JPH0723892B2 - ジゴキシンアッセイ用血清予備処理 - Google Patents
ジゴキシンアッセイ用血清予備処理Info
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- JPH0723892B2 JPH0723892B2 JP60130669A JP13066985A JPH0723892B2 JP H0723892 B2 JPH0723892 B2 JP H0723892B2 JP 60130669 A JP60130669 A JP 60130669A JP 13066985 A JP13066985 A JP 13066985A JP H0723892 B2 JPH0723892 B2 JP H0723892B2
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- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
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Description
【発明の詳細な説明】 ［発明の背景］ （発明分野） ジゴキシンおよびジゴキシン誘導体は、しばしばジギタ
リス成分として、心臓病の処置に広範な用途を有する。
ジゴキシンは活性が高く、治療力のある範囲が狭い。さ
らに、この薬剤は重大な副作用をもたらし得るので、ジ
ゴキシンレベルの監視は患者の安全上重要である。
リス成分として、心臓病の処置に広範な用途を有する。
ジゴキシンは活性が高く、治療力のある範囲が狭い。さ
らに、この薬剤は重大な副作用をもたらし得るので、ジ
ゴキシンレベルの監視は患者の安全上重要である。
治療力のある範囲が約0.8〜2.0ng/mlであるため、血清
中にある極めて少量のジゴキシンを測定する必要がある
のみでなく、濃度の僅かな差を識別し得ることが必要で
ある。アツセイの感度によっては、血清中のジゴキシン
濃度はアツセイ媒質中に希釈したとき検出に不充分なも
のとなり得る。また、血清試料中の天然物質が観測シグ
ナルを改変して誤まった結果を与えることもある。した
がって、ジゴキシンのアツセイに用いる血清試料を予備
処理するための簡単な手段の提供が望まれている。予備
処理法は、迅速、効果的で、しかも濃厚量の薬剤を含み
妨害物質を含まないものでなければならない。
中にある極めて少量のジゴキシンを測定する必要がある
のみでなく、濃度の僅かな差を識別し得ることが必要で
ある。アツセイの感度によっては、血清中のジゴキシン
濃度はアツセイ媒質中に希釈したとき検出に不充分なも
のとなり得る。また、血清試料中の天然物質が観測シグ
ナルを改変して誤まった結果を与えることもある。した
がって、ジゴキシンのアツセイに用いる血清試料を予備
処理するための簡単な手段の提供が望まれている。予備
処理法は、迅速、効果的で、しかも濃厚量の薬剤を含み
妨害物質を含まないものでなければならない。
（先行技術） 試料中のジゴキシン含量を定量するためのラジオイムノ
アツセイは、米国特許第3981982号に記載されている。
酵素増幅法は、米国特許第3817837号に記載されてい
る。
アツセイは、米国特許第3981982号に記載されている。
酵素増幅法は、米国特許第3817837号に記載されてい
る。
［発明の要約］ ジゴキシンのアツセイ用血清試料は、低級アルキル基で
アルキル化されたシリカゲルを含むカラム、通常予備調
製したカラムに血清試料を通すことにより予備処理され
る。次いでカラムを希酸および水で洗浄し、ジゴキシン
を水性メタノールで溶離して、妨害物質を含まないジゴ
キシン濃厚試料を得る。予備処理法は、酵素標識または
蛍光標識を用いるアツセイと組合わせて用いるのに特に
適当である。
アルキル化されたシリカゲルを含むカラム、通常予備調
製したカラムに血清試料を通すことにより予備処理され
る。次いでカラムを希酸および水で洗浄し、ジゴキシン
を水性メタノールで溶離して、妨害物質を含まないジゴ
キシン濃厚試料を得る。予備処理法は、酵素標識または
蛍光標識を用いるアツセイと組合わせて用いるのに特に
適当である。
［実施態様］ 血清試料中に存在する物質を実質的に含まない媒質中
に、ジゴキシンの定量アツセイに用い得る形で少なくと
も約２倍濃度のジゴキシンをもたらすジゴキシンのアツ
セイ用血清試料が提供される。
に、ジゴキシンの定量アツセイに用い得る形で少なくと
も約２倍濃度のジゴキシンをもたらすジゴキシンのアツ
セイ用血清試料が提供される。
この方法は、血清試料中に存在する内因性蛋白質であっ
てジゴキシンが結合している蛋白質からのジゴキシンの
分離を可能にすると考えられる。この方法は、通常炭素
原子１〜２個、特に１個または２個のアルキル基でアル
キル化されたシリカゲルを含むカラムによる逆相液体ク
ロマトグラフィーを使用する。シリカゲル粒子の寸法範
囲は約30−50μｍであり、約40μｍが好ましい。粒子は
メチルもしくはエチルシリル基でシラン化されてアルキ
ル化シリカゲル粒子を生ずる。
てジゴキシンが結合している蛋白質からのジゴキシンの
分離を可能にすると考えられる。この方法は、通常炭素
原子１〜２個、特に１個または２個のアルキル基でアル
キル化されたシリカゲルを含むカラムによる逆相液体ク
ロマトグラフィーを使用する。シリカゲル粒子の寸法範
囲は約30−50μｍであり、約40μｍが好ましい。粒子は
メチルもしくはエチルシリル基でシラン化されてアルキ
ル化シリカゲル粒子を生ずる。
使用するカラム充填材すなわちアルキル化シリカゲルの
量およびカラムの寸法は、処理すべき血清試料の量によ
り異なる。一般に、1mlの血清試料に対して約50−100mg
の充填材を用いる。シリカゲル50mgの場合、充填方法お
よびカラムの直径により異なるが、カラムの高さは約７
−20mmの間で変化し得る。
量およびカラムの寸法は、処理すべき血清試料の量によ
り異なる。一般に、1mlの血清試料に対して約50−100mg
の充填材を用いる。シリカゲル50mgの場合、充填方法お
よびカラムの直径により異なるが、カラムの高さは約７
−20mmの間で変化し得る。
カラムの充填は、適当なカラムにシリカゲルの粉末を導
入して行なう。カラムは、メタノール次いで水を加え、
任意の慣用手段例えば真空、陽圧、遠心分離等により溶
媒を除くことにより、予備調製すなわちコンディショニ
ングする。メタノール除去後、カラムを水、好ましくは
脱イオン水で洗浄する。次いで水を前記のようにして除
くと、試料に対するカラムの準備ができる。
入して行なう。カラムは、メタノール次いで水を加え、
任意の慣用手段例えば真空、陽圧、遠心分離等により溶
媒を除くことにより、予備調製すなわちコンディショニ
ングする。メタノール除去後、カラムを水、好ましくは
脱イオン水で洗浄する。次いで水を前記のようにして除
くと、試料に対するカラムの準備ができる。
次いで、前処理に用いた過剰のメタノールおよび水並び
にカラム洗液を全部除去した後、カラムに試料を加え
る。試料は、減圧または遠心分離によりカラムを吸込む
ことができ、また陽圧により圧入することもできる。試
料をカラム上に加える条件は一般に緩和なものであり、
例えば約10−20インチ（約254−508mm）Hgの範囲の真空
を用いることができる。種々の慣用装置、例えばバク・
エリユート（商標）真空箱（アナリティケム・インター
ナショナル、ハーバーシティ、カリホルニア90710）が
使用可能である。
にカラム洗液を全部除去した後、カラムに試料を加え
る。試料は、減圧または遠心分離によりカラムを吸込む
ことができ、また陽圧により圧入することもできる。試
料をカラム上に加える条件は一般に緩和なものであり、
例えば約10−20インチ（約254−508mm）Hgの範囲の真空
を用いることができる。種々の慣用装置、例えばバク・
エリユート（商標）真空箱（アナリティケム・インター
ナショナル、ハーバーシティ、カリホルニア90710）が
使用可能である。
試料をカラムに加えた後、カラムを少量の0.05−0.2N−
HCl、通常0.1N−HClで洗浄する。酸洗浄の容量は厳密で
なく、通常カラム容量のほぼ１倍であり、一般に約5ml
以下、通常約2ml以下で普通少なくとも約1mlである。酸
洗浄後、カラムを脱イオン水で洗浄してカラム充填材料
に吸着されていない残留物質を除く。この場合も、使用
する水量は厳密でなく、通常カラム容量のほぼ１倍であ
り、一般に約10ml以下、通常約5ml以下で好ましくは少
なくとも約1mlである。各洗浄液の添加後、試料につい
て前述したようにして洗浄液をカラムから除く。通常、
試料の当初容量1mlの場合、これには少なくとも約15秒
で約２分以下、一般に約20−45秒を要する。カラムの先
に残る水は、吸いとりまたは他の常用手段で除去するこ
とができる。
HCl、通常0.1N−HClで洗浄する。酸洗浄の容量は厳密で
なく、通常カラム容量のほぼ１倍であり、一般に約5ml
以下、通常約2ml以下で普通少なくとも約1mlである。酸
洗浄後、カラムを脱イオン水で洗浄してカラム充填材料
に吸着されていない残留物質を除く。この場合も、使用
する水量は厳密でなく、通常カラム容量のほぼ１倍であ
り、一般に約10ml以下、通常約5ml以下で好ましくは少
なくとも約1mlである。各洗浄液の添加後、試料につい
て前述したようにして洗浄液をカラムから除く。通常、
試料の当初容量1mlの場合、これには少なくとも約15秒
で約２分以下、一般に約20−45秒を要する。カラムの先
に残る水は、吸いとりまたは他の常用手段で除去するこ
とができる。
次いで、ジゴキシンを溶離して、アツセイに使用する純
粋形態としてジゴキシン濃縮物を得る。溶離には、血清
試料の当初容量1mlに対して溶離剤少なくとも約150μ
、好ましくは少なくとも約250μで好ましくは約500
μ以下を用いて行なう。溶離剤容量が少ないほど、最
終試料中のジゴキシン濃度が高くなる。溶離剤は、一般
に水性有機溶媒であり、有機溶媒は一般に炭素原子０−
４個と酸素および窒素から選んだヘテロ原子１−３個を
含むものである。このような溶離剤の例としては、50−
100％水性メタノール、好ましくは約60％水性メタノー
ルが含まれる。使用できる他の有機溶媒としては、ジメ
チルホルムアミド、エタノール等が含まれる。標識、例
えば酵素標識を用いるアツセイでは、有機溶媒は標識活
性に対してほとんどまたは全く有害な作用を示してはな
らない。この点については、アツセイ試薬も標識活性に
作用を及ぼすことがあり得るので、ジゴキシン濃縮物に
アツセイ試薬を加える方法についても考慮を払う必要が
ある。水性メタノールは、前述と同様にしてカラムに吸
引する。水性メタノールは、200−500μの部分として
カラムに加えることができ、溶離液は次回の添加前にカ
ラムに通す。通常、約１〜３アリコート、好ましくは１
アリコートの水性メタノールを用いて、当初の血清試料
容量の約50％以下、通常約30−50％のアツセイ容量を得
る。次いで、溶離液を集め、アツセイに使用可能とす
る。
粋形態としてジゴキシン濃縮物を得る。溶離には、血清
試料の当初容量1mlに対して溶離剤少なくとも約150μ
、好ましくは少なくとも約250μで好ましくは約500
μ以下を用いて行なう。溶離剤容量が少ないほど、最
終試料中のジゴキシン濃度が高くなる。溶離剤は、一般
に水性有機溶媒であり、有機溶媒は一般に炭素原子０−
４個と酸素および窒素から選んだヘテロ原子１−３個を
含むものである。このような溶離剤の例としては、50−
100％水性メタノール、好ましくは約60％水性メタノー
ルが含まれる。使用できる他の有機溶媒としては、ジメ
チルホルムアミド、エタノール等が含まれる。標識、例
えば酵素標識を用いるアツセイでは、有機溶媒は標識活
性に対してほとんどまたは全く有害な作用を示してはな
らない。この点については、アツセイ試薬も標識活性に
作用を及ぼすことがあり得るので、ジゴキシン濃縮物に
アツセイ試薬を加える方法についても考慮を払う必要が
ある。水性メタノールは、前述と同様にしてカラムに吸
引する。水性メタノールは、200−500μの部分として
カラムに加えることができ、溶離液は次回の添加前にカ
ラムに通す。通常、約１〜３アリコート、好ましくは１
アリコートの水性メタノールを用いて、当初の血清試料
容量の約50％以下、通常約30−50％のアツセイ容量を得
る。次いで、溶離液を集め、アツセイに使用可能とす
る。
この発明により処理してジゴキシン濃縮物とした血清試
料は、数々のアツセイ原理によりジゴキシンのアツセイ
に用いることができる。アツセイは、ヘテロジニアス法
でもホモジニアス法でもよく、酵素、放射性同位元素、
蛍光剤等の標識を含むことができる。この発明の方法
は、例えばEMIT（商標）アツセイ、EMIT（商標）QST
（商標）アツセイ等のような酵素標識アツセイ用のジゴ
キシン濃縮物の製造に特に適する。
料は、数々のアツセイ原理によりジゴキシンのアツセイ
に用いることができる。アツセイは、ヘテロジニアス法
でもホモジニアス法でもよく、酵素、放射性同位元素、
蛍光剤等の標識を含むことができる。この発明の方法
は、例えばEMIT（商標）アツセイ、EMIT（商標）QST
（商標）アツセイ等のような酵素標識アツセイ用のジゴ
キシン濃縮物の製造に特に適する。
この発明はまた、パッケージした組合わせとして、
（１）炭素原子１−２個を含むアルキル基でアルキル化
されたシリカゲルを前記の量で含む前記寸法の予じめ充
填したカラムであって血清試料を適用すべきカラム、お
よび（２）ガラスまたはプラスチックのような適当な材
料製の、バイヤルのような適当な容器に入れた、溶離剤
として用いる50−70％水性メタノール約300μ−500μ
を含む、キットを包含するものである。キットはま
た、血清試料を安全に保つ装置または血清試料をカラム
に適用する装置、前記量および濃度の希水性鉱酸、例え
ばHCl、脱イオン水等のような洗浄液を別個の容器に入
れたもの等の如き付属品を含むことができる。上記キッ
トは、ジゴキシンのアツセイ実施用キットと組合わせて
もよく、これと別のものであってもよい。
（１）炭素原子１−２個を含むアルキル基でアルキル化
されたシリカゲルを前記の量で含む前記寸法の予じめ充
填したカラムであって血清試料を適用すべきカラム、お
よび（２）ガラスまたはプラスチックのような適当な材
料製の、バイヤルのような適当な容器に入れた、溶離剤
として用いる50−70％水性メタノール約300μ−500μ
を含む、キットを包含するものである。キットはま
た、血清試料を安全に保つ装置または血清試料をカラム
に適用する装置、前記量および濃度の希水性鉱酸、例え
ばHCl、脱イオン水等のような洗浄液を別個の容器に入
れたもの等の如き付属品を含むことができる。上記キッ
トは、ジゴキシンのアツセイ実施用キットと組合わせて
もよく、これと別のものであってもよい。
［実施例］ 以下にこの発明の実施例を示すが、これらは説明のため
のものであって発明を限定するものではない。
のものであって発明を限定するものではない。
バックエリユート（Vac−Elut、商標）真空箱（アナリ
ティケム・インターナショナル）を、12−15インチ（約
305−381mm）Hgで使用した。10個以下のカラム（メチル
基でアルキル化したシリカゲルを含む、アナリティケム
製Ｃ−１形）を、真空箱の蓋内のルーアー（luer）部品
内に入れ、穴が残っている場合にはこれに栓をした。各
カラムにスペクトル測定用メタノールを満たし、メタノ
ールを13インチ（約330mm）Hgの真空で吸引した。次い
で、カラムを１カラム容量の脱イオン水で洗浄してメタ
ノールを置換した。各カラムに正確に1.0mlの血清試料
をピペットで入れ、試料を13インチ（約330mm）Hgの減
圧で吸引した。カラムを１カラム容量の0.1M−HClで洗
って挾雑物を除いた。カラムを１カラム容量の脱イオン
水で洗ってカラム充填材に吸着されない残留物を除い
た。カラムに水の残留が認められなくなるまで約30秒間
真空を適用した。（カラム容量は１−2mlである。）カ
ラム出口に残る物質を吸い取った。
ティケム・インターナショナル）を、12−15インチ（約
305−381mm）Hgで使用した。10個以下のカラム（メチル
基でアルキル化したシリカゲルを含む、アナリティケム
製Ｃ−１形）を、真空箱の蓋内のルーアー（luer）部品
内に入れ、穴が残っている場合にはこれに栓をした。各
カラムにスペクトル測定用メタノールを満たし、メタノ
ールを13インチ（約330mm）Hgの真空で吸引した。次い
で、カラムを１カラム容量の脱イオン水で洗浄してメタ
ノールを置換した。各カラムに正確に1.0mlの血清試料
をピペットで入れ、試料を13インチ（約330mm）Hgの減
圧で吸引した。カラムを１カラム容量の0.1M−HClで洗
って挾雑物を除いた。カラムを１カラム容量の脱イオン
水で洗ってカラム充填材に吸着されない残留物を除い
た。カラムに水の残留が認められなくなるまで約30秒間
真空を適用した。（カラム容量は１−2mlである。）カ
ラム出口に残る物質を吸い取った。
溶離液を集めるために、真空箱中に10×75mmの試験管を
備えた金属製収集ラックを入れた。オクッスフォード反
復ディスペンザー（例えばシェールウッド・メディカル
・カンパニーのランサー部、フォスターシティ、カリホ
ルニア）を用い、60％メタノール各500μを各カラム
に入れるか、または300μを150μづつの２部に分け
て入れた。溶離液は60％メタノールであり、真空により
カラムから吸引した。採集管は使用するまで栓をして貯
蔵した。
備えた金属製収集ラックを入れた。オクッスフォード反
復ディスペンザー（例えばシェールウッド・メディカル
・カンパニーのランサー部、フォスターシティ、カリホ
ルニア）を用い、60％メタノール各500μを各カラム
に入れるか、または300μを150μづつの２部に分け
て入れた。溶離液は60％メタノールであり、真空により
カラムから吸引した。採集管は使用するまで栓をして貯
蔵した。
最初の実験では、多数のアツセイをコバス・ビオ（Coba
s Bio、商標、ロシュ・アナリティ・インストルメント
・インコーポレイテッド、ニュージャージー）遠心分析
器上で、製造者によるEMIT（商標）アツセイ実施用操作
指示書にしたがって行なった。アツセイ用のパラメータ
ーは下記の通りである。
s Bio、商標、ロシュ・アナリティ・インストルメント
・インコーポレイテッド、ニュージャージー）遠心分析
器上で、製造者によるEMIT（商標）アツセイ実施用操作
指示書にしたがって行なった。アツセイ用のパラメータ
ーは下記の通りである。
1.単位 ng/ml（「13」エンター） 2.計算ファクター 8000 3a.標準１濃度 0.0 b.標準２濃度 0.5 c.標準３濃度 1.0カリブレーター・コンセントレーシ
ョンズ・エンター d.標準４濃度 2.0 e.標準５濃度 3.5 f.標準６濃度 5.0 6.リミット ０ 7.温度（セ氏度） 37.0 8.分析タイプ 7.3 9.波長（nm） 340 10.試料容量（μ） 24 11.希釈剤容量（μ） 15 12.試薬容量（μ） 135 13.インキュベーション時間（秒） 10 14.出発試薬容量（μ） 70 15.最初の読み時間（秒） 1.0 16.間隔 120 17.読み数 ５ 18.ブランキングモード ０ 19.プリントアウトモード １ カーブ・モデル・エン
ター プロトコルは、下記試薬を使用する。
ョンズ・エンター d.標準４濃度 2.0 e.標準５濃度 3.5 f.標準６濃度 5.0 6.リミット ０ 7.温度（セ氏度） 37.0 8.分析タイプ 7.3 9.波長（nm） 340 10.試料容量（μ） 24 11.希釈剤容量（μ） 15 12.試薬容量（μ） 135 13.インキュベーション時間（秒） 10 14.出発試薬容量（μ） 70 15.最初の読み時間（秒） 1.0 16.間隔 120 17.読み数 ５ 18.ブランキングモード ０ 19.プリントアウトモード １ カーブ・モデル・エン
ター プロトコルは、下記試薬を使用する。
1.試薬A: ニートのジゴキシン抗体と2x基質の１〜3500希釈物。
2.試薬B: ニートのジゴキシン・グルコース−６−燐酸デヒドロゲ
ナーゼ（G6PDH）コンジュゲートのＢ希釈剤による１〜2
20希釈物。
ナーゼ（G6PDH）コンジュゲートのＢ希釈剤による１〜2
20希釈物。
（Ｂ希釈剤組成は次の通り。） 0.05MトリスHCl 0.45％NaCl 0.05％NaN3 １％RSA pH7.6 3.アツセイ緩衝液： 0.6％NaCl 0.132Mトリス 0.006％チメロサール 0.12％トリトンＸ−100 0.06％NaN3 pH＝8.4 4.操作試薬A: 試薬A1容とアツセイ緩衝液８容を合わせて製造する。
5.操作試薬B: 試薬B3容とアツセイ緩衝液11容を合わせて製造する。
6.カリブレーター： カリブレーター用マトリックスとしてフレオン処理血清
を使用する。
を使用する。
7.カリブレーターレベル： カリブレーター番号 呼称ジゴキシン濃度 （ng/ml） ０ 0.0 １ 0.5 ２ 1.0 ３ 2.0 ４ 3.5 ５ 5.0 8.カリブレーターは、アツセイ用血清試料について前述
したのと同じカラム抽出法に付す。
したのと同じカラム抽出法に付す。
100mgカラムからのジゴキシンの回収率は、0.7ng/mlお
よび3.5ng/mlにおけるジゴキシンのスパイク（添加）レ
ベルにより評価した。ジゴキシン陰性の血清プールにジ
ゴキシンを添加した。0.7ng/mlの試料では、平均値0.69
1ng/ml、標準偏差（SD）0.06、変動係数（CV）8.7％、
回収率98.5％であった。3.5ng/mlでは、上記値はそれぞ
れ3.46、0.15、4.3および98.9であった。
よび3.5ng/mlにおけるジゴキシンのスパイク（添加）レ
ベルにより評価した。ジゴキシン陰性の血清プールにジ
ゴキシンを添加した。0.7ng/mlの試料では、平均値0.69
1ng/ml、標準偏差（SD）0.06、変動係数（CV）8.7％、
回収率98.5％であった。3.5ng/mlでは、上記値はそれぞ
れ3.46、0.15、4.3および98.9であった。
上記方法を反復した。上記のように実施した連続結果の
比較として、60％メタノール溶離液を用いるアナリティ
ケム100mgC1カラムと70％メタノール溶離液を用いるア
ナリティケム100mgC2カラム（エチル基でアルキル化し
たシリカゲルを含む）を比較した。結果は、ジゴキシン
不含有試料と比較したシグナル観測値の変化として得
た。下表にその結果を示す。
比較として、60％メタノール溶離液を用いるアナリティ
ケム100mgC1カラムと70％メタノール溶離液を用いるア
ナリティケム100mgC2カラム（エチル基でアルキル化し
たシリカゲルを含む）を比較した。結果は、ジゴキシン
不含有試料と比較したシグナル観測値の変化として得
た。下表にその結果を示す。
上記結果は、C2カラムよりC1カラムの方が良好な広がり
が得られると思われる点を除いて同様である。
が得られると思われる点を除いて同様である。
次の実験では、上記アツセイにおいて、この発明により
作ったジゴキシン試料を用いた結果と未抽出試料のRIA
アツセイを比較した。RIAアツセイはクリニカルアツセ
イズ、ケンブリッジ、マサチュセツツから購入した［ガ
ンマコート（Gammacoat、商標）［125I］ジゴキシンラ
ジオイムノアツセイキット］。RIAは販売元の指示にし
たがって実施した。結果の統計的要約は下記のである。
作ったジゴキシン試料を用いた結果と未抽出試料のRIA
アツセイを比較した。RIAアツセイはクリニカルアツセ
イズ、ケンブリッジ、マサチュセツツから購入した［ガ
ンマコート（Gammacoat、商標）［125I］ジゴキシンラ
ジオイムノアツセイキット］。RIAは販売元の指示にし
たがって実施した。結果の統計的要約は下記のである。
傾斜:1.086 切片：−0.339 傾斜SE:0.024 切片SE:0.051 Xavg:2.001 Yavg:1.834 SDx:0.834 SDy:0.901 相関:0.945 SEE:0.204 N:108 ｘ＝販売元の指示によるRIA ｙ＝この発明により実施したEMITアツセイ avg＝平均値 SE＝標準誤差 SD＝標準偏差 SEE＝推定値の標準誤差 Ｎ＝試料数 上記の結果から、この発明の方法がジゴキシンアツセイ
の正確さおよび再現性を著しく向上させるものであり、
特に酵素標識法においてそれが認められることが明らか
である。したがって、ジゴキシンの正確な定量ができる
ジゴキシンアツセイに用いるため高感度かつ効果的な試
料処理法が提供される。
の正確さおよび再現性を著しく向上させるものであり、
特に酵素標識法においてそれが認められることが明らか
である。したがって、ジゴキシンの正確な定量ができる
ジゴキシンアツセイに用いるため高感度かつ効果的な試
料処理法が提供される。
以上、理解を促がすために説明と例示によりこの発明を
記載したが、特許請求の範囲内で変更と改良をなし得る
ことはいうまでもない。
記載したが、特許請求の範囲内で変更と改良をなし得る
ことはいうまでもない。
フロントページの続き (72)発明者 ロバータ・ドロシア・エルンスト アメリカ合衆国カリフオルニア 94087、 サニーベイル、ロツクフエラー・ナンバー 15・ビー 902番 (72)発明者 アン・ジエニフアー・ストーン アメリカ合衆国カリフオルニア 94022、 ロス・アルトス、セコンド・ストリート・ ナンバー ６ 101番 (56)参考文献 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔ ｏｇｒａｐｈｙ，Ｖｏｌ．163（1979）Ｐ. 169−177
Claims (8)
- 【請求項１】血清中のジゴキシンを定量するために用い
る血清試料の製造法であって、炭素原子１〜２個のアル
キル基でアルキル化されたシリカゲルを含むクロマトグ
ラフィー用カラムに非前処理血清を加え、 カラムを希酸および水で洗浄し、 50−70容量％の有機溶媒を含む水性有機溶媒をほぼ上記
非前処理血清試料の容量より少ない容量で用いてジゴキ
シンを溶離し、上記有機溶媒は炭素原子１〜４個並びに
酸素および窒素からなる群から選ばれたヘテロ原子１〜
３個を含むものであることを特徴とする、方法。 - 【請求項２】アルキル基がメチルである、特許請求の範
囲第１項記載の方法。 - 【請求項３】アルキル基がエチルである、特許請求の範
囲第１項記載の方法。 - 【請求項４】有機溶媒がメタノールである、特許請求の
範囲第１項記載の方法。 - 【請求項５】水性メタノールが60容量％メタノールであ
る、特許請求の範囲第４項記載の方法。 - 【請求項６】水性メタノールを非前処理血清試料の容量
の約30−50％の容量で加える特許請求の範囲第４項記載
の方法。 - 【請求項７】非前処理血清からその中のジゴキシンを定
量するために用いる血清試料の調製用キットであって、 （ａ）炭素原子１〜２個のアルキル基でアルキル化され
たシリカゲルを含むカラム、および （ｂ）50〜70％水性有機溶媒であって、有機溶媒は、炭
素原子１〜４個並びに酸素および窒素からなる群から選
ばれたヘテロ原子１〜３個を含むものである溶離液、 を含むことを特徴とする、キット。 - 【請求項８】有機溶媒がメタノールである、特許請求の
範囲第７項記載のキット。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US621301 | 1984-06-15 | ||
| US06/621,301 US4654311A (en) | 1984-06-15 | 1984-06-15 | Serum pretreatment for digoxin assay |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6111662A JPS6111662A (ja) | 1986-01-20 |
| JPH0723892B2 true JPH0723892B2 (ja) | 1995-03-15 |
Family
ID=24489604
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60130669A Expired - Lifetime JPH0723892B2 (ja) | 1984-06-15 | 1985-06-14 | ジゴキシンアッセイ用血清予備処理 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4654311A (ja) |
| EP (1) | EP0168968B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0723892B2 (ja) |
| AT (1) | ATE61485T1 (ja) |
| CA (1) | CA1254511A (ja) |
| DE (1) | DE3581970D1 (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4652529A (en) * | 1984-10-02 | 1987-03-24 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Serum pretreatment for tricyclic antidepressant drug assays |
| US4734378A (en) * | 1985-06-26 | 1988-03-29 | Abbott Laboratories | Precipitation of interfering proteins in fluorescence polarization immunoassay for digoxin |
| DE3738467A1 (de) * | 1986-11-12 | 1988-06-01 | Hitachi Ltd | Verfahren und vorrichtung zur fluessigkeitschromatographie |
| DE3643760A1 (de) * | 1986-12-20 | 1988-06-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur anreicherung und/oder isolierung von herzglykosiden unter verwendung unpolarer adsorberharze |
| US4798804A (en) * | 1987-02-05 | 1989-01-17 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Serum pretreatment in digoxin immunoassay |
| FI890341A (fi) * | 1988-01-26 | 1989-07-27 | Hoechst Ag | Foerfarande foer immunodiagnostisk bestaemning av polyhalogenerade, plana, polycykliska, aromatiska kolvaeten. |
| US5395521A (en) * | 1991-05-31 | 1995-03-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Automated column equilibration, column loading, column washing and column elution |
| EP0995803A3 (en) * | 1998-10-20 | 2001-11-07 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Sample treating kit and sample treating method using the same for analysis with a biosensor |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2137397B1 (ja) * | 1971-05-12 | 1973-05-25 | Degussa | |
| US3817837A (en) * | 1971-05-14 | 1974-06-18 | Syva Corp | Enzyme amplification assay |
| DE2410033C2 (de) * | 1974-03-02 | 1975-09-11 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Isolierung von in lipophilen Lösungsmitteln löslichen Inhaltstoffen wäßriger Lösungen |
| US3981982A (en) * | 1974-09-11 | 1976-09-21 | Abbott Laboratories | Radioimmunoassay for determining the digoxin content of a sample |
| JPS5344466A (en) * | 1976-10-05 | 1978-04-21 | Toyota Motor Co Ltd | Hemming method and device |
| US4469797A (en) * | 1982-09-23 | 1984-09-04 | Miles Laboratories, Inc. | Digoxigenin immunogens, antibodies, labeled conjugates, and related derivatives |
-
1984
- 1984-06-15 US US06/621,301 patent/US4654311A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-06-14 CA CA000483985A patent/CA1254511A/en not_active Expired
- 1985-06-14 EP EP85304259A patent/EP0168968B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-06-14 DE DE8585304259T patent/DE3581970D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-06-14 AT AT85304259T patent/ATE61485T1/de active
- 1985-06-14 JP JP60130669A patent/JPH0723892B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ｖｏｌ．１６３（１９７９）Ｐ．１６９−１７７ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4654311A (en) | 1987-03-31 |
| ATE61485T1 (de) | 1991-03-15 |
| CA1254511A (en) | 1989-05-23 |
| JPS6111662A (ja) | 1986-01-20 |
| EP0168968A1 (en) | 1986-01-22 |
| EP0168968B1 (en) | 1991-03-06 |
| DE3581970D1 (de) | 1991-04-11 |
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