JPH07248297A - β−グルカンの測定法 - Google Patents
β−グルカンの測定法Info
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- JPH07248297A JPH07248297A JP6065423A JP6542394A JPH07248297A JP H07248297 A JPH07248297 A JP H07248297A JP 6065423 A JP6065423 A JP 6065423A JP 6542394 A JP6542394 A JP 6542394A JP H07248297 A JPH07248297 A JP H07248297A
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】 Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いるフローインジ
ェクションシステムによるβ−（１，３）（１，４）−
Ｄ−グルカンの測定法において、サンプル注入量が、反
応部分の空寸体積量が0.４ｍｌ未満の場合は、0.０３×
空寸体積量（ｍｌ）＋0.００１８≦サンプル注入量（ｍ
ｌ）≦0.０６６×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００１８を、
反応部分の空寸体積量が0.４ｍｌ以上の場合は、 0.０１×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００９８≦サンプル注
入量（ｍｌ）≦0.０２６×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００
１７８ を満足し、かつ0.００２〜0.１ｍｌの範囲内であること
を特徴とするβ−（１，３）（１，４）−Ｄ−グルカン
の測定法。 【効果】 試料中のβ−グルカン含有量を高い精度で、
かつ再現性よく測定することができる。
ェクションシステムによるβ−（１，３）（１，４）−
Ｄ−グルカンの測定法において、サンプル注入量が、反
応部分の空寸体積量が0.４ｍｌ未満の場合は、0.０３×
空寸体積量（ｍｌ）＋0.００１８≦サンプル注入量（ｍ
ｌ）≦0.０６６×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００１８を、
反応部分の空寸体積量が0.４ｍｌ以上の場合は、 0.０１×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００９８≦サンプル注
入量（ｍｌ）≦0.０２６×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００
１７８ を満足し、かつ0.００２〜0.１ｍｌの範囲内であること
を特徴とするβ−（１，３）（１，４）−Ｄ−グルカン
の測定法。 【効果】 試料中のβ−グルカン含有量を高い精度で、
かつ再現性よく測定することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、β−（１，３）（１，
４）−Ｄ−グルカン（以下、β−グルカンと略記するこ
とがある。）の測定法に関し、詳しくは各種の大麦をは
じめとする穀類や麦芽，麦汁，ビールなどに含まれるβ
−グルカンを測定する方法に関する。
４）−Ｄ−グルカン（以下、β−グルカンと略記するこ
とがある。）の測定法に関し、詳しくは各種の大麦をは
じめとする穀類や麦芽，麦汁，ビールなどに含まれるβ
−グルカンを測定する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】下記の構造式で表されるＣａｌｃｏｆｌ
ｕｏｒは、β−グルカンと特異的に結合し、その結合に
より蛍光強度が増加する蛍光剤であり、この化合物を用
いたフローインジェクション法はデンマークのカールズ
ベルグ社のヨルゲンセンらによって報告されている（Ｃ
ａｒｌｓｂｅｒｇ Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．Vol.５３，
p.２７７−２８５，１９８８；Ａｎａｌｙｔｉｃａ−Ｅ
ＢＣ，3.１１. 2.）。
ｕｏｒは、β−グルカンと特異的に結合し、その結合に
より蛍光強度が増加する蛍光剤であり、この化合物を用
いたフローインジェクション法はデンマークのカールズ
ベルグ社のヨルゲンセンらによって報告されている（Ｃ
ａｒｌｓｂｅｒｇ Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．Vol.５３，
p.２７７−２８５，１９８８；Ａｎａｌｙｔｉｃａ−Ｅ
ＢＣ，3.１１. 2.）。
【０００３】
【化１】
【０００４】また、同様の原理によるＣａｌｃｏｆｌｕ
ｏｒを用いたフローインジェクション法が数名の研究者
によって報告されており（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈ
ｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｒｅｗｉｎｇ，Vol.９
５，p.３２７，１９８９：Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈ
ｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｒｅｗｉｎｇ，Vol.
９３，p.３９６，１９８７）、 近年スウェーデンのＴ
ｅｃａｔｏｒ社やアメリカのＦｉａｔｒｏｎ社（Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ ＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅ
ｔｙ ｏｆ Ｂｒｅｗｉｎｇ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，Vol.
９３，p.３９６，１９８７）によってＣａｌｃｏｆｌｕ
ｏｒを用いたフローインジェクションシステムが市販さ
れている。
ｏｒを用いたフローインジェクション法が数名の研究者
によって報告されており（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈ
ｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｒｅｗｉｎｇ，Vol.９
５，p.３２７，１９８９：Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈ
ｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｒｅｗｉｎｇ，Vol.
９３，p.３９６，１９８７）、 近年スウェーデンのＴ
ｅｃａｔｏｒ社やアメリカのＦｉａｔｒｏｎ社（Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ ＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅ
ｔｙ ｏｆ Ｂｒｅｗｉｎｇ Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，Vol.
９３，p.３９６，１９８７）によってＣａｌｃｏｆｌｕ
ｏｒを用いたフローインジェクションシステムが市販さ
れている。
【０００５】これらはいずれも図１もしくは図２に見ら
れる様なシステムを応用したものであり、ｐＨ１０から
ｐＨ８の範囲のトリスもしくはグリシン緩衝液にＣａｌ
ｃｏｆｌｕｏｒを８〜３５ｍｇ／リットルとなるように
溶解させた反応液の流液に試料を注入もしくは試料を注
入した溶液の流液を混合し、適当なチューブを用いβ−
グルカンと結合させ、蛍光検出器にてその蛍光強度の増
加を測定するものである。これらの方法により麦汁，ビ
ール等の試料中のβ−グルカン含量を決定するにあた
り、大麦より抽出した精製β−グルカンを溶解させた濃
度既知の溶液を標準試料として用いている。
れる様なシステムを応用したものであり、ｐＨ１０から
ｐＨ８の範囲のトリスもしくはグリシン緩衝液にＣａｌ
ｃｏｆｌｕｏｒを８〜３５ｍｇ／リットルとなるように
溶解させた反応液の流液に試料を注入もしくは試料を注
入した溶液の流液を混合し、適当なチューブを用いβ−
グルカンと結合させ、蛍光検出器にてその蛍光強度の増
加を測定するものである。これらの方法により麦汁，ビ
ール等の試料中のβ−グルカン含量を決定するにあた
り、大麦より抽出した精製β−グルカンを溶解させた濃
度既知の溶液を標準試料として用いている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかし、これまで報告
されているＣａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いたフローインジ
ェクション法は、サンプル注入量，混合チューブの長さ
や空寸体積量，流速，反応液ｐＨ，Ｃａｌｃｏｆｌｕｏ
ｒ濃度等がそれぞれ測定条件が異なっており、それらの
違いにより同一の試料のβ−グルカン含量の測定値が異
なることが経験されている。特に従来の報告では、測定
温度は特定されておらず、任意の室温にて通常測定がな
されていたが、測定温度によって麦汁，ビール等の試料
の測定値が変化することが認識されている。また、Ｃａ
ｌｃｏｆｌｕｏｒとβ−グルカンの結合により生じる蛍
光強度の増加量は温度により変化するが、その変化の割
合が標準サンプルの分子量１０万以上の高分子β−グル
カンとビールや麦汁等の中にいくらか含まれる分子量１
０万以下の低分子β−グルカンとでは違っており、温度
が低い程、低分子β−グルカンのＣａｌｃｏｆｌｕｏｒ
との反応による蛍光増加量が高分子β−グルカンに比べ
て高くなることが認められている。
されているＣａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いたフローインジ
ェクション法は、サンプル注入量，混合チューブの長さ
や空寸体積量，流速，反応液ｐＨ，Ｃａｌｃｏｆｌｕｏ
ｒ濃度等がそれぞれ測定条件が異なっており、それらの
違いにより同一の試料のβ−グルカン含量の測定値が異
なることが経験されている。特に従来の報告では、測定
温度は特定されておらず、任意の室温にて通常測定がな
されていたが、測定温度によって麦汁，ビール等の試料
の測定値が変化することが認識されている。また、Ｃａ
ｌｃｏｆｌｕｏｒとβ−グルカンの結合により生じる蛍
光強度の増加量は温度により変化するが、その変化の割
合が標準サンプルの分子量１０万以上の高分子β−グル
カンとビールや麦汁等の中にいくらか含まれる分子量１
０万以下の低分子β−グルカンとでは違っており、温度
が低い程、低分子β−グルカンのＣａｌｃｏｆｌｕｏｒ
との反応による蛍光増加量が高分子β−グルカンに比べ
て高くなることが認められている。
【０００７】よって、測定温度が低温である程、ビー
ル，麦汁等の低分子β−グルカンを含む試料の測定値が
高くなる。ところで、通常麦汁には、様々な糖成分が含
まれており、ビールには糖の他にエタノールが含まれて
いるが、この様な成分が従来のＣａｌｃｏｆｌｕｏｒを
用いたフローインジェクション法の測定値に影響を与え
ることも認められた。これらの事象は大麦抽出液，麦
汁，ビール等の中に含まれるβ−グルカンを測定する上
において誤差を生む原因となることは明かである。その
ため、測定時の室温や糖類，エタノール等の影響を受け
ないシステム、測定条件を設定することが精度の向上に
有効であり、その開発が待たれている。
ル，麦汁等の低分子β−グルカンを含む試料の測定値が
高くなる。ところで、通常麦汁には、様々な糖成分が含
まれており、ビールには糖の他にエタノールが含まれて
いるが、この様な成分が従来のＣａｌｃｏｆｌｕｏｒを
用いたフローインジェクション法の測定値に影響を与え
ることも認められた。これらの事象は大麦抽出液，麦
汁，ビール等の中に含まれるβ−グルカンを測定する上
において誤差を生む原因となることは明かである。その
ため、測定時の室温や糖類，エタノール等の影響を受け
ないシステム、測定条件を設定することが精度の向上に
有効であり、その開発が待たれている。
【０００８】
【課題を解決するための手段および作用】本発明の目的
は、Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いるフローインジェクシ
ョン法によるβ−グルカンの測定精度と再現性の向上を
図ることにあり、そのための第１の手段として従来任意
の室温にて行われていた測定をシステムの一部、最適な
条件としてはシステム全てを同一の温度にて保持するこ
とにより行い、温度変化による測定値の変動を防ぐこと
である。第２の手段として、試料中の糖やエタノール等
の目的とするβ−グルカン以外の成分による影響を低減
し、種々の試料において客観的な測定値が得られる様な
測定条件を設定することである。
は、Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いるフローインジェクシ
ョン法によるβ−グルカンの測定精度と再現性の向上を
図ることにあり、そのための第１の手段として従来任意
の室温にて行われていた測定をシステムの一部、最適な
条件としてはシステム全てを同一の温度にて保持するこ
とにより行い、温度変化による測定値の変動を防ぐこと
である。第２の手段として、試料中の糖やエタノール等
の目的とするβ−グルカン以外の成分による影響を低減
し、種々の試料において客観的な測定値が得られる様な
測定条件を設定することである。
【０００９】本発明は、Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いる
フローインジェクションシステムによるβ−グルカンの
測定法において、該システムのＣａｌｃｏｆｌｕｏｒ反
応液と試料を混合する箇所より検出器までの間にある反
応部分を０〜４０℃の温度範囲で一定温度に保つことを
特徴とするβ−グルカンの測定法並びにＣａｌｃｏｆｌ
ｕｏｒを用いるフローインジェクションシステムによる
β−（１，３）（１，４）−Ｄ−グルカンの測定法にお
いて、サンプル注入量が、反応部分の空寸体積量が0.４
ｍｌ未満の場合は、
フローインジェクションシステムによるβ−グルカンの
測定法において、該システムのＣａｌｃｏｆｌｕｏｒ反
応液と試料を混合する箇所より検出器までの間にある反
応部分を０〜４０℃の温度範囲で一定温度に保つことを
特徴とするβ−グルカンの測定法並びにＣａｌｃｏｆｌ
ｕｏｒを用いるフローインジェクションシステムによる
β−（１，３）（１，４）−Ｄ−グルカンの測定法にお
いて、サンプル注入量が、反応部分の空寸体積量が0.４
ｍｌ未満の場合は、
【００１０】
【数５】0.０３×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００１８≦サ
ンプル注入量（ｍｌ）≦0.０６６×空寸体積量（ｍｌ）
＋0.００１８
ンプル注入量（ｍｌ）≦0.０６６×空寸体積量（ｍｌ）
＋0.００１８
【００１１】を、反応部分の空寸体積量が0.４ｍｌ以上
の場合は、
の場合は、
【００１２】
【数６】0.０１×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００９８≦サ
ンプル注入量（ｍｌ）≦0.０２６×空寸体積量（ｍｌ）
＋0.００１７８
ンプル注入量（ｍｌ）≦0.０２６×空寸体積量（ｍｌ）
＋0.００１７８
【００１３】を満足し、かつ0.００２〜0.１ｍｌの範囲
内であることを特徴とするβ−（１，３）（１，４）−
Ｄ−グルカンの測定法を提供するものである。
内であることを特徴とするβ−（１，３）（１，４）−
Ｄ−グルカンの測定法を提供するものである。
【００１４】本発明の方法は、図１および図２に示され
た従来用いられていたシステムをそのまま応用すること
が可能である。測定温度の一定化において最も重要な部
分は試料注入後より検出器に至るまでの反応および混合
部分である。この部分によりＣａｌｃｏｆｌｕｏｒとβ
−グルカンの結合が実質的に行われるため、この部分を
一定温度に保つことにより室温の相違による測定値の変
化をかなり低減することができる。
た従来用いられていたシステムをそのまま応用すること
が可能である。測定温度の一定化において最も重要な部
分は試料注入後より検出器に至るまでの反応および混合
部分である。この部分によりＣａｌｃｏｆｌｕｏｒとβ
−グルカンの結合が実質的に行われるため、この部分を
一定温度に保つことにより室温の相違による測定値の変
化をかなり低減することができる。
【００１５】さらに、Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒ反応液およ
び該反応液の容器を反応部分と同様の温度で一定に保つ
ことがより効果的である。反応部分が短い場合には、試
料が検出器に至るまでの間に目的の温度に達しない可能
性があるため、その様な場合には、予め反応液の温度を
反応部分の温度と同一にしておくことが必要であると考
えられる。また、検出器も反応部分と同一の温度に保つ
ことがより望ましい。その理由は、検出器の内部におい
て、実際の測定セル部分に至るまでに試料の温度変化の
可能性が考えられるからである。最も効果的に温度変化
の影響を無くすことができるのは、上記の部分だけでは
なくポンプ，サンプルインジェクターを含めたシステム
全体を一定の温度に保持することである。
び該反応液の容器を反応部分と同様の温度で一定に保つ
ことがより効果的である。反応部分が短い場合には、試
料が検出器に至るまでの間に目的の温度に達しない可能
性があるため、その様な場合には、予め反応液の温度を
反応部分の温度と同一にしておくことが必要であると考
えられる。また、検出器も反応部分と同一の温度に保つ
ことがより望ましい。その理由は、検出器の内部におい
て、実際の測定セル部分に至るまでに試料の温度変化の
可能性が考えられるからである。最も効果的に温度変化
の影響を無くすことができるのは、上記の部分だけでは
なくポンプ，サンプルインジェクターを含めたシステム
全体を一定の温度に保持することである。
【００１６】しかし、余りに高い測定温度はＣａｌｃｏ
ｆｌｕｏｒとβ−グルカンの結合を妨げるので、望まし
くない。通常、実用的には０℃から４０℃程度の温度が
適当であり、システムそのものを一定温度に保つ場合に
は、１５〜３０℃程度が望ましい。Ｃａｌｃｏｆｌｕｏ
ｒを用いたフローインジェクション法によるβ−グルカ
ンの測定法の種々の条件の中で、サンプル注入量と反応
部分空寸体積量が、試料中に含まれる糖類やエタノール
による測定値への影響の程度に最も関係する。サンプル
注入量が多くなればなるほど、糖類やエタノールを含ん
でいる試料の測定値は、これらを含んでいない試料に比
べて低くなるが、逆にある注入量より少なくなればなる
ほど、糖類やエタノールを含んでいる試料の測定値は、
これらを含んでいない試料に比べて高くなる。
ｆｌｕｏｒとβ−グルカンの結合を妨げるので、望まし
くない。通常、実用的には０℃から４０℃程度の温度が
適当であり、システムそのものを一定温度に保つ場合に
は、１５〜３０℃程度が望ましい。Ｃａｌｃｏｆｌｕｏ
ｒを用いたフローインジェクション法によるβ−グルカ
ンの測定法の種々の条件の中で、サンプル注入量と反応
部分空寸体積量が、試料中に含まれる糖類やエタノール
による測定値への影響の程度に最も関係する。サンプル
注入量が多くなればなるほど、糖類やエタノールを含ん
でいる試料の測定値は、これらを含んでいない試料に比
べて低くなるが、逆にある注入量より少なくなればなる
ほど、糖類やエタノールを含んでいる試料の測定値は、
これらを含んでいない試料に比べて高くなる。
【００１７】糖類やエタノールによる測定値への影響
が、これらを含んでいない試料に対して測定値を高くす
る作用から低くする作用に変わる特定のサンプル注入量
が存在することが確認された。しかし、そのサンプル注
入量は、反応部分の空寸体積量に応じて変化するもので
ある。よって、特定の反応部分の空寸体積量に対して糖
類やエタノールの影響を余り受けない特定のサンプル注
入量が存在するわけである。しかしながら、これらはそ
の他の測定条件によって若干の影響を受けるとともに、
糖類とエタノールの種類や含有量等によっても若干異な
ることから、次のような条件を設定することが適切であ
る。
が、これらを含んでいない試料に対して測定値を高くす
る作用から低くする作用に変わる特定のサンプル注入量
が存在することが確認された。しかし、そのサンプル注
入量は、反応部分の空寸体積量に応じて変化するもので
ある。よって、特定の反応部分の空寸体積量に対して糖
類やエタノールの影響を余り受けない特定のサンプル注
入量が存在するわけである。しかしながら、これらはそ
の他の測定条件によって若干の影響を受けるとともに、
糖類とエタノールの種類や含有量等によっても若干異な
ることから、次のような条件を設定することが適切であ
る。
【００１８】サンプル注入量が、反応部分の空寸体積量
が0.４ｍｌ未満の場合は、
が0.４ｍｌ未満の場合は、
【００１９】
【数７】0.０３×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００１８≦サ
ンプル注入量（ｍｌ）≦0.０６６×空寸体積量（ｍｌ）
＋0.００１８
ンプル注入量（ｍｌ）≦0.０６６×空寸体積量（ｍｌ）
＋0.００１８
【００２０】を、また反応部分の空寸体積量が0.４ｍｌ
以上の場合は、
以上の場合は、
【００２１】
【数８】0.０１×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００９８≦サ
ンプル注入量（ｍｌ）≦0.０２６×空寸体積量（ｍｌ）
＋0.００１７８
ンプル注入量（ｍｌ）≦0.０２６×空寸体積量（ｍｌ）
＋0.００１７８
【００２２】を満足し、かつ0.００２〜0.１ｍｌの範囲
内とすること。この条件を詳しく説明すると、反応部分
の空寸体積量が0.１〜0.２ｍｌのときは、サンプル注入
量を0.００６〜0.０１４ｍｌとし、空寸体積量が0.２〜
0.２５ｍｌのときは、サンプル注入量を0.００８〜0.０
１７ｍｌとし、空寸体積量が0.２５〜0.３ｍｌのとき
は、サンプル注入量を0.０１１〜0.０１９ｍｌとし、空
寸体積量が0.３〜0.４ｍｌのときは、サンプル注入量を
0.０１２〜0.０２５ｍｌとし、空寸体積量が0.４〜0.６
ｍｌのときは、サンプル注入量を0.０１３〜0.０３ｍｌ
とし、空寸体積量が0.６〜0.８ｍｌのときは、サンプル
注入量を0.０１５〜0.０３５ｍｌとし、空寸体積量が0.
８〜1.０ｍｌのときは、サンプル注入量を0.０２〜0.０
４ｍｌとし、空寸体積量が1.０〜1.５ｍｌのときは、サ
ンプル注入量を0.０２５〜0.０５ｍｌとし、空寸体積量
が1.５〜2.０ｍｌのときは、サンプル注入量を0.０３〜
0.０６ｍｌとすればよい。この様な条件下で測定を行え
ば、従来のＣａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いたフローインジ
ェクション法によるβ−グルカンの測定法に比べて、糖
類やエタノール等の影響を受けない、より客観的なβ−
グルカンそのものだけを測定することが可能である。
内とすること。この条件を詳しく説明すると、反応部分
の空寸体積量が0.１〜0.２ｍｌのときは、サンプル注入
量を0.００６〜0.０１４ｍｌとし、空寸体積量が0.２〜
0.２５ｍｌのときは、サンプル注入量を0.００８〜0.０
１７ｍｌとし、空寸体積量が0.２５〜0.３ｍｌのとき
は、サンプル注入量を0.０１１〜0.０１９ｍｌとし、空
寸体積量が0.３〜0.４ｍｌのときは、サンプル注入量を
0.０１２〜0.０２５ｍｌとし、空寸体積量が0.４〜0.６
ｍｌのときは、サンプル注入量を0.０１３〜0.０３ｍｌ
とし、空寸体積量が0.６〜0.８ｍｌのときは、サンプル
注入量を0.０１５〜0.０３５ｍｌとし、空寸体積量が0.
８〜1.０ｍｌのときは、サンプル注入量を0.０２〜0.０
４ｍｌとし、空寸体積量が1.０〜1.５ｍｌのときは、サ
ンプル注入量を0.０２５〜0.０５ｍｌとし、空寸体積量
が1.５〜2.０ｍｌのときは、サンプル注入量を0.０３〜
0.０６ｍｌとすればよい。この様な条件下で測定を行え
ば、従来のＣａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いたフローインジ
ェクション法によるβ−グルカンの測定法に比べて、糖
類やエタノール等の影響を受けない、より客観的なβ−
グルカンそのものだけを測定することが可能である。
【００２３】
【実施例】以下、本発明を実施例により詳しく説明す
る。 実施例１ 図１に示したシステムを使用し、室温を所定温度に設定
して行った。反応液としてＣａｌｃｏｆｌｕｏｒ １５
ｍｇ／リットル，ＴｒｉｔｏｎＸ１００ １０ｍｇ／リ
ットル（0.１Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ−ＮａＯＨ緩衝液，ｐ
Ｈ９中）を使用し、流速３ｍｌ／ｍｉｎの条件で実施し
た。なお、蛍光検出器の励起波長は３６０ｎｍ、蛍光波
長は４２０ｎｍで測定した。反応部分として内径0.５ｍ
ｍ, 長さ４ｍのテフロンチューブを使用した。サンプル
注入量は0.０２ｍｌとし、反応部分の温度を恒温槽にて
制御し２０℃とした。
る。 実施例１ 図１に示したシステムを使用し、室温を所定温度に設定
して行った。反応液としてＣａｌｃｏｆｌｕｏｒ １５
ｍｇ／リットル，ＴｒｉｔｏｎＸ１００ １０ｍｇ／リ
ットル（0.１Ｍ Ｇｌｙｃｉｎｅ−ＮａＯＨ緩衝液，ｐ
Ｈ９中）を使用し、流速３ｍｌ／ｍｉｎの条件で実施し
た。なお、蛍光検出器の励起波長は３６０ｎｍ、蛍光波
長は４２０ｎｍで測定した。反応部分として内径0.５ｍ
ｍ, 長さ４ｍのテフロンチューブを使用した。サンプル
注入量は0.０２ｍｌとし、反応部分の温度を恒温槽にて
制御し２０℃とした。
【００２４】標準溶液として大麦より抽出した精製β−
グルカン（Ｓｉｇｍａ社製）を３０ｍｇ／リットル、５
０ｍｇ／リットル、７５ｍｇ／リットル、１００ｍｇ／
リットル、１５０ｍｇ／リットル、２００ｍｇ／リット
ル、２５０ｍｇ／リットル、３００ｍｇ／リットルとな
るように蒸留水中に溶解させたものを使用し、各標準溶
液により得られる測定ピークの高さより検量線を作製し
た。一方、麦汁ＡまたはビールＡを試料として用い、試
料のピークの高さを測定し、上記検量線より試料中のβ
−グルカン含量を決定した。結果を第１表に示す。
グルカン（Ｓｉｇｍａ社製）を３０ｍｇ／リットル、５
０ｍｇ／リットル、７５ｍｇ／リットル、１００ｍｇ／
リットル、１５０ｍｇ／リットル、２００ｍｇ／リット
ル、２５０ｍｇ／リットル、３００ｍｇ／リットルとな
るように蒸留水中に溶解させたものを使用し、各標準溶
液により得られる測定ピークの高さより検量線を作製し
た。一方、麦汁ＡまたはビールＡを試料として用い、試
料のピークの高さを測定し、上記検量線より試料中のβ
−グルカン含量を決定した。結果を第１表に示す。
【００２５】実施例２ 反応液およびその容器の温度を恒温槽にて２０℃に制御
したこと以外は実施例１と同一システム・同一条件にて
試料の麦汁ＡまたはビールＡについてピークの高さを測
定し、実施例１と同様の標準溶液を用いて作成した検量
線より試料中のβ−グルカン含量を決定した。その結果
を第１表に示す。
したこと以外は実施例１と同一システム・同一条件にて
試料の麦汁ＡまたはビールＡについてピークの高さを測
定し、実施例１と同様の標準溶液を用いて作成した検量
線より試料中のβ−グルカン含量を決定した。その結果
を第１表に示す。
【００２６】実施例３ システム全体を恒温槽にて２０℃に制御したこと以外は
実施例１と同一システム・同一条件にて試料の麦汁Ａま
たはビールＡについてピークの高さを測定し、実施例１
と同様の標準溶液を用いて作成した検量線より試料中の
β−グルカン含量を決定した。結果を第１表に示す。
実施例１と同一システム・同一条件にて試料の麦汁Ａま
たはビールＡについてピークの高さを測定し、実施例１
と同様の標準溶液を用いて作成した検量線より試料中の
β−グルカン含量を決定した。結果を第１表に示す。
【００２７】実施例４ システム全体を恒温槽にて２５℃に制御したこと以外は
実施例１と同一システム・同一条件にて試料の麦汁Ａま
たはビールＡについてピークの高さを測定し、実施例１
と同様の標準溶液を用いて作成した検量線より試料中の
β−グルカン含量を決定した。結果を第１表に示す。
実施例１と同一システム・同一条件にて試料の麦汁Ａま
たはビールＡについてピークの高さを測定し、実施例１
と同様の標準溶液を用いて作成した検量線より試料中の
β−グルカン含量を決定した。結果を第１表に示す。
【００２８】
【表１】
【００２９】実施例５ 実施例３と同じシステムを用いたが、反応部分に内径0.
５ｍｍ、長さ１ｍのテフロンチューブを用い、サンプル
注入量を0.０１ｍｌとしたこと以外は実施例３と同様に
して所定の試料（１：大麦精製βグルカンを0.１Ｎ硫酸
中に溶解させ、煮沸湯浴中で１時間加水分解後、水酸化
ナトリウムで中和して得た低分子量のβ−グルカン（以
下、低分子量のβ−グルカンと称する。）を含む水溶
液、２：低分子量のβ−グルカンと５％エタノールを含
む水溶液、３：低分子量のβ−グルカンと１０％マルト
ースを含む水溶液）についてピークの高さを測定し、実
施例１と同様の標準溶液を用いて作成した検量線より試
料中のβ−グルカン含量を決定した。その結果を実施例
３の結果と共に第２表に示す。
５ｍｍ、長さ１ｍのテフロンチューブを用い、サンプル
注入量を0.０１ｍｌとしたこと以外は実施例３と同様に
して所定の試料（１：大麦精製βグルカンを0.１Ｎ硫酸
中に溶解させ、煮沸湯浴中で１時間加水分解後、水酸化
ナトリウムで中和して得た低分子量のβ−グルカン（以
下、低分子量のβ−グルカンと称する。）を含む水溶
液、２：低分子量のβ−グルカンと５％エタノールを含
む水溶液、３：低分子量のβ−グルカンと１０％マルト
ースを含む水溶液）についてピークの高さを測定し、実
施例１と同様の標準溶液を用いて作成した検量線より試
料中のβ−グルカン含量を決定した。その結果を実施例
３の結果と共に第２表に示す。
【００３０】比較例１ 実施例１と同じシステムをしたが、反応部分も含めてシ
ステム全体の温度を制御することなく実施したこと以外
は実施例１と同様にして試料の麦汁ＡまたはビールＡに
ついてピークの高さを測定し、実施例１と同様の標準溶
液を用いて作成した検量線より試料中のβ−グルカン含
量を決定した。結果を第１表に示す。
ステム全体の温度を制御することなく実施したこと以外
は実施例１と同様にして試料の麦汁ＡまたはビールＡに
ついてピークの高さを測定し、実施例１と同様の標準溶
液を用いて作成した検量線より試料中のβ−グルカン含
量を決定した。結果を第１表に示す。
【００３１】比較例２ 実施例３と同じシステムを用いたが、サンプル注入量を
0.０１ｍｌとしたこと以外は実施例３と同様にして試料
（１：低分子量のβ−グルカンを含む水溶液、２：低分
子量のβ−グルカンと５％エタノールを含む水溶液、
３：低分子量のβ−グルカンと１０％マルトースを含む
水溶液）についてピークの高さを測定し、実施例１と同
様の標準溶液を用いて作成した検量線より試料中のβ−
グルカン含量を決定した。結果を第２表に示す。
0.０１ｍｌとしたこと以外は実施例３と同様にして試料
（１：低分子量のβ−グルカンを含む水溶液、２：低分
子量のβ−グルカンと５％エタノールを含む水溶液、
３：低分子量のβ−グルカンと１０％マルトースを含む
水溶液）についてピークの高さを測定し、実施例１と同
様の標準溶液を用いて作成した検量線より試料中のβ−
グルカン含量を決定した。結果を第２表に示す。
【００３２】比較例３ 実施例５と同様のシステムを用いたが、サンプル注入量
を0.０２５ｍｌとしたこと以外は実施例３と同様にして
試料（１：低分子量のβ−グルカンを含む水溶液、２：
低分子量のβ−グルカンと５％エタノールを含む水溶
液、３：低分子量のβ−グルカンと１０％マルトースを
含む水溶液）についてピークの高さを測定し、実施例１
と同様の標準溶液を用いて作成した検量線より試料中の
β−グルカン含量を決定した。結果を第２表に示す。
を0.０２５ｍｌとしたこと以外は実施例３と同様にして
試料（１：低分子量のβ−グルカンを含む水溶液、２：
低分子量のβ−グルカンと５％エタノールを含む水溶
液、３：低分子量のβ−グルカンと１０％マルトースを
含む水溶液）についてピークの高さを測定し、実施例１
と同様の標準溶液を用いて作成した検量線より試料中の
β−グルカン含量を決定した。結果を第２表に示す。
【００３３】
【表２】
【００３４】第１表の結果から明らかなように、比較例
１の場合は、室温の変化に伴いβ−グルカンの測定値が
変化するのに対し、実施例１〜４のようにシステムの一
部もしくは全部を温度制御することにより、β−グルカ
ンの測定値が変動しなくなることが確認された。また、
低分子量のβ−グルカンの測定に際し、糖類やエタノー
ルの存在による影響について調べた結果、第２表に示し
たように、反応部分の空寸体積量に対して適切なサンプ
ル注入量を用いた実施例の場合は、糖類やエタノールの
存在による影響を殆ど受けないのに対し、注入量が本発
明の条件と合致しないサンプル注入量を用いた比較例の
場合はこれらの影響を強く受けることが確認された。
１の場合は、室温の変化に伴いβ−グルカンの測定値が
変化するのに対し、実施例１〜４のようにシステムの一
部もしくは全部を温度制御することにより、β−グルカ
ンの測定値が変動しなくなることが確認された。また、
低分子量のβ−グルカンの測定に際し、糖類やエタノー
ルの存在による影響について調べた結果、第２表に示し
たように、反応部分の空寸体積量に対して適切なサンプ
ル注入量を用いた実施例の場合は、糖類やエタノールの
存在による影響を殆ど受けないのに対し、注入量が本発
明の条件と合致しないサンプル注入量を用いた比較例の
場合はこれらの影響を強く受けることが確認された。
【００３５】
【発明の効果】本発明の方法によれば、試料に含まれる
糖類やエタノールなどの成分による影響を受けないで、
試料中のβ−グルカン含有量を高い精度で、かつ再現性
よく測定することができる。したがって、種々の穀類，
麦芽抽出液，麦汁，ビールなどの試料中のβ−グルカン
含有量を客観的に比較、評価することが可能である。
糖類やエタノールなどの成分による影響を受けないで、
試料中のβ−グルカン含有量を高い精度で、かつ再現性
よく測定することができる。したがって、種々の穀類，
麦芽抽出液，麦汁，ビールなどの試料中のβ−グルカン
含有量を客観的に比較、評価することが可能である。
【図１】 Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いたフローインジ
ェクション法によるβ−グルカン含有量の測定システム
の１例を示す。
ェクション法によるβ−グルカン含有量の測定システム
の１例を示す。
【図２】 Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いたフローインジ
ェクション法によるβ−グルカン含有量の測定システム
の他の例を示す。
ェクション法によるβ−グルカン含有量の測定システム
の他の例を示す。
１ Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒ反応液 ２ ポンプ ３ サンプル注入器 ４ 反応部分 ５ 積分器 ６ 蛍光検出器 ７ 廃液 ８ 緩衝液
Claims (10)
- 【請求項１】 Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いるフローイ
ンジェクションシステムによるβ−（１，３）（１，
４）−Ｄ−グルカンの測定法において、該システムのＣ
ａｌｃｏｆｌｕｏｒ反応液と試料を混合する箇所より検
出器までの間にある反応部分を０〜４０℃の温度範囲で
一定温度に保つことを特徴とするβ−（１，３）（１，
４）−Ｄ−グルカンの測定法。 - 【請求項２】 Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒ反応液および該反
応液を収容した容器を０〜４０℃の温度範囲で一定温度
に保つ請求項１記載のβ−（１，３）（１，４）−Ｄ−
グルカンの測定法。 - 【請求項３】 検出器を０〜４０℃の温度範囲で一定温
度に保つ請求項１記載のβ−（１，３）（１，４）−Ｄ
−グルカンの測定法。 - 【請求項４】 ポンプ・サンプルインジェクターを含め
たシステム全体を０〜４０℃の温度範囲で一定温度に保
つ請求項１記載のβ−（１，３）（１，４）−Ｄ−グル
カンの測定法。 - 【請求項５】 サンプル注入量が、反応部分の空寸体積
量が0.４ｍｌ未満の場合は、 【数１】0.０３×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００１８≦サ
ンプル注入量（ｍｌ）≦0.０６６×空寸体積量（ｍｌ）
＋0.００１８ を、反応部分の空寸体積量が0.４ｍｌ以上の場合は、 【数２】0.０１×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００９８≦サ
ンプル注入量（ｍｌ）≦0.０２６×空寸体積量（ｍｌ）
＋0.００１７８ を満足し、かつ0.００２〜0.１ｍｌの範囲内である請求
項１〜４のいずれかに記載のβ−（１，３）（１，４）
−Ｄ−グルカンの測定法。 - 【請求項６】 反応部分の空寸体積量が0.７〜0.９ｍｌ
の場合に、サンプル注入量が0.０１７〜0.０３ｍｌの範
囲内である請求項１〜４のいずれかに記載のβ−（１，
３）（１，４）−Ｄ−グルカンの測定法。 - 【請求項７】 反応部分の空寸体積量が0.４〜0.７ｍｌ
の場合に、サンプル注入量が0.０１５〜0.０２５ｍｌの
範囲内である請求項１〜４のいずれかに記載のβ−
（１，３）（１，４）−Ｄ−グルカンの測定法。 - 【請求項８】 Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いるフローイ
ンジェクションシステムによるβ−（１，３）（１，
４）−Ｄ−グルカンの測定法において、サンプル注入量
が、反応部分の空寸体積量が0.４ｍｌ未満の場合は、 【数３】0.０３×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００１８≦サ
ンプル注入量（ｍｌ）≦0.０６６×空寸体積量（ｍｌ）
＋0.００１８ を、反応部分の空寸体積量が0.４ｍｌ以上の場合は、 【数４】0.０１×空寸体積量（ｍｌ）＋0.００９８≦サ
ンプル注入量（ｍｌ）≦0.０２６×空寸体積量（ｍｌ）
＋0.００１７８ を満足し、かつ0.００２〜0.１ｍｌの範囲内であること
を特徴とするβ−（１，３）（１，４）−Ｄ−グルカン
の測定法。 - 【請求項９】 Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いるフローイ
ンジェクションシステムによるβ−（１，３）（１，
４）−Ｄ−グルカンの測定法において、反応部分の空寸
体積量が0.７〜0.９ｍｌで、サンプル注入量が0.０１７
〜0.０３ｍｌの範囲内であることを特徴とするβ−
（１，３）（１，４）−Ｄ−グルカンの測定法。 - 【請求項１０】 Ｃａｌｃｏｆｌｕｏｒを用いるフロー
インジェクションシステムによるβ−（１，３）（１，
４）−Ｄ−グルカンの測定法において、反応部分の空寸
体積量が0.４〜0.７ｍｌで、サンプル注入量が0.０１５
〜0.０２５ｍｌの範囲内であることを特徴とするβ−
（１，３）（１，４）−Ｄ−グルカンの測定法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6065423A JPH07248297A (ja) | 1994-03-10 | 1994-03-10 | β−グルカンの測定法 |
| US08/394,287 US5585274A (en) | 1994-03-10 | 1995-02-24 | Method for measuring β-glucan |
| DE19508028A DE19508028C2 (de) | 1994-03-10 | 1995-03-07 | Verfahren zur Messung des ß-Glucan-Gehaltes in einer Probe |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6065423A JPH07248297A (ja) | 1994-03-10 | 1994-03-10 | β−グルカンの測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07248297A true JPH07248297A (ja) | 1995-09-26 |
Family
ID=13286651
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6065423A Pending JPH07248297A (ja) | 1994-03-10 | 1994-03-10 | β−グルカンの測定法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5585274A (ja) |
| JP (1) | JPH07248297A (ja) |
| DE (1) | DE19508028C2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6008054A (en) * | 1995-03-29 | 1999-12-28 | Sapporo Breweries Limited | Method of measuring a β-glucan |
| US20040023923A1 (en) * | 2000-07-03 | 2004-02-05 | Morgan Keith Raymond | Cold water soluble beta-glucan product and process for preparing the same |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4997627A (en) * | 1987-07-17 | 1991-03-05 | Fisher Scientific Company | Sample analysis |
-
1994
- 1994-03-10 JP JP6065423A patent/JPH07248297A/ja active Pending
-
1995
- 1995-02-24 US US08/394,287 patent/US5585274A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-07 DE DE19508028A patent/DE19508028C2/de not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5585274A (en) | 1996-12-17 |
| DE19508028A1 (de) | 1995-10-05 |
| DE19508028C2 (de) | 1999-07-22 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20030416 |
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