JPH07274948A - Novel microorganism capable of producing beta-glucuronidase - Google Patents
Novel microorganism capable of producing beta-glucuronidaseInfo
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】この発明は、シュウドモナス(Pse
udomonas) 属に属し、特にビートサポニンの加水分解に
よりオレアノール酸を生産するに際して有効なβ−グル
クロニダーゼ生産性を有する新規微生物に関する。This invention relates to Pseudomonas (Pseudomonas)
The present invention relates to a novel microorganism belonging to the genus udomonas) and having β-glucuronidase productivity effective in producing oleanolic acid by hydrolysis of beet saponin.
【０００２】[0002]
【従来の技術】ビートサポニンは、サポゲニンであるオ
レアノール酸にグロクロン酸がβ結合したグルクロン酸
型のほか、グルコース型とメチルグルコース型がある
が、大部分はグルクロン酸型である。BACKGROUND ART Beet saponins include glucuronic acid type in which glucuronic acid is β-bonded to oleanolic acid which is sapogenin, and glucose type and methyl glucose type, but most of them are glucuronic acid type.
【０００３】このビートサポニンからオレアノール酸を
製造する方法としては、特開昭62-126149 号公報、特開
昭62-126150 号公報等に提案されているように、酸分解
法が主流を占めている。As a method for producing oleanolic acid from beet saponin, an acid decomposition method is predominant as proposed in JP-A-62-126149 and JP-A-62-126150. There is.
【０００４】この方法においては、先ずサポニンを溶媒
又はアルカリ水にて抽出し、不純物を除去してから若干
精製した粗サポニンを鉱酸にて加水分解し、粗オレアノ
ール酸としてから溶媒による再結晶を繰り返しながらオ
レアノール酸を精製するものである。In this method, saponin is first extracted with a solvent or alkaline water to remove impurities, and then slightly purified crude saponin is hydrolyzed with mineral acid to obtain crude oleanolic acid, which is then recrystallized with a solvent. The oleanolic acid is purified repeatedly.
【０００５】しかし、この酸分解法の場合、強酸を用い
ることによる製造装置の腐食、或はガス発生に由来する
製造操作上の種々の困難等が伴うことから穏やかな条件
で、且つ効率的な製造法が望まれている。However, in the case of this acid decomposition method, since the production apparatus is corroded by using a strong acid, or various difficulties in the production operation due to gas generation are involved, it is effective under mild conditions and efficiently. A manufacturing method is desired.
【０００６】[0006]
【発明が解決しようとする課題】これに対して、β−グ
ルクロニダーゼを使用してビートサポニンを分解する方
法においては、穏やかな条件で、且つ効率的にオレアノ
ール酸を製造できることが期待されるが、従来β−グル
クロニダーゼの利用法として、酵母のクリプトコッカス
から生産されたβ−グルクロニダーゼを使用した高品質
のグリチルリチン酸モノグルクロナイド系甘味料の製造
方法( 特開平4-23982 号) 、及び糸状菌アスペルギルス
属から生産されたβ−グルクロニダーゼを使用した大豆
サポニンの如き疎水性の大きいアグリコンに直接結合し
たグルクロナイド結合を加水分解する方法( 特開平4-26
7875）等が報告されているが、微生物によるβ−グルク
ロニダーゼ生産の報告は数少ない。On the other hand, in the method of degrading beet saponin using β-glucuronidase, it is expected that oleanolic acid can be efficiently produced under mild conditions. As a conventional method of utilizing β-glucuronidase, a method for producing a high-quality glycyrrhizic acid monoglucuronide sweetener using β-glucuronidase produced from yeast cryptococcus (JP-A-4-23982), and a filamentous fungus Aspergillus Method for hydrolyzing glucuronide bond directly bonded to highly hydrophobic aglycone such as soybean saponin using β-glucuronidase produced from genus (JP-A-4-26
7875) etc., but there are few reports of β-glucuronidase production by microorganisms.
【０００７】また、β−グルクロニダーゼは海洋軟体動
物、牛の肝臓、カタツムリ、リンゴ貝等から抽出分離・
精製されたものが試薬として販売されているが、本発明
者等は、フダンソウ属アカザ科の植物である甜菜（ビー
ト）中に含まれるこのビートサポニンを、この市販され
る試薬のβ−グルクロニダーゼで分解する実験を試みた
が、目的を達成するに至らなかった。Further, β-glucuronidase is extracted and separated from marine molluscs, bovine liver, snails, apple shellfish, etc.
Although the purified product is sold as a reagent, the present inventors have developed the beet saponin contained in beet, which is a plant belonging to the genus Chardaceae, with the β-glucuronidase of this commercially available reagent. An attempt was made to disassemble it, but the goal was not achieved.
【０００８】そこでこの発明の目的は、ビート中に含ま
れるビートサポニンを効率よく分解してオレアノール酸
を容易に、且つ安価に製造することができる優れた微生
物を提供することにある。An object of the present invention is to provide an excellent microorganism capable of efficiently decomposing beet saponin contained in beet and producing oleanolic acid easily and at low cost.
【０００９】[0009]
【課題を解決するための手段】本発明者等は、上記条件
を兼ね備えた微生物を見出すべく鋭意検討を重ねた結
果、北海道北見市内の山林・畑地から採取してきた土壌
から分離された菌株、即ちシュウドモナス(Pseudomona
s) 属に属する菌株をビートサポニン含有の培地中で培
養して得られる菌株が上記条件を備えていることを見出
し、その発見に基づいてこの発明を完成させたものであ
る。[Means for Solving the Problems] The inventors of the present invention have conducted extensive studies to find microorganisms having the above conditions, and as a result, strains isolated from soil collected from forests and fields in Kitami City, Hokkaido, That is, Pseudomonas
The present invention has been completed based on the discovery that the strain obtained by culturing a strain belonging to the genus genus in a medium containing beet saponin has the above-mentioned conditions, and based on the discovery.
【００１０】ここで、菌株の培養培地としては例えばYP
G(酵母エキス 0.1%,ペプトン 0.5%,グルコース 0.2%,Na
NO3 0.1%,KH2PO4 0.2%,MgSO47H2O. 0.05%)液体培地を使
用することができる。The culture medium of the strain is, for example, YP
G (yeast extract 0.1%, peptone 0.5%, glucose 0.2%, Na
NO 3 0.1%, KH 2 PO 4 0.2%, MgSO 4 7H 2 O. 0.05%) liquid medium can be used.
【００１１】この発明に係る菌株は、常法に従って釣菌
したシュウドモナス(Pseudomonas)属に属する上記菌株
をビートサポニンを含有した培地中に接種し、培養して
得られたもののうち、β−グルクロニダーゼ活性のある
菌株であり、その中の一つ菌株であるシュウドモナス・
パウシモビリス(Pseudomonas paucimobilis)Ｈ−３は次
の方法で得られた。The strain according to the present invention is a β-glucuronidase activity among those obtained by inoculating the above strain belonging to the genus Pseudomonas cultivated according to a conventional method into a medium containing beet saponin and culturing it. Strains of Pseudomonas
Pseudomonas paucimobilis H-3 was obtained by the following method.
【００１２】常法に従って釣菌した菌株を粗ビートサポ
ニン0.1%を含有するYPG 液体培地を100ml 容坂口フラス
コに50 ml 宛分注したものに接種し、30℃, ３日間振盪
培養し、この培養液を遠心分離し、上澄液をβ−グルク
ロニダーゼ活性測定用の酵素液とし、これよりβ−グル
クロニダーゼ活性のある細菌12株を得、この中活性が最
も高く、且つ再現性のある一株を選択した。The strain strained by the conventional method was inoculated into a 100 ml Sakaguchi flask to which 50 ml of YPG liquid medium containing 0.1% of crude beet saponin was dispensed, and shake culture was carried out at 30 ° C. for 3 days. The liquid was centrifuged, and the supernatant was used as an enzyme solution for β-glucuronidase activity measurement, from which 12 strains of bacteria with β-glucuronidase activity were obtained, among which the highest activity, and a reproducible strain. Selected.
【００１３】この菌株が、この発明に係る新規微生物で
あるシュウドモナス・パウシモビリス(Pseudomonas pau
cimobilis)Ｈ−３である。This strain is a novel microorganism of the present invention, Pseudomonas pau
cimobilis) H-3.
【００１４】この菌株の生産するβ−グルクロニダーゼ
は、pHの安定性は広く温度の安定性もあり、この発明の
目的であるビートサポニンを非常によく分解し、効率よ
くオレアノール酸に転換させる。The β-glucuronidase produced by this strain has a wide pH stability and temperature stability, and it decomposes beet saponin, which is the object of the present invention, very well and efficiently converts it into oleanolic acid.
【００１５】オレアノール酸製造時の反応条件として
は、基質となるビートサポニンの濃度は1 〜30% 、好ま
しくは5 〜10% である。As a reaction condition for the production of oleanolic acid, the concentration of beet saponin as a substrate is 1 to 30%, preferably 5 to 10%.
【００１６】反応時のpHは通常4.0 〜9.0 であるが、好
ましくは6.0 〜7.5 であり、また反応温度は20〜60℃、
好ましくは30〜40℃であり、pH, 温度の安定性が高い。The pH during the reaction is usually 4.0 to 9.0, preferably 6.0 to 7.5, and the reaction temperature is 20 to 60 ° C.
The temperature is preferably 30 to 40 ° C, and the stability of pH and temperature is high.
【００１７】この新菌株は、生命工学工業技術研究所に
平成６年１月26日付けで寄託され、その微生物寄託番号
はFERM P-14074 (以下、Ｈ−３株と記す）である。This new strain was deposited at the Institute of Biotechnology and Industrial Technology on January 26, 1994, and its microorganism deposit number is FERM P-14074 (hereinafter referred to as H-3 strain).
【００１８】この発明に係る微生物には、上記Ｈ−３株
のほか、Ｈ−３株を人工的に変異処理した変異株及び自
然変異株をも含まれる。The microorganism according to the present invention includes, in addition to the above H-3 strain, a mutant strain obtained by artificially mutating the H-3 strain and a natural mutant strain.
【００１９】次に、この発明に係る微生物の菌学的性質
について詳細に説明する。Ｈ−３株は、次の菌学的諸性
質を有する。Next, the mycological properties of the microorganism according to the present invention will be described in detail. The H-3 strain has the following mycological properties.
【００２０】(1) 形態 大きさ：0.5 ×1.5 μm の捍菌。 運動性：有り。グラム染色は陰性。(1) Morphology Size: 0.5 × 1.5 μm bacillus. Motility: Yes. Gram stain is negative.
【００２１】(2) 生理学的性質 (a) 硝酸塩の還元 ：− (b) インドール生成 ：− (c) アルギニン脱水素酵素 ：− (d) ウレアーゼ ：− (e) エスクリンの加水分解 ：＋ (f) ゼラチンの加水分解 ：− (g) β−ガラクトシダーゼ ：＋ (h) チトクロームオキシダーゼ ：− (i) リジンデカルボキシラーゼ ：− (j) アルギニンデヒドロラーゼ ：− (k) オルニチンデカルボキシラーゼ：− (l) ゼラチンの液化 ：−(2) Physiological properties (a) Reduction of nitrate:-(b) Indole formation:-(c) Arginine dehydrogenase:-(d) Urease:-(e) Esculin hydrolysis: + (f ) Gelatin hydrolysis:-(g) β-galactosidase: + (h) Cytochrome oxidase:-(i) Lysine decarboxylase:-(j) Arginine dehydrolase:-(k) Ornithine decarboxylase:-(l) Gelatin Liquefaction of: −
【００２２】 (m) 糖類及び有機酸の資化性 グルコース ：＋ グルコン酸 ：＋ アラビノース ：＋ n-カプリル酸 ：− マンノース ：− アジピン酸 ：− マンニット ：− dl −リンゴ酸：＋ マントース ：＋ クエン酸 ：＋ N-アセチルグルコサミン：＋ 酢酸フェニール：−(M) Assimilation of sugars and organic acids Glucose: + Gluconic acid: + Arabinose: + n-Caprylic acid: -Mannose: -Adipic acid: -Mannitol: -dl-Malic acid: + Mantose: + Citric acid: + N-acetylglucosamine: + Phenyl acetate:-
【００２３】 (n) 糖類からの酸生成 グルコース ：＋ キシロース ：＋ フラクトース ：＋ マンニット ：− マルトース ：＋ ラクトース ：＋ ガラクトース ：＋ シュークロース：−(N) Acid production from sugars Glucose: + Xylose: + Fructose: + Mannitol: − Maltose: + Lactose: + Galactose: + Sucrose: −
【００２４】(3) その他の性質 β−グルクロニダーゼ ：＋(3) Other properties β-glucuronidase: +
【００２５】以上、(1),(2) の菌学的性質からバージー
ズマニュアルの分類方法に従ってシュドモナス(Pseudom
onas) 属に属し、パウシモビリス(paucimobilis)と一致
するが、このバクテリアは(3) に記載した如く、β−グ
ルクロニダーゼを生産することからタイプカルチャーと
は異なり（発酵研究所からシュウドモナス・パウシモビ
リスIFO No.13934,13935の二株を取り寄せ、同条件で培
養したが、β−グルクロニダーゼは生産されなかっ
た。）、新菌種と判断し、シュウドモナス・パウシモビ
リス(Pseudomonas paucimobilis)Ｈ−３と命名した。As described above, from the mycological properties of (1) and (2), Pseudomonas (Pseudom
onas) and is consistent with paucimobilis, but this bacterium differs from type culture in that it produces β-glucuronidase, as described in (3) (Pseudomonas paucimobilis IFO No. Two strains of 13934 and 13935 were ordered and cultured under the same conditions, but β-glucuronidase was not produced.) It was determined to be a new bacterial strain, and it was named Pseudomonas paucimobilis H-3.
【００２６】[0026]
【実施例】以下、実施例によりこの発明を更に詳しく説
明する。なお、実施例中における酵素活性の測定法、並
びに生成したオレアノール酸の定量は次に示す方法で行
い、また酵素の単位は次に示す定義に従った。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples. The method for measuring the enzyme activity and the quantification of the oleanolic acid produced in the examples were carried out by the method shown below, and the unit of the enzyme was in accordance with the definition shown below.
【００２７】＊ 酵素活性の測定法：4mM のフェノール
フタレンβ−Ｄ−グルクロニド200 μl にpH6.5 の0.1M
リン酸バッファ200 μl を加え、これに適当に希釈した
酵素液1,000 μl を加えて50℃で１時間反応する。反応
終了後、グリシン1%,NaCl 0.4%,Na2CO30.9% からなる反
応停止液3,000 μl を加えて反応を止める。分光光度計
により552nm の吸光値を測定し、フェノールフタレイン
を標準物質として用いた検量線から、遊離フェノールフ
タレン量を求めた。* Method for measuring enzyme activity: 0.1 mM of pH 6.5 in 200 μl of 4 mM phenolphthalene β-D-glucuronide
Add 200 μl of phosphate buffer, add 1,000 μl of appropriately diluted enzyme solution, and incubate at 50 ° C for 1 hour. After the reaction is complete, stop the reaction by adding 3,000 μl of a reaction stop solution consisting of 1% glycine, 0.4% NaCl, and 0.9% Na 2 CO 3 . The absorption value at 552 nm was measured with a spectrophotometer, and the amount of free phenolphthalene was determined from a calibration curve using phenolphthalein as a standard substance.
【００２８】＊ 酵素の単位：１時間に１マイクロモル
のフェノールフタレインβ−Ｄ−グルクロニドを分解す
る酵素量を１単位と定義した。* Enzyme unit: The amount of enzyme that decomposes 1 μmol of phenolphthalein β-D-glucuronide per hour was defined as 1 unit.
【００２９】＊ 生成したオレアノール酸の定量（ＧＬ
Ｃ法）：ビートサポニンを基質としたβ−グルクロニダ
ーゼ反応液の一定量を予め蒸発乾固し、それをメタノー
ル20% エーテル溶液にて溶解し、ジアゾ化した後、減圧
留去してｎ−ブタノールに溶解したものを試料とし、ス
チグマスチロールを内部標準としてガスクロマト法によ
って定量する。* Determination of oleanolic acid produced (GL
Method C): An aliquot of β-glucuronidase reaction solution using beet saponin as a substrate was previously evaporated to dryness, dissolved in methanol 20% ether solution, diazotized, and then evaporated under reduced pressure to give n-butanol. Quantitatively determined by gas chromatography using stigmastyrol as an internal standard.
【００３０】実施例１ Ｈ−３株のスクリーニング 北見市内の山林・畑地から採取してきた土壌をサンプル
として、生理食塩水を懸濁した液を粗ビートサポニン0.
1%含有し、pH6.5 に調整したYPG 寒天培地に塗布し、30
℃で48時間培養する。Example 1 Screening of H-3 Strain Using a soil sample collected from a forest or a field in Kitami city as a sample, a suspension of physiological saline was used to prepare crude beet saponin.
Apply it to YPG agar medium containing 1% and adjusted to pH 6.5.
Incubate at ℃ for 48 hours.
【００３１】生育した菌株について、同組成の培地によ
り作製した斜面培地に接種し、30℃48時間培養して保存
スラントを調製した。次に粗ビートサポニン0.1%を含有
したYPG 液体培地を100ml 容坂口フラスコに50 ml 宛分
注したものに、保存スラントから一白金耳の種菌を接種
し、30℃, ３日間、振盪培養を行った。各培養液を3,00
0r.p.mで10分間遠心分離し、菌体画分を除去して酵素液
とした。この中で、若干でもβ−グルクロニダーゼ活性
があると思われる12菌株を得た。The grown strain was inoculated into a slant medium prepared with a medium having the same composition and cultured at 30 ° C. for 48 hours to prepare a preserved slant. Next, YPG liquid medium containing 0.1% crude beet saponin was dispensed into a 100 ml Sakaguchi flask in an amount of 50 ml, inoculated with one platinum loop of inoculum from the stored slant, and shake cultured at 30 ° C for 3 days. It was 3,000 each culture
After centrifugation at 0 rpm for 10 minutes, the bacterial cell fraction was removed to obtain an enzyme solution. Among these, 12 strains that were considered to have some β-glucuronidase activity were obtained.
【００３２】実施例２ 実施例１で得られた12株について、更に実施例１と同様
に液体培地にて振盪培養し、再現性を調べた。結果を下
記表１に示す。Example 2 The 12 strains obtained in Example 1 were further shake-cultured in a liquid medium in the same manner as in Example 1 to examine the reproducibility. The results are shown in Table 1 below.
【００３３】この中で、活性が高く再現性を示したのが
No.31 菌株であり、この発明のＨ−３株である。Ｈ−３
株の生産するβ−グルクロニダーゼについて前記した酵
素活性測定方法により測定した結果、培養液1ml 当り0.
3 単位であった。Among these, the one showing high activity and reproducibility is
It is No. 31 strain and is the H-3 strain of the present invention. H-3
As a result of measuring the β-glucuronidase produced by the strain by the enzyme activity measuring method described above, it was found to be 0.
It was 3 units.
【００３４】[0034]
【表１】 [Table 1]
【００３５】実施例３ 実施例２で得られたＨ−３株及びタイプカルチャーのシ
ュウドモナス・パウシモビリス２株（発酵研究所より入
手したIFO NO.13934,13935) について、実施例１と同様
に液体培地を使用して同条件で培養後、培養液を遠心分
離し菌体を除去して酵素液とした。Example 3 Regarding the H-3 strain and the type culture Pseudomonas paucimobilis 2 strains obtained in Example 2 (IFO NO.13934,13935 obtained from the Fermentation Research Institute), liquid medium was used in the same manner as in Example 1. After culturing under the same conditions using, the culture solution was centrifuged to remove bacterial cells to obtain an enzyme solution.
【００３６】比較試験 粗ビートサポニン( 純度30%)1gをpH7.0,リン酸バッファ
ーに溶解し、上記調製した各酵素液3ml を添加して40℃
で18時間反応させ、生成したオレアノール酸をＧＬＣ法
で分析したところ、図１に示すようなＧＬＣチャートが
得られ、更にＨ−３株については下記表２に示す通り0.
2gのオレアノール酸と0.07g のグルクロン酸を生成し
た。しかしながらタイプカルチャー２株については、β
−グルクロニダーゼが生産されないためオレアノール酸
は確認されなかった。Comparative Test 1 g of crude beet saponin (purity 30%) was dissolved in phosphate buffer (pH 7.0), 3 ml of each enzyme solution prepared above was added, and the mixture was added at 40 ° C.
When the resulting oleanolic acid was analyzed by GLC method, a GLC chart as shown in FIG. 1 was obtained. Further, for H-3 strain, as shown in Table 2 below,
2 g of oleanolic acid and 0.07 g of glucuronic acid were produced. However, for the two type culture strains, β
-No oleanolic acid was identified as no glucuronidase was produced.
【００３７】[0037]
【表２】 [Table 2]
【００３８】実施例４ 粗ビートサポニン( 純度30%)10g をpH7.0,0.1Mのリン酸
バッファーに溶解し、予め調製した実施例３の10倍濃縮
したＨ−３株の酵素液6ml を添加し、40℃で18時間反応
した。反応後、反応液の分析を行ったところ、0.2g/g(ヒ
゛ートサホ゜ニン) のオレアノール酸と0.07g/g(ヒ゛ートサホ゜ニン)のグ
ルクロン酸が生成していることを確認した。本反応液を
全量ロータリーエバポレーターにて濃縮し、蒸発乾固し
てから１リットルのエタノールに溶解し、活性炭10g を添加
して脱色、濾液を濃縮して100mlとしてビーカーに採
り、冷却晶析した。晶析後、濾過して乾燥したところ2.
0gの白色のオレアノール酸を得ることができた。Example 4 10 g of crude beet saponin (purity 30%) was dissolved in a phosphate buffer having a pH of 7.0 and 0.1 M, and 6 ml of a 10-fold concentrated H-3 strain enzyme solution prepared in Example 3 was prepared in advance. It was added and reacted at 40 ° C. for 18 hours. After the reaction, the reaction solution was analyzed, and it was confirmed that 0.2 g / g (bet saponin) of oleanolic acid and 0.07 g / g (bet saponin) of glucuronic acid were produced. The whole amount of this reaction liquid was concentrated by a rotary evaporator, evaporated to dryness, dissolved in 1 liter of ethanol, decolorized by adding 10 g of activated carbon, and the filtrate was concentrated to 100 ml in a beaker for cooling and crystallization. After crystallization, filtration and drying 2.
It was possible to obtain 0 g of white oleanolic acid.
【００３９】[0039]
【発明の効果】この発明に係る新規微生物は、pH, 温度
の安定性が高く、且つビートサポニンを効率よく分解す
るβ−グルクロニダーゼを生産することができ、したが
ってここで得られたβ−グルクロニダーゼをビートサポ
ニンからオレアノール酸を製造する工程に導入すること
により、オレアノール酸の製造が設備的にも方法的にも
かなり簡略化され、且つコスト的にも非常に安価なオレ
アノール酸を得ることができる。INDUSTRIAL APPLICABILITY The novel microorganism according to the present invention is highly stable in pH and temperature, and can produce β-glucuronidase that decomposes beet saponin efficiently. Therefore, the β-glucuronidase obtained here is By introducing into the step of producing oleanolic acid from beet saponin, the production of oleanolic acid can be considerably simplified both in terms of equipment and method, and oleanolic acid can be obtained at a very low cost.
【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]
【図１】 Ｈ−３株酵素液を粗ビートサポニンに作用さ
せて得られた反応液のＧＬＣチャートFIG. 1 is a GLC chart of a reaction solution obtained by reacting an enzyme solution of H-3 strain with crude beet saponin.
Claims (2)
し、ビートサポニンを含有する培地で培養することによ
り得られたβ−グルクロニダーゼの生産性を有する新規
微生物。1. A novel microorganism belonging to the genus Pseudomonas and having β-glucuronidase productivity obtained by culturing in a medium containing beet saponin.
udomonas paucimobilis)Ｈ−３（微工研菌寄第FERM P-1
4074号）である特許請求の範囲第１項記載の新規微生
物。2. Pseudomonas paucimobilis ((Pse
udomonas paucimobilis) H-3 (Microtechnology Research Institute, FERM P-1
4074), the novel microorganism according to claim 1.
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP6093862A JP2613847B2 (en) | 1994-04-08 | 1994-04-08 | Novel microorganism having β-glucuronidase productivity |
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|
| JP6093862A JP2613847B2 (en) | 1994-04-08 | 1994-04-08 | Novel microorganism having β-glucuronidase productivity |
Publications (2)
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| JPH07274948A true JPH07274948A (en) | 1995-10-24 |
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6391547B1 (en) | 1997-09-09 | 2002-05-21 | Center For The Application Of Molecular Biology To International Agriculture | Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof |
| US6641996B1 (en) | 1997-09-09 | 2003-11-04 | Cambia | Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof |
-
1994
- 1994-04-08 JP JP6093862A patent/JP2613847B2/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| EUROPEAN JOURNAL OF CANCER=1979 * |
| J.PHARMACOBIO-DYNAMICS=1990 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6391547B1 (en) | 1997-09-09 | 2002-05-21 | Center For The Application Of Molecular Biology To International Agriculture | Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof |
| US6641996B1 (en) | 1997-09-09 | 2003-11-04 | Cambia | Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof |
| US7176006B2 (en) | 1997-09-09 | 2007-02-13 | Cambia | Microbial β-glucuronidase genes, gene products and uses thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2613847B2 (en) | 1997-05-28 |
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