JPH07159410A - 血液中の高比重リポ蛋白−コレステロールの測定方法 - Google Patents
血液中の高比重リポ蛋白−コレステロールの測定方法Info
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- JPH07159410A JPH07159410A JP34168593A JP34168593A JPH07159410A JP H07159410 A JPH07159410 A JP H07159410A JP 34168593 A JP34168593 A JP 34168593A JP 34168593 A JP34168593 A JP 34168593A JP H07159410 A JPH07159410 A JP H07159410A
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 ＨＤＬ−コレステロール分画試薬を充填した
採血管に血液を入れ、次いで遠心分離し、それにて得ら
れた上澄みからＨＤＬ−コレステロールを測定する。 【効果】 分画試薬添加の煩雑さがなくなり、操作が簡
便な測定方法で、血液採取量及び分画試薬の分注量の誤
りも少なくなる。また血清分離とＨＤＬ−コレステロー
ル分画分離を一度だけの遠心分離操作で行うので、採血
から測定までにおいて、直接血液に触れることが少なく
なる。
採血管に血液を入れ、次いで遠心分離し、それにて得ら
れた上澄みからＨＤＬ−コレステロールを測定する。 【効果】 分画試薬添加の煩雑さがなくなり、操作が簡
便な測定方法で、血液採取量及び分画試薬の分注量の誤
りも少なくなる。また血清分離とＨＤＬ−コレステロー
ル分画分離を一度だけの遠心分離操作で行うので、採血
から測定までにおいて、直接血液に触れることが少なく
なる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、血液中の高比重リポ蛋
白−コレステロール（以下、ＨＤＬ−コレステロールと
いう）の測定方法、とりわけその分画操作に関する。
白−コレステロール（以下、ＨＤＬ−コレステロールと
いう）の測定方法、とりわけその分画操作に関する。
【０００２】
【従来の技術】血液中のコレステロールの主たる運搬は
低比重リポ蛋白であるが、高比重リポ蛋白は各組織から
コレステロールを受け取り、異化させる機能を有するこ
とから、動脈硬化症の危険予防因子とされる。血液中に
４０〜７０ｍｇ／デシリットル含まれるＨＤＬ−コレス
テロールの測定は大きく分けて分画操作とコレステロー
ル測定操作の２つからなる。分画法には超遠心法、免疫
化学的方法、電気泳動法、沈殿法などがある。これらの
うち沈殿法は操作も簡便であり、酵素法によるコレステ
ロール測定と組み合わせたキツトが多数市販されてい
る。
低比重リポ蛋白であるが、高比重リポ蛋白は各組織から
コレステロールを受け取り、異化させる機能を有するこ
とから、動脈硬化症の危険予防因子とされる。血液中に
４０〜７０ｍｇ／デシリットル含まれるＨＤＬ−コレス
テロールの測定は大きく分けて分画操作とコレステロー
ル測定操作の２つからなる。分画法には超遠心法、免疫
化学的方法、電気泳動法、沈殿法などがある。これらの
うち沈殿法は操作も簡便であり、酵素法によるコレステ
ロール測定と組み合わせたキツトが多数市販されてい
る。
【０００３】一例を挙げると、デキストランの硫酸エス
テルと塩化マグネシウムを含有し、かつ、磁気を帯びた
ビーズの分画試薬を用いる方法がある。これは（１）採
血し、（２）遠心分離し、（３）血清を分取し、（４）
次いで上記分画試薬を添加する。（５）これを磁場に静
置し、（６）上澄みにＨＤＬ−コレステロールの分画を
得る。
テルと塩化マグネシウムを含有し、かつ、磁気を帯びた
ビーズの分画試薬を用いる方法がある。これは（１）採
血し、（２）遠心分離し、（３）血清を分取し、（４）
次いで上記分画試薬を添加する。（５）これを磁場に静
置し、（６）上澄みにＨＤＬ−コレステロールの分画を
得る。
【０００４】他の一つの方法は以下のようなヘパリン塩
化マンガン沈殿法である。（１）採血し、（２）遠心分
離し、（３）血清を分取し、（４）血清試料にヘパリン
及び塩化マンガンを添加（分注）すると、ＬＤＬ（低比
重リポ蛋白）、ＶＬＤＬ（超低比重リポ蛋白）はマンガ
ンイオンを介してヘパリンと不溶性結合物を形成する。
（５）これを遠心除去後、（６）上澄みにＨＤＬ−コレ
ステロールの分画を得る。
化マンガン沈殿法である。（１）採血し、（２）遠心分
離し、（３）血清を分取し、（４）血清試料にヘパリン
及び塩化マンガンを添加（分注）すると、ＬＤＬ（低比
重リポ蛋白）、ＶＬＤＬ（超低比重リポ蛋白）はマンガ
ンイオンを介してヘパリンと不溶性結合物を形成する。
（５）これを遠心除去後、（６）上澄みにＨＤＬ−コレ
ステロールの分画を得る。
【０００５】これらの方法では、血清分離操作又は血清
及び試薬の分注に手間がかかり、また、ヘパリン塩化マ
ンガン沈殿法では、遠心分離も必要なため、操作が煩雑
であった。またこれらの方法では、患者血液と接触する
機会が多く、感染の危険性が高かった。
及び試薬の分注に手間がかかり、また、ヘパリン塩化マ
ンガン沈殿法では、遠心分離も必要なため、操作が煩雑
であった。またこれらの方法では、患者血液と接触する
機会が多く、感染の危険性が高かった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、血液中のＨ
ＤＬ−コレステロールの測定において、分画操作を簡便
にするためになされたものであり、血清分離操作又は血
清及び試薬の分注操作が簡単となり、操作の煩雑さがな
くなったことにより、患者血液と接触する機会を少なく
し、感染の危険性を少なくするためになされたものであ
る。
ＤＬ−コレステロールの測定において、分画操作を簡便
にするためになされたものであり、血清分離操作又は血
清及び試薬の分注操作が簡単となり、操作の煩雑さがな
くなったことにより、患者血液と接触する機会を少なく
し、感染の危険性を少なくするためになされたものであ
る。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、ＨＤＬ−コレ
ステロール分画試薬を充填した採血管に血液を入れ、次
いで遠心分離し、それにて得られた上澄みからＨＤＬ−
コレステロールを測定することを特長とする血液中のＨ
ＤＬ−コレステロールの測定方法を要旨とする。
ステロール分画試薬を充填した採血管に血液を入れ、次
いで遠心分離し、それにて得られた上澄みからＨＤＬ−
コレステロールを測定することを特長とする血液中のＨ
ＤＬ−コレステロールの測定方法を要旨とする。
【０００８】本発明において、上澄みにＨＤＬ−コレス
テロールを残す分画試薬として、例えば以下のものを使
用する。
テロールを残す分画試薬として、例えば以下のものを使
用する。
【０００９】米国のレフアランス−ダイアグナステイク
ス（ＲＥＦＥＲＥＮＣＥ ＤＩＡＧＮＯＳＴＩＣＳ）社
から市販されているが、分子量５万程度のデキストラン
の硫酸エステル（５ｇ／リツトル）・塩化マグネシウム
（２５０ｍｍｏｌ／リツトル）・アジ化ナトリウム
（０．０１％）を含有した粒子を分散させた緩衝液。
ス（ＲＥＦＥＲＥＮＣＥ ＤＩＡＧＮＯＳＴＩＣＳ）社
から市販されているが、分子量５万程度のデキストラン
の硫酸エステル（５ｇ／リツトル）・塩化マグネシウム
（２５０ｍｍｏｌ／リツトル）・アジ化ナトリウム
（０．０１％）を含有した粒子を分散させた緩衝液。
【００１０】その他、ヘパリン−Ｍｎ法・ヘパリン−Ｃ
ａ法・ヘパリン−Ｃａ−Ｎｉ法・デキストラン硫酸−Ｍ
ｇ法・リンタングステン酸−Ｍｇ法の分画試薬があげら
れる。
ａ法・ヘパリン−Ｃａ−Ｎｉ法・デキストラン硫酸−Ｍ
ｇ法・リンタングステン酸−Ｍｇ法の分画試薬があげら
れる。
【００１１】本発明においてＨＤＬ−コレステロール分
画試薬は血清量の１／１０〜１／５を充填する。但し試
薬の種類によってこれ以上必要なこともある。
画試薬は血清量の１／１０〜１／５を充填する。但し試
薬の種類によってこれ以上必要なこともある。
【００１２】本発明において、採血管の材質はガラス又
はプラスチツクであり、真空採血管を使用することもあ
りうる。採血管の管壁がシリコン等でコーティングされ
ていてもよい。また採血管内に、抗凝固剤等の試薬が添
加されていても差し支えない。抗凝固剤等の試薬の例と
してはヘパリン、フッ化ナトリウム、クエン酸、シュウ
酸、ＥＤＴＡ−２Ｎａ、ＥＤＴＡ−２Ｋ等がある。
はプラスチツクであり、真空採血管を使用することもあ
りうる。採血管の管壁がシリコン等でコーティングされ
ていてもよい。また採血管内に、抗凝固剤等の試薬が添
加されていても差し支えない。抗凝固剤等の試薬の例と
してはヘパリン、フッ化ナトリウム、クエン酸、シュウ
酸、ＥＤＴＡ−２Ｎａ、ＥＤＴＡ−２Ｋ等がある。
【００１３】本発明において血液とは血液成分の分離操
作を受ける前の人体から採取されたものである。
作を受ける前の人体から採取されたものである。
【００１４】本発明において遠心分離は通常の条件でよ
く、例えば１５００Ｇで１０〜３０分である。この遠心
分離で上澄みに血清が得られる。
く、例えば１５００Ｇで１０〜３０分である。この遠心
分離で上澄みに血清が得られる。
【００１５】本発明において上澄み中のＨＤＬ−コレス
テロールを測定は塩化鉄反応や酵素法で測定する。
テロールを測定は塩化鉄反応や酵素法で測定する。
【００１６】
【作用】本発明においては分画試薬分注の煩雑さをなく
すために、かつ、試薬分注量の誤りをなくすため、あら
かじめ採血管に分画試薬が充填されてある。
すために、かつ、試薬分注量の誤りをなくすため、あら
かじめ採血管に分画試薬が充填されてある。
【００１７】本発明においては採血後遠心分離前に血液
がＨＤＬ−コレステロール分画試薬と接するので、一度
だけの遠心分離で血液中のＨＤＬ−コレステロールの測
定できる。
がＨＤＬ−コレステロール分画試薬と接するので、一度
だけの遠心分離で血液中のＨＤＬ−コレステロールの測
定できる。
【００１８】本発明において採血管に真空採血管を使用
すれば、採血量を一定に保つことができる。
すれば、採血量を一定に保つことができる。
【００１９】
【発明の効果】従来の血液中のＨＤＬ−コレステロール
を測定は、（１）採血（２）遠心分離（３）血清分取
（４）分画試薬添加（５）磁場に静置（６）検体採取
（７）測定の手順で行われたが、本発明における測定は
（１）採血（２）遠心分離（３）検体採取（４）測定の
手順で行い得るので、本発明の血液中のＨＤＬ−コレス
テロールの測定方法は分画試薬添加の煩雑さがなくな
り、操作が簡便になる。
を測定は、（１）採血（２）遠心分離（３）血清分取
（４）分画試薬添加（５）磁場に静置（６）検体採取
（７）測定の手順で行われたが、本発明における測定は
（１）採血（２）遠心分離（３）検体採取（４）測定の
手順で行い得るので、本発明の血液中のＨＤＬ−コレス
テロールの測定方法は分画試薬添加の煩雑さがなくな
り、操作が簡便になる。
【００２０】また、本発明によれば血液採取量及び分画
試薬の分注量の誤りも少なくなる。更にまた本発明は血
清分離とＨＤＬ−コレステロール分画分離を一度だけの
遠心分離操作で行うので、採血から測定までにおいて、
直接血液に触れることが少なくなる。
試薬の分注量の誤りも少なくなる。更にまた本発明は血
清分離とＨＤＬ−コレステロール分画分離を一度だけの
遠心分離操作で行うので、採血から測定までにおいて、
直接血液に触れることが少なくなる。
【００２１】
【実施例】以下、本発明の血液中のＨＤＬ−コレステロ
ールの測定方法の実施例を示す。ＨＤＬ−コレステロー
ル分画試薬は、米国特許５２４２８３３を参考にして、
以下のものを使用した。
ールの測定方法の実施例を示す。ＨＤＬ−コレステロー
ル分画試薬は、米国特許５２４２８３３を参考にして、
以下のものを使用した。
【００２２】粒子として直径１〜１０μのセルロースを
用意し、この粒子をＨＤＬ−コレステロール分画剤と結
合させるため、５０ｍｇ／ミリリツトルの濃度で水に加
え、スラリー状とした。デキストランの硫酸エステル−
塩化マグネシウムと上記スラリーを３０ミリリツトルで
水で調整し１００ミリリツトルとした。
用意し、この粒子をＨＤＬ−コレステロール分画剤と結
合させるため、５０ｍｇ／ミリリツトルの濃度で水に加
え、スラリー状とした。デキストランの硫酸エステル−
塩化マグネシウムと上記スラリーを３０ミリリツトルで
水で調整し１００ミリリツトルとした。
【００２３】この際、デキストランの硫酸エステルの濃
度は５ｇ／リツトルとし、塩化マグネシウムの濃度は２
５０ｍｍｏｌ／リツトルとした。
度は５ｇ／リツトルとし、塩化マグネシウムの濃度は２
５０ｍｍｏｌ／リツトルとした。
【００２４】ポリエチレンテレフタレート製採血管に１
０００μリツトルの血液及び１００μリツトル、２００
μリツトル又は３００μリツトルの上記分画試薬を加え
た。室温で１５００Ｇで２０分の条件で遠心分離を行
い、上澄みに血清を得た。
０００μリツトルの血液及び１００μリツトル、２００
μリツトル又は３００μリツトルの上記分画試薬を加え
た。室温で１５００Ｇで２０分の条件で遠心分離を行
い、上澄みに血清を得た。
【００２５】上澄み中のＨＤＬ−コレステロールを酵素
法で測定した。以下は検体１及び２はＨＤＬ−コレステ
ロールが異なるもので、それぞれ１５回の測定を行っ
た。
法で測定した。以下は検体１及び２はＨＤＬ−コレステ
ロールが異なるもので、それぞれ１５回の測定を行っ
た。
【００２６】 〔検体１の場合〕 試薬添加料、μｌ １００ ２００ ３００ 平均値、ｍｇ／デシリツトル ４２．８ ４３．９ ４１．５ 標準偏差、ｍｇ／デシリツトル ２．１ ２．５ ２．３
【００２７】 〔検体２の場合〕 試薬添加料、μｌ １００ ２００ ３００ 平均値、ｍｇ／デシリツトル ８３．１ ８０．９ ８１．３ 標準偏差、ｍｇ／デシリツトル ３．８ ３．９ ３．５
Claims (1)
- 【請求項１】 ＨＤＬ−コレステロール分画試薬を充填
した採血管に血液を入れ、次いで遠心分離し、それにて
得られた上澄みからＨＤＬ−コレステロールを測定する
ことを特長とする血液中のＨＤＬ−コレステロールの測
定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34168593A JPH07159410A (ja) | 1993-12-10 | 1993-12-10 | 血液中の高比重リポ蛋白−コレステロールの測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34168593A JPH07159410A (ja) | 1993-12-10 | 1993-12-10 | 血液中の高比重リポ蛋白−コレステロールの測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07159410A true JPH07159410A (ja) | 1995-06-23 |
Family
ID=18347995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34168593A Pending JPH07159410A (ja) | 1993-12-10 | 1993-12-10 | 血液中の高比重リポ蛋白−コレステロールの測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH07159410A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007004687A1 (en) * | 2005-06-30 | 2007-01-11 | Fuji Film Corporation | A method for separating target component using magnetic nanoparticles |
| JP2009247317A (ja) * | 2008-04-10 | 2009-10-29 | Fujifilm Corp | 高密度リポ蛋白コレステロール測定用乾式分析素子 |
| US8084275B2 (en) | 2005-02-08 | 2011-12-27 | Fujifilm Corporation | Magnetic composite body, production method thereof, method for removing substance with mannose on its surface, and method for concentrating substance with mannose on its surface |
-
1993
- 1993-12-10 JP JP34168593A patent/JPH07159410A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8084275B2 (en) | 2005-02-08 | 2011-12-27 | Fujifilm Corporation | Magnetic composite body, production method thereof, method for removing substance with mannose on its surface, and method for concentrating substance with mannose on its surface |
| WO2007004687A1 (en) * | 2005-06-30 | 2007-01-11 | Fuji Film Corporation | A method for separating target component using magnetic nanoparticles |
| JP2009247317A (ja) * | 2008-04-10 | 2009-10-29 | Fujifilm Corp | 高密度リポ蛋白コレステロール測定用乾式分析素子 |
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