JPH0783689B2 - Method for preparing natural flavor derived from lactic acid bacterium starter - Google Patents

Method for preparing natural flavor derived from lactic acid bacterium starter

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JPH0783689B2
JPH0783689B2 JP62327413A JP32741387A JPH0783689B2 JP H0783689 B2 JPH0783689 B2 JP H0783689B2 JP 62327413 A JP62327413 A JP 62327413A JP 32741387 A JP32741387 A JP 32741387A JP H0783689 B2 JPH0783689 B2 JP H0783689B2
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diacetyl
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lactic acid
acetoin
acetaldehyde
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幸孝 宿野部
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Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、バター、マーガリン、カテージチーズ、サワ
ークリーム、キヤンデイ等の食品にフレーバーを強化す
るのに利用される乳酸菌スターター由来の天然性フレー
バーの調製方法に関する。
TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for preparing a natural flavor derived from a lactic acid bacterium starter which is used to enhance the flavor of foods such as butter, margarine, cottage cheese, sour cream, and canday.

従来技術 乳酸菌は、従来から種々の発酵乳製品の製造に利用され
ており、更には広範囲な種類の食品分野においても重要
な役割を果している。
BACKGROUND ART Lactic acid bacteria have been conventionally used for producing various fermented dairy products, and also play an important role in a wide variety of food fields.

また、近年、食品に対する嗜好性の多様化に伴ない、発
酵乳、カテージチーズ、サワークリーム、発酵バターク
リーム及び発酵バター等においてもフレーバーを増強さ
せるための方法が種々検討されている。
In recent years, various methods for enhancing the flavor of fermented milk, cottage cheese, sour cream, fermented butter cream, fermented butter and the like have been investigated with the diversification of palatability to foods.

従来、乳酸菌、例えばストレプトコツカス・クレモリス
(streptococcus cremoris)、ストレプトコツカス・ジ
アセチラクチス(streptococcus diacetilactis)等
が、バターのような乳製品の主要な風味乃至芳香成分で
あるジアセチルを生産すること、及びクエン酸の添加が
該ジアセチルの生産を促進することが知られている。
Conventionally, lactic acid bacteria such as Streptococcus cremoris, Streptococcus diacetilactis, etc. produce diacetyl, which is a main flavor or aroma component of dairy products such as butter, and quenching. It is known that the addition of acid promotes the production of diacetyl.

一方、発酵乳製品におけるフレーバーは、ジアセチルの
ほかに、アセトイン、アセトアルデヒド、酢酸、プロピ
オン酸及び炭酸ガス等により形成されるとされている
が、その主体はジアセチル、アセトイン及びアセトアル
デヒドの3成分であり、カテージチーズ、発酵バター等
では特にジアセチルが重要であり、ヨーグルトではアセ
トアルデヒドが重要なフレーバー成分とされている。
On the other hand, the flavor in fermented dairy products is said to be formed by acetoin, acetaldehyde, acetic acid, propionic acid, carbon dioxide, etc. in addition to diacetyl, but the main components are diacetyl, acetoin and acetaldehyde. Diacetyl is particularly important in cottage cheese, fermented butter, etc., and acetaldehyde is regarded as an important flavor component in yogurt.

ところで、発酵乳製品におけるこれらのフレーバーは、
その製造に用いられる乳酸菌スターターにより生産され
るものであつて、上記フレーバーの生成を目的としたス
ターターには、ジアセチルやアセトイン等の芳香生産菌
として知られるストレプトコツカス・ジアセチラクチ
ス、ロイコノストツク・クレモリス、ロイコノストツク
・デキストラニクム、ラクトバチルス・プランタルム、
ラクトバチルス・ブルガリクス、ラクトバチルス・ヘル
ベテイカス及びラクトバチルス・ブレビス等が用いられ
ている。
By the way, these flavors in fermented dairy products are:
What is produced by a lactic acid bacterium starter used in its production, the starter for the purpose of producing the flavor, Streptococcus diacetylase, known as aroma-producing bacteria such as diacetyl and acetoin, Leuconostoc cremoris, Leuconostoc・ Dextranicum, Lactobacillus plantarum,
Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus brevis and the like are used.

因に、これらの乳酸菌は、牛乳及びその他の培地中の乳
糖或はクエン酸を基質として香気成分を生産する。
Incidentally, these lactic acid bacteria produce aroma components by using lactose or citric acid in milk and other culture media as a substrate.

しかし、上掲のフレーバー生産乳酸菌を培養してもジア
セチルの生産量は10μg/ml以下であるため、それをフレ
ーバーとして利用するには、ジアセチルの生産量を増加
させる必要がある。
However, even if the above-mentioned flavor-producing lactic acid bacterium is cultured, the production amount of diacetyl is 10 μg / ml or less. Therefore, in order to use it as a flavor, it is necessary to increase the production amount of diacetyl.

乳酸菌による香気成分の生産増強に関しては、従来、豊
田の報告〔酪農科学「食品の研究」34(6),A221(198
5)〕があり、それによると、香気成分生成菌であるス
トレプトコツカス・ジアセチラクチスとロイコノストツ
ク・クレモリスの両菌株を併用すると、前者の菌株単独
ではジアセチルの生成量が1.5〜2ppm程度であつたもの
が、ジアセチルが10ppmになつたことが示されている。
また、同報告は、上記両菌株を用い、脱脂乳を培地とし
て用い、これにクエン酸ソーダを0.3重量%を添加した
ものに接種して22℃で16時間培養することにより、ジア
セチルを30ppm及びアセトアルデヒドを約15ppm含有する
芳香性カルチヤーが得られたことを示している。
Regarding the enhancement of aroma components produced by lactic acid bacteria, a report by Toyoda [Dairy Science "Food Research" 34 (6), A221 (198)
5)], it is found that when both strains of Streptococcus diacetylachistis and Leuconostoc cremoris, which are fragrance-producing bacteria, are used together, the former strain alone produced about 1.5 to 2 ppm of diacetyl. However, it has been shown that diacetyl has reached 10 ppm.
Further, the same report, using both strains above, skim milk as a medium, inoculated with 0.3 wt% of sodium citrate added thereto, and culturing for 16 hours at 22 ℃, diacetyl 30ppm and It shows that an aromatic culture containing about 15 ppm of acetaldehyde was obtained.

しかし、神辺の報告〔乳技協資料「発酵乳の風味」vol.
28,No.5,pp.2〜11(1979)〕に示された、ジアセチル生
産菌による香気物質の生成機構にみられるように、生成
したジアセチルは、ジアセチルレダクターゼによる不可
逆的反応でアセトインになり、また一部はアセトインか
ら2,3-ブタンジオールに還元されるので、ジアセチル生
産菌であつても、ジアセチルよりもアセトインを多量に
生成するようになる。したがつて、ジアセチル含量の高
いフレーバーを乳酸菌スターターから調製するには、乳
酸菌スターターにより生産されたアセトインをジアセチ
ルに変換させることが必要となる。
However, Kamibe's report (milk co-operation material "Fermented milk flavor" vol.
28, No. 5, pp. 2 to 11 (1979)], the produced diacetyl becomes acetoin in an irreversible reaction by diacetyl reductase, as shown in the mechanism of production of odorous substances by diacetyl-producing bacteria. Also, since a part of acetoin is reduced to 2,3-butanediol, even a diacetyl-producing bacterium can produce more acetoin than diacetyl. Therefore, in order to prepare a flavor having a high diacetyl content from a lactic acid bacterium starter, it is necessary to convert acetoin produced by the lactic acid bacterium starter into diacetyl.

発明が解決しようとする課題 本発明は、叙上の状況に鑑みなされたものであつて、乳
酸菌スターターから特にジアセチル含量の高い天然性フ
レーバーを有利に調製するための方法を提供することを
課題とする。
The present invention has been made in view of the above circumstances, and it is an object of the present invention to provide a method for advantageously preparing a natural flavor having a particularly high diacetyl content from a lactic acid bacterium starter. To do.

以下本発明を詳しく説明する。The present invention will be described in detail below.

発明の構成 本発明の構成上の特徴は、獣乳もしくはホエーにクエン
酸或はクエン酸ソーダを添加したものに、ストレプトコ
ツカス・クレモリスとストレプトコツカス・ジアセチラ
クチスに属する2種の乳酸菌を接種して培養し、得られ
た培養物に更にクエン酸或はクエン酸塩を添加し、攪拌
し、次いで該培養物を水蒸気蒸留に付して得られた留出
液に酸化剤を加えて加熱した後蒸留するか、もしくは酸
化剤を加えて直ちに水蒸気蒸留を行うことによりジアセ
チル含量を増加させた天然性フレーバーを得ることにあ
る。
Composition of the invention The composition of the present invention is characterized in that animal milk or whey to which citric acid or sodium citrate is added is inoculated with two kinds of lactic acid bacteria belonging to Streptococcus cremoris and Streptococcus diacetilactis. The resulting culture was further added with citric acid or citrate and stirred, and then the culture was subjected to steam distillation, and the distillate obtained was heated with an oxidizing agent. It is to obtain a natural flavor having an increased diacetyl content by post-distillation or immediately performing steam distillation by adding an oxidizing agent.

課題を解決するための手段 本発明は、乳酸菌スターターの培地として獣乳もしくは
ホエーにクエン酸或はクエン酸塩を添加したものを用
い、乳酸菌としてストレプトコツカス・クレモリスとス
トレプトコツカス・ジアセチラクチスに属する2種の菌
を用いる。
Means for Solving the Problems The present invention uses animal milk or whey added with citric acid or citrate as a medium for a lactic acid bacterium starter, and belongs to Streptococcus cremoris and Streptococcus diacetylactis as lactic acid bacteria. Two types of bacteria are used.

本発明において原料として使用する獣乳としては牛乳が
最も好ましいが、山羊乳及びその他の獣乳も用いること
ができる。これらの獣乳は、そのままでも使用し得る
が、脂肪を除去した脱脂乳でもよく、また粉乳の形態に
したものを水に溶解して用いてもよい。
As the animal milk used as a raw material in the present invention, cow's milk is most preferable, but goat milk and other animal milks can also be used. These animal milks may be used as they are, but may be skim milk from which fat is removed, or powdered milk may be dissolved in water before use.

本発明では、クエン酸或はクエン酸塩を0.5〜1.0重量%
程度添加した獣乳もしくはホエーに、上記2種の乳酸菌
を接種して約22℃の温度で16〜17時間培養を行つて、ジ
アセチル、アセトイン及びアセトアルデヒドを生産す
る。これらの芳香物質の生産量は、クエン酸或はクエン
酸塩の添加量により影響され、例えば、培養17時間後で
はジアセチルの生産量は、クエン酸ソーダを0.5重量%
添加した場合に最大となり、また、アセトインはジアセ
チルの生産量の約10倍近く生産し、一方アセトアルデヒ
ドはジアセチルの約1/10生産し、クエン酸ソーダの添加
量が多くなるとその生産量は減少する傾向にある。
In the present invention, 0.5 to 1.0% by weight of citric acid or citrate is used.
The above-mentioned two kinds of lactic acid bacteria are inoculated into the animal milk or whey to which about a certain amount has been added, and the mixture is cultured at a temperature of about 22 ° C. for 16 to 17 hours to produce diacetyl, acetoin and acetaldehyde. The production of these aromatic substances is influenced by the amount of citric acid or citrate added. For example, after 17 hours of culture, the production of diacetyl is 0.5% by weight of sodium citrate.
It becomes maximum when added, and acetoin produces about 10 times the production amount of diacetyl, while acetaldehyde produces about 1/10 of diacetyl production, and the production amount decreases when the addition amount of sodium citrate increases. There is a tendency.

また、上記培養に際し、アスコルビン酸或はアスコルビ
ン酸ソーダを添加するとジアセチルの生産量が増加す
る。この場合アスコルビン酸或はアスコルビン酸ソーダ
の添加量は培地に対し0.05重量%程度が適当である。
Further, when ascorbic acid or sodium ascorbate is added in the above culture, the production amount of diacetyl increases. In this case, it is appropriate that the amount of ascorbic acid or sodium ascorbate added be about 0.05% by weight with respect to the medium.

次に、乳酸菌の培地への接種量は、ストレプトコツカス
・クレモリスを、1.0重量%及びストレプトコツカス・
ジアセチラクチスを0.1重量%をそれぞれ接種すること
がジアセチルの生産上好ましい。
Next, the amount of lactic acid bacteria inoculated into the medium was 1.0% by weight of Streptococcus cremoris and Streptococcus
It is preferable for the production of diacetyl to inoculate each with 0.1% by weight of diacetylactis.

本発明では、上記培養を行つた後、培養物にクエン酸或
はクエン酸塩を添加してそのクエン酸濃度を調整するこ
とによりジアセチルの生産量を増加させる。この培養物
中のクエン酸濃度の調整によるジアセチルの生産量の増
大は、該培養物のクエン酸濃度を1.0%、pHを4.5に調整
して攪拌を行うことにより最大となる。ここで、pHを4.
5に調整するのは、攪拌によるジアセチルの生産量が最
も高くなることに因る。すなわち、上記に従つて培養を
17時間行つた後、培養物のpHを4N-HClにて4.1、4.3、4.
5、4.7、4.9及び5.1にそれぞれ調整して、攪拌を3時間
行つた場合のジアセチルの生産量の推移は添付図に示す
とおりである。
In the present invention, after the above culture, the production amount of diacetyl is increased by adding citric acid or citrate to the culture to adjust the citric acid concentration. The increase in the amount of diacetyl produced by adjusting the citric acid concentration in the culture is maximized by adjusting the citric acid concentration of the culture to 1.0% and adjusting the pH to 4.5 and stirring. Where the pH is 4.
The adjustment to 5 is due to the highest production of diacetyl by stirring. That is, culture according to the above
After 17 hours, the pH of the culture was adjusted to 4.1, 4.3, 4.
The changes in the production amount of diacetyl when the stirring was carried out for 3 hours after adjusting to 5, 4.7, 4.9 and 5.1 respectively are shown in the attached figure.

なお、培養物は500ml容フラスコに200mlを仕込み、回転
式振とう機により180rpmで攪拌を行つた。
In addition, 200 ml of the culture was charged into a 500 ml flask and stirred at 180 rpm by a rotary shaker.

図にみられるとおり、pH4.5においてジアセチルの生産
量の増加が最大になる。また、図から、攪拌によるジア
セチルの生産量の増加効果もわかる。
As can be seen, the increase in diacetyl production is maximized at pH 4.5. The figure also shows the effect of increasing the amount of diacetyl produced by stirring.

一方、アセトインは、ストレプトコツカス・ジアセチラ
クチスの接種量を0.6重量%にして培養し、次いでクエ
ン酸濃度とpHを上記のように調整して攪拌を行うことに
より、その生産量を著しく増加させることができる。例
えば、上記攪拌を53時間を行う場合には、アセトインの
生産量は約5800〜6000μg/gに達する。
On the other hand, acetoin can significantly increase the production by culturing with an inoculum of Streptococcus diacetylachitis of 0.6% by weight, and then adjusting the citric acid concentration and pH as described above and stirring. You can For example, when the stirring is performed for 53 hours, the production amount of acetoin reaches about 5800 to 6000 μg / g.

したがつて、香気物質としてジアセチルの生成を目的と
するか、或はアセトインの生成を目的とするかにより、
上記培養条件及び培養液の攪拌条件を選択するとよい。
Therefore, depending on whether it is intended to produce diacetyl as an aroma substance or acetoin,
It is advisable to select the above-mentioned culture conditions and stirring conditions of the culture solution.

なお、上記pHの調整に際し、クエン酸溶液を用いると香
気物質の生産量は一そう増加する。次に、4N-HCl、食用
乳酸及びクエン酸溶液を用いた場合における香気物質の
生成量を調べた結果を表1に示す。
When the citric acid solution is used for adjusting the pH, the production amount of the aroma substance is further increased. Next, Table 1 shows the results of examining the amount of aroma substances produced when 4N-HCl, edible lactic acid and citric acid solutions were used.

例えば、ジアセチルの生産を目的とする場合は、乳酸菌
スターターを上述した割合で接種し、25%のl-アスコル
ビン酸溶液を0.2重量%添加して培養を22℃で16〜17時
間行い、次いでクエン酸ソーダを添加して培養物のクエ
ン酸濃度を1%になし、かつ40%クエン酸溶液でpHを4.
5に調整して攪拌を3〜4時間行う場合、ジアセチルを1
40〜160μg/g、アセトインを2100〜2200μg/g及びアセ
トアルデヒドを5〜12μg/g含有する乳酸菌カルチヤー
が得られる。
For example, for the purpose of producing diacetyl, inoculate the lactic acid bacterium starter at the above-mentioned ratio, add 0.2% by weight of 25% l-ascorbic acid solution, perform the culture at 22 ° C for 16 to 17 hours, and then quench. Acid soda was added to bring the culture to a citric acid concentration of 1%, and the pH was adjusted to 40% with a 40% citric acid solution.
When adjusting to 5 and stirring for 3 to 4 hours, diacetyl 1
A lactic acid bacteria culture containing 40 to 160 μg / g, acetoin 2100 to 2200 μg / g and acetaldehyde 5 to 12 μg / g is obtained.

次に、本発明においては、上述のようにして得られた乳
酸菌カルチヤーを水蒸気蒸留する。この水蒸気蒸留によ
り得られる留出液を回収すると、それぞれの香気物質の
沸点が下記に示すように異なることから、それらの回収
率も異なる。
Next, in the present invention, the lactic acid bacteria culture obtained as described above is steam-distilled. When the distillate obtained by this steam distillation is recovered, the boiling points of the respective aroma substances are different as shown below, and therefore the recovery rates thereof are also different.

沸点(℃) ジアセチル 87〜89 アセトイン 142〜148 アセトアルデヒド 21 すなわち、ジアセチルはその沸点からみて約90%回収さ
れるのに対し、アセトインは沸点が高いため約10%回収
されるにすぎず、またアセトアルデヒドは沸点が低く揮
発し易いため約50%回収される程度である。
Boiling point (° C) Diacetyl 87-89 Acetoin 142-148 Acetaldehyde 21 That is, about 90% of diacetyl is recovered from its boiling point, whereas acetoin has a high boiling point and only about 10% is recovered. Has a low boiling point and is easily volatilized, so about 50% is recovered.

例えば、上述のようにして得られる乳酸菌カルチヤー
(ジアセチル140〜160μg/g、アセトイン2100〜2200μg
/g、アセトアルデヒド5〜12μg/g含有)100gを水蒸気
蒸留すると、ジアセチル1260〜1440μg/g、アセトイン2
000〜2100μg/g、アセトアルデヒド25〜60μg/gを含有
する留出液10gが回収される。
For example, the lactic acid bacteria culture obtained as described above (diacetyl 140-160 μg / g, acetoin 2100-2200 μg
/ g, acetaldehyde 5 ~ 12μg / g) 100g steam distilling, diacetyl 1260 ~ 1440μg / g, acetoin 2
10 g of distillate containing 000 to 2100 μg / g and acetaldehyde 25 to 60 μg / g is recovered.

しかし、この留出液中のジアセチル含量では、従来、市
販されている乳酸菌フレーバーのジアセチル含量よりも
低いので、本発明は、該留出液中のアセトインをジアセ
チルに変換することにより、ジアセチルの含量を著しく
増加させるものである。
However, since the diacetyl content in this distillate is lower than the diacetyl content of the commercially available lactic acid bacterium flavors, the present invention converts the acetoin in the distillate into diacetyl to obtain the diacetyl content. Is significantly increased.

すなわち、本発明においては、上記水蒸気蒸留により得
られた留出液に酸化剤を加えて密封下に加熱した後蒸留
するか、もしくは、酸化剤を加えて直ちに再度水蒸気蒸
留を行うことにより、該留出液中のアセトインの約70%
以上をジアセチルに変換することが可能となる。なお、
この酸化剤の添加によりジアセチル及びアセトアルデヒ
ドは影響されないし、また、上記蒸留もしくは水蒸気蒸
留により得られる留出液中への酸化剤の混入もみられな
い。
That is, in the present invention, by adding an oxidizing agent to the distillate obtained by the steam distillation and heating under a sealed condition and then distilling, or by adding the oxidizing agent and immediately performing steam distillation again, About 70% of acetoin in the distillate
It becomes possible to convert the above into diacetyl. In addition,
Diacetyl and acetaldehyde are not affected by the addition of the oxidizing agent, and the oxidizing agent is not mixed in the distillate obtained by the above distillation or steam distillation.

ここで使用する酸化剤は、食品添加剤として認められて
いるものであればよく、例えば塩化第二鉄(FeCl3)、
硫酸鉄(FeSO4)が挙げられる。また、上記酸化剤は、
留出液に予め硫酸を加えた後に添加する。
The oxidizing agent used here may be one that is recognized as a food additive, such as ferric chloride (FeCl 3 ),
Examples include iron sulfate (FeSO 4 ). Further, the oxidant is
Sulfuric acid is added to the distillate in advance and then added.

例えば、留出液5gに対して10N-H2SO4を0.7ml添加した
後、50%のFeCl3の溶液30mlにFeSO4・7H2O10gを溶解し
た溶液を1.43mlを添加したものを、密栓して沸とう水中
で30分間加熱し、次いで冷却後、蒸留するか、もしくは
直ちに水蒸気蒸留を行つて、留出液中のアセトインをジ
アセチルに変換する。
For example, after adding 0.7 ml of 10N-H 2 SO 4 to 5 g of distillate, a solution of 10 g of FeSO 4 .7H 2 O dissolved in 30 ml of 50% FeCl 3 solution added 1.43 ml, After sealing and heating in boiling water for 30 minutes and then cooling, distillation is carried out or immediately steam distillation is carried out to convert acetoin in the distillate into diacetyl.

例えば、アセトインの生産を目的とした培養条件で調製
して得られた乳酸菌カルチヤー(ジアセチル156.8μg/
g、アセトイン5.843μg/g、アセトアルデヒド16.7μg/g
含有)100gを水蒸気蒸留して得られる留出液100gに、上
記により酸化剤を添加して水蒸気蒸留を行なうと、ジア
セチル15,413μg/g、アセトイン2.153μg/g、アセトア
ルデヒド93.2μg/gを含有する留出液100gが得られる。
すなわち、ジアセチル含量の極めて高い留出液(スター
ターデイステイレート)が得られ、このようなジアセチ
ルのレベルの製品は、CHR.HANSEN'S LABORATORYから市
販されている調合によるフレーバー製品に匹敵する。
For example, the lactic acid bacteria culture (diacetyl 156.8 μg /
g, acetoin 5.843 μg / g, acetaldehyde 16.7 μg / g
(Containing) 100 g of the distillate obtained by steam distillation, the oxidant is added by the above and steam distillation is performed, diacetyl 15,413 μg / g, acetoin 2.153 μg / g, acetaldehyde 93.2 μg / g are contained. 100 g of distillate is obtained.
That is, a distillate having a very high diacetyl content (starter day stay rate) is obtained, and a product having such a diacetyl level is comparable to a flavor product with a formula commercially available from CHR.HANSEN'S LABORATORY.

因に、上記市販の調合フレーバーは、還元粉乳を培地と
して特別な条件下に培養して得られた培養物から蒸留法
により得られた各種の香気物質を調合したものであつ
て、コスト高の製品である。ところが、本発明により得
られるスターターデイステイレートはそれに含まれる香
気成分中ジアセチル含量が90%以上と非常に高く、しか
も、特定な乳酸菌スターターを利用して効率良く調製し
得るので、発酵乳製品を始め、種々食品に対する天然性
フレーバーとして有益である。
By the way, the above-mentioned commercially available flavor is a mixture of various aroma substances obtained by a distillation method from a culture obtained by culturing reduced milk powder as a medium under special conditions, and is expensive. It is a product. However, the starter day stay rate obtained by the present invention has a very high diacetyl content of 90% or more in the aroma component contained therein, and moreover, since it can be efficiently prepared by using a specific lactic acid bacterium starter, a fermented dairy product is obtained. Initially, it is useful as a natural flavor for various food products.

以下実施例を示して本発明を具体的に説明する。The present invention will be specifically described below with reference to examples.

実施例1 ホエー粉15重量部とクエン酸ソーダ1重量部を水84重量
部に溶解し、90℃の温度で60分間殺菌を行つた後、22℃
に冷却して培地とした。この培地に、25%のアスコルビ
ン酸溶液を0.2重量%添加し、ストレプトコツカス・ク
レモリスSBT-1305(微工研菌寄第9690号)1重量%と、
ストレプトコツカス・ジアセチラクチスSBT-1255(微工
研菌寄第9689号)0.1重量%を接種し、22℃の温度で17
時間培養を行つた。
Example 1 15 parts by weight of whey powder and 1 part by weight of sodium citrate were dissolved in 84 parts by weight of water, and sterilized at a temperature of 90 ° C. for 60 minutes, and then 22 ° C.
The medium was cooled to a medium. To this medium, 0.2% by weight of a 25% ascorbic acid solution was added, and 1% by weight of Streptococcus cremoris SBT-1305 (Microtechnology Research Institute No. 9690),
Streptococcus diacetylactis SBT-1255 (Microtechnology Research Institute No. 9689) 0.1% by weight was inoculated, and at a temperature of 22 ° C, 17
Culture was carried out for a time.

培養後、得られた培養物を40%クエン酸溶液でpHを4.5
に調整し、次いで回転式振とう機により攪拌を3時間行
つた。
After culturing, the resulting culture was adjusted to pH 4.5 with 40% citric acid solution.
After that, the mixture was stirred for 3 hours by a rotary shaker.

上記により、ジアセチル166.9μg/g、アセトイン2091μ
g/g及びアセトアルデヒド8.0μg/gを含む乳酸菌カルチ
ヤー104gを得た。
From the above, diacetyl 166.9 μg / g, acetoin 2091 μ
104 g of lactic acid bacteria culture containing g / g and 8.0 μg / g of acetaldehyde was obtained.

次に、上記乳酸菌カルチヤー104gを水蒸気蒸留して留出
液100gを得た。この留出液は下記の芳香成分組成を有し
ていた。
Next, 104 g of the lactic acid bacterium culture was steam distilled to obtain 100 g of a distillate. This distillate had the following fragrance composition.

ジアセチル 150.2μg/g アセトイン 1254.6μg/g アセトアルデヒド 4.8μg/g 得られた留出液100gに、10N-H2SO4を14ml添加した後、5
0%FeCl3溶液30mlにFeSO4・7H2O 10gを溶解した酸化剤
溶液28.6mlを加えて水蒸気蒸留を行つた。
Diacetyl 150.2 μg / g Acetoin 125 4.6 μg / g Acetaldehyde 4.8 μg / g To 100 g of the obtained distillate, 14 N of 10N-H 2 SO 4 was added, and then 5
28.6 ml of an oxidant solution prepared by dissolving 10 g of FeSO 4 .7H 2 O in 30 ml of 0% FeCl 3 solution was subjected to steam distillation.

上記蒸留により留出液(スターターデイステイレート)
10gを得た。
Distillate from the above distillation (starter day stay rate)
I got 10g.

得られたスターターデイステイレートは下記の芳香成分
組成を有していた。
The obtained starter day stay rate had the following fragrance component composition.

ジアセチル 5906.0μg/g アセトイン 693.0μg/g アセトアルデヒド 36.8μg/g 因に、CHR.HANSEN'S LABORATORYの市販調合フレーバー
の芳香成分組成を示すと下記のとおりである。
Diacetyl 5906.0 μg / g Acetoin 693.0 μg / g Acetaldehyde 36.8 μg / g The fragrance composition of CHR.HANSEN'S LABORATORY commercial flavor is shown below.

ジアセチル 14,000μg/g アセトイン 1,100μg/g アセトアルデヒド 60μg/g 実施例2 実施例1において、ストレプトコツカス・クレモリスSB
T-1255(微工研菌寄第9689号)を0.6重量%接種し、か
つ培養後培養物にクエン酸ナトリウムとして1重量%に
なるようにクエン酸ナトリウム溶液を加え、pHを同様に
調整して攪拌を53時間行うことを除いては、実施例1に
記載したと同様の手順でスターターデイステイレートを
10gを得た。得られたスターターデイステイレートは下
記の芳香成分組成を有した。
Diacetyl 14,000 μg / g Acetoin 1,100 μg / g Acetaldehyde 60 μg / g Example 2 In Example 1, Streptococcus cremoris SB
Inoculate 0.6% by weight of T-1255 (Microtechnology Research Institute No. 9689), and after the culture, add sodium citrate solution to the culture to make 1% by weight sodium citrate, and adjust the pH in the same manner. The starter day stay rate was the same as that described in Example 1 except that the stirring was performed for 53 hours.
I got 10g. The obtained starter day stay rate had the following fragrance component composition.

ジアセチル 15,413 μg/g アセトイン 2,153 μg/g アセトアルデヒド 93.2μg/g なお、上記により得られた乳酸菌カルチヤーの芳香成分
組成は下記のとおりであつた。
Diacetyl 15,413 μg / g acetoin 2,153 μg / g acetaldehyde 93.2 μg / g The composition of aroma components of the lactic acid bacteria culture obtained as described above was as follows.

ジアセチル 156.8 μg/g アセトイン 5.843μg/g アセトアルデヒド 16.7 μg/gDiacetyl 156.8 μg / g Acetoin 5.843 μg / g Acetaldehyde 16.7 μg / g

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

添付図は、乳酸菌スターターの培養により得られた培養
物のpHとジアセチル生産量の関係を示したものである。
The attached figure shows the relationship between the pH of the culture obtained by culturing the lactic acid bacterium starter and the amount of diacetyl produced.

Claims (1)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項1】獣乳もしくはホエーにクエン酸或はクエン
酸塩を添加したものに、ストレプトコツカス・クレモリ
スとストレプトコツカス・ジアセチラクチスに属する2
種の乳酸菌を接種して培養し、得られた培養物を更にク
エン酸或はクエン酸塩を添加し、攪拌し、次いで該培養
物を水蒸気蒸留に付して得られた留出液に酸化剤を加え
て、加熱した後蒸留するか、もしくは酸化剤を加えて直
ちに水蒸気蒸留を行うことを特徴とするジアセチル含量
を増加させた天然フレーバーの調製方法。 (2)培養を、アスコルビン酸或はアスコルビン酸ソー
ダを添加して行う特許請求の範囲第(1)項記載の調製
方法。
1. Animal milk or whey to which citric acid or a citrate is added, which belongs to Streptococcus cremoris and Streptococcus diacetylachistis 2.
Lactobacillus seeds were inoculated and cultivated, the obtained culture was further added with citric acid or citrate, stirred, and then the culture was subjected to steam distillation to oxidize the distillate obtained. A method for preparing a natural flavor having an increased diacetyl content, which comprises adding an agent and heating and then performing distillation, or adding an oxidizing agent and immediately performing steam distillation. (2) The method according to claim (1), wherein the culture is performed by adding ascorbic acid or sodium ascorbate.
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