5854, which is pMON The value was significantly higher than that of the culture solution in which 5847 was tethered.                                   Example 4   PMON5887 encoding Met- (1-125) hIL-3 (Fig. 12) Building   Plasmid DNA of pMON5854 (Example 3) was transformed with EcoRI (5HindIII). The large fragment gel was purified by treating with. About 0.5 μg of this DNA was added to hIL- Annealed oligonucleotides encoding amino acids 107-125 of 3 It was ligated to 1 picomole of do. The sequences of these oligonucleotides are shown below. I will.   EcoRI ~ HindIII   After ligation, the competent JM101 cells were annealed using the DNA. It was transformed to be resistant to picillin. Colonies were collected in broth and plasmid DNA Was isolated from each culture. PMON5854 by restriction analysis of plasmid DNA The presence of a shorter EcoRI-HindIII fragment than that of the above case was shown. This The nucleotide sequence of the portion of the coding sequence between the EcoRI and HindIII sites of , Was determined to confirm the accuracy of the replaced sequences. The following amino acid sequence This new plasmid encoding Met- (1-125) hIL-3 has pM It was named ON5887.                                   Example 5   PMON59 encoding [Met-Ala- (15-125) hIL-3] Build 67   PMON5887 plasmid isolated from E. coli strain GM48 (dam-) The DNA was cleaved with NcoI and ClaI to give the amino acid [MetAla (15-20) Annealed oligonucleotides encoding hIL-3 vs. 1 picomole I ligated. The sequences of these oligonucleotides are shown below.   The resulting ligation mixture was used to compete with E. coli JM101 cells. The cells were transformed into ampicillin resistant colonies. Plasmids from these cells DNA was isolated and inserted by restriction analysis with NcoI and NsiI Make sure the size of the fragment is smaller than that of pMON5887 It has been certified. The nucleotide sequence of the region between NcoI and ClaI was determined and it was It was confirmed to be the sequence of the synthetic oligonucleotide. This new plasmid is pMON It was named 5967, and protein production was induced in cells containing it. Super The sonicated cell pellet and supernatant were used for protein purification and bioassay. I used it.                                   Example 6   PMON59 encoding [Met-Ala- (15-125) hIL-3] Build 78   The plasmid of pMON5967 isolated from E. coli strain GM48 (dam-) The DNA was cleaved with ClaI and NsiI, and hIL-3 amino acids 20 to 70 (Fig. 2). Annealed assembly of 6 oligonucleotides encoding I made him ligate. This synthetic fragment is the only three restriction sites It encodes EcoRV, XhoI and PstI. These oligonuclides The sequence of Ochid is shown in Fig. 2.   The resulting ligation mixture was used to compete with E. coli JM101 cells. The cells were transformed into ampicillin resistant colonies. Isolate the plasmid DNA, The presence of the new restriction site EcoRV was screened for with XbaI and EcoRV. I got it. The DNA sequence in the region between ClaI and NsiI was determined and the synthetic oligonucleotide We found that it is identical to the sequence of cleotide. This new plasmid is pMON It was named 5978 and induced protein production in cells containing it. Super Sonicated cell pellets and supernatants for protein purification and bioassay Used for.   Plasmid pMON5978 has the amino acid sequence shown below [Met- Ala- (15-125) hIL-3].                                   Example 7   Construction of pMON13356   Digestion of plasmid pMON5988 DNA with restriction enzymes NcoI and EcoRV did. The resulting 4190 base pair NcoI, EcoRV fragment is shown below. Gene element, β-lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, transcription Origin of phage f1 replication as terminator, pAraBAD promoter, g10L ribosome binding site, lamB secretion leader, and (15-125) It contains the bases encoding amino acids 47-125 of hIL-3. pMON59 The 4190 base pair NcoI, EcoRV restriction fragment from 88 is from Table 2 It was ligated to the following annealed complementary oligonucleotides.   Oligo # 13 [SEQ ID NO: 27]   Oligo # 14 [SEQ ID NO: 28]   E. coli K-12 strain JM101 was transformed with the ligation reaction mixture, Transformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. LB medium Plasmid DNA was isolated from colonies grown in Restriction digestion of the gut size with the restriction enzymes NcoI and HindIII Determined by analysis. In the obtained plasmid, (15-125) hIL- The 99 bases between the NcoI and EcoRV restriction sites in the 3 genes are It is substituted with 22 bases from Gonucleotide. This linker is also NdeI It also contains the recognition sequence.                                   Example 8   Construction of pMON13344   The plasmid pMON13356 DNA was deleted with the restriction enzymes NcoI and EcoRV. It became. The 4190 base pair NcoI, EcoRV fragment obtained was as follows. Gene element, β-lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, transcription Origin of phage f1 replication as terminator, pAraBAD promoter, g10L ribosome binding site, lamB secretion leader, and (15-125) It contains the bases encoding amino acids 47-125 of hIL-3. Second DNA The fragment used the following pair of complementary oligonucleotides with overlapping ends It was generated by a synthetic gene assembly.   Oligo # 1 [SEQ ID NO: 15]   Oligo # 2 [SEQ ID NO: 16]   Oligo # 3 [SEQ ID NO: 17]   Oligo # 4 [SEQ ID NO: 18]   Oligo # 9 [SEQ ID NO: 23]   Oligo # 10 [SEQ ID NO: 24]   The assembled oligonucleotide contains NcoI and EcoRV restriction ends. And the following amino acid substitutions: 18I, 25H, 29R, 32A, Amino acids of (15-125) hIL-3 having 37P, 42A, and 45V A DNA sequence encoding 15-46 is created. (15-125) hIL-3 The codons encoding amino acids 15 to 46 of And the codon found in the hIL-3 cDNA sequence. pMON13356? Annealed the 4190 base pair NcoI, EcoRV restriction fragment of Ligated oligonucleotide pairs. The ligation reaction product was treated with NdeI. E. coli K-12 strain JM101 was transformed with this. To Lanceformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. In LB medium Plasmid DNA was isolated from colonies grown in. DNA sequence is oligo It was determined to be a cleotide sequence. The plasmid pMON13344 is It encodes a (15-125) hIL-3 variant having the following amino acid sequence.   Peptide # 2   DNA sequence # 10 [SEQ ID NO: 106] is the above pMON13344 polypep Code Chid.                                   Example 9   Construction of pMON13345   4190 base pair NcoI, EcoRV control from plasmid pMON13356 Restriction fragment into the following annealed complementary oligonucleotide pair. Gated.   Oligo # 1 [SEQ ID NO: 15]   Oligo # 2 [SEQ ID NO: 16]   Oligo # 5 [SEQ ID NO: 19]   Oligo # 6 [SEQ ID NO: 20]   Oligo # 11 [SEQ ID NO: 25]   Oligo # 12 [SEQ ID NO: 26]   The assembled oligonucleotide contains NcoI and EcoRV restriction ends. And the following amino acid substitutions: 18I, 25H, 29R, 32N, 37 From amino acid 15 of (15-125) hIL-3 with P, 42S and 45M A DNA sequence encoding 46 is created. (15-125) hIL-3 Ami The codons coding for noic acids 15-46, except for the positions where amino acid substitutions were made, It is a codon found in the hIL-3 cDNA sequence. The ligation reaction product It was digested with NdeI and used for transformation of Escherichia coli K-12 strain JM101. Transformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. LB medium Plasmid DNA was isolated from colonies grown in. For DNA sequencing The sequence was determined to be that of an oligonucleotide. Plasmid pMON13345 has the following amino acid sequence (15-125) hIL- It encodes 3 variants.   Peptide # 3   DNA sequence # 11 [SEQ ID NO: 107] is the above pMON13345 polypep Code Chid.                                 Example 10   Construction of pMON13346   4190 base pairs from pMON13356, NcoI, EcoRV restriction flags Ligation to the following pair of annealed complementary oligonucleotides. I made it.   Oligo # 1 [SEQ ID NO: 15]   Oligo # 2 [SEQ ID NO: 16]   Oligo # 7 [SEQ ID NO: 21]   Oligo # 8 [SEQ ID NO: 22]   Oligo # 11 [SEQ ID NO: 25]   Oligo # 12 [SEQ ID NO: 26]   The assembled oligonucleotide contains NcoI and EcoRV restriction ends. And the following amino acid substitutions: 18I, 25H, 29V, 32A, 37 Amino acids 15 to (15-125) hIL-3 having S, 42S and 45M A DNA sequence encoding 46 is created. (15-125) hIL-3 Ami The codons coding for noic acids 15-46, except for the positions where amino acid substitutions were made, It is a codon found in the hIL-3 cDNA sequence. The ligation reaction product It was digested with NdeI and used for transformation of Escherichia coli K-12 strain JM101. Transformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. LB medium Plasmid DNA was isolated from colonies grown in The sequence was determined to be that of the oligonucleotide. Plasmid, pMON13346 has the following amino acid sequence (15-125) hIL- It encodes 3 variants.   Peptide # 4   DNA sequence # 12 [SEQ ID NO: 108] is the above pMON13346 polypep. Code Chid.                                 Example 11   Construction of pMON13357   The DNA of the plasmid pMON5988 was digested with the restriction enzymes EcoRV and NsiI. Digested. The 4218 base pair EcoRV, NsiI fragment obtained was Gene elements of β-lactamase gene (AMP), pBR327 Origin of production, origin of phage f1 replication as transcription terminator, pAraBAD Promoter, g10L ribosome binding site, lamB secretion leader, and Coding amino acids 15-46 and 72-125 of (15-125) hIL-3. Contains the base to be added. 4218 base pair EcoRV from pMON5988, The NsiI restriction fragment was ligated with the following annealed complementary oligonucleotides: I made him ligate.   Oligo # 19 [SEQ ID NO: 33]   Oligo # 20 [SEQ ID NO: 34]   The ligation reaction mixture was used to transform E. coli K-12 strain JM101. It was. Transformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. LB Plasmid DNA was isolated from colonies grown in medium and the inserted flag Double digestion of menthol size with restriction enzymes NcoI and HindIII Determined by restriction analysis. In the resulting plasmid, (15-125) hIL The 71 bases between the EcoRV and NsiI restriction sites in the -3 gene are It is substituted with 22 bases from the lygonucleotide. This linker is also Nde Contains the I recognition sequence.                                 Example 12   Construction of pMON13347   4218 base pair EcoRV, NsiI restriction fragment from pMON13357 Components were ligated to the following annealed complementary oligonucleotide pairs.   Oligo # 21 [SEQ ID NO: 35]   Oligo # 22 [SEQ ID NO: 36]   Oligo # 25 [SEQ ID NO: 39]   Oligo # 26 [SEQ ID NO: 40]   Oligo # 31 [SEQ ID NO: 45]   Oligo # 32 [SEQ ID NO: 46]   The assembled oligonucleotide contains EcoRV and NsiI restriction ends. And the following amino acid substitutions: 51R, 55L, 59L, 62V, 67 Amino acids 47-71 of (15-125) hIL-3 with N, and 69E The coding DNA sequence is created. (15-125) hIL-3 47-71 The codons encoding amino acids are hIL-, except at the positions where amino acid substitutions were made. 3 is a codon found in the cDNA sequence. Ligation reaction product with NdeI It was digested and used for transformation of E. coli K-12 strain JM101. Troff Human bacterium was selected on plates containing ampicillin. Proliferate in LB medium Plasmid DNA was isolated from the colonies. The sequence is determined by DNA sequencing. The row was determined to be the sequence of the oligonucleotide. Plasmid, pMON 13347 is a (15-125) hIL-3 variant having the following amino acid sequence: Code   Peptide # 5   DNA sequence # 13 [SEQ ID NO: 109] is the above pMON13347 polypep Code Chid.                                 Example 13   Construction of pMON13348   4218 base pair EcoRV, NsiI restriction fragment from pMON13357 Components were ligated to the following annealed complementary oligonucleotide pairs.   Oligo # 21 [SEQ ID NO: 35]   Oligo # 22 [SEQ ID NO: 36]   Oligo # 27 [SEQ ID NO: 41]   Oligo # 28 [SEQ ID NO: 42]   Oligo # 31 [SEQ ID NO: 45]   Oligo # 32 [SEQ ID NO: 46]   The assembled oligonucleotide contains EcoRV and NsiI restriction ends. And the following amino acid substitutions: 51R, 55L, 60S, 62V, 67 Amino acids 47-71 of (15-125) hIL-3 with N, and 69E The coding DNA sequence is created. (15-125) hIL-3 47-71 The codons encoding amino acids are hIL-, except at the positions where amino acid substitutions were made. 3 is a codon found in the cDNA sequence. Ligation reaction product with NdeI It was digested and used for transformation of E. coli K-12 strain JM101. Troff Human bacterium was selected on plates containing ampicillin. Proliferate in LB medium Plasmid DNA was isolated from the colonies. The sequence is determined by DNA sequencing. The row was determined to be the sequence of the oligonucleotide. Plasmid, pMON 13348 is a (15-125) hIL-3 variant having the following amino acid sequence: Code   Peptide # 6   DNA sequence # 14 [SEQ ID NO: 110] is the above pMON13348 polypep. Code Chid.                                 Example 14   Construction of pMON13349   4218 base pair EcoRV, NsiI restriction fragment from pMON13357 Components were ligated to the following annealed complementary oligonucleotide pairs.   Oligo # 23 [SEQ ID NO: 37]   Oligo # 24 [SEQ ID NO: 38]   Oligo # 25 [SEQ ID NO: 39]   Oligo # 26 [SEQ ID NO: 40]   Oligo # 29 [SEQ ID NO: 43]   Oligo # 30 [SEQ ID NO: 44]   The assembled oligonucleotide contains EcoRV and NsiI restriction ends. And the following amino acid substitutions: 51R, 55T, 59L, 62V, 67 H, and amino acids 47-71 of (15-125) hIL-3 with 69E The coding DNA sequence is created. (15-125) hIL-3 47-71 The codons encoding amino acids are hIL- 3 is a codon found in the cDNA sequence. Ligation reaction product with NdeI It was digested and used for transformation of E. coli K-12 strain JM101. Troff Human bacterium was selected on plates containing ampicillin. Proliferate in LB medium Plasmid DNA was isolated from the colonies that had been selected and the The sequence was determined to be that of the oligonucleotide. Plasmid pMON 13349 is a (15-125) hIL-3 variant having the following amino acid sequence: Code   Peptide # 7   DNA sequence # 15 [SEQ ID NO: 111] is the above pMON13349 polypep Code Chid.                                 Example 15   Construction of pMON13358   The DNA of the plasmid pMON5988 was digested with the restriction enzymes NsiI and EcoRI. Digested. The resulting 4178 base pair NsiI, EcoRI fragment was Gene element of β, lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, Origin of phage f1 replication as a transcription terminator, pAraBAD promoter , G10L ribosome binding site, lamB secretion leader, and (15- 125) Salts encoding amino acids 15-71 and 106-125 of hIL-3 Contains a group. 4178 base pair NsiI, EcoRI restriction from pMON5988 Restriction fragment to the following annealed complementary oligonucleotides: I did.   Oligo # 15 [SEQ ID NO: 29]   Oligo # 16 [SEQ ID NO: 30]   The ligation reaction mixture was used to transform E. coli K-12 strain JM101. It was. Transformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. LB Plasmid DNA was isolated from colonies grown in medium and the inserted flag Double digestion of menthol size with restriction enzymes NcoI and HindIII Determined by restriction analysis. In the resulting plasmid, (15-125) hIL The 111 bases between the NsiI and EcoRI restriction sites in the -3 gene are It is replaced by 24 bases from the oligonucleotide. This linker is It also contains an NdeI recognition sequence.                                 Example 16   Construction of pMON13350   4178 base pairs from pMON13358 NsiI, EcoRI restriction fragments Components were ligated to the following annealed complementary oligonucleotide pairs.   Oligo # 41 [SEQ ID NO: 55]   Oligo # 42 [SEQ ID NO: 56]   Oligo # 39 [SEQ ID NO: 53]   Oligo # 40 [SEQ ID NO: 54]   Oligo # 35 [SEQ ID NO: 49]   Oligo # 36 [SEQ ID NO: 50]   Oligo # 43 [SEQ ID NO: 57]   Oligo # 44 [SEQ ID NO: 58]   The assembled oligonucleotide contains NsiI and EcoRI restriction ends. And the following amino acid substitutions: 73G, 76A, 79R, 82Q, 87 Of (15-125) hIL-3 having S, 93S, 981, 101A, 105Q A DNA sequence encoding amino acids 72-105 is created. (15-125) Amino acid substitutions were made in the codons encoding amino acids 72-105 of hIL-3. It is a codon found in the hIL-3 cDNA sequence except at the designated positions. Ligation Reaction product was digested with NdeI and transformed into E. coli K-12 strain JM101. It was used instead. Select transformant bacteria on plates containing ampicillin. Selected. Plasmid DNA was isolated from colonies grown in LB medium. Sequencing of the DNA reveals that the sequence is that of an oligonucleotide. It has been determined. The plasmid, pMON13350, has the following amino acid sequence It encodes the (15-125) hIL-3 variant.   Peptide # 8   DNA sequence # 16 [SEQ ID NO: 112] is the above pMON13350 polypep Code Chid.                                 Example 17   Construction of pMON13355   4178 base pairs from pMON13358 NsiI, EcoRI restriction fragments Components were ligated to the following annealed complementary oligonucleotide pairs.   Oligo # 41 [SEQ ID NO: 55]   Oligo # 42 [SEQ ID NO: 56]   Oligo # 37 [SEQ ID NO: 51]   Oligo # 38 [SEQ ID NO: 52]   Oligo # 33 [SEQ ID NO: 47]   Oligo # 34 [SEQ ID NO: 48]   Oligo # 43 [SEQ ID NO: 57]   Oligo # 44 [SEQ ID NO: 58]   The assembled oligonucleotide contains NsiI and EcoRI restriction ends. And the following amino acid substitutions: 73G, 76A, 79R, 82V, 87 Of (15-125) hIL-3 having S, 93S, 98T, 101A and 105Q A DNA sequence encoding amino acids 72-105 is created. (15-125) Amino acid substitutions were made in the codons encoding amino acids 72-105 of hIL-3. It is a codon found in the hIL-3 cDNA sequence except at the designated positions. Ligation Reaction product was digested with NdeI and transformed into E. coli K-12 strain JM101. It was used instead. Select transformant bacteria on plates containing ampicillin. Selected. Plasmid DNA was isolated from colonies grown in LB medium. By sequencing the DNA, the sequence is that of an oligonucleotide. Was decided. The plasmid, pMON13355, has the following amino acid sequence It encodes the (15-125) hIL-3 variant.   Peptide # 9   DNA sequence # 17 [SEQ ID NO: 113] is the above pMON13355 polypep Code Chid.                                 Example 18   Construction of pMON13359   The plasmid pMON5988 DNA was digested with restriction enzymes EcoRI and HindII. Digested with I. The resulting 4225 base pair EcoRI, HindIII fragment was , The following genetic elements: β-lactamase gene (AMP), pBR32 7 Origin of replication, origin of replication of phage f1 as transcription terminator, pAr aBAD promoter, g10L ribosome binding site, lamB secretion leader And (15-125) bases encoding amino acids 15-105 of hIL-3. Have. 4225 base pair EcoRI, HindIII restriction from pMON5988 Ligate the fragment to the following annealed complementary oligonucleotides It was.   Oligo # 17 [SEQ ID NO: 31]   Oligo # 18 [SEQ ID NO: 32]   Transformation of E. coli K-12 strain JM101 using the ligation reaction product did. Transformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. Plasmid DNA was isolated from colonies grown in LB medium and the inserted plasmid was isolated. Double digestion of lagment size with restriction enzymes NcoI and HindIII It was decided by restriction analysis. In the obtained plasmid, (15-125) 64 bases between the EcoRI and HindIII restriction sites in the hIL-3 gene Is substituted with 20 bases from the above oligonucleotide. This linker is It also contains an NdeI recognition sequence.                                 Example 19   Construction of pMON13352   4225 base pair EcoRI, HindIII restriction fragments from pMON13359 Ligated to the following annealed complementary oligonucleotide pair: ．   Oligo # 45 [SEQ ID NO: 59]   Oligo # 46 [SEQ ID NO: 60]   Oligo # 49 [SEQ ID NO: 63]   Oligo # 50 [SEQ ID NO: 64]   EcoRI and HindIII restriction for assembled oligonucleotides Terminal and the following amino acid substitutions: 109E, 116V, 120Q and Amino acids 106-125 of (15-125) hIL-3 having The resulting DNA sequence is created. (15-125) hIL-3 amino acid 10 The codons encoding 6 to 125 were hIL-except for the positions where amino acid substitutions were made. 3 is a codon found in the cDNA sequence. Ligation reaction product with NdeI It was digested and used for transformation of E. coli K-12 strain JM101. Trance Formatant bacteria were selected on plates containing ampicillin. Increase in LB medium Plasmid DNA was isolated from the propagated colonies. By sequencing the DNA , Its sequence was determined to be that of an oligonucleotide. Plasmid, pMON13352 has the following amino acid sequence (15-125) hIL-3 It encodes a variant.   Peptide # 10   DNA sequence # 18 [SEQ ID NO: 114] is the above pMON13352 polypep Code Chid.                                 Example 20   Construction of pMON13354   4225 base pair EcoRI, HindIII restriction fragments from pMON13359 Ligated to the following annealed complementary oligonucleotide pair: ．   Oligo # 45 [SEQ ID NO: 59]   Oligo # 46 [SEQ ID NO: 60]   Oligo # 47 [SEQ ID NO: 61]   Oligo # 48 [SEQ ID NO: 62]   EcoRI and HindIII restriction for assembled oligonucleotides Terminal and the following amino acid substitutions: 109E, 116V, 117S , 15H and 123E, amino acid 10 of (15-125) hIL-3 A DNA sequence encoding 6-125 is created. (15-125) hIL-3 The codons encoding amino acids 106 to 125 of Except for the codon found in the hIL-3 cDNA sequence. Ligation reaction generation Digested with NdeI and used for transformation of E. coli K-12 strain JM101 did. Transformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. L Plasmid DNA was isolated from colonies grown in B medium. Its DNA The sequence was determined to be that of the oligonucleotide. The plasmid, pMON13354, has the following amino acid sequence (15-125 ) Encodes a hIL-3 variant.   Peptide # 11   DNA sequence # 19 [SEQ ID NO: 115] is the above pMON13354 polypep Code Chid.                                 Example 21   Construction of pMON13360   The DNA of plasmid pMON13352 was digested with restriction enzymes NsiI and EcoRII. Digestion with I yielded a 4178 base pair NsiI, EcoRIII fragment. pMO The genetic element derived from N13352 is β-lactamase gene (AMP) , The origin of pBR327 replication, the origin of phage f1 replication as a transcription terminator , PAraBAD promoter, g10L ribosome binding site, lamB secretion site Amino acids 15-71 and 106 of (15-125) hIL-3 It is a base encoding ~ 125. Plasmid pMON13350 was added to NsiI And digested with EcoRI. The resulting 111 base pair NsiI, EcoRI fragment The segment encodes amino acids 72-105 of (15-125) hIL-3. The eluted restriction fragment was concentrated using a Centricon 30 concentrator, Desalted. Ligate the restriction fragments and use the ligation reaction mixture to Enterobacter K-12 strain JM101 was transformed. Ampi Transformant Bacteria Selected on plates containing cillin. Plasmid DNA was isolated and analyzed by restriction analysis. Was analyzed. A clone containing the correct insert was Xmn compared to pMON13352. The I site had disappeared. Positive clones of the 615 base pair XmnI fragment It was identified by disappearance. DNA sequenced to confirm correct insert ． The resulting (15-125) hIL-3 mutant had the following amino acid substitutions 73G, 7 6A, 79R, 82Q, 87S, 93S, 981, 101A, 105Q, 109 E, 116V, 120Q, and 123E. (15-125) hIL- The codons encoding amino acids 72-105 of 3 are at the position where the amino acid substitution was made Excluding And is the codon found in the hIL-3 cDNA sequence. Plasmid, pMON 13360 is a (15-125) hIL-3 variant having the following amino acid sequence: Code.   Peptide # 12   DNA sequence # 23 [SEQ ID NO: 119] is the above pMON13360 polypep Code Chid.                                 Example 22   Construction of pMON13361   Plasmid pMON13352DNA was digested with restriction enzymes NsiI and EcoRI. Digestion yielded a 4178 base pair NsiI, EcoRI fragment. pMON The genetic element derived from 13352 is β-lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, pAraBAD promoter, g10L ribosome binding site, lamB secretion site And amino acids 15-71 and 106- of (15-125) hIL-3 It is a base encoding 125. The plasmid pMON13355 was cloned into NsiI and And digested with EcoRI. Obtained 111 base pair NsiI, EcoRI flag Ment encodes amino acids 72-105 of (15-125) hIL-3. System Ligated the restriction fragment and used the ligation reaction mixture to transform E. coli K-12. Strain JM101 was transformed. Ampicillin containing transformant bacteria Selected on plate. Clones containing the correct insert also contain an RsaI site. Which produces a 1200 base pair RsaI fragment. Correct insert The DNA was sequenced for confirmation. Obtained (15-125) hIL-3 The mutants have the following amino acid substitutions 73G, 76A, 79R, 82V, 87S, 93 S, 98T, 101A, 105Q, 109E, 116V, 120Q and 123 Has E. (15-125) encodes amino acids 72 to 125 of hIL-3 Codons were found in the hIL-3 cDNA sequence except at the positions where amino acid substitutions were made. Is a codon that is used. The plasmid, pMON13361, has the following amino acid sequence: (15-125) hIL-3 mutant.   Peptide # 13   DNA sequence # 24 [SEQ ID NO: 120] is the above pMON13361 polypep Code Chid.                                 Example 23   Construction of pMON13362   Plasmid pMON13354DNA was digested with restriction enzymes NsiI and EcoRI. Digestion yielded a 4178 base pair NsiI, EcoRI fragment. pMON The genetic element derived from 13354 is β-lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, pAraBAD promoter, g10L ribosome binding site, lamB secretion site And amino acids 15-71 and 106- of (15-125) hIL-3 It is a base encoding 125. The plasmid, pMON13355 DNA, Digested with NsiI and EcoRI. Obtained 111 base pairs NsiI, EcoRI The fragment encodes amino acids 72-105 of (15-125) hIL-3. The The restriction fragment was ligated and the ligation reaction mixture was used to The K-12 strain JM101 was transformed. Ampicile Transformant Bacteria Selected on phosphorus-containing plates. The clone containing the correct insert is further RsaI Site, which results in a 1200 base pair RsaI fragment. Positive The DNA sequence was determined to confirm the new insert. Obtained (15-125) The hIL-3 mutant has the following amino acid substitutions: 73G, 76A, 79R, 82V, 87S, 93S, 98T, 101A, 105Q, 109E, 116V, 117S , 120H and 123E. (15-125) hIL-3 amino acid 7 The codons encoding 2-125 are hIL except for the positions where amino acid substitutions were made. -3 is a codon found in the cDNA sequence. The plasmid, pMON13362, is It encodes a (15-125) hIL-3 variant having the following amino acid sequence.   Peptide # 14   DNA sequence # 25 [SEQ ID NO: 121] is the above pMON13362 polypep Code Chid.                                 Example 24   Construction of pMON13363   The DNA of the plasmid pMON13344 is erased with the restriction enzymes NsiI and EcoRV. Was ligated to obtain a 4218 base pair NsiI, EcoRV fragment. pMON The genetic elements derived from 13344 are β-lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, pAraBAD promoter, g10L ribosome binding site, lamB secretion site And amino acids 15-46 and 72- of (15-125) hIL-3 It is a base encoding 125. The plasmid pMON13348DNA is Nsi Digested with I and EcoRV. The resulting 71 base pairs of NsiI, EcoRV Lagment encodes amino acids 47-71 of (15-125) hIL-3. Ligate the restriction fragments with T4 ligase and use the ligation reaction mixture Then, Escherichia coli K-12 strain JM101 was transformed. Transformant bacteria Were selected on plates containing ampicillin. A clone containing the correct insert Contains an additional DdeI site, which results in 973 bases in pMON13344 This produces a DdeI restriction fragment of 806 and 167 base pairs corresponding to the pair. The DNA sequence was determined to confirm the correct insert. Obtained (15-125) The hIL-3 variant has the following amino acid substitutions: 181, 25H, 29R, 32A, 37P, 42A, 45V, 51R, 55L, 60S, 62V, 67N and 69 Has E. (15-125) hIL-3 encoding amino acids 15-71 Don is found in the hIL-3 cDNA sequence except at the position where the amino acid substitution was made. Is a codon. The plasmid, pMON13363, has the following amino acid sequence: (15-125) hIL-3 mutant.   Peptide # 15   DNA sequence # 20 [SEQ ID NO: 116] is the above pMON13363 polypep Code Chid.                                 Example 25   Construction of pMON13364   The DNA of the plasmid pMON13345 is erased with the restriction enzymes NsiI and EcoRV. Was ligated to obtain a 4218 base pair NsiI, EcoRV fragment. pMON The genetic element derived from 13345 is β-lactamase gene (AMP), Origin of pBR327 replication. The origin of phage f1 replication as a transcription terminator, pAraBAD promoter, g10L ribosome binding site, lamB secretion site And amino acids 15-46 and 72- of (15-125) hIL-3 It is a base encoding 125. The plasmid, pMON13349 DNA, Digested with NsiI and EcoRV. The resulting 71 base pairs of NsiI, EcoRV The fragment encodes amino acids 47-71 of (15-125) hIL-3 The The restriction fragment was ligated and the ligation reaction mixture was used to The K-12 strain JM101 was transformed. Ampicile Transformant Bacteria Selected on phosphorus-containing plates. The clone containing the correct insert is further DdeI Site, which is comparable to 973 base pairs in pMON13344, This produces a DdeI restriction fragment of 806 and 167 base pairs. Correct insert The DNA was sequenced to confirm The obtained (15-125) hIL- The 3 mutants have the following amino acid substitutions 181, 25H, 29R, 32N, 37P, 42 S, 45M, 51R, 55T, 59L, 62V, 67H and 69E. The codons encoding amino acids 15-71 of (15-125) hIL-3 are amino acids. With the codons found in the hIL-3 cDNA sequence, except at the positions where no acid substitutions were made. is there. Plasmid. pMON13364 has the following amino acid sequence (15- 125) encodes a hIL-3 variant.   Peptide # 16   DNA sequence # 21 [SEQ ID NO: 117] is the above pMON13364 polypep Code Chid.                                 Example 26   Construction of pMON13365   The plasmid pMON13346 DNA is erased with the restriction enzymes NsiI and EcoRV. Was ligated to obtain a 4218 base pair NsiI, EcoRV fragment. pMON The genetic element derived from 13346 is β-lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, pAraBAD promoter, g101, ribosome binding site, lamB secretory gene Amino acids 15-46 and 72 of (15-125) hIL-3 It is a base encoding ~ 125. Plasmid pMON13347 DNA , NsiI and EcoRV. The resulting 71 base pair NsiI, EcoR The V fragment encodes amino acids 47-71 of (15-125) hIL-3. You The The restriction fragment was ligated and the ligation reaction mixture was used to The K-12 strain JM101 was transformed. Ampicile Transformant Bacteria Selected on phosphorus-containing plates. The clone containing the correct insert is further DdeI Contains a site, which corresponds to 973 base pairs in pMON13344 Yields a DdeI restriction fragment of 806 and 167 base pairs. Correct insertion DNA was sequenced to confirm entry. Obtained (15-125) h The IL-3 variant has the following amino acid substitutions 181, 25H, 29V, 32A, 37: S, 42S, 45M, 51R, 55L, 59L, 62V, 67N and 69E Have. (15-125) Codons encoding amino acids 15-71 of hIL-3 Is found in the hIL-3 cDNA sequence except at the position where the amino acid substitution was made It is a codon. The plasmid, pMON13365, has the following amino acid sequence It encodes the (15-125) hIL-3 variant.   Peptide # 17   DNA sequence # 22 [SEQ ID NO: 118] is the above-mentioned pMON13365 polypep Code Chid.                                 Example 27   Construction of pMON13298   The plasmid pMON5978 DNA was digested with restriction enzymes NsiI and HindIII. so Digestion yielded a 3789 base pair NsiI, HindIII fragment. pMO The gene element derived from N5978 includes β-lactamase gene (AMP) , The origin of pBR327 replication, the origin of phage f1 replication as a transcription terminator ． precA promoter, g10L ribosome binding site and (15-125 ) There are bases encoding amino acids 15-71 of hIL-3. Plasmid pMO N13360 DNA was digested with NsiI and HindIII. Got 1 The 75 base pair NsiI, HindIII fragment is (15-125) hIL -3 of amino acids 72-125. You can ligate the restriction fragment and The gation reaction mixture was used to transform E. coli K-12 strain JM101. ． Transformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. Plastic Smid DNA was isolated and analyzed by restriction analysis and sequenced to determine the correct insert. It was confirmed. The obtained (15-125) hIL-3 mutant had the following amino acid sequence: Conversion 73G, 76A, 79R, 82Q, 87S, 93S, 981, 101A, 10 5Q, 109E, 116V, 120Q, and 123E. (15-12 5) The codons encoding amino acids 72 to 125 of hIL-3 have amino acid substitutions It is a codon found in the hIL-3 cDNA sequence except at the position where it was made. plus Mid, pMON13298 has the following amino acid sequence (15-125) hI It encodes the L-3 variant.   Peptide # 18   DNA sequence # 29 [SEQ ID NO: 125] is the above pMON13298 polypep Code Chid.                                 Example 28   Construction of pMON13299   The plasmid pMON5978 DNA was digested with restriction enzymes NsiI and HindIII. Digestion with NdI gave a 3789 base pair NsiI, HindIII fragment. pM The genetic elements derived from ON5978 include the β-lactamase gene (AMP ), Origin of pBR327 replication, initiation of phage f1 replication as a transcription terminator. Source, precA promoter, g10L ribosome binding site and (15-12 5) There are bases encoding amino acids 15-71 of hIL-3. Plasmid pM ON13361 DNA was digested with NsiI and HindIII. Got The 175 base pair NsiI, HindIII fragment is (15-125) hI. It encodes amino acids 72 to 125 of L-3. Ligate the restriction fragment, The ligation reaction mixture was used to transform E. coli K-12 strain JM101. It was. Transformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. The Lasmid DNA was isolated, analyzed by restriction analysis, sequenced and correct inserted I confirmed my body. The obtained (15-125) hIL-3 mutant had the following amino acid sequence: Replacement 73G, 76A, 79R, 82V, 87S, 93S, 98T, 101A, 1 05Q, 109E, 116V, 120Q, and 123E. (15-1 25) The codons encoding amino acids 72 to 125 of hIL-3 have amino acid substitutions. Is a codon found in the hIL-3 cDNA sequence except for the positions where Plastic Sumid, pMON13299 has the following amino acid sequence (15-125) h It encodes an IL-3 variant.   Peptide # 19   DNA sequence # 30 [SEQ ID NO: 126] is the above pMON13299 polypep Code Chid.                                 Example 29   Construction of pMON13300   The plasmid pMON5978 DNA was digested with restriction enzymes NsiI and HindIII. Digestion with NdI gave a 3789 base pair NsiI, HindIII fragment. pM The genetic elements derived from ON5978 include the β-lactamase gene (AMP ), Origin of pBR327 replication, initiation of phage f1 replication as a transcription terminator. Source, precA promoter, g10L ribosome binding site and (15-12 5) There are bases encoding amino acids 15-71 of hIL-3. Plasmid pM ON13362 DNA was digested with NsiI and HindIII. Got The 175 base pair NsiI, HindIII fragment is (15-125) hI. It encodes amino acids 72 to 125 of L-3. Ligate the restriction fragment, The ligation reaction mixture was used to transform E. coli K-12 strain JM101. It was. Transformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. The Lasmid DNA was isolated, analyzed by restriction analysis, sequenced and correct inserted I confirmed my body. The obtained (15-125) hIL-3 mutant had the following amino acid sequence: Replacement 73G, 76A, 79R, 82V, 87S, 93S, 98T, 101A, 1 05Q, 109E, 116V, 117S, 120H, and 123E. The codons encoding amino acids 72 to J25 of (15-125) hIL-3 are With the codon found in the hIL-3 cDNA sequence except at the position where the mino acid substitution was made. is there. The plasmid, pMON13300, has the following amino acid sequence (15- 125) encodes a hIL-3 variant.   Peptide # 20   DNA sequence # 31 [SEQ ID NO: 127] is the above pMON13300 polypep Code Chid.                                 Example 30   Construction of pMON13301   The plasmid pMON5978 DNA was digested with the restriction enzymes NcoI and NsiI. Digestion yielded a 3794 base pair NcoI, NsiI fragment. pMON The genetic element derived from 5978 is β-lactamase gene (AMP), p Origin of BR327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, p recA promoter, g10L ribosome binding site and (15-125) h It is a base encoding amino acids 72 to 125 of IL-3. Plasmid pMON The DNA of 13363 was digested with NcoI and NsiI. 170 salt obtained The base pair NcoI, NsiI fragment is the amino acid of (15-125) hIL-3. Acids 15-71 are coded. Ligation of restriction fragments and ligation reaction The mixture was used to transform E. coli K-12 strain JM101. Transform Cloaked bacteria were selected on plates containing ampicillin. Plasmid DNA Separated, analyzed by restriction analysis and sequenced to confirm the correct insert. Got The (15-125) hIL-3 mutant obtained was the following amino acid substitution, 181,25 H, 29R, 32A, 37P, 42A, 45V, 51R, 55L, 60S, 62 V, 67N and 69E. (15-125) hIL-3 amino acid 15 The codons encoding ~ 71 are hIL-3 except at the positions where amino acid substitutions were made. It is a codon found in the cDNA sequence. The plasmid, pMON13301, is It encodes a (15-125) hIL-3 variant with the amino acid sequence below.   Peptide # 21   DNA sequence # 26 [SEQ ID NO: 122] is the above pMON13301 polypep Code Chid.                                 Example 31   Construction of pMON13302   The plasmid pMON5978 DNA was digested with the restriction enzymes NcoI and NsiI. Digestion yielded a 3794 base pair NcoI, NsiI fragment. pMON The genetic element derived from 5978 is β-lactamase gene (AMP), p Origin of BR327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, p recA promoter, g10L ribosome binding site and (15-125) h It is a base encoding amino acids 72 to 125 of IL-3. Plasmid pMON The DNA of 13364 was digested with NcoI and NsiI. 170 salt obtained The base pair NcoI, NsiI fragment is the amino acid of (15-125) hIL-3. Acids 15-71 are coded. Ligation of restriction fragments and ligation reaction The mixture was used to transform E. coli K-12 strain JM101. Transform Cloaked bacteria were selected on plates containing ampicillin. Plasmid DNA Separated, analyzed by restriction analysis and sequenced to confirm the correct insert. Got The (15-125) hIL-3 mutant obtained was the following amino acid substitution, 181,25 H, 29R, 32N, 37P, 42S, 45M, 51R, 55T, 59L, 62 V, 67H and 69E. (15-125) hIL-3 amino acid 15 The codons encoding ~ 71 are hIL-3 except at the positions where amino acid substitutions were made. It is a codon found in the cDNA sequence. The plasmid, pMON13302, is as follows Encoding a (15-125) hIL-3 variant having the amino acid sequence of.   Peptide # 22   DNA sequence # 27 [SEQ ID NO: 123] is the above pMON13302 polypep Code Chid.                                 Example 32   Construction of pMON13303   The plasmid pMON5978 DNA was digested with the restriction enzymes NcoI and NsiI. Digestion yielded a 3794 base pair NcoI, NsiI fragment. pMON The genetic element derived from 5978 is β-lactamase gene (AMP), p Origin of BR327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, p recA promoter, g10L ribosome binding site and (15-125) h It is a base encoding amino acids 72 to 125 of IL-3. Plasmid pMON The DNA of 13365 was digested with NcoI and NsiI. 170 salt obtained The base pair NcoI, NsiI fragment is the amino acid of (15-125) hIL-3. Acids 15-71 are coded. Ligation of restriction fragments and ligation reaction The mixture was used to transform E. coli K-12 strain JM101. Transform Cloaked bacteria were selected on plates containing ampicillin. Plasmid DNA Separated, analyzed by restriction analysis and sequenced to confirm the correct insert. Got The (15-125) hIL-3 mutant obtained was the following amino acid substitution, 181,25 H, 29V, 32A, 37S, 42S, 45M, 51R, 55L, 59L, 62 V, 67N and 69E. (15-125) hIL-3 amino acid 15 The codons encoding ~ 71 are hIL-3c except for the positions where amino acid substitutions are made. It is a codon found in a DNA sequence. The plasmid, pMON13303 is It encodes a (15-125) hIL-3 variant having an amino acid sequence.   Peptide # 23   DNA sequence # 28 [SEQ ID NO: 124] is the above pMON13303 polypep Code Chid.                                 Example 33   Construction of pMON13287   The DNA of the plasmid pMON2341 was digested with the restriction enzymes NcoI and HindIII. Digestion with N.coli gave a 3619 base pair NcoI, HindIII fragment. pM A genetic element derived from ON2341 is a β-lactamase gene (AMP) , PBR327 origin of replication. Origin of phage f1 replication as a transcription terminator , PrecA promoter and g10L ribosome binding site. Plastic DNA of pMON13363 was digested with NcoI and NsiI. Got The resulting 170 base pair NcoI, NsiI fragment was (15-125) hIL- It encodes 3 amino acids 15-71. DNA of plasmid pMON13360 Was digested with NsiI and HindIII. 175 base pairs of Ns obtained The iI, HindIII fragment is amino acid 72 of (15-125) hIL-3. Code ~ 125. Ligate restriction fragments and mix ligation reaction E. coli K-12 strain JM101 was transformed with the product. Transform man Bacteria were selected on plates containing ampicillin. Isolate the plasmid DNA They were then analyzed by restriction analysis and sequenced to confirm the correct insert. Got The (15-125) hIL-3 variant has the following amino acid substitutions: 181, 25H, 29R, 32A, 37P, 42A, 45V, 51R, 55L, 60S, 62V, 67N, 69E, 73G, 76A, 79R, 82Q, 87S, 93S, 981, Having 101A, 105Q, 109E, 116V, 120Q, and 123E ． The codons encoding amino acids 15-125 of (15-125) hIL-3 are: Codons found in the hIL-3 cDNA sequence except at the positions where amino acid substitutions were made Is. The plasmid, pMON13287, has the following amino acid sequence (15 -125) encodes a hIL-3 variant.   Peptide # 24   DNA sequence # 1 [SEQ ID NO: 97] is the pMON13287 polypeptide described above. Code                                 Example 34   Construction of pMON13288   The DNA of the plasmid pMON2341 was digested with the restriction enzymes NcoI and HindIII. Digestion with N.coli gave a 3619 base pair NcoI, HindIII fragment. pM A genetic element derived from ON2341 is a β-lactamase gene (AMP) , The origin of pBR327 replication, the origin of phage f1 replication as a transcription terminator , PrecA promoter and g10L ribosome binding site. Plastic The DNA of pMON13364 was digested with NcoI and NsiI. Profit The resulting 170 base pair NcoI, NsiI fragment was (15-125) hIL -3 encoding amino acids 15-71. DN of plasmid pMON13360 A was digested with NsiI and HindIII. The resulting 175 base pair NsiI, H The indIII fragment is amino acids 72-125 of (15-125) hIL-3. Code Ligate restriction fragments and use ligation reaction mixture Then, Escherichia coli K-12 strain JM101 was transformed. Transformant bacteria Were selected on plates containing ampicillin. Isolate plasmid DNA and It was analyzed by analysis and sequenced to confirm the correct insert. Obtained (15- 125) hIL-3 variants have the following amino acid substitutions 181,25H, 29R, 32 N, 37P, 42S, 45M, 51R, 55T, 59L, 62V, 67H, 69 E, 73G, 76A, 79R, 82Q, 87S, 93S, 981, 101A, 1 05Q, 109E, 116V, 120Q, and 123E. (15-125) h Amino acid substitutions were made in the codons encoding amino acids 15-125 of IL-3. The codons found in the hIL-3 cDNA sequence except for the Plasmid, pMON13288 has the following amino acid sequence (15-125) hIL-3 It encodes a variant.   Peptide # 25   DNA sequence # 4 [SEQ ID NO: 100] is the pMON13288 polypeptide described above. Code the code.                                 Example 35   Construction of pMON13289   The DNA of the plasmid pMON2341 was digested with the restriction enzymes NcoI and HindIII. Digestion with N.coli gave a 3619 base pair NcoI, HindIII fragment. pM A genetic element derived from ON2341 is a β-lactamase gene (AMP) , Origin of pBR327 replication, Origin of phage f1 replication as transcription terminator Source, the precA promoter and the g10L ribosome binding site. plus The DNA of the mid pMON13365 was digested with NcoI and NsiI. Profit The resulting 170 base pair NcoI, NsiI fragment was (15-125) hIL -3 encoding amino acids 15-71. DN of brassmid pMON13360 A is Digested with NsiI and HindIII. The resulting 175 base pair NsiI , HindIII fragment is amino acids 72 to 1 of (15-125) hIL-3 Code 25. Ligate the restriction fragments and add the ligation reaction mixture It was used to transform E. coli K-12 strain JM101. Transformant Bacteria were selected on plates containing ampicillin. Isolate and control plasmid DNA It was analyzed by restriction analysis and sequenced to confirm the correct insert. Obtained (1 The 5-125) hIL-3 variant has the following amino acid substitutions: 18I, 25H, 29 V, 32A, 37S, 42S, 45M, 51R, 55L, 59L, 62V, 67 N, 69E, 73G, 76A, 79R, 82Q, 87S, 93S, 981, 10 1A, 105Q, 109E, 116V, 120Q, and 123E. ( 15-125) The codons encoding amino acids 15-125 of hIL-3 are It is a codon found in the hIL-3 cDNA sequence except at the position where no acid substitution was made. The The plasmid, pMON13289, has the following amino acid sequence (15-1 25) encodes a hIL-3 variant.   Peptide # 26   DNA sequence # 7 [SEQ ID NO: 103] is the above-mentioned pMON13289 polypeptide. Code the code.                                 Example 36   Construction of pMON13290   The DNA of the plasmid pMON2341 was digested with the restriction enzymes NcoI and HindIII. Digestion with N.coli gave a 3619 base pair NcoI, HindIII fragment. pM A genetic element derived from ON2341 is a β-lactamase gene (AMP) , Origin of pBR327 replication, Origin of phage f1 replication as transcription terminator Source, the precA promoter and the g10L ribosome binding site. plus The DNA of the mid pMON13363 was digested with NcoI and NsiI. Profit The resulting 170 base pair NcoI, NsiI fragment was (15-125) hIL -3 encoding amino acids 15-71. DN of plasmid pMON13361 A was digested with NsiI and HindIII. 175 base pairs of Ns obtained The iI, HindIII fragment is amino acid 72 of (15-125) hIL-3. Code ~ 125. Ligate restriction fragments and mix ligation reaction E. coli K-12 strain JM101 was transformed with the product. Transform man Bacteria were selected on plates containing ampicillin. Isolate the plasmid DNA They were then analyzed by restriction analysis and sequenced to confirm the correct insert. Got The (15-125) hIL-3 variant has the following amino acid substitutions, 18I, 25H, 29R, 32A, 37P, 42A, 45V, 51R, 55L, 60S, 62V, 67N, 69E, 73G, 76A, 79R, 82V, 87S, 93S, 98T, Having 101A, 105Q, 109E, 116V, 120Q, and 123E ． The codons encoding amino acids 15-125 of (15-125) hIL-3 are: Codons found in the hIL-3 cDNA sequence except at the positions where amino acid substitutions were made Is. The plasmid, pMON13290, has the following amino acid sequence (15 -125) encodes a hIL-3 variant.   Peptide # 27   DNA sequence # 2 [SEQ ID NO: 98] is the pMON13290 polypeptide described above. Code                                 Example 37   Construction of pMON13292   The DNA of the plasmid pMON2341 was digested with the restriction enzymes NcoI and HindIII. Digestion with N.coli gave a 3619 base pair NcoI, HindIII fragment. pM A genetic element derived from ON2341 is a β-lactamase gene (AMP) , Origin of pBR327 replication, Origin of phage f1 replication as transcription terminator Source, the precA promoter and the g10L ribosome binding site. plus The DNA of the mid pMON13365 was digested with NcoI and NsiI. Profit The resulting 170 base pair NcoI, NsiI fragment was (15-125) hIL -3 encoding amino acids 15-71. DN of plasmid pMON13361 A was digested with NsiI and HindIII. 175 base pairs of Ns obtained The iI, HindIII fragment is amino acid 72 of (15-125) hIL-3. Code ~ 125. Ligate restriction fragments and mix ligation reaction E. coli K-12 strain JM101 was transformed with the product. Transform man Bacteria were selected on plates containing ampicillin. Isolate the plasmid DNA , And analyzed by restriction analysis and sequenced to confirm the correct insert. Got The (15-125) hIL-3 variant has the following amino acid substitutions, 18I, 25H, 29V, 32A, 37S, 42S, 45M, 51R, 55L, 59L, 62V, 67N, 69E, 73G, 76A, 79R, 82V, 87S, 93S, 98T, Having 101A, 105Q, 109E, 116V, 120Q, and 123E ． The codons encoding amino acids 15-125 of (15-125) hIL-3 are: Amino acid storage It is a codon found in the hIL-3 cDNA sequence except at the position where the substitution was performed. The Rasmid, pMON13292 has the following amino acid sequence (15-125) encodes a hIL-3 variant.   Peptide # 28   DNA sequence # 8 [SEQ ID NO: 104] is the pMON13292 polypeptide described above. Code the code.                                 Example 38   Construction of pMON13294   The DNA of the plasmid pMON2341 was digested with the restriction enzymes NcoI and HindIII. Digestion with N.coli gave a 3619 base pair NcoI, HindIII fragment. pM A genetic element derived from ON2341 is a β-lactamase gene (AMP) , Origin of pBR327 replication, Origin of phage f1 replication as transcription terminator Source, the precA promoter and the g10L ribosome binding site. plus The DNA of the mid pMON13364 was digested with NcoI and NsiI. Profit The resulting 170 base pair NcoI, NsiI fragment was (15-125) hIL -3 encoding amino acids 15-71. DN of plasmid pMON13362 A was digested with NsiI and HindIII. 175 base pairs of Ns obtained The iI, HindIII fragment is amino acid 72 of (15-125) hIL-3. ~ 125 Code Ligate restriction fragments and use ligation reaction mixture Then, Escherichia coli K-12 strain JM101 was transformed. Transformant bacteria Were selected on plates containing ampicillin. Isolate plasmid DNA and It was analyzed by analysis and sequenced to confirm the correct insert. Obtained (15- 125) hIL-3 variants have the following amino acid substitutions: 18I, 25H, 29R, 32N, 37P, 42S, 45M, 51R, 55T, 59L, 62V, 67H, 69E, 73G, 76A, 79R, 82V, 87S, 93S, 98T, 101A , 105Q, 109E, 116V, 117S, 120H and 123E ． The codons encoding amino acids 15-125 of (15-125) hIL-3 are: Codons found in the hIL-3 cDNA sequence except at the positions where amino acid substitutions were made Is. The plasmid, pMON13294, has the following amino acid sequence (15 -125) encodes a hIL-3 variant.   Peptide # 29   DNA sequence # 6 [SEQ ID NO: 102] is the above-mentioned pMON13294 polypeptide. Code the code.                                 Example 39   Construction of pMON13295   The DNA of the plasmid pMON2341 was digested with the restriction enzymes NcoI and HindIII. so Digestion yielded a 3619 base pair NcoI, HindIII fragment. pMO Genetic elements derived from N2341 are β-lactamase gene (AMP), Origin of pBR327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator , PrecA promoter and g10L ribosome binding site. Plastic DNA of pMON13365 was digested with NcoI and NsiI. Got The resulting 170 base pair NcoI, NsiI fragment was (15-125) hIL- It encodes 3 amino acids 15-71. DNA of plasmid pMON13362 Was digested with NsiI and HindIII. The resulting 175 base pair Nsi I, HindIII fragment is from amino acid 72 of (15-125) hIL-3 Code 125. Ligation reaction mixture for ligating restriction fragments Was used to transform E. coli K-12 strain JM101. Transformants Bacteria were selected on plates containing ampicillin. Isolate the plasmid DNA, It was analyzed by restriction analysis and sequenced to confirm the correct insert. Obtained ( 15-125) hIL-3 mutant has the following amino acid substitutions: 181, 25H, 2 9V, 32A, 37S, 42S, 45M, 51R, 55L, 59L, 62V, 6 7N, 69E, 73G, 76A, 79R, 82V, 87S, 93S, 98T, 1 01A, 105Q, 109E, 116V, 117S, 120H and 123E Have. (15-125) Code encoding amino acids 15 to 125 of hIL-3 Is found in the hIL-3 cDNA sequence except at positions where amino acid substitutions have been made It is a codon. The plasmid, pMON13295, has the following amino acid sequence It encodes the (15-125) hIL-3 variant.   Peptide # 30   DNA sequence # 9 [SEQ ID NO: 105] is the pMON13295 polypeptide described above. Code the code.                                 Example 40   Construction of pMON13312   The DNA of the plasmid pMON2341 was digested with the restriction enzymes NcoI and HindIII. Digestion with N.coli gave a 3619 base pair NcoI, HindIII fragment. pM The genetic element derived from ON2341 is a β-lactamase gene (AMP) , Origin of pBR327 replication, Origin of phage f1 replication as transcription terminator Source, the precA promoter and the g10L ribosome binding site. plus The DNA of the mid pMON13364 was digested with NcoI and NsiI. Profit The resulting 170 base pair NcoI, NsiI fragment was (15-125) hIL -3 encoding amino acids 15-71. DN of plasmid pMON13361 A was digested with NsiI and HindIII. 175 base pairs of Ns obtained The iI, HindIII fragment is amino acid 72 of (15-125) hIL-3. Code ~ 125. Ligate restriction fragments and mix ligation reaction E. coli K-12 strain JM101 was transformed with the product. Transform man Bacteria were selected on plates containing ampicillin. Isolate the plasmid DNA They were then analyzed by restriction analysis and sequenced to confirm the correct insert. Got The (15-125) hIL-3 variant has the following amino acid substitutions, 18I, 25H, 29R, 32N, 37P, 42S, 45M, 51R, 55T, 59L, 62V, 67H, 69E, 73G, 76A, 79R, 82V, 87S, 93S, 98T, Having 101A, 105Q, 109E, 116V, 120Q, and 123E ． The codons encoding amino acids 15-125 of (15-125) hIL-3 are: Codons found in the hIL-3 cDNA sequence except at the positions where amino acid substitutions were made Is. The plasmid, pMON13312, has the following amino acid sequence (15 -125) encodes a hIL-3 variant.   Peptide # 31   DNA sequence # 5 [SEQ ID NO: 101] is the pMON13312 polypeptide described above. Code the code.                                 Example 41   Construction of pMON13313   The DNA of the plasmid pMON2341 was digested with the restriction enzymes NcoI and HindIII. Digestion with N.coli gave a 3619 base pair NcoI, HindIII fragment. pM The genetic element derived from ON2341 is a β-lactamase gene (AMP) , Origin of pBR327 replication, Origin of phage f1 replication as transcription terminator Source, the precA promoter and the g10L ribosome binding site. plus The DNA of the mid pMON13363 was digested with NcoI and NsiI. Profit The resulting 170 base pair NcoI, NsiI fragment was (15-125) hIL -3 encoding amino acids 15-71. DN of plasmid pMON13362 A was digested with NsiI and HindIII. 175 base pairs of Ns obtained The iI, HindIII fragment is amino acid 72 of (15-125) hIL-3. Code ~ 125. Ligate restriction fragments and mix ligation reaction E. coli K-12 strain JM101 was transformed with the product. Transform man Bacteria Were selected on plates containing ampicillin. Isolate plasmid DNA and It was analyzed by analysis and sequenced to confirm the correct insert. Obtained (15- 125) hIL-3 variants have the following amino acid substitutions: 18I, 25H, 29R, 32A, 37P, 42A, 45V, 51R, 55L, 60S, 62V, 67N, 69E, 73G, 76A, 79R, 82V, 87S, 93S, 98T, 101A , 105Q, 109E, 116V, 117S, 120H and 123E ． The codons encoding amino acids 15-125 of (15-125) hIL-3 are: Codons found in the hIL-3 cDNA sequence except at the positions where amino acid substitutions were made Is. The plasmid, pMON13313, has the following amino acid sequence (15 -125) encodes a hIL-3 variant.   Peptide # 32   DNA sequence # 3 [SEQ ID NO: 99] is the pMON13313 polypeptide described above. Code                                 Example 42   Construction of pMON5987   The DNA of the plasmid pMON6458 was digested with the restriction enzymes NcoI and HindIII. Digestion with NcoI, HindIII fragment of 3940 base pairs was obtained. pM The genetic element derived from ON6458 is β-lactamase gene (AMP) , P Origin of BR327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, pAraBAD promoter, g10L ribosome binding site and lamB secretion The leader. Plasmid pMON5978DNA contains NcoI and NsiI. Digested with. The resulting 170 base pair NcoI, NsiI fragment was (15- 125) encodes amino acids 15-71 of hIL-3. Plasmid, pMON The DNA of 5976 was digested with NsiI and HindIII. Obtained 17 The 5 base pair NsiI, HindIII fragment is (15-125) hIL-3. Encoding amino acids 72-125 of. Regate the restriction fragment and ligate The reaction mixture was used to transform E. coli K-12 strain JM101. Trang Sformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. Plasmid D NA was isolated and screened for restriction sites EcoRV and NheI. Then, the DNA sequence was determined to confirm the correct insert.                                 Example 43   Construction of pMON5988   pMON5987 plasmid DNA was digested with NheI and EcoRI A 3903 base pair NheI, EcoRI fragment was obtained. This 3903 The base pair NheI, EcoRI fragment was annealed to the following annealed oligonucleotides: Cletide was ligated to 1.0 pmol.   E. coli K-12 strain JM101 was transformed with the ligation reaction mixture. , Transformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. The Rasmid DNA was isolated and positive clones were confirmed by sequencing. This plus Mido asparagines alanine 101 in the hIL-3 gene (15-125). Built to convert to acid. This plasmid was named pMON5988 It was.                                 Example 44   PMO encoding [Met- (15-133) hIL-3 (Arg 129)] the Construction of N5853 (Fig. 6)   Plasmid DNA of pMON5847 (FIG. 2) was treated with NcoI. Limited fermentation The element was inactivated by heat treatment (65 ° C, 10 minutes). Next, DNA Large amounts of DNA polymerase I (Klenow) in the presence of all nucleotide precursors Treated with fragments. This produces DNA ends with non-overlapping ends. 37 After incubating at ℃ for 5 minutes, heat treatment at 65 ℃ for 10 minutes to inactivate the polymerase. It was. The DNA was then treated with HpaI, an enzyme that produces non-overlapping ends. DNA It was precipitated with ethanol and ligated. The ligation reaction mixture was used to Pietent JM101 cells were transformed to ampicillin resistance. Colony Harvested and analyzed for plasmid DNA by restriction analysis. pMON5853 and life The named plasmid has a deletion of the 14 amino-terminal codons of the hIL-3 gene. Were identified as containing genes. (15-133) hIL- at the ribosome binding site The DNA sequence at the junction to the three genes was determined as follows.   The lower sequence depends on the amino-terminal coding sequence of the 15-133 hIL-3 gene. The one-letter code of the amino acid specified by These are methionine and asparagus. Gin, cysteine, serine and asparagine.   Induction of JM101 cell culture harboring this plasmid with nalidixic acid Then, hIL-3 (15-133) showed higher levels than hIL-3 (pMON5847). It was found to accumulate on the bell.   The plasmid, pMON5853, has the following amino acid sequence Met- (15 -133) hIL-3 (Arg129) Is coded.                                 Example 45   Construction of pMON5873 encoding [Met- (1-133) hIL-3]   British Biotechnology, Ltd. Genes obtained from Had codon position 129 designated arginine. Native hIL-3 The amino acid specified in the cDNA is serine. Native to this position To produce a protein having a sequence, at codons 106 and 107 Of the coding sequence between the EcoRI site and the NheI sites of codons 129 and 130. Replaced the part. Plasmid DNA of pMON5854 (Example 3) and pMON The plasmid DNA of 5853 (Example 44) was treated with EcoRI and NheI. It was. Each larger fragment was gel purified. These are the following arrays Was ligated to the pair of annealed oligonucleotides that had.   Amperate competent JM101 cells using the ligation reaction mixture. It was transformed to sillin resistance. Colonies were picked into the medium and grown. plus Mid DNA was isolated and present in synthetic DNA, but pMON5854 and pMON5854 The existence of a new StyI recognition site, which does not exist in MON5853, is screened. I learned. Nucleotide of the gene in the region between EcoRI and NheI The sequence was determined and found to be the sequence of the synthetic oligonucleotide. The new plasmid is a plasmid encoding [Met- (1-133) hIL-3]. Smid codes for pMON5873, [Met- (15-133) hIL-3] The resulting plasmid was named pMON5872.   The plasmid, pMON5873, has the following amino acid sequence [Met- (1- 133) hIL-3].                                 Example 46   Construction of pMON6458   The plasmid pMON6525 was digested with the restriction enzymes HindIII and SalI. , The resulting 3172 base pair fragment was intersected from a 1% agarose gel. Isolated on the DEAE membrane. The remains derived from pMON6525 The gene element is the β-lactamase gene (AMP), the origin of pBR327 replication, and And the origin of phage f1 replication as a transcription terminator (plasmid, The genetic elements derived from pMON6525 were also used in the construction of pMON6458. Identical to the genetic elements in the available plasmid pMON2341). Plastic Smid pMON6457 was obtained by digesting with restriction enzymes HindIII and SalI. The resulting 1117 base pair fragment was subjected to PAGE and milling and immersion elution. Isolated. Genetic elements derived from pMON6457 are pAraBAD pro Motor, g10L ribosome binding site, lamB secretion leader, and (1 5-125) hIL-3 gene. Regate the restriction fragment and ligate The reaction mixture was used to transform E. coli K-12 strain JM101. Trang Sformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. Plasmid D Isolation of NA and restriction solution using double digestion of restriction enzymes NcoI and HindIII The size of the inserted fragment was measured by analysis. hIL-3 gene ( A clone containing amino acids 15-125) is 345 base pairs NcoI, Hi. It contained the ndIII restriction fragment. This construct was named pMON6458. It was. This plasmid is located outside the hIL-3 gene coding region within pMON6457. It was constructed to eliminate flanking EcoRI restriction sites.                                 Example 47   [PMON that encodes Met- (15-125) hIL-3 (Ala 101 ). Build 5976   dam-pMON5941 plasmid DNA isolated from E. coli strain GM48 Is cleaved with ClaI and NsiI, encoding amino acids 20-70 of hIL-3. An annealed assembly of 6 oligonucleotides (Fig. 2), It was ligated to 1 picomole. This synthetic fragment contains three unique restriction sites, It encodes EcoRV, XhoI and PstI. These oligonuclides The sequence of Ochid is shown in Fig. 2.   Competent E. coli JM101 cells using the resulting ligation mixture Was transformed into an ampicillin resistant colony. Isolate the plasmid DNA, Determine that the inserted fragment has both EcoRV and NheI sites. Fixed. Determining the nucleotide sequence of the region between ClaI and NsiI, which Was found to be a sequence of synthetic nucleotides. (15-125) hIL- A NheI site was introduced at codons 86-87 of the nucleotide sequence encoding 3 It was. The plasmid with this change was named pMON5941. This plasm Met changed by substitution of aspartic acid at position 101 with alanine -(15-125) encodes hIL-3.   The plasmid pMON5976 contains Met- (15 -125) hIL-3 (Ala101) Is coded.                                 Example 48   Construction of pMON5917 encoding [Met- (15-88) hIL-3]   pMON5853 plasmid DNA was cut with NsiI and HindIII , With a new NheI endonuclease restriction site at codons 86-87 (70 -88) ligated to the annealed oligonucleotide pair encoding hIL-3. I started. The sequences of these oligonucleotides are shown in Example 18.   Transformation of competent E. coli JM101 cells with the ligation mixture Then, the colonies resistant to ampicillin were collected. Isolated from individual colonies Screened plasmid DNA for the presence of a new NheI restriction site. It was. Determine the nucleotide sequence of this substitution, which is the synthetic nucleotide sequence. It was found that Contains a new NheI site at this codon 86-87 A new plasmid encoding Met- (15-88) hIL-3 is pMON. It was named 5917.   The plasmid pMON5917 has the following amino acid sequence Met- (15- 88) encodes hIL-3.                                 Example 49   [PMON that encodes Met- (15-125) hIL-3 (Ala 101 ). Construction of 5941   The plasmid DNA of pMON5917 was cut with NheI and HindIII , HIL-3 encoding amino acids 86-106 and 107-125 Ligated to annealed oligonucleotide pairs. These oligonucs The sequence of reotide is shown below. NheI ~ EcoRI EcoRI ~ HindIII   Ampire competent E. coli JM101 cells using the ligation mixture. It was transformed into a sillin-resistant colony. Plasmid DNA from these cells Fractions isolated and inserted by restriction analysis with NheI and HindIII The size of the cement was determined to be larger. Asp to Ala 101 The changes are encoded on the NheI-HindIII fragment. NheI And the nucleotide sequence of the part of the coding region between the HindIII site and We found that this is a sequence of synthetic nucleotides. This new plasmid is p It was named MON5941.   This plasmid, pMON5941, contains Met- (15-125) hIL-3. (Ala101), And contains a new NheI restriction site.                                 Example 50   Construction of pMON6455   The plasmid pMON5905 was digested with the restriction enzymes HindIII and NcoI. , 3936 base pair fragment was obtained. Inheritance derived from pMON5905 Child elements are β-lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, pAr aBAD promoter, g10L ribosome binding site, lamB secretion leader And is the origin of phage f1 replication as a transcription terminator. pMON590 The following genetic elements derived from 5, β-lactamase gene (AMP), pB Origin of R327 replication, g10L ribosome binding site and transcription terminator The origin of phage f1 replication in E. coli was the same as in plasmid pMON5594. , This plasmid could also be used to construct pMON6455. pAraBAD B The motor is identical to the promoter described in relation to pMON6235. The lamB signal peptide sequence used in pMON6455 has the NcoI part It is the sequence shown in Figure 8 fused to hIL-3 (15-125) at position. plus Digestion of pmid5887 with restriction enzymes HindIII and NcoI gave 38 A 4 base pair NcoI, HindIII fragment was obtained. Restrict fragment Gating and using the ligation reaction mixture to transform E. coli K-12 strain JM101 It was converted. Select transformant bacteria on plates containing ampicillin It was. Isolate plasmid DNA and use restriction enzymes NcoI and HindIII The size of the inserted fragment was determined by double digestion restriction analysis. hIL Positive clone containing -3 gene (coding amino acids 1-125) is 384 salt. It contained the base pair NcoI, HindIII restriction fragment. This construct is pM It was named ON6455.                                 Example 51   Construction of pMON6456   The plasmid pMON5905 was digested with the restriction enzymes HindIII and NcoI. , 3936 base pair fragment was obtained. Inheritance derived from pMON5905 The child elements are β-lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, transcription Origin of phage f1 replication as a terminator, pAraBAD promoter, g10L ribosome binding site, and lamB secretion leader. Plasmid pMON5871 was digested with restriction enzymes HindIII and NcoI to give 330 bases. A pair of NcoI and HindIII fragments were obtained. Inheritance from pMON5871 The child element includes a base encoding the (1-107) hIL-3 gene. System Ligated the restriction fragment and used the ligation reaction mixture to transform E. coli K-12. Strain JM101 was transformed. Ampicillin containing transformant bacteria Selected on plate. Plasmid DNA was isolated and digested with double restriction enzyme Nco The size of the inserted fragments by restriction analysis with I and HindIII. It was decided. A clone containing the hIL-3 gene (encoding amino acids 1-107) The lawn contained a 330 base pair NcoI, HindIII restriction fragment. This construct was named pMON6456.                                 Example 52   Construction of pMON6457   Of plasmid pMON6455 grown in E. coli strain GM48 (dam-) The DNA was digested with the restriction enzymes NcoI and ClaI to give 4263 base pairs of NcoI, A ClaI fragment was obtained. The restriction fragment was labeled with Met Ala14-20 Annealed oligonucleosides having the following sequences encoding hIL-3 The tide was ligated to 1.0 pmol.   The obtained DNA was transformed into E. coli K-12 strain JM101 and Transformant bacteria were selected on plates containing ampicillin. Plasmid Isolation of DNA and restriction digestion with restriction enzymes XbaI and EcoRI in double digestion The size of the inserted fragment was determined by analysis. hIL-3 gene (h A positive clone containing amino acids 15 to 125 of IL-3) is 433 base pairs. XbaI, EcoRI restriction fragment. This construct is pMON It was named 6457. This plasmid lacks the first 14 amino acids of hIL-3. Built to lose. The coding sequence of the obtained gene begins as follows.   The first two amino acids (methionine, alanine) are lamB signal peptides. And a (15-125) hIL-3 between NcoI restriction site and signal peptidase Create a cleavage site. Plasmid pMON6457 is designated SEQ ID NO: 65. Encoded (15-125) hIL-3 having the amino acid sequence shown in FIG.                                 Example 53   Construction of pMON6235   One of the DNA fragments used to create this plasmid is Using gonucleotides, it is generated by mutation at a specific site in the PCR method described above. I made it. This procedure includes oligo # 51 [SEQ ID NO: 155] and oligo # 51. 52 [SEQ ID NO: 156] was used as a primer. The template for the PCR reaction is Of E. coli strain W3110 prepared as described by Maniatis (1982). Chromosomal DNA was used. Oligonucleotide primers are AraBAD promoted Designed to amplify the target (Greenfield, 1978). Obtained The resulting DNA product was digested with the restriction enzymes SacII and BglII. The reaction mixture was Purified as described above. The DNA of the plasmid pMON5594 was digested with SacII and And BglII, and the following genetic elements, β-lactamase gene (AMP), Origin of pBR327 replication, g10L ribosome binding site, transcription terminator Origin of phage f1 replication, and chloramphenicol acetyl transfer A 4416 base pair SacII, BglII restriction fragment containing the gene for caterase (cat). I got a lagment. 4416 base pairs SacII, BglII from pMON5594 The restriction fragments were PCR-generated SacII and BglII DNA fragments. I ligated. E. coli K-112 strain JM101 was formed using the ligation mixture. The quality has changed. Positive clones contained the 323 base pair SacII, BglII fragment. SacII and BglII fragments were detected by AraBAD promotion in DNA sequencing. It was confirmed that the This construct was named pMON6235.                                 Example 54   Construction of pMON5647   Plasmid pMON5585 [Incorporated herein by reference in its entirety. DNA produced according to the disclosure of EP 0241446), with the restriction enzymes NcoI and After digestion with HindIII, the 3273 base pair NcoI and HindIII fragments were Obtained. The genetic element derived from pMON5585 is the origin of pBR327 replication. , PrecA promoter, g10L ribosome binding protein, bovine somato Lopin gene (bST) site, β-lactamase gene (AMP), and T 7 is a transcription terminator. Plasmid pMON3267 [EP024144 Prepared as disclosed in No. 6 (incorporated herein by reference in its entirety). ] The DNA was digested with NcoI and HindIII to give porcine somatotropin (pST) residue. A 580 base pair NcoI, HindIII fragment containing the gene was obtained. System Restriction fragment and the ligation reaction mixture was used to ligate E. coli strain JM1. 01 was transformed. Transformant bacteria, ampicillin-containing play On the Selected. Plasmid DNA was isolated and analyzed by restriction analysis for sequencing. A more correct insert was confirmed.                                 Example 55   Construction of pMON710   The plasmid pMON709 is 1614 base pairs AvaI of transposon TN7. , An EcoRI fragment, and streptomycin adenylyl tran The spherase gene (Fling et al., 1985) and HindII of pUC19. PUC9 linker (XmaI, Hi cloned between the I and EcoRI sites ndIII). Streptomycin adenylyl transferase inheritance Offspring confer resistance to streptomycin and spectinomycin ． The plasmid pMON709 was mutated at a specific oligonucleotide site (Zol Ler & Smith, 1982). EcoR was added to the 3'end of the streptomycin adenylyltransferase gene. V site was introduced. In order to introduce the EcoRV site by this operation, an oligo Otide, oligo # 53 [SEQ ID NO: 157] was used. The resulting plasmid is It was named pMON710.                                 Example 56   Construction of pMON5723   Plasmid pMON5647 DNA was digested with restriction enzymes DraI and SspI. Digestion yielded a 2916 base pair DraI, SspI fragment. pMON The gene element derived from 5647 is the origin of replication of pBR327, precA Promoter, g10L ribosome binding protein, porcine somatotropin gene (PST), and T7 transcription terminator (Dunn & Strudier, 1983). The DNA of plasmid pMON710 was digested with the restriction enzyme HincII. Digested with EcoRV for streptomycin and spectinomycin Contains the streptomycin adenylyltransferase gene that confers resistance. A 940 base pair HincII, EcORV fragment was obtained. Restricted Fragment GAT to GAC and ATC to ATT, and EcoRV The recognition site was destroyed. This procedure, which eliminates the EcoRV site, requires oligo # 55 [SEQ ID NO: 159] was used. Ampicillin transformants Selected on the containing plate. Plasmid DNA was isolated and analyzed by restriction analysis Confirmed the disappearance of the EcoRV site and sequenced (15-125) hIL-3 The sequence of the mutant gene was confirmed. Plasmid pMON14058 is peptide # 25 (15-125) hIL-3 variant having the amino acid sequence of [SEQ ID NO: 89] Code DNA sequence # 33 [SEQ ID NO: 161] is pMON140 described above. It encodes the 58 polypeptide.                                 Example 59   Construction of pMON13438   The DNA of the plasmid pMON5723 was digested with the restriction enzymes NcoI and HindIII. Digestion was performed to obtain a 3278NcoI, HindIII fragment. pMON57 The gene element derived from 23 is the origin of pBR327 replication, the precA promoter. , G10L ribosome binding protein, T7 transcription terminator and strain The leptomycin adenylyl transferase gene. Plasmid pMO N14058 DNA was digested with NcoI and HindIII to give the following amino acids: Substitution 18I, 25H, 29R, 32N, 37P, 42S, 45M, 51R, 55 T, 59L, 62V, 67H, 69E, 73G, 76A, 79R, 83Q, 87 S, 93S, 98I, 101A, 105Q, 109E, 116V, 120Q and And a 345 base pair NcoI, HindIII fragment with 123E was obtained. ． The restriction fragment was ligated and the ligation reaction mixture was used to M101 was transformed. Transformin bacteria, spectinomycin Selected on the containing plate. Isolate plasmid DNA and analyze by restriction analysis Then, the correct insert was confirmed by sequencing. Plasmid pMON13438 Has the amino acid sequence of peptide # 25 [SEQ ID NO: 89] (15-125) encodes a hIL-3 variant. DNA sequence # 33 [SEQ ID NO: 161] is described above. Encoding the pMON13438 polypeptide of.                                 Example 60   Construction of pMON13285   The DNA of the plasmid pMON13252 is deleted with the restriction enzymes NcoI and EcoRV. It became. The resulting 3669 base pair NcoI, EcoRV fragment is Genetic element, Streptomycin adenylyl transferase gene, pBR Origin of 327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, rec Has an A promoter, g10L ribosome binding site and amino acid substitution 50D (15-125) contains bases encoding amino acids 47 to 125 of hIL-3 The 3669 base pair NcoI, EcoRV fragment from pMON13252 Components were ligated to the following annealed complementary oligonucleotides.   Oligo # 165 [SEQ ID NO: 162]   Oligo # 166 [SEQ ID NO: 163]   Oligo # 167 [SEQ ID NO: 164]   Oligo # 168 [SEQ ID NO: 165]   Oligo # 169 [SEQ ID NO: 166]   Oligo # 170 [SEQ ID NO: 167]   When assembled, these oligonucleotides will have NcoI and EcoRV restriction With ends and the following amino acid substitutions, 42D, 45M, and 46S (15-125) Creation of DNA sequence encoding amino acids 15 to 46 of hIL-3 To make. (15-125) Codons encoding amino acids 15 to 46 of hIL-3 Are found in the hIL-3 cDNA sequence except at the position where the amino acid substitution was made. Is a codon that is used. The plasmid, pMON13285, has the following amino acid sequence: (15-125) hIL-3 mutant.   Peptide # A3 [SEQ ID NO: 258]   DNA sequence # A3 pMON13285 42D, 45M, 46S, 50D                                 Example 61   Construction of pMON13286   Digestion of plasmid pMON5978 DNA with restriction enzymes NcoI and EcoRV did. The resulting 3865 base pair NcoI, EcoRV fragment is shown below. Gene element, β-lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, transcription Origin of phage f1 replication as terminator, precA promoter, g 10L ribosome binding site and amino acids 47 to (15-125) hIL-3 It contains a base encoding 125. 3865 base pairs from pMON5978 The NcoI and EcoRV fragments were combined with the following annealed complementary oligos: It was ligated to nucleotides.   Oligo # 165 [SEQ ID NO: 162]   Oligo # 166 [SEQ ID NO: 163]   Oligo # 167 [SEQ ID NO: 164]   Oligo # 168 [SEQ ID NO: 165]   Oligo # 169 [SEQ ID NO: 166]   Oligo # 170 [SEQ ID NO: 167]   When assembled, these oligonucleotides will have NcoI and EcoRV restriction With ends and the following amino acid substitutions, 42D, 45M, and 46S (15-125) Creation of DNA sequence encoding amino acids 15 to 46 of hIL-3 To make. (15-125) Codons encoding amino acids 15 to 46 of hIL-3 Are found in the hIL-3 cDNA sequence except at the position where the amino acid substitution was made. Is a codon that is used. The plasmid, pMON13286, has the following amino acid sequence: (15-125) hIL-3 mutant.   Peptide # A4 [SEQ ID NO: 259]   DNA sequence # A4 pMON13286 42D, 45M, 46S                                 Example 62   Construction of pMON13325   3704 base pairs EcoRI, HindII from plasmid pMON13286 A 64 base pair Eco from the plasmid pMON13215 with the IDNA fragment Ligate the RI and HindIII DNA fragments. Plasmid pMON1 From 3286, the following genetic elements, namely β-lactamase gene (AMP) , The origin of pBR327 replication, the origin of phage f1 replication as a transcription terminator , PrecA promoter, g10L ribosome binding site and the following changes, Of the (15-125) hIL-3 gene having 42D, 45M, and 46S. The bases encoding the mino acids 15-105 are derived. From pMON13215 Coding amino acids 106-125 of the (15-125) gene with the change 116W. The base to be introduced is induced. The resulting plasmid pMON13325 has the following amino acid (15-125) hI having the amino acid sequence, peptide # A5 [SEQ ID NO: 261] It encodes the L-3 variant.                                 Example 63   Construction of pMON13326   3683 base pairs NcoI, EcoRI from plasmid pMON13215, The DNA fragment was 281 base pairs Nco from plasmid pMON13285. I, EcoRI, ligate to DNA fragment. Plasmid pMON13 From 215, the following genetic elements, β-lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, the precA promoter, g10L ribosome binding site, and the following changes: That is, amino acid 106 of the (15-125) hIL-3 gene having 116 W Bases encoding ~ 125 are derived. The following changes from pMON13285 Of the (15-125) gene having the The bases encoding the no acids 15-105 are derived. The resulting plasmid, pMO N 13326 has an amino acid sequence, peptide # A6 [SEQ ID NO: 262] The (15-125) hIL-3 variant is encoded.                                 Example 64   Construction of pMON13332   The DNA of the plasmid pMON13326 was digested with restriction enzymes NsiI and EcoRI. Digest with. The resulting 3853 base pair, NsiI, EcoRI fragment was The following genetic elements: β-lactamase gene (AMP), pBR327 Origin of replication, phage f1 as transcription terminator Origin of replication, recA Lomotor, g10L ribosome binding site, and the following changes: 42 (15-125) hIL-3 with D, 45M, 46S, 50D, I116W The bases encoding the amino acids 15-71 and 106-125 of the gene have been derived The 3853 base pair NsiI, EcoRI fragment from pMON13326 To the following annealed complementary oligonucleotides.   Oligo # 15 (A) [SEQ ID NO: 168]   Oligo # 16 (A) [SEQ ID NO: 169]   In the resulting plasmid, NsiI in the (15-125) hIL-3 gene And 111 bases between the EcoRI restriction site from the above oligonucleotide It is replaced by 24 bases. This linker also created an NdeI recognition sequence. It is done.                                 Example 65   Construction of pMON13330   3846 base pairs PstI, EcoRI, from plasmid pMON13332. The DNA fragment was derived from plasmid pMON13305 with 118 base pairs pst I, EcoRI, ligate to DNA fragment. Plasmid pMON13 From 332, the following genetic elements, namely β-lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, recA promoter, g10L ribosome binding site, and the following changes Having 42D, 45M, 46S, 50D and 116W (15-125) Salts encoding amino acids 15-69 and 106-125 of the hIL-3 gene The group is derived. The following changes from pMON13305, 95R, 981 and Encodes amino acids 70-105 of the (15-125) gene with 100R Base is induced. The resulting plasmid pMON13330 has the following amino acid sequence (15-125) hIL-3 with column, peptide # A7 [SEQ ID NO: 263] It encodes a variant.                                 Example 66   Construction of pMON13329   3846 base pairs PstI, EcoRI, from plasmid pMON13332. The DNA fragment was derived from plasmid pMON13304 with 118 base pairs Pst. I, EcoRI, ligate to DNA fragment. Plasmid pMON13 From 332, the following genetic elements, namely β-lactamase gene (AMP), origin of pBR327 replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, recA promoter, g10L ribosome binding site, and the following changes: That is, (15-125) hIL- having 42D, 45M, 46S, 116W. The bases encoding amino acids 15-69 and 106-125 of the three genes were derived. It is done. From pMON13304 have the following changes, 981 and 100R The bases encoding amino acids 70-105 of the (15-125) gene are derived. The The resulting plasmid pMON13329 has the following amino acid sequence and peptide The (15-125) hIL-3 mutant having # A8 [SEQ ID NO: 406] is encoded. Do.                                 Example 67   [Met- (15-133) pMO encoding hIL-3 a (Arg 129) " Construction of N5853 (Fig. 6)   Plasmid DNA of pMON5847 (Example 2) was treated with NcoI. Limited fermentation The element was deactivated by heat treatment (65 ° C. for 10 minutes). Please add this DNA DNA polymerase I (Klenow) in the presence of all four nucleotide precursors Processed with a large fragment of. This creates DNA ends with non-overlapping ends. The After incubating at 37 ℃ for 5 minutes, heat-treat the polymerase at 65 ℃ for 10 minutes to remove I made it alive. This DNA was then treated with HpaI, an enzyme that produces non-overlapping ends. Competent JM101 was treated with ampicillin using the ligation reaction mixture. It was transformed to be resistant. Colonies are picked and plasmid DNA is analyzed by restriction analysis. analyzed. The plasmid designated as pMON5853 is a plasmid of the hIL-3 gene. It was identified as a plasmid containing a deletion of the 14 codons at the mino terminus. (15- 133) The DNA sequence at the junction of the ribosome binding site to the hIL-3 gene is as follows: Was decided.   The lower sequence depends on the amino-terminal coding sequence of the 15-133 hIL-3 gene. The one-letter code of the amino acid specified by These are methionine, These are sparagin, cysteine, serine and asparagine.   The culture solution of JM101 cells harboring this plasmid was induced with nalidixic acid. When hIL-3 (15-133) is higher than hIL-3 (pMON5847), It was found to accumulate at a high level.   The plasmid pMON5853 has the following amino acid sequence Met- (15- 133) hIL-3 (Arg129) Is coded.                                 Example 68   Construction of pMON13252   The DNA of the plasmid pMON2341 was digested with the restriction enzymes NcoI and HindIII. Digestion with N.co. gave a 3619 base pair NcoI / HindIII fragment. pM The genetic element derived from ON2341 is a β-lactamase gene (AMP) , Origin of pBR327 replication, Origin of phage f1 replication as transcription terminator source, precA, g10L ribosome binding site. hIL-3 (15-125) Asp(50)Digestion of the plasmid encoding the mutant with NcoI and HindIII A 345 base pair NcoI / HindIII fragment was obtained. This 345 Base pair NcoI / HindIII fragment with 3619 from pMON2341 Ligation with the base pair fragment and E. coli K- using the ligation reaction mixture 12 strains JM101 were transformed. Plasmid DNA was isolated and NcoI and Hi Screened by restriction analysis with ndIII. 345 positive clones Contains a base pair NcoI / HindIII fragment. This construct is pMON It was named 13252. The plasmid pMON13252 contains the following amino acid sequence It encodes a variant of (15-125) hIL-3 with a sequence.   Peptide A10; (15-125) HIL-3Asp(50)pMON13252                               Example 69-76   The variants in Table 5 are. Materials and methods section and examples herein Constructed by cassette mutation using the method described in Examples 54-58. Suitable Maternal plasmid DNA (Table 5) digested with the appropriate restriction enzyme (Table 5) It was ligated to a pair of kneeling complementary oligonucleotides (Table 5). Assembled Suitable oligonucleotides include (15-125) hIL-3 gene with appropriate restriction ends. A part of the sequence (pMON13288 [SEQ ID NO: 100]) is created. Individual Isolates were screened by restriction analysis for (15-125) hIL-3 mutations The desired changes in the somatic gene were confirmed by DNA sequencing. Oh Rigonucleotides encode the corresponding amino acid substitutions in the mutant polypeptide Changes in the (15-125) hIL-3 gene are created (Table 5). Polypepchi Substitutions and / or additions to the substitutions in do # 25 [SEQ ID NO: 89] Indicates different amino acid substitutions in Table 5. This table also shows the plasmid Name (pMON number), DNA sequence identification number of mutant IL-3 gene and The identification number of the mutated polypeptide is shown. Organisms for some of the variants in Table 5 The activity (proliferation promoting activity in AML193 cells) is shown in Table 1.                               Example 77-82   The variants in Table 6 are found in the Materials and Methods section and in the Examples herein. It was constructed by the method described in Examples 60 and 61. Suitable restriction enzymes (Table 6) The maternal plasmid DNA digested with (Table 6) was digested with the indicated restriction fragments (Table 6). I was ligated to 6). Screening individual isolates by restriction analysis, (15-125) DNA indicating that a desired change has occurred in the hIL-3 mutant gene. Confirmed by sequence determination. Resulting mutation (15-125) hIL-3 inheritance The offspring encode the corresponding substitutions in the mutant polypeptide (Table 6). Polypep Substitutions and / or additions to the substitutions in Cide # 25 [SEQ ID NO: 89] Or different amino acid substitutions are indicated in Table 6. This table also shows Name (pMON number), DNA sequence identification number of mutant IL-3 gene, and The identification number of the obtained mutant polypeptide is shown. For some of the variants in Table 6 The biological activity (growth promoting activity in AML193 cells) is shown in Table 1.                                 Example 83   Construction of pMON13368   One of the DNA fragments for constructing the plasmid pMON13368 is The PCR method described in the Materials and Methods section and in the Examples herein, particularly Example 53. Was generated by site-specific mutation using. Positive template for PCR reaction Mid, pMON13289DNA, oligonucleotide, oligo # B13 18I23A25H [SEQ ID NO: 182] and oligo # B14 2341HI N3 [SEQ ID NO: 183] was used as a primer. The resulting DNA product Was digested with the enzymes NcoI and HindIII. After completion, the digest is heated to 70 ° C for 15 The enzyme was inactivated by heating for a minute. Restriction fragment is phenol / chloroform Extraction and 2M NHFourPrecipitation with an equal volume of isopropanol in the presence of OAc It was purified by. Oligonucleotide, oligo # B13 18I23A25H [sequence No .: 182] is the (15-125) hIL-3 mutant gene pMON13289. The codon at position 23 of [SEQ ID NO: 103] is changed from ATT to GCA (Ile To Ala). 3619 base pairs from pMON2341, NcoI, NcoI, HindI generated by PCR with HindIII restriction fragment I ligated to the II restriction fragment. Screen individual isolates by restriction analysis (15-125) hIL-3 mutants were identified by sequencing and DNA sequencing. It was confirmed that the desired change occurred in the gene. The plasmid pMON13368 is , Polypeptide # B15 [SEQ ID NO: 278] amino acid sequence (15 -125) hIL-3 variant polypeptides encoding (15-125) hIL -3 mutant gene (DNA sequence # B15 [SEQ ID NO: 346]).                                 Example 84   Construction of pMON13380   The plasmid pMON13368 DNA was digested with restriction enzymes EcoRI and HindIII. Digested with. The resulting 3900 base pair EcoRI, HindIII fragment Are the following genetic elements: β-lactamase gene (AMP), pBR3 27 origin of replication, origin of phage f1 replication as transcription terminator, pre cA Promoter, g10L ribosome binding site, and mutant pMON13368 Containing a DNA sequence encoding amino acids 15-105 of. pMON13368 The 3900 base pair EcoRI, HindIII restriction fragment from It was ligated to a complementary complementary oligonucleotide.   Oligo # B489E12Q6V1 [SEQ ID NO: 217]   Oligo # B49 9E12Q6V3 [SEQ ID NO: 218]   Oligo # 49 120Q123E2 [SEQ ID NO: 63]   Oligo # 50 120Q123E4 [SEQ ID NO: 64]   When assembled, these oligonucleotides will contain EcoRI and HindIII Restriction ends and the following amino acid substitutions, 109E, 112Q, 116V, 120 Amino acids 106-12 of (15-125) hIL-3 with Q and 123E Create a DNA sequence encoding 5. (15-125) in the hIL-3 gene The codons used were hIL-3cDN except for the positions where amino acid substitutions were made. It is a codon found in the A sequence. Screen individual isolates by restriction analysis And made the desired changes in the (15-125) hIL-3 mutant gene. The DNA was sequenced to confirm that it was done. Plasmid, pMO N13380 has the amino acid sequence of polypeptide # B16 [SEQ ID NO: 279]. (15-125) encoding a hIL-3 mutant polypeptide (15-125) ) HIL-3 mutant gene (containing DNA sequence # 16 [SEQ ID NO: 347].                                 Example 85   Construction of pMON13476   One of the DNA fragments to construct the plasmid pMON13476 is The PCR method described in the Materials and Methods section and in the Examples herein, particularly Example 54. Was generated by mutation at a specific site using. Positive template for PCR reaction Mid, pMON13287DNA, oligonucleotide, oligo # B131 8I23A25H [SEQ ID NO: 182] and oligo # B14 2341HIN 3 [SEQ ID NO: 183] was used as a primer. The obtained DNA product is , And digested with the enzymes NcoI and HindIII. After completion, the digest is heated to 70 ° C for 15 The enzyme was inactivated by heating for a minute. Restriction fragment is phenol / chloroform Extraction and 2M NHFourPrecipitation with an equal volume of isopropanol in the presence of OAc It was purified by. Oligonucleotide, oligo # B13 18I23A25H [sequence No .: 182] is the (15-125) hIL-3 mutant gene pMON13287 [ The codon at position 23 of SEQ ID NO: 97] is converted from ATT to GCA (Ile is Ala)). 3619 base pair NcoI, H from pMON2341 NcoI, HindIII restriction generated by PCR of indIII restriction fragment I ligated to a limited fragment. Screening individual isolates by restriction analysis In the (15-125) hIL-3 mutant gene by DNA sequencing and It was confirmed that the desired change occurred. The resulting clone is also at position -1 Change codon from GCT to GAT and amino acid from alanine to aspartic acid It also contained an undesignated change in the mutating oligonucleotide that caused it ． Plasmid pMON13476 is polypeptide # B52 [SEQ ID NO: 314]. A (15-125) hIL-3 variant polypeptide having the amino acid sequence of (15-125) hIL-3 mutant gene (DNA sequence # B52 [SEQ ID NO: : 303]).                               Examples 86-92   The variants in Table 7 are found in the Materials and Methods section and in the Examples herein, particularly Example 51. It was constructed by the PCR method using the method described in 1. It took two times to create the mutant A continuous PCR reaction was used. In the first PCR reaction, pMON13287 The two types of oligonucleotids listed in Table 7 acted on the plasmid DNA as a template. De worked as a primer. After the PCR extension reaction, the PCR product was partially purified. The primer that did not extend was removed. In the second PCR reaction, pMON The DNA of the 13287 plasmid acts as a template, allowing the purification from the first PCR reaction. The PCR product manufactured by Oligo # B14 2341Hin3 was used as one of the primers. [SEQ ID NO: 183] served as the second primer. From the second PCR reaction Was partially purified, digested with restriction enzymes NcoI and HindIII, pMO 3619 base pair NcoI, HindIII fragment from N2341 I started. Individual isolates screened by restriction analysis, and DNA sequences Determination resulted in the desired change in the (15-125) hIL-3 mutant gene It was confirmed. Amino acid substitution in polypeptide # 24 [SEQ ID NO: 88] Nisa The substitutions added and / or different substitutions are indicated in Table 7. this The table also shows the plasmid name (pMON number) and the mutant hIL-3 gene. Shows the DNA sequence identification number of and the identification number of the obtained mutant polypeptide. table Biological activity of some of the mutants in 7 (promotion of growth in AML193 cells) The activity) is shown in Table 1.                             Example 93-120   The variants in Table 8 are found in the Materials and Methods section and in the Examples herein, particularly Example 54. Was constructed by cassette mutation using the method described in ~ 58. Appropriate restrictions Maternal plasmid DNA (Table 8) digested with enzyme (Table 8) was treated with the indicated anneal. They were ligated to ring complementary oligonucleotide pairs (Table 8). Assembled cage Gonucleotides have appropriate restriction ends and (15-125) hIL-3 gene sequence. Is created (pMON13288 [SEQ ID NO: 100]). These Corresponds to the (15-125) hIL-3 mutant gene by the lygonucleotide. Amino acid substitutions and / or deletions from the C-terminus of the variant polypeptide The changes (Table 8) in the encoding (15-125) hIL-3 mutant gene were created. The Individual isolates screened by restriction analysis and also (15-125) DNA sequencing determined that the desired change in the hIL-3 variant gene had occurred. I confirmed it. For amino acid substitution in polypeptide # 25 [SEQ ID NO: 88] Table 8 shows the substitutions added and / or different substitutions. In this table Is also the plasmid name (pMON number), the DNA sequence of the mutant hIL-3 gene. The identification number and the identification number of the obtained mutant polypeptide are shown. Of the variants in Table 5 Table 1 shows some biological activities (proliferation promoting activity in AML193 cells).                                 Example 121   Construction of pMON13446   DNA of plasmid pMON13287 (from E. coli strain GM48 {dam-} Purified) was digested with the restriction enzymes NcoI and ClaI. 3942 base pairs obtained The NcoI and ClaI fragments are the following genetic elements: β-lactamer Ze gene (AMP), the origin of pBR327 replication, and the transcriptional terminator Origin of phage f1 replication, precA promoter, g10L ribosome binding site And encoding amino acids 21-125 of the (15-125) hIL-3 variant It contains the DNA sequence pMON13287. 3942 from pMON13368 The base pair NcoI, ClaI restriction fragment was subjected to the following annealed complementarity: It was ligated to an oligonucleotide.   Oligo # B57 338UP [SEQ ID NO: 226]   Oligo # B56 338DOWN [SEQ ID NO: 225]   When assembled, these oligonucleotides contained NcoI and ClaI restriction fragments. The end and the following 14 amino acid sequence: Met Ala Tyr Pro Glu Thr Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Encoding DNA sequence [SEQ ID NO: 403] and (15-125) hIL-3 DNA sequence encoding amino acids 15 to 20 of mutant gene, pMON13287 Create [SEQ ID NO: 97]. The resulting mutant polypeptide is (15-125) fused to hIL-3 mutant polypeptide, pMON13288 [SEQ ID NO: 88] With a 14 amino acid N-terminal extension. The plasmid pMON13446 is a polype It has the amino acid sequence of peptide # B53 [SEQ ID NO: 315] (15-125) (15-125) hIL-3 mutant gene encoding a hIL-3 mutant polypeptide Child (DNA sequence # B53 [SEQ ID NO: 404]).                                 Example B54   Construction of pMON13390   DNA of plasmid pMON13288 (from E. coli strain GM48 {dam-} Purified) was digested with the restriction enzymes NcoI and ClaI. 3942 base pairs obtained The NcoI and ClaI fragments are the following genetic elements: β-lactamer Ze gene (AMP), the origin of pBR327 replication, and the transcriptional terminator Origin of phage f1 replication, precA promoter, g10L ribosome binding site And encoding amino acids 21-125 of the (15-125) hIL-3 variant It contains the DNA sequence pMON13288. 3942 from pMON13288 The base pair NcoI, ClaI restriction fragment was subjected to the following annealed complementarity: It was ligated to an oligonucleotide.   Oligo # B57 338UP [SEQ ID NO: 226]   Oligo # B56 338DOWN [SEQ ID NO: 225]   When assembled, these oligonucleotides contained NcoI and ClaI restriction fragments. The end and the following 14 amino acid sequence: Met Ala Tyr Pro Glu Thr Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Encoding DNA sequence [SEQ ID NO: 403] and (15-125) hIL-3 DNA sequence encoding amino acids 15 to 20 of mutant gene, pMON13288 Create [SEQ ID NO: 100]. The resulting mutant was (15-125) hIL- 3 mutant polypeptide, 14A fused to pMON13288 [SEQ ID NO: 88] It has a mino acid N-terminal extension. Plasmid pMON13390 is polypeptide # (15-125) hIL-3 having the amino acid sequence of B54 [SEQ ID NO: 316] (15-125) hIL-3 mutant gene (DNA encoding a mutant polypeptide) Sequence # B54 [SEQ ID NO: 405]).                             Example 133-136   The variants in Table 10 are described in the Materials and Methods section and in the Examples herein, particularly the Examples. It was constructed by the method described in 54-58. Digest with appropriate restriction enzyme (Table 10) The obtained maternal plasmid DNA (Table 10) was labeled with the indicated changes. Restriction fragments (Table 10). Mutations obtained (15-125) The IL-3 gene encodes the corresponding amino acid substitutions (Table 10) in the mutant polypeptide. Do. Further amino acid substitutions in Polypeptide # 25 [SEQ ID NO: 89] The added substitutions and / or the different substitutions are indicated in Table 10. Table 10 Activity (proliferation promoting activity in AML193 cells) of some of the mutants in Shown in Table 1.                             Example 123-132   The variants in Table 9 are listed in the Materials and Methods section, and in Examples 54-58 herein. Was constructed by cassette mutation using the method described in. Suitable restriction fermentation Maternal plasmid DNA (Table 9) digested with prime (Table 9) was treated with the indicated Annie Ligated to a complementary pair of oligonucleotides (Table 9). Assembled oligo Nucleotides include the (15-125) hIL-3 gene between these restriction sites. Appropriate restriction flag inserted in (pMON13288 [SEQ ID NO: 100]) Ment is created. (15-125) Oligonucleotide in hIL-3 gene Deletions or substitutions that are encoded by Or corresponds to substitution (Table 9). In Polypeptide # 25 [SEQ ID NO: 88] The additional substitutions and / or the substitutions different from the amino acid substitutions Instruct 9. Biological activity of some of the variants in Table 9 (increased in AML193 cells Table 1 shows the reproduction promoting activity).   Formula XI shown below is a representative example of a (15-125) hIL-3 mutein, The bold number added to the top of the amino acid is the native (1-133) h In IL-3, the amino acid below the boldface number appears at that position. Shown [eg, the amino acid at position 1 of formula XI is native (1- 133) Corresponds to Asn appearing at position 15 in hIL-3]. Shown in bold The designated number indicates the amino acid equivalent to native IL-3 (1-133) There is. The non-bold number at the bottom of the amino acid sequence is the sequence identification reference number. When this mutein is expressed, the first amino acid is Met- or Met- It may be preceded by Ala-.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ１２Ｎ 1/21 8828−4Ｂ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｋ 9282−4Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｈ Ｕ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＧ ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ， ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＶＮ (72)発明者 エイブラムズ，マーク アレン アメリカ合衆国 63130 ミズーリ州セン ト ルイス，ブラックベリー アベニュー 7723 (72)発明者 ブラフォード − ゴールドバーグ サラ ルス アメリカ合衆国 63108 ミズーリ州セン ト ルイス，ナンバー 10，ウエスト パ イン 4111 (72)発明者 キャパロン，マイアー ヘレナ アメリカ合衆国 63017 ミズーリ州チェ スターフィールド，ビーチウッド コート 109 (72)発明者 イーストン，アラン マイクル アメリカ合衆国 63146 ミズーリ州メリ ーランド ハイツ，ナンバー ７，セブン パインズ ドライブ 2317 (72)発明者 クレイン，バーバラ クアー アメリカ合衆国 63131 ミズーリ州タウ ン アンド カウントリィ，トッピング イーステイツ 12917 (72)発明者 マック キァーン，ジョン パトリック アメリカ合衆国 63038 ミズーリ州グレ ンコウ，ハイウエイ シー．1430 (72)発明者 オリンズ，ピーター オー. アメリカ合衆国 63038 ミズーリ州グレ ンコウ，サミット ビュー 17507 (72)発明者 パイク，クムナン アメリカ合衆国 63021 ミズーリ州ボー ルウィン，アルパイン リッジ 1021 (72)発明者 トーマス，ジョン ウオレン アメリカ合衆国 63131 ミズーリ州タウ ン アンド カウントリィ，メソン バレ ー コート 13426─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (51) Int.Cl. 6 Identification code Internal reference number FI C12N 1/21 8828-4B 15/09 ZNA C12P 21/02 K 9282-4B // (C12N 1/21 C12R 1 : 19) (C12P 21/02 C12R 1:19) (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT , SE), OA (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AT, AU, BB, BG, BR, BY, CA, CH. , CZ, DE, DK, ES, FI, GB, HU, JP, KP, KR, KZ, LK, LU, LV, MG, MN, MW, NL, NO, NZ, PL, PT, RO, RU , SD, SE, SK, UA, US, VN (72) Inventor Abrams, Mark Allen United States 63130 Missouri Sent Louis, Blackberry Ave 7723 (72) Inventor Braford-Goldberg Salals United States 63108 Missouri Sen Trois, Number 10, West Pine 4111 (72) Inventor Capron, Maier Helena United States 63017 Chesterfield, Chesterfield, Missouri Beachwood Court 109 (72) Inventor Easton, Alan Mickle United States 63146 Maryland Heights, Missouri Number 7 , Seven Pines Drive 2317 (72) Inventor Klein, Barbara Quar United States 63131 Town and Country, Missouri, Toppings Estates 12917 (72) Inventor McKean, John Patrick United States 63,038 Missouri gray Nkou, highway Sea. 1430 (72) Inventor Orleans, Peter Oh. United States 63038 Glencoe, Missouri, Summit View 17507 (72) Inventor Pike, Cummunan United States 63021 Alpine Ridge 1021 (Bowlwin, Missouri) Thomas, John Warren United States 63131 Meson Valley Court, 13426, Towand and County, Missouri

Claims (1)

【特許請求の範囲】 １．式Ｉ ［式中，位置１７のＸａａはＳｅｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｍｅｔ，Ｇｌｎ またはＡｒｇであり， 位置１８のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ａｒｇまた はＧｌｎであり， 位置１９のＸａａは．Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｇｌｙ，Ａｌａまた はＣｙｓであり， 位置２０のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＡｌａであり， 位置２１におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｙ ，Ｇｌｕ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｔｈｒ，ＳｅｒまたはＶａｌであり， 位置２２におけるＸａａはＧｌｕ，Ｔｒｐ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｈｉｓ ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，ＶａｌまたはＧｌｙであり， 位置２３におけるＸａａはＩｌｅ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ｌｅｕ．Ｇｌｙ，Ｔｒｐ ，Ｌｙｓ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，ＳｅｒまたはＡｒｇであり， 位置２４のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ｐｈｅまた はＬｅｕであり， 位置２５のＸａａは，Ｔｈｒ．Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＡｌａであり， 位置２６のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ， Ｐｈｅ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，Ａｌａま たはＴｒｐであり， 位置２７のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，ＳｅｒまたはＡｌａ であり， 位置２８におけるＸａａはＬｙｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏ ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置２９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，ＡｒｇまたはＶａｌ であり， 位置３０におけるＸａａはＰｒｏ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｇｌｎ ，Ｓｅｒ，ＬｅｕまたはＬｙｓであり， 位置３１のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｌｅｕまた はＧｌｎであり， 位置３２におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ ， ＡｌａまたはＧｌｕであり， 位置３３のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ａｌａ，ＴｈｒまたはＧｌｕ であり， 位置３４におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｕ ，Ｇｌｎ，Ｔｈｒ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置３５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｇｌｎまた はＶａｌであり， 位置３６のＸａａは，Ａｓｐ，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置３７のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，ＴｒｐまたはＩｌｅであり， 位置３８のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置４０のＸａａは，Ｌｅｕ，ＴｒｐまたはＡｒｇであり， 位置４１のＸａａは，Ａｓｎ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔまた はＰｒｏであり， 位置４２におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ ，Ｔｈｒ．Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ．Ｐｈｅ．Ｔｙｒ，Ｉｌｅ，Ｍｅｔ，または Ａｌａであり， 位置４３におけるＸａａはＧｌｕ，Ａｓｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｐｈｅ，Ａｓｐ ，Ａｌａ，Ｃｙｓ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，ＧｌｙまたはＳｅｒであり， 位置４４におけるＸａａはＡｓｐ，Ｓｅｒ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置４５におけるＸａａはＧｌｎ，Ｐｒｏ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ ，Ｔｈｒ，Ｌｙｓ，Ｔｒｐ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｉｌｅ ，ＧｌｕまたはＨｉｓであり， 位置４６におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，または Ｇｌｙであり， 位置４７のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＨｉｓであり， 位置４８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ，Ｈｉｓ ， Ｐｈｅ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｍｅｔ，ＶａｌまたはＡｓｎであり ， 位置４９におけるＸａａはＭｅｔ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏ，Ａｓｎ ，ＨｉｓまたはＡｓｐであり， 位置５０におけるＸａａはＧｌｕ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ ，Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，Ｍｅｔ，または Ｇｌｎであり， 位置５１のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置５２のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒまた はＴｈｒであり， 位置５３におけるＸａａはＬｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ ，Ｌｙｓ，ＳｅｒまたはＭｅｔであり， 位置５４におけるＸａａはＡｒｇ，Ａｓｐ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ｔｈｒ ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，ＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置５５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，ＬｅｕまたはＧｌｙ であり， 位置５６におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｃｙｓ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，または Ｌｙｓであり， 位置５７のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｙであり， 位置５８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｖａｌまた はＣｙｓであり， 位置５９のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，ＰｒｏまたはＡｒｇ であり， 位置６０のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ｔｙｒ，ＡｓｎまたはＴｈｒ であり， 位置６１のＸａａは，Ｐｈｅ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ，Ａｒｇまた はＳｅｒであり， 位置６２におけるＸａａはＡｓｎ，Ｈｉｓ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ ， ＡｓｐまたはＩｌｅであり， 位置６３におけるＸａａはＡｒｇ，Ｔｙｒ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ｈｉｓ ，ＰｒｏまたはＶａｌであり， 位置６４のＸａａは，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置６５のＸａａは，Ｖａｌ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｐｈｅまた はｓｅｒであり， 位置６６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，Ｇｌｕまた はＳｅｒであり， 位置６７におけるＸａａはＳｅｒ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ ，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＨｉｓであり， 位置６８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ ，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置６９におけるＸａａはＧｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ ，Ｔｒｐ，ＧｌｙまたはＬｅｕであり， 位置７０のＸａａは．Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，ＰｒｏまたはＡｌａ であり， 位置７１におけるＸａａはＡｌａ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｇｌｕ ，Ｔｈｒ，Ｇｌｎ，ＴｒｐまたはＡｓｎであり， 位置７２におけるＸａａはＳｅｒ，Ｇｌｕ，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ａｓｎ ，ＡｒｇまたはＡｓｐであり， 位置７３におけるＸａａはＡｌａ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ ，ＴｈｒまたはＡｒｇであり， 位置７４におけるＸａａはＩｌｅ，Ｍｅｔ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｇｌｙ またはＡｌａであり， 位置７５におけるＸａａはＧｌｕ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｔｒｐ ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，ＧｌｎまたはＬｅｕであり， 位置７６におけるＸａａはＳｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｔｒｐ，Ｇｌｕ ，Ｐｒｏ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置７７のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ａｒｇ，ＴｈｒまたはＬｅｕであり， 位置７８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙまた はＡｒｇであり， 位置７９におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｈｒ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置８０におけるＸａａはＡｓｎ，Ｔｒｐ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置８１におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ ，ＶａｌまたはＬｙｓであり， 位置８２におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ ，ＭｅｔまたはＶａｌであり， 位置８３のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｔｒｐ，ＡｒｇまたはＭｅｔ であり， 位置８４のＸａａは，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，ＭｅｔまたはＶａｌ であり， 位置８５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，ＶａｌまたはＧｌｎであり， 位置８６のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＬｙｓであり， 位置８７のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，ＴｒｐまたはＧｌｙであり， 位置８８のＸａａは，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置８９におけるＸａａはＴｈｒ，Ａｓｐ，Ｃｙｓ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ ，Ｈｉｓ，ＡｓｎまたはＳｅｒであり， 位置９０におけるＸａａはＡｌａ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ ，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置９１におけるＸａａはＡｌａ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置９２におけるＸａａはＰｒｏ，Ｐｈｅ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置９３におけるＸａａはＴｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ ，ＬｅｕまたはＡｒｇであり， 位置９４におけるＸａａはＡｒｇ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置９５におけるＸａａはＨｉｓ，Ｇｌｎ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｔｒｐ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ またはＴｙｒであり， 位置９６のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｇｌｙ，ＩｌｅまたはＴｈｒ であり， 位置９７のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置９８におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｐｈｅ，Ｍｅｔ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ ，ＴｙｒまたはＰｒｏであり， 位置９９におけるＸａａはＩｌｅ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置１００のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ， Ｓｅｒ，ＧｌｎまたはＰｒｏであり， 位置１０１のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ， Ｖａｌ，Ｔｙｒ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕま たはＧｌｎであり， 位置１０２のＸａａは，Ｇｌｙ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒま たはＰｒｏであり， 位置１０３のＸａａは，ＡｓｐまたはＳｅｒであり， 位置１０４のＸａａは，Ｔｒｐ，Ｖａｌ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ， Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ａｌａ，ＰｈｅまたはＧｌｙであり， 位置１０５のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ， Ｇｌｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置１０６のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｉｌｅ， ＧｌｙまたはＰｒｏであり， 位置１０８のＸａａは，Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ｉｌｅ， Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置１０９のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ， ＳｅｒまたはＧｌｙであり， 位置１１０のＸａａは，Ｌｙｓ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ， Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置１１１のＸａａはＬｅｕ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，ＡｓｐまたはＭｅｔであり， 位置１１２のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｇｌｎ，Ｔｙｒ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ， ＳｅｒまたはＰｈｅであり， 位置１１３のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｔｒｐ， Ｔｙｒ，Ａｓｐ，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＡｓｎであり， 位置１１４のＸａａは，Ｔｙｒ，Ｃｙｓ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ，Ａｒｇま たはＬｅｕであり， 位置１１５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ａｌａ， Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，ＴｒｐまたはＭｅｔであり， 位置１１６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ，Ａｓｐ， Ｖａｌ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ａｌａ，Ｔｙｒ， Ｐｈｅ，ＧｌｎまたはＩｌｅであり， 位置１１７のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓま たはＰｒｏであり， 位置１１８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｇｌｕ，Ｃｙｓ， ＡｓｐまたはＴｙｒであり， 位置１１９のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ， ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置１２０のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｖａｌま たはＧｌｎであり， 位置１２１のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ， ＡｓｐまたはＧｌｙであり， 位置１２２のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｐｈｅ， Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，ＴｙｒまたはＣｙｓであり， 位置１２３のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ， ＴｙｒまたはＬｅｕであり， またさらに位置１におけるアミノ酸に先行するＭｅｔ−をもっていてもよく； Ｎ−末端から１〜１４のアミノ酸および／またはＣ−末端から１〜１５のアミノ 酸が欠失していてもよく；Ｘａａで示されている４〜４４個のアミノ酸はネイテ ィブな（１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なっ ている］のヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチド． ２．式II ［式中， 位置１７のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，ＭｅｔまたはＧｌｎであり， 位置１８のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ａｒｇまた はＧｌｎであり， 位置１９のＸａａは，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置２０のＸａａは，ＩｌｅまたはＰｒｏであり， 位置２１のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置２３のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ａｌａ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置２４のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，ＰｈｅまたはＬｅｕであり， 位置２５のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＡｌａであり， 位置２６のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙ，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置２８のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，ＰｒｏまたはＶａｌ であり， 位置２９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，ＡｒｇまたはＶａｌであり， 位置３０のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，ＧｌｙまたはＧｌｎであり， 位置３１のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｌｅｕまた はＧｌｎであり， 位置３２のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａまた はＧｌｕであり， 位置３３のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，ＡｌａまたはＧｌｕであり， 位置３４におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ， Ｌｙｓ，Ａｌ ａ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＴｈｒまたはＭｅｔであり， 位置３５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＧｌｎまたはＶａｌ であり， 位置３６のＸａａは，ＡｓｐまたはＬｅｕであり， 位置３７のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，ＴｒｐまたはＩｌｅであり， 位置３８のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置４１のＸａａは，Ａｓｎ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，ＭｅｔまたはＰｒｏ であり， 位置４２におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，Ｔｙｒ，ＶａｌまたはＡｒｇであり， 位置４４のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置４５におけるＸａａはＧｌｎ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ｌｙｓ ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，ＳｅｒまたはＴｒｐであり， 位置４６におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ，または Ｇｌｙであり， 位置４７のＸａａは，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＨｉｓであり， 位置４９のＸａａは，Ｍｅｔ，ＡｓｎまたはＡｓｐであり， 位置５０のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＡｓｐ であり， 位置５１のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置５２のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｙであり， 位置５３のＸａａは，Ｌｅｕ，ＭｅｔまたはＰｈｅであり， 位置５４のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置５５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置５６におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｃｙｓ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ａｌａ ，Ａｒｇ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＬｙｓであ り， 位置５９のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，ＬｅｕまたはＡｒｇであり， 位置６０のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＡｓｎまたはＴｈｒであり， 位置６１のＸａａは，ＰｈｅまたはＳｅｒであり， 位置６２のＸａａは，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ，ＴｈｒまたはＩｌｅであり， 位置６３のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，ＨｉｓまたはＶａｌ であり， 位置６４のＸａａは，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置６５のＸａａは，Ｖａｌ，Ｔｈｒ，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置６６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，Ｇｌｕまた はＳｅｒであり， 位置６７のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｉｌｅまた はＨｉｓであり， 位置６８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｉｌｅ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置６９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇまた はＧｌｙであり， 位置７０のＸａａは，ＡｓｎまたはＰｒｏであり， 位置７１のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｇｌｕ，Ｔｈｒまた はＧｌｎであり， 位置７２におけるＸａａはＳｅｒ，Ｇｌｕ，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ａｓｎ ，ＡｒｇまたはＡｓｐであり， 位置７３におけるＸａａはＡｌａ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ ，Ｔｈｒ，ＡｒｇまたはＰｒｏであり， 位置７４のＸａａは，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置７５のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，ＳｅｒまたはＧｌｎであり， 位置７６におけるＸａａはＳｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置７７のＸａａは，Ｉｌｅ，ＳｅｒまたはＬｅｕであり， 位置７９におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ ，Ｉｌｅ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置８０のＸａａは，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕまた はＡｒｇであり， 位置８１のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置８２におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｔｙｒ，または Ｖａｌであり， 位置８３のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，ＴｒｐまたはＭｅｔであり， 位置８５のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置８７のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置８８のＸａａは，Ａｌａ，ＡｒｇまたはＴｒｐであり， 位置８９のＸａ ａは，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，ＡｓｎまたはＳｅｒであり， 位置９０のＸａａは，Ａｌａ，ＡｓｐまたはＭｅｔであり， 位置９１のＸａａは，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕまた はＡｓｐであり， 位置９２のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置９３のＸａａは，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｌｅｕまた はＡｒｇであり， 位置９５におけるＸａａはＨｉｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＳｅｒまたはＴｈｒであり， 位置９６のＸａａは，ＰｒｏまたはＴｙｒであり， 位置９７のＸａａは，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＡｌａであり， 位置９８におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ ，ＶａｌまたはＰｒｏであり， 位置９９のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，ＶａｌまたはＰｈｅであり， 位置１００のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ，Ｇｌｎ， ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置１０１のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ， Ｖａｌ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒであり， 位置１０２のＸａａはＧｌｙ，Ｇｌｕ，ＬｙｓまたはＳｅｒであり， 位置１０４のＸａａはＴｒｐ，Ｖａｌ，Ｔｙｒ，ＭｅｔまたはＬｅｕであり， 位置１０５のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ， Ｇｌｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置１０６のＸａａはＧｌｕ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＧｌｙであり， 位置１０８のＸａａはＡｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｎ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置１０９のＸａａはＡｒｇ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，ＳｅｒまたはＧｌｙ であり， 位置１１２のＸａａはＴｈｒ，Ｖａｌ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，ＨｉｓまたはＳｅｒ であり， 位置１１４のＸａａは，ＴｙｒまたはＴｒｐであり， 位置１１５のＸａａは，ＬｅｕまたはＡｌａであり， 位置１１６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ， Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，またはＩ ｌｅであり， 位置１１７のＸａａは，Ｔｈｒ，ＳｅｒまたはＡｓｎであり， 位置１１９のＸａａはＧｌｕ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，ＴｈｒまたはＴｙｒ であり， 位置１２０のＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，ＶａｌまたはＧｌｎ であり， 位置１２１のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ， ＡｓｐまたはＧｌｙであり， 位置１２２のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｐｈｅ， Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，ＴｙｒまたはＣｙｓであり， 位置１２３のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ， ＴｙｒまたはＬｅｕであり， またさらに位置１におけるアミノ酸に先行するＭｅｔ−をもっていてもよく； Ｎ−末端から１−１４のアミノ酸および／またはＣ−末端から１−１５アミノ酸 が欠失していてもよく；Ｘａａで示されている４〜４４個のアミノ酸はネイティ ブな（１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なって いる］のヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチド． ３．式III ［式中， 位置１７のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，ＭｅｔまたはＧｌｎであり， 位置１８のＸａａは，Ａｓｎ，ＨｉｓまたはＩｌｅであり， 位置１９のＸａａは，ＭｅｔまたはＩｌｅであり， 位置２１のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置２３のＸａａは，Ｉｌｅ，Ａｌａ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置２４のＸａａは，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＬｅｕであり， 位置２５のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，ＧｌｎまたはＡｌａであり， 位置２６のｘａａは，ＨｉｓまたはＡｌａであり， 位置２９のＸａａは．Ｇｌｎ，ＡｓｎまたはＶａｌであり， 位置３０のＸａａは，Ｐｒｏ，ＧｌｙまたはＧｌｎであり， 位置３１のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，ＧｌｙまたはＧｌｎであり， 位置３２のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａまた はＧｌｕであり， 位置３３のＸａａは，ＰｒｏまたはＧｌｕであり， 位置３４におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ａｌａ ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＴｈｒまたはＭｅｔであり， 位置３５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＧｌｎまたはＶａｌ であり， 位置３７のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，ＰｒｏまたはＴｒｐであり， 位置３８のｘａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置４２におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置４４のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置４５におけるＸａａはＧｌｎ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置４６におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，ＶａｌまたはＣｙｓであ り， 位置５０のＸａａは，Ｇｌｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＡｓｐであり， 位置５１のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置５４のＸａａは，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置５５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置５６におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ａｒｇ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＬｙｓであり， 位置６０のＸａａは，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置６２のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＴｈｒまたはＩｌｅであり， 位置６３のＸａａは，ＡｒｇまたはＬｙｓであり， 位置６４のＸａａは，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置６５のＸａａは，ＶａｌまたはＴｈｒであり， 位置６６のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置６７のＸａａは，Ｓｅｒ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置６８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置６９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇまた はＧｌｙであり， 位置７１のＸａａは，Ａｌａ，ＰｒｏまたはＡｒｇであり， 位置７２のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，ＡｒｇまたはＡｓｐであり， 位置７３のＸａａは，ＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置７６のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏまた はＧｌｙであり， 位置７７のＸａａは，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置７９におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ ，Ｉｌｅ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置８０のＸａａは，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置８２におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｔｙｒ またはＶａｌであり， 位置８３のＸａａは，ＰｒｏまたはＴｈｒであり， 位置８５のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置８７のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置８８のＸａａは，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置９１のＸａａは，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置９３のＸａａは，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｌｅｕまた はＡｒｇであり， 位置９５におけるＸａａはＨｉｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ ，Ａｓｎ，Ｐｈｅ，ＳｅｒまたはＴｈｒであり， 位置９６のＸａａは，ＰｒｏまたはＴｙｒであり， 位置９７のＸａａは，ＩｌｅまたはＶａｌであり， 位置９８におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｔｈｒ ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ またはＰｒｏであり， 位置９９のＸａａは，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置１００のＸａａはＬｙｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ，Ｇｌｎ，ＰｒｏまたはＳｅｒ であり， 位置１０１のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ， Ｐｒｏ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒであり， 位置１０４のＸａａは，ＴｒｐまたはＬｅｕであり， 位置１０５のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ，Ｇｌｎ， Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置１０６のＸａａは，ＧｌｕまたはＧｌｙであり， 位置１０８のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置１０９のＸａａはＡｒｇ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置１１２のＸａａは，Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＧｌｎであり， 位置１１４のＸａａは，ＴｙｒまたはＴｒｐであり， 位置１１５のＸａａは，ＬｅｕまたはＡｌａであり， 位置１１６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ａｌａ， Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，ＴｙｒまたはＩｌｅであり， 位置１１７のＸａａは，ＴｈｒまたはＳｅｒであり， 位置１２０のＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，ＶａｌまたはＧｌｎ であり， 位置１２１のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｓｐま たはＧｌｙであり， 位置１２２のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｐｈｅ， Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，ＴｙｒまたはＣｙｓであり， 位置１２３のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ， ＴｙｒまたはＬｅｕであり， またさらに位置１におけるアミノ酸に先行するＭｅｔ−をもっていてもよく； Ｎ−末端から１〜１４のアミノ酸および／またはＣ−末端から１〜１５のアミノ 酸が欠失していてもよく；Ｘａａで示されている４〜３５個のアミノ酸はネイテ ィブな（１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なっ ている］の「請求項２」に記載されたヒトインターロイキン−３突然変異ポリペ プチド． ４．式IV ［式中， 位置１７のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，ＡｓｐまたはＧｌｎであり， 位置１８のＸａａは，Ａｓｎ，ＨｉｓまたはＩｌｅであり， 位置２３のＸａａは，Ｉｌｅ，Ａｌａ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置２５のＸａａは，Ｔｈｒ，ＨｉｓまたはＧｌｎであり， 位置２６のＸａａは，ＨｉｓまたはＡｌａであり， 位置２９のＸａａは，ＧｌｎまたはＡｓｎであり， 位置３０のＸａａは，ＰｒｏまたはＧｌｙであり， 位置３２のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置３４におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ ，Ｇｌｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＴｈｒまたはＭｅｔであり， 位置３５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，ＡｓｎまたはＰｒｏであり， 位置３８のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置４２におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置４５におけるＸａａはＧｌｎ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，ＧｌｕまたはＬｙｓであり， 位置４６におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ ，ＶａｌまたはＴｈｒであり， 位置５０のＸａａは，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＡｓｐであり， 位置５１のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置５５のＸａａは，Ａｒｇ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置５６におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｖａｌ ，ＬｅｕまたはＧｌｎであり， 位置６２のＸａａは，Ａｓｎ，ＰｒｏまたはＴｈｒであり， 位置６４のＸａａは，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置６５のＸａａは，ＶａｌまたはＴｈｒであり， 位置６７のＸａａは，ＳｅｒまたはＰｈｅであり， 位置６８のＸａａは，ＬｅｕまたはＰｈｅであり， 位置６９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｌａ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置７６のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，ＰｒｏまたはＧｌｙであり， 位置７７のＸａａは，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置７９のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ，Ｉｌｅまた はＧｌｙであり， 位置８０のＸａａは，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置８２におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ａｓｎ ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，ＴｙｒまたはＶａｌであ り， 位置８７のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置８８のＸａａは，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置９１のＸａａは，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置９３のＸａａは，Ｔｈｒ，ＡｓｐまたはＡｌａであり， 位置９５におけるＸａａはＨｉｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ ，ＳｅｒまたはＴｈｒであり， 位置９８におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｇｌｎ ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，ＶａｌまたはＬｅｕであり， 位置９９のＸａａは，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置１００のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置１０１のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ， Ｐｒｏ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒであり， 位置１０５のＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，ＩｌｅまたはＡｓｐであり， 位置１０８のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置１０９のＸａａはＡｒｇ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置１１２のＸａａは，ＴｈｒまたはＧｌｎであり， 位置１１６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ， ＴｙｒまたはＩｌｅであり， 位置１１７のＸａａは，ＴｈｒまたはＳｅｒであり， 位置１２０のＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，ＶａｌまたはＧｌｎ であり， 位置１２１のＸａａはＡｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＡｓｎであり， 位置１２２のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ｐｈｅ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ， ＩｌｅまたはＴｙｒであり， 位置１２３のＸａａはＡｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，ＳｅｒまたはＬｅｕであり， またさらに位置１におけるアミノ酸に先行するＭｅｔ−をもっていてもよく； Ｎ−末端から１〜１４のアミノ酸および／またはＣ−末端から１〜１５のアミノ 酸が欠失していてもよく；Ｘａａで示されている４〜４４個のアミノ酸はネイテ ィブな（１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なっ ている］の「請求項３」に記載されたヒトインターロイキン−３突然変異ポリペ プチド． ５．Ｃ−末端から１〜１５のアミノ酸および／またはＮ−末端から１〜１４の アミノ酸が欠失していて「請求項１」に記載されたヒトインターロイキン−３突 然変異ポリペプチド． ６．位置４２におけるＸａａは，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ， Ｍｅｔ，ＴｙｒまたはＡｌａであり， 位置４５におけるＸａａはＧｌｎ，Ｖａｌ，ＭｅｔまたはＡｓｎであり， 位置４６におけるＸａａはＡｓｐ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，ＨｉｓまたはＶａｌであ り， 位置５０のＸａａは，ＧｌｕまたはＡｓｐであり， 位置５１のＸａａは，Ａｓｎ，ＰｒｏまたはＴｈｒであり， 位置６２のＸａａは，ＡｓｎまたはＰｒｏであり， 位置７６のＸａａは，ＳｅｒまたはＰｒｏであり， 位置８２におけるＸａａはＬｅｕ，Ｔｒｐ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ ，Ｐｈｅ，ＳｅｒまたはＴｙｒであり， 位置９５におけるＸａａは，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，ＡｓｎまたはＳｅｒで あり， 位置９８におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，ＴｙｒまたはＶａｌであり， 位置１００のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置１０１におけるＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ａｓｎ，Ｉｌｅまた はＬｅｕであり， 位置１０５のＸａａは，ＡｓｎまたはＰｒｏであり， 位置１０８のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置１１６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ， またはＴｙｒであり， 位置１２１のＸａａは，ＡｌａまたはＩｌｅであり， 位置１２２のＸａａは，ＧｌｎまたはＩｌｅであり， 位置１２３のＸａａは，Ａｌａ，ＭｅｔまたはＧｌｕである「請求項１」に記 載されたヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチド． ７．式Ｖ ［式中， 位置３のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｍｅｔ，Ｇｌｎまたは Ａｒｇであり， 位置４のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ａｒｇまたは Ｇｌｎであり， 位置５のＸａａは，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｇｌｙ，Ａｌａまたは Ｃｙｓであり， 位置６のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまたは Ａｌａであり， 位置７のＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｇｌｕ ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｔｈｒ，ＳｅｒまたはＶａｌであり， 位置８のＸａａはＧｌｕ，Ｔｒｐ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ａｓｐ ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，ＶａｌまたはＧｌｙであり， 位置９のＸａａはＩｌｅ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，ＳｅｒまたはＡｒｇであり， 位置１０のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ｐｈｅまた はＬｅｕであり， 位置１１のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＡｌａであり， 位置１２のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，Ａｌａまた はＴｒｐであり， 位置１３のｘａａはＬｅｕ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ａｌａであり ， 位置１４におけるＸａａはＬｙｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏ ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置１５のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，ＡｒｇまたはＶａｌ であり， 位置１６におけるＸａａはＰｒｏ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｇｌｎ ，Ｓｅｒ，ＬｅｕまたはＬｙｓであり， 位置１７のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｌｅｕまた はＧｌｎであり， 位置１８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ ，ＡｌａまたはＧｌｕであり， 位置１９のＸａａはＰｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕであり ， 位置２０におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｕ ，Ｇｌｎ，Ｔｈｒ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置２１のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｇｌｎまた はＶａｌであり， 位置２２のＸａａは，Ａｓｐ，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置２３のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，ＴｒｐまたはＩｌｅであり， 位置２４のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置２６のＸａａは，Ｌｅｕ，ＴｒｐまたはＡｒｇであり， 位置２７のＸａａは，Ａｓｎ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔまた はＰｒｏであり， 位置２８におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ，Ｌｙｓ ，Ａｓｎ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｉｌｅ，または Ｍｅｔであり， 位置２９におけるＸａａはＧｌｕ，Ａｓｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｐｈｅ，Ａｓｐ ，Ａｌａ，Ｃｙｓ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，ＧｌｙまたはＳｅｒであり， 位置３０におけるＸａａはＡｓｐ，Ｓｅｒ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置３１におけるＸａａはＧｌｎ，Ｐｒｏ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ ，Ｔｈｒ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｇｌｕ ，ＨｉｓまたはＴｒｐであり， 位置３２におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ．または Ｇｌｙであり， 位置３３のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＨｉｓであり， 位置３４におけるＸａａはＬｅｕ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ，Ｈｉｓ ，Ｐｈｅ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｍｅｔ，ＶａｌまたはＡｓｎであ り， 位置３５におけるＸａａはＭｅｔ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏ，Ａｓｎ ，ＨｉｓまたはＡｓｐであり， 位置３６におけるＸａａはＧｌｕ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ ，Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，Ｍｅｔ，または Ｇｌｎであり， 位置３７のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置３８のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒまた はＴｈｒであり， 位置３９におけるＸａａはＬｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ ，Ｌｙｓ，ＳｅｒまたはＭｅｔであり， 位置４０におけるＸａａはＡｒｇ，Ａｓｐ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ｔｈｒ ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，ＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置４１のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，ＬｅｕまたはＧｌｙ であり， 位置４２におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｃｙｓ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，または Ｌｙｓであり， 位置４３のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｙであり， 位置４４のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｖａｌまた はＣｙｓであり， 位置４５のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，ＰｒｏまたはＡｒｇ であり， 位置４６のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ｔｙｒ，ＡｓｎまたはＴｈｒ であり， 位置４７のＸａａは，Ｐｈｅ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ，Ａｒｇまた はＳｅｒであり， 位置４８におけるＸａａはＡｓｎ，Ｈｉｓ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ ，ＡｓｐまたはＩｌｅであり， 位置４９におけるＸａａはＡｒｇ，Ｔｙｒ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ｈｉｓ ，ＰｒｏまたはＶａｌであり， 位置５０のＸａａは，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置５１のＸａａは，Ｖａｌ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｐｈｅまた はＳｅｒであり， 位置５２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ａｓｒｌ，Ｇｌｕま たはＳｅｒであり， 位置５３におけるＸａａはＳｅｒ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ ，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＨｉｓであり， 位置５４におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ ，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置５５におけるＸａａはＧｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ ，Ｔｒｐ，ＧｌｙまたはＬｅｕであり， 位置５６のＸａａは，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，ＰｒｏまたはＡｌａ であり， 位置５７におけるＸａａはＡｌａ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ， Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｇｌ ｕ，Ｔｈｒ，Ｇｌｎ，ＴｒｐまたはＡｓｎであり， 位置５８におけるＸａａはＳｅｒ，Ｇｌｕ，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ａｓｎ ，ＡｒｇまたはＡｓｐであり， 位置５９におけるＸａａはＡｌａ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ ，ＴｈｒまたはＡｒｇであり， 位置６０におけるＸａａはＩｌｅ，Ｍｅｔ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｇｌｙ またはＡｌａであり， 位置６１におけるＸａａはＧｌｕ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｔｒｐ ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，ＧｌｎまたはＬｅｕであり， 位置６２におけるＸａａはＳｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｔｒｐ，Ｇｌｕ ，Ｐｒｏ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置６３のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ａｒｇ，ＴｈｒまたはＬｅｕであり， 位置６４のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙまた はＡｒｇであり， 位置６５におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ ，ＩｌｅまたはＡｓｐであり， 位置６６におけるＸａａはＡｓｎ，Ｔｒｐ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置６７におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ ，ＶａｌまたはＬｙｓであり， 位置６８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ ，ＭｅｔまたはＶａｌであり， 位置６９のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｔｒｐ，ＡｒｇまたはＭｅｔ であり， 位置７０のＸａａは，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，ＭｅｔまたはＶａｌ であり， 位置７１のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，ＶａｌまたはＧｌｎであり， 位置７２のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＬｙｓであり， 位置７３のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，ＴｒｐまたはＧｌｙであり， 位置７４のＸａａは，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置７５におけるＸａａはＴｈｒ，Ａｓｐ，Ｃｙｓ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ ，Ｈｉｓ，ＡｓｎまたはＳｅｒであり， 位置７６におけるＸａａはＡｌａ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ ，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置７７におけるＸａａはＡｌａ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置７８におけるＸａａはＰｒｏ，Ｐｈｅ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置７９におけるＸａａはＴｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ ，ＬｅｕまたはＡｒｇであり， 位置８０におけるＸａａはＡｒｇ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置８１におけるＸａａはＨｉｓ，Ｇｌｎ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｔｒｐ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ またはＴｙｒであり， 位置８２のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｇｌｙ，ＩｌｅまたはＴｈｒ であり， 位置８３のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置８４におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｐｈｅ，Ｍｅｔ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ ，ＴｙｒまたはＰｒｏであり， 位置８５におけるＸａａはＩｌｅ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置８６におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ ，Ｓｅｒ，ＧｌｎまたはＰｒｏであり， 位置８７におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ ，Ｖａｌ，Ｔｙｒ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ またはＧｌｎであり， 位置８８のＸａａは，Ｇｌｙ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒまた はｐｒｏであり， 位置８９のＸａａは，ＡｓｐまたはＳｅｒであり， 位置９０におけるＸａａはＴｒｐ，Ｖａｌ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ａｌａ，ＰｈｅまたはＧｌｙであり， 位置９１におけるＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ ，Ｇｌｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置９２におけるＸａａはＧｌｕ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｉｌｅ ，ＧｌｙまたはＰｒｏであり， 位置９４におけるＸａａはＡｒｇ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ｉｌｅ ，Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置９５におけるＸａａはＡｒｇ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ ，ＳｅｒまたはＧｌｙであり， 位置９６におけるＸａａはＬｙｓ，Ａｓｎ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置９７のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，ＡｓｐまたはＭｅｔであり， 位置９８におけるＸａａはＴｈｒ，Ｖａｌ，Ｇｌｎ，Ｔｙｒ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ ，ＳｅｒまたはＰｈｅであり， 位置９９におけるＸａａはＰｈｅ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｔｒｐ ，Ｔｙｒ，Ａｓｐ，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＡｓｎであり， 位置１００のＸａａは，Ｔｙｒ，Ｃｙｓ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ，Ａｒｇま たはＬｅｕであり， 位置１０１のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ａｌａ， Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，ＴｒｐまたはＭｅｔであり， 位置１０２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ，Ａｓｐ， Ｖａｌ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ａｌａ，Ｔｙｒ， Ｐｈｅ，ＧｌｎまたはＩｌｅであり， 位置１０３のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓま たはＰｒｏであり， 位置１０４のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｇｌｕ，Ｃｙｓ， ＡｓｐまたはＴｙｒであり， 位置１０５のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ， ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置１０６のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｖａｌま たはＧｌｎであり， 位置１０７のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ， ＡｓｐまたはＧｌｙであり， 位置１０８のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｐｈｅ， Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，ＴｙｒまたはＣｙｓであり， 位置１０９のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ， ＴｙｒまたはＬｅｕであり， またさらに位置１のアミノ酸に先行するＭｅｔ−またはＭｅｔ−Ａｌａ−をも っていてもよく；Ｘａａで示されている４〜４４個のアミノ酸は（１−１３３） ヒトインターロイキン−３の相当するネイティブなアミノ酸とは異なる］にて示 される（１５−１２５）ヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチド，また は実質的に同一の構造および実質的に同一の生物活性を有するポリペプチド． ８．式VI ［式中， 位置３のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，ＭｅｔまたはＧｌｎであり， 位置４のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ａｒｇまたは Ｇｌｎであり， 位置５のＸａａは，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｉｌｅ，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置６のＸａａは，ＩｌｅまたはＰｒｏであり， 位置７のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置９のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ａｌａ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置１０のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，ＰｈｅまたはＬｅｕであり， 位置１１のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＡｌａであり， 位置１２のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙ，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置１４のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，ＰｒｏまたはＶａｌ であり， 位置１５のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，ＡｒｇまたはＶａｌであり， 位置１６のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，ＧｌｙまたはＧｌｎであり， 位置１７のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｌｅｕまた はＧｌｎであり， 位置１８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａまた はＧｌｕであり， 位置１９のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，ＡｌａまたはＧｌｕであり， 位置２０のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ａｌａ，Ａ ｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＴｈｒまたはＭｅｔであり， 位置２１のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＧｌｎまたはＶａｌ であり， 位置２２のＸａａは，ＡｓｐまたはＬｅｕであり， 位置２３のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，ＴｒｐまたはＩｌｅであり， 位置２４のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置２７のＸａａは，Ａｓｎ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，ＭｅｔまたはＰｒｏ であり， 位置２８のＸａａは，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｉ ｌｅ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置３０のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置３１のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ｌｙｓ，Ａ ｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，ＳｅｒまたはＴｒｐであり， 位置３２のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ，Ａ ｓｎ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ，またはＧｌ ｙであり， 位置３３のＸａａは，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＨｉｓであり， 位置３５のＸａａは，Ｍｅｔ，ＡｓｎまたはＡｓｐであり， 位置３６のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＡｓｐ であり， 位置３７のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置３８のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｙであり， 位置３９のＸａａは，Ｌｅｕ，ＭｅｔまたはＰｈｅであり， 位置４０のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置４１のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置４２のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｇｌｙ，Ｃｙｓ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ａ ｒｇ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＬｙｓであり， 位置４５のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，ＬｅｕまたはＡｒｇであり， 位置４６のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＡｓｎまたはＴｈｒであり， 位置４７のＸａａは，ＰｈｅまたはＳｅｒであり， 位置４８のＸａａは，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ，ＴｈｒまたはＩｌｅであり， 位置４９のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，ＨｉｓまたはＶａｌ であり， 位置５０のＸａａは，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置５１のＸａａは，Ｖａｌ，Ｔｈｒ，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置５２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，Ｇｌｕまた はＳｅｒであり， 位置５３のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｉｌｅまた はＨｉｓであり， 位置５４のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｉｌｅ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置５５のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇまた はＧｌｙであり， 位置５６のＸａａは，ＡｓｎまたはＰｒｏであり， 位置５７のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｇｌｕ，Ｔｈｒまた はＧｌｎであり， 位置５８のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ａｓｎ，Ａ ｒｇまたはＡｓｐであり， 位置５９のＸａａは，Ａｌａ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｔ ｈｒ，ＡｒｇまたはＰｒｏであり， 位置６０のＸａａは，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置６１のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，ＳｅｒまたはＧｌｎであり， 位置６２のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ，Ｇ ｌｙまたはＡｓｐであり， 位置６３のＸａａは，Ｉｌｅ，ＳｅｒまたはＬｅｕであり， 位置６５のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ，Ｉ ｌｅまたはＡｓｐであり， 位置６６のＸａａは，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕまた はＡｒｇであり， 位置６７のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置６８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ａ ｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｔｙｒ，またはＶａ ｌであり， 位置６９のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，ＴｒｐまたはＭｅｔであり， 位置７１のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置７３のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置７４のＸａａは，Ａｌａ，ＡｒｇまたはＴｒｐであり， 位置７５のＸａａは，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，ＡｓｎまたはＳｅｒ であり， 位置７６のＸａａは，Ａｌａ，ＡｓｐまたはＭｅｔであり， 位置７７のＸａａは，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕまた はＡｓｐであり， 位置７８のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置７９のＸａａは，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｌｅｕまた はＡｒｇであり， 位置８１のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ａ ｓｎ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＳｅｒまたはＴｈｒであり， 位置８２のＸａａは，ＰｒｏまたはＴｙｒであり， 位置８３のＸａａは，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＡｌａであり， 位置８４のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｔ ｈｒ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｖａｌまた はＰｒｏであり， 位置８５のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，ＶａｌまたはＰｈｅであり， 位置８６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ，Ｇｌｎ， ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置８７のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｖ ａｌ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒであり， 位置８８のＸａａは，Ｇｌｙ，Ｇｌｕ，ＬｙｓまたはＳｅｒであり， 位置９０のＸａａは，Ｔｒｐ，Ｖａｌ，Ｔｙｒ，ＭｅｔまたはＬｅｕであり， 位置９１のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ，Ｇ ｌｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置９２のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＧｌｙであり， 位置９４のＸａａは，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｎ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置９５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，ＳｅｒまたはＧｌｙ であり， 位置９８のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，ＨｉｓまたはＳｅｒ ，であり， 位置１００のＸａａは，ＴｙｒまたはＴｒｐであり， 位置１０１のＸａａは，ＬｅｕまたはＡｌａであり， 位置１０２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ， Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，またはＩ ｌｅであり， 位置１０３のＸａａは，Ｔｈｒ，ＳｅｒまたはＡｓｎであり， 位置１０５のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，またはＴ ｙｒであり， 位置１０６のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｖａｌ，またはＧ ｌｎであり， 位置１０７のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ， ＡｓｐまたはＧｌｙであり， 位置１０８のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｐｈｅ， Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，ＴｙｒまたはＣｙｓであり， 位置１０９のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ， ＴｙｒまたはＬｅｕであり， またさらに位置１のアミノ酸に先行するＭｅｔ−またはＭｅｔ−Ａｌａ−をも っていてもよく；Ｘａａによって示されている４〜４４個のアミノ酸はネイティ ブな（１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる］ で示される（１５−１２５）ヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチド， または実質的に同一の構造および実質的に同一の生物活性を有するポリペプチド ． ９．式VII ［式中， 位置３のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，ＭｅｔまたはＧｌｎであり， 位置４のＸａａは，Ａｓｎ，ＨｉｓまたはＩｌｅであり， 位置５のＸａａは，ＭｅｔまたはＩｌｅであり， 位置７のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置９のＸａａは，Ｉｌｅ，Ａｌａ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置１０のＸａａは，Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＬｅｕであり， 位置１１のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，ＧｌｎまたはＡｌａであり， 位置１２のＸａａは，ＨｉｓまたはＡｌａであり， 位置１５のＸａａは，Ｇｌｎ，ＡｓｎまたはＶａｌであり， 位置１６のＸａａは，Ｐｒｏ，ＧｌｙまたはＧｌｎであり， 位置１７のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，ＧｌｙまたはＧｌｎであり， 位置１８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａまた はＧｌｕであり， 位置１９のＸａａは，ＰｒｏまたはＧｌｕであり， 位置２０におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ａｌａ ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＴｈｒまたはＭｅｔであり， 位置２１のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＧｌｎまたはＶａｌ であり， 位置２３のＸａａは，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，ＰｒｏまたはＴｒｐであり， 位置２４のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置２８におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置３０のＸａａは，ＡｓｐまたはＧｌｕであり， 位置３１におけるＸａａはＧｌｎ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置３２におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，ＶａｌまたはＣｙｓであ り， 位置３６のＸａａは，Ｇｌｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＡｓｐであり， 位置３７のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置４０のＸａａは，ＡｒｇまたはＡｌａであり， 位置４１のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置４２におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ａｌａ，Ａｒｇ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＬｙｓであり， 位置４６のＸａａは，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置４８のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＴｈｒまたはＩｌｅであり， 位置４９のＸａａは，ＡｒｇまたはＬｙｓであり， 位置５０のＸａａは，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置５１のＸａａは，ＶａｌまたはＴｈｒであり， 位置５２のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置５３のＸａａは，Ｓｅｒ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置５４のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置５５におけるＸａａはＧｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ ，またはＧｌｙであり， 位置５７のＸａａは，Ａｌａ，ＰｒｏまたはＡｒｇであり， 位置５８のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，ＡｒｇまたはＡｓｐであり， 位置５９のＸａａは，ＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置６２のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏまた はＧｌｙであり， 位置６３のＸａａは，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置６５におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ ，Ｉｌｅ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置６６のＸａａは，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置６８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｔｙｒ またはＶａｌであり， 位置６９のＸａａは，ＰｒｏまたはＴｈｒであり， 位置７１のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置７３のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置７４のＸａａは，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置７７のＸａａは，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置７９のＸａａは，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｌｅｕまた はＡｒｇであり， 位置８１におけるＸａａはＨｉｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ ，Ａｓｎ，Ｐｈｅ，ＳｅｒまたはＴｈｒであり， 位置８２のＸａａは，ＰｒｏまたはＴｙｒであり， 位置８３のＸａａは，ＩｌｅまたはＶａｌであり， 位置８４におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｔｈｒ ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ またはＰｒｏであり， 位置８５のＸａａは，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置８６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｉｌｅ，Ｇｌｎ，ＰｒｏまたはＳｅｒ であり， 位置８７におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ ，Ａｓｎ，ＩＩｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒであり， 位置９０のＸａａは，ＴｒｐまたはＬｅｕであり， 位置９１におけるＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ，Ｇｌｎ ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，ＡｓｐまたはＨｉｓであり， 位置９２のＸａａは，ＧｌｕまたはＧｌｙであり， 位置９４のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置９５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置９８のＸａａは，Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＧｌｎであり， 位置１００のＸａａは，ＴｙｒまたはＴｒｐであり， 位置１０１のＸａａは，ＬｅｕまたはＡｌａであり， 位置１０２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ａｌａ， Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，ＴｙｒまたはＩｌｅであり， 位置１０３のＸａａは，ＴｈｒまたはＳｅｒであり， 位置１０６のＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，ＶａｌまたはＧｌｎ であり， 位置１０７のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｓｐま たはＧｌｙであり， 位置１０８のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ｐｈｅ， Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，ＴｙｒまたはＣｙｓであり， 位置１０９のＸａａは，Ａｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ， ＴｙｒまたはＬｅｕであり， また，さらに位置１のアミノ酸に先行するＭｅｔ−またはＭｅｔ−Ａｌａ−を もっていてもよく；Ｘａａで示されている４〜３５個のアミノ酸はネイティブな （１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる］で示 される「請求項７」に記載の（１５−１２５）ヒトインターロイキン−３突然変 異ポリペプチド． １０．式VIII ［式中， 位置３のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，ＡｓｐまたはＧｌｎであり， 位置４のＸａａは，Ａｓｎ，ＨｉｓまたはＩｌｅであり， 位置９のＸａａは，Ｉｌｅ，Ａｌａ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置１１のＸａａは，Ｔｈｒ，ＨｉｓまたはＧｌｎであり， 位置１２のＸａａは，ＨｉｓまたはＡｌａであり， 位置１５のＸａａは，ＧｌｎまたはＡｓｎであり， 位置１６のＸａａは，ＰｒｏまたはＧｌｙであり， 位置１８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置２０におけるＸａａはＬｅｕ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ ，Ｇｌｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，ＴｈｒまたはＭｅｔであり， 位置２１のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，ＡｓｎまたはＰｒｏであり， 位置２４のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置２８におけるＸａａはＧｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，ＴｙｒまたはＡｒｇであり， 位置３１におけるＸａａはＧｌｎ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｓｎ ，ＧｌｕまたはＬｙｓであり， 位置３２におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ ，Ｈｉｓ，ＶａｌまたはＴｈｒであり， 位置３６のＸａａは，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＡｓｐであり， 位置３７のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置４１のＸａａは，Ａｒｇ，ＬｅｕまたはＧｌｙであり， 位置４２におけるＸａａはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｖａｌ ， ＬｅｕまたはＧｌｎであり， 位置４８のＸａａは，Ａｓｎ，ＰｒｏまたはＴｈｒであり， 位置５０のＸａａは，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置５１のＸａａは，ＶａｌまたはＴｈｒであり， 位置５３のＸａａは，ＳｅｒまたはＰｈｅであり， 位置５４のＸａａは，ＬｅｕまたはＰｈｅであり， 位置５５のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｌａ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置６２のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，ＰｒｏまたはＧｌｙであり， 位置６３のＸａａは，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置６５のＸａａは，Ｌｙｓ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｒｇ，ＩｌｅまたはＧｌｙ であり， 位置６６のＸａａは，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，ＧｌｕまたはＡｒｇであり， 位置６８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ａｓｎ ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，ＴｙｒまたはＶａｌであ り， 位置７３のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置７４のＸａａは，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置７７のＸａａは，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置７９のＸａａは，Ｔｈｒ，ＡｓｐまたはＡｌａであり， 位置８１におけるＸａａはＨｉｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ ，ＳｅｒまたはＴｈｒであり， 位置８４におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ａｒｇ ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，ＶａｌまたはＬｅｕであ り， 位置８５のＸａａは，ＩｌｅまたはＬｅｕであり， 位置８６のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置８７におけるＸａａはＡｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｐｒｏ ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒであり， 位置９１のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，ＩｌｅまたはＡｓｐであり， 位置９４のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置９５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置９８のＸａａは，ＴｈｒまたはＧｌｎであり， 位置１０２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｖａｌ，ＴｒｐまたはＩｌｅであり， 位置１０３のＸａａはＴｈｒ，Ａｌａ．Ｈｉｓ，Ｐｈｅ，ＴｙｒまたはＳｅｒ であり， 位置１０６のＸａａはＡｓｎ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，ＶａｌまたはＧｌｎ であり， 位置１０７のＸａａはＡｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＡｓｐであり， 位置１０８のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｍｅｔ，Ｔｒｐ，Ｐｈｅ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ， ＩｌｅまたはＴｙｒであり， 位置１０９のＸａａはＡｌａ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，ＳｅｒまたはＬｅｕであり， また，さらに位置１のアミノ酸に先行するＭｅｔ−またはＭｅｔ−Ａｌａ−を もっていてもよく；Ｘａａによって示されている４〜２６個のアミノ酸はネイテ ィブ（１−１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる］ で示される「請求項７」に記載の（１５−１２５）ヒトインターロイキン−３突 然変異ポリペプチド，または実質的に同一の構造および実質的に同一の生物活性 を有するポリペプチド． １１．式中，位置１７のＸａａは，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ｍｅｔ，Ｇｌｎ またはＡｒｇであり， 位置１８のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ａｒｇまた はＧｌｎであり， 位置１９のＸａａは，Ｍｅｔ，Ａｒｇ，Ｇｌｙ，ＡｌａまたはＣｙｓであり， 位置２０におけるＸａａはＩｌｅ，Ｃｙｓ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ またはＡｌａであり， 位置２１のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｈｅ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｙまた はＶａｌであり， 位置２２のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｒｐ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｈｉｓまた はＧｌｙであり， 位置２３におけるＸａａはＩｌｅ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｔｒｐ，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ ，ＳｅｒまたはＡｒｇであり， 位置２４のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｇｌｙ，ＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置２５のＸａａは，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｐｒｏまた はＡｌａであり， 位置２６のＸａａは，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙ，ＡｌａまたはＴｙｒ であり， 位置２７のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，ＳｅｒまたはＡｌａ であり， 位置２８のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏ，Ｖａｌまた はＴｒｐであり， 位置２９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｌｏｈ，Ｐｒｏ，ＡｒｇまたはＶａｌ であり， 位置３０におけるＸａａはＰｒｏ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｇｌｎ ，Ｓｅｒ，ＬｅｕまたはＬｙｓであり， 位置３１のＸａａは，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，ＬｅｕまたはＧｌｎ であり， 位置３２のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａまた はＧｌｕであり， 位置３３のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，ＴｈｒまたはＧｌｕであり， 位置３４のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置３５のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，ＰｒｏまたはＧｌｎ であり， 位置３６のＸａａは，Ａｓｐ，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置３７のＸａａは，Ｐｈｅ，ＳｅｒまたはＰｒｏであり， 位置３８のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置４０のＸａａは，Ｌｅｕ，ＴｒｐまたはＡｒｇであり， 位置４１のＸａａは，Ａｓｎ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｍｅｔまた はＰｒｏであり， 位置４２のＸａａは，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，ＣｙｓまたはＡｌａであり， 位置４２におけるＸａａはＧｌｕ，Ａｓｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｐｈｅ，Ａｓｐ ， Ａｌａ，ＣｙｓまたはＳｅｒであり， 位置４４におけるＸａａはＡｓｐ，Ｓｅｒ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ ，Ｍｅｔ，ＴｒｐまたはＰｒｏであり， 位置４５におけるＸａａはＧｌｎ，Ｐｒｏ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ ，Ｔｈｒ，ＬｙｓまたはＴｒｐであり， 位置４６のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，ＣｙｓまたはＧｌｙ であり， 位置４７のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ａｒｇ，ＰｒｏまたはＨｉｓ であり， 位置４８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅまた はＡｓｎであり， 位置４９におけるＸａａはＭｅｔ，Ａｒｇ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏ，Ａｓｎ ，ＨｉｓまたはＡｓｐであり， 位置５０のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，ＡｓｐまたはＴｙｒであり， 位置５１のＸａａは，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置５２のＸａａは，Ａｓｎ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒまた はＴｈｒであり， 位置５３におけるＸａａはＬｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ ，Ｌｙｓ，ＳｅｒまたはＭｅｔであり， 位置５４におけるＸａａはＡｒｇ，Ａｓｐ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ｖａｌ，Ｔｈｒ ，ＧｌｎまたはＬｅｕであり， 位置５５のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｓｅｒ，ＬｅｕまたはＧｌｙ であり， 位置５６のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｇｌｙ，Ｃｙｓ，Ｓｅｒ，ＧｌｎまたはＬｙｓ であり， 位置５７のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｙであり， 位置５８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｖａｌまた はＣｙｓであり， 位置５９のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，ＰｒｏまたはＡｒｇ であり， 位置６０のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，ＡｓｎまたはＴｈｒであり， 位置６１のＸａａは，Ｐｈｅ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ，Ａｒｇまた はＳｅｒであり， 位置６２におけるＸａａはＡｓｎ，Ｈｉｓ，Ｖａｌ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ またはＩｌｅであり， 位置６３のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｙｒ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，ＰｒｏまたはＶａｌ であり， 位置６４のＸａａは，Ａｌａ，Ａｓｎ，ＳｅｒまたはＬｙｓであり， 位置６５のＸａａは，Ｖａｌ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｐｈｅまた はＳｅｒであり， 位置６６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ａｓｎ，ＧｌｕまたはＳｅｒ であり， 位置６７におけるＸａａはＳｅｒ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ ，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＨｉｓであり， 位置６８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ｓｅｒ，Ｐｈｅ，Ｔｈｒまた はＨｉｓであり， 位置６９におけるＸａａはＧｌｎ，Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ａｒｇ，Ｔｒｐ ，ＧｌｙまたはＬｅｕであり， 位置７０のＸａａは，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，ＰｒｏまたはＡｌａ であり， 位置７１におけるＸａａはＡｌａ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｇｌｕ，Ｔｈｒ ，Ｇｌｎ，ＴｒｐまたはＡｓｎであり， 位置７２におけるＸａａはＳｅｒ，Ｇｌｕ，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ａｓｎ ，ＡｒｇまたはＡｓｐであり， 位置７３におけるＸａａはＡｌａ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ ，ＴｈｒまたはＡｒｇであり， 位置７４のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，ＧｌｙまたはＡｌａ であり， 位置７５におけるＸａａはＧｌｕ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｔｒｐ ，Ａｒｇ，ＳｅｒまたはＬｅｕであり， 位置７６におけるＸａａはＳｅｒ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ａｓｎ，Ｔｒｐ，Ｇｌｕ ，Ｐｒｏ，ＧｌｙまたはＡｓｐであり， 位置７７のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，ＡｒｇまたはＴｈｒであり， 位置７８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，ＧｌｙまたはＡｒｇ であり， 位置７９におけるＸａａはＬｙｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ｉｌｅ またはＡｓｐであり， 位置８０におけるＸａａはＡｓｎ，Ｔｒｐ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ またはＡｒｇであり， 位置８１におけるＸａａはＬｅｕ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｔｒｐ，Ａｒｇ またはＬｙｓであり， 位置８２のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｔｒｐ，ＡｒｇまたはＡｓｐ であり， 位置８３のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｔｒｐ，ＡｒｇまたはＭｅｔであり， 位置８４のＸａａは，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，ＭｅｔまたはＶａｌ であり， 位置８５のＸａａは，Ｌｅｕ，ＡｓｎまたはＧｌｎであり， 位置８６のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｃｙｓ，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＬｙｓであり， 位置８７のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，ＴｒｐまたはＧｌｙであり， 位置８８のＸａａは，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置８９におけるＸａａはＴｈｒ，Ａｓｐ，Ｃｙｓ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ ，ＨｉｓまたはＡｓｎであり， 位置９０のＸａａは，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ａｓｐ，ＩｌｅまたはＭｅｔであり， 位置９１におけるＸａａはＡｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ またはＨｉｓであり， 位置９２におけるＸａａはＰｒｏ，Ｐｈｅ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ またはＬｅｕであり， 位置９３におけるＸａａはＴｈｒ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ ，ＬｅｕまたはＡｒｇであり， 位置９４におけるＸａａはＡｒｇ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ またはＰｒｏであり， 位置９５におけるＸａａはＨｉｓ，Ｇｌｎ，Ｐｒｏ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ またはＴｙｒであり， 位置９６のＸａａは，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｇｌｙ，ＩｌｅまたはＴｈｒ であり， 位置９７のＸａａは，Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置９８におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ ，ＴｈｒまたはＰｒｏであり， 位置９９におけるＸａａはＩｌｅ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ ，ＰｈｅまたはＨｉｓであり， 位置１００のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ， ＧｌｎまたはＰｒｏであり， 位置１０１のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｔｈｒ， Ｖａｌ，ＴｙｒまたはＧｌｎであり， 位置１０２のＸａａは，Ｇｌｙ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒま たはＰｒｏであり， 位置１０３のＸａａは，ＡｓｐまたはＳｅｒであり， 位置１０４のＸａａは，Ｔｒｐ，Ｖａｌ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｔｈｒ，Ｍｅｔ， Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ａｌａ，ＰｈｅまたはＧｌｙであり， 位置１０５のＸａａは，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｐｈｅ，Ｓｅｒ，Ｔｒｐ， Ｇｌｎ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｉｌｅ，またはＨｉｓであり， 位置１０６のＸａａは，Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｉｌｅ， ＧｌｙまたはＰｒｏであり， 位置１０８のＸａａはＡｒｇ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，ＩｌｅまたはＰｒｏ であり， 位置１０９のＸａａは，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ， ＳｅｒまたはＧｌｙである「請求項７」に記載の（１５−１２５）ヒトインター ロイキン−３突然変異ポリペプチド． １２．式中，位置２８のＸａａは，Ｇｌｙ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ ，Ｍｅｔ，ＴｙｒまたはＡｌａであり， 位置３１のＸａａは，Ｇｌｎ，Ｖａｌ，ＭｅｔまたはＡｓｎであり， 位置３２のＸａａは，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｇｌｎ，ＨｉｓまたはＶａｌ であり， 位置３６のＸａａは，ＧｌｕまたはＡｓｐであり， 位置３７のＸａａは，Ａｓｎ，ＰｒｏまたはＴｈｒであり， 位置４８のＸａａは，ＡｓｎまたはＰｒｏであり， 位置６２のＸａａは，ＳｅｒまたはＰｒｏであり， 位置６８におけるＸａａはＬｅｕ，Ｔｒｐ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ ，Ｐｈｅ，ＳｅｒまたはＴｙｒであり， 位置８１のＸａａは，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，ＡｓｎまたはＳｅｒであり， 位置８４におけるＸａａはＨｉｓ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ ，Ｌｙｓ，Ｍｅｔ，Ｓｅｒ，ＴｙｒまたはＶａｌであり， 位置８６のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置８７のＸａａは，Ａｓｐ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ．Ａｓｎ，ＩｌｅまたはＬｅｕ であり， 位置９１のＸａａは，ＡｓｎまたはＰｒｏであり， 位置９４のＸａａは，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置１０２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｖａｌ，Ｔｒｐ，Ａｌａ，Ｈｉｓ，Ｐｈｅま たはＴｙｒであり， 位置１０７のＸａａは，ＡｌａまたはＩｌｅであり， 位置１０８のＸａａは，ＧｌｎまたはＩｌｅであり， 位置１０９のＸａａは，Ａｌａ，ＭｅｔまたはＧｌｕである「請求項７」に記 載のヒトインターロイキン−３突然変異ポリペプチド． １３．式 （式中， ｍは０または１であり， 位置１８のＸａａは，ＡｓｎまたはＩｌｅであり， 位置１９のＸａａは，Ｍｅｔ，ＡｌａまたはＩｌｅであり， 位置２０のＸａａは，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＩｌｅであり， 位置２３のＸａａは，Ｉｌｅ，ＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置２５のＸａａは，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置２９のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，ＶａｌまたはＩｌｅであり， 位置３２のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，ＡｓｎまたはＡｒｇであり， 位置３４のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置３７のＸａａは，Ｐｈｅ，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置３８のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置４２のＸａａは，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＡｓｐまたはＡｓｎであり， 位置４５のＸａａは，Ｇｌｎ，ＶａｌまたはＭｅｔであり， 位置４６のＸａａは，ＡｓｐまたはＳｅｒであり， 位置４９のＸａａは，Ｍｅｔ，Ｉｌｅ，ＬｅｕまたはＡｓｐであり， 位置５０のＸａａは，ＧｌｕまたはＡｓｐであり， 位置５１のＸａａは，Ａｓｎ，ＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置５５のＸａａは，Ａｒｇ，ＬｅｕまたはＴｈｒであり， 位置５６のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置５９のＸａａは，ＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置６０のＸａａは，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置６２のＸａａは，Ａｓｎ，ＶａｌまたはＰｒｏであり， 位置６３のＸａａは，ＡｒｇまたはＨｉｓであり， 位置６５のＸａａは，ＶａｌまたはＳｅｒであり， 位置６７のＸａａは，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，ＨｉｓまたはＧｌｎであり， 位置６９のＸａａは，ＧｌｎまたはＧｌｕであり， 位置７３のＸａａは，ＡｌａまたはＧｌｙであり， 位置７６のＸａａは，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置７９のＸａａは，Ｌｙｓ，ＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置８２のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置８５のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置８７のＸａａは，Ｌｅｕ，ＳｅｒまたはＴｙｒであり， 位置８８のＸａａは，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置９１のＸａａは，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置９３のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置９５のＸａａは，ＨｉｓまたはＴｈｒであり， 位置９８のＸａａは，Ｈｉｓ，ＩｌｅまたはＴｈｒであり， 位置１００のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置１０１のＸａａは，Ａｓｐ，ＡｌａまたはＭｅｔであり， 位置１０５のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｕであり， 位置１０９のＸａａは，Ａｒｇ，ＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置１１２のＸａａは，ＴｈｒまたはＧｌｎであり， 位置１１６のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｖａｌ，ＴｒｐまたはＳｅｒであり， 位置１１７のＸａａは，ＴｈｒまたはＳｅｒであり， 位置１２０のＸａａは，Ａｓｎ，ＧｌｎまたはＨｉｓであり， 位置１２３のＸａａは，ＡｌａまたはＧｌｕである． ただしＸａａで示されている４個〜２６個のアミノ酸はネイティブなヒトイン ターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる）のポリペプチドまたは実質的 に同一の構造および実質的に同一の生物活性を有するポリペプチド． １４．式中，位置１８のＸａａはＩｌｅであり， 位置１９のＸａａはＡｌａまたはＩｌｅであり， 位置２０のＸａａはＰｒｏまたはＬｅｕであり， 位置２３のＸａａはＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置２５のＸａａはＨｉｓであり， 位置２９のＸａａはＡｒｇ，ＶａｌまたはＩｌｅであり， 位置３２のＸａａはＡｌａ，ＡｓｎまたはＡｒｇであり， 位置３４のＸａａはＳｅｒであり， 位置３７のＸａａはＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置３８のＸａａはＡｌａであり， 位置４２のＸａａはＡｌａ，Ｓｅｒ，ＡｓｐまたはＡｓｎであり， 位置４５のＸａａはＶａｌまたはＭｅｔであり， 位置４６のＸａａはＳｅｒである「請求項１３」に記載のポリペプチド． １５．式中，位置４９のＸａａはＩｌｅ，ＬｅｕまたはＡｓｐであり， 位置５０のＸａａはＡｓｐであり， 位置５１のＸａａはＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置５５のＸａａはＬｅｕまたはＴｈｒであり， 位置５６のＸａａはＳｅｒであり， 位置５９のＸａａはＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置６０のＸａａはＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置６２のＸａａはＶａｌまたはＰｒｏであり， 位置６３のＸａａはＨｉｓであり， 位置６５のＸａａはＳｅｒであり， 位置６７のＸａａはＡｓｎ，ＨｉｓまたはＧｌｎであり， 位置６９のＸａａはＧｌｕである「請求項１３」に記載のポリペプチド． １６．式中，位置７３のＸａａはＧｌｙであり， 位置７６のＸａａはＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置７９のＸａａはＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置８２のＸａａはＧｌｎ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置８５のＸａａはＶａｌであり， 位置８７のＸａａはＳｅｒまたはＴｙｒであり， 位置８８のＸａａはＴｒｐであり， 位置９１のＸａａはＰｒｏであり， 位置９３のＸａａはＳｅｒであり， 位置９５のＸａａはＴｈｒであり， 位置９８のＸａａはＩｌｅまたはＴｈｒであり， 位置１００のＸａａはＡｒｇであり， 位置１０１のＸａａはＡｌａまたはＭｅｔであり， 位置１０５のＸａａはＧｌｕである「請求項１３」に記載のポリペプチド １７．式中，位置１０９のＸａａはＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置１１２のＸａａはＧｌｎであり， 位置１１６のＸａａはＶａｌ，ＴｒｐまたはＳｅｒであり， 位置１１７のＸａａはＳｅｒであり， 位置１２０のＸａａはＧｌｕまたはＨｉｓであり， 位置１２３のＸａａはＧｌｕである「請求項１３」に記載のポリペプチド． １８．式中，位置１８のＸａａはＩｌｅであり， 位置１９のＸａａはＡｌａまたはＩｌｅであり， 位置２０のＸａａはＰｒｏまたはＬｅｕであり， 位置２３のＸａａはＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置２５のＸａａはＨｉｓであり， 位置２９のＸａａはＡｒｇ，ＶａｌまたはＩｌｅであり， 位置３２のＸａａはＡｌａ，ＡｓｎまたはＡｒｇであり， 位置３４のＸａａはＳｅｒであり， 位置３７のＸａａはＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置３８のＸａａはＡｌａであり， 位置４２のＸａａはＡｌａ，Ｓｅｒ，ＡｓｐまたはＡｓｎであり， 位置４５のＸａａはＶａｌまたはＭｅｔであり， 位置４６のＸａａはＳｅｒであり， 位置４９のＸａａはＩｌｅ，ＬｅｕまたはＡｓｐであり， 位置５０のＸａａはＡｓｐであり， 位置５１のＸａａはＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置５５のＸａａはＬｅｕまたはＴｈｒであり， 位置５６のＸａａはＳｅｒであり， 位置５９のＸａａはＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置６０のＸａａはＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置６２のＸａａはＶａｌまたはＰｒｏであり， 位置６３のＸａａはＨｉｓであり， 位置６５のＸａａはＳｅｒであり， 位置６７のＸａａはＡｓｎ，ＨｉｓまたはＧｌｎであり， 位置６９のＸａａはＧｌｕである「請求項１３」に記載のポリペプチド． １９．式中，位置７３のＸａａはＧｌｙであり， 位置７６のＸａａはＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置７９のＸａａはＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置８２のＸａａはＧｌｎ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置８５のＸａａはＶａｌであり， 位置８７のＸａａはＳｅｒまたはＴｙｒであり， 位置８８のＸａａはＴｒｐであり， 位置９１のＸａａはＰｒｏであり， 位置９３のＸａａはＳｅｒであり， 位置９５のＸａａはＴｈｒであり， 位置９８のＸａａはＩｌｅまたはＴｈｒであり， 位置１００のＸａａはＡｒｇであり， 位置１０１のＸａａはＡｌａまたはＭｅｔであり， 位置１０５のＸａａはＧｌｕでり， 位置１０９のＸａａはＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置１１２のＸａａはＧｌｎであり， 位置１１６のＸａａはＶａｌ，ＴｒｐまたはＳｅｒであり， 位置１１７のＸａａはＳｅｒであり， 位置１２０のＸａａはＧｌｕまたはＨｉｓであり， 位置１２３のＸａａはＧｌｕである「請求項１３」に記載のポリペプチド． ２０．式， ［式中， ｍは０または１であり， ｎは０または１であり， ｐは０または１であり， 位置４のＸａａは，ＡｓｎまたはＩｌｅであり， 位置５のＸａａは，Ｍｅｔ，ＡｌａまたはＩｌｅであり， 位置６のＸａａは，Ｉｌｅ，ＰｒｏまたはＬｅｕであり， 位置９のＸａａは，Ｉｌｅ，ＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置１１のＸａａは，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置１５のＸａａは，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，ＶａｌまたはＩｌｅであり， 位置１８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ａｌａ，ＡｓｎまたはＡｒｇであり， 位置２０のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置２３のＸａａは，Ｐｈｅ，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置２４のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｌａであり， 位置２８のＸａａは，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，ＡｓｐまたはＡｓｎであり， 位置３１のＸａａは，Ｇｌｎ，ＶａｌまたはＭｅｔであり， 位置３２のＸａａは，ＡｓｐまたはＳｅｒであり， 位置３５のＸａａは，Ｍｅｔ，ＩｌｅまたはＡｓｐであり， 位置３６のＸａａは，ＧｌｕまたはＡｓｐであり， 位置３７のＸａａは，Ａｓｎ，ＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置４１のＸａａは，Ａｒｇ，ＬｅｕまたはＴｈｒであり， 位置４２のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置４５のＸａａは，ＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置４６のＸａａは，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置４８のＸａａは，Ａｓｎ，ＶａｌまたはＰｒｏであり， 位置４９のＸａａは，ＡｒｇまたはＨｉｓであり， 位置５１のＸａａは，ＶａｌまたはＳｅｒであり， 位置５３のＸａａは，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，ＨｉｓまたはＧｌｎであり， 位置５５のＸａａは，ＧｌｎまたはＧｌｕであり， 位置５９のＸａａは，ＡｌａまたはＧｌｙであり， 位置６２のＸａａは，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置６５のＸａａは，Ｌｙｓ，ＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置６７のＸａａは，Ｌｅｕ，ＧｌｕまたはＶａｌであり， 位置６８のＸａａは，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置７１のＸａａは，ＬｅｕまたはＶａｌであり， 位置７３のＸａａは，Ｌｅｕ，ＳｅｒまたはＴｙｒであり， 位置７４のＸａａは，ＡｌａまたはＴｒｐであり， 位置７７のＸａａは，ＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置７９のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置８１のＸａａは．ＨｉｓまたはＴｈｒであり， 位置８４のＸａａは，Ｈｉｓ，ＩｌｅまたはＴｈｒであり， 位置８６のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置８７のＸａａは，Ａｓｐ，ＡｌａまたはＭｅｔであり， 位置９１のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｕであり， 位置９５のＸａａは，Ａｒｇ，ＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置９８のＸａａは，ＴｈｒまたはＧｌｎであり， 位置１０２のＸａａは，Ｌｙｓ，Ｖａｌ，ＴｒｐまたはＳｅｒであり， 位置１０３のＸａａは，ＴｈｒまたはＳｅｒであり， 位置１０６のＸａａは，Ａｓｎ，ＧｌｎまたはＨｉｓであり， 位置１０９のＸａａは，ＡｌａまたはＧｌｕである． ただし，Ｘａａで示されている４〜２６個のアミノ酸はネイティブな（１５− １２５）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる］のポリペプ チド，または実質的に同一の構造および実質的に同一の生物活性を有するポリペ プチド． ２１．式中，位置４のＸａａはＩｌｅであり， 位置５のＸａａはＡｌａまたはＩｌｅであり， 位置６のＸａａはＰｒｏまたはＬｅｕであり， 位置９のＸａａはＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置１１のＸａａはＨｉｓであり， 位置１５のＸａａはＡｒｇ，ＶａｌまたはＩｌｅであり， 位置１８のＸａａはＡｌａ，ＡｓｎまたはＡｒｇであり， 位置２０のＸａａはＳｅｒであり， 位置２３のＸａａはＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置２４のＸａａはＡｌａであり， 位置２８のＸａａはＡｌａ，Ｓｅｒ，ＡｓｐまたはＡｓｎであり， 位置３１のＸａａはＶａｌまたはＭｅｔであり， 位置３２のＸａａはＳｅｒである「請求項２０」に記載のポリペプチド． ２２．式中，位置３５のＸａａはＩｌｅ，ＬｅｕまたはＡｓｐであり， 位置３６のＸａａはＡｓｐであり， 位置３７のＸａａはＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置４１のＸａａはＬｅｕまたはＴｈｒであり， 位置４２のＸａａはＳｅｒであり， 位置４５のＸａａはＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置４６のＸａａはＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置４８のＸａａはＶａｌまたはＰｒｏであり， 位置４９のＸａａはＨｉｓであり， 位置５１のＸａａはＳｅｒであり， 位置５３のＸａａはＡｓｎ，ＨｉｓまたはＧｌｎであり， 位置５５のＸａａはＧｌｕである「請求項２０」に記載のポリペプチド． ２３．位置５９のＸａａはＧｌｙであり， 位置６２のＸａａはＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置６５のＸａａはＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置６７のＸａａはＧｌｕまたはＶａｌであり， 位置６８のＸａａはＧｌｕ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置７１のＸａａはＶａｌであり， 位置７３のＸａａはＳｅｒまたはＴｙｒであり， 位置７４のＸａａはＴｒｐであり， 位置７７のＸａａはＰｒｏであり， 位置７９のＸａａはＳｅｒであり， 位置８１のＸａａはＴｈｒであり， 位置８４のＸａａはＩｌｅまたはＴｈｒであり， 位置８６のＸａａはＡｒｇであり， 位置８７のＸａａはＡｌａまたはＭｅｔであり， 位置９１のＸａａはＧｌｕである「請求項２０」に記載のポリペプチド． ２４．式中，位置９５のＸａａはＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置９８のＸａａはＧｌｎであり， 位置１０２のＸａａはＶａｌ，ＴｒｐまたはＳｅｒであり， 位置１０３のＸａａはＳｅｒであり， 位置１０６のＸａａはＧｌｎまたはＨｉｓであり， 位置１０９のＸａａはＧｌｕである「請求項２０」に記載のポリペプチド． ２５．位置４のＸａａはＩｌｅであり， 位置５のＸａａはＡｌａまたはＩｌｅであり， 位置６のＸａａはＰｒｏまたはＬｅｕであり， 位置９のＸａａはＡｌａまたはＬｅｕであり， 位置１１のＸａａはＨｉｓであり， 位置１５のＸａａはＡｒｇ，ＶａｌまたはＩｌｅであり， 位置１８のＸａａはＡｌａ，ＡｓｎまたはＡｒｇであり， 位置２０のＸａａはＳｅｒであり， 位置２３のＸａａはＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置２４のＸａａはＡｌａであり， 位置２８のＸａａはＡｌａ，Ｓｅｒ，ＡｓｐまたはＡｓｎであり， 位置３１のＸａａはＶａｌまたはＭｅｔであり， 位置３２のＸａａはＳｅｒであり， 位置３５のＸａａはＩｌｅ，ＬｅｕまたはＡｓｐであり， 位置３６のＸａａはＡｓｐであり， 位置３７のＸａａはＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置４１のＸａａはＬｅｕまたはＴｈｒであり， 位置４２のＸａａはＳｅｒであり， 位置４５のＸａａはＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置４６のＸａａはＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置４８のＸａａはＶａｌまたはＰｒｏであり， 位置４９のＸａａはＨｉｓであり， 位置５１のＸａａはＳｅｒであり， 位置５３のＸａａはＡｓｎ，ＨｉｓまたはＧｌｎであり， 位置５５のＸａａはＧｌｕである「請求項２０」に記載のポリペプチド． ２６．式中，位置５９のＸａａはＧｌｙであり， 位置６２のＸａａはＡｌａまたはＰｒｏであり， 位置６５のＸａａはＡｒｇまたはＳｅｒであり， 位置６７のＸａａはＧｌｕまたはＶａｌであり， 位置６８のＸａａはＧｌｕ，ＶａｌまたはＴｒｐであり， 位置７１のＸａａはＶａｌであり， 位置７３のＸａａはＳｅｒまたはＴｙｒであり， 位置７４のＸａａはＴｒｐであり， 位置７７のＸａａはＰｒｏであり， 位置７９のＸａａはＳｅｒであり， 位置８１のＸａａはＴｈｒであり， 位置８４のＸａａはＩｌｅまたはＴｈｒであり， 位置８６のＸａａはＡｒｇであり， 位置８７のＸａａはＡｌａまたはＭｅｔであり， 位置９１のＸａａはＧｌｕであり， 位置９５のＸａａはＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置９８のＸａａはＧｌｎであり， 位置１０２のＸａａはＶａｌ，ＴｒｐまたはＳｅｒであり， 位置１０３のＸａａはＳｅｒであり， 位置１０６のＸａａはＧｌｎまたはＨｉｓであり， 位置１０９のＸａａはＧｌｕである「請求項２０」に記載のポリペプチド． ２７．以下のポリペプチド から選択される［請求項２０］に記載のポリペプチド ２８．「請求項１」のポリペプチド，「請求項２」のポリペプチド，「請求項 ３」のポリペプチド，「請求項４」のポリペプチド，「請求項５」のポリペプチ ド，「請求項６」のポリペプチド，「請求項７」のポリペプチド，「請求項８」 のポリペプチド，「請求項９」のポリペプチド，「請求項１０」のポリペプチド ，「請求項１１」のポリペプチド，「請求項１２」のポリペプチド，「請求項１ ３」のポリペプチド，「請求項１４」のポリペプチド，「請求項１５」のポリペ プチド，「請求項１６」のポリペプチド，「請求項１７」のポリペプチド，「請 求項１８」のポリペプチド，「請求項１９」のポリペプチド，「請求項２０」の ポリペプチド，「請求項２１」のポリペプチド，「請求項２２」のポリペプチド ，「請求項２３」のポリペプチド，「請求項２４」のポリペプチド，「請求項２ ５」のポリペプチド，「請求項２６」のポリペプチドおよび「請求項２７」のポ リペプチドからなる群より選ばれる突然変異ヒトインターロイキン−３ポリペプ チドの治療有効量と医薬的に許容される担体から構成される造血細胞欠損の処置 用医薬組成物． ２９．配列番号：８８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチドの治療有 効量と医薬的に許容される担体から構成される「請求項２８」に記載の造血細胞 欠損の処置用医薬組成物 ３０．配列番号：８９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチドの治療有 効量と医薬的に許容される担体から構成される「請求項２８」に記載の造血細胞 欠損の処置用医薬組成物 ３１．配列番号：９０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチドの治療有 効量と医薬的に許容される担体から構成される「請求項２８」に記載の造血細胞 欠損の処置用医薬組成物 ３２．配列番号：６６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：６７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：６８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：６９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：９１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：９２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：９３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：９４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：９５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：９６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２５８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２５９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２９９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３００に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる群よ り選ばれるポリペプチドの治療有効量と医薬的に許容される担体から構成される 「請求項２８」に記載の造血細胞欠損の処置用医薬組成物 ３３．造血細胞の産生を刺激する方法において，このような処置を必要とする 患者に，「請求項１」のポリペプチド，「請求項２」のポリペプチド，「請求項 ３」のポリペプチド，「請求項４」のポリペプチド，「請求項５」のポリペプチ ド，「請求項６」のポリペプチド，「請求項７」のポリペプチド，「請求項８」 のポリペプチド，「請求項９」のポリペプチド，「請求項１０」のポリペプチド ，「請求項１１」のポリペプチド，「請求項１２」のポリペプチド，「請求項１ ３」のポリペプチド，「請求項１４」のポリペプチド，「請求項１５」のポリペ プチド，「請求項１６」のポリペプチド，「請求項１７」のポリペプチド，「請 求項１８」のポリペプチド，「請求項１９」のポリペプチド，「請求項２０」の ポリペプチド，「請求項２１」のポリペプチド，「請求項２２」のポリペプチド ，「請求項２３」のポリペプチド，「請求項２４」のポリペプチド，「請求項２ ５」のポリペプチド，「請求項２６」のポリペプチドおよび「請求項２７」のポ リペプチドからなる群より選ばれる突然変異ヒトインターロイキン−３ポリペプ チドの治療有効量を投与することからなる造血細胞の産生刺激方法． ３４．配列番号：８８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチドの治療有 効量を投与することからなる「請求項３３」に記載の造血細胞の産生刺激方法． ３５．配列番号：８９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチドの治療有 効量を投与することからなる「請求項３３」に記載の造血細胞の産生刺激方法． ３６．配列番号：９０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチドの治療有 効量を投与することからなる「請求項３３」に記載の造血細胞の産生刺激方法． ３７．配列番号：６６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：６７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：６８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：６９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：７９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：８７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：９１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：９２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：９３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：９４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：９５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：９６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２５８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２５９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２６９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２７７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２８９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：２９９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３００に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３０９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３１９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２０に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２２に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド， 配列番号：３２６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチドからなる群よ り選ばれるポリペプチドの治療有効量を投与することからなる「請求項３３」に 記載の造血細胞の産生を刺激す方法． ３８．ベクターＤＮＡと，「請求項１」のポリペプチド，「請求項２」のポリ ペプチド，「請求項３」のポリペプチド，「請求項４」のポリペプチド，「請求 項５」のポリペプチド，「請求項６」のポリペプチド，「請求項７」のポリペプ チド，「請求項８」のポリペプチド，「請求項９」のポリペプチド，「請求項１ ０」のポリペプチド，「請求項１１」のポリペプチド，「請求項１２」のポリペ プチド，「請求項１３」のポリペプチド，「請求項１４」のポリペプチド，「請 求項１５」のポリペプチド，「請求項１６」のポリペプチド，「請求項１７」の ポリペプチド，「請求項１８」のポリペプチド，「請求項１９」のポリペプチド ，「請求項２０」のポリペプチド，「請求項２１」のポリペプチド，「請求項２ ２」のポリペプチド，「請求項２３」のポリペプチド，「請求項２４」のポリペ プチド，「請求項２５」のポリペプチド，「請求項２６」のポリペプチドおよび 「請求項２７」のポリペプチドからなる群より選ばれるポリペプチドをコードす るＤＮＡからなる組換えＤＮＡ配列． ３９．ベクターＤＮＡと，配列番号：９７に相当するヌクレオチド配列を有す るＤＮＡからなる「請求項３８」に記載の組換えＤＮＡ配列． ４０．ベクターＤＮＡと，配列番号：１００または１０３に相当するヌクレオ チド配列を有するＤＮＡからなる「請求項３８」に記載の組換えＤＮＡ配列． ４１．ベクターＤＮＡと，配列番号：１６１に相当するヌクレオチド配列を有 するＤＮＡからなる「請求項３８」に記載の組換えＤＮＡ配列． ４２．ベクターＤＮＡと， 配列番号：９８に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：９９に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１０１に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１０２に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１０４に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１０５に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１０７に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１０８に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１０９に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１１０に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１１１に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１１２に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１１３に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１１４に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１１５に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１１６に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１１７に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１１８に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１１９に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１２０に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１２１に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１２２に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１２３に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１２４に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１２５に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１２６に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１２７に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１６０に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１６１に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３９８に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３４６に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３４７に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３０３に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：４０４に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：４０５に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３３２に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３３３に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３３４に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３３５に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３３６に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３３７に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３３８に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３３９に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３４０に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３４１に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３４２に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３４３に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３４４に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３４５に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３４８に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３４９に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３５０に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３５２に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３５３に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３５４に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３５５に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３５６に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３５７に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３５８に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３５９に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６０に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６１に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６２に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６３に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６４に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６５に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６６に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６７に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６８に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６９に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７０に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７１に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７２に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７３に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７４に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７５に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７６に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７７に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７８に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７９に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３８０に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３８１に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３８２に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３８４に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３８５に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３８６に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３８７に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３８８に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３８９に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３９０に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３９１に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３９２に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡより選択される ＤＮＡから構成される「請求項３８」に記載の組換えＤＮＡ配列． ４３．「請求項３８」の組換えＤＮＡ配列を含有し，コードされたポリペプチ ドを発現できる宿主細胞． ４４．ベクターＤＮＡと配列番号：９７に相当するヌクレオチド配列を有する ＤＮＡからなり，コードされたポリペプチドを発現できる「請求項４３」の宿主 細胞． ４５．ベクターＤＮＡと配列番号：１００または１０３に相当するヌクレオチ ド配列を有するＤＮＡからなり，コードされたポリペプチドを発現できる「請求 項４３」の宿主細胞． ４６．ベクターＤＮＡと配列番号：１６１に相当するヌクレオチド配列を有す るＤＮＡからなり，コードされたポリペプチドを発現できる「請求項４３」の宿 主細胞． ４７．突然変異ヒトインターロイキン−３ポリペプチドを製造する方法におい て，以下の工程， （ａ）ベクターＤＮＡと「請求項３８」のＤＮＡからなる組換えＤＮＡ配列を 含有し，組換えＤＮＡの発現が可能な条件下にコードされたポリペプチドを発現 できる宿主細胞の培養；および （ｂ）培養体からのポリペプチドの収穫，からなる製造方法． ４８．突然変異ヒトインターロイキン−３ポリペプチドを製造する方法におい て，以下の工程， （ａ）ベクターＤＮＡと配列番号：９７に相当するヌクレオチド配列を有する ＤＮＡからなる組換えＤＮＡ配列を含有し，組換えＤＮＡの発現が可能な条件下 にコードされたポリペプチドを発現できる宿主細胞の培養；および （ｂ）培養体からのポリペプチドの収穫，からなる「請求項４７」に記載の製 造方法． ４９．突然変異ヒトインターロイキン−３ポリペプチドを製造する方法におい て，以下の工程， （ａ）ベクターＤＮＡと配列番号：１００または１０３に相当するヌクレオチ ド配列を有するＤＮＡからなる組換えＤＮＡ配列を含有し，組換えＤＮＡの発現 が可能な条件下にコードされたポリペプチドを発現できる宿主細胞の培養；およ び （ｂ）培養体からのポリペプチドの収穫，からなる「請求項４７」に記載の製 造方法． ５０．突然変異ヒトインターロイキン−３ポリペプチドを製造する方法におい て，以下の工程， （ａ）ベクターＤＮＡと配列番号：１６１に相当するヌクレオチド配列を有す るＤＮＡからなる組換えＤＮＡ配列を含有し，組換えＤＮＡの発現が可能な条件 下にコードされたポリペプチドを発現できる宿主細胞の培養；および （ｂ）培養体からのポリペプチドの収穫，からなる「請求項４７」に記載の製 造方法 ５１．配列番号：９７に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１００に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１０３に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１６０に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：１６１に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：４０４に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：４０５に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６４に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６８に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３６９に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７６に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７７に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３７８に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ， 配列番号：３８５に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡからなる群より 選択されるＤＮＡ配列を有する遺伝子を含有するベクター． ５２．プローター，リボソーム結合部位，ならびに配列番号：８８に相当する アミノ酸配列を有するポリペプチド，配列番号：８９に相当するアミノ酸配列を 有するポリペプチド，および配列番号：９０に相当するアミノ酸配列を有するポ リペプチドからなる群より選ばれるポリペプチドをコードするＤＮＡ配列に直接 連結したシグナルペプチドからなる組換えＤＮＡベクターであって，上述の突然 変異ヒトインターロイキン−３ポリペプチドの発現を導くことができる，組換え ＤＮＡベクター． ５３．プロモーターはＡｒａＢＡＤである「請求項５１」に記載の組換えＤＮ Ａベクター． ５４．リボソーム結合部位はｇ１０−Ｌである「請求項５１」に記載の組換え ＤＮＡベクター． ５５．シグナルペプチドはｌａｍＢシグナルペプチドである「請求項５１」に 記載の組換えＤＮＡベクター． ５６．シグナルペプチドは図８に示すｌａｍＢシグナルペプチドである「請求 項５１」に記載の組換えＤＮＡベクター． ５７．プロモーターはＡｒａＢＡＤであり，リボソーム結合部位はｇ１０−Ｌ である「請求項５１」に記載の組換えＤＮＡベクター． ５８．プロモーターはＡｒａＢＡＤであり，リボソーム結合部位はｇ１０−Ｌ であり，シグナルペプチドはｌａｍＢシグナルペプチドである「請求項５１」に 記載の組換えＤＮＡベクター． ５９．プロモーターはＡｒａＢＡＤであり，リボソーム結合部位はｇ１０−Ｌ であり，シグナルペプチドは図８に示すｌａｍＢシグナルペプチドである「請求 項５１」に記載の組換えＤＮＡベクター． ６０．「請求項５１」のベクターからなる組換え細菌宿主であり，配列番号： ８８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド，配列番号：８９に相当する アミノ酸配列を有するポリペプチド，および配列番号：９０に相当するアミノ酸 配列を有するポリペプチドからなる群より選ばれる変異ヒトインターロイキン− ３ポリペプチドを分泌する組換え細菌宿主． ６１．式， （式中， ｍは０または１であり， 位置１８のＸａａは，ＡｓｎまたはＩｌｅであり， 位置２５のＸａａは，ＴｈｒまたはＨｉｓであり， 位置２９のＸａａは，Ｇｌｎ，ＡｒｇまたはＶａｌであり， 位置３２のＸａａは，Ｌｅｕ，ＡｌａまたはＡｓｎであり， 位置３７のＸａａは，Ｐｈｅ，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置４２のＸａａは，Ｇｌｙ，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置４５のＸａａは，Ｇｌｎ，ＶａｌまたはＭｅｔであり， 位置５１のＸａａは，ＡｓｎまたはＡｒｇであり， 位置５５のＸａａは，Ａｒｇ，ＬｅｕまたはＴｈｒであり， 位置５９のＸａａは，ＧｌｕまたはＬｅｕであり， 位置６０のＸａａは，ＡｌａまたはＳｅｒであり， 位置６２のＸａａは，ＡｓｎまたはＶａｌであり， 位置６７のＸａａは，Ｓｅｒ，ＡｓｎまたはＨｉｓであり， 位置６９のＸａａは，ＧｌｎまたはＧｌｕであり， 位置７３のＸａａは，ＡｌａまたはＧｌｙであり， 位置７６のＸａａは，ＳｅｒまたはＡｌａであり， 位置７９のＸａａは，ＬｙｓまたはＡｒｇであり， 位置８２のＸａａは，Ｌｅｕ，ＧｌｕまたはＶａｌであり， 位置８７のＸａａは，ＬｅｕまたはＳｅｒであり， 位置９３のＸａａは，ＰｒｏまたはＳｅｒであり， 位置９８のＸａａは，Ｈｉｓ，ＩｌｅまたはＴｈｒであり， 位置１０１のＸａａは，ＡｓｐまたはＡｌａであり， 位置１０５のＸａａは，ＡｓｎまたはＧｌｕであり， 位置１０９のＸａａは，ＡｒｇまたはＧｌｕであり， 位置１１６のＸａａは，ＬｙｓまたはＶａｌであり， 位置１２０のＸａａは，Ａｓｎ，ＧｌｎまたはＨｉｓであり， 位置１２３のＸａａは，ＡｌａまたはＧｌｕである． ただしＸａａで示されている４個〜２７個のアミノ酸はネイティブなヒトイン ターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なり，そのポリペプチドのＮ−末端 からアミノ酸１−１４の１〜１４個のアミノ酸および／またはＣ−末端からのア ミノ酸１１９−１３３の１〜１５個のアミノ酸が欠失している）のポリペプチド または実質的に同一の構造および実質的に同一の生物活性を有するポリペプチド ． ６２．突然変異ヒトインターロイキン−３ポリペプチドを製造する方法におい て，以下の工程， （ａ）ベクターＤＮＡと配列番号：１６０に相当するヌクレオチド配列を有す るＤＮＡからなる組換えＤＮＡ配列を含有し，組換えＤＮＡの発現が可能な条件 下にコードされたポリペプチドを発現できる宿主細胞の培養；および （ｂ）培養体からのポリペプチドの収穫，からなる「請求項４７」に記載の製 造方法． ６３．突然変異ヒトインターロイキン−３ポリペプチドを製造する方法におい て，以下の工程， （ａ）ベクターＤＮＡと配列番号：１６１に相当するヌクレオチド配列を有す るＤＮＡからなる組換えＤＮＡ配列を含有し，組換えＤＮＡの発現が可能な条件 下にコードされたポリペプチドを発現できる宿主細胞の培養；および （ｂ）培養体からのポリペプチドの収穫，からなる「請求項４７」に記載の製 造方法 ６４．ベクターＤＮＡと，配列番号：１６０に相当するヌクレオチド配列を有 するＤＮＡおよび配列番号：１６０に相当するヌクレオチド配列を有するＤＮＡ からなる群より選ばれるＤＮＡ配列から構成される組換えＤＮＡ配列を含有し， コードされたポリペプチドを発現できる宿主細胞． ６５．式， で表される「請求項２７」に記載のポリペプチド．[Claims]   1. Formula I [In the formula, Xaa at position 17 is Ser, Lys, Gly, Asp, Met, Gln. Or Arg,   Xaa at position 18 is Asn, His, Leu, Ile, Phe, Arg or Is Gln,   Xaa at position 19 is. Met, Phe, Ile, Arg, Gly, Ala Is Cys,   Xaa at position 20 is Ile, Cys, Gln, Glu, Arg, Pro or Is Ala,   Xaa at position 21 is Asp, Phe, Lys, Arg, Ala, Gly , Glu, Gln, Asn, Thr, Ser or Val,   Xaa at position 22 is Glu, Trp, Pro, Ser, Ala, His , Asp, Asn, Gln, Leu, Val or Gly,   Xaa at position 23 is Ile, Val, Ala, Leu. Gly, Trp , Lys, Phe, Leu, Ser or Arg,   Xaa at position 24 is Ile, Gly, Val, Arg, Ser, Phe or Is Leu,   Xaa at position 25 is Thr. His, Gly, Gln, Arg, Pro Is Ala,   Xaa at position 26 is His, Thr, Phe, Gly, Arg, Ala. Or Trp,   Xaa at position 27 is Leu, Gly, Arg, Thr, Ser or Ala. And   Xaa at position 28 is Lys, Arg, Leu, Gln, Gly, Pro. , Val or Trp,   Xaa at position 29 is Gln, Asn, Leu, Pro, Arg or Val. And   Xaa at position 30 is Pro, His, Thr, Gly, Asp, Gln , Ser, Leu or Lys,   Xaa at position 31 is Pro, Asp, Gly, Ala, Arg, Leu or Is Gln,   Xaa at position 32 is Leu, Val, Arg, Gln, Asn, Gly , Ala or Glu,   Xaa at position 33 is Pro, Leu, Gln, Ala, Thr or Glu. And   Xaa at position 34 is Leu, Val, Gly, Ser, Lys, Glu. , Gln, Thr, Arg, Ala, Phe, Ile or Met,   Xaa at position 35 is Leu, Ala, Gly, Asn, Pro, Gln or Is Val,   Xaa at position 36 is Asp, Leu or Val,   Xaa at position 37 is Phe, Ser, Pro, Trp or Ile,   Xaa at position 38 is Asn or Ala,   Xaa at position 40 is Leu, Trp or Arg,   Xaa at position 41 is Asn, Cys, Arg, Leu, His, Met or Is Pro,   Xaa at position 42 is Gly, Asp, Ser, Cys, Asn, Lys , Thr. Leu, Val, Glu. Phe. Tyr, Ile, Met, or Ala,   Xaa at position 43 is Glu, Asn, Tyr, Leu, Phe, Asp , Ala, Cys, Gln, Arg, Thr, Gly or Ser,   Xaa at position 44 is Asp, Ser, Leu, Arg, Lys, Thr , Met, Trp, Glu, Asn, Gln, Ala or Pro,   Xaa at position 45 is Gln, Pro, Phe, Val, Met, Leu , Thr, Lys, Trp, Asp, Asn, Arg, Ser, Ala, Ile. , Glu or His,   Xaa at position 46 is Asp, Phe, Ser, Thr, Cys, Glu , Asn, Gln, Lys, His, Ala, Tyr, Ile, Val, or Gly,   Xaa at position 47 is Ile, Gly, Val, Ser, Arg, Pro or Is His,   Xaa at position 48 is Leu, Ser, Cys, Arg, Ile, His , Phe, Glu, Lys, Thr, Ala, Met, Val or Asn ,   Xaa at position 49 is Met, Arg, Ala, Gly, Pro, Asn , His or Asp,   Xaa at position 50 is Glu, Leu, Thr, Asp, Tyr, Lys , Asn, Ser, Ala, Ile, Val, His, Phe, Met, or Gln,   Xaa at position 51 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 52 is Asn, His, Arg, Leu, Gly, Ser or Is Thr,   Xaa at position 53 is Leu, Thr, Ala, Gly, Glu, Pro , Lys, Ser or Met,   Xaa at position 54 is Arg, Asp, Ile, Ser, Val, Thr. , Gln, Asn, Lys, His, Ala or Leu,   Xaa at position 55 is Arg, Thr, Val, Ser, Leu or Gly. And   Xaa at position 56 is Pro, Gly, Cys, Ser, Gln, Glu , Arg, His, Thr, Ala, Tyr, Phe, Leu, Val, or Lys,   Xaa at position 57 is Asn or Gly,   Xaa at position 58 is Leu, Ser, Asp, Arg, Gln, Val or Is Cys,   Xaa at position 59 is Glu, Tyr, His, Leu, Pro or Arg And   Xaa at position 60 is Ala, Ser, Pro, Tyr, Asn or Thr And   Xaa at position 61 is Phe, Asn, Glu, Pro, Lys, Arg or Is Ser,   Xaa at position 62 is Asn, His, Val, Arg, Pro, Thr , Asp or Ile,   Xaa at position 63 is Arg, Tyr, Trp, Lys, Ser, His. , Pro or Val,   Xaa at position 64 is Ala, Asn, Pro, Ser or Lys,   Xaa at position 65 is Val, Thr, Pro, His, Leu, Phe or Is ser,   Xaa at position 66 is Lys, Ile, Arg, Val, Asn, Glu or Is Ser,   Xaa at position 67 is Ser, Ala, Phe, Val, Gly, Asn , Ile, Pro or His,   Xaa at position 68 is Leu, Val, Trp, Ser, Ile, Phe , Thr or His,   Xaa at position 69 is Gln, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg , Trp, Gly or Leu,   Xaa at position 70 is. Asn, Leu, Val, Trp, Pro or Ala And   Xaa at position 71 is Ala, Met, Leu, Pro, Arg, Glu , Thr, Gln, Trp or Asn,   Xaa at position 72 is Ser, Glu, Met, Ala, His, Asn , Arg or Asp,   Xaa at position 73 is Ala, Glu, Asp, Leu, Ser, Gly , Thr or Arg,   Xaa at position 74 is Ile, Met, Thr, Pro, Arg, Gly Or Ala,   Xaa at position 75 is Glu, Lys, Gly, Asp, Pro, Trp , Arg, Ser, Gln or Leu,   Xaa at position 76 is Ser, Val, Ala, Asn, Trp, Glu. , Pro, Gly or Asp,   Xaa at position 77 is Ile, Ser, Arg, Thr or Leu,   Xaa at position 78 is Leu, Ala, Ser, Glu, Phe, Gly or Is Arg,   Xaa at position 79 is Lys, Thr, Asn, Met, Arg, Ile. , Gly or Asp,   Xaa at position 80 is Asn, Trp, Val, Gly, Thr, Leu , Glu or Arg,   Xaa at position 81 is Leu, Gln, Gly, Ala, Trp, Arg , Val or Lys,   Xaa at position 82 is Leu, Gln, Lys, Trp, Arg, Asp , Glu, Asn, His, Thr, Ser, Ala, Tyr, Phe, Ile , Met or Val,   Xaa at position 83 is Pro, Ala, Thr, Trp, Arg or Met And   Xaa at position 84 is Cys, Glu, Gly, Arg, Met or Val And   Xaa at position 85 is Leu, Asn, Val or Gln,   Xaa at position 86 is Pro, Cys, Arg, Ala or Lys,   Xaa at position 87 is Leu, Ser, Trp or Gly,   Xaa at position 88 is Ala, Lys, Arg, Val or Trp,   Xaa at position 89 is Thr, Asp, Cys, Leu, Val, Glu , His, Asn or Ser,   Xaa at position 90 is Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Asp , Ile or Met,   Xaa at position 91 is Ala, Pro, Ser, Thr, Phe, Leu , Asp or His,   Xaa at position 92 is Pro, Phe, Arg, Ser, Lys, His , Ala, Gly, Ile or Leu,   Xaa at position 93 is Thr, Asp, Ser, Asn, Pro, Ala , Leu or Arg,   Xaa at position 94 is Arg, Ile, Ser, Glu, Leu, Val , Gln, Lys, His, Ala or Pro,   Xaa at position 95 is His, Gln, Pro, Arg, Val, Leu , Gly, Thr, Asn, Lys, Ser, Ala, Trp, Phe, Ile Or Tyr,   Xaa at position 96 is Pro, Lys, Tyr, Gly, Ile or Thr And   Xaa at position 97 is Ile, Val, Lys, Ala or Asn,   Xaa at position 98 is His, Ile, Asn, Leu, Asp, Ala. , Thr, Glu, Gln, Ser, Phe, Met, Val, Lys, Arg , Tyr or Pro,   Xaa at position 99 is Ile, Leu, Arg, Asp, Val, Pro , Gln, Gly, Ser, Phe or His,   Xaa at position 100 is Lys, Tyr, Leu, His, Arg, Ile, Ser, Gln or Pro,   Xaa at position 101 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr, Val, Tyr, Glu, Asn, Ser, Ala, Gly, Ile, Leu Or Gln,   Xaa at position 102 is Gly, Leu, Glu, Lys, Ser, Tyr. Is Pro,   Xaa at position 103 is Asp or Ser,   Xaa at position 104 is Trp, Val, Cys, Tyr, Thr, Met, Pro, Leu, Gln, Lys, Ala, Phe or Gly,   Xaa at position 105 is Asn, Pro, Ala, Phe, Ser, Trp, Gln, Tyr, Leu, Lys, Ile, Asp or His,   Xaa at position 106 is Glu, Ser, Ala, Lys, Thr, Ile, Gly or Pro,   Xaa at position 108 is Arg, Lys, Asp, Leu, Thr, Ile, Gln, His, Ser, Ala or Pro,   Xaa at position 109 is Arg, Thr, Pro, Glu, Tyr, Leu, Ser or Gly,   Xaa at position 110 is Lys, Ala, Asn, Thr, Leu, Arg, Gln, His, Glu, Ser, Ala or Trp,   Xaa at position 111 is Leu, Ile, Arg, Asp or Met,   Xaa at position 112 is Thr, Val, Gln, Tyr, Glu, His, Ser or Phe,   Xaa at position 113 is Phe, Ser, Cys, His, Gly, Trp, Tyr, Asp, Lys, Leu, Ile, Val or Asn,   Xaa at position 114 is Tyr, Cys, His, Ser, Trp, Arg. Or Leu,   Xaa at position 115 is Leu, Asn, Val, Pro, Arg, Ala, His, Thr, Trp or Met,   Xaa at position 116 is Lys, Leu, Pro, Thr, Met, Asp, Val, Glu, Arg, Trp, Ser, Asn, His, Ala, Tyr, Phe, Gln or Ile,   Xaa at position 117 is Thr, Ser, Asn, Ile, Trp, Lys. Is Pro,   Xaa at position 118 is Leu, Ser, Pro, Ala, Glu, Cys, Asp or Tyr,   Xaa at position 119 is Glu, Ser, Lys, Pro, Leu, Thr, Tyr or Arg,   Xaa at position 120 is Asn, Ala, Pro, Leu, His, Val. Or Gln,   Xaa at position 121 is Ala, Ser, Ile, Asn, Pro, Lys, Asp or Gly,   Xaa at position 122 is Gln, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, His, Ile, Tyr or Cys,   Xaa at position 123 is Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr or Leu,   Still further, it may have a Met- preceding the amino acid at position 1; 1 to 14 amino acids from the N-terminus and / or 1 to 15 amino acids from the C-terminus The acid may be deleted; the 4-44 amino acids designated Xaa are Different from the corresponding amino acid of human (1-133) human interleukin-3 Human interleukin-3 mutant polypeptide.   2. Formula II [In the formula,   Xaa at position 17 is Ser, Gly, Asp, Met or Gln,   Xaa at position 18 is Asn, His, Leu, Ile, Phe, Arg or Is Gln,   Xaa at position 19 is Met, Phe, Ile, Arg or Ala,   Xaa at position 20 is Ile or Pro,   Xaa at position 21 is Asp or Glu,   Xaa at position 23 is Ile, Val, Ala, Leu or Gly,   Xaa at position 24 is Ile, Val, Phe or Leu,   Xaa at position 25 is Thr, His, Gly, Gln, Arg, Pro or Is Ala,   Xaa at position 26 is His, Phe, Gly, Arg or Ala,   Xaa at position 28 is Lys, Leu, Gln, Gly, Pro or Val. And   Xaa at position 29 is Gln, Asn, Leu, Arg or Val,   Xaa at position 30 is Pro, His, Thr, Gly or Gln,   Xaa at position 31 is Pro, Asp, Gly, Ala, Arg, Leu or Is Gln,   Xaa at position 32 is Leu, Arg, Gln, Asn, Gly, Ala or Is Glu,   Xaa at position 33 is Pro, Leu, Gln, Ala or Glu,   Xaa at position 34 is Leu, Val, Gly, Ser, Lys, Al a, Arg, Gln, Glu, Ile, Phe, Thr or Met,   Xaa at position 35 is Leu, Ala, Asn, Pro, Gln or Val. And   Xaa at position 36 is Asp or Leu,   Xaa at position 37 is Phe, Ser, Pro, Trp or Ile,   Xaa at position 38 is Asn or Ala,   Xaa at position 41 is Asn, Cys, Arg, His, Met or Pro. And   Xaa at position 42 is Gly, Asp, Ser, Cys, Ala, Asn , Ile, Leu, Met, Tyr, Val or Arg,   Xaa at position 44 is Asp or Glu,   Xaa at position 45 is Gln, Val, Met, Leu, Thr, Lys , Ala, Asn, Glu, Ser or Trp,   Xaa at position 46 is Asp, Phe, Ser, Thr, Cys, Ala. , Asn, Gln, Glu, His, Ile, Lys, Tyr, Val, or Gly,   Xaa at position 47 is Ile, Val or His,   Xaa at position 49 is Met, Asn or Asp,   Xaa at position 50 is Glu, Thr, Ala, Asn, Ser or Asp And   Xaa at position 51 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 52 is Asn or Gly,   Xaa at position 53 is Leu, Met or Phe,   Xaa at position 54 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 55 is Arg, Thr, Val, Leu or Gly,   Xaa at position 56 is Pro, Gly, Cys, Ser, Gln, Ala. , Arg, Asn, Glu, His, Leu, Thr, Val or Lys. ,   Xaa at position 59 is Glu, Tyr, His, Leu or Arg,   Xaa at position 60 is Ala, Ser, Asn or Thr,   Xaa at position 61 is Phe or Ser,   Xaa at position 62 is Asn, Val, Pro, Thr or Ile,   Xaa at position 63 is Arg, Tyr, Lys, Ser, His or Val. And   Xaa at position 64 is Ala or Asn,   Xaa at position 65 is Val, Thr, Leu or Ser,   Xaa at position 66 is Lys, Ile, Arg, Val, Asn, Glu or Is Ser,   Xaa at position 67 is Ser, Phe, Val, Gly, Asn, Ile or Is His,   Xaa at position 68 is Leu, Val, Ile, Phe or His,   Xaa at position 69 is Gln, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg or Is Gly,   Xaa at position 70 is Asn or Pro,   Xaa at position 71 is Ala, Met, Pro, Arg, Glu, Thr or Is Gln,   Xaa at position 72 is Ser, Glu, Met, Ala, His, Asn , Arg or Asp,   Xaa at position 73 is Ala, Glu, Asp, Leu, Ser, Gly , Thr, Arg or Pro,   Xaa at position 74 is Ile or Met,   Xaa at position 75 is Glu, Gly, Asp, Ser or Gln,   Xaa at position 76 is Ser, Val, Ala, Asn, Glu, Pro , Gly or Asp,   Xaa at position 77 is Ile, Ser or Leu,   Xaa at position 79 is Lys, Thr, Gly, Asn, Met, Arg , Ile, Gly or Asp,   Xaa at position 80 is Asn, Val, Gly, Thr, Leu, Glu or Is Arg,   Xaa at position 81 is Leu or Val,   Xaa at position 82 is Leu, Gln, Trp, Arg, Asp, Ala. , Asn, Glu, His, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr, or Val,   Xaa at position 83 is Pro, Ala, Thr, Trp or Met,   Xaa at position 85 is Leu or Val,   Xaa at position 87 is Leu or Ser,   Xaa at position 88 is Ala, Arg, or Trp, and Xa at position 89 a is Thr, Asp, Glu, His, Asn or Ser,   Xaa at position 90 is Ala, Asp or Met,   Xaa at position 91 is Ala, Pro, Ser, Thr, Phe, Leu or Is Asp,   Xaa at position 92 is Pro or Ser,   Xaa at position 93 is Thr, Asp, Ser, Pro, Ala, Leu Is Arg,   Xaa at position 95 is His, Pro, Arg, Val, Leu, Gly , Asn, Ile, Phe, Ser or Thr,   Xaa at position 96 is Pro or Tyr,   Xaa at position 97 is Ile, Val or Ala,   Xaa at position 98 is His, Ile, Asn, Leu, Asp, Ala. , Thr, Leu, Arg, Gln, Glu, Lys, Met, Ser, Tyr , Val or Pro,   Xaa at position 99 is Ile, Leu, Val or Phe,   Xaa at position 100 is Lys, Leu, His, Arg, Ile, Gln, Pro or Ser,   Xaa at position 101 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr, Val, Asn, Ile, Leu or Tyr,   Xaa at position 102 is Gly, Glu, Lys or Ser,   Xaa at position 104 is Trp, Val, Tyr, Met or Leu,   Xaa at position 105 is Asn, Pro, Ala, Phe, Ser, Trp, Gln, Tyr, Leu, Lys, Ile, Asp or His,   Xaa at position 106 is Glu, Ser, Ala or Gly,   Xaa at position 108 is Arg, Ala, Gln, Ser or Lys,   Xaa at position 109 is Arg, Thr, Glu, Leu, Ser or Gly. And   Xaa at position 112 is Thr, Val, Gln, Glu, His or Ser And   Xaa at position 114 is Tyr or Trp,   Xaa at position 115 is Leu or Ala,   Xaa at position 116 is Lys, Thr, Met, Val, Trp, Ser, Leu, Ala, Asn, Gln, His, Met, Phe, Tyr, or I le,   Xaa at position 117 is Thr, Ser or Asn,   Xaa at position 119 is Glu, Ser, Pro, Leu, Thr or Tyr And   Xaa at position 120 is Asn, Pro, Leu, His, Val or Gln. And   Xaa at position 121 is Ala, Ser, Ile, Asn, Pro, Lys, Asp or Gly,   Xaa at position 122 is Gln, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, His, Ile, Tyr or Cys,   Xaa at position 123 is Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr or Leu,   Still further, it may have a Met- preceding the amino acid at position 1; 1-14 amino acids from the N-terminus and / or 1-15 amino acids from the C-terminus May be deleted; the 4-44 amino acids indicated by Xaa are Unlike the corresponding amino acid in human (1-133) human interleukin-3 Human interleukin-3 mutant polypeptide.   3. Formula III [In the formula,   Xaa at position 17 is Ser, Gly, Asp, Met or Gln,   Xaa at position 18 is Asn, His or Ile,   Xaa at position 19 is Met or Ile,   Xaa at position 21 is Asp or Glu,   Xaa at position 23 is Ile, Ala, Leu or Gly,   Xaa at position 24 is Ile, Val or Leu,   Xaa at position 25 is Thr, His, Gln or Ala,   Xaa at position 26 is His or Ala,   Xaa at position 29 is. Gln, Asn or Val,   Xaa at position 30 is Pro, Gly or Gln,   Xaa at position 31 is Pro, Asp, Gly or Gln,   Xaa at position 32 is Leu, Arg, Gln, Asn, Gly, Ala or Is Glu,   Xaa at position 33 is Pro or Glu,   Xaa at position 34 is Leu, Val, Gly, Ser, Lys, Ala. , Arg, Gln, Glu, Ile, Phe, Thr or Met,   Xaa at position 35 is Leu, Ala, Asn, Pro, Gln or Val. And   Xaa at position 37 is Phe, Ser, Pro or Trp,   Xaa at position 38 is Asn or Ala,   Xaa at position 42 is Gly, Asp, Ser, Cys, Ala, Asn , Ile, Leu, Met, Tyr or Arg,   Xaa at position 44 is Asp or Glu,   Xaa at position 45 is Gln, Val, Met, Leu, Thr, Ala. , Asn, Glu, Ser or Lys,   Xaa at position 46 is Asp, Phe, Ser, Thr, Ala, Asn , Gln, Glu, His, Ile, Lys, Tyr, Val or Cys. ,   Xaa at position 50 is Glu, Ala, Asn, Ser or Asp,   Xaa at position 51 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 54 is Arg or Ala,   Xaa at position 55 is Arg, Thr, Val, Leu or Gly,   Xaa at position 56 is Pro, Gly, Ser, Gln, Ala, Arg , Asn, Glu, Leu, Thr, Val or Lys,   Xaa at position 60 is Ala or Ser,   Xaa at position 62 is Asn, Pro, Thr or Ile,   Xaa at position 63 is Arg or Lys,   Xaa at position 64 is Ala or Asn,   Xaa at position 65 is Val or Thr,   Xaa at position 66 is Lys or Arg,   Xaa at position 67 is Ser, Phe or His,   Xaa at position 68 is Leu, Ile, Phe or His,   Xaa at position 69 is Gln, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg or Is Gly,   Xaa at position 71 is Ala, Pro or Arg,   Xaa at position 72 is Ser, Glu, Arg or Asp,   Xaa at position 73 is Ala or Leu,   Xaa at position 76 is Ser, Val, Ala, Asn, Glu, Pro or Is Gly,   Xaa at position 77 is Ile or Leu,   Xaa at position 79 is Lys, Thr, Gly, Asn, Met, Arg , Ile, Gly or Asp,   Xaa at position 80 is Asn, Gly, Glu or Arg,   Xaa at position 82 is Leu, Gln, Trp, Arg, Asp, Ala. , Asn, Glu, His, Ile, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr Or Val,   Xaa at position 83 is Pro or Thr,   Xaa at position 85 is Leu or Val,   Xaa at position 87 is Leu or Ser,   Xaa at position 88 is Ala or Trp,   Xaa at position 91 is Ala or Pro,   Xaa at position 93 is Thr, Asp, Ser, Pro, Ala, Leu Is Arg,   Xaa at position 95 is His, Pro, Arg, Val, Leu, Gly , Asn, Phe, Ser or Thr,   Xaa at position 96 is Pro or Tyr,   Xaa at position 97 is Ile or Val,   Xaa at position 98 is His, Ile, Asn, Leu, Ala, Thr. , Leu, Arg, Gln, Leu, Lys, Met, Ser, Tyr, Val. Or Pro,   Xaa at position 99 is Ile, Leu or Val,   Xaa at position 100 is Lys, Arg, Ile, Gln, Pro or Ser And   Xaa at position 101 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr, Pro, Asn, Ile, Leu or Tyr,   Xaa at position 104 is Trp or Leu,   Xaa at position 105 is Asn, Pro, Ala, Ser, Trp, Gln, Tyr, Leu, Lys, Ile, Asp or His,   Xaa at position 106 is Glu or Gly,   Xaa at position 108 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 109 is Arg, Thr, Glu, Leu or Ser,   Xaa at position 112 is Thr, Val or Gln,   Xaa at position 114 is Tyr or Trp,   Xaa at position 115 is Leu or Ala,   Xaa at position 116 is Lys, Thr, Val, Trp, Ser, Ala, His, Met, Phe, Tyr or Ile,   Xaa at position 117 is Thr or Ser,   Xaa at position 120 is Asn, Pro, Leu, His, Val or Gln. And   Xaa at position 121 is Ala, Ser, Ile, Asn, Pro, Asp. Or Gly,   Xaa at position 122 is Gln, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, His, Ile, Tyr or Cys,   Xaa at position 123 is Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr or Leu,   Still further, it may have a Met- preceding the amino acid at position 1; 1 to 14 amino acids from the N-terminus and / or 1 to 15 amino acids from the C-terminus The acid may be deleted; the 4-35 amino acids designated Xaa are Different from the corresponding amino acid of human (1-133) human interleukin-3 Human interleukin-3 mutant polype according to claim 2. Petit.   4. Formula IV [In the formula,   Xaa at position 17 is Ser, Gly, Asp or Gln,   Xaa at position 18 is Asn, His or Ile,   Xaa at position 23 is Ile, Ala, Leu or Gly,   Xaa at position 25 is Thr, His or Gln,   Xaa at position 26 is His or Ala,   Xaa at position 29 is Gln or Asn,   Xaa at position 30 is Pro or Gly,   Xaa at position 32 is Leu, Arg, Asn or Ala,   Xaa at position 34 is Leu, Val, Ser, Ala, Arg, Gln. , Glu, Ile, Phe, Thr or Met,   Xaa at position 35 is Leu, Ala, Asn or Pro,   Xaa at position 38 is Asn or Ala,   Xaa at position 42 is Gly, Asp, Ser, Ala, Asn, Ile , Leu, Met, Tyr or Arg,   Xaa at position 45 is Gln, Val, Met, Leu, Ala, Asn , Glu or Lys,   Xaa at position 46 is Asp, Phe, Ser, Gln, Glu, His , Val or Thr,   Xaa at position 50 is Glu, Asn, Ser or Asp,   Xaa at position 51 is Asn, Arg, Pro, Thr or His,   Xaa at position 55 is Arg, Leu or Gly,   Xaa at position 56 is Pro, Gly, Ser, Ala, Asn, Val , Leu or Gln,   Xaa at position 62 is Asn, Pro or Thr,   Xaa at position 64 is Ala or Asn,   Xaa at position 65 is Val or Thr,   Xaa at position 67 is Ser or Phe,   Xaa at position 68 is Leu or Phe,   Xaa at position 69 is Gln, Ala, Glu or Arg,   Xaa at position 76 is Ser, Val, Asn, Pro or Gly,   Xaa at position 77 is Ile or Leu,   Xaa at position 79 is Lys, Gly, Asn, Met, Arg, Ile or Is Gly,   Xaa at position 80 is Asn, Gly, Glu or Arg,   Xaa at position 82 is Leu, Gln, Trp, Arg, Asp, Asn , Glu, His, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr or Val. ,   Xaa at position 87 is Leu or Ser,   Xaa at position 88 is Ala or Trp,   Xaa at position 91 is Ala or Pro,   Xaa at position 93 is Thr, Asp or Ala,   Xaa at position 95 is His, Pro, Arg, Val, Gly, Asn , Ser or Thr,   Xaa at position 98 is His, Ile, Asn, Ala, Thr, Gln. , Glu, Lys, Met, Ser, Tyr, Val or Leu,   Xaa at position 99 is Ile or Leu,   Xaa at position 100 is Lys or Arg,   Xaa at position 101 is Asp, Pro, Met, Lys, Thr, His, Pro, Asn, Ile, Leu or Tyr,   Xaa at position 105 is Asn, Pro, Ser, Ile or Asp,   Xaa at position 108 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 109 is Arg, Thr, Glu, Leu or Ser,   Xaa at position 112 is Thr or Gln,   Xaa at position 116 is Lys, Val, Trp, Ala, His, Phe, Tyr or Ile,   Xaa at position 117 is Thr or Ser,   Xaa at position 120 is Asn, Pro, Leu, His, Val or Gln. And   Xaa at position 121 is Ala, Ser, Ile, Pro or Asn,   Xaa at position 122 is Gln, Met, Trp, Phe, Pro, His, Ile or Tyr,   Xaa at position 123 is Ala, Met, Glu, Ser or Leu,   Still further, it may have a Met- preceding the amino acid at position 1; 1 to 14 amino acids from the N-terminus and / or 1 to 15 amino acids from the C-terminus The acid may be deleted; the 4-44 amino acids designated Xaa are Different from the corresponding amino acid of human (1-133) human interleukin-3 Human interleukin-3 mutant polype according to claim 3. Petit.   5. 1 to 15 amino acids from the C-terminus and / or 1 to 14 amino acids from the N-terminus The human interleukin-3 protein described in claim 1 having an amino acid deletion. Naturally mutated polypeptide.   6. Xaa at position 42 is Gly, Asp, Ser, Ile, Leu, Met, Tyr or Ala,   Xaa at position 45 is Gln, Val, Met or Asn,   Xaa at position 46 is Asp, Ser, Gln, His or Val. ,   Xaa at position 50 is Glu or Asp,   Xaa at position 51 is Asn, Pro or Thr,   Xaa at position 62 is Asn or Pro,   Xaa at position 76 is Ser or Pro,   Xaa at position 82 is Leu, Trp, Asp, Asn, Glu, His , Phe, Ser or Tyr,   Xaa at position 95 is His, Arg, Thr, Asn or Ser Yes,   Xaa at position 98 is His, Ile, Leu, Ala, Gln, Lys , Met, Ser, Tyr or Val,   Xaa at position 100 is Lys or Arg,   Xaa at position 101 is Asp, Pro, His, Asn, Ile or Is Leu,   Xaa at position 105 is Asn or Pro,   Xaa at position 108 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 116 is Lys, Val, Trp, Ala, His, Phe, Or Tyr,   Xaa at position 121 is Ala or Ile,   Xaa at position 122 is Gln or Ile,   Xaa at position 123 is Ala, Met, or Glu. Listed human interleukin-3 mutant polypeptides.   7. Formula V [In the formula,   Xaa at position 3 is Ser, Lys, Gly, Asp, Met, Gln or Arg,   Xaa at position 4 is Asn, His, Leu, Ile, Phe, Arg or Gln,   Xaa at position 5 is Met, Phe, Ile, Arg, Gly, Ala or Cys,   Xaa at position 6 is Ile, Cys, Gln, Glu, Arg, Pro or Ala,   Xaa at position 7 is Asp, Phe, Lys, Arg, Ala, Gly, Glu , Gln, Asn, Thr, Ser or Val,   Xaa at position 8 is Glu, Trp, Pro, Ser, Ala, His, Asp , Asn, Gln, Leu, Val or Gly,   Xaa at position 9 is Ile, Val, Ala, Leu, Gly, Trp, Lys , Phe, Leu, Ser or Arg,   Xaa at position 10 is Ile, Gly, Val, Arg, Ser, Phe or Is Leu,   Xaa at position 11 is Thr, His, Gly, Gln, Arg, Pro or Is Ala,   Xaa at position 12 is His, Thr, Phe, Gly, Arg, Ala or Is Trp,   Xaa at position 13 is Leu, Gly, Arg, Thr, Ser, Ala ,   Xaa at position 14 is Lys, Arg, Leu, Gln, Gly, Pro. , Val or Trp,   Xaa at position 15 is Gln, Asn, Leu, Pro, Arg or Val. And   Xaa at position 16 is Pro, His, Thr, Gly, Asp, Gln. , Ser, Leu or Lys,   Xaa at position 17 is Pro, Asp, Gly, Ala, Arg, Leu Is Gln,   Xaa at position 18 is Leu, Val, Arg, Gln, Asn, Gly. , Ala or Glu,   Xaa at position 19 is Pro, Leu, Gln, Ala, Thr, Glu ,   Xaa at position 20 is Leu, Val, Gly, Ser, Lys, Glu. , Gln, Thr, Arg, Ala, Phe, Ile or Met,   Xaa at position 21 is Leu, Ala, Gly, Asn, Pro, Gln or Is Val,   Xaa at position 22 is Asp, Leu or Val,   Xaa at position 23 is Phe, Ser, Pro, Trp or Ile,   Xaa at position 24 is Asn or Ala,   Xaa at position 26 is Leu, Trp or Arg,   Xaa at position 27 is Asn, Cys, Arg, Leu, His, Met or Is Pro,   Xaa at position 28 is Gly, Asp, Ser, Cys, Ala, Lys , Asn, Thr, Leu, Val, Glu, Phe, Tyr, Ile, or Met,   Xaa at position 29 is Glu, Asn, Tyr, Leu, Phe, Asp , Ala, Cys, Gln, Arg, Thr, Gly or Ser,   Xaa at position 30 is Asp, Ser, Leu, Arg, Lys, Thr , Met, Trp, Glu, Asn, Gln, Ala or Pro,   Xaa at position 31 is Gln, Pro, Phe, Val, Met, Leu , Thr, Lys, Asp, Asn, Arg, Ser, Ala, Ile, Glu , His or Trp,   Xaa at position 32 is Asp, Phe, Ser, Thr, Cys, Glu , Asn, Gln, Lys, His, Ala, Tyr, Ile, Val. Or Gly,   Xaa at position 33 is Ile, Gly, Val, Ser, Arg, Pro or Is His,   Xaa at position 34 is Leu, Ser, Cys, Arg, Ile, His , Phe, Glu, Lys, Thr, Ala, Met, Val or Asn. ,   Xaa at position 35 is Met, Arg, Ala, Gly, Pro, Asn , His or Asp,   Xaa at position 36 is Glu, Leu, Thr, Asp, Tyr, Lys , Asn, Ser, Ala, Ile, Val, His, Phe, Met, or Gln,   Xaa at position 37 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 38 is Asn, His, Arg, Leu, Gly, Ser or Is Thr,   Xaa at position 39 is Leu, Thr, Ala, Gly, Glu, Pro. , Lys, Ser or Met,   Xaa at position 40 is Arg, Asp, Ile, Ser, Val, Thr. , Gln, Asn, Lys, His, Ala or Leu,   Xaa at position 41 is Arg, Thr, Val, Ser, Leu or Gly. And   Xaa at position 42 is Pro, Gly, Cys, Ser, Gln, Glu , Arg, His, Thr, Ala, Tyr, Phe, Leu, Val, or Lys,   Xaa at position 43 is Asn or Gly,   Xaa at position 44 is Leu, Ser, Asp, Arg, Gln, Val or Is Cys,   Xaa at position 45 is Glu, Tyr, His, Leu, Pro or Arg And   Xaa at position 46 is Ala, Ser, Pro, Tyr, Asn or Thr And   Xaa at position 47 is Phe, Asn, Glu, Pro, Lys, Arg or Is Ser,   Xaa at position 48 is Asn, His, Val, Arg, Pro, Thr , Asp or Ile,   Xaa at position 49 is Arg, Tyr, Trp, Lys, Ser, His. , Pro or Val,   Xaa at position 50 is Ala, Asn, Pro, Ser or Lys,   Xaa at position 51 is Val, Thr, Pro, His, Leu, Phe or Is Ser,   Xaa at position 52 is Lys, Ile, Arg, Val, Asrl, Glu. Or Ser,   Xaa at position 53 is Ser, Ala, Phe, Val, Gly, Asn , Ile, Pro or His,   Xaa at position 54 is Leu, Val, Trp, Ser, Ile, Phe , Thr or His,   Xaa at position 55 is Gln, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg , Trp, Gly or Leu,   Xaa at position 56 is Asn, Leu, Val, Trp, Pro or Ala. And   Xaa at position 57 is Ala, Met, Leu, Pro, Arg, Gl u, Thr, Gln, Trp or Asn,   Xaa at position 58 is Ser, Glu, Met, Ala, His, Asn , Arg or Asp,   Xaa at position 59 is Ala, Glu, Asp, Leu, Ser, Gly , Thr or Arg,   Xaa at position 60 is Ile, Met, Thr, Pro, Arg, Gly Or Ala,   Xaa at position 61 is Glu, Lys, Gly, Asp, Pro, Trp , Arg, Ser, Gln or Leu,   Xaa at position 62 is Ser, Val, Ala, Asn, Trp, Glu. , Pro, Gly or Asp,   Xaa at position 63 is Ile, Ser, Arg, Thr or Leu,   Xaa at position 64 is Leu, Ala, Ser, Glu, Phe, Gly or Is Arg,   Xaa at position 65 is Lys, Thr, Gly, Asn, Met, Arg , Ile or Asp,   Xaa at position 66 is Asn, Trp, Val, Gly, Thr, Leu , Glu or Arg,   Xaa at position 67 is Leu, Gln, Gly, Ala, Trp, Arg , Val or Lys,   Xaa at position 68 is Leu, Gln, Lys, Trp, Arg, Asp , Glu, Asn, His, Thr, Ser, Ala, Tyr, Phe, Ile , Met or Val,   Xaa at position 69 is Pro, Ala, Thr, Trp, Arg or Met And   Xaa at position 70 is Cys, Glu, Gly, Arg, Met or Val. And   Xaa at position 71 is Leu, Asn, Val or Gln,   Xaa at position 72 is Pro, Cys, Arg, Ala or Lys,   Xaa at position 73 is Leu, Ser, Trp or Gly,   Xaa at position 74 is Ala, Lys, Arg, Val or Trp,   Xaa at position 75 is Thr, Asp, Cys, Leu, Val, Glu , His, Asn or Ser,   Xaa at position 76 is Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Asp , Ile or Met,   Xaa at position 77 is Ala, Pro, Ser, Thr, Phe, Leu , Asp or His,   Xaa at position 78 is Pro, Phe, Arg, Ser, Lys, His , Ala, Gly, Ile or Leu,   Xaa at position 79 is Thr, Asp, Ser, Asn, Pro, Ala , Leu or Arg,   Xaa at position 80 is Arg, Ile, Ser, Glu, Leu, Val , Gln, Lys, His, Ala or Pro,   Xaa at position 81 is His, Gln, Pro, Arg, Val, Leu , Gly, Thr, Asn, Lys, Ser, Ala, Trp, Phe, Ile Or Tyr,   Xaa at position 82 is Pro, Lys, Tyr, Gly, Ile or Thr And   Xaa at position 83 is Ile, Val, Lys, Ala or Asn,   Xaa at position 84 is His, Ile, Asn, Leu, Asp, Ala. , Thr, Glu, Gln, Ser, Phe, Met, Val, Lys, Arg , Tyr or Pro,   Xaa at position 85 is Ile, Leu, Arg, Asp, Val, Pro , Gln, Gly, Ser, Phe or His,   Xaa at position 86 is Lys, Tyr, Leu, His, Arg, Ile. , Ser, Gln or Pro,   Xaa at position 87 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr , Val, Tyr, Glu, Asn, Ser, Ala, Gly, Ile, Leu Or Gln,   Xaa at position 88 is Gly, Leu, Glu, Lys, Ser, Tyr or Is pro,   Xaa at position 89 is Asp or Ser,   Xaa at position 90 is Trp, Val, Cys, Tyr, Thr, Met , Pro, Leu, Gln, Lys, Ala, Phe or Gly,   Xaa at position 91 is Asn, Pro, Ala, Phe, Ser, Trp , Gln, Tyr, Leu, Lys, Ile, Asp or His,   Xaa at position 92 is Glu, Ser, Ala, Lys, Thr, Ile , Gly or Pro,   Xaa at position 94 is Arg, Lys, Asp, Leu, Thr, Ile. , Gln, His, Ser, Ala or Pro,   Xaa at position 95 is Arg, Thr, Pro, Glu, Tyr, Leu , Ser or Gly,   Xaa at position 96 is Lys, Asn, Thr, Leu, Gln, Arg. , His, Glu, Ser, Ala or Trp,   Xaa at position 97 is Leu, Ile, Arg, Asp or Met,   Xaa at position 98 is Thr, Val, Gln, Tyr, Glu, His , Ser or Phe,   Xaa at position 99 is Phe, Ser, Cys, His, Gly, Trp , Tyr, Asp, Lys, Leu, Ile, Val or Asn,   Xaa at position 100 is Tyr, Cys, His, Ser, Trp, Arg. Or Leu,   Xaa at position 101 is Leu, Asn, Val, Pro, Arg, Ala, His, Thr, Trp or Met,   Xaa at position 102 is Lys, Leu, Pro, Thr, Met, Asp, Val, Glu, Arg, Trp, Ser, Asn, His, Ala, Tyr, Phe, Gln or Ile,   Xaa at position 103 is Thr, Ser, Asn, Ile, Trp, Lys. Is Pro,   Xaa at position 104 is Leu, Ser, Pro, Ala, Glu, Cys, Asp or Tyr,   Xaa at position 105 is Glu, Ser, Lys, Pro, Leu, Thr, Tyr or Arg,   Xaa at position 106 is Asn, Ala, Pro, Leu, His, Val. Or Gln,   Xaa at position 107 is Ala, Ser, Ile, Asn, Pro, Lys, Asp or Gly,   Xaa at position 108 is Gln, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, His, Ile, Tyr or Cys,   Xaa at position 109 is Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr or Leu,   In addition, Met- or Met-Ala- preceding the amino acid at position 1 4 to 44 amino acids represented by Xaa are (1-133) Different from the corresponding native amino acid of human interleukin-3] (15-125) human interleukin-3 mutant polypeptide, Is a polypeptide having substantially the same structure and substantially the same biological activity.   8. Formula VI [In the formula,   Xaa at position 3 is Ser, Gly, Asp, Met or Gln,   Xaa at position 4 is Asn, His, Leu, Ile, Phe, Arg or Gln,   Xaa at position 5 is Met, Phe, Ile, Arg or Ala,   Xaa at position 6 is Ile or Pro,   Xaa at position 7 is Asp or Glu,   Xaa at position 9 is Ile, Val, Ala, Leu or Gly,   Xaa at position 10 is Ile, Val, Phe or Leu,   Xaa at position 11 is Thr, His, Gly, Gln, Arg, Pro or Is Ala,   Xaa at position 12 is His, Phe, Gly, Arg or Ala,   Xaa at position 14 is Lys, Leu, Gln, Gly, Pro or Val. And   Xaa at position 15 is Gln, Asn, Leu, Arg or Val,   Xaa at position 16 is Pro, His, Thr, Gly or Gln,   Xaa at position 17 is Pro, Asp, Gly, Ala, Arg, Leu Is Gln,   Xaa at position 18 is Leu, Arg, Gln, Asn, Gly, Ala or Is Glu,   Xaa at position 19 is Pro, Leu, Gln, Ala or Glu,   Xaa at position 20 is Leu, Val, Gly, Ser, Lys, Ala, A rg, Gln, Glu, Ile, Phe, Thr or Met,   Xaa at position 21 is Leu, Ala, Asn, Pro, Gln or Val. And   Xaa at position 22 is Asp or Leu,   Xaa at position 23 is Phe, Ser, Pro, Trp or Ile,   Xaa at position 24 is Asn or Ala,   Xaa at position 27 is Asn, Cys, Arg, His, Met or Pro. And   Xaa at position 28 is Gly, Asp, Ser, Cys, Ala, Asn, I le, Leu, Met, Tyr or Arg,   Xaa at position 30 is Asp or Glu,   Xaa at position 31 is Gln, Val, Met, Leu, Thr, Lys, A la, Asn, Glu, Ser or Trp,   Xaa at position 32 is Asp, Phe, Ser, Thr, Cys, Ala, A sn, Gln, Glu, His, Ile, Lys, Tyr, Val, or Gl y,   Xaa at position 33 is Ile, Val or His,   Xaa at position 35 is Met, Asn or Asp,   Xaa at position 36 is Glu, Thr, Ala, Asn, Ser or Asp And   Xaa at position 37 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 38 is Asn or Gly,   Xaa at position 39 is Leu, Met or Phe,   Xaa at position 40 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 41 is Arg, Thr, Val, Leu or Gly,   Xaa at position 42 is Pro, Gly, Cys, Ser, Gln, Ala, A rg, Asn, Glu, His, Leu, Thr, Val or Lys,   Xaa at position 45 is Glu, Tyr, His, Leu or Arg,   Xaa at position 46 is Ala, Ser, Asn or Thr,   Xaa at position 47 is Phe or Ser,   Xaa at position 48 is Asn, Val, Pro, Thr or Ile,   Xaa at position 49 is Arg, Tyr, Lys, Ser, His or Val. And   Xaa at position 50 is Ala or Asn,   Xaa at position 51 is Val, Thr, Leu or Ser,   Xaa at position 52 is Lys, Ile, Arg, Val, Asn, Glu or Is Ser,   Xaa at position 53 is Ser, Phe, Val, Gly, Asn, Ile or Is His,   Xaa at position 54 is Leu, Val, Ile, Phe or His,   Xaa at position 55 is Gln, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg or Is Gly,   Xaa at position 56 is Asn or Pro,   Xaa at position 57 is Ala, Met, Pro, Arg, Glu, Thr Is Gln,   Xaa at position 58 is Ser, Glu, Met, Ala, His, Asn, A rg or Asp,   Xaa at position 59 is Ala, Glu, Asp, Leu, Ser, Gly, T hr, Arg or Pro,   Xaa at position 60 is Ile or Met,   Xaa at position 61 is Glu, Gly, Asp, Ser or Gln,   Xaa at position 62 is Ser, Val, Ala, Asn, Glu, Pro, G ly or Asp,   Xaa at position 63 is Ile, Ser or Leu,   Xaa at position 65 is Lys, Thr, Gly, Asn, Met, Arg, I le or Asp,   Xaa at position 66 is Asn, Val, Gly, Thr, Leu, Glu or Is Arg,   Xaa at position 67 is Leu or Val,   Xaa at position 68 is Leu, Gln, Trp, Arg, Asp, Ala, A sn, Glu, His, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr, or Va l,   Xaa at position 69 is Pro, Ala, Thr, Trp or Met,   Xaa at position 71 is Leu or Val,   Xaa at position 73 is Leu or Ser,   Xaa at position 74 is Ala, Arg or Trp,   Xaa at position 75 is Thr, Asp, Glu, His, Asn or Ser And   Xaa at position 76 is Ala, Asp or Met,   Xaa at position 77 is Ala, Pro, Ser, Thr, Phe, Leu Is Asp,   Xaa at position 78 is Pro or Ser,   Xaa at position 79 is Thr, Asp, Ser, Pro, Ala, Leu Is Arg,   Xaa at position 81 is His, Pro, Arg, Val, Leu, Gly, A sn, Ile, Phe, Ser or Thr,   Xaa at position 82 is Pro or Tyr,   Xaa at position 83 is Ile, Val or Ala,   Xaa at position 84 is His, Ile, Asn, Leu, Asp, Ala, T hr, Arg, Gln, Glu, Lys, Met, Ser, Tyr, Val Is Pro,   Xaa at position 85 is Ile, Leu, Val or Phe,   Xaa at position 86 is Lys, Leu, His, Arg, Ile, Gln, Pro or Ser,   Xaa at position 87 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr, V al, Asn, Ile, Leu or Tyr,   Xaa at position 88 is Gly, Glu, Lys or Ser,   Xaa at position 90 is Trp, Val, Tyr, Met or Leu,   Xaa at position 91 is Asn, Pro, Ala, Phe, Ser, Trp, G ln, Tyr, Leu, Lys, Ile, Asp or His,   Xaa at position 92 is Glu, Ser, Ala or Gly,   Xaa at position 94 is Arg, Ala, Gln, Ser or Lys,   Xaa at position 95 is Arg, Thr, Glu, Leu, Ser or Gly And   Xaa at position 98 is Thr, Val, Gln, Glu, His or Ser , And   Xaa at position 100 is Tyr or Trp,   Xaa at position 101 is Leu or Ala,   Xaa at position 102 is Lys, Thr, Met, Val, Trp, Ser, Leu, Ala, Asn, Gln, His, Met, Phe, Tyr, or I le,   Xaa at position 103 is Thr, Ser or Asn,   Xaa at position 105 is Glu, Ser, Pro, Leu, Thr, or T yr,   Xaa at position 106 is Asn, Pro, Leu, His, Val, or G ln,   Xaa at position 107 is Ala, Ser, Ile, Asn, Pro, Lys, Asp or Gly,   Xaa at position 108 is Gln, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, His, Ile, Tyr or Cys,   Xaa at position 109 is Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr or Leu,   In addition, Met- or Met-Ala- preceding the amino acid at position 1 4 to 44 amino acids designated by Xaa may be Different from the corresponding amino acid of buna (1-133) human interleukin-3] (15-125) human interleukin-3 mutant polypeptide represented by Or a polypeptide having substantially the same structure and substantially the same biological activity ．   9. Formula VII [In the formula,   Xaa at position 3 is Ser, Gly, Asp, Met or Gln,   Xaa at position 4 is Asn, His or Ile,   Xaa at position 5 is Met or Ile,   Xaa at position 7 is Asp or Glu,   Xaa at position 9 is Ile, Ala, Leu or Gly,   Xaa at position 10 is Ile, Val or Leu,   Xaa at position 11 is Thr, His, Gln or Ala,   Xaa at position 12 is His or Ala,   Xaa at position 15 is Gln, Asn or Val,   Xaa at position 16 is Pro, Gly or Gln,   Xaa at position 17 is Pro, Asp, Gly or Gln,   Xaa at position 18 is Leu, Arg, Gln, Asn, Gly, Ala or Is Glu,   Xaa at position 19 is Pro or Glu,   Xaa at position 20 is Leu, Val, Gly, Ser, Lys, Ala. , Arg, Gln, Glu, Ile, Phe, Thr or Met,   Xaa at position 21 is Leu, Ala, Asn, Pro, Gln or Val. And   Xaa at position 23 is Phe, Ser, Pro or Trp,   Xaa at position 24 is Asn or Ala,   Xaa at position 28 is Gly, Asp, Ser, Cys, Ala, Asn , Ile, Leu, Met, Tyr or Arg,   Xaa at position 30 is Asp or Glu,   Xaa at position 31 is Gln, Val, Met, Leu, Thr, Ala. , Asn, Glu, Ser or Lys,   Xaa at position 32 is Asp, Phe, Ser, Thr, Ala, Asn , Gln, Glu, His, Ile, Lys, Tyr, Val or Cys. ,   Xaa at position 36 is Glu, Ala, Asn, Ser or Asp,   Xaa at position 37 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 40 is Arg or Ala,   Xaa at position 41 is Arg, Thr, Val, Leu or Gly,   Xaa at position 42 is Pro, Gly, Ser, Gln, Ala, Arg , Asn, Glu, Leu, Thr, Val or Lys,   Xaa at position 46 is Ala or Ser,   Xaa at position 48 is Asn, Pro, Thr or Ile,   Xaa at position 49 is Arg or Lys,   Xaa at position 50 is Ala or Asn,   Xaa at position 51 is Val or Thr,   Xaa at position 52 is Lys or Arg,   Xaa at position 53 is Ser, Phe or His,   Xaa at position 54 is Leu, Ile, Phe or His,   Xaa at position 55 is Gln, Ala, Pro, Thr, Glu, Arg , Or Gly,   Xaa at position 57 is Ala, Pro or Arg,   Xaa at position 58 is Ser, Glu, Arg or Asp,   Xaa at position 59 is Ala or Leu,   Xaa at position 62 is Ser, Val, Ala, Asn, Glu, Pro or Is Gly,   Xaa at position 63 is Ile or Leu,   Xaa at position 65 is Lys, Thr, Gly, Asn, Met, Arg , Ile, Gly or Asp,   Xaa at position 66 is Asn, Gly, Glu or Arg,   Xaa at position 68 is Leu, Gln, Trp, Arg, Asp, Ala. , Asn, Glu, His, Ile, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr Or Val,   Xaa at position 69 is Pro or Thr,   Xaa at position 71 is Leu or Val,   Xaa at position 73 is Leu or Ser,   Xaa at position 74 is Ala or Trp,   Xaa at position 77 is Ala or Pro,   Xaa at position 79 is Thr, Asp, Ser, Pro, Ala, Leu Is Arg,   Xaa at position 81 is His, Pro, Arg, Val, Leu, Gly. , Asn, Phe, Ser or Thr,   Xaa at position 82 is Pro or Tyr,   Xaa at position 83 is Ile or Val,   Xaa at position 84 is His, Ile, Asn, Leu, Ala, Thr. , Leu, Arg, Gln, Leu, Lys, Met, Ser, Tyr, Val. Or Pro,   Xaa at position 85 is Ile, Leu or Val,   Xaa at position 86 is Lys, Arg, Ile, Gln, Pro or Ser And   Xaa at position 87 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr , Asn, IIe, Leu or Tyr,   Xaa at position 90 is Trp or Leu,   Xaa at position 91 is Asn, Pro, Ala, Ser, Trp, Gln , Tyr, Leu, Lys, Ile, Asp or His,   Xaa at position 92 is Glu or Gly,   Xaa at position 94 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 95 is Arg, Thr, Glu, Leu or Ser,   Xaa at position 98 is Thr, Val or Gln,   Xaa at position 100 is Tyr or Trp,   Xaa at position 101 is Leu or Ala,   Xaa at position 102 is Lys, Thr, Val, Trp, Ser, Ala, His, Met, Phe, Tyr or Ile,   Xaa at position 103 is Thr or Ser,   Xaa at position 106 is Asn, Pro, Leu, His, Val or Gln. And   Xaa at position 107 is Ala, Ser, Ile, Asn, Pro, Asp. Or Gly,   Xaa at position 108 is Gln, Ser, Met, Trp, Arg, Phe, Pro, His, Ile, Tyr or Cys,   Xaa at position 109 is Ala, Met, Glu, His, Ser, Pro, Tyr or Leu,   In addition, Met- or Met-Ala- preceding the amino acid at position 1 May have; the 4-35 amino acids designated Xaa are native (1-133) different from the corresponding amino acid of human interleukin-3] (15-125) Human interleukin-3 abrupt change according to claim 7 Foreign polypeptide.   10. Formula VIII [In the formula,   Xaa at position 3 is Ser, Gly, Asp or Gln,   Xaa at position 4 is Asn, His or Ile,   Xaa at position 9 is Ile, Ala, Leu or Gly,   Xaa at position 11 is Thr, His or Gln,   Xaa at position 12 is His or Ala,   Xaa at position 15 is Gln or Asn,   Xaa at position 16 is Pro or Gly,   Xaa at position 18 is Leu, Arg, Asn or Ala,   Xaa at position 20 is Leu, Val, Ser, Ala, Arg, Gln. , Glu, Ile, Phe, Thr or Met,   Xaa at position 21 is Leu, Ala, Asn or Pro,   Xaa at position 24 is Asn or Ala,   Xaa at position 28 is Gly, Asp, Ser, Ala, Asn, Ile , Leu, Met, Tyr or Arg,   Xaa at position 31 is Gln, Val, Met, Leu, Ala, Asn , Glu or Lys,   Xaa at position 32 is Asp, Phe, Ser, Ala, Gln, Glu , His, Val or Thr,   Xaa at position 36 is Glu, Asn, Ser or Asp,   Xaa at position 37 is Asn, Arg, Pro, Thr or His,   Xaa at position 41 is Arg, Leu or Gly,   Xaa at position 42 is Pro, Gly, Ser, Ala, Asn, Val , Leu or Gln,   Xaa at position 48 is Asn, Pro or Thr,   Xaa at position 50 is Ala or Asn,   Xaa at position 51 is Val or Thr,   Xaa at position 53 is Ser or Phe,   Xaa at position 54 is Leu or Phe,   Xaa at position 55 is Gln, Ala, Glu or Arg,   Xaa at position 62 is Ser, Val, Asn, Pro or Gly,   Xaa at position 63 is Ile or Leu,   Xaa at position 65 is Lys, Asn, Met, Arg, Ile or Gly And   Xaa at position 66 is Asn, Gly, Glu or Arg,   Xaa at position 68 is Leu, Gln, Trp, Arg, Asp, Asn , Glu, His, Met, Phe, Ser, Thr, Tyr or Val. ,   Xaa at position 73 is Leu or Ser,   Xaa at position 74 is Ala or Trp,   Xaa at position 77 is Ala or Pro,   Xaa at position 79 is Thr, Asp or Ala,   Xaa at position 81 is His, Pro, Arg, Val, Gly, Asn , Ser or Thr,   Xaa at position 84 is His, Ile, Asn, Ala, Thr, Arg , Gln, Glu, Lys, Met, Ser, Tyr, Val or Leu. ,   Xaa at position 85 is Ile or Leu,   Xaa at position 86 is Lys or Arg,   Xaa at position 87 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Pro , Asn, Ile, Leu or Tyr,   Xaa at position 91 is Asn, Pro, Ser, Ile or Asp,   Xaa at position 94 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 95 is Arg, Thr, Glu, Leu or Ser,   Xaa at position 98 is Thr or Gln,   Xaa at position 102 is Lys, Val, Trp or Ile,   Xaa at position 103 is Thr, Ala. His, Phe, Tyr or Ser And   Xaa at position 106 is Asn, Pro, Leu, His, Val or Gln. And   Xaa at position 107 is Ala, Ser, Ile, Pro or Asp,   Xaa at position 108 is Gln, Met, Trp, Phe, Pro, His, Ile or Tyr,   Xaa at position 109 is Ala, Met, Glu, Ser or Leu,   In addition, Met- or Met-Ala- preceding the amino acid at position 1 May have; the 4-26 amino acids designated by Xaa are (1-133) differs from the corresponding amino acid of human interleukin-3] (15-125) human interleukin-3 prongs according to claim 7, represented by A naturally occurring polypeptide, or substantially the same structure and substantially the same biological activity A polypeptide having   11. In the formula, Xaa at position 17 is Ser, Lys, Asp, Met, Gln. Or Arg,   Xaa at position 18 is Asn, His, Leu, Ile, Phe, Arg or Is Gln,   Xaa at position 19 is Met, Arg, Gly, Ala or Cys,   Xaa at position 20 is Ile, Cys, Gln, Glu, Arg, Pro Or Ala,   Xaa at position 21 is Asp, Phe, Lys, Arg, Ala, Gly or Is Val,   Xaa at position 22 is Glu, Trp, Pro, Ser, Ala, His or Is Gly,   Xaa at position 23 is Ile, Ala, Gly, Trp, Lys, Leu , Ser or Arg,   Xaa at position 24 is Ile, Gly, Arg or Ser,   Xaa at position 25 is Thr, His, Gly, Gln, Arg, Pro or Is Ala,   Xaa at position 26 is His, Thr, Phe, Gly, Ala or Tyr And   Xaa at position 27 is Leu, Gly, Arg, Thr, Ser or Ala. And   Xaa at position 28 is Lys, Leu, Gln, Gly, Pro, Val or Is Trp,   Xaa at position 29 is Gln, Asn, Loh, Pro, Arg or Val. And   Xaa at position 30 is Pro, His, Thr, Gly, Asp, Gln , Ser, Leu or Lys,   Xaa at position 31 is Pro, Asp, Gly, Arg, Leu or Gln. And   Xaa at position 32 is Leu, Arg, Gln, Asn, Gly, Ala or Is Glu,   Xaa at position 33 is Pro, Leu, Gln, Thr or Glu,   Xaa at position 34 is Leu, Gly, Ser or Lys,   Xaa at position 35 is Leu, Ala, Gly, Asn, Pro or Gln And   Xaa at position 36 is Asp, Leu or Val,   Xaa at position 37 is Phe, Ser or Pro,   Xaa at position 38 is Asn or Ala,   Xaa at position 40 is Leu, Trp or Arg,   Xaa at position 41 is Asn, Cys, Arg, Leu, His, Met or Is Pro,   Xaa at position 42 is Gly, Asp, Ser, Cys or Ala,   Xaa at position 42 is Glu, Asn, Tyr, Leu, Phe, Asp , Ala, Cys or Ser,   Xaa at position 44 is Asp, Ser, Leu, Arg, Lys, Thr , Met, Trp or Pro,   Xaa at position 45 is Gln, Pro, Phe, Val, Met, Leu , Thr, Lys or Trp,   Xaa at position 46 is Asp, Phe, Ser, Thr, Cys or Gly And   Xaa at position 47 is Ile, Gly, Ser, Arg, Pro or His And   Xaa at position 48 is Leu, Ser, Cys, Arg, His, Phe or Is Asn,   Xaa at position 49 is Met, Arg, Ala, Gly, Pro, Asn , His or Asp,   Xaa at position 50 is Glu, Leu, Thr, Asp or Tyr,   Xaa at position 51 is Asn, Arg, Met, Pro, Ser, Thr or Is His,   Xaa at position 52 is Asn, His, Arg, Leu, Gly, Ser or Is Thr,   Xaa at position 53 is Leu, Thr, Ala, Gly, Glu, Pro , Lys, Ser or Met,   Xaa at position 54 is Arg, Asp, Ile, Ser, Val, Thr. , Gln or Leu,   Xaa at position 55 is Arg, Thr, Val, Ser, Leu or Gly. And   Xaa at position 56 is Pro, Gly, Cys, Ser, Gln or Lys And   Xaa at position 57 is Asn or Gly,   Xaa at position 58 is Leu, Ser, Asp, Arg, Gln, Val or Is Cys,   Xaa at position 59 is Glu, Tyr, His, Leu, Pro or Arg And   Xaa at position 60 is Ala, Ser, Tyr, Asn or Thr,   Xaa at position 61 is Phe, Asn, Glu, Pro, Lys, Arg or Is Ser,   Xaa at position 62 is Asn, His, Val, Arg, Pro, Thr Or Ile,   Xaa at position 63 is Arg, Tyr, Trp, Ser, Pro or Val. And   Xaa at position 64 is Ala, Asn, Ser or Lys,   Xaa at position 65 is Val, Thr, Pro, His, Leu, Phe or Is Ser,   Xaa at position 66 is Lys, Ile, Val, Asn, Glu or Ser And   Xaa at position 67 is Ser, Ala, Phe, Val, Gly, Asn , Ile, Pro or His,   Xaa at position 68 is Leu, Val, Trp, Ser, Phe, Thr or Is His,   Xaa at position 69 is Gln, Ala, Pro, Thr, Arg, Trp , Gly or Leu,   Xaa at position 70 is Asn, Leu, Val, Trp, Pro or Ala. And   Xaa at position 71 is Ala, Met, Leu, Arg, Glu, Thr. , Gln, Trp or Asn,   Xaa at position 72 is Ser, Glu, Met, Ala, His, Asn , Arg or Asp,   Xaa at position 73 is Ala, Glu, Asp, Leu, Ser, Gly , Thr or Arg,   Xaa at position 74 is Ile, Thr, Pro, Arg, Gly or Ala. And   Xaa at position 75 is Glu, Lys, Gly, Asp, Pro, Trp , Arg, Ser or Leu,   Xaa at position 76 is Ser, Val, Ala, Asn, Trp, Glu. , Pro, Gly or Asp,   Xaa at position 77 is Ile, Ser, Arg or Thr,   Xaa at position 78 is Leu, Ala, Ser, Glu, Gly or Arg And   Xaa at position 79 is Lys, Thr, Gly, Asn, Met, Ile. Or Asp,   Xaa at position 80 is Asn, Trp, Val, Gly, Thr, Leu Or Arg,   Xaa at position 81 is Leu, Gln, Gly, Ala, Trp, Arg Or Lys,   Xaa at position 82 is Leu, Gln, Lys, Trp, Arg or Asp And   Xaa at position 83 is Pro, Thr, Trp, Arg or Met,   Xaa at position 84 is Cys, Glu, Gly, Arg, Met or Val And   Xaa at position 85 is Leu, Asn or Gln,   Xaa at position 86 is Pro, Cys, Arg, Ala or Lys,   Xaa at position 87 is Leu, Ser, Trp or Gly,   Xaa at position 88 is Ala, Lys, Arg, Val or Trp,   Xaa at position 89 is Thr, Asp, Cys, Leu, Val, Glu , His or Asn,   Xaa at position 90 is Ala, Ser, Asp, Ile or Met,   Xaa at position 91 is Ala, Ser, Thr, Phe, Leu, Asp Or His,   Xaa at position 92 is Pro, Phe, Arg, Ser, Lys, His Or Leu,   Xaa at position 93 is Thr, Asp, Ser, Asn, Pro, Ala , Leu or Arg,   Xaa at position 94 is Arg, Ile, Ser, Glu, Leu, Val Or Pro,   Xaa at position 95 is His, Gln, Pro, Val, Leu, Thr. Or Tyr,   Xaa at position 96 is Pro, Lys, Tyr, Gly, Ile or Thr And   Xaa at position 97 is Ile, Lys, Ala or Asn,   Xaa at position 98 is His, Ile, Asn, Leu, Asp, Ala. , Thr or Pro,   Xaa at position 99 is Ile, Arg, Asp, Pro, Gln, Gly , Phe or His,   Xaa at position 100 is Lys, Tyr, Leu, His, Ile, Ser, Gln or Pro,   Xaa at position 101 is Asp, Pro, Met, Lys, His, Thr, Val, Tyr or Gln,   Xaa at position 102 is Gly, Leu, Glu, Lys, Ser, Tyr. Is Pro,   Xaa at position 103 is Asp or Ser,   Xaa at position 104 is Trp, Val, Cys, Tyr, Thr, Met, Pro, Leu, Gln, Lys, Ala, Phe or Gly,   Xaa at position 105 is Asn, Pro, Ala, Phe, Ser, Trp, Gln, Tyr, Leu, Lys, Ile, or His,   Xaa at position 106 is Glu, Ser, Ala, Lys, Thr, Ile, Gly or Pro,   Xaa at position 108 is Arg, Asp, Leu, Thr, Ile or Pro. And   Xaa at position 109 is Arg, Thr, Pro, Glu, Tyr, Leu, (15-125) human intercalation according to claim 7, which is Ser or Gly. Leukin-3 mutant polypeptide.   12. In the formula, Xaa at position 28 is Gly, Asp, Ser, Ile, Leu , Met, Tyr or Ala,   Xaa at position 31 is Gln, Val, Met or Asn,   Xaa at position 32 is Asp, Ser, Ala, Gln, His or Val. And   Xaa at position 36 is Glu or Asp,   Xaa at position 37 is Asn, Pro or Thr,   Xaa at position 48 is Asn or Pro,   Xaa at position 62 is Ser or Pro,   Xaa at position 68 is Leu, Trp, Asp, Asn, Glu, His , Phe, Ser or Tyr,   Xaa at position 81 is His, Arg, Thr, Asn or Ser,   Xaa at position 84 is His, Ile, Leu, Ala, Arg, Gln. , Lys, Met, Ser, Tyr or Val,   Xaa at position 86 is Lys or Arg,   Xaa at position 87 is Asp, Pro, His. Asn, Ile or Leu And   Xaa at position 91 is Asn or Pro,   Xaa at position 94 is Arg, Ala or Ser,   Xaa at position 102 is Lys, Val, Trp, Ala, His, Phe. Or Tyr,   Xaa at position 107 is Ala or Ile,   Xaa at position 108 is Gln or Ile,   Xaa at position 109 is Ala, Met, or Glu. The listed human interleukin-3 mutant polypeptides.   13. formula (In the formula,   m is 0 or 1,   Xaa at position 18 is Asn or Ile,   Xaa at position 19 is Met, Ala or Ile,   Xaa at position 20 is Ile, Pro or Ile,   Xaa at position 23 is Ile, Ala or Leu,   Xaa at position 25 is Thr or His,   Xaa at position 29 is Gln, Arg, Val or Ile,   Xaa at position 32 is Leu, Ala, Asn or Arg,   Xaa at position 34 is Leu or Ser,   Xaa at position 37 is Phe, Pro or Ser,   Xaa at position 38 is Asn or Ala,   Xaa at position 42 is Gly, Ala, Ser, Asp or Asn,   Xaa at position 45 is Gln, Val or Met,   Xaa at position 46 is Asp or Ser,   Xaa at position 49 is Met, Ile, Leu or Asp,   Xaa at position 50 is Glu or Asp,   Xaa at position 51 is Asn, Arg or Ser,   Xaa at position 55 is Arg, Leu or Thr,   Xaa at position 56 is Pro or Ser,   Xaa at position 59 is Glu or Leu,   Xaa at position 60 is Ala or Ser,   Xaa at position 62 is Asn, Val or Pro,   Xaa at position 63 is Arg or His,   Xaa at position 65 is Val or Ser,   Xaa at position 67 is Ser, Asn, His or Gln,   Xaa at position 69 is Gln or Glu,   Xaa at position 73 is Ala or Gly,   Xaa at position 76 is Ser, Ala or Pro,   Xaa at position 79 is Lys, Arg or Ser,   Xaa at position 82 is Leu, Glu, Val or Trp,   Xaa at position 85 is Leu or Val,   Xaa at position 87 is Leu, Ser or Tyr,   Xaa at position 88 is Ala or Trp,   Xaa at position 91 is Ala or Pro,   Xaa at position 93 is Pro or Ser,   Xaa at position 95 is His or Thr,   Xaa at position 98 is His, Ile or Thr,   Xaa at position 100 is Lys or Arg,   Xaa at position 101 is Asp, Ala or Met,   Xaa at position 105 is Asn or Glu,   Xaa at position 109 is Arg, Glu or Leu,   Xaa at position 112 is Thr or Gln,   Xaa at position 116 is Lys, Val, Trp or Ser,   Xaa at position 117 is Thr or Ser,   Xaa at position 120 is Asn, Gln or His,   Xaa at position 123 is Ala or Glu.   However, the 4 to 26 amino acids represented by Xaa are native human Different from the corresponding amino acid of Thaleukin-3) polypeptide or substantially A polypeptide having the same structure and substantially the same biological activity as.   14. In the formula, Xaa at position 18 is Ile,   Xaa at position 19 is Ala or Ile,   Xaa at position 20 is Pro or Leu,   Xaa at position 23 is Ala or Leu,   Xaa at position 25 is His,   Xaa at position 29 is Arg, Val or Ile,   Xaa at position 32 is Ala, Asn or Arg,   Xaa at position 34 is Ser,   Xaa at position 37 is Pro or Ser,   Xaa at position 38 is Ala,   Xaa at position 42 is Ala, Ser, Asp or Asn,   Xaa at position 45 is Val or Met,   The polypeptide according to claim 13, wherein Xaa at position 46 is Ser.   15. Where Xaa at position 49 is Ile, Leu or Asp,   Xaa at position 50 is Asp,   Xaa at position 51 is Arg or Ser,   Xaa at position 55 is Leu or Thr,   Xaa at position 56 is Ser,   Xaa at position 59 is Glu or Leu,   Xaa at position 60 is Ala or Ser,   Xaa at position 62 is Val or Pro,   Xaa at position 63 is His,   Xaa at position 65 is Ser,   Xaa at position 67 is Asn, His or Gln,   The polypeptide according to claim 13, wherein Xaa at position 69 is Glu.   16. In the formula, Xaa at position 73 is Gly,   Xaa at position 76 is Ala or Pro,   Xaa at position 79 is Arg or Ser,   Xaa at position 82 is Gln, Val or Trp,   Xaa at position 85 is Val,   Xaa at position 87 is Ser or Tyr,   Xaa at position 88 is Trp,   Xaa at position 91 is Pro,   Xaa at position 93 is Ser,   Xaa at position 95 is Thr,   Xaa at position 98 is Ile or Thr,   Xaa at position 100 is Arg,   Xaa at position 101 is Ala or Met,   The polypeptide according to claim 13, wherein Xaa at position 105 is Glu.   17． In the formula, Xaa at position 109 is Glu or Leu,   Xaa at position 112 is Gln,   Xaa at position 116 is Val, Trp or Ser,   Xaa at position 117 is Ser,   Xaa at position 120 is Glu or His,   The polypeptide according to claim 13, wherein Xaa at position 123 is Glu.   18. In the formula, Xaa at position 18 is Ile,   Xaa at position 19 is Ala or Ile,   Xaa at position 20 is Pro or Leu,   Xaa at position 23 is Ala or Leu,   Xaa at position 25 is His,   Xaa at position 29 is Arg, Val or Ile,   Xaa at position 32 is Ala, Asn or Arg,   Xaa at position 34 is Ser,   Xaa at position 37 is Pro or Ser,   Xaa at position 38 is Ala,   Xaa at position 42 is Ala, Ser, Asp or Asn,   Xaa at position 45 is Val or Met,   Xaa at position 46 is Ser,   Xaa at position 49 is Ile, Leu or Asp,   Xaa at position 50 is Asp,   Xaa at position 51 is Arg or Ser,   Xaa at position 55 is Leu or Thr,   Xaa at position 56 is Ser,   Xaa at position 59 is Glu or Leu,   Xaa at position 60 is Ala or Ser,   Xaa at position 62 is Val or Pro,   Xaa at position 63 is His,   Xaa at position 65 is Ser,   Xaa at position 67 is Asn, His or Gln,   The polypeptide according to claim 13, wherein Xaa at position 69 is Glu.   19. In the formula, Xaa at position 73 is Gly,   Xaa at position 76 is Ala or Pro,   Xaa at position 79 is Arg or Ser,   Xaa at position 82 is Gln, Val or Trp,   Xaa at position 85 is Val,   Xaa at position 87 is Ser or Tyr,   Xaa at position 88 is Trp,   Xaa at position 91 is Pro,   Xaa at position 93 is Ser,   Xaa at position 95 is Thr,   Xaa at position 98 is Ile or Thr,   Xaa at position 100 is Arg,   Xaa at position 101 is Ala or Met,   Xaa at position 105 is Glu,   Xaa at position 109 is Glu or Leu,   Xaa at position 112 is Gln,   Xaa at position 116 is Val, Trp or Ser,   Xaa at position 117 is Ser,   Xaa at position 120 is Glu or His,   The polypeptide according to claim 13, wherein Xaa at position 123 is Glu.   20. formula, [In the formula,   m is 0 or 1,   n is 0 or 1,   p is 0 or 1,   Xaa at position 4 is Asn or Ile,   Xaa at position 5 is Met, Ala or Ile,   Xaa at position 6 is Ile, Pro or Leu,   Xaa at position 9 is Ile, Ala or Leu,   Xaa at position 11 is Thr or His,   Xaa at position 15 is Gln, Arg, Val or Ile,   Xaa at position 18 is Leu, Ala, Asn or Arg,   Xaa at position 20 is Leu or Ser,   Xaa at position 23 is Phe, Pro or Ser,   Xaa at position 24 is Asn or Ala,   Xaa at position 28 is Gly, Ala, Ser, Asp or Asn,   Xaa at position 31 is Gln, Val or Met,   Xaa at position 32 is Asp or Ser,   Xaa at position 35 is Met, Ile or Asp,   Xaa at position 36 is Glu or Asp,   Xaa at position 37 is Asn, Arg or Ser,   Xaa at position 41 is Arg, Leu or Thr,   Xaa at position 42 is Pro or Ser,   Xaa at position 45 is Glu or Leu,   Xaa at position 46 is Ala or Ser,   Xaa at position 48 is Asn, Val or Pro,   Xaa at position 49 is Arg or His,   Xaa at position 51 is Val or Ser,   Xaa at position 53 is Ser, Asn, His or Gln,   Xaa at position 55 is Gln or Glu,   Xaa at position 59 is Ala or Gly,   Xaa at position 62 is Ser, Ala or Pro,   Xaa at position 65 is Lys, Arg or Ser,   Xaa at position 67 is Leu, Glu or Val,   Xaa at position 68 is Leu, Glu, Val or Trp,   Xaa at position 71 is Leu or Val,   Xaa at position 73 is Leu, Ser or Tyr,   Xaa at position 74 is Ala or Trp,   Xaa at position 77 is Ala or Pro,   Xaa at position 79 is Pro or Ser,   Xaa at position 81 is. His or Thr,   Xaa at position 84 is His, Ile or Thr,   Xaa at position 86 is Lys or Arg,   Xaa at position 87 is Asp, Ala or Met,   Xaa at position 91 is Asn or Glu,   Xaa at position 95 is Arg, Glu or Leu,   Xaa at position 98 is Thr or Gln,   Xaa at position 102 is Lys, Val, Trp or Ser,   Xaa at position 103 is Thr or Ser,   Xaa at position 106 is Asn, Gln or His,   Xaa at position 109 is Ala or Glu.   However, the 4 to 26 amino acids shown by Xaa are native (15- 125) different from the corresponding amino acid of human interleukin-3] Tide, or a polypeptide having substantially the same structure and substantially the same biological activity. Petit.   21. In the formula, Xaa at position 4 is Ile,   Xaa at position 5 is Ala or Ile,   Xaa at position 6 is Pro or Leu,   Xaa at position 9 is Ala or Leu,   Xaa at position 11 is His,   Xaa at position 15 is Arg, Val or Ile,   Xaa at position 18 is Ala, Asn or Arg,   Xaa at position 20 is Ser,   Xaa at position 23 is Pro or Ser,   Xaa at position 24 is Ala,   Xaa at position 28 is Ala, Ser, Asp or Asn,   Xaa at position 31 is Val or Met,   The polypeptide according to claim 20, wherein Xaa at position 32 is Ser.   22. Where Xaa at position 35 is Ile, Leu or Asp,   Xaa at position 36 is Asp,   Xaa at position 37 is Arg or Ser,   Xaa at position 41 is Leu or Thr,   Xaa at position 42 is Ser,   Xaa at position 45 is Glu or Leu,   Xaa at position 46 is Ala or Ser,   Xaa at position 48 is Val or Pro,   Xaa at position 49 is His,   Xaa at position 51 is Ser,   Xaa at position 53 is Asn, His or Gln,   The polypeptide. According to claim 20, wherein Xaa at position 55 is Glu.   23. Xaa at position 59 is Gly,   Xaa at position 62 is Ala or Pro,   Xaa at position 65 is Arg or Ser,   Xaa at position 67 is Glu or Val,   Xaa at position 68 is Glu, Val or Trp,   Xaa at position 71 is Val,   Xaa at position 73 is Ser or Tyr,   Xaa at position 74 is Trp,   Xaa at position 77 is Pro,   Xaa at position 79 is Ser,   Xaa at position 81 is Thr,   Xaa at position 84 is Ile or Thr,   Xaa at position 86 is Arg,   Xaa at position 87 is Ala or Met,   The polypeptide according to claim 20, wherein Xaa at position 91 is Glu.   24. In the formula, Xaa at position 95 is Glu or Leu,   Xaa at position 98 is Gln,   Xaa at position 102 is Val, Trp or Ser,   Xaa at position 103 is Ser,   Xaa at position 106 is Gln or His,   The polypeptide according to claim 20, wherein Xaa at position 109 is Glu.   25. Xaa at position 4 is Ile,   Xaa at position 5 is Ala or Ile,   Xaa at position 6 is Pro or Leu,   Xaa at position 9 is Ala or Leu,   Xaa at position 11 is His,   Xaa at position 15 is Arg, Val or Ile,   Xaa at position 18 is Ala, Asn or Arg,   Xaa at position 20 is Ser,   Xaa at position 23 is Pro or Ser,   Xaa at position 24 is Ala,   Xaa at position 28 is Ala, Ser, Asp or Asn,   Xaa at position 31 is Val or Met,   Xaa at position 32 is Ser,   Xaa at position 35 is Ile, Leu or Asp,   Xaa at position 36 is Asp,   Xaa at position 37 is Arg or Ser,   Xaa at position 41 is Leu or Thr,   Xaa at position 42 is Ser,   Xaa at position 45 is Glu or Leu,   Xaa at position 46 is Ala or Ser,   Xaa at position 48 is Val or Pro,   Xaa at position 49 is His,   Xaa at position 51 is Ser,   Xaa at position 53 is Asn, His or Gln,   The polypeptide. According to claim 20, wherein Xaa at position 55 is Glu.   26. In the formula, Xaa at position 59 is Gly,   Xaa at position 62 is Ala or Pro,   Xaa at position 65 is Arg or Ser,   Xaa at position 67 is Glu or Val,   Xaa at position 68 is Glu, Val or Trp,   Xaa at position 71 is Val,   Xaa at position 73 is Ser or Tyr,   Xaa at position 74 is Trp,   Xaa at position 77 is Pro,   Xaa at position 79 is Ser,   Xaa at position 81 is Thr,   Xaa at position 84 is Ile or Thr,   Xaa at position 86 is Arg,   Xaa at position 87 is Ala or Met,   Xaa at position 91 is Glu,   Xaa at position 95 is Glu or Leu,   Xaa at position 98 is Gln,   Xaa at position 102 is Val, Trp or Ser,   Xaa at position 103 is Ser,   Xaa at position 106 is Gln or His,   The polypeptide according to claim 20, wherein Xaa at position 109 is Glu.   27. The following polypeptides The polypeptide according to claim 20 selected from   28. The polypeptide of claim 1, the polypeptide of claim 2, and the claim 3 ”polypeptide,“ claim 4 ”polypeptide,“ claim 5 ”polypeptide De, polypeptide of "claim 6", polypeptide of "claim 7", "claim 8" Polypeptide, "claim 9" polypeptide, "claim 10" polypeptide , The polypeptide of "claim 11", the polypeptide of "claim 12", "claim 1" 3 ”polypeptide,“ claim 14 ”polypeptide,“ claim 15 ”polypeptide Peptide, polypeptide of "claim 16", polypeptide of "claim 17", "contract" The polypeptide of claim 18 ", the polypeptide of claim 19" and the claim 20 of Polypeptide, polypeptide of "claim 21", polypeptide of "claim 22" , The polypeptide of claim 23, the polypeptide of claim 24, the claim 2 5 ”polypeptide,“ claim 26 ”polypeptide and“ claim 27 ”polypeptide. Mutant human interleukin-3 polypep selected from the group consisting of lipopeptides Treatment of hematopoietic cell defects composed of a therapeutically effective amount of tide and a pharmaceutically acceptable carrier Pharmaceutical composition.   29. Treated with a polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 88 The hematopoietic cell according to claim 28, which is composed of an effective amount and a pharmaceutically acceptable carrier. Pharmaceutical composition for the treatment of defects   30. With a polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 89 treated The hematopoietic cell according to claim 28, which is composed of an effective amount and a pharmaceutically acceptable carrier. Pharmaceutical composition for the treatment of defects   31. With the treatment of a polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 90 The hematopoietic cell according to claim 28, which is composed of an effective amount and a pharmaceutically acceptable carrier. Pharmaceutical composition for the treatment of defects   32. A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 66,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 67,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 68,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 69,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 70,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 71,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 72,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 73,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 74,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 75,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 76,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 77,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 78,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 79,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 80,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 81,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 82,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 83,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 84,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 85,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 86,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 87,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 91,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 92,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 93,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 94,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 95,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 96,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 258,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 259,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 260,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 261,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 262,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 263,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 278,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 279,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 314,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 315,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 316,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 264,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 265,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 266,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 267,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 268,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 269,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 270,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 271,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 272,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 273,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 274,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 275,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 276,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 277,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 280,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 281,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 282,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 283,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 284,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 285,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 286,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 287,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 288,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 289,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 299,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 300,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 301,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 302,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 303,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 304,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 305,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 306,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 307,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 308,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 309,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 310,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 311;   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 312,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 313,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 314,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 317,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 318,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 319,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 320,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 321,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 322,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 323,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 324,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 325,   A group consisting of polypeptides having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 326 Consisting of a therapeutically effective amount of a selected polypeptide and a pharmaceutically acceptable carrier A pharmaceutical composition for treating a hematopoietic cell defect according to claim 28.   33. A method that stimulates the production of hematopoietic cells requires such treatment To the patient, the polypeptide of claim 1, the polypeptide of claim 2, and the claim 3 ”polypeptide,“ claim 4 ”polypeptide,“ claim 5 ”polypeptide De, polypeptide of "claim 6", polypeptide of "claim 7", "claim 8" Polypeptide, "claim 9" polypeptide, "claim 10" polypeptide , The polypeptide of "claim 11", the polypeptide of "claim 12", "claim 1" 3 ”polypeptide,“ claim 14 ”polypeptide,“ claim 15 ”polypeptide Peptide, polypeptide of "claim 16", polypeptide of "claim 17", "contract" The polypeptide of claim 18 ", the polypeptide of claim 19" and the claim 20 of Polypeptide, polypeptide of "claim 21", polypeptide of "claim 22" , The polypeptide of claim 23, the polypeptide of claim 24, the claim 2 5 ”polypeptide,“ claim 26 ”polypeptide and“ claim 27 ”polypeptide. Mutant human interleukin-3 polypep selected from the group consisting of lipopeptides A method for stimulating the production of hematopoietic cells, which comprises administering a therapeutically effective amount of tide.   34. Treated with a polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 88 The method for stimulating the production of hematopoietic cells according to claim 33, which comprises administering an effective amount.   35. With a polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 89 treated The method for stimulating the production of hematopoietic cells according to claim 33, which comprises administering an effective amount.   36. With the treatment of a polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 90 The method for stimulating the production of hematopoietic cells according to claim 33, which comprises administering an effective amount.   37. A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 66,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 67,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 68,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 69,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 70,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 71,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 72,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 73,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 74,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 75,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 76,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 77,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 78,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 79,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 80,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 81,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 82,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 83,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 84,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 85,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 86,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 87,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 91,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 92,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 93,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 94,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 95,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 96,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 258,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 259,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 260,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 261,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 262,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 263,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 278,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 279,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 314,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 315,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 316,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 264,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 265,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 266,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 267,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 268,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 269,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 270,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 271,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 272,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 273,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 274,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 275,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 276,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 277,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 280,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 281,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 282,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 283,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 284,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 285,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 286,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 287,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 288,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 289,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 299,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 300,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 301,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 302,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 303,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 304,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 305,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 306,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 307,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 308,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 309,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 310,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 311;   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 312,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 313,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 314,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 317,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 318,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 319,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 320,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 321,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 322,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 323,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 324,   A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 325,   A group consisting of polypeptides having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 326 In Claim 33, which comprises administering a therapeutically effective amount of a reselected polypeptide. A method of stimulating the production of hematopoietic cells as described.   38. Vector DNA, the polypeptide of claim 1 and the polypeptide of claim 2. Peptide, polypeptide of "claim 3", polypeptide of "claim 4", "claim" The polypeptide of claim 5, the polypeptide of claim 6, and the polypeptide of claim 7. Tide, the polypeptide of "claim 8", the polypeptide of "claim 9", "claim 1" 0 "polypeptide," claim 11 "polypeptide," claim 12 "polypeptide Peptide, polypeptide of "claim 13", polypeptide of "claim 14", "contract" The polypeptide of claim 15 ", the polypeptide of claim 16" and the claim of "claim 17" Polypeptide, polypeptide of "claim 18", polypeptide of "claim 19" , The polypeptide of "claim 20", the polypeptide of "claim 21", "claim 2" 2 ”polypeptide,“ claim 23 ”polypeptide,“ claim 24 ”polypeptide Peptide, the polypeptide of claim 25, the polypeptide of claim 26 and It encodes a polypeptide selected from the group consisting of the polypeptides of "claim 27". A recombinant DNA sequence consisting of   39. It has a vector DNA and a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 97. The recombinant DNA sequence according to claim 38, which comprises DNA   40. Vector DNA and nucleoid corresponding to SEQ ID NO: 100 or 103 The recombinant DNA sequence according to claim 38, which comprises a DNA having a nucleotide sequence.   41. It has a vector DNA and a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 161. The recombinant DNA sequence according to claim 38, which comprises   42. Vector DNA,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 98,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 99,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 101,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 102,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 104,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 105,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 107,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 108,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 109,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 110,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 111,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 112,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 113,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 114,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 115,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 116,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 117,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 118,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 119,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 120,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 121,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 122,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 123,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 124,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 125,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 126,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 127,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 160,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 161;   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 398,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 346,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 347,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 303,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 404,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 405,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 332,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 333,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 334,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 335,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 336,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 337,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 338,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 339,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 340,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 341,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 342,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 343,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 344,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 345,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 348,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 349,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 350,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 352,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 353,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 354,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 355,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 356,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 357,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 358,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 359,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 360,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 361,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 362,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 363,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 364,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 365,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 366,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 367,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 368,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 369,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 370,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 371,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 372,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 373,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 374,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 375,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 376,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 377,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 378,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 379,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 380,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 381,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 382,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 384,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 385,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 386,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 387,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 388,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 389,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 390,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 391,   Selected from DNAs having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 392 The recombinant DNA sequence according to claim 38, which is composed of DNA.   43. An encoded polypeptide containing the recombinant DNA sequence of claim 38. A host cell capable of expressing the host.   44. It has a vector DNA and a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 97. A host according to claim 43, which is composed of DNA and is capable of expressing the encoded polypeptide. cell.   45. Vector DNA and nucleoti corresponding to SEQ ID NO: 100 or 103 A DNA comprising a sequence having a coding sequence and capable of expressing the encoded polypeptide Item 43 "host cell.   46. Has a vector DNA and a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 161 The inn of claim 43, which consists of DNA that expresses the encoded polypeptide. Main cell.   47. Method for producing mutant human interleukin-3 polypeptide The following steps,   (A) a recombinant DNA sequence consisting of the vector DNA and the DNA of "claim 38" Expresses the encoded polypeptide under conditions that contain and allow expression of recombinant DNA Culturing host cells capable of; and   (B) A method for producing a polypeptide, which comprises harvesting a polypeptide from a culture.   48. Method for producing mutant human interleukin-3 polypeptide The following steps,   (A) having a nucleotide sequence corresponding to vector DNA and SEQ ID NO: 97 Conditions containing a recombinant DNA sequence consisting of DNA and capable of expressing the recombinant DNA Of a host cell capable of expressing a polypeptide encoded by:   48. A method according to claim 47, which comprises (b) harvesting the polypeptide from the culture. Build method.   49. Method for producing mutant human interleukin-3 polypeptide The following steps,   (A) Vector DNA and nucleoti corresponding to SEQ ID NO: 100 or 103 Expression of recombinant DNA containing recombinant DNA sequence consisting of DNA having Culturing a host cell capable of expressing the encoded polypeptide under conditions capable of And   48. A method according to claim 47, which comprises (b) harvesting the polypeptide from the culture. Build method.   50. Method for producing mutant human interleukin-3 polypeptide The following steps,   (A) has a nucleotide sequence corresponding to vector DNA and SEQ ID NO: 161 Conditions that contain a recombinant DNA sequence consisting of Culturing a host cell capable of expressing a polypeptide encoded below; and   48. A method according to claim 47, which comprises (b) harvesting the polypeptide from the culture. Build method   51. A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 97,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 100,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 103,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 160,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 161;   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 404,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 405,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 364,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 368,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 369,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 376,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 377,   A DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 378,   From the group consisting of DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 385 A vector containing a gene having a selected DNA sequence.   52. Corresponds to the prober, ribosome binding site, and SEQ ID NO: 88 A polypeptide having an amino acid sequence, the amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 89 And a polypeptide having an amino acid sequence corresponding to SEQ ID NO: 90. Directly on the DNA sequence encoding a polypeptide selected from the group consisting of A recombinant DNA vector comprising a linked signal peptide, which Recombinant capable of directing expression of mutant human interleukin-3 polypeptide DNA vector.   53. The recombinant DN according to claim 51, wherein the promoter is AraBAD. A vector.   54. The recombinant according to claim 51, wherein the ribosome binding site is g10-L. DNA vector.   55. In the claim 51, wherein the signal peptide is a lamB signal peptide. The recombinant DNA vector described.   56. The signal peptide is the lamB signal peptide shown in FIG. Item 51. The recombinant DNA vector according to item 51.   57. The promoter is AraBAD and the ribosome binding site is g10-L The recombinant DNA vector according to claim 51, which is   58. The promoter is AraBAD and the ribosome binding site is g10-L And the signal peptide is a lamB signal peptide. The recombinant DNA vector described.   59. The promoter is AraBAD and the ribosome binding site is g10-L And the signal peptide is the lamB signal peptide shown in FIG. Item 51. The recombinant DNA vector according to item 51.   60. A recombinant bacterial host comprising the vector of claim 51, SEQ ID NO: A polypeptide having an amino acid sequence corresponding to 88, corresponding to SEQ ID NO: 89 Polypeptide having amino acid sequence, and amino acid corresponding to SEQ ID NO: 90 Mutant human interleukin selected from the group consisting of polypeptides having a sequence A recombinant bacterial host that secretes 3 polypeptides.   61. formula, (In the formula,   m is 0 or 1,   Xaa at position 18 is Asn or Ile,   Xaa at position 25 is Thr or His,   Xaa at position 29 is Gln, Arg or Val,   Xaa at position 32 is Leu, Ala or Asn,   Xaa at position 37 is Phe, Pro or Ser,   Xaa at position 42 is Gly, Ala or Ser,   Xaa at position 45 is Gln, Val or Met,   Xaa at position 51 is Asn or Arg,   Xaa at position 55 is Arg, Leu or Thr,   Xaa at position 59 is Glu or Leu,   Xaa at position 60 is Ala or Ser,   Xaa at position 62 is Asn or Val,   Xaa at position 67 is Ser, Asn or His,   Xaa at position 69 is Gln or Glu,   Xaa at position 73 is Ala or Gly,   Xaa at position 76 is Ser or Ala,   Xaa at position 79 is Lys or Arg,   Xaa at position 82 is Leu, Glu or Val,   Xaa at position 87 is Leu or Ser,   Xaa at position 93 is Pro or Ser,   Xaa at position 98 is His, Ile or Thr,   Xaa at position 101 is Asp or Ala,   Xaa at position 105 is Asn or Glu,   Xaa at position 109 is Arg or Glu,   Xaa at position 116 is Lys or Val,   Xaa at position 120 is Asn, Gln or His,   Xaa at position 123 is Ala or Glu.   However, the 4 to 27 amino acids shown by Xaa are native human Unlike the corresponding amino acid of Thaleukin-3, the N-terminal of the polypeptide From 1 to 14 amino acids of amino acids 1-14 and / or amino acids from the C-terminus. 1 to 15 amino acids of mino acid 119-133 are deleted) Or a polypeptide having substantially the same structure and substantially the same biological activity ．   62. Method for producing mutant human interleukin-3 polypeptide The following steps,   (A) has a nucleotide sequence corresponding to vector DNA and SEQ ID NO: 160 Conditions that contain a recombinant DNA sequence consisting of Culturing a host cell capable of expressing a polypeptide encoded below; and   48. A method according to claim 47, which comprises (b) harvesting the polypeptide from the culture. Build method.   63. Method for producing mutant human interleukin-3 polypeptide The following steps,   (A) has a nucleotide sequence corresponding to vector DNA and SEQ ID NO: 161 Conditions that contain a recombinant DNA sequence consisting of Culturing a host cell capable of expressing a polypeptide encoded below; and   48. A method according to claim 47, which comprises (b) harvesting the polypeptide from the culture. Build method   64. Contains vector DNA and a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 160. And a DNA having a nucleotide sequence corresponding to SEQ ID NO: 160 Containing a recombinant DNA sequence composed of a DNA sequence selected from the group consisting of: A host cell capable of expressing the encoded polypeptide.   65. formula, The polypeptide according to claim 27, which is represented by:
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