JPH072675A - ビタミンｄ化合物による免疫不全の治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 哺乳動物に該哺乳動物の免疫、特に細胞性免
疫を向上させるのに十分な量のビタミンＤ化合物を投与
することを含んでなる哺乳動物の免疫不全を治療する、
または損傷した細胞性免疫を向上させる方法。 【効果】 十分な量のビタミンＤ化合物を十分な期間投
与することで、哺乳動物の免疫不全又はき損した細胞性
免疫を有効に治療ないし回復させることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、哺乳動物の細胞免疫機
能に関し、さらに詳細には、ビタミンＤ化合物たとえば
ビタミンＤ₃ その活性形態の１α，２５−ジヒドロキシ
ビタミンＤ₃またはビタミンＤ様の活性を示す他の化合
物の哺乳動物への投与を哺乳動物の免疫を向上させるま
たは回復させるのに十分な期間おこない哺乳動物のき損
された細胞性免疫を向上させる方法に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】ビタミ
ンＤは、歴史的に、ミネラル代謝の調節と関連づけられ
てきたが、その機能は、このシステムだけに限らないこ
とが現在はっきりしているようである（マノラガス、ハ
スツミエル及びユー（Ｍａｎｏｌａｇａｓ，Ｈｕｓｔｍ
ｙｅｒａｎｄ Ｙｕ）（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．
Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１９１，２３８−２４
５）。ビタミンＤの活性形態すなわち１，２５−ジヒド
ロキシビタミンＤ₃ （１，２５−（ＯＨ）₂ Ｄ₃ ）に対
するレセプターが、ラットおよびヒト由来の末梢血液リ
ンパ球および胸腺リンパ球（マロガガス、プロベディニ
及びツオカス（Ｍａｌｏｇａｇａｓ，Ｐｒｏｖｖｅｄｉ
ｎｉ ａｎｄ Ｔｓｕｏｋａｓ）（１９８５）Ｍｏｌ．
Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．４３，１１３−１２
２）に見いだされている。試験管中で１，２５−（Ｏ
Ｈ）₂ Ｄ₃ は、一方のたんぱく質を減少させるのに対
し、活性化されたヒトリンパ球中でもう１つのたんぱく
質を増加させる（ユー、ハスツミエル、ガーベイ及びマ
ノラガス（Ｙｕ，Ｈｕｓｔｍｙｅｒ，Ｇａｒｖｅｙ ａ
ｎｄ Ｍａｎｏｌａｇａｓ，Ｃ．）（１９９１）Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８，８３４７−８
３５１）。さらに、試験管中の１，２５−（ＯＨ）₂ Ｄ
₃ は、末梢血液単核細胞に抗増殖作用を発揮し（マノラ
ガス、プロベディニ、ミュレイ、ツオカス及びデフトス
（Ｍａｎｏｌａｇａｓ，Ｐｒｏｖｖｅｄｉｎｉ，Ｍｕｒ
ｒａｙ，Ｔｓｏｕｋａｓａｎｄ Ｄｅｆｔｏｓ）（１９
８６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａ
ｂ．６３，３９４−４００）、植物血球凝集素により活
性化されたヒト末梢単核細胞によるインターロイキン−
２（ＩＬ−２）の産生を減少させ、単球中のＩＬ−１活
性を減ずる（マノラガス（１９８８）、”ビタミンＤ：
分子、細胞及び臨床内分泌学”、ノーマン、シャエファ
ー、グリゴライト及びヘラス編、第２８２−２９０頁、
ウオルター・デ・グルイター、ベルリン、ニューヨーク
（Ｍａｎｏｌａｇａｓ，”Ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ：Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉ
ｃａｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ”，Ｎｏｒｍａ
ｎ，Ｓｃｈａｅｆｅｒ，Ｇｒｉｇｏｌｅｉｔ ａｎｄ
Ｈｅｒｒａｔｈ，Ｅｄｓ．，Ｗａｌｔｅｒ ｄｅ Ｇｒ
ｕｙｔｅｒ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ））。Ｂ
−リンパ球中の１，２５−（ＯＨ）₂ Ｄ₃ による免疫グ
ロブリン合成の抑制も報告されている（プロベディニ、
ツオカス、デフトス及びマノラガス（Ｐｒｏｖｖｅｄｉ
ｎｉ，Ｔｓｏｕｋａｓ，Ｄｅｆｔｏｓ ａｎｄ Ｍａｎ
ｏｌａｇａｓ）（１９８６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３
６，２７３４−２７４０）。本発明の目的は、ビタミン
Ｄ化合物の投与によって、哺乳動物の免疫不全又は損失
した細胞性免疫を治療ないし回復させる方法を提供する
ことにある。

【０００３】

【課題を解決するための手段】ビタミンＤ化合物に対す
るさまざまな生物学的機能が発見されているが、上記し
たように、哺乳動物の免疫システムへのビタミンＤおよ
びビタミンＤ様の活性を有する他の化合物の役割ははっ
きりしない。生体内での免疫システムへのビタミンＤお
よびビタミンＤ様の活性を有する他の化合物の影響を評
価することを始めるため、本開示は、マウスでのビタミ
ンＤ不足モデルを提供し、次に、細胞性免疫へのこの不
足の影響を調べる。ビタミンＤ化合物の再投与の効果を
次ぎに調べ、何らかの免疫不全が改善され得たかまたは
回復し得たかどうかを決定した。血液中の２５−ヒドロ
キシビタミンＤ₃ の不在と極度の低カルシウム血症とに
より証明されるように、著しいビタミンＤ不足がマウス
に生じた。これらおよびビタミンＤ十分なマウスをジニ
トロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）により増感(sensiti
zed)させた。ＤＮＦＢへの感度を、ＤＮＦＢによる１つ
の耳の処理により測定した。処理した耳の厚みと未処理
の耳の厚みとの比を、細胞性免疫反応の指標として用い
た。耳のＤＮＡへの ³Ｈ−チミジンの取り込みも、コン
カナバリンＡに対する胸腺リンパ球の応答のように、細
胞性免疫の指標として用いた。ビタミンＤ不足は、耳厚
み比と ³Ｈ−チミジン取り込み比とを顕著に減少させ
た。同様に、コンカナバリンＡ処理した胸腺リンパ球の
ＤＮＡへの ³Ｈ−チミジンの取り込みは、ビタミンＤ不
足で著しく減少した。これらの結果は、生体内のビタミ
ンＤ不足は、細胞性免疫を損なうことを示している。８
週間に及ぶビタミンＤ十分な食餌の提供は、免疫システ
ムのき損した応答機能を直すが、３週間に及ぶビタミン
Ｄ投与は、そのようにならなかった。本開示に従えば、
生体内のビタミンＤの不足は、哺乳動物の免疫不全をも
たらす細胞性免疫をき損することが分かった。さらに、
哺乳動物のこの免疫不全は、ビタミンＤたとえばビタミ
ンＤ₃ および１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃の
投与によりおよびビタミンＤ様の活性を有する他の化合
物により劇的に改善されて、哺乳動物の免疫不全の完全
な修復でないまでも回復をもたらし得る。

【０００４】本発明は、哺乳動物の免疫を向上させるの
に十分な量のビタミンＤ化合物を哺乳動物に投与するこ
とを含んでなる哺乳動物の免疫不全を治療する方法を含
む。好ましくは、ビタミンＤ化合物は、投与ビタミンＤ
化合物に依存して１日当たり約０．１μｇから約２ｍｇ
の量で投与される。また、ビタミンＤ化合物は、好まし
くは、約３週間から約８か月にわたり哺乳動物に毎日投
与される。ここで用いられる用語「ビタミンＤ化合物」
は、哺乳動物のさまざまなビタミンＤ応答プロセス、す
なわち腸内カルシウム吸収、骨の流動、骨のミネラル化
および細胞分化の１つまたはそれ以上を制御する化合物
を包含する。したがって、本発明により包含されるビタ
ミンＤ化合物は、コレカルシフェロールおよびエルゴカ
ルシフェロールおよびそれらの代謝生成物さらにはカル
セミック（ｃａｌｃｅｍｉｃ）または細胞分化活性を発
現する合成のコレカルシフェロールおよびエルゴカルシ
フェロールの類似体を含む。本発明により包含されるビ
タミンＤ化合物を限定することなく、これらの合成のコ
レカルシフェロールおよびエルゴカルシフェロール類似
体は、５，６−トランス−コレカルシフェロール類およ
び５，６−トランス−エルゴカルシフェロール類、フッ
素化コレカルシフェロール類、側鎖同族化コレカスシフ
ェロール類および側鎖同族化Δ²²−コレカルシフェロー
ル類、側鎖が切断されたコレカルシフェロール類、１９
−ノルコレカルシフェロール類および１９ーノルエルゴ
カルシフェロール類および１０，１９−ジヒドロビタミ
ンＤ化合物のような化合物の種類を含む。構造的には、
包含されるビタミンＤ化合物は、次式により表すことが
できる：

【０００５】

【化７】

【０００６】ここで、Ｒ⁶ およびＲ⁷ は、それぞれ、水
素を示すか、またはＲ⁶ およびＲ⁷ が一緒になって、メ
チレン基を示し、Ｒ⁸ は、水素、ヒドロキシまたは保護
されたヒドロキシを示し、そして上記構造の側鎖基Ｒ
は、いずれのステロイド側鎖の種類を示してもよい。よ
り具体的には、Ｒは、直鎖、分岐または環状であっても
よく、１つまたはそれ以上の追加の置換基、たとえばヒ
ドロキシ基、保護されたヒドロキシ基、フルオロ基、カ
ルボニル基、エステル基、エポキシ基、アミノ基または
他の複素原子基を含んでいてもよい１−３５個の炭素の
飽和または不飽和炭化水素基を示し得る。この種の好ま
しい側鎖は、次ぎの構造により示される：

【０００７】

【化８】

【０００８】ここで立体化学中心（ステロイド番号付け
でＣ−２０に相当）は、Ｒ配置またはＳ配置（すなわ
ち、天然配置約炭素２０または２０−エピ配置）を有し
ていてもよく、Ｚは、Ｙ、−ＯＹ、−ＣＨ₂ ＯＹ、−Ｃ
≡ＣＹおよび−ＣＨ＝ＣＨＹからなる群から選択され、
この際、二重結合はシス配置またはトランス配置を有し
ていてもよく、Ｙは水素、メチル、−ＣＲ⁵ Ｏおよび次
の構造

【０００９】

【化９】

【００１０】（ここで、ｍおよびｎは、互いに独立し
て、０から５の整数を示し、Ｒ¹ は、水素、ヒドロキ
シ、保護されたヒドロキシ、フルオロ、トリフルオロメ
チルおよび直鎖であっても分岐していてもよく、任意に
はヒドロキシ置換基または保護されたヒドロキシ置換基
を有していてもよいＣ_1-5 アルキルからなる群から選択
され、そしてＲ² 、Ｒ³ およびＲ⁴ のそれぞれは、互い
に独立して、水素、フルオロ、トリフルオロメチルおよ
び直鎖であっても分岐していてもよく、任意にはヒドロ
キシ置換基または保護されたヒドロキシ置換基を有して
いてもよいＣ_1-5 アルキルからなる群から選択され、Ｒ
¹ とＲ² とは一緒になった場合オキソ基、アルキリデン
基、＝ＣＲ² Ｒ³ または基−（ＣＨ₂ ）_p −を示し、こ
の際、ｐは２から５の整数であり、Ｒ³ とＲ⁴ とは一緒
になた場合オキソ基または基−（ＣＨ₂）_q −を示し、
この際ｑは２から５の整数であり、Ｒ⁵ は水素、ヒドロ
キシ、保護されたヒドロキシまたはＣ_1-5 アルキルを示
す）の基からなる群から選択される。「保護されたヒド
ロキシ」基は、ヒドロキシ基の一時的または永久的な保
護に通常用いられる基により、たとえば、シリル基、ア
ルコキシアルキル基、またはアルキル基により、保護さ
れたヒドロキシ基である。好ましいヒドロキシ保護基
は、塩基安定性であるが所望の時に容易に除去できるヒ
ドロキシ保護基である。適当な基は、たとえば、アルキ
ルシリル基またはアルキルアリールシリル基（ここで
は、単に「シリル」基と述べる、たとえばトリメチルシ
リル、トリエチルシリル、ジブチルメチルシリル、ジフ
ェニルメチルシリル、フェニルジメチルシリル、ジフェ
ニル−ｔ−ブチルシリルなど）またはアルコキシアルキ
ル基（たとえばメトキシメチル基、エトキシメチル基、
メトキシエトキシメチル基など、あるいはテトラヒドロ
ピラニル基、テトラヒドロフラニル基）および１−６炭
素のアルキル基（たとえばメチル、エチル、プロピル、
イソプロピルなど）である。

【００１１】そのような化合物のいくつかの具体例に
は、次ぎのものがある：ビタミンＤ代謝産物または類似
体たとえばビタミンＤ₃ 、ビタミンＤ₂ 、１α−ヒドロ
キシビタミンＤ₃ 、１α−ヒドロキシビタミンＤ₂ 、１
α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃ 、１α，２５−ジ
ヒドロキシビタミンＤ₂ 、２５−ヒドロキシビタミンＤ
₃ 、２５−ヒドロキシビタミンＤ₂ 、２４，２４−ジフ
ルオロ−２５−ヒドロキシビタミンＤ₃ 、２４，２４−
ジフルオロ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃ 、
２４−フルオロ−２５−ヒドロキシビタミンＤ₃ 、２４
−フルオロ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃ 、
２β−フルオロ−２５−ヒドロキシビタミンＤ₃ 、２β
−フルオロ−１α−ヒドロキシビタミンＤ₃ 、２β−フ
ルオロ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃ 、２
６，２６，２６，２７，２７，２７−ヘキサフルオロ−
２５−ヒドロキシビタミンＤ₃ 、２６，２６，２６，２
７，２７，２７−ヘキサフルオロ−１α，２５−ジヒド
ロキシビタミンＤ₃ 、２４，２５−ジヒドロキシビタミ
ンＤ₃ 、１α，２４，２５−トリヒドロキシビタミンＤ
₃ 、２５，２６−ジヒドロキシビタミンＤ₃ 、１α，２
５，２６−トリヒドロキシビタミンＤ₃ 、２３，２５−
ジヒドロキシビタミンＤ₃ 、２３，２５，２６−トリヒ
ドロキシビタミンＤ₃ および対応する１α−ヒドロキシ
ル化物、２５−ヒドロキシビタミンＤ₃ −２６，２３−
ラクトンおよびその１α−ヒドロキシル化誘導体、２５
−ヒドロキシビタミンＤ₃ および１α，２５−ジヒドロ
キシビタミンＤ₃ の側鎖ノル、ジノル、トリノルおよび
テトラノル類似体、１α−ヒドロキシプレグナカルシフ
ェロールおよびそのホモおよびジホモ誘導体、１α，２
５−ヒドロキシ−２４−エピ−ビタミンＤ₂ 、２４−ホ
モ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃ ２４−ジホモ
−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃ 、２４−トリホ
モ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃ および１α，
２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃ の対応する２６−また
は２６，２７−ホモ、ジホモまたはトリホモ類似体、さ
らに上記に上げたものの対応する１９−ノル化合物。

【００１２】

【実施例】本発明を、さらに以下の例の手段により説明
する。例の中で、次ぎの省略を用いる：１，２５−（Ｏ
Ｈ₂ ）Ｄ₃ 、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃ ；２
５−ＯＨ−Ｄ、２５−ヒドロキシビタミンＤ₃ ；ＩＬ−
２、インターロイキン−２；ＤＴＨ、遅延型過敏性；Ｄ
ＮＦＢ、ジニトロフルオロベンゼン；Ａ／Ｏ、アセトン
／オリーブ油；ＨＢＳＳ、ハンクス平衡塩溶液（Ｈａｎ
ｋｓ’ｂａｌａｎｃｅｄ ｓａｌｔ ｓｏｌｕｔｉｏ
ｎ）；ｃｏｎ Ａ、コンカナバリンＡ；ＰＨＡ、フィト
ヘマグルチニン；ＳＩ、刺激指標；Ｂ１、チアミン；Ｂ
２、リボフラビン；Ｂ６、ピリドキシン；Ｂ１２、シア
ノコバラミン；ＩＵｄＲ、５−ヨードデオキシウリジ
ン。

【００１３】物質と方法ビタミンＤ不足マウス 。 第１の実験では、妊娠１４日
のＢＡＬＢ／ＣＡＮＮＨＳＤ雌マウス（ウイルスなし、
Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄ
ｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を３つのグループに分け
た。第１のグループと第２のグループ（−Ｄグループお
よび＋Ｄグループ）とに、精製ビタミンＤ不足食餌（−
Ｄ食餌、表１）とビタミンＤ十分食餌（＋Ｄ食餌）とを
それぞれ与えた。＋Ｄ食餌は、ビタミンＤ₂ （エルゴカ
ルシフェロール）５０７０ ＩＵ／ｋｇ（１２６．７５
μｇ／ｋｇ）（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｃｏｕｎｃｉｌ（１９７８）Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ
Ａｎｉｍａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ， Ａｇｒｉｃｕ
ｌｔｕｒｅ Ｂｏａｒｄ， ”Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｒｅ
ｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ａｎｉｍａｌｓ”，３ｒｄ Ｒｅｖ．Ｅｄ．，Ｎｏ．１
０．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔ
ｏｎ，Ｄ．Ｃ．）を加えたことを別として、−Ｄ食餌と
同じである。精製食餌（表１）は、０．４７％のカルシ
ウムおよび０．３％の燐を含んでいて、次ぎのようにし
てゲルの形態とした：１リットルの脱イオン水に含むよ
うにした２５ｇの寒天（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ，Ｄｉｆｃｏ，ＭＩ）を３０分間高圧加熱滅菌
し、１Ｋｇの精製食餌と５ｍｌの脂肪可溶性ビタミン
（−Ｄ食餌に対してＡ、ＥおよびＫおよび＋Ｄ食餌に対
してＡ、Ｄ、ＥおよびＫ）の混合物（表２）を寒天溶液
に加え、混合し、ガラスのパンにあけ、室温で固化さ
せ、次ぎに、給餌まで−２０℃に保存した。妊娠マウス
の第３のグループ（正常なグループ）には、２３．５％
のたんぱく質、６．５％の脂肪、３，８％の繊維および
１５，０００ ＩＵ／ｋｇのビタミンＡ、３，８００
ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ、５５，０００ ＩＵ／ｋｇの
ビタミンＥ（α−トコフェロール）、１％のカルシウム
および０．６５％の燐を含むＦｏｒｍｕｌａｂ＃５００
８ペレット食餌（Ｐｕｒｉｎａ Ｍｉｌｌｓ，Ｓｔ．Ｌ
ｏｕｉｓ，ＭＯ）を与えた。マウスの子は、３週齢で離
乳させ、その親と同じ食餌を与えた。第１のグループの
親により生まれたマウスは、１０週齢で２つのグループ
に分けた：１つのグループ（−Ｄグループ）は、精製−
Ｄ食餌を継続させ、もう一方のグループ（−Ｄ＋Ｄグル
ープ）は、残りの３週間、精製＋Ｄ食餌を与えた。

【００１４】

【表１】

【００１５】

【表２】

【００１６】第２の実験では、ＢＡＬＢ／ＣＡＮＮＨＳ
Ｄ雌マウスを２つのグループに分けた：−Ｄ食餌と＋Ｄ
食餌をそれぞれ与えた−Ｄグループおよび＋Ｄグルー
プ。同時に、これらのマウスを雄マウスと交尾させた。
マウスの子は、３週齢で離乳させ、その親と同じ食餌を
１３週間与えた。次ぎに、すべてのマウスにＦｏｒｍｕ
ｌａｂ＃５００８ペレット食餌を８週間与えた。２つの
グループのマウスは、それぞれ、−Ｄ＋Ｐグループおよ
び＋Ｄ＋Ｐグループと名づけた。すべてのマウスは、木
片を敷きつめたプラスチックのかごに収容し、黄色光の
下に１２時間そして暗所に１２時間置くようにした。実
験を通じ、食餌と水道水が任意に得られるようにした。

【００１７】血清カルシウムおよび２５−ヒドロキシビ
タミンＤについての検定：血清全カルシウムレベルは、
原子吸光分光分析（モデル４０３、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌ
ｍｅｒ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ）により５％のＬａＣｌ
₃ ２．９５ｍｌと血清５０μｌを一緒にすることにより
またはモデル４００８ Ｃａｌｃｅｔｔｅ（Ｐｒｅｃｉ
ｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ）中の
血清２５μｌにより測定した。血清２５−ヒドロキシビ
タミンＤ［２５−ＯＨ−Ｄ］は、０．２ｍｌのサンプル
を用いて測定した（ベルセイ、デルーカ及びポッツ（Ｂ
ｅｌｓｅｙ，ＤｅＬｕｃａ ａｎｄ Ｐｏｔｔｓ）（１
９７４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｒｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅ
ｔａｂ．３８，１０４６−１０５１）。検定に用いた結
合たんぱく質は、６週間を越えてビタミンＤ不足食餌を
与えたＨｏｌｔｚｍａｎラットからえた。１０μｌの血
清のアリコートを−８０℃で保存凍結させ、燐酸塩緩衝
液（５０ｍＭ、ｐＨ７．２）を用いて１／８，５００に
希釈して検定に用いた。マウス血清のサンプルを１０μ
ｌの ³Ｈ−２５−ＯＨ−Ｄ₃ （比活性：１６０ Ｃｉ／
ｍＭ、１ Ｃｉ＝３７ ＧＢｑ；Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎ
ｄ Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）に加え、回
収率をモニターした。サンプルは、渦運動させ（ｖｏｒ
ｔｅｘｅｄ）てから、室温で１５分間温置させ、メタノ
ール０．６ｍｌで抽出し、次ぎに、１５分間１，５００
ｒｐｍで遠心分離させた。上澄み液を、０．４ｍｌのＨ
₂ Ｏと混合してから、ガラスウールピペットフィルター
を通じてＣ１８ Ｓｅｐ−Ｐａｋ カラム（Ｗａｔｅｒ
ｓ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ．Ｍｉｌｆｏｒｄ，
ＭＡ）（ホリス及びフランク（Ｈｏｌｌｉｓ ａｎｄ
Ｆｒａｎｋ）（１９８５）Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ ３４
３，４３−４９）に移した。カラムは、次ぎに、それぞ
れＨ₂ Ｏ中の５５％メタノール４ｍｌ、７０％メタノー
ル１０ｍｌおよび８０％メタノール２０ｍｌにより順次
ゆすいだ。最後の部分を、窒素の下に蒸発させてから、
無水エタノール１００μｌに再溶解させた。２０μｌ
は、競争結合検定用のトリプリケート（ｔｒｉｐｌｉｃ
ａｔｅ）に用いた；３０μｌのアリコートを、回収率を
算出するために液体シンチレーションカウンター（Ｔｒ
ｉ−Ｃａｒｂ ４６０ＣＤ Ｌｉｑｕｉｄ ｓｃｉｎｔ
ｉｌｌａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｐａｃｋａｒｄ Ｉ
ｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．）で算出した。
この検定の検出限界は、３．０ｎｇ／ｍｌ血清である。

【００１８】遅延型過敏性（ＤＴＨ）応答。１３週齢の
マウスを、第１の実験での４つのグループ（−Ｄ、−Ｄ
＋Ｄ、正常および＋Ｄのグループ）のそれぞれのためと
第２の実験での１８週齢の２つのグループ（−Ｄ＋Ｐお
よび＋Ｄ＋Ｐ）のための２つのサブグループに分けた。
１つのサブグループは、ＤＮＦＢで増感し（ＤＮＦＢサ
ブグループ）、１つのサブグループ（Ａ／Ｏサブグルー
プ）は、対照とした。アセトン／オリーブ油＝１／１
（ｗ／ｗ）の賦形剤中に含むようにしたジニトロフルオ
ロベンゼン（ＤＮＦＢ）１０ｍｇ／ｍｌ溶液を、皮膚接
触抗原とした。０日目に５０μｌ、７日目に２０μｌの
ＤＮＦＢ溶液を、ＤＮＦＢ増感済のサブグループのマウ
スに対しそった腹部皮膚に適用した。対照マウス（Ａ／
Ｏサブグループ）も同時に賦形剤を適用した（スミス、
レビー及びヘイス（Ｓｍｉｔｈ，Ｌｅｖｙ ａｎｄ Ｈ
ａｙｅｓ）（１９８７）Ｊ．Ｎｕｔｒ．１１７，８５７
−８６５）。最初の増感の後７．５日に、すべてのマウ
スに、５μＣｉの ³Ｈ−チミジン（比活性２０ Ｃｉ／
ｍｍｏｌ、ＮＥＮ，ＤｕＰｏｎｔ Ｃｏ．，Ｗｉｌｍｉ
ｇｔｏｎ，ＤＥ）（エイパート及びミラー（Ｅｉｐｅｒ
ｔ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ）（１９７５）Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．Ｃｏｍｍｕｎ．４，３６１−３７２）を含むサリン
（ｓａｌｉｎｅ）０．２ｍｌを腹腔内（ｉ．ｐ．）注入
した。９日目に、すべてのマウスは、左耳の背側に１０
μｌのＤＮＦＢ抗原溶液で挑戦され（challenged）、同
じ量の賦形剤溶液で右耳を刺激した。１日後、エーテル
でマウスを屠殺した。胸腺および脾臓を切除し、脾臓の
重さを測った。胸腺は、直ちに、氷冷のハンクス平衡塩
溶液（ＨＢＳＳ）（ハドソン及びヘイ、１９７６年、”
プラクティカル・イムノロジー”、第２６９−２７６
頁、バルクウエル・サイエンティフィック・パブリケイ
ションズ、オックスフォード、ロンドン（Ｈｕｄｓｏｎ
ａｎｄ Ｈａｙ、”Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ”，Ｂａｌｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｌｏ
ｎｄｏｎ））に入れ、用いるまで入れておいた。耳の厚
さは、直ちに、Ｙｕａｎｏ １−Ｊマイクロメータ（Ｎ
ＳＫ Ｊａｐａｎ Ｍｉｃｒｏｍｅｔｅｒ）により測定
し、左耳の右耳に対する厚さの比として表した。対照の
耳は、ＤＮＦＢ増感サブグループでアセトン／オリーブ
油賦形剤溶液を受けたことが強調される。対照マウス
（増感されてないサブグループ）もまた、ＤＮＦＢ挑戦
された耳を有した。ＤＮＦＢ増感位置は、腹部である
が、ＤＮＦＢ挑戦位置は、耳である。

【００１９】耳と脾臓は、４５℃で５時間大きなガラス
の標準シンチレーションバイアル中で１ｍｌの可溶化剤
（Ｓｏｌｕｅｎｅ ３５０， Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓ
ｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．Ｄｏｗｎｅｒｓ Ｇ
ｒｏｖｅ，ＩＬ；またはＴＳ−１組織可溶化剤、Ｉｎｔ
ｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅｒａｃｈ Ｐｒｏｄｕ
ｃｔｓ Ｉｎｃ．，Ｅｌｋ Ｇｒｏｖｅ Ｖｉｌｌａｇ
ｅ，ＩＬ）に溶解させた。可溶化剤が、水酸化第四アン
モンニウムであるので、可溶化されたサンプルは、５０
μｌの濃塩酸（ＨＣｌ）により酸性として強い化学ルミ
ネッセンスを排除した。組織サンプルの放射能は、１０
ｍｌのＢｉｏｓａｆｅ ＩＩシンチレーション流体（Ｉ
ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏ
ｄｕｃｔｓＩｎｃ．，Ｍｔ．Ｐｒｏｓｐｅｃｔ．ＩＬ）
により液体シンチレーションカウンター（Ｔｒｉ−Ｃａ
ｒｂ ４６０ＣＤ Ｌｉｑｕｉｄ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａ
ｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒ
ｕｍｅｎｔｓ，Ｄｏｗｎｅｒｓ Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）中
で計数した。サンプルの１分当たりの崩壊（ｄｉｓｉｎ
ｔｅｇｒａｔｉｏｎ）（ＤＰＭ）は、内部標準として ³
Ｈ−トルエン（ＩＣＮ ＃７７２４５，ＳＡ： ２，３
６０，０００ＤＰＭ／ｍｌ）およびクエンチャー（ｑｕ
ｅｎｃｈｅｒ）として可溶化した耳または脾臓組織を用
いて得た標準クエンチングシリーズサンプルを使って自
動訂正プログラムにより得た。左耳の右耳に対する放射
能の比を算出した。

【００２０】リンパ球増殖。 ＨＢＳＳでゆすいだ後、
胸腺組織をＨＢＳＳ中でステンレス鋼メッシュで圧搾し
た。細胞懸濁物は、１５分間遠心分離（４００ｘｇ）さ
せた。リンパ球は、２ｍＭのＬ−グルタミン、抗生物質
（１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、１００Ｕ／
ｍｌのペニシリン）および５％の加熱不活性化させた胎
児ウシ血清（ＦＢＳ）を補足したＲＰＭＩ−１６４０培
地（Ｇｉｂｃｏ，Ｇｒａｎｔ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）に
懸濁させた。細胞を計数し、細胞生存率をトリパンブル
ー排除（９５％より大）により評価した。リンパ球の懸
濁物を直接利用した。

【００２１】培養は、５ｘ１０⁵ 細胞／ウエル（ｗｅｌ
ｌ）の接種（seeding ）で、９６個の十分に平らな底の
マイクロタイタープレート（＃２５８６０，Ｃｏｒｎｉ
ｎｇＧｌａｓｓ Ｗｏｒｋｓ，Ｃｏｒｎｉｎ，ＮＹ）中
で３回行った。マイトジェンコンカナバリンＡ（ｃｏｎ
Ａ、０．５μｇ／ウエル、Ｓｉｇｍａ）を加えた。用
いたマイトジェン投与量は、あらかじめ最適であると確
定された。細胞は、５％のＣＯ₂ と９５％の空気を含む
加湿した雰囲気中で３７℃で４８時間温置した。収集す
る１８時間前に、０．５μＣｉ／ウエルの ³Ｈ−チミジ
ンを加えた。細胞は、ガラスマイクロファイバーフィル
ターストリップ（ｍｏｄｅｌ ２４０−１，Ｃａｍｂｒ
ｉｄｇｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｗａｔｅ
ｒｔｏｗｎ，ＭＡ）に収集し、連続的に収集機（Ｈａｒ
ｖｅｓｔｅｒ）（ＭｏｄｅｌＰＨＤ ２５２Ａ．Ｃａｍ
ｂｒｉｄｇｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）中で
２度蒸留済みの水により３回洗浄し、無水メタノールに
より１回洗浄した。放射能は、ｐａｃｋａｒｄ Ｍｏｄ
ｅｌ ４６０ ＣＤ液体シンチレーションシステムによ
り計数した。刺激指数（ＳＩ）は、次の式により計算し
た：ＳＩ＝（マイトジェンを有する培養物のｃｐｍ−バ
ックグランドの培養物のｃｐｍ）／（マイトジェンなし
の培養物のｃｐｍ−バックグランドの培養物のｃｐｍ）
（ここで、バックグランドの培養物は、 ³Ｈ−チミジン
およびマイトジェンを含まなかった。）リンパ球を、温
置した時、マイトジェン以外の他の因子は加えなかっ
た。

【００２２】統計。 学生のｔ−テストを用いて有意性
を測定した。等しくない母分散（分散の不均質性）を有
する平均値（ｍｅａｎｓ）の差の場合、ｔ’−テストま
たはノンパラメトリックＷｉｌｃｏｘｏｎ’ｓテストを
用いて有意性を推定した（テイラー、１９９１年、”デ
ータ分析のための統計技術”、ルイス・パブリッシャー
ズ社、チェルシー、ミシガン（Ｔａｙｌｏｒ，”Ｓｔａ
ｔｉｓｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ Ｄ
ａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ”，Ｌｅｗｉｓ Ｐｕｂｌｉ
ｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｈｅｌｓｅａ，ＭＩ．）、及
びテイト及びクレランド、１９５７年、”非母数の簡単
な統計学”、インターステイト・プリンターズ・アンド
・パブリッシャーズ、ダンビル、イリノイ（Ｔａｔｅ
ａｎｄＣｌｅｌｌａｎｄ、”Ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉ
ｃ ａｎｄ ＳｈｏｒｔｃｕｔＳｔａｔｉｓｔｉｃ
ｓ”，Ｉｎｔｅｒｓｔａｔｅ Ｐｒｉｎｔｅｒｓ ａｎ
ｄＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｄａｎｖｉｌｌｅ，ＩＬ）。

【００２３】図１ａは、第１の実験での１３週齢の第４
のグループ（−Ｄ、−Ｄ＋Ｄ、正常および＋Ｄ）につい
てのマウスの血清カルシウム濃度を示し、図１ｂは、−
Ｄまたは＋Ｄ精製食餌を１３週間与えた後、８週間Ｆｏ
ｒｍｕｌａｂ ＃５００８ペレット食餌を８週間与えた
２つのグループ（−Ｄ＋Ｄおよび＋Ｄ＋Ｐ）についてで
ある。図１ａでは、グラフの第１の列のＰの値は、−Ｄ
グループの血清カルシウム濃度とＰ値の下のグループと
の間の差の有意性である。第２の列（または第３列）の
値は、−Ｄ＋Ｄ（または正常）グループとＰ値の下のグ
ループとの間の差の有意性である。図１ｂでは、第１の
列のＰ値は、Ｐ値の下の補足期間での−Ｄ（または−Ｄ
＋Ｐ）グループと＋Ｄ（または＋Ｄ＋Ｐ）グループとの
間の差の有意性を示す。第２の列のＰ値は、０週間での
−Ｄグループとペレット食餌２．５週間での−Ｄ＋Ｐグ
ループとの間の差の有意性を示す。図２ａは、第１の実
験での１３週での第４のグループについてのマウスの血
清２５−ＯＨ−Ｄ濃度を示し、図２ａは、第２の実験で
１３週間−Ｄまたは＋Ｄ精製食餌を与えた後０週間およ
び８週間Ｆｏｒｍｕｌａｂ ＃５００８ペレット食餌を
与えた２つのグループ（−Ｄ＋Ｐおよび＋Ｄ＋Ｐ）につ
いてである。図２ｂのＰ値は、図１ｂについて説明した
のと同様である。

【００２４】図３ａは、第１の実験でのマウスの脾臓重
量のビタミンＤ補給と不足の影響を示し、図３ｂは、第
２の実験についての同じ影響を示す。図３ａでは、グラ
フの第１の列のＰ値は、ＤＮＦＢ増感サブグループとＰ
値の下の対照サブグループとの間の脾臓重量の差の有意
性である。第２の列のＰ値は、Ｐ値の下のＤＮＦＢ増感
サブグループの間の差の有意性である。図３ｂでは、第
１の列のＰ値は、図３ａの第１の列についての説明と同
様である。第２の列の値は、Ｐ値の下の＋Ｄ＋Ｐグルー
プのサブグループと−Ｄ＋Ｐグループの対応するサブグ
ループとの間の差の有意性を示す。図４ａは，第１の実
験でのマウスＤＮＦＢ挑戦した耳の対照耳に対する厚さ
の比を示し、図４ｂは、第２の実験での同じ比を示す。
Ｐ値は、図３ａと３ｂについての説明と同様である。

【００２５】図５ａは、第１の実験でのマウスについて
のＤＮＦＢ挑戦した耳の対照耳に対する放射能比を示
し、図４ｂは、第２の実験の同じ比を示す。Ｐ値は、図
３ａおよび３ｂで示したのと同様である。図６ａは、第
１の実験での−Ｄ、−Ｄ＋Ｄ、正常および＋Ｄグループ
の胸腺のリンパ球数の比較を示し、図４ｂは、ＤＮＦＢ
により増感されたマウスまたは増感されないマウスでの
胸腺リンパ球の刺激指標へのビタミンＤ不足の影響を示
す。ウエルは、５ｘ１０５細胞／ウエルにより接種され
た。ＣｏｎＡを、０．５μｇ／ウエルで加えた、温置を
４８時間継続させた。細胞は、 ³Ｈチミジン（０．５μ
Ｃｉ／ウエル）を加えた後、１８時間で収穫した。Ｐ値
は、図３ａで説明したのと同様である。

【００２６】結果マウスのビタミンＤ不足 。 １３週齢の４つのグループ
（−Ｄ、−Ｄ＋Ｄ、正常および＋Ｄ）と、１３週間にわ
たり−Ｄまたは＋Ｄ精製食餌を与えた後８週間ペレット
食餌を与えた２つのグループ（−Ｄ＋Ｐおよび＋Ｄ＋
Ｐ）とについてのマウスの血清カルシウム濃度を、図１
ａおよび図１ｂにそれぞれ示す。１３週間−Ｄ食餌を与
えたマウスは、血清カルシウム６．６４±０．４１ｍｇ
／ｄｌ（平均±ＳＤ、ｎ＝１２；図１ａ）を有した。＋
Ｄ食餌を与えたマウスは、血清カルシウム濃度９．５０
±０．８４ｍｇ／ｄｌ（ｎ＝４）を有し、これは、−Ｄ
グループ（ｐ＜０．００１）のものよりも有意的に高
い。Ｆｏｒｍｕｌａｂ ＃５００８ペレットを与えられ
た正常なマウスは、−Ｄグループ（ｐ＜０．００１）の
ものよりも顕著に高い血清カルシウム濃度８．８９±
０．２７ｍｇ／ｄｌ（ｎ＝１０）を示したが、＋Ｄグル
ープ（ｐ＞０．０５）の血清カルシウム濃度に有意的な
差はなかった。１０週間−Ｄ食餌を与えられ３週間＋Ｄ
食餌を与えられたマウスは、血清カルシウム濃度８．８
１±０．４５ｍｇ／ｄｌ（ｎ＝１２）を示した。これ
は、−Ｄグループ（Ｐ＜０．００１）のものよりも著し
く高く、正常なマウス（ｐ＞０．６）の血清カルシウム
濃度と有意的に異ならない。この事実は、１０週間−Ｄ
食餌を与えた後３週間ビタミンＤ₂ を食餌に補足するこ
とが、血清カルシウム濃度を著しく増加させるが、その
レベルは＋Ｄグループ（ｐ＜０．０５）のものよりわず
かに低いことを示した。

【００２７】第２の実験では、１３週間精製−Ｄまたは
＋Ｄ食餌を与えたマウス（１３週齢）、−Ｄマウスの血
清カルシウム（６．７６±０．９７ｍｇ／ｄｌ、ｎ＝１
２；図１ｂ）は、＋Ｄマウス（８．７１±０．４１ｍｇ
／ｄｌ、ｎ−１０；Ｐ＜０．００１）よりも著しく低か
った。これらの−ＤマウスにＦｏｒｍｕｌａｂ ＃５０
０８ペレット食餌を２．５週間与えることにより、血清
カルシウムは、有意的に増加した（８．８８±０．１９
ｍｇ／ｄｌ、ｎ＝１８、Ｐ＜０．００１）。しかしなが
ら、これは、また、同じ補足期間で＋Ｄ＋Ｐグループ
（９．００±０．２５ｍｇ／ｄｌ、ｎ＝１６；Ｐ＜０．
０５）よりも有意的に低い。ペレット食餌の５週間およ
び８週間後、−Ｄ＋Ｐグループの血清カルシウム（それ
ぞれ９．１８±０．２３ｍｇ／ｄｌ、ｎ＝１１および
８．５６±０．２０ｍｇ／ｄｌ、ｎ＝８）は、＋Ｄ＋Ｐ
グループ（それぞれ、９．０７±０．３５ｍｇ／ｄｌ、
ｎ＝１１および８．６６±０．１９ｍｇ／ｄｌ、ｎ＝
８、両方ともＰ＞０．３）と有意的な差はなかった。

【００２８】第１の実験の＋Ｄグループのマウスは、血
清２５−ＯＨ−Ｄ濃度３０．９±２．６ｎｇ／ｍｌ（ｎ
＝２）を与え、−Ｄグループのマウスのすべての３つの
サンプルは、検出不可能な血清２５−ＯＨ−Ｄ濃度（＜
３．０ｎｇ／ｍｌ、図２ａ）を与えた。−Ｄ＋Ｄおよび
正常なグループについての濃度は、それぞれ、２５．４
±４．５ｎｇ／ｍｌ（ｎ＝３）および２２．５±２．４
ｎｇ／ｍｌ（ｎ−２）であった。血清カルシウムおよび
２５−ＯＨ−Ｄレベルの結果は、−Ｄグループのマウス
が、実際ビタミンＤ不足であることを示し、３週間の＋
Ｄ食餌の補足が血清カルシウムおよび２５−ＯＨ−Ｄ濃
度を著しく増加させたことを示した。第２の実験に対
し、１３週で、−Ｄグループの４つのサンプルの血清２
５−ＯＨ−Ｄは、最小検知可能なレベルよりも少なく
（図２ｂ）、＋Ｄ＋Ｐグループは、血清２５−ＯＨ−Ｄ
濃度１６．３±４．８ｎｇ／ｍｌ、ｎ＝４）を有してい
た。マウスに、１３週間精製食餌を与えた後、８週間Ｆ
ｏｒｍｕｌａｂ ＃５００８ペレット食餌を与えたとこ
ろ、−Ｄ＋Ｐグループ（１２．２±２．１ｎｇ／ｍｌ、
ｎ＝３）の血清２５−ＯＨ−Ｄは、＋Ｄ＋Ｐグループ
（１４．６±４．１ｎｇ／ｍｌ； Ｐ＞０．４）のもの
と有意的に差はなかった。これらの結果は、８週間のビ
タミンＤの補足が、血清中の血清カルシウムおよび２５
−ＯＨ−Ｄレベルを完全に正常に戻したことを示た。

【００２９】第１の実験の正常なグループ、＋Ｄグルー
プおよび−Ｄ＋Ｄグループ（図３ａ；それぞれ、ｐ＜
０．００１，＝０．００１と＜０．０５）についておよ
び第２の実験の−Ｄ＋Ｐと＋Ｄ＋Ｐグループ（図３ｂ；
それぞれＰ＜０．００１と＜０．０１）についてのＤＮ
ＦＢ増感サブグループと対照グループとの間の脾臓の重
量に有意的な差があったが、第１の実験の−Ｄグループ
は、別であった（ｐ＞０．０５、図３ａ）。正常なマウ
スについては、ＤＮＦＢ増感が、脾臓の重量を著しく増
加させ、正常な免疫学的な応答を示し、この応答は、−
Ｄマウスで著しく減ぜられた。−ＤマウスのＤＮＦＢ増
感サブグループの脾臓の重量は、正常なマウスのＤＮＦ
Ｂ増感サブグループ（Ｐ＜０．０１、図３ａ）の脾臓の
重量より明らかに少なく、＋ＤマウスのＤＮＦＢ増感サ
ブグループ（Ｐ≒０．０５；図３ａ）の脾臓の重量より
もほぼ有意的に少なかった。−Ｄと−Ｄ＋Ｄグループの
ＤＮＦＢ増感サブグループの間の差は有意的でなかった
（ｐ＝０．５）。このことは、１０週間−Ｄ食餌を与え
た後の３週間にわたるビタミンＤ₂ の補足が、脾臓免疫
応答を回復させなかったことを示唆する。第２の実験の
結果は、１３週間−Ｄ食餌を与えた後の８週間におよぶ
ビタミンＤ（Ｆｏｒｍｕｌａｂ ＃５００８ペレット食
餌）の補足が、脾臓免疫学的応答を回復させ得ることを
示した；−Ｄ＋ＰグループのＤＮＦＢ増感サブグループ
（１１２．６±１０．５ｍｇ、ｎ＝１０；図３ｂ）の脾
臓の重量は、＋Ｄ＋ＰグループのＤＮＦＢ増感サブグル
ープ（１１３．８±１４．９ｍｇ、ｎ＝１０；Ｐ＞０．
８、図３ｂ）の脾臓の重量と有意的な差がなかった。−
Ｄ＋Ｐグループと＋Ｄ＋Ｐグループとの間のＡ／Ｏ対照
サブグループの脾臓の重量の差も有意的でなかった（Ｐ
＞０．２）。

【００３０】遅延型過敏性。 図４ａは、第１の実験で
１３週間精製された食餌（−Ｄまたは＋Ｄ）または正常
なペレット食餌を与えたマウスのＤＮＦＢ挑戦耳の対照
耳に対する厚さの比を示し、図４ｂは、１３週間−／＋
Ｄ精製食餌を与えた後８週間ビタミンＤ（Ｆｏｒｍｕｌ
ａｂ ＃５００８ペレット食餌）を与えたマウスのＤＮ
ＦＢ挑戦耳の対照耳に対する厚さの比を示す。まず、６
つの対照サブグループは、実質的に同じ耳の厚さ比
（１．２１±０．１５ないし１．３２±０．１０）を有
する。しかし、ＤＮＦＢ増感サブグループの耳の厚さの
比は、６つのグループのすべてについて対照サブグルー
プ（ｐ＜０．００１）の比よりも有意的に高かった。こ
のことは、ＤＮＦＢ増感が、遅延型過敏性を評価する優
れた方法であることを示す。第２に、第１の実験の−Ｄ
グループのＤＮＦＢ増感サブグループの耳の厚さの比
は、正常なマウス（１．５５±０．０７、ｎ＝１１〜
１．８０±０．１９、ｎ＝１２；ｐ＜０．００１；図４
ａ）および＋Ｄマウス（１．７３±０．０８、ｎ＝１
２；ｐ＜０．００１）のＤＮＦＢ増感サブグループの耳
の厚さの比よりも著しく低い。これらのデータは、ビタ
ミンＤ−不足がマウスのＤＴＨを有意的に減少させるこ
とを示している。第３に、−Ｄ＋Ｄマウス（１．５±
０．１４、ｎ＝１２）のＤＮＦＢ増感サブグループの耳
の厚さの比が−Ｄマウス（ｐ＞０．８）のＤＮＦＢ増感
サブグループの耳の厚さの比と実質的に同じであるが、
正常マウス（ｐ＝０．００１）および＋Ｄマウス（Ｐ＜
０．００１；図４ａ）のＤＮＦＢ増感サブグループの耳
の厚さの比よりも有意的に低い。これらの結果は、３週
間のビタミンＤの補足が血清カルシウムと２５−ＯＨ−
Ｄ濃度をほぼ正常レベルに増加させた（図１および２）
が、ＤＴＨ応答が応答しなかったことを証明した。第４
に、−Ｄ＋Ｐグループ（１．６２±０．１２、ｎ＝１
０；図４ｂ）および＋Ｄ＋Ｐグループ（１．６４±０．
１７、ｎ＝１０）のＤＮＦＢ増感サブグループの間の耳
の厚さの比の差は、有意的でなかった（Ｐ＞０．８）。
このように、ビタミンＤ不足（１３週）に見られる損な
われたＤＴＨ応答は、８週間ビタミンＤを供給すること
により矯正され得る。

【００３１】マウスの耳への ³Ｈ−チミジンの取り込み
の場合、６つの対照サブグループのすべてが、ＤＮＦＢ
挑戦耳の対照耳に対するほぼ同じ放射能比を有した
（１．４３±０．４０ないし１．９１±０．３２）（図
５ａおよび５ｂ）。ＤＮＦＢ増感サブグループと対照グ
ループとの間の放射能の比の差は、すべての６つのグル
ープについてかなり有意的であった［第１の実験で４つ
のグループについてＰ＜０．００１（図５ａ）および第
２の実験で−Ｄ＋Ｐおよび＋Ｄ＋ＰグループについてＰ
＜０．０１（図５ｂ）］。このことは、ＤＮＦＢ増感サ
ブグループのＤＮＦＢ挑戦耳への ³Ｈ−チミジンの取り
込みが、対照サブグループへの取り込みよりも高いこと
を証明し、また、 ³Ｈ−チミジン取り込みが、ＤＴＨ応
答を評価する意味ある方法であることを示唆する。−Ｄ
マウスのＤＮＦＢ増感サブグループについての耳の放射
能比は、正常なマウス（ｐ＜０．０５；図５ａ）よりも
有意的に低く、＋Ｄマウス（ｐ＝０．０５）のＤＮＦＢ
増感サブグループの耳の放射能比よりもほぼ有意的に低
い。−Ｄと−Ｄ＋Ｄグループの間および−Ｄ＋Ｐと＋Ｄ
＋Ｐグループの間のＤＮＦＢ増感サブグループの耳の放
射能比の差は、有意的ではない（それぞれ、ｐ＞０．
１、図５ａとｐ＞０．２、図５ｂ）。このように、３週
間にわたるビタミンＤは、ビタミンＤ不足により誘発さ
れるき損した細胞性免疫を矯正しなかったが、８週間に
わたるビタミンＤは矯正できた。

【００３２】リンパ球増殖。 第１の実験の４つの対照
サブグループの胸腺リンパ球の数は、ほぼ同じであった
（図６ａ）。ＤＮＦＢ増感サブグループの胸腺リンパ球
の数は、第１の実験のすべての４つのグループについて
対照サブグループのそれよりも明らかに少なかった：そ
れぞれ、−Ｄグループについて５８±３３（ｎ＝６）対
１２６±３５（ｎ＝６）（ｐ＜０．１）、−Ｄ＋Ｄグル
ープについて３３±２３（ｎ−６）対１３９±３２（ｎ
＝６）（ｐ＜０．００１）、＋Ｄグループについて２８
±１０（ｎ＝６）対１２５±２９（ｎ＝６）（ｐ＜０．
００１）。−Ｄと−Ｄ＋Ｄグループの増感グループの間
のリンパ球の数の差は、有意的でなかった（ｐ＞０．
１）。

【００３３】ｃｏｎＡ（０．５μｇ／ウエル）による胸
腺リンパ球の刺激指標は、第１の実験のすべての４つの
対照グループについてほぼ同じであった（図６ｂ）。Ｄ
ＮＦＢ増感サブグループの刺激指標は、正常なグループ
の対照サブグループより著しく高く［７８．０±４３．
３（ｎ＝６）対１５．９±７．７（ｎ＝６）；ｐ＜０．
１］、＋Ｄグループの対照サブグループよりも著しく高
い［６６．６±７．３（ｎ＝６）対１６．３±９．４
（ｎ＝６）；ｐ＜０．００１］、しかし−Ｄと−Ｄ＋Ｄ
グループについては、ＤＮＦＢ増感サブグループと対照
サブグループのＳＩの間の差は、有意的でなかった：−
Ｄグループについて２８．１±１１．１（ｎ＝６）対１
７．１±１２．７（ｎ＝６）；ｐ＞０．１、−Ｄ＋Ｄグ
ループについて３８．７±２４．８（ｎ＝６）対２０．
０±１２．０（ｎ＝６）；Ｐ＞０．１。このことは、−
Ｄと−Ｄ＋Ｄ胸腺リンパ球は、＋Ｄおよび正常なマウス
からのものよりもマイトジェン刺激に対して明らかに低
い応答を有していることを示している。−ＤマウスのＤ
ＮＦＢ増感サブグループのＳＩは、正常なマウス（ｐ＝
０．０２）よりも著しく低くまた＋Ｄマウス（ｐ＜０．
００１）よりも著しく低い。これらの結果は、ビタミン
Ｄ不足が、マウスの細胞性免疫を損なうという追加の証
拠を提供する。−Ｄと−Ｄ＋ＤマウスのＤＮＦＢ増感サ
ブグループの間のＳＩの差は、有意的でなかった（Ｐ＞
０．３）。第２の実験から得られた結果は、対照グルー
プの間および−Ｄ＋Ｐおよび＋Ｄ＋ＰグループのＤＮＦ
Ｂ増感サブグループの間の胸腺リンパ球の数の差が有意
的でないことを示した（それぞれＰ＞０．３と＞０．０
５；示してない）。−Ｄ＋Ｐと＋Ｄ＋ＰグループのＤＮ
ＦＢ増感サブグループの間および対照サブグループの間
の刺激指標の有意的な差もなかった（それぞれ、Ｐ＞
０．９と＞０．６；示してない）。

【００３４】検討 真にビタミン不足のマウスモデルの開発は、免疫でのビ
タミンＤの役割の研究のための道具をもたらした。商業
的に入手できるマウスにビタミンＤ不足の食餌を与えて
マウスの真のビタミンＤ不足を起こさせることは不可能
でないまでも難しいことである。通常、ビタミンＤ不足
は、２５−ＯＨ−Ｄ₃ およびカルシウムの血清濃度を測
定することにより確かめられる。もちろん、血清１，２
５−（ＯＨ）₂ Ｄ₃ 濃度も、動物がビタミンＤ不足かど
うかを評価する重要な指標であるが、マウスから得られ
る血液の量が、現在利用できる方法による１，２５−
（ＯＨ）₂ Ｄ₃ レベルの検定をはばむ。したがって、ビ
タミンＤ不足を確かめるのに血清カルシウムレベルと共
に血清２５−ＯＨ−Ｄ濃度に依存せざるを得ない。０．
４７％のカルシウムを含んだ精製−Ｄ食餌を与えた商業
的に入手可能なマウスにより、低くした２５−ＯＨ−Ｄ
レベルが、達成され得た；しかしながら、血清カルシウ
ムレベルは、＋Ｄマウスのそれとは異ならない（未公表
の観察）。したがって、血清カルシウム濃度は、マウス
のビタミンＤ不足のより敏感な指標であることは明らか
である。アレン（Ａｌｌｅｎ（１９８４）Ｊ．Ｎｕｔ
ｒ．，１１４，４２−４９）は、３％のカルシウムを有
する−Ｄ食餌を与えられたビタミンＤ不足授乳マウスの
血漿全カルシウムレベルが、＋Ｄ食餌を与えられた対照
マウスのレベルと有意的に異ならないが、両グループの
間の血清２５−ＯＨ−Ｄレベルの差は有意的であると報
告した。マウスの真のビタミンＤ不足を達成するため
に、妊娠母親は、妊娠後、直ちに、−Ｄ食餌を与えられ
ねばならなく、その子が不十分な食餌で維持されねばな
らない。精製ビタミンＤなし食餌と紫外線なしを含め、
継続した不足が必要である。

【００３５】皮膚接触反応の遅延型過敏性は、細胞性免
疫の標準的テストである。ロビンソンとネイスミス（Ｒ
ｏｂｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｎａｙｓｍｉｔｈ（１９７
５）Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５，２９９−３
０４）は、マウスのたんぱく質抗原に対するＤＴＨ反応
を測定する４つの異なる方法の長所を評価した：肉趾ま
たは耳の厚さの増加；耳の刺激部位への５１Ｃｒ−標識
付けした同系リンパ節細胞の到達および耳の刺激部位で
の¹²⁵ Ｉ−標識付けした５−ヨードデオキシウリジン
（ＩＵｄＲ）の蓄積。刺激に続く耳の厚さの増加の直接
測定は、最も鋭敏で首尾一貫した結果を与えたので、信
頼のおける方法を提供する。耳の厚さの測定中、位置の
選択の影響を避けるためおよび耳の厚さの測定の過程で
圧力の影響を避けるため、我々は、また、耳の中への ³
Ｈ−チミジンの取り込みを用いた。この方法は、抗原に
応答して増殖する細胞が永久的な標識として ³Ｈ−チミ
ジンを取り込むという仮定に基づく。

【００３６】器官から得たリンパ球または単核の細胞の
増殖も、細胞性免疫を評価するために用いられた。タバ
タ、スズキ、キクナミ、マツシタ、イノウエ、オカモ
ト、ミキ、ニシザワ及びモリイ（Ｔａｂａｔａ、Ｓｕｚ
ｕｋｉ、Ｋｉｋｕｎａｍｉ、Ｍａｔｓｕｓｈｉｔａ、Ｉ
ｎｏｕｅ、Ｏｋａｍｏｔｏ、Ｍｉｋｉ、Ｎｉｓｈｉｚａ
ｗａ ａｎｄ Ｍｏｒｉｉ（１９８６），Ｊ．Ｃｌｉ
ｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，６３，１２
１８−１２２１）は、 ³Ｈ−チミジン摂取により測定さ
れるとしてマイトジェンＰＨＡおよびＰＷＭ（アメリカ
ヤマゴボウマイトジェン）に対する細胞増殖応答を直接
観察し、抹消血液単核細胞の刺激指標を用いて血液透析
を受けた患者の細胞性免疫への１α−ヒドロキシビタミ
ンＤ₃ ［１α−ＯＨ−Ｄ］の効果を評価した。本実験で
は、胸腺リンパ球の刺激指標を測定し、細胞性免疫への
ビタミンＤ不足の影響を評価した。胸腺リンパ球の数の
有意的な差または増感されてない−Ｄグループと＋Ｄグ
ループ（または正常なグループの）の間の胸腺リンパ球
のＳＩの有意的な差は見いだせなかった。しかしなが
ら、増感マウスでは、−Ｄマウスからの胸腺リンパ球
が、＋Ｄ（または正常な）マウスからのものより低い刺
激指標を与えた。プロベディニ、ルロット、ソボル、ツ
オウカス及びマノラガス（Ｐｒｏｖｖｅｄｉｎｉ、Ｒｕ
ｌｏｔ、Ｓｏｂｏｌ、ＴｓｏｕｋａｓおよびＭａｎｏｌ
ａｇａｓ（１９８７）Ｊ．Ｂｏｎｅ．Ｍｉｎ．Ｒｅ
ｓ．，２，２３９−２４７）は、活性化の初期の段階の
胸腺リンパ球が生体内で１，２５−（ＯＨ）₂ Ｄ₃ レセ
プターたんぱく質の出現を有することを見いだし、１，
２５−（ＯＨ）₂ Ｄ₃ が生体内でこれらの細胞に働き得
ることを提案した。１，２５−（ＯＨ）₂ Ｄ₃ バインデ
ィングと胸腺リンパ球の活性化相との間の明確な相関
が、検出された（プロベディニ、ルロット、ソボル、ツ
オウカス及びマノラガス（１９８７）Ｊ．Ｂｏｎｅ Ｍ
ｉｎ．Ｒｅｓ．，２，２３９−２４７）。ウシおよびマ
ウスの未熟な胸腺リンパ球の１，２５−（ＯＨ）₂ Ｄ₃
レセプターも、見つけ出された（ラインハート、ホルス
ト、リトルダイク及びバイツ（Ｒｅｉｎｈａｒｄｔ，Ｈ
ｏｒｓｔ，Ｌｉｔｔｌｅｄｉｋｅ ａｎｄ Ｂｅｉｔ
ｚ）（１９８２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒ
ｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１０６，１０１２−１０１８、
及びデイビッド、コーレン、ノボルグロツキイ及びリー
ベルマン（Ｄａｖｉｄ，Ｋｏｒｅｎ，Ｎｏｖｏｒｇｒｏ
ｄｓｋｙ ａｎｄ Ｌｉｂｅｒｍａｎ）（１９８４）Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕ
ｎ．１２３，１６３−１６９）。経口投与した１α−Ｏ
Ｈ−Ｄ₃ は、腎性骨異栄養症をもったラットの胸腺退縮
を防ぐ（オオスギ、ナカノ、コモリ、ウエノ、スガワ
ラ、フクシマ、ヤマモト、ニシ、マスダ及びマツノ、１
９８５年、”最新のビタミンＤの化学、生化学及び臨床
学”、第２０９−２１８頁、ノーマル、シャエファー、
グリゴライト及びヘラス編、デグルイタール、ベルリ
ン、ニューヨーク（Ｏｈｓｕｇｉ，Ｎａｋａｎｏ，Ｋｏ
ｍｏｒｉ，Ｕｅｎｏ，Ｓｕｇａｗａｒａ，Ｆｕｋｕｓｈ
ｉｍａ，Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｎｉｓｈｉ，Ｍａｓｕｄａ
ａｎｄ Ｍａｔｓｕｎｏ，”Ｖｉｔａｍｉｎ Ｄ Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｃ
ｌｉｎｉｃａｌ Ｕｐｄａｔｅ．”，Ｎｏｒｍａｌ，Ｓ
ｃｈａｅｆｅｒ，Ｇｒｉｇｏｌｅｉｔ ａｎｄ Ｈｅｒ
ｒａｔｈ，Ｅｄｓ．，ＤｅＧｒｕｙｔｅｒ，Ｂｅｒｌｉ
ｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。１，２５−（ＯＨ）₂ Ｄ₃ の
不在は、Ｔ−リンパ球増殖を損なうことが明らかと思わ
れる。

【００３７】何人かの著者（オオスギとその他上記の
者； ザラベイチア、リアンコ、フランシスコ及びゴン
ザレス−マチアス（Ｚａｒｒａｂｅｉｔｉａ，Ｒｉａｎ
ｃｈｏ，Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ ａｎｄ Ｇｏｎｚａｌｅ
ｚ−Ｍａｃｉａｓ）（１９９０）Ｎｅｐｈｒｏｎ ５
５，１１０−１１３； ハーウイック、カルマンソン及
びグーゼ（Ｈａｒｗｉｃｋ，Ｋａｌｍａｎｓｏｎ ａｎ
ｄ Ｇｕｚｅ）（１９７８）Ｎｅｐｈｒｏｎ ２３，２
９３−２９６； ツーライン、レビラード、ブロンチヘ
ルド及びトラエガー（Ｔｏｕｒａｉｎｅ，Ｒｅｖｉｌｌ
ａｒｄ，Ｂｒｏｎｃｈｉｈｅｒｄ ａｎｄ Ｔｒａｅｇ
ｅｒ）（１９７５）Ｎｅｐｈｒｏｎ １４，１９５−２
０８； カウフマン、マンツラー及びフェアー（Ｋａｕ
ｆｆｍａｎ，Ｍａｎｚｌｅｒ ａｎｄ Ｐｈａｉｒ）
（１９７５）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２
２，５４−６１； ナクラ及びゴッジン（Ｎａｋｈｌａ
ａｎｄＧｏｇｇｉｎ）（１９７３ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ ２４，２２９−２３５；セルース、パスターナッ
ク及びビロンライネン（Ｓｅｌｒｏｏｓ，Ｐａｓｔｅｒ
ｎａｃｋ ａｎｄ Ｖｉｒｏｎｌａｉｎｅｎ）（１９７
３）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４，３６５
−３７０； 及びリッカーズ、クリスチャンセン、クリ
スチャンセン、クリスチャンセン及びロドブロ（Ｒｉｃ
ｋｅｒｓ，Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ，Ｃｈｉｓｔｉａ
ｎｓｅｎ，Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎａｎｄ Ｒｏｄｂ
ｒｏ）（１９８５）Ｎｅｐｈｒｏｎ ３９，２６７−２
７１）は、ヒトの慢性腎不全が、き損した細胞性免疫を
もたらすことを立証した。血清１，２５−（ＯＨ）₂ Ｄ
₃ レベルが、血液透析した腎不全患者および血液透析し
てない腎不全患者で減少する（セルースとその他上記の
者）。１α−ヒドロキシビタミンＤ₃ は、患者の管理で
治療学的価値を有し、細胞性免疫を回復し得る（タバタ
とその他上記の者；およびオオスギとその他上記の
者）。腎不全患者の遅延型過敏性応答の測定される指標
であるツベルクリンテスト（ＰＰＤ）と１，２５−（Ｏ
Ｈ）₂ Ｄ₃ 濃度との間の明確な相関が、報告されている
（リンド、ベングル、ゾレンセン及びリュンガル（Ｌｉ
ｎｄ，Ｗｅｎｇｌｅ，Ｓｏｒｅｎｓｅｎａｎｄ Ｌｊｕ
ｎｇｈａｌｌ）（１９９０）Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄ
ｏｃｒｉｎｏｌ．，９５，２７１−２７４）。これらの
状況下の１，２５−（ＯＨ）₂ Ｄ₃ の不在は、これらの
発見の原因で十分ありうる。

【００３８】試験管内と臨床の結果は、矛盾を示唆す
る：ビタミンＤ代謝産物は、生体内での刺激効果を除い
て、試験管内での免疫抑制効果を有する。試験管内での
実験のほとんどは、その生理学的濃度の過剰で１，２５
−（ＯＨ）₂ Ｄ₃ を用いて行われた。Ｚａｒｒａｂｅｉ
ｔｉａとその他の上記の者は、生理学的範囲（１０^-11
Ｍ）の濃度での１，２５−（ＯＨ）₂ Ｄ₃ の添加は、血
液透析患者からのリンパ球の増殖の小さいが限界的に有
意的な（１１％）の増加を誘発したこと；過剰生理学的
濃度（１０^-9〜１０^-7Ｍ）は、患者および健康な被験者
の両方からの細胞に有糸分裂の顕著な抑制（対照値の６
０％まで）を誘発したことを証明した。全てのこれらの
結果が、ここでの生体内の発見により説明され得るわけ
ではないことは明白である。しかしながら、試験管内の
１，２５−（ＯＨ）₂ Ｄ₃ の高い濃度は生体内では達成
されないであろう。ビタミンＤの不足は、生体内でき損
された細胞性免疫応答を起こすことが明白である。加え
て、３週間にわたるビタミンＤ投与が、ビタミンＤ不足
マウスの正常な細胞性免疫を回復しえないが、血清カル
シウムおよび２５−ＯＨ−Ｄが、これらの動物で正常な
レベルに回復され得ることは興味あることである。ビタ
ミンＤの長引く不足は、ビタミンＤの後の投与により迅
速に直すことのできない免疫システムの進行性の欠点を
起こし得ることが可能である。ここに報告する結果は、
マウスの細胞性免疫を回復するためにはビタミンＤに対
しさらに長く影響を受けること（exposure）が必要とさ
れることを示唆する。

【００３９】最も重要な発見は、ビタミンＤ₃ が、約３
週間以内でほ乳動物の免疫不全を改善させるまたは回復
させるということである。このように、ほ乳動物のビタ
ミンＤの不足は、ビタミンＡの不足とは異なり生体内の
免疫の不可逆的な抑制を生じない。これらの結果は、ま
た、ビタミンＤ₃ が、直接関与して、生体内の細胞性免
疫で重要な役目を果たすという考えを支持する。

【００４０】

【発明の効果】本発明方法によれば、十分な量のビタミ
ンＤ化合物を十分な期間投与することで、哺乳動物の免
疫不全又はき損した細胞性免疫を有効に治療ないし回復
させることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１ａは、第１の実験での１３週齢の４つのグ
ループ（−Ｄ、−Ｄ＋Ｄ、正常および＋Ｄ）についての
マウス中の血清カルシウム濃度の棒グラフであり、図１
ｂは、第２の実験での１３週間−Ｄまたは＋Ｄ精製食餌
を与えた後８週間ペレット食餌を与えた２つのグループ
（−Ｄ＋Ｐおよび＋Ｄ＋Ｐ）についてのマウス中の血清
カルシウム濃度の棒グラフである。

【図２】図２ａは、第１の実験で１３週間での同じ４つ
のグループについてのマウスの血清２５−ヒドロキシビ
タミンＤ₃ 濃度の棒グラフであり、図２ｂは、第２の実
験で同じ２つのグループについてのマウスの血清２５−
ヒドロキシビタミンＤ₃濃度の棒グラフである。

【図３】図３ａは、第１の実験でのマウスの脾臓の重量
へのビタミンＤの補足と不足の影響の棒グラフであり、
図３ｂは、第２の実験について同じ影響を示す棒グラフ
である。

【図４】図４ａは、第１の実験でのマウスについてのＤ
ＮＦＢ挑戦をした耳の対照耳に対する耳の厚さ比の棒グ
ラフであり、図４ｂは、第２の実験のマウスについて同
じ耳の厚さ比の棒グラフである。

【図５】図５ａは、第１の実験でのマウスについてのＤ
ＮＦＢ挑戦をした耳の対照耳に対する耳放射能比の棒グ
ラフであり、図５ｂは、第２の実験のマウスについて同
じ耳放射能比を示す棒グラフである。

【図６】図６ａは、第１の実験での４つのマウスグルー
プのリンパ球の数と胸腺の比較の棒グラフであり、図６
ｂは、第１の実験の同じ４つのマウスグループについて
ＤＮＦＢにより増感しないマウスまたは増感したマウス
での胸腺リンパ球の刺激指標へのビタミンＤ不足の影響
の棒グラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 シヨウリ ヤン アメリカ合衆国 38111 テネシー メン フイス サザン アベニユー 3341 アパ ートメント 14 (72)発明者 ジーン エム． プラール アメリカ合衆国 53531 ウイスコンシン マデイソン ジヨージタウン シーテイ ー． ７ (72)発明者 コニー エム． スミス アメリカ合衆国 53713 ウイスコンシン マデイソン ポスト ロード 2918

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 哺乳動物に該哺乳動物の免疫を向上させ
   るのに十分な量のビタミンＤ化合物を投与することを含
   んでなる哺乳動物の免疫不全を治療する方法。
2. 【請求項２】 該哺乳動物の該免疫不全が該哺乳動物の
   ビタミンＤ不足から生じたものである請求項１記載の方
   法。
3. 【請求項３】 該ビタミンＤ化合物が、次式 【化１】 ｛式中、Ｒ⁶ およびＲ⁷ はそれぞれ水素を示すか、また
   はＲ⁶ とＲ⁷ とが一緒になってメチレン基を示し、Ｒ⁸
   は水素、ヒドロキシまたは保護されたヒドロキシを示
   し、そしてＲは次の構造 【化２】 ［ここで側鎖の炭素２０の立体化学中心は、Ｒ配置また
   はＳ配置を有していてもよく、Ｚは、Ｙ、−ＯＹ、−Ｃ
   Ｈ₂ ＯＹ、−Ｃ≡ＣＹおよび−ＣＨ＝ＣＨＹからなる群
   から選択され、この際、二重結合はシス立体化学配置ま
   たはトランス立体化学配置を有していてもよく、Ｙは水
   素、メチル、−ＣＲ⁵ Ｏおよび次の構造 【化３】 （ここで、ｍおよびｎは、互いに独立して、０から５の
   整数を示し、Ｒ¹ は、水素、ヒドロキシ、保護されたヒ
   ドロキシ、フルオロ、トリフルオロメチルおよび直鎖で
   あっても分岐していてもよく、任意にはヒドロキシ置換
   基または保護されたヒドロキシ置換基を有していてもよ
   いＣ_1-5 アルキルからなる群から選択され、そしてＲ
   ² 、Ｒ³ およびＲ⁴ のそれぞれは、互いに独立して、水
   素、フルオロ、トリフルオロメチルおよび直鎖であって
   も分岐していてもよく、任意にはヒドロキシ置換基また
   は保護されたヒドロキシ置換基を有していてもよいＣ
   _1-5 アルキルからなる群から選択され、Ｒ¹ とＲ² とは
   一緒になった場合オキソ基、アルキリデン基、＝ＣＲ²
   Ｒ³ または基−（ＣＨ₂ ）_p −を示し、この際、ｐは２
   から５の整数であり、Ｒ³ とＲ⁴ とは一緒になった場合
   オキソ基または基−（ＣＨ₂ ）_q −を示し、この際ｑは
   ２から５の整数であり、Ｒ⁵ は水素、ヒドロキシ、保護
   されたヒドロキシまたはＣ_1-5 アルキルを示す）の基か
   らなる群から選択される］により表される｝を有する化
   合物から選択される請求項１記載の方法。
4. 【請求項４】 該ビタミンＤ化合物が、投与されるビタ
   ミンＤ化合物に応じて１日当たり約０．１マイクログラ
   ムから約２ミリグラムの量で投与される請求項１記載の
   方法。
5. 【請求項５】 該ビタミンＤ化合物が、約３週間から約
   ８か月にわたり該哺乳動物に毎日投与される請求項１記
   載の方法。
6. 【請求項６】 該ビタミンＤ化合物を、該哺乳動物によ
   り摂取可能でかつ該哺乳動物に無毒な液体賦形剤に含む
   ようにして経口投与される請求項１記載の方法。
7. 【請求項７】 該ビタミンＤ化合物が投与に先立ち、無
   毒な薬学的に受容される担体と組み合わせられる請求項
   １記載の方法。
8. 【請求項８】 用いられる該ビタミンＤ化合物がビタミ
   ンＤ₃ である請求項１記載の方法。
9. 【請求項９】 用いられる該ビタミンＤ化合物が１，２
   ５−ジヒドロキシビタミンＤ₃ である請求項１記載の方
   法。
10. 【請求項１０】 用いられる該ビタミンＤ化合物が１α
    −ヒドロキシビタミンＤ₃ である請求項１記載の方法。
11. 【請求項１１】 哺乳動物の細胞性免疫を向上させるの
    に十分な量のビタミンＤ化合物を該哺乳動物に投与する
    ことを含んでなる哺乳動物のき損した細胞性免疫を向上
    させる方法。
12. 【請求項１２】 該細胞性免疫が、Ｔ細胞性免疫、Ｂ細
    胞性免疫、Ｔキラー細胞性免疫およびマクロファージ性
    免疫からなる群から選択される請求項１１記載の方法。
13. 【請求項１３】 該き損した細胞性免疫が、該哺乳動物
    のビタミンＤ不足から生じたものである請求項１１記載
    の方法。
14. 【請求項１４】 該ビタミンＤ化合物が次式 【化４】 ｛式中、Ｒ⁶ およびＲ⁷ はそれぞれ水素を示すか、また
    はＲ⁶ とＲ⁷ とが一緒になってメチレン基を示し、Ｒ⁸
    は水素、ヒドロキシまたは保護されたヒドロキシを示
    し、そしてＲは次の構造 【化５】 ［ここで側鎖の炭素２０の立体化学中心は、Ｒ配置また
    はＳ配置を有していてもよく、Ｚは、Ｙ、−ＯＹ、−Ｃ
    Ｈ₂ ＯＹ、−Ｃ≡ＣＹおよび−ＣＨ＝ＣＨＹからなる群
    から選択され、この際、二重結合はシス立体化学配置ま
    たはトランス立体化学配置を有していてもよく、Ｙは水
    素、メチル、−ＣＲ⁵ Ｏおよび次の構造 【化６】 （ここで、ｍおよびｎは、互いに独立して、０から５の
    整数を示し、Ｒ¹ は、水素、ヒドロキシ、保護されたヒ
    ドロキシ、フルオロ、トリフルオロメチルおよび直鎖で
    あっても分岐していてもよく、任意にはヒドロキシ置換
    基または保護されたヒドロキシ置換基を有していてもよ
    いＣ_1-5 アルキルからなる群から選択され、そしてＲ
    ² 、Ｒ³ およびＲ⁴ のそれぞれは、互いに独立して、水
    素、フルオロ、トリフルオロメチルおよび直鎖であって
    も分岐していてもよく、任意にはヒドロキシ置換基また
    は保護されたヒドロキシ置換基を有していてもよいＣ
    _1-5 アルキルからなる群から選択され、Ｒ¹ とＲ² とは
    一緒になった場合オキソ基、アルキリデン基、＝ＣＲ²
    Ｒ³ または基−（ＣＨ₂ ）_p −を示し、この際、ｐは２
    から５の整数であり、Ｒ³ とＲ⁴ とは一緒になった場合
    オキソ基または基−（ＣＨ₂ ）_q −を示し、この際ｑは
    ２から５の整数であり、Ｒ⁵ は水素、ヒドロキシ、保護
    されたヒドロキシまたはＣ_1-5 アルキルを示す）の基か
    らなる群から選択される］により表される｝を有する化
    合物から選択される請求項１１記載の方法。
15. 【請求項１５】 該ビタミンＤ化合物が、投与されるビ
    タミンＤ化合物に応じて１日当たり約０．１マイクログ
    ラムから約２ミリグラムの量で投与される請求項１１記
    載の方法。
16. 【請求項１６】 該ビタミンＤ化合物が、約３週間から
    約８か月にわたり該哺乳動物に毎日投与される請求項１
    １記載の方法。
17. 【請求項１７】 該ビタミンＤ化合物を、該哺乳動物に
    より摂取可能でかつ該哺乳動物に無毒な液体賦形剤に含
    むようにして経口投与される請求項１１記載の方法。
18. 【請求項１８】 該ビタミンＤ化合物が投与に先立ち、
    無毒な薬学的に受容される担体と組み合わせられる請求
    項１１記載の方法。
19. 【請求項１９】 用いられる該ビタミンＤ化合物がビタ
    ミンＤ₃ である請求項１１記載の方法。
20. 【請求項２０】 用いられる該ビタミンＤ化合物が１，
    ２５−ジヒドロキシビタミンＤ₃ である請求項１１記載
    の方法。
21. 【請求項２１】 用いられる該ビタミンＤ化合物が１α
    −ヒドロキシビタミンＤ₃ である請求項１１記載の方
    法。