JPH0787780B2 - Novel sarcosine oxidase and its production method - Google Patents
Novel sarcosine oxidase and its production methodInfo
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- JPH0787780B2 JPH0787780B2 JP1086611A JP8661189A JPH0787780B2 JP H0787780 B2 JPH0787780 B2 JP H0787780B2 JP 1086611 A JP1086611 A JP 1086611A JP 8661189 A JP8661189 A JP 8661189A JP H0787780 B2 JPH0787780 B2 JP H0787780B2
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は熱安定性に優れ、かつKm値の小さい新規なザル
コシンオキシダーゼ及びその製法に関するものである。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel sarcosine oxidase having excellent thermostability and a small Km value, and a method for producing the same.
本発明の新規なザルコシンオキシダーゼは、血清、尿中
のクレアチン、クレアチニンの定量に用いられる。The novel sarcosine oxidase of the present invention is used for quantifying creatine and creatinine in serum and urine.
（従来の技術） 従来からザルコシンオキシダーゼは、バチルス属（特開
昭54-52789号公報）、コリネバクテリウム属（J.Bioche
m.89,599,（1981））、シリンドロカルポン属（特開昭5
6-92790号公報）、アルスロバクター属（特開昭54-2889
3号公報）、シュードモナス属（特開昭60-43379号公
報）等の菌株が生産することが知られている。しかしな
がらいずれの菌株の生産するザルコシンオキシダーゼも
熱安定性が十分でなく、もしくはKm値が大きく、実用上
問題があった。(Prior Art) Conventionally, sarcosine oxidase has been classified into the genus Bacillus (Japanese Patent Laid-Open No. 54-52789) and the genus Corynebacterium (J. Bioche).
m. 89 , 599, (1981)), genus Cylindrocarpon (Japanese Patent Laid-Open No. Sho 5
6-92790), Arthrobacter genus (JP-A-54-2889)
3) and Pseudomonas sp. (Japanese Patent Laid-Open No. 60-43379) are known to be produced. However, the sarcosine oxidase produced by any of the strains had insufficient thermal stability, or had a large Km value, which was a problem in practical use.
（発明が解決しようとする問題点） 本発明者らは上記の背景を踏まえ、従来のザルコシンオ
キシダーゼよりも熱安定性に優れ、かつKm値の小さい、
より実用的なザルコシンオキシダーゼを見い出そうと試
みた。(Problems to be Solved by the Invention) Based on the above background, the present inventors have superior thermal stability to conventional sarcosine oxidase and have a small Km value.
I tried to find a more practical sarcosine oxidase.
（問題点を解決するための手段） 本発明者らは上記問題点を解決するため鋭意研究を重ね
た結果、石川県加賀市内の土壌より分離した、アルスロ
バクター属に属すると同定された菌株、TE1826から従来
のザルコシンオキシダーゼよりも熱安定性に優れ、かつ
Km値の小さいザルコシンオキシダーゼを見い出した。(Means for Solving Problems) The inventors of the present invention have conducted extensive studies to solve the above problems, and as a result, have been identified as belonging to the genus Arthrobacter isolated from soil in Kaga City, Ishikawa Prefecture. The strain TE1826 is more thermostable than conventional sarcosine oxidase, and
A sarcosine oxidase with a low Km value was found.
すなわち本発明は、下記性質〜を有する新規なザル
コシンオキシダーゼである。That is, the present invention is a novel sarcosine oxidase having the following properties.
下記の反応を触媒する。It catalyzes the following reactions:
ザルコシン＋H2O＋O2→グリシン＋ホルムアルデヒド＋H
2O2 安定pHが6.5〜9.0付近である。Sarcosine + H 2 O + O 2 → Glycine + Formaldehyde + H
2 O 2 Stable pH is around 6.5 to 9.0.
至適pHが7.0〜8.5付近である。The optimum pH is around 7.0-8.5.
熱安定性が約55℃以下である。Thermal stability is less than about 55 ℃.
至適温度が40〜50℃付近である。The optimum temperature is around 40-50 ° C.
ザルコシンに対するKm値が約2.8×10-3Mである。The Km value for sarcosine is about 2.8 × 10 −3 M.
分子量が約65,000である（ゲルろ過法）。The molecular weight is about 65,000 (gel filtration method).
また本発明は、上記性質〜を有する新規なザルコシ
ンオキシダーゼを産生するアルスロバクター属菌を栄養
培地にて培養し、該培養物から前記ザルコシンオキシダ
ーゼを採取することを特徴とする新規なザルコシンオキ
シダーゼの製法である。Also, the present invention is a novel monkey characterized by culturing Arthrobacter sp. That produces a novel sarcosine oxidase having the above properties in a nutrient medium and collecting the sarcosine oxidase from the culture. This is a method for producing cosin oxidase.
本発明に用いる微生物は、上記性質を有するザルコシン
オキシダーゼを産生しうるアルスロバクター属菌であっ
て、好適な例としてはアルスロバクター・エスピー（Ar
throbacter sp.）TE1826があげられる。アルスロバクタ
ー・エスピー（Arthrobacter sp.）TE1826は本発明者ら
が土壌中より新たに分離した菌株であり、その菌学的性
質は下記のとおりである。The microorganism used in the present invention is a bacterium belonging to the genus Arthrobacter capable of producing sarcosine oxidase having the above-mentioned properties, and a preferable example thereof is Arthrobacter sp.
throbacter sp.) TE1826. Arthrobacter sp. TE1826 is a strain newly isolated from the soil by the present inventors, and its mycological properties are as follows.
（ａ）形態 （１）細胞の大きさ:0.5〜0.7×1.0〜10.0μｍの桿菌。(A) Morphology (1) Cell size: 0.5 to 0.7 × 1.0 to 10.0 μm bacilli.
（２）細胞の多形性：生活環にともなう多形性有り。(2) Cell polymorphism: There is polymorphism associated with the life cycle.
（３）運動性：なし。(3) Motility: None.
（４）胞子の有無：なし。(4) Presence or absence of spores: None.
（５）グラム染色性：陽性。(5) Gram stainability: positive.
（６）抗酸性：陰性。(6) Anti-acidity: negative.
（ｂ）各培地における生育状態 （１）肉汁寒天平板培養:37℃、24時間培養で淡褐色円
形のコロニーを形成する。表面はなめらかで鈍い光沢を
有し、不透明である。色素の生成はない。(B) Growth state in each medium (1) Meat broth agar plate culture: A light brown circular colony is formed by culturing at 37 ° C for 24 hours. The surface is opaque with a smooth, dull gloss. No dye formation.
（２）肉汁寒天斜面培養：生育は良好で（１）に同じ。(2) Meat broth agar slope culture: Good growth, same as (1).
（３）肉汁液体培養：静置培養は生育悪く、振とう培養
にて良好に生育する。(3) Broth liquid culture: static culture does not grow well, and shaking culture grows well.
（４）肉汁ゼラチン穿刺培養：上部のみ生育し、層状に
液化する。(4) Meat broth gelatin stab culture: Only the upper part grows and liquefies in layers.
（５）リトマスミルク：全く変化しない。(5) Litmus milk: No change.
（ｃ）生理的性質 （１）硝酸塩の還元：陽性。(C) Physiological properties (1) Reduction of nitrate: Positive.
（２）脱窒反応：陰性。(2) Denitrification reaction: negative.
（３）MRテスト：陰性。(3) MR test: Negative.
（４）VPテスト：陰性。(4) VP test: negative.
（５）インドールの生成：陰性。(5) Indole formation: negative.
（６）硫化水素の生成：陰性。(6) Generation of hydrogen sulfide: negative.
（７）デンプンの加水分解：陽性。(7) Hydrolysis of starch: positive.
（８）クエン酸の利用：シモン培地で陰性、クリステン
セン培地で陽性。(8) Utilization of citric acid: Negative in Simon's medium and positive in Christensen's medium.
（９）無機窒素源の利用：アンモニウム塩は利用するが
弱い。硝酸塩はほとんど利用しない。(9) Use of inorganic nitrogen source: Ammonium salt is used but weak. Almost no nitrate is used.
（10）色素の生成：陰性。(10) Dye formation: negative.
（11）ウレアーゼ：陽性。(11) Urease: Positive.
（12）オキシダーゼ：陰性。(12) Oxidase: negative.
（13）カタラーゼ：陽性。(13) Catalase: Positive.
（14）生育の範囲：生育pH域は5.0〜8.5、生育温度域は
10〜45℃。(14) Growth range: The growth pH range is 5.0 to 8.5, and the growth temperature range is
10-45 ° C.
（15）酸素に対する態度：好気性。(15) Attitude toward oxygen: aerobic.
（16）O-Fテスト:O（酸化） （17）糖からの酸の生成 Ｌ−アラビノース − Ｄ−キシロース − Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−マンノース − Ｄ−フラクトース − Ｄ−ガラクトース − 麦芽糖（マルトース） ＋ ショ糖（サッカロース） ＋ 乳糖（ラクトース） − トレハロース ＋ Ｄ−ソルビット ＋ Ｄ−マンニット ＋ イノシット − グリセリン ＋ デンプン ＋ 上記菌学的性質の同定のための実験法は主として長谷川
武治編著、改訂版「微生物の分類と同定」学会出版セン
ター（1985年）によって行った。(16) OF test: O (oxidation) (17) Generation of acid from sugar L-arabinose-D-xylose-D-glucose + D-mannose-D-fructose-D-galactose-maltose (maltose) + sucrose (Saccharose) + Lactose (Lactose) -Trehalose + D-Sorbit + D-Mannitol + Inosit-Glycerin + Starch + The experimental method for identifying the above-mentioned mycological properties is mainly edited by Takeharu Hasegawa, Revised edition "Classification of Microorganisms". And identification ”by the Society Publishing Center (1985).
また分類同定の基準として「バージィス・マニュアル・
オブ・デタミネイティブ・バクテリオロジー」第８版
（1974年）を参考にした。In addition, as a criterion for classification and identification, "Vergis Manual
The 8th edition (1974) of "Determinative Bacteriology" was referred to.
以上の菌学的性状における本菌TE1826は生活環にともな
う多形性が認められ、グラム染色は陽性の無胞子桿菌
で、通常栄養培地に良好に生育し、極めて好気的である
ことより、アルスロバクター属に属するとみなされ、ア
ルスロバクター・エスピー（Arthrobacter sp.）TP1826
と命名した。なお本菌は工業技術院微生物工業技術研究
所に、微工研菌寄第10637号として寄託されている。The bacterium TE1826 in the above mycological properties, polymorphism associated with the life cycle was observed, Gram stain is a positive asporum bacillus, usually grows well in a nutrient medium, and is extremely aerobic. Arthrobacter sp. TP1826, which is considered to belong to the genus Arthrobacter
I named it. This bacterium has been deposited in the Institute of Microbial Technology, National Institute of Industrial Science and Technology, as Microcosm Research Institute No. 10637.
本発明の酵素を製造するにあたっては、上記ザルコシン
オキシダーゼ生産菌を酵素を生産する通常の方法で培養
する。使用する培地組成としては使用菌株が資化しうる
炭素源、窒素源、無機物、その他必要な栄養素を適量含
有するものであれば、合成培地、天然培地いずれも使用
できる。本発明においてはクレアチン又はクレアチニン
又はザルコシンを含有する培地で培養したときにザルコ
シンオキシダーゼが最も収量良く得られる。培養は通常
振とう培養あるいは通気撹拌培養で行う。培養温度は30
℃〜40℃で行うことが好ましい。これら以外の条件下で
も使用する菌株が生育すれば実施できる。通常１〜２日
の培養期間で生育し、菌体内にザルコシンオキシダーゼ
が生成蓄積される。In producing the enzyme of the present invention, the sarcosine oxidase-producing bacterium is cultured by a usual method for producing the enzyme. As the medium composition to be used, either a synthetic medium or a natural medium can be used as long as it contains an appropriate amount of a carbon source, a nitrogen source, an inorganic substance and other necessary nutrients that can be assimilated by the strain to be used. In the present invention, sarcosine oxidase is obtained in the highest yield when cultured in a medium containing creatine, creatinine or sarcosine. The culture is usually performed by shaking culture or aeration-agitation culture. Culture temperature is 30
It is preferable to carry out at 40 to 40 ° C. It can be carried out under conditions other than these as long as the strain to be used grows. Usually, it grows in a culture period of 1 to 2 days, and sarcosine oxidase is produced and accumulated in the cells.
本発明酵素の精製法は一般に使用されている精製法を用
いることができる。例えば抽出法には超音波破砕、ガラ
スビーズを用いる機械的破砕、フレンチプレス、界面活
性剤、溶菌酵素などいずれを用いてもよい。さらに抽出
液については硫安や芒硝などの塩析法、塩化マグネシウ
ムや塩化カルシウムなどの金属凝集法、プロタミンやエ
チレンイミンポリマーなどの凝集法、熱処理、さらには
イオン交換クロマトグラフィーなどにより精製すること
ができる。As a method for purifying the enzyme of the present invention, a generally used purification method can be used. For example, ultrasonic extraction, mechanical disruption using glass beads, French press, surfactant, lytic enzyme, etc. may be used for the extraction method. Furthermore, the extract can be purified by salting out with ammonium sulfate, mirabilite or the like, metal agglomeration with magnesium chloride or calcium chloride, agglutination with protamine or ethyleneimine polymer, heat treatment, or ion exchange chromatography. .
次に本発明のザルコシンオキシダーゼの活性測定法を示
す。95mMザルコシン、0.47mM4−アミノアンチピリン、2
mMフェノール、4.5U/mlペルオキシダーゼ、0.045％トリ
トンX-100を含む48mMトリス塩酸緩衝液（pH8.0）を調製
した後、1.0mlを試験管に分取し、37℃で予備加温す
る。適当な濃度の酵素液0.05mlを添加し、37℃、10分間
反応させ、次にこれに0.25％ラウリル硫酸ナトリウム水
溶液を添加して反応を停止させ、分光光度計にて500nm
における吸光度変化を求める。ザルコシンオキシダーゼ
の活性の表示は、上記条件下で１分間に１マイクロモル
のH2O2を生成する酵素活性を１単位（Ｕ）とする。Next, a method for measuring the activity of sarcosine oxidase of the present invention is shown. 95 mM sarcosine, 0.47 mM 4-aminoantipyrine, 2
After preparing a 48 mM Tris-HCl buffer (pH 8.0) containing mM phenol, 4.5 U / ml peroxidase and 0.045% Triton X-100, 1.0 ml is dispensed into a test tube and preheated at 37 ° C. Add 0.05 ml of enzyme solution of appropriate concentration, react at 37 ℃ for 10 minutes, then add 0.25% sodium lauryl sulfate aqueous solution to stop the reaction, and measure with a spectrophotometer at 500 nm.
Determine the change in absorbance at. Regarding the expression of the activity of sarcosine oxidase, 1 unit (U) is the enzyme activity that produces 1 micromolar H 2 O 2 per minute under the above-mentioned conditions.
次に本発明の酵素の理化学的な性質について述べる。Next, the physicochemical properties of the enzyme of the present invention will be described.
（１）作用及び基質特異性 ザルコシンを酸化分解して、グリシン、ホルムアルデヒ
ドと過酸化水素を生成する反応を触媒する。なおザルコ
ミンに対するKm値は37℃、pH8.0（トリス塩酸緩衝液）
で約2.8×10-3Mである。(1) Action and substrate specificity It catalyzes the reaction that oxidizes and decomposes sarcosine to produce glycine, formaldehyde and hydrogen peroxide. The Km value for sarcomin is 37 ℃, pH 8.0 (Tris-HCl buffer)
It is about 2.8 × 10 -3 M.
（２）安定pH 本発明の酵素と0.1Mジメチルグルタル酸−NaOH緩衝液
（pH5.5〜6.5）、0.1MK−リン酸緩衝液（pH6.5〜7.
5）、0.1Mトリス塩酸緩衝液（pH7.5〜8.5）、0.1Mグリ
シン−NaOH緩衝液（pH8.5〜9.5）、0.1Mグリシン−NaCl
-NaOH緩衝液（pH9.0〜10.0）中で25℃、24時間保温後、
残存する酵素活性を測定した。その結果は第１図に示す
通りであって、安定pHは6.5〜9.0付近であった。(2) Stable pH The enzyme of the present invention and 0.1 M dimethyl glutaric acid-NaOH buffer (pH 5.5 to 6.5), 0.1 M K-phosphate buffer (pH 6.5 to 7.
5), 0.1M Tris-HCl buffer (pH 7.5 to 8.5), 0.1M glycine-NaOH buffer (pH 8.5 to 9.5), 0.1M glycine-NaCl
-After keeping at 25 ℃ for 24 hours in NaOH buffer solution (pH 9.0-1.0),
The remaining enzyme activity was measured. The results are shown in Fig. 1, and the stable pH was around 6.5 to 9.0.
（３）至適pH 0.1MK−リン酸緩衝液（pH5.5〜7.5）、0.1Mトリス塩酸
緩衝液（pH7.5〜8.5）、0.1Mグリシン−NaOH緩衝液（pH
8.0〜9.0）、0.1Mグリシン−NaCl-NaOH緩衝液（pH9.0〜
10.0）中での酵素活性を測定した。その結果は第２図に
示す通りであって、至適pHは7.0〜8.5付近であった。(3) Optimum pH 0.1M K-phosphate buffer (pH 5.5 to 7.5), 0.1M Tris-HCl buffer (pH 7.5 to 8.5), 0.1M glycine-NaOH buffer (pH
8.0-9.0), 0.1M glycine-NaCl-NaOH buffer (pH 9.0-
The enzyme activity in 10.0) was measured. The results are shown in FIG. 2, and the optimum pH was around 7.0 to 8.5.
（４）熱安定性 本発明の酵素を50mMK−リン酸緩衝液（pH7.5）中で25〜
60℃、10分間保温した後、残存する酵素活性を測定し
た。その結果は第３図に示す通りであって約55℃まで安
定であった。(4) Thermostability The enzyme of the present invention is added to a solution of 25 mM in 50 mM K-phosphate buffer (pH 7.5).
After incubating at 60 ° C. for 10 minutes, the residual enzyme activity was measured. The results are shown in Fig. 3 and were stable up to about 55 ° C.
（５）至適温度 25〜60℃の各温度における酵素活性を測定した。その結
果は第４図に示す通りであって、至適温度は40〜50℃付
近であった。(5) Optimal temperature The enzyme activity was measured at each temperature of 25 to 60 ° C. The results are shown in Fig. 4, and the optimum temperature was around 40 to 50 ° C.
（６）分子量 HPLC用カラムAsahipak GFA-50（旭化成工業製）を用い
たゲルろ過法を行った結果、分子量は約65,000であっ
た。(6) Molecular weight As a result of gel filtration using an Asahipak GFA-50 column (manufactured by Asahi Kasei Kogyo) for HPLC, the molecular weight was about 65,000.
（７）等電点 アンホライン（LKB製）を用いた電気泳動の結果、等電
点は約pH4.9であった。(7) Isoelectric point As a result of electrophoresis using Ampholine (manufactured by LKB), the isoelectric point was about pH 4.9.
（実施例） 以下、実施例をあげ本発明を具体的に示す。(Examples) Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to Examples.
実施例１ ザルコシン0.5％、クレアチン0.5％、肉エキス0.3％、
ポリペプトン0.3％、酵母エキス0.3％、KH2PO40.1％、K
2HPO40.22％、MgSO4・7H2O0.05％を含む培地（pH7.0）5
mlを30ml容試験管に移し、121℃、15分間オートクレー
ブ殺菌を行なった。種菌としてアルスロバクター・エス
ピー（Arthrobacter sp.）TE1826（微工研菌寄第10637
号）を１白金耳植菌し、37℃で16時間振とう培養し、種
培養液とした。次に同培地500mlを2l容坂口フラスコに
移し、121℃、15分間オートクレーブを行った。これに
種培養液5mlを移し、37℃で24時間振とう培養した。培
養終了時のザルコシンオキシダーゼ活性は0.3U/mlであ
った。Example 1 Sarcosine 0.5%, Creatine 0.5%, Meat extract 0.3%,
Polypeptone 0.3%, Yeast extract 0.3%, KH 2 PO 4 0.1%, K
Medium containing 2 HPO 4 0.22%, the MgSO 4 · 7H 2 O0.05% ( pH7.0) 5
ml was transferred to a 30 ml test tube and autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes. As inoculum, Arthrobacter sp. TE1826
No. 2) was inoculated with 1 platinum loop and shake-cultured at 37 ° C. for 16 hours to obtain a seed culture solution. Next, 500 ml of the same medium was transferred to a 2-liter Sakaguchi flask and autoclaved at 121 ° C. for 15 minutes. 5 ml of the seed culture was transferred to this and cultured at 37 ° C for 24 hours with shaking. The sarcosine oxidase activity at the end of the culture was 0.3 U / ml.
培養液500mlを遠心分離にて集菌し、50mMK−リン酸緩衝
液（pH7.5）50mlにて懸濁した。超音波破砕機（海上電
気製、19KHz）にて20分間処理し、遠心分離にてその上
清液45mlを得た。硫酸アンモニウム22gを添加、溶解
し、遠心分離にて塩析沈殿物を得た。これを50mMK−リ
ン酸緩衝液（pH7.5）25mlにて懸濁し、遠心分離にて上
清液を得た。上清液を50mMK−リン酸緩衝液にて平衡化
したセファデックスG-25（ファルマシア製）で脱塩を行
なった。次に同緩衝液にて平衡化したDEAE−セファロー
スCL-6B（ファルマシア製）カラムクロマトグラフィー
に供し、０〜0.4MNaCl容出画分にザルコシンオキシダー
ゼ酵素活性を得た。溶出液を55℃、１時間熱処理した
後、50mMK−リン酸緩衝液（pH7.5）にて平衡化したセフ
ァデックスG-25（ファルマシア製）で脱塩を行った。そ
の結果65Uの酵素が得られた。得られた酵素の理化学的
性質は前述の通りであった。500 ml of the culture solution was collected by centrifugation and suspended in 50 ml of 50 mM K-phosphate buffer (pH 7.5). The mixture was treated for 20 minutes with an ultrasonic crusher (Kaiden Denki, 19 KHz) and centrifuged to obtain 45 ml of the supernatant. 22 g of ammonium sulfate was added and dissolved, and a salting-out precipitate was obtained by centrifugation. This was suspended in 25 ml of 50 mM K-phosphate buffer (pH 7.5) and centrifuged to obtain a supernatant. The supernatant was desalted with Sephadex G-25 (Pharmacia) equilibrated with 50 mM K-phosphate buffer. Next, it was subjected to DEAE-Sepharose CL-6B (Pharmacia) column chromatography equilibrated with the same buffer, and sarcosine oxidase enzyme activity was obtained in the 0 to 0.4 M NaCl fraction. The eluate was heat-treated at 55 ° C. for 1 hour and then desalted with Sephadex G-25 (Pharmacia) equilibrated with 50 mM K-phosphate buffer (pH 7.5). As a result, 65 U of enzyme was obtained. The physicochemical properties of the obtained enzyme were as described above.
比較例１ 比較のために先行技術文献に記載されているザルコシン
オキシダーゼの理化学的性質を第１表に示す。Comparative Example 1 Table 1 shows the physicochemical properties of sarcosine oxidase described in prior art documents for comparison.
（発明の効果） 本発明では熱安定性に優れ、かつKm値の小さい新規なザ
ルコシンオキシダーゼが得られる。 (Effects of the Invention) In the present invention, a novel sarcosine oxidase having excellent thermostability and a small Km value can be obtained.
第１図は本発明のザルコシンオキシダーゼのpH安定性を
示す。 第２図は本発明のザルコシンオキシダーゼの至適pHを示
す。 第３図は本発明のザルコシンオキシダーゼの熱安定性を
示す。 第４図は本発明のザルコシンオキシダーゼの至適温度を
示す。FIG. 1 shows the pH stability of the sarcosine oxidase of the present invention. FIG. 2 shows the optimum pH of the sarcosine oxidase of the present invention. FIG. 3 shows the thermostability of sarcosine oxidase of the present invention. FIG. 4 shows the optimum temperature of sarcosine oxidase of the present invention.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 愛水 重典 福井県敦賀市東洋町10番24号 東洋紡績株 式会社敦賀酵素工場内 審査官 種村 慈樹 (56)参考文献 特開 昭54−28893（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−162174（ＪＰ，Ａ) ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (72) Shigenori Aizumi 10-24 Toyocho, Tsuruga City, Fukui Prefecture Toyobo Co., Ltd. Tsuruga Enzyme Factory Examiner, Kiyoshi Tanemura (56) Reference JP-A-54-28893 (JP, A) JP-A-61-162174 (JP, A)
Claims (2)
オキシダーゼ。 下記の反応を触媒する。 ザルコシン＋H2O＋O2→グリシン＋ホルムアルデヒド＋H
2O2 安定pHが6.5〜9.0付近である。 至適pHが7.0〜8.5付近である。 熱安定性が約55℃以下である。 至適温度が40〜50℃付近である。 ザルコシンに対するKm値が約2.8×10-3Mである。 分子量が約65,000である（ゲルろ過法）。1. A novel sarcosine oxidase having the following properties. It catalyzes the following reactions: Sarcosine + H 2 O + O 2 → Glycine + Formaldehyde + H
2 O 2 Stable pH is around 6.5 to 9.0. The optimum pH is around 7.0-8.5. Thermal stability is less than about 55 ℃. The optimum temperature is around 40-50 ° C. The Km value for sarcosine is about 2.8 × 10 −3 M. The molecular weight is about 65,000 (gel filtration method).
オキシダーゼを産生するアルスロバクター属菌を栄養培
地にて培養し、該培養物から前記ザルコシンオキシダー
ゼを採取することを特徴とする新規なザルコシンオキシ
ダーゼの製法。 下記の反応を触媒する。 ザルコシン＋H2O＋O2→グリシン＋ホルムアルデヒド＋H
2O2 安定pHが6.5〜9.0付近である。 至適pHが7.0〜8.5付近である。 熱安定性が約55℃以下である。 至適温度が40〜50℃付近である。 ザルコシンに対するKm値が約2.8×10-3Mである。 分子量が約65,000である（ゲルろ過法）。2. A novel monkey which is characterized by culturing an Arthrobacter genus producing a novel sarcosine oxidase having the following properties in a nutrient medium and collecting the sarcosine oxidase from the culture. A method for producing cosin oxidase. It catalyzes the following reactions: Sarcosine + H 2 O + O 2 → Glycine + Formaldehyde + H
2 O 2 Stable pH is around 6.5 to 9.0. The optimum pH is around 7.0-8.5. Thermal stability is less than about 55 ℃. The optimum temperature is around 40-50 ° C. The Km value for sarcosine is about 2.8 × 10 −3 M. The molecular weight is about 65,000 (gel filtration method).
Priority Applications (1)
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