JPH0718000A - 新規ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】脳血液関門を透過して記憶改善作用を示し、な
おかつ、昇圧，抗利尿作用等の副作用のない新規ペプチ
ドの提供。 【構成】一般式 【化１】 （式中、Ｒは置換されていてもよい二価の炭化水素残基
を、ＸはArgまたはLysを、Ｙは水酸基またはGly-NH₂を
示す）で表されるペプチドまたはその塩。 【効果】本発明のペプチドまたはその塩は、脳血液関門
を透過して記憶改善作用を示し、なおかつ、昇圧，抗利
尿作用等の副作用が見られない。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は脳血液関門を透過して記
憶改善作用を示し、なおかつ、昇圧，抗利尿作用等の副
作用のない新規ペプチドに関する。

【従来の技術】脳下垂体後葉ホルモンであるバソプレッ
シンは、式

【化５】 で表される構造を有し、抗利尿および末梢血管収縮作用
を示す。また、近年、バソプレッシンが、中枢神経系に
おいて能動的回避反応消去遅延，受動的回避反応獲得促
進，実質的健忘回復など、記憶，学習に関係した作用を
示すことが明らかにされている。また、ブルバッヒ（Bu
rbach）等は、アルギニンバソプレッシン（以下、ＡＶ
Ｐと略することもある）の脳内代謝物の一部が記憶の固
定過程を促進することを報告している〔サイエンス（Ｓ
ＣＩＥＮＣＥ），２２１巻，１３１０頁，１９８３
年〕。この代謝物は、アルギニンバソプレッシンの９個
のアミノ酸のうち、第２位および第３位のチロシンとフ
ェニルアラニンが酵素的分解により外れたもので、〔pG
lu⁴，Cyt⁶〕ＡＶＰ(４−９)（以下、ＡＶＰ−Ｍ１と略
する）すなわち、式

【化６】 で表される構造を有している。さらに、特開平２−５３
７３４および特開平２−５３８００には、上記したＡＶ
Ｐ−Ｍ１のプロリンまたはアルギニン残基がＤ体である
ペプチドが向知能作用を有することが記載されている。

【０００２】

【発明が解決しようとする課題】バソプレッシンを中枢
神経系作動薬として用いる場合、抗利尿，血圧上昇作用
は副作用となり不都合を生じる。さらに、皮下投与にお
いては、上記したＡＶＰ−Ｍ１では十分な記憶改善作用
（健忘回復効果）が得られない。したがって、抗利尿，
血圧上昇作用等の副作用がなく、脳血液関門透過性の改
善されたペプチドが求められている。

【０００３】

【課題を解決するための手段】このような事情に鑑み、
本発明者らは、脳血液関門を透過し得るバソプレッシン
アナログを開発するために検討を重ね、ＡＶＰ−Ｍ１の
主鎖部分のＮ末端側とシステインのＣ末端側とを炭素鎖
で結合させることによりＡＶＰ−Ｍ１に比して、はるか
に脳血液関門の透過性が向上することを見いだした。さ
らに、これらのアナログは、抗利尿，血圧上昇作用等の
副作用が極めて弱いことを見いだした。すなわち、本発
明は（１）一般式

【化７】 （式中、Ｒは置換されていてもよい二価の炭化水素残基
を、ＸはArgまたはLysを、Ｙは水酸基またはGly-NH₂を
示す）で表されるペプチドまたはその塩，（２）アミノ
酸残基がＬ体である請求項１記載のペプチドまたはその
塩，（３）炭化水素残基が、炭素数１〜１５の炭化水素
残基である第１項記載のペプチドまたはその塩，（４）
炭化水素残基が、炭素数１〜１５のアルキレン基である
第１項記載のペプチドまたはその塩，（５）アルキレン
基が、ペンタメチレン基である第４項記載のペプチドま
たはその塩，（６）一般式

【化８】 （式中、Ｒは置換されていてもよい二価の炭化水素残基
を、ＸはArgまたはLysを、Ｙは水酸基またはGly-NH₂を
示す）で表されるペプチドまたはその塩を閉環反応に付
すことを特徴とする一般式

【化９】 （式中、Ｒは置換されていてもよい二価の炭化水素残基
を、ＸはArgまたはLysを、Ｙは水酸基またはGly-NH₂を
示す）で表されるペプチドまたはその塩の製造法，
（７）一般式

【化１０】 （式中、Ｒは置換されていてもよい二価の炭化水素残基
を、ＸはArgまたはLysを、Ｙは水酸基またはGly-NH₂を
示す）で表されるペプチドまたはその塩を含有してなる
記憶障害改善剤に関する。

【０００４】一般式〔Ｉ〕および〔II〕において、Ｒで
示される置換されていてもよい二価の炭化水素残基にお
ける二価の炭化水素残基は、好ましくは炭素数１〜１５
の二価の炭化水素残基である。該炭化水素残基として
は、例えば二価の直鎖もしくは分枝状炭化水素残基，二
価の環状炭化水素残基等が挙げられる。また、二価の直
鎖もしくは分枝状炭化水素残基と二価の環状炭化水素残
基とが２〜３個結合して二価の炭化水素残基を形成して
いてもよい。二価の直鎖もしくは分枝状炭化水素残基
は、飽和または不飽和のいずれであってもよい。該炭化
水素残基は、好ましくは炭素数１〜１５のアルキレン
基，炭素数２〜１５のアルケニレン基等である。ここに
おいて、炭素数１〜１５のアルキレン基としては、例え
ばメチレン，エチレン，トリメチレン，プロピレン，テ
トラメチレン，エチルエチレン，ペンタメチレン，ヘキ
サメチレン，ヘプタメチレン，３，３−ジメチルペンタ
メチレン，オクタメチレン，ノナメチレン，デカメチレ
ン，ウンデカメチレン，４−エチル−５−メチルオクタ
メチレン，ドデカメチレン，トリデカメチレン，テトラ
デカメチレン，４−イソプロピル−５−プロピルオクタ
メチレン，ペンタデカメチレン等が挙げられる。アルキ
レン基は、特に好ましくはペンタメチレンである。炭素
数２〜１５のアルケニレン基としては、例えばビニレ
ン，プロペニレン，メチルプロペニレン，ジメチルプロ
ペニレン，エチルプロペニレン，ブテニレン，ペンテニ
レン，ヘキセニレン，ヘプテニレン，オクテニレン，ジ
メチルヘキセニレン，４−プロピル−２−ペンテニレ
ン，ノネニレン，デセニレン，ウンデセニレン，ドデセ
ニレン，トリデセニレン，２−ノニル−２−ブテニレ
ン，テトラデセニレン，ペンタデセニレン等が挙げられ
る。

【０００５】二価の環状炭化水素残基は、飽和または不
飽和のいずれであってもよい。該炭化水素残基は、好ま
しくは炭素数３〜１０の脂環式基，炭素数６〜１４の芳
香環基等が挙げられる。二価の環状炭化水素残基は、さ
らに好ましくは炭素数６〜１０の芳香環基である。炭素
数３〜１０の脂環式基としては、例えばシクロプロピレ
ン，１，３−シクロペンチレン，３−シクロヘキセン−
１，２−イレン，２，５−シクロヘキサジエン−１，４
−イレン等が挙げられる。炭素数６〜１０の芳香環基と
しては、例えばフェニレン，ナフチレン等が挙げられ
る。

【０００６】上記した二価の直鎖もしくは分枝状炭化水
素残基と二価の環状炭化水素残基とが２〜３個結合して
二価の炭化水素残基を形成する場合、二価の直鎖もしく
は分枝状炭化水素残基としては、例えば炭素数１〜４の
アルキレン基，炭素数２〜４のアルケニレン基等が挙げ
られる。また、二価の環状炭化水素残基としては、例え
ば炭素数３〜１０の脂環式基，炭素数６〜１０の芳香環
基等が挙げられる。ここにおいて、炭素数１〜４のアル
キレン基としては、例えばメチレン，エチレン，トリメ
チレン，プロピレン，テトラメチレン，エチルエチレン
等が挙げられる。炭素数２〜４のアルケニレン基として
は、例えばビニレン，プロペニレン，メチルプロペニレ
ン，ブテニレン等が挙げられる。炭素数３〜１０の脂環
式基としては、例えばシクロプロピレン，１，３−シク
ロペンチレン，３−シクロヘキセン−１，２−イレン，
２，５−シクロヘキサジエン−１，４−イレン等が挙げ
られる。炭素数６〜１０の芳香環基としては、例えばフ
ェニレン，ナフチレン等が挙げられる。

【０００７】二価の直鎖もしくは分枝状炭化水素残基と
二価の環状炭化水素残基とが２〜３個結合して形成され
る二価の炭化水素残基としては、例えばＣ_1-4アルキレ
ン基とＣ_3-10脂環式基との組み合わせからなる基，Ｃ
_1-4アルキレン基とＣ_6-10芳香環基との組み合わせから
なる基，Ｃ_2-4アルケニレン基とＣ_3-10脂環式基との組
み合わせからなる基，Ｃ_2-4アルケニレン基とＣ_6-10芳
香環基との組み合わせからなる基，Ｃ_1-4アルキレン基
とＣ_3-10脂環式基とＣ_1-4アルキレン基との組み合わせ
からなる基，Ｃ_1-4アルキレン基とＣ_6-10芳香環基とＣ
_1-4アルキレン基との組み合わせからなる基，Ｃ_1-4アル
キレン基とＣ_3-10脂環式基とＣ_2-4アルケニレン基との
組み合わせからなる基，Ｃ_1-4アルキレン基とＣ_6-10芳
香環基とＣ_2-4アルケニレン基との組み合わせからなる
基等が挙げられる。

【０００８】二価の直鎖もしくは分枝状炭化水素残基と
二価の環状炭化水素残基とが２〜３個結合して形成され
る二価の炭化水素残基は、好ましくは二価の直鎖もしく
は分枝状炭化水素残基と二価の環状炭化水素残基とが２
個結合して形成される二価の炭化水素残基である。この
ような炭化水素残基としては、例えばＣ_1-4アルキレン
基とＣ_3-10脂環式基との組み合わせからなる基，Ｃ_1-4
アルキレン基とＣ_6-10芳香環基との組み合わせからなる
基，Ｃ_2-4アルケニレン基とＣ_3-10脂環式基との組み合
わせからなる基，Ｃ_2-4アルケニレン基とＣ_6-10芳香環
基との組み合わせからなる基等が挙げられる。二価の直
鎖もしくは分枝状炭化水素残基と二価の環状炭化水素残
基とが２〜３個結合して形成される二価の炭化水素残基
は、さらに好ましくはＣ_1-4アルキレン基とＣ_6-10芳香
環基との組み合わせからなる基，Ｃ_2-4アルケニレン基
とＣ_6-10芳香環基との組み合わせからなる基である。二
価の直鎖もしくは分枝状炭化水素残基と二価の環状炭化
水素残基とが２〜３個結合して形成される二価の炭化水
素残基は、特に好ましくはＣ_1-4アルキレン基とフェニ
レンとの組み合わせからなる基，Ｃ_2-4アルケニレン基
とフェニレンとの組み合わせからなる基である。

【０００９】Ｒで示される置換されていてもよい二価の
炭化水素残基における炭化水素残基は、さらに好ましく
は炭素数１〜１０の直鎖もしくは分枝状炭化水素残基で
ある。ここにおいて、炭素数１〜１０のアルキレン基と
しては、例えばメチレン，エチレン，トリメチレン，プ
ロピレン，テトラメチレン，エチルエチレン，ペンタメ
チレン，ヘキサメチレン，ヘプタメチレン，３，３−ジ
メチルペンタメチレン，オクタメチレン，ノナメチレ
ン，デカメチレン等が挙げられる。Ｒで示される置換さ
れていてもよい二価の炭化水素残基における炭化水素残
基は、特に好ましくは炭素数３〜８の直鎖もしくは分枝
状炭化水素残基である。ここにおいて、炭素数３〜８の
アルキレン基としては、例えばトリメチレン，プロピレ
ン，テトラメチレン，エチルエチレン，ペンタメチレ
ン，ヘキサメチレン，ヘプタメチレン，３，３−ジメチ
ルペンタメチレン，オクタメチレン等が挙げられる。ア
ルキレン基は、特に好ましくはペンタメチレンである。

【００１０】置換されていてもよい二価の炭化水素残基
における置換基としては、例えば水酸基，カルボキシル
基，アミノ基，ハロゲン，アリール基，アルコキシ基，
シクロアルキルオキシ基，アリールオキシ基，アラルキ
ルオキシ基などが挙げられる。ここにおいて、ハロゲン
としては、例えばフッ素，塩素，臭素，ヨウ素などが挙
げられる。アリール基およびアリールオキシ基における
アリール基は、好ましくは炭素数６〜１４のアリール基
（例、フェニル，ナフチル，ビフェニリル，アントリル
など）である。アリール基は、特に好ましくは炭素数６
〜１０のアリール基（例、フェニル，ナフチルなど）で
ある。アルコキシ基は、好ましくは炭素数１〜６のアル
コキシ基（例、メトキシ，エトキシ，n−プロポキシ，
イソプロポキシ，ブトキシ，イソブトキシ，sec−ブト
キシ，tert−ブトキシ，ペントキシ，イソペントキシな
ど）である。アルコキシ基は、特に好ましくは炭素数１
〜４のアルコキシ基（例、メトキシ，エトキシ，プロポ
キシ，ブトキシ，イソブトキシ，sec−ブトキシ，tert
−ブトキシなど）である。シクロアルキルオキシ基にお
けるシクロアルキル基は、好ましくは炭素数３〜１０の
シクロアルキル基（例、シクロプロピル，シクロブチ
ル，シクロペンチル，シクロヘキシル，シクロヘプチ
ル，シクロオクチル，シクロノニル，シクロデシルな
ど）である。シクロアルキル基は、特に好ましくは炭素
数３〜６のシクロアルキル基（例、シクロプロピル，シ
クロブチル，シクロペンチル，シクロヘキシルなど）で
ある。アラルキルオキシ基におけるアラルキル基は、好
ましくは炭素数７〜１９のアラルキル基（例、ベンジ
ル，フェネチル，ベンズヒドリル，（１−ナフチル）メ
チル，（２−ナフチル）メチルなど）である。アラルキ
ル基は、特に好ましくは炭素数７〜１０のアラルキル基
（例、ベンジル，フェネチルなど）である。

【００１１】Ｒは、望ましくは炭素数１〜１０の二価の
直鎖もしくは分枝状炭化水素残基である。ここにおい
て、炭素数１〜１０のアルキレン基としては、例えばメ
チレン，エチレン，トリメチレン，プロピレン，テトラ
メチレン，エチルエチレン，ペンタメチレン，ヘキサメ
チレン，ヘプタメチレン，３，３−ジメチルペンタメチ
レン，オクタメチレン，ノナメチレン，デカメチレン等
が挙げられる。Ｒは、さらに望ましくは炭素数３〜８の
二価の直鎖もしくは分枝状炭化水素残基である。ここに
おいて、炭素数３〜８のアルキレン基としては、例えば
トリメチレン，プロピレン，テトラメチレン，エチルエ
チレン，ペンタメチレン，ヘキサメチレン，ヘプタメチ
レン，３，３−ジメチルペンタメチレン，オクタメチレ
ン等が挙げられる。アルキレン基は、特に好ましくはペ
ンタメチレンである。

【００１２】本発明において、例えばアミノ酸，ペプチ
ド，化合物の残基，保護基，溶媒等をIUPAC−IUBコミッ
ション・オン・バイオロジカル・ノーメンクラチャー
（Commission on Biological Nomenclature）による略
号あるいは当該分野における慣用略号で示す場合があ
る。その例を次に掲げる。 pGlu：５−オキソ−プロリン Gln：グルタミン Asn：アスパラギン Cys：システイン Pro：プロリン Arg：アルギニン Lys：リシン Gly：グリシン Z：ベンジルオキシカルボニル Z(OMe)：ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル Boc：tert−ブトキシカルボニル MeBzl：ｐ−メチルベンジル Mts：メシチレン−２−スルフォニル Bom：ベンジルオキシメチル Acm：アセタミドメチル Tacm：トリメチルアセタミドメチル Bam：ベンズアミドメチル Pym：（２−オキソ−１−ピロリジニル）メチル Npys：３−ニトロ−２−ピリジルスルフェニル Scm：カルボメトキシスルフェニル Snm：メチルフェニルカルバモイルスルフェニル

【００１３】BOP：ベンゾトリアゾール−１−イル−オ
キシ−トリス（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサ
フルオロホスフェイト HOBt：１−ハイドロキシスクシミド DIEA：Ｎ−Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン DMF：Ｎ−Ｎ’−ジメチルホルムアミド DCM：ジクロロメタン NMP：Ｎ−メチルピロリドン THF：テトラヒドロフラン BHA 樹脂：ベンズヒドリルアミン樹脂（ポリスチレン−
１％−ジビニルベンゼンコポリマー） MBHA 樹脂：ｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（ポ
リスチレン−１％−ジビニルベンゼンコポリマー） TMSOTf：トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネ
ート TMBS：トリメチルブロモシラン TFMSAAg：トリフルオロメタンスルホン酸銀 AgBF₄：テトラフルオロホウ酸銀 上記記号はそれに相当する化合物のペプチド結合を形成
する残基，またはアシル結合を形成する残基等を示す場
合もある。本発明において、ペプチド〔Ι〕を構成する
アミノ酸残基の各々（例、プロリン，アルギニン，リシ
ン残基等）は、Ｌ体，Ｄ体またはラセミ体のいずれであ
ってもよい。本発明において、一般式〔Ｉ〕または〔I
I〕中、Ｎ末端部分の“Cys”で表されるシステインのア
ミノ基は水素原子であってもよい。

【００１４】本発明のペプチド〔Ι〕は自体公知のペプ
チド合成方法により製造される。該製造方法としては、
例えば液相法，固相法が挙げられる。ペプチド合成の
際、必要に応じてアシル化，ジスルフィド形成，保護基
の導入，保護基の脱離等の操作を任意に使用してもよ
い。該操作に用いる手段はいずれも自体公知のものであ
る。上記したペプチド合成方法としては、例えば「ザ・
ペプチド（The Peptide）」，第１巻，１９６６年，シ
ュロダー（Schroder）およびルブク（Lubke），アカデ
ミック・プレス，ニューヨーク，米国：「アミノ酸・ペ
プチド・アンド・プロテインズ（Amino Acids，Peptide
s and Proteins）」，１−５巻，ジー・ティー・ヤング
（G.T.Young）編集，ザ・ケミカル・ソサエティー（The
Chemical Society）出版，ロンドン：泉屋信夫等著
「ペプチド合成」（丸善）：矢島治明等著「続医薬品の
開発 第１４巻 ペプチド合成」（廣川書店）等に記載
された活性エステル法，カルボジイミダゾール法等が挙
げられる。

【００１５】本発明のペプチド〔Ι〕またはその塩は、
例えばペプチド〔II〕またはその塩を閉環反応に付すこ
とにより製造される。該閉環反応は、２個のシステイン
（Ｃｙｓ）残基の−ＳＨ（チオール基）が酸化反応より
（−Ｓ−Ｓ−）結合（ジスルフィド結合）を形成する反
応である。酸化反応は、例えば酸素類（例、空気等），
酸化剤（例、ヨウ素，フェリシアン化カリウム，硝酸，
塩化鉄，Ｎ−クロル−ｐ−トルエンスルホンアミド，Ｎ
−クロル−ｐ−ベンゼンスルホンアミド等）を用いるこ
とにより行われる。酸化反応は、好ましくは空気，ヨウ
素，フェリシアン化カリウム等を用いることにより行わ
れる。酸化剤を用いる場合、原料ペプチド〔II〕または
その塩に対して少なくとも当量が用いられる。酸化剤
は、好ましくは原料ペプチド〔II〕またはその塩に対し
て約５〜約４０倍当量が用いられる。酸化反応は、通
常、反応を阻害しない溶媒下で行われる。該溶媒は、酸
化剤の種類によって適宜選ばれるが、好ましくは、低級
アルコール類（例、メタノール，エタノール等），低級
脂肪酸類（例、酢酸，酪酸等），ハロゲン化炭化水素類
（例、クロロホルム，ジクロロメタン等）などである。
これらの溶媒は、適宜混合して用いてもよい。溶媒は、
好ましくは原料ペプチド〔II〕またはその塩の溶媒中の
濃度が約１〜約１０００ｍＭとなる量が用いられる。溶
媒は、さらに好ましくは原料ペプチド〔II〕またはその
塩の溶媒中の濃度が約１〜約１００ｍＭとなる量が用い
られる。反応温度は好ましくは約０〜約４０℃である。
反応温度は、さらに好ましくは約４〜約２５℃である。
反応時間は例えば約３０分〜約４８時間であるる。

【００１６】また、原料であるペプチド〔II〕は、シス
テイン（Ｃｙｓ）残基のチオール基の部分に保護基を有
していてもよい。この場合、チオール基からの保護基の
除去と閉環反応が同時に行われる。このような反応は、
チオール基から保護基を除去し、かつジスルフィド結合
を形成させる能力を有する試薬を用いることにより行わ
れる。このような試薬としては、例えばタリウムトリフ
ルオロ酢酸，シリルクロリド／スルホキシド等が挙げら
れる。この際、反応温度は好ましくは約０〜約４０℃で
ある。特にタリウムトリフルオロ酢酸を用いる場合、反
応温度は、さらに好ましくは約０〜約１０℃である。反
応時間は好ましくは約１０分〜約２時間である。例えば
タリウムトリフルオロ酢酸を用いる場合、反応時間は、
さらに好ましくは約１〜約２時間である。また、シリル
クロリド／スルホキシドを用いる場合、反応時間は、さ
らに好ましくは約１０〜約２０分である。このようにし
て得られた本発明のペプチド〔Ｉ〕またはその塩は、自
体公知の方法（例、転溶，抽出，クロマトグラフィー，
結晶化，再沈殿，凍結乾燥等）により単離もしくは精製
することができる。単離もしくは精製方法としては、ク
ロマトグラフィーを用いる方法が特に好ましい。該方法
としては、例えばゲル瀘過，陽イオンもしくは陰イオン
交換樹脂を用いるイオン交換クロマトグラフィー，疎水
クロマトグラフィー，分配吸着クロマトグラフィー，逆
相クロマトグラフィー，種々の原理によるカラムクロマ
トグラフィー，高速液体クロマトグラフィー等が挙げら
れる。

【００１７】本発明の原料であるペプチド〔II〕または
その塩は、自体公知の方法にしたがって製造することが
できる。このような方法としては、例えば液相法，固相
法が挙げられる。例えば固相法において、ペプチド〔I
I〕は、樹脂担体（例、ＢＨＡ樹脂，ＭＢＨＡ樹脂，ア
ミノメチル樹脂等）に、α−アミノ基が保護されたＣ末
端アミノ酸（例、グリシン，リシン，アルギニン等）を
結合させ、α−アミノ基の保護基の除去，保護アミノ酸
の縮合を順次繰り返し、アミノ末端に向けて目的のアミ
ノ酸配列を有する保護ペプチド樹脂を得る。次いで、得
られる保護ペプチド樹脂を酸（例、フッ化水素，トリフ
ルオロ酢酸，メタンスルホン酸，トリフルオロメタンス
ルホン酸，テトラフルオロほう酸等）と反応させて、ペ
プチドの樹脂からの脱離と全保護基の除去を一段階で行
う。この方法はペプチド合成機にも適用できる。

【００１８】ペプチド〔II〕またはその塩に関し、Ｒ部
分の合成については、Ｒがアルキレンである場合、例え
ば炭素数２では、Boc−β−アラニンのように末端にア
ミノ基を持つ化合物のアミノ基保護誘導体を原料化合物
として用いればよい。同様にして、炭素数３ではBoc−
γ−アミノ酪酸，炭素数４ではBoc−アミノ吉草酸，炭
素数５ではBoc−アミノカプロン酸，炭素数６ではBoc−
アミノヘプタン酸，炭素数７ではBoc−アミノカプリル
酸，炭素数８ではBoc−アミノノナ酸，炭素数９ではBoc
−アミノデカン酸，炭素数１０ではBoc−アミノウンデ
カン酸をそれぞれ原料化合物として用いればよい。ま
た，Ｒが環状炭化水素残基または鎖状と環状との組み合
わせによる炭化水素残基である場合、ｐ−アミノ安息香
酸，ｐ−アミノケイ皮酸等のアミノ基保護誘導体を原料
化合物として用いればよい。このようにして得られたペ
プチド〔II〕またはその塩は、自体公知の方法（例、転
溶，抽出，クロマトグラフィー，結晶化，再沈殿，凍結
乾燥等）により単離もしくは精製することができる。単
離もしくは精製方法は、上記したペプチド〔Ｉ〕の場合
と同様である。

【００１９】ペプチド〔II〕またはその塩の製造に際
し、保護アミノ酸の縮合反応に先立って反応に関与しな
いアミノ酸，グアニジノ基，チオール基等の官能基を公
知手段および保護基で保護してもよい。また、該縮合反
応に関与するアミノ基，グアニジノ基，チオール基，カ
ルボキシル基等は公知手段で活性化してもよい。反応に
関与しないアミノ基（例、グリシンのα−アミノ基等）
の保護基としては、例えば Z 基，Z(OMe) 基，Boc 基，
tert−アミルオキシカルボニル基，イソボルニルオキシ
カルボニル基，フタロイル基，トリフルオロアセチル
基，ホルミル基等が挙げられる。反応に関与しないグア
ニジノ基の保護基としては、例えばニトロ基，p−トル
エンスルフォニル（Tos）基，4−メトキシ−2,3,6−ト
リメチルベンゼンスルフォニル（Mtr）基，メシチレン
−2−スルフォニル（Mts）基，トリチル（Trt）基，2,
4,6−トリメトキシベンゼンスルフォニル（Mtb）基，2,
2,5,7,8−ペンタメチルクロマン−6−スルフォニル（Pm
c）基等が挙げられる。反応に関与しないチオール基の
保護基としては、例えばトリチル（Trt）基，ベンジル
（Bzl）基，p-メトキシベンジル（MBzl）基，メチルベ
ンジル（MeBzl）基，トリメチルベンジル（Tmb）基，ア
セタミドメチル（Acm）基，トリメチルアセタミドメチ
ル（Tacm）基，3−ニトロ−2−ピリジルスルフェニル
（Npys）基，カルボキシスルフェニル（Scm）基，メチ
ルフェニルカルバモイルスルフェニル（Snm）基，ベン
ズアミドメチル（Bam）基，（2−オキソ−1−ピロリジ
ニル）メチル（Pym）基等が挙げられる。縮合反応の
際、カルボキシル基の活性化を行ってもよい。該活性化
は、自体公知の方法により行えばよい。このような方法
としては、例えば活性エステル〔置換フェノール類
（例、ペンタクロロフェノール，2,4,5−トリクロロフ
ェノール，2,4−ジニトロフェノール，p−ニトロフェノ
ール等），N−置換イミド類（例、N−ハイドロキシ−5
−ノルボルネン−2,3−ジカルボキシイミド，N−ハイド
ロキシスクシンイミド，N−ハイドロキシ−1,2,3−ベン
ゾトリアゾール等）等とのエステル〕，原料のカルボン
酸に対するカルボン酸無水物，アジド等を形成させる方
法，酸クロライド法，酸化還元法（向山法），混合酸無
水物法，Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
法，Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド−アデ
ィティブ法，ウッドワード試薬Ｋを用いる方法，ＢＯＰ
試薬を用いる方法等が挙げられる。

【００２０】縮合反応は、通常、反応を阻害しない溶媒
中で行われる。このような溶媒としては、ジメチルホル
ムアミド等のアミド類、テトラヒドロフラン，ジオキサ
ン等のエーテル類、ジクロロメタン，クロロホルム等の
ハロゲン化炭化水素類、エタノール，メタノール等のア
ルコール類、水、ジメチルスルホキシド等のスルホキシ
ド類、酢酸エチル等のエステル類、Ｎ−メチルピロリド
ン、Ｎ−メチルモルホリン等が挙げられる。溶媒は、好
ましくはジメチルホルムアミド等のアミド類、テトラヒ
ドロフラン，ジオキサン等のエーテル類、ジクロロメタ
ン，クロロホルム等のハロゲン化炭化水素類、Ｎ−メチ
ルピロリドン、Ｎ−メチルモルホリン等である。反応温
度は好ましくは約−３０〜約５０℃である。反応温度は
さらに好ましくは約０〜約４０℃である。反応時間は、
例えば約１０分〜約２４時間である。上記縮合反応で得
られたペプチドが保護基を有する場合、該保護基は自体
公知の方法により脱離できる。このような方法として
は、ペプチド結合に影響を与えずに保護基を除去するこ
とが可能な方法であればよいが、具体的には、例えば酸
化，還元，酸処理等の方法が挙げられる。ここにおい
て、酸化方法としては、例えばヨウ素，重金属（例、水
銀塩，銀塩，タリウム塩等）等による酸化が挙げられ
る。還元方法としては、例えば触媒（例、パラジウム炭
素，パラジウム黒，酸化白金等）を用いる接触還元，液
体アンモニア中でのナトリウムによる還元，ジチオスレ
イトールによる還元等が挙げられる。酸処理方法として
は、例えば無機酸（例、フッ化水素，臭化水素，塩化水
素等）あるいは有機酸（例、トリフルオロ酢酸，メタン
スルホン酸，トリフルオロメタンスルホン酸等）または
これらの混合物等による酸処理が挙げられる。酸処理の
際、カチオン・スカベンジャー（例、アニソール，フェ
ノール，チオアニソール等）を適宜添加することが好ま
しい。

【００２１】本発明のペプチド〔Ｉ〕は塩として用いて
もよく、好ましくは薬理学的に許容し得る塩が用いられ
る。このような塩としては、該ペプチドが、アミノ基な
どの塩基性基を有する場合、無機酸（例、塩酸，硫酸，
リン酸等），有機酸（例、酢酸，酒石酸，クエン酸，フ
マル酸，マレイン酸等）などとの塩が挙げられる。ペプ
チドが、カルボキシル基などの酸性基を有する場合、無
機塩基（例、ナトリウム，カリウム等のアルカリ金属、
カルシウム，マグネシウム等のアルカリ土類金属など）
との塩が挙げられる。

【００２２】本発明のペプチド〔Ｉ〕またはその塩は、
例えば哺乳動物（例、ヒト，ウシ，ブタ，イヌ，ネコ，
マウス，ラット，ウサギ等）に対し、記憶障害改善剤と
して用いられる。本発明の記憶障害改善剤は、例えばア
ルツハイマー病，ピック病，ハンチントン舞踏病，クロ
イツフェルト・ヤコブ病，パーキンソン病，小脳脊髄変
性症等に基づく痴呆、老年痴呆（アルツハイマー型痴
呆）、脳血管性痴呆等の予防または治療に用いられる。
ペプチド〔Ｉ〕またはその塩を含有してなる記憶障害改
善剤の投与方法としては経口，非経口投与のいずれでも
よい。経口投与のための製剤としては，固体または液体
の剤形が挙げられる。固体製剤としては、例えば錠剤
（糖衣錠，フィルムコーティング錠を含む），丸剤，顆
粒剤，散剤，カプセル剤（ソフトカプセル剤を含む）な
どが挙げられる。液体製剤としては、例えばシロップ
剤，乳剤，懸濁剤などが挙げられる。このような製剤は
自体公知の方法によって製造され、製剤分野において通
常用いられる担体もしくは賦形剤を含有するものであ
る。例えば錠剤用の担体もしくは賦形剤としては乳糖，
でんぷん，蔗糖，ステリン酸マグネシウムなどが挙げら
れる。

【００２３】非経口投与のための製剤としては，例えば
注射剤（例、血管内，筋肉内，皮下注射剤など）、粘膜
投与製剤（例、鼻，口腔，直腸，膣，子宮粘膜投与製剤
など）あるいは放出制御剤（例、埋め込み剤など）など
の剤形が挙げられる。注射剤は、例えば本発明のペプチ
ド〔Ｉ〕またはその塩を、注射用蒸留水，水性溶剤
（例、生理食塩水，リンゲル液等），油性溶剤（例、ゴ
マ油，オリーブ油等）などの溶剤に溶解，懸濁または乳
化させることにより製造される。この際、所望により通
常注射剤に用いられる添加剤を用いてもよい。このよう
な添加剤としては、例えば溶解補助剤（例、Tween-80，
アルギニン等），緩衝剤（例、リン酸ナトリウム，クエ
ン酸ナトリウム，酢酸ナトリウム等），等張化剤（例、
ブドウ糖，グリセリン，ソルビトール等），安定化剤
（例、ヒト血清アルブミン，ポリエチレングリコール
等），保存剤（例、ベンジルアルコール，フェノール
等），無痛化剤（例、塩化ベンザルコニウム，塩酸プロ
カイン等）などが挙げられる。

【００２４】また，例えば用時溶解あるいは分散型の固
形状注射剤は、例えば溶解液または分散媒（例、蒸留
水，生理食塩水，ブドウ糖液等），賦形剤（例、カルボ
キシメチルセルロース〔ＣＭＣ〕，マンニトール，アル
ギン酸ナトリウム等），保存剤（例、ベンジルアルコー
ル，塩化ベンザルコニウム，フェノール等），無痛化剤
（例、ブドウ糖，グルコン酸カルシウム，塩酸プロカイ
ン等）などを適宜混合することにより製造される。粘膜
投与製剤（例、鼻，口腔，直腸，膣，子宮粘膜投与製剤
など）あるいは放出制御剤（例、埋め込み剤など）は、
例えば上記した等張化剤，安定化剤，緩衝剤（pH調整
剤），無痛化剤，保存剤（防腐剤），吸収促進剤（例：
クエン酸，α−シクロデキストリン，マンデル酸，サリ
チル酸ナトリウム，胆汁酸，ポリオキシエチレン

〔９〕
ラウリルエーテル，タウロジヒドロフシジール酸）など
を用いることにより製造される。

【００２５】ペプチド〔Ｉ〕またはその塩を含有してな
る記憶障害改善剤を人に投与する場合、ペプチド〔Ｉ〕
またはその塩の投与量は必要とする薬理効果を発現する
量でよいが，例えば成人には、通常約１０μg〜約５０
０mg，より好ましくは約２０μg〜約２００mgを１日１
〜３回に分けて投与される。静脈内，皮下などの注射剤
では、ペプチド〔Ｉ〕またはその塩の投与量は、成人１
日あたり約１０μg〜約５０mg，より好ましくは約２０
μg〜約２０mgである。直腸，膣などの粘膜投与製剤で
は、ペプチド〔Ｉ〕またはその塩の投与量は、成人１日
あたり約１mg〜約５００mg，より好ましくは約２mg〜約
２００mgである。本発明のペプチド〔Ｉ〕またはその塩
は、比較的毒性も低く、記憶障害改善剤として安全に用
いられる。

【００２６】

【実施例】以下に実施例および実験例を挙げて，本発明
をさらに具体的に説明するが，本発明はその要旨を超え
ない限り以下の実施例および実験例に限定されるもので
はない。なお、次に掲げるアミノ酸，ペプチドおよびそ
の他の化合物に関し，光学異性体が存在し得る場合に，
特に断わらない限り全てＬ体を示すものとする。また、
実施例中のパーセント（％）は、特記しないかぎり容量
（Ｖ／Ｖ）パーセント（％）を表す。 実施例１

【化１１】 以下、上記したペプチドをＣＭＡ−３と称することもあ
る。 （ａ）Boc-Gly-MBHA樹脂の製造 MBHA の塩酸塩樹脂（２５０mg、０．２９mmol）をポリ
プロピレン製反応容器中でDCM（５ml）中に分散し、DIE
A（１００μl）を加え、室温で３０分間混合（voltex m
ixing）を行う。溶媒を吸引ろ過し、さらに同量のDCMで
３回混合（voltex mixing）による樹脂の洗浄を行う。
この際、樹脂の一部を採取しておく。次に、得られた樹
脂にBoc-Gly-OH（１２４mg），BOP 試薬（３１４mg），
HOBt（１０９mg）を加え、DCM／NMP（１：１）（５ml）
で溶解し、DIEA（２２３μl）を添加して、室温で６０
分間混合（voltex mixing）する。反応液をろ去したの
ち、得られた樹脂をDCM／DMF（１：１）（５ml），DCM
（５ml）でそれぞれ３回洗浄する。樹脂の一部を採取
し、反応前の樹脂と共にカイザーテストにより反応が完
了していることを確認する。未反応の樹脂がある場合は
上記した一連の反応操作を反応が完了するまで行う。

【００２７】（ｂ）Boc-Arg(Mts)-Gly-MBHA樹脂の製造 Boc-Gly-MBHA樹脂に０．５Ｍメタンスルホン酸，５％ア
ニソール含有のDCM／ジオキサン（９：１）溶液（５m
l）を添加して、室温で３０分間混合（voltex mixing）
し、Boc 基を除去する。反応液をろ去したのち、得られ
る樹脂をDCM／ジオキサン（１：１）（５ml），DCM／DM
F（１：１）（５ml），DCM（５ml）でそれぞれ３回洗浄
する。ついで、２％ピリジン（５ml）で３回洗浄して樹
脂に付着しているメタンスルホン酸を除去する。得られ
る樹脂を、さらにDCM（５ml），DCM／DMF（１：１）
（５ml）でそれぞれ３回洗浄し、樹脂の一部を採取して
おく。得られた樹脂に、Boc-Arg(Mts)-OH（３２４m
g），BOP 試薬（３１４mg），HOBt（１０９mg）を加
え、DCM／NMP（１：１）（５ml）で溶解し、DIEA（２２
３μl）を添加して、室温で６０分間混合（voltex mixi
ng）する。反応液をろ去したのち、得られた樹脂をDCM
／DMF（１：１）（５ml），DCM（５ml）でそれぞれ３回
洗浄する。樹脂の一部を採取し、反応前の樹脂と共にカ
イザーテストにより反応が完了していることを確認す
る。未反応の樹脂がある場合は上記した一連の反応操作
を反応が完了するまで行う。

【００２８】（ｃ）Boc-Pro-Arg(Mts)-Gly-MBHA樹脂の
製造 Boc-Arg(Mts)-Gly-MBHA樹脂に０．５Ｍメタンスルホン
酸，５％アニソール含有のDCM／ジオキサン（９：１）
溶液（５ml）を添加して、室温で３０分間混合（voltex
mixing）し、Boc 基を除去する。反応液をろ去したの
ち、得られる樹脂をDCM／ジオキサン（１：１）（５m
l），DCM／DMF（１：１）（５ml），DCM（５ml）でそれ
ぞれ３回洗浄する。ついで、２％ピリジン（５ml）で３
回洗浄して樹脂に付着しているメタンスルホン酸を除去
する。さらにDCM（５ml），DCM／DMF（１：１）（５m
l）でそれぞれ３回洗浄し、樹脂の一部を採取してお
く。得られた樹脂に、Boc-Pro-OH（１５３mg），BOP 試
薬（３１４mg），HOBt（１０９mg）を加え、DCM／NMP
（１：１）（５ml）で溶解し、DIEA（２２３μl）を添
加して、室温で６０分間混合（voltex mixing）する。
反応液をろ去したのち、得られた樹脂をDCM／DMF（１：
１）（５ml），DCM（５ml）でそれぞれ３回洗浄する。
樹脂の一部を採取し、反応前の樹脂と共にカイザーテス
トにより反応が完了していることを確認する。未反応の
樹脂がある場合は上記した一連の反応操作を反応が完了
するまで行う。

【００２９】（ｄ）Boc-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mts)-Gly-MB
HA樹脂の製造 Boc-Pro-Arg(Mts)-Gly-MBHA樹脂に０．５Ｍメタンスル
ホン酸，５％アニソール含有のDCM／ジオキサン（９：
１）溶液（５ml）を添加して、室温で３０分間混合（vo
ltex mixing）し、Boc 基を除去する。反応液をろ去し
たのち、得られる樹脂をDCM／ジオキサン（１：１）
（５ml），DCM／DMF（１：１）（５ml），DCM（５ml）
でそれぞれ３回洗浄する。ついで、２％ピリジン（５m
l）で３回洗浄して樹脂に付着しているメタンスルホン
酸を除去する。得られる樹脂を、さらにDCM（５ml），D
CM／DMF（１：１）（５ml）でそれぞれ３回洗浄し、樹
脂の一部を採取しておく。得られた樹脂にBoc-Cys(Acm)
-OH（２０８mg），BOP 試薬（３１４mg），HOBt（１０
９mg）を加え、DCM／NMP（１：１）（５ml）で溶解し、
DIEA（２２３μl）を添加して、室温で６０分間混合（v
oltex mixing）する。反応液をろ去したのち、得られた
樹脂をDCM／DMF（１：１）（５ml），DCM（５ml）でそ
れぞれ３回洗浄する。樹脂の一部を採取し、反応前の樹
脂と共にカイザーテストにより反応が完了していること
を確認する。未反応の樹脂がある場合は上記した一連の
反応操作を反応が完了するまで行う。

【００３０】（ｅ）Boc-Asn-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mts)-Gl
y-MBHA樹脂の製造 Boc-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mts)-Gly-MBHA樹脂に０．５Ｍメ
タンスルホン酸，５％アニソール含有のDCM／ジオキサ
ン（９：１）溶液（５ml）を添加して、室温で３０分間
混合（voltex mixing）し、Boc 基を除去する。反応液
をろ去したのち、得られる樹脂をDCM／ジオキサン
（１：１）（５ml），DCM／DMF（１：１）（５ml），DC
M（５ml）でそれぞれ３回洗浄する。ついで、２％ピリ
ジン（５ml）で３回洗浄して、樹脂に付着しているメタ
ンスルホン酸を除去する。得られる樹脂を、さらにDCM
（５ml），DCM／DMF（１：１）（５ml）でそれぞれ３回
洗浄し、樹脂の一部を採取しておく。得られた樹脂に、
Boc-Asn-OH （１６５mg），BOP試薬（３１４mg），HOBt
（１０９mg）を加え、DCM／NMP（１：１）（５ml）で溶
解し、DIEA（２２３μl）を添加して、室温で６０分間
混合（voltex mixing）する。反応液をろ去したのち、
得られた樹脂をDCM／DMF（１：１）（５ml），DCM（５m
l）でそれぞれ３回洗浄する。樹脂の一部を採取し、反
応前の樹脂と共にカイザーテストにより反応が完了して
いることを確認する。未反応の樹脂がある場合は上記し
た一連の反応操作を反応が完了するまで行う。

【００３１】（ｆ）Boc-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mt
s)-Gly-MBHA樹脂の製造 Boc-Asn-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mts)-Gly-MBHA樹脂に０．５
Ｍメタンスルホン酸，５％アニソール含有のDCM／ジオ
キサン（９：１）溶液（５ml）を添加して、室温で３０
分間混合（voltex mixing）し、Boc 基を除去する。反
応液をろ去したのち、得られる樹脂をDCM／ジオキサン
（１：１）（５ml），DCM／DMF（１：１）（５ml），DC
M（５ml）でそれぞれ３回洗浄する。ついで、２％ピリ
ジン（５ml）で３回洗浄して、樹脂に付着しているメタ
ンスルホン酸を除去する。得られる樹脂を、さらにDCM
（５ml），DCM／DMF（１：１）（５ml）でそれぞれ３回
洗浄し、樹脂の一部を採取しておく。得られた樹脂に、
Boc-Gln-OH （１７５mg），BOP 試薬（３１４mg），HOB
t（１０９mg）を加え、DCM／NMP（１：１）（５ml）で
溶解し、DIEA（２２３μl）を添加して室温で６０分間
混合（voltex mixing）する。反応液をろ去したのち、
得られた樹脂をDCM／DMF（１：１）（５ml），DCM（５m
l）でそれぞれ３回洗浄を行う。樹脂の一部を採取し、
反応前の樹脂と共にカイザーテストにより反応が完了し
ていることを確認する。未反応の樹脂がある場合は上記
した一連の反応操作を反応が完了するまで行う。

【００３２】（ｇ）Boc-NH(CH₂)₅CO-Gln-Asn-Cys(Acm)-
Pro-Arg(Mts)-Gly-MBHA樹脂の製造 Boc-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mts)-Gly-MBHA樹脂に
０．５Ｍメタンスルホン酸，５％アニソール含有のDCM
／ジオキサン（９：１）溶液（５ml）を添加して、室温
で３０分間混合（voltex mixing）し、Boc 基を除去す
る。反応液をろ去したのち、得られる樹脂をDCM／ジオ
キサン（１：１）（５ml），DCM／DMF（１：１）（５m
l），DCM（５ml）でそれぞれ３回洗浄する。ついで、２
％ピリジン（５ml）で３回洗浄して樹脂に付着している
メタンスルホン酸を除去する。得られる樹脂を、さらに
DCM（５ml），DCM／DMF（１：１）（５ml）でそれぞれ
３回洗浄し、樹脂の一部を採取しておく。得られた樹脂
に、Boc−６−アミノ−カプロン酸（Boc-6-amino-capro
nic acid）（１６６mg），BOP 試薬（３１４mg），HOBt
（１０９mg）を加え、DCM／NMP（１：１）（５ml）で溶
解し、DIEA（２２３μl）を添加して、室温で６０分間
混合（voltex mixing）する。反応液をろ去したのち、
得られた樹脂をDCM／DMF（１：１）（５ml），DCM（５m
l）でそれぞれ３回洗浄する。樹脂の一部を採取し、反
応前の樹脂と共にカイザーテストにより反応が完了して
いることを確認する。未反応の樹脂がある場合は上記し
た一連の反応操作を反応が完了するまで行う。

【００３３】（ｈ）Boc-Cys(Acm)-NH(CH₂)₅CO-Gln-Asn-
Cys(Acm)-Pro-Arg(Mts)-Gly-MBHA樹脂の製造 Boc-NH(CH₂)₅CO-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mts)-Gly-M
BHA樹脂に０．５Ｍメタンスルホン酸，５％アニソール
含有のDCM／ジオキサン（９：１）溶液（５ml）を添加
して、室温で３０分間混合（voltex mixing）し、Boc
基を除去する。反応液をろ去したのち、得られる樹脂を
DCM／ジオキサン（１：１）（５ml），DCM／DMF（１：
１）（５ml），DCM（５ml）でそれぞれ３回洗浄する。
ついで、２％ピリジン（５ml）で３回洗浄して、樹脂に
付着しているメタンスルホン酸を除去する。得られる樹
脂を、さらにDCM（５ml），DCM／DMF（１：１）（５m
l）でそれぞれ３回洗浄し、樹脂の一部を採取してお
く。得られた樹脂に、Boc-Cys(Acm)-OH（２１０mg），B
OP 試薬（３１４mg），HOBt（１０９mg）を加え、DCM／
NMP（１：１）（５ml）で溶解し、DIEA（２２３μl）を
添加して、室温で６０分間混合（voltex mixing）す
る。反応液をろ去したのち、得られた樹脂をDCM／DMF
（１：１）（５ml），DCM（５ml）でそれぞれ３回洗浄
する。樹脂の一部を採取し、反応前の樹脂と共にカイザ
ーテストにより反応が完了していることを確認する。未
反応の樹脂がある場合は上記した一連の反応操作を反応
が完了するまで行う。

【００３４】（ｉ）H-Cys(Acm)-NH(CH₂)₅CO-Gln-Asn-Cy
s(Acm)-Pro-Arg-Gly-NH₂ の製造 Boc-NH(CH₂)₅CO-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-Arg(Mts)-Gly-M
BHA樹脂（２４７mg）をテフロン製容器に入れ、ジメチ
ルスルフィド（２５０μl），ｍ−クレゾール（２５０
μl）を添加してしばらく浸透させた後、氷冷下、フッ
化水素（１０ml）を加えてそのまま６０分間攪拌する。
反応液を室温に戻し、減圧下でフッ化水素を留去する。
残査にエーテルを加えて粉末とし、エーテルで３回固体
洗浄したものを１規定酢酸に溶解して以下の条件による
ゲルろ過精製を行う。 ・カラム：Sephadex G-15 (25 mm id X 400 mm) ・溶出液：１規定酢酸 ・検出波長：254 nm（UV 法） ・目的物の分取：最初に溶出するピークの分画を集め、
凍結乾燥して H-Cys(Acm)-NH-(CH₂)₅-CO-Gln-Asn-Cys(A
cm)-Pro-Arg-Gly-NH₂の粗製品を得る。続いて以下の条
件による逆相分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）精製を行う。 ・カラム：TSK gel ODS-120T (2.15 cm id X 30 cm) ・溶媒系：0.1％トリフルオロ酢酸−アセトニトリル（4
00分を要してアセトニトリル濃度を10％から60％まで直
線的に上昇させる） ・波長検出：230 nm（UV 法） ・流速：3 ml／min ・目的物の分取：保持時間４０分に溶出するピークを集
め、凍結乾燥してH-Cys-(Acm)-NH-(CH₂)₅-CO-Gln-Asn-C
ys(Acm)-Pro-Arg-Gly-NH₂の精製品を得る。

【００３５】（ｊ）

【化１２】 H-Cys(Acm)-NH-(CH₂)₅-CO-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-Arg-G
ly-NH₂（２０mg）をトリフルオロ酢酸（４ml）に溶解
し、アニソール（８μl）の存在下、AgBF₄（１４８mg）
を加えて６０分間反応させる。反応液を室温に戻し、減
圧下でトリフルオロ酢酸を留去する。残査にエーテルを
加えて粉末とし、エーテルで３回固体洗浄したものを１
規定酢酸に溶解して、ジチオスレイトール（１７０mg）
を加え、１５０分間攪拌する。その後、以下の条件によ
るゲルろ過精製を行う。 ・カラム：Sephadex G-15 (25 mm id X 400 mm) ・溶出液：１規定酢酸 ・検出波長：254 nm（UV 法） ・目的物の分取：最初に溶出するピークの分画を集め
た。続いて精製水（100 ml）で希釈後、５％アンモニア
でpH７．６に調製し、室温下で空気酸化をする。空気酸
化反応の進行は逆相分析高速液体クロマトグラフィーで
モニターし、１８時間後に凍結乾燥する。H-Cys(Acm)-N
H-(CH₂)₅-CO-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-Arg-Gly-NH₂（２７
mg）を用いて同様の操作を行って得られた粗製品と合わ
せて以下の条件による逆相分取ＨＰＬＣ精製を行う。 ・カラム：TSK gel ODS-120T (2.15 cm id X 30 cm) ・溶媒系：0.1％トリフルオロ酢酸−アセトニトリル（4
00 分を要してアセトニトリル濃度を10％から60％まで
直線的に上昇させる） ・波長検出：230 nm（UV 法） ・流速：3 ml／min ・目的物の分取：保持時間４５．７分に溶出するピーク
を集め、凍結乾燥して、精製品を粉末状物質として１
９．５mgを得た。

【００３６】精製したＣＭＡ−３の分析結果は以下の通
りである。 （１）高速液体クロマトグラフィー ・カラム：Shodex ODS pak F-411A (4.6 mm id X 150 m
m) ・溶媒系：0.1％TFA−アセトニトリル（30 分を要して
アセトニトリル濃度を５％から４０％まで直線的に上昇
させる。） ・流速：0.7 ml／min ・検出波長：230 nm（UV 法） ・保持時間：13.7 分に単一ピークを検出 （２）アミノ酸分析 ６Ｎ塩酸で１１０℃，２０時間加水分解後、常法により
アミノ酸分析をおこなった。結果は以下の通りである。
（括弧内は理論整数値を示す） アスパラギン 1.00 (1) グルタミン 1.07 (1) グリシン 1.00 (1) アルギニン 0.97 (1) プロリン 1.01 (1)

【００３７】実施例２ 実施例１と同様の方法によって以下のペプチドを製造し
た。

【化１３】

【化１４】

【化１５】

【００３８】実施例３

【化１６】 実施例１で得られたH-Cys(Acm)-NH-(CH₂)₅-CO-Gln-Asn-
Cys(Acm)-Pro-Arg-Gly-NH₂（５０mg，１等量）を、氷冷
下（０〜４℃）、トリフルオロ酢酸（４ml）に溶解し、
アニソール（５０μl）の存在下、タリウムトリフルオ
ロ酢酸（５４ｍｇ、２等量）を加えて６０分間反応させ
る。反応液を室温に戻し、減圧下でトリフルオロ酢酸を
留去する。残査にエーテルを加えて粉末とし、エーテル
で３回固体洗浄したものを１規定酢酸に溶解して以下の
条件によるゲルろ過精製を行う。 ・カラム：Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１５ （２５ ｍ
ｍ ｉｄ Ｘ ４００ ｍｍ） ・溶出液：１規定酢酸 ・検出波長：254 nm（UV 法） ・目的物の分取：最初に溶出するピークの分画を集め
た。続いて以下の条件による逆相分取ＨＰＬＣ精製を行
う。 ・カラム：TSK gel ODS-120T (2.15 cm id X 30 cm) ・溶媒系：0.1％トリフルオロ酢酸−アセトニトリル（4
00 分を要してアセトニトリル濃度を１０％から６０％
まで直線的に上昇させる） ・波長検出：230 nm（UV 法） ・流速：3 ml／min ・目的物の分取：保持時間４５．７分に溶出するピーク
を集め、凍結乾燥して、精製品を粉末状物質として１
９．５mgを得た。

【００３９】精製したＣＭＡ−３の分析結果は以下の通
りであった。 （１）高速液体クロマトグラフィー ・カラム：Shodex ODS pak F-411A (4.6 mm id X 150 m
m) ・溶媒系：0.1％TFA−アセトニトリル（30 分を要して
アセトニトリル濃度を５％から４０％まで直線的に上昇
させる。） ・流速：0.7 ml／min ・検出波長：230 nm（UV 法） ・保持時間：13.7 分に単一ピークを検出 （２）アミノ酸分析 ６Ｎ塩酸で１１０℃，２０時間加水分解後、常法により
アミノ酸分析をおこなった。結果は以下の通りである。
（括弧内は理論整数値を示す） アスパラギン 1.00 (1) グルタミン 1.07 (1)グリシン 1.00 (1) アルギニン 0.97 (1) プロリン 1.01 (1)

【００４０】実施例４ 実施例３と同様の方法によって以下のペプチドを製造し
た。

【化１７】

【化１８】

【化１９】

【００４１】実施例５ 実施例１で得られたペプチド（ＣＭＡ−３）１gを１０m
lの生理食塩水に溶解し、噴霧容器に入れ、１回にその
５０〜２００μlを鼻腔内に投与できる製剤とした。 実施例６ 実施例１で得られたペプチド（ＣＭＡ−３）１gを１０m
lの生理食塩水に溶解し、メチルセルロース１００mgを
加えて粘調な液とし、１回にその５０〜２００μlを鼻
腔内に投与できる製剤とした。 実施例７ 実施例１で得られたペプチド（ＣＭＡ−３）１０mgを１
〜５mlの生理食塩水に溶解し、常法に従い静脈内，皮下
及び筋肉内投与用の注射用液剤を調製した。

【００４２】実験例１ 脳血液関門透過性の評価実験 たかさと（Takasato）らによって開発された in situ
脳灌流法〔（アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオ
ロジー（American Journal of Physiology），２7７
巻，４８４頁，１９８４年）に記載された方法〕により
脳血液関門透過性の評価を行った。ラット（ＳＤ系雄
性，８週令）を用いて、ラット実質脳部に関係しない分
枝動脈を結紮後、右外頚動脈から薬液（灌流液）を注入
し、５分後にラットの断頭を行った。摘出した脳より抽
出した薬物量を、抗ＡＶＰ抗体を用いるラジオイムノア
ッセイにより測定し、薬物の取り込み量を算出した。そ
の結果、ＡＶＰ−Ｍ１が脳血液関門をほとんど透過しな
いのに対して、ＣＭＡ−３の取り込みは有意に上昇し
た。結果を図１に示す。なお、脳内対血中薬物濃度比
は、脳内薬物濃度（mol/g brain）／血中薬物濃度（mol
/ml）として算出した。 実験例２ 炭酸ガス誘発性記憶障害からの回復効果の評価 実験マウス（ＩＣＲ系雄性，５週令）を、受動的回避反
応を獲得させた直後に、炭酸ガスを暴露して仮死状態と
し、人口呼吸により蘇生させて炭酸ガス誘発性記憶障害
モデルを作成した。その翌日に、ＡＶＰ−Ｍ１およびＣ
ＭＡ−３、対照群には生理食塩水を皮下投与して、一定
時間後に記憶保持テストをおこない、潜時を測定した。
その結果、ＣＭＡ−３の潜時は対照群よりも有意に延長
し、健忘からの回復が認められた。なおかつＡＶＰに比
べて持効性の傾向がみられた。結果を図２に示す。

【００４３】実験例３ 抗利尿作用の分離の確認 体重１６０〜２００gのＳＤ系雄性ラットに、体重１０
０gあたり２．５mlの水を経口負荷した後、０．００
５，０．５，５０μg／kgの薬物を静脈内投与し、３時
間までの尿量，尿浸透圧を測定して、薬物の抗利尿作用
を評価した（各ｎ＝５）。その結果、ＡＶＰ５０μg／k
g投与群では有意に尿量が減少、尿浸透圧が上昇し、強
い抗利尿効果が認められたのに対し、ＣＭＡ−３では、
尿量，浸透圧とも対照とした生食投与群と比較して変化
せず、抗利尿作用は認められなかった。さらに、１mg／
kgの投与ではＡＶＰ投与群は全例死亡したのに対し、Ｃ
ＭＡ−３投与群では尿量が６．１ml（対照群６．７m
l）、尿浸透圧が２４６mOsm（対照群２８４mOsm）、Ａ
ＶＰ−Ｍ１投与群では尿量が６．１ml、尿浸透圧が２０
６mOsmで、抗利尿作用も認められなかった。結果を図３
および４に示す。 実験例４ 血圧上昇作用の分離の確認 体重約３００ｇのＳＤ系雄性ラットをペントバルビター
ルで麻酔下、頚動脈にカニューレを施し、血圧トランス
デューサーを接続して、１ｍｇ／ｋｇ薬物投与後の血圧
変化を測定した。その結果、ＡＶＰ投与では、投与直後
に血圧が上昇（１０５→１４４ｍｍＨｇ）した後、不安
定な血圧変化を示し、１０分後に死亡したのに対し、Ｃ
ＭＡ−３およびＡＶＰ−Ｍ１投与では血圧変化は全く観
察されなかった。

【００４４】

【発明の効果】本発明のペプチド〔Ｉ〕またはその塩
は、優れた記憶障害改善効果を有し、しかも抗利尿，血
圧上昇作用等の副作用が見られないため、低毒性で安全
に用いることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＡＶＰ−Ｍ１およびＣＭＡ−３（実施例１のペ
プチド）のラット脳灌流５分後の脳取り込み量の結果で
ある。

【図２】皮下投与後（３mg／kg）の各時間での対照群に
対するＡＶＰおよびＣＭＡ−３（実施例１のペプチド）
の炭酸ガス誘発性健忘マウスに対する潜時延長効果であ
る。ただし、生理食塩水投与群（対照群）（被検体数
６）の潜時を１００％とする。図中、ｎは被検体数を示
す。

【図３】ＡＶＰおよびＣＭＡ−３（実施例１のペプチ
ド）のラット静脈内投与後３時間内に排泄された尿量の
結果である。

【図４】ＡＶＰおよびＣＭＡ−３（実施例１のペプチ
ド）のラット静脈内投与後３時間内に排泄された尿の浸
透圧である。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式 【化１】 （式中、Ｒは置換されていてもよい二価の炭化水素残基
   を、ＸはArgまたはLysを、Ｙは水酸基またはGly-NH₂を
   示す）で表されるペプチドまたはその塩。
2. 【請求項２】アミノ酸残基がＬ体である請求項１記載の
   ペプチドまたはその塩。
3. 【請求項３】炭化水素残基が、炭素数１〜１５の炭化水
   素残基である請求項１記載のペプチドまたはその塩。
4. 【請求項４】炭化水素残基が、炭素数１〜１５のアルキ
   レン基である請求項１記載のペプチドまたはその塩。
5. 【請求項５】アルキレン基が、ペンタメチレン基である
   請求項４記載のペプチドまたはその塩。
6. 【請求項６】一般式 【化２】 （式中、Ｒは置換されていてもよい二価の炭化水素残基
   を、ＸはArgまたはLysを、Ｙは水酸基またはGly-NH₂を
   示す）で表されるペプチドまたはその塩を閉環反応に付
   すことを特徴とする一般式 【化３】 （式中、Ｒは置換されていてもよい二価の炭化水素残基
   を、ＸはArgまたはLysを、Ｙは水酸基またはGly-NH₂を
   示す）で表されるペプチドまたはその塩の製造法。
7. 【請求項７】一般式 【化４】 （式中、Ｒは置換されていてもよい二価の炭化水素残基
   を、ＸはArgまたはLysを、Ｙは水酸基またはGly-NH₂を
   示す）で表されるペプチドまたはその塩を含有してなる
   記憶障害改善剤。