JPH07278011A - 狭心症治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 配列番号から配列番号３１のいずれかに記載
のアミノ酸配列を有するペプチド、薬学的に許容される
これらペプチドドの誘導体、薬学的に許容されるこれら
ペプチドの塩類、またはこれらの２種以上の混合物を有
効成分とする狭心症治療剤。 【効果】 毒性および副作用が少なく、耐熱性があり、
水に可溶性であり、水溶液中で安定なので、薬剤として
安定であり、ペプチドは抗菌作用を有するので、製剤化
に当り防腐剤を使用する必要がない。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は、狭心症治療剤に関す
るものである。さらに詳しくは、この発明は特定のアミ
ノ酸配列を有するラクトフェリン由来のペプチド等を有
効成分とし、副作用のない新しい狭心症治療剤に関する
ものである。

【０００２】

【従来の技術】狭心症は、心筋が一過性嘘血状態に陥り
生じる疼通発作を主徴とする症候群であり、場合によっ
ては死に至ることもあるので、酸素の必要量と供給量と
の不均衡により惹起される発作時に、直ちに症状を緩解
させることが肝要である。狭心症の治療に使用される薬
品としては、有機ニトロ化合物、アドレナリンβ受容体
拮抗薬、カルシウムチャンネル遮断薬等が知られている
［ザ・ファーマコロジカル・ベイシス・オブ・セラピュ
ーティクス(The Pharmacological Basis of Therapeuti
cs) 、第７版、８０６ページ、マクミラン(Macmilan)
社、１９８５年］。また、冠血管を拡張させて冠血流量
を増加させる生体内物質としてサブスタンスＰ、心房性
ナトリウム利尿ホルモン等が発見され［ライフ・サイエ
ンス(Life Science)、第４２巻、６９５ページ、１９８
７年］、ジピリダモール等の冠血管を拡張させる物質も
多数合成されているが、狭心症の発作には効果が少な
く、専ら狭心症発作の再発防止の目的で使用されている
にすぎない［ザ・ファーマコロジカル・ベイシス・オブ
・セラピューティクス(The Pharmacological Basisof T
herapeutics) 、第７版，８０６ページ、クミラン(Macm
ilan)社、１９８５年］。

【０００３】従来、狭心症発作の緩解を目的として、有
機ニトロ化合物、特にニトログリセリンが臨床において
最も繁用されているが、ニトログリセリンには初回通過
効果を受け易く、作用持続時間が極端に短い欠点があ
り、しかも副作用として頭痛、めまい、血圧下降に伴う
頻脈等が知られている。そこで、これらの欠点がなく、
しかも副作用のない狭心症治療薬が待望されていた。

【０００４】一方、臨床において、患者の心電図におけ
るＳ波およびＴ波の低下は、狭心症の診断および治療に
おける一つの指標とされており、ニトログリセリン等の
狭心症発作に有効な治療薬は、薬物により動物に誘発さ
れたＳ波の低下を抑制するので、この方法が狭心症治療
薬の検索にしばしば用いられている［ザ・ジャパニーズ
・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー(The Japanese
Journal of Pharmacology)、第２０巻、第３１３ペー
ジ、１９７０年、応用薬理、第１９巻、第３１１ペー
ジ、１９８０年、ザ・ジャパニーズ・ジャーナル・オブ
・ファーマコロジー(The Japanese Journal of Pharmac
ology)、第６３巻、第３５ページ、１９９３年および日
本薬理学雑誌、第１０２巻、第８５ページ、１９９３
年］。

【０００５】このような検索の結果、薬物により動物に
誘発されたＳ波の低下を抑制する物質が、ニトログリセ
リン以外にも種々報告されている。例えば、鯨心臓の抽
出物［ザ・ジャパニーズ・ジャーナル・オブ・ファーマ
コロジー(The Japanese Journal of Pharmacology)、第
２０巻、３１３ページ、１９７０年］等も知られている
が、それらの物質の多くは、ジクロロイソプロテレノー
ル［ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・エ
クスペリメンタル・セラピューティクス(The Japanese
Journal of Pharmacology and Experimental Therapeut
ics)、第１３６巻、３２７ページ、１９６２年］、ベラ
パミル（応用薬理、第１９巻、３１１ページ、１９８０
年）、ＫＲＮ２３９１［ザ・ジャパニーズ・ジャーナル
・オブ・ファーマコロジー(The Japanese Journal of P
harmacology)、第６３巻、３５ページ、１９９３年］、
パロニジピン（日本薬理学雑誌、第１０２巻、第８５ペ
ージ、１９９３年）等の合成された有機化合物であり、
副作用が問題となっていた。また、アミノ酸誘導体のニ
トロ化合物も冠血流量を増加することが知られているが
（特開平２−１６９５５８号公報及び特開平５−２２１
９４９号公報）、薬物により動物に誘発されたＳ波の低
下に対して有効であるか否か明らかにされていない。

【０００６】一方、種々の微生物に対して抗菌作用を有
するペプチドについては、多数の発明が開示されてい
る。例えば、グラム陽性菌およびグラム陰性菌に有効な
ホスホノトリペプチド（特開昭５７−１０６６８９号公
報）、ホスホノジペプチド誘導体（特開昭５８−１３５
９４号公報）、環状ペプチド誘導体（特開昭５８−２１
３７４４号公報）、抗菌および抗ウイルス作用を示すペ
プチド（特開昭５９−５１２４７号公報）、酵母に有効
なポリペプチド（特開昭６０−１３０５９９号公報）、
グラム陽性菌に有効な糖ペプチド誘導体（特開昭６０−
１７２９９８号公報、特開昭６１−２５１６９９号公報
および特開昭６３−４４５９８号公報）、グラム陽性菌
に有効なオリゴペプチド（特開昭６２−２２７９８号公
報）、ペプチド系抗生物質（特開昭６２−５１６９７号
公報および特開昭６３−１７８９７号公報）そのほか北
米産カブトガニの血球から抽出した抗菌性ペプチド（特
開平２−５３７９９号公報）、蜜蜂の血リンパから単離
した抗菌性ペプチドド（特表平２−５０００８４号公
報）、ロイヤルゼリーから単離した抗菌ペプチド（特開
平２−２６８１９８号公報）等がある。

【０００７】ラクトフェリンは、乳汁および唾液、涙、
粘膜分泌液などのヒトを含む哺乳動物の体液に存在する
鉄結合性タンパク質であり、大腸菌、カンジダ菌、クロ
ストリジウム菌等の有害微生物に対して抗菌作用を示す
ことが知られている［ジャーナル・オブ・ペディアトリ
クス(Journal of Pediatrics) 、第９４巻、第１ペー
ジ、１９７９年］。また、ブドウ球菌および腸球菌に対
して、０．５〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度で抗菌作用を有す
ることが知られている［ジャーナル・オブ・デイリー・
サイエンス(Journal of Dairy Science)、第６７巻、第
６０６ページ、１９８４年］。

【０００８】この発明の発明者らは、ラクトフェリンの
抗菌性に着目し、哺乳類のラクトフェリン、アポラクト
フェリン、および／または金属飽和ラクトフェリン（以
下、これらをラクトフェリン類と記載することがある）
を酸または酵素により加水分解した物質が、望ましくな
い副作用（例えば抗原性）等がなく、しかも未分解のラ
クトフェリン類よりも強い耐熱性および抗菌性を有する
ことを見出し、既に特許出願を行った（特開平５−３２
００６８号公報）。

【０００９】また、この発明の発明者らは、ラクトフェ
リンの分解物から強い抗菌活性を有するペプチドを単
離、若しくはそれらのペプチドと同一のアミノ酸配列を
有するペプチドまたはペプチド誘導体を合成し、２０個
のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−９
２９９４号公報）、１１個のアミノ酸残基からなる抗菌
性ペプチド（特開平５−７８３９２号公報）、６個のア
ミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８
２９７号公報）、５個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペ
プチド（特開平５−１４９８２９６号公報）、３〜６個
のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１
４８２９５号公報）を、それぞれ既に特許出願した。

【００１０】さらに、乳汁の生理活性ペプチドには、成
長ホルモン、細胞分化増殖因子等の他に、カルシウム吸
収促進ペプチド（フードケミカル、第１１巻、第３３ペ
ージ、１９８８年）、オピオイドペプチド［ホッペ−ザ
イラーズ・ツァイトシュリフト・フュアー・フィジオロ
ギッシェ・ヘミー(Hoppe-Seyler´s Zeitschrift furPh
ysiologische Chemie)、第３６０巻、第１２１１ペー
ジ、１９７９年およびザ・ジャーナル・オブ・バイオロ
ジカルケミストリー(The Journal of Biological Chemi
stry) 、第２５４巻、第２４４６ページ、１９７９
年］、アンジオテンシン転換酵素阻害ペプチド（フード
ケミカル、第１１巻、第３９ページ、１９８８年）、胃
酸分泌抑制作用を有するペプチド（特開平５−２６２７
９３号公報）等が知られている。この発明の発明者ら
も、ラクトフェリン類を酸または酵素により加水分解し
た物質と同一のアミノ酸配列を有するペプチドまたはこ
れらペプチドの誘導体に脳の保護作用のあることを見出
し、既に特許出願した（特願平４−３２７７３８号）。
しかしながら、これらのラクトフェリン由来のペプチド
に狭心症治療効果のあることは知られておらず、文献に
も記載されていない。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】前記従来技術から明ら
かなように、狭心症発作に対して持続的な緩解作用を有
し、しかも副作用が少なく安全な薬剤は実現されていな
い。この発明は、以上の通りの事情に鑑みてなされたも
のであり、副作用が少なく、少量で有効な狭心症治療薬
を提供することを目的としている。

【００１２】

【課題を解決するための手段】この発明は、前記の課題
を解決するものとして、配列番号１から配列番号３１の
いずれかに記載のアミノ酸配列を有するペプチド、薬学
的に許容されるこれらペプチドの誘導体、薬学的に許容
されるこれらペプチドの塩類（以下、これらをまとめて
ペプチド類と記載することがある）、またはこれらの２
種以上の混合物を有効成分とする狭心症治療剤を提供す
る。

【００１３】すなわち、この発明の発明者らは、薬物の
投与により誘発される心電図のＳ波の低下に対する抑制
効果を指標とする検索方法により、副作用の少ない安全
な狭心症治療薬を検索した結果、前記ペプチド類が狭心
症に対し優れた治療効果を有することを見い出し、この
発明を完成した。以下、この発明の構成および好ましい
態様について詳しく説明する。

【００１４】この発明の狭心症治療剤の有効成分である
ペプチド類をラクトフェリン類から製造する場合、出発
物質として使用するラクトフェリン類は、市販のラクト
フェリン、哺乳類（例えば、ヒト、ウシ、ヒツジ、ヤ
ギ、ウマ）の初乳、移行乳、常乳、末期乳等、またはこ
れらの乳の処理物である脱脂乳、ホエー等から常法（例
えば、イオン交換クロマトグラフィー）により分離した
ラクトフェリン、それらを塩酸、クエン酸等により脱鉄
したアポラクトフェリン、アポラクトフェリンを鉄、
銅、亜鉛、マンガン等の金属でキレートした金属飽和ま
たは部分飽和ラクトフェリンであり、市販品または公知
の方法により製造した調製品を使用することもできる。

【００１５】この発明において使用するペプチド類は、
ラクトフェリン類の分解物から分離手段によって得られ
るペプチド、このペプチドと同一のアミノ酸配列、相同
なアミノ酸配列を有するペプチド、これらのペプチドの
誘導体、これらのペプチドの薬学的に許容される塩類ま
たはこれらの任意の混合物であり、公知の方法により化
学的に合成することもできる。これらのペプチド類は、
例えば、前記特開平５−９２９９４号公報、特開平５−
７８３９２号公報、特開平５−１４８２９７号公報、特
開平５−１４９８２９６号公報および特開平５−１４８
２９５号公報の各発明に記載された方法によって得るこ
とができる。

【００１６】前記の方法によって得られるペプチドは次
のアミノ酸配列を有するペプチド、その誘導体または塩
類を望ましい態様として例示できる。例えば、配列番号
１、２及び２７のアミノ酸配列を有するペプチド、その
塩類またはその誘導体（特開平５−７８３９２号公
報）、配列番号３、４、５および６のアミノ酸配列を有
するペプチド、その塩類またはその誘導体（特開平５−
１４８２９７号公報）、配列番号７、８、９及び３１の
アミノ酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘
導体（特開平５−１４９８２９６号公報）、配列番号１
０乃至２１のアミノ酸配列を有するペプチド、その塩類
またはその誘導体（特開平５−１４８２９５号公報）、
配列番号２２から２６、２８、２９および３０のアミノ
酸配列を有するペプチド、その塩類またはその誘導体
（特開平５−９２９９４号公報）である。 前記ペプチ
ドの薬学的に許容される塩類としては、塩酸塩、リン酸
塩、硫酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩等の酸付加
塩を例示でき、誘導体としては、カルボキシル基をアミ
ド化またはアシル化した誘導体を例示することができ
る。

【００１７】この発明の治療剤は、公知の方法により錠
剤、カプセル剤、トローチ剤、シロップ剤、顆粒剤、散
剤、注射剤等に加工することができ、必要に応じて公知
の方法により剤皮を施した薬剤、例えば腸溶被錠とする
こともできる。この発明の狭心症治療剤は、年齢、症状
等により異なるが、体重１ｋｇ当たり少なくとも１０μ
ｇの割合で非経口的に、あるいは、体重１ｋｇ当たり少
なくとも１０ｍｇの割合で経口的に投与できる。

【００１８】次に試験例を示してこの発明を詳しく説明
する。 試験例１ この試験は、ペプチドの狭心症治療効果を調べるために
行った。 １）試験動物 体重２２０〜２８０ｇのウイスター(Wistar)系雄性ラッ
ト（日本ＳＬＣ社から購入）を、無作為に４群（１群６
〜１３匹）に分けて使用した。 ２）試験方法 ラットをウレタン（東京化成社製）１．３ｍｇ／ｋｇ
ｉ．ｐ．で麻酔し、四肢に装着した電極を介して第２誘
導した心臓の電位を多用途記録計（日本光電社製）で増
幅し、周波数解析装置（小野測器社製）で心電図の最小
値を検出した。これをＳ波の値とし、パーソナルコンピ
ュータ（日本電気社製）で経時的に記録した。Ｓ波の低
下は、バソプレシン（ペプチド研究所製）０．５μｇ／
ｋｇを大腿静脈内に挿入したカニューレを介して急速注
入して誘発し、被検薬投与直前の値とバソプレシン投与
後５分間の最小値との差をＳ波の値の変化量とした。

【００１９】被検薬（参考例１と同一の方法により製造
した配列番号２６のペプチド）は、注射用生理食塩液
（大塚製薬社製）に溶解し、０．５ｍｌ／ｒａｔの割合
で投与した。ニトログリセリン（日本化薬社製）は注射
剤を希釈せずに用いた。いずれの薬物もカニューレを介
して大腿静脈内にバソプレシン投与２分前に投与し、対
照群には生理食塩液を投与した。Ｓ波の値の変化量は、
マン−ホイットニーのＵ検定により統計学的な有意差の
検定を行った。 ３）試験結果 この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から
明らかなように、被検薬はバソプレシンの急速注入によ
り誘発されたＳ波の低下を抑制し、標準薬のニトログリ
セリンより有効であることが認められた。尚、他のペプ
チド類についても試験を行ったが、ほぼ同様の結果が得
られた。

【００２０】

【表１】

【００２１】試験例２ この試験は、ペプチドの狭心症治療効果を調べるために
行った。 １）試験動物 体重２２０〜２８０ｇのウイスター(Wistar)系雄性ラッ
ト（日本ＳＬＣ社から購入）を、無作為に４群（１群６
〜９匹）に分けて使用した。 ２）試験方法 Ｓ波の低下はイソプロテレノール（日研化学製）５μｇ
／ｋｇ／ｍｉｎを０．１ｍｌ／ｍｉｎの割合で持続注入
して誘発し、被検薬物（参考例１と同一の方法により製
造した配列番号２６のペプチド）投与直前の値と被検薬
投与後１分毎の値との差をＳ波の値の変化量としたこ
と、および薬物はイソプロテレノール投与開始１分前に
投与したことを除き、試験例１と同一の方法により試験
した。 ３）試験結果 この試験の結果は、表２に示すとおりである。表２から
明らかなように、被検薬はイソプロテノールの持続注入
により誘発されたＳ波の低下を顕著に抑制した。尚、他
のペプチド類についても試験を行ったが、ほぼ同様の結
果が得られた。

【００２２】

【表２】

【００２３】試験例３ この試験は、ペプチドの狭心症治療効果を調べるために
行った。 １）試験動物 体重２２０〜２８０ｇのウイスター(Wistar)系雄性ラッ
ト（日本ＳＬＣ社から購入）を、無作為に６群（１群５
〜９匹）に分けて使用した。 ２）試験方法 Ｓ波の低下はドーパミン（日本新薬社製）０．５ｍｇ／
ｋｇ／ｍｉｎを０．１ｍｌ／ｍｉｎの割合で持続注入し
て誘発したことを除き、試験例２と同一の方法により試
験した。 ３）試験結果 この試験の結果は、表３に示すとおりである。表３から
明らかなように、被検薬（参考例１と同一の方法により
製造した配列番号２６のペプチド）は、ドーパミンの持
続注入により誘発されたＳ波の低下を抑制し、標準薬の
ニトログリセリンより有効であることが認められた。
尚、他のペプチド類についても試験を行ったが、ほぼ同
様の結果が得られた。

【００２４】

【表３】

【００２５】試験例４ この試験は、ペプチドの急性毒性を調べるために行っ
た。 １）使用動物 ６週齢のＣＤ（ＳＤ）系のラット（日本ＳＬＣから購
入）の両性を用い、雄および雌を無作為にそれぞれ４群
（１群５匹）に分けて使用した。 ２）試験方法 体重１ｋｇ当り１０００、２０００および４０００ｍｇ
の割合で参考例１と同一の方法で製造したペプチドを注
射用水（大塚製薬社製）に溶解し、体重１００ｇ当たり
４ｍｌの割合で金属製玉付き針を用いて単回強制経口投
与し、急性毒性を試験した。 ３）試験結果 この試験の結果は、表４に示すとおりである。表４から
明らかなように、このペプチドを１０００ｍｇ／ｋｇお
よび２０００ｍｇ／ｋｇの割合で投与した群に死亡例は
認められなかった。従って、このペプチドのＬＤ５０
は、２０００ｍｇ／ｋｇ以上であり、毒性は極めて低い
ことが判明した。尚、他のペプチド類についても試験を
行ったが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００２６】

【表４】

【００２７】参考例１ 市販のウシ・ラクトフェリン（シグマ社製）５０ｍｇを
精製水０．９ｍｌに溶解し、０．１規定の塩酸でｐＨを
２．５に調整し、のち市販のブタペプシン（シグマ社
製）１ｍｇを添加し、３７℃で６時間加水分解した。次
いで０．１規定の水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に調
整し、８０℃で１０分間加熱して酵素を失活させ、室温
に冷却し、１５，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、
透明な上清を得た。この上清１００μｌをＴＳＫゲルＯ
ＤＳ−１２０Ｔ（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマ
トグラフィ−にかけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入
後１０分間０．０５％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を含
む２０％アセトニトリルで溶出し、のち３０分間０．０
５％ＴＦＡを含む２０〜６０％のアセトニトリルのグラ
ジエントで溶出し、２４〜２５分の間に溶出する画分を
集め、真空乾燥した。この乾燥物を２％（Ｗ／Ｖ）の濃
度で精製水に溶解し、再度ＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ
（東ソ−社製）を用いた高速液体クロマトグラフィ−に
かけ、０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０分間０．
０５％ＴＦＡを含む２４％アセトニトリルで溶出し、の
ち３０分間０．０５％ＴＦＡを含む２４〜３２％のアセ
トニトリルのグラジエントで溶出し、３３．５〜３５．
５分の間に溶出する画分を集めた。上記の操作を２５回
反復し、真空乾燥し、ペプチド約１．５ｍｇを得た。

【００２８】上記のペプチドを６Ｎ塩酸で加水分解し、
アミノ酸分析計を用いて常法によりアミノ酸組成を分析
した。同一の試料を気相シ−クェンサ−（アプライド・
バイオシステムズ社製）を用いて２５回のエドマン分解
を行ない、２５個のアミノ酸残基の配列を決定した。ま
たＤＴＮＢ［５，５−ジチオ−ビス（２−ニトロベンゾ
イック・アシド）］を用いたジスルフィド結合分析法
［アナリティカル・バイオケミストリ−（Analytical B
iochemistry ）、第６７巻、第４９３頁、１９７５年］
によりジスルフィド結合が存在することを確認した。

【００２９】その結果、このペプチドは、２５個のアミ
ノ酸残基からなり、３番目と２０番目のシステイン残基
がジスルフィド結合し、３番目のシステイン残基からＮ
−末端側に２個のアミノ酸残基が、２０番目のシステイ
ン残基からＣ−末端側に５個のアミノ酸がそれぞれ結合
した、配列番号２６のアミノ酸配列を有していることが
確認された。 参考例２ ペプチド自動合成装置（ファルマシアＬＫＢバイオテク
ノロジ−社製。ＬＫＢＢｉｏｌｙｎｘ４１７０）を用
い、シェパ−ド等による固相ペプチド合成法［ジャ−ナ
ル・オブ・ケミカル・ソサイエティ−・パ−キンＩ（Jo
urnal of Chemical Society Perkin Ｉ）、第５３８
頁、１９８１年］に基づいてペプチドを次のようにして
合成した。

【００３０】アミン官能基を９−フルオレニルメトキシ
カルボニル基で保護したアミノ酸［以下Fmoc−アミノ酸
またはFmoc−固有のアミノ酸の名称（例えば、Fmoc−ア
スパラギン）と記載することがある］に、Ｎ，Ｎ−ジシ
クロヘキシルカルボジイミドを添加して所望のアミノ酸
の無水物を生成させ、このFmoc−アミノ酸無水物を合成
に用いた。ペプチド鎖を製造するためにＣ−末端のアス
パラギン残基に相当するFmoc−アスパラギン無水物を、
そのカルボキシル基を介し、ジメチルアミノピリジンを
触媒としてウルトロシンＡ樹脂（ファルマシアＬＫＢバ
イオテクノロジ−社製）に固定する。次いでこの樹脂を
ピペリジンを含むジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ−
末端アミノ酸のアミン官能基の保護基を除去する。のち
アミノ酸配列のＣ−末端から２番目に相当するFmoc−ア
ルギニン無水物を前記Ｃ−末端アミノ酸残基を介して樹
脂に固定されたアルギニンの脱保護アミン官能基にカッ
プリングさせた。以下同様にして順次グルタミン、トリ
プトファン、グルタミン、およびフェニルアラニンを固
定した。全部のアミノ酸のカップリングが終了し、所望
のアミノ酸配列のペプチド鎖が形成された後、９４％Ｔ
ＦＡ、５％フェノ−ル、および１％エタンジオ−ルから
なる溶媒でアセトアミドメチル以外の保護基の除去およ
びペプチドの脱離を行ない、高速液体クロマトグラフイ
−によりペプチドを精製し、この溶液を濃縮し、乾燥し
て、ペプチド粉末を得た。

【００３１】前記のペプチドについてアミノ酸分析計を
用いて常法によりアミノ酸組成を分析し、配列番号１０
のアミノ酸配列を有することを確認した。

【００３２】

【実施例】次に実施例を示してこの発明をさらに詳細か
つ具体的に説明するが、この発明は以下の例に限定され
るものではない。 実施例１ 注射用水（大塚製薬社製）１ｍｌに、参考例１と同一の
方法により製造した配列番号２６のペプチド粉末１ｍｇ
および塩化ナトリウム（和光純薬工業製）９ｍｇの割合
で溶解し、水酸化ナトリウム（和光純薬工業社製）およ
び塩酸（和光純薬工業社製）でｐＨを約７に調整し、濾
過滅菌し、常法により１ｍｌずつアンプルに充填し、注
射用の狭心症治療薬を製造した。 実施例２ 注射用水（大塚製薬製）１ｍｌに、参考例２と同一の方
法により製造した配列番号１０のペプチド粉末１０ｍｇ
およびＤ−マンニット（和光純薬工業社製）４９．５ｍ
ｇの割合で溶解し、リン酸緩衝剤粉末（和光純薬工業社
製）の水溶液でｐＨを約７に調整し、濾過滅菌し、常法
により１ｍｌずつバイアル瓶に充填し、凍結乾燥し、注
射用の狭心症治療薬を製造した。 実施例３ １錠当り次の組成からなる錠剤の狭心症治療薬を次の方
法により製造した。

【００３３】 配当番号２６のペプチド １０．０（ｍｇ） 乳糖一水和物（和光純薬工業社製） ３０．０ トウモロコシデンプン（和光純薬工業社製） １９．８ 結晶セルロース（旭化成社製） ２８．０ 珪酸マグネシウム五水和物（和光純薬工業社製） ２．０ ステアリン酸マグネシウム（和光純薬工業社製） ０．２ 参考例１と同一の方法により製造した配列番号２６のペ
プチド、乳糖一水和物、トウモロコシデンプンおよび結
晶セルロースの混合物に、滅菌精製水を適宜添加しなが
ら均一に混練し、５０℃で３時間乾燥させ、得られた乾
燥物に珪酸マグネシウム五水和物およびステアリン酸マ
グネシウムを添加して混合し、常法により打錠器で打錠
した。

【００３４】

【発明の効果】以上詳しく説明したとおり、この発明
は、ペプチド類を有効成分とする狭心症治療剤に係るも
のであり、この発明によって奏せられる効果は次のとお
りである。（１）毒性および副作用が少ない。 （２）耐熱性があり、水に可溶性で、水溶液中で安定な
ため、薬剤として安定である。 （３）ペプチドは抗菌作用を有するので、製剤化に当り
防腐剤を使用する必要がない。

【００３５】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００３６】 配列： Lys R01 R01 R01 R01 R01 Gln R01 R01 Met Lys Lys 1 5 10 配列番号：２ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００３７】 配列： Lys R01 R01 R01 R01 Gln R01 R01 Met Arg Lys 1 5 10 配列番号：３ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００３８】 配列： Arg R01 R01 R01 R01 Arg 1 5 配列番号：４ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００３９】 配列： Lys R01 R01 R01 R01 Arg 1 5 配列番号：５ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００４０】 配列： Lys R01 R01 R01 R01 Lys 1 5 配列番号：６ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００４１】 配列： Arg R01 R01 R01 R01 Lys 1 5 配列番号：７ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００４２】 配列： Arg R01 R01 R01 Arg 1 5 配列番号：８ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００４３】 配列： Lys R01 R01 R01 Arg 1 5 配列番号：９ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
はCys を除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００４４】 配列： Arg R01 R01 R01 Lys 1 5 配列番号：１０ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００４５】 配列： Phe Gln Trp Gln Arg Asn 1 5 配列番号：１１ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００４６】 配列： Phe Gln Trp Gln Arg 1 5 配列番号：１２ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００４７】 配列： Gln Trp Gln Arg 1 配列番号：１３ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００４８】 配列： Trp Gln Arg 1 配列番号：１４ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００４９】 配列： Arg Arg Trp Gln Trp 1 5 配列番号：１５ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００５０】 配列： Arg Arg Trp Gln 1 配列番号：１６ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００５１】 配列： Trp Gln Trp Arg 1 配列番号：１７ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００５２】 配列： Gln Trp Arg 1 配列番号：１８ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００５３】 配列： Leu Arg Trp Gln Asn Asp 1 5 配列番号：１９ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００５４】 配列： Leu Arg Trp Gln Asn 1 5 配列番号：２０ 配列の長さ：４ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００５５】 配列： Leu Arg Trp Gln 1 配列番号：２１ 配列の長さ：３ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００５６】 配列： Arg Trp Gln 1 配列番号：２２ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、２番
の Cysと１９番の Cysがジスルフィド結合している。

【００５７】 配列： Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro 1 5 10 15 Ser Ile Thr Cys Val 20 配列番号：２３ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列においてCys*
は、ジスルフィド結合の形成を防止するため、チオ−ル
基を化学的に修飾したシステインを示す。

【００５８】 配列： Lys Cys* Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro 1 5 10 15 Ser Ile Thr Cys* Val 20 配列番号：２４ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、２番
の Cysと１９番の Cysがジスルフィド結合している。

【００５９】 配列： Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly Pro 1 5 10 15 Pro Val Ser Cys Ile 20 配列番号：２５ 配列の長さ：２０ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列においてCys*
は、ジスルフィド結合の形成を防止するため、チオ−ル
基を化学的に修飾したシステインを示す。

【００６０】 配列： Lys Cys* Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly Pro 1 5 10 15 Pro Val Ser Cys* Ile 20 配列番号：２６ 配列の長さ：２５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、３番
の Cysと２０番の Cysがジスルフィド結合している。

【００６１】 配列： Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala 1 5 10 15 Pro Ser Ile Thr Cys Val Arg Arg Ala Phe 20 25 配列番号：２７ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。

【００６２】 配列番号：２８ 配列の長さ：３８ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、１６
番の Cysと３３番の Cysとがジスルフィド結合してい
る。

【００６３】 配列： Lys Asn Val Arg Trp Cys Thr Ile Ser Gln Pro Glu Trp Phe Lys 1 5 10 15 Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro Ser 20 25 30 Ile Thr Cys Val Arg Arg Ala Phe 35 配列番号：２９ 配列の長さ：３２ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、１０
番の Cysと２７番の Cysとがジスルフィド結合してい
る。

【００６４】 配列： Thr Ile Ser Gln Pro Glu Trp Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp 1 5 10 15 Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala Pro Ser Ile Thr Cys Val Arg Arg 20 25 30 Ala Phe 配列番号：３０ 配列の長さ：４７ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、配列
の長さ３６であって９番、２６番、及び３５番に Cysを
有するペプチドの、９番の Cysと２６番の Cysとがジス
ルフィド結合し、上記配列の長さ３６のペプチドの３５
番の Cysが、配列の長さ１１であって１０番にCysを有
するペプチドの１０番の Cysとがジスルフィド結合して
いる。

【００６５】 配列： Val Ser Gln Pro Glu Ala Thr Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn 1 5 10 15 Met Arg Lys Val Arg Gly Pro Pro Val Ser Cys Ile Lys Arg Asp 20 25 30 Ser Pro Ile Gln Cys Ile 35 Gly Arg Arg Arg Arg Ser Val Gln Trp Cys Ala 1 5 10 配列番号：３１ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、R01
は Cysを除く任意のアミノ酸残基を示す。

【００６６】 配列： Lys R01 R01 R01 Lys 1 5

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 5/103 5/11 5/113 5/117 7/06 ＺＮＡ 7/08 14/47 (72)発明者 高瀬 光徳 神奈川県座間市東原５−１−83 森永乳業 株式会社食品総合研究所内 (72)発明者 折笠 修三 神奈川県座間市東原５−１−83 森永乳業 株式会社食品総合研究所内

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号１から配列番号３１のいずれか
   に記載のアミノ酸配列を有するペプチド、薬学的に許容
   されるこれらペプチドの誘導体、薬学的に許容されるこ
   れらペプチドの塩類、またはこれらの２種以上の混合物
   を有効成分とする狭心症治療剤。