JPH07126176A - Active oxygen inhibitor - Google Patents

Active oxygen inhibitor

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JPH07126176A
JPH07126176A JP14379993A JP14379993A JPH07126176A JP H07126176 A JPH07126176 A JP H07126176A JP 14379993 A JP14379993 A JP 14379993A JP 14379993 A JP14379993 A JP 14379993A JP H07126176 A JPH07126176 A JP H07126176A
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JP
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active oxygen
solution
manganese
iii
complex
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JP14379993A
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Japanese (ja)
Inventor
Hiroshi Sakurai
弘 桜井
Original Assignee
Otsuka Pharmaceut Co Ltd
Hiroshi Sakurai
大塚製薬株式会社
弘 桜井
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Abstract

PURPOSE:To provide an active oxygen inhibitor having high superoxide dismutase(SOD)-and catalase(CAT)-like activities and useful for prevention and therapy of various kinds of disorders or diseases caused by active oxygen. CONSTITUTION:This active oxygen inhibitor is characterized by its active component composed of manganese(III)-2,6-pyridinecarboxylate complex.

Description

【発明の詳細な説明】 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【0001】 [0001]

【産業上の利用分野】本発明は、活性酸素抑制剤に関する。 The present invention relates to a reactive oxygen inhibitor.

【0002】 [0002]

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】白血球中の好中球は、生体内に侵入した外敵に対して遊走反応、貧食作用、活性酸素O 2 -の産生、リソゾーム酵素の放出によって殺菌作用を示すところから、生体防御で重要な役割を担っていると考えられる。 BACKGROUND OF THE INVENTION AND SUMMARY OF THE INVENTION neutrophils in leukocytes, migration response to enemy penetrated into the body, phagocytosis, active oxygen O 2 - production, by the release of lysosomal enzymes from that exhibit bactericidal action, it is considered to play an important role in biological defense. 一方、かかる生体防御反応と共に、各組織の虚血およびそれに続く血液の再潅流時あるいは急性期の炎症時において好中球あるいはその他の組織が放出する活性酸素が細胞を破壊し、 On the other hand, according with biological defense reaction, active oxygen each tissue ischemia and subsequent blood re-perfusion or during acute inflammation at neutrophils or to other tissues in the releases will disrupt cell,
組織機能に障害を与えることが報告されている〔BRL It has been reported that damage the tissue function [BRL
ucchesi, アニュアル・レビュー・オブ・ファマコロジー・アンド・トキシコロジー(Ann. Rev. Pharmacol. To ucchesi, Annual Review of Famakoroji And Toxicology (Ann. Rev. Pharmacol. To
xicol.), 26, 201 (1986); BA Freeman et al.,ラボラトリー・インベスティゲーション (Laboratory Inves xicol), 26, 201 (1986 );.. BA Freeman et al, Laboratory Investigations Institut ligation (Laboratory Inves
tigation), 47, 419 (1982); E. Braunwald., RA Kl tigation), 47, 419 (1982 );. E. Braunwald, RA Kl
oner, ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション (J. Clin. Invest.), 76, 1713 (1985); J. oner, Journal of Clinical Investigations Institute interrogation, 76, 1713 (1985) ( J. Clin Invest..); J.
L. Romson et al., サーキュレーション(Circulatio L. Romson et al., Circulation (Circulatio
n), 67, 1016 (1983) 。 n), 67, 1016 (1983 ).

【0003】このような過剰の活性酸素から生体を防御するために、生体内にはスーパーオキシドジスムターゼ(以下、SODという)やカタラーゼ(以下、CATという)などの酵素が存在し、過剰の活性酸素を消去して疾病とならないようにしている。 [0003] In order to protect the living from such an excess of active oxygen, superoxide dismutase is within the living body (hereinafter, SOD called) and catalase (hereinafter referred to as CAT) there is an enzyme, such as an excess of active oxygen so that not a disease to erase. ところが、このような防御作用が充分に機能しなかったり、あるいは活性酸素が多量に発生した場合には、このような防御作用だけでは充分に生体を防御できない。 However, if or not such protective effect is sufficiently function, or active oxygen in large amounts generated, can not protect against such protective effect alone is sufficiently bio. このような場合としては、例えば過度のストレス、アルコール、過酸化物その他の薬剤の多量摂取、過度の運動などがあった場合である。 As such a case, for example, excessive stress, alcohol, peroxides high intakes of other agents, a case where there is such excessive exercise.

【0004】そのため、上記のようなSODやCATなどの酵素に類似した活性を有する薬剤の提供が求められていた。 [0004] Therefore, the provision of agents with enzyme similar activity, such as SOD and CAT as described above has been demanded. 本発明の目的は、上述の技術的課題を解決し、 An object of the present invention is to solve the technical problems described above,
SOD様活性またはCAT様活性を有する活性酸素抑制剤を提供することである。 It is to provide an active oxygen inhibitor having a SOD-like activity or CAT-like activity.

【0005】 [0005]

【課題を解決するための手段および作用】本発明者は、 Means for Solving the Problems and effects of the present invention have,
上記の細胞障害、とくに心臓、脳、腎臓、肺、消化器系における虚血再潅流後の障害の原因の主たるものが好中球から放出される活性酸素であるという観点に立って、 Additional cytotoxicity, standing especially the heart, brain, kidney, lungs, the viewpoint of the principal ones of the causes of damage after ischemia-reperfusion in the digestive system is active oxygen released from neutrophils,
活性酸素種の放出を抑制するか、あるいは活性酸素種を除去する活性を有する新しい薬剤を提供すべく鋭意研究を重ねた結果、マンガン(III) −2,6−ピリジンジカルボキシレート錯体が非常に強力なSOD様活性およびCAT様活性を有するという事実を見出し、本発明を完成するに至った。 Or inhibiting the active oxygen species of release, or reactive oxygen species result of intensive study to provide a new agent with activity in clearing, manganese (III)-2,6-pyridinedicarboxylate complex is very heading the fact that it has a strong SOD-like activity and CAT-like activity, which resulted in the completion of the present invention.

【0006】すなわち、本発明の活性酸素抑制剤は、マンガン(III) −2,6−ピリジンジカルボキシレート錯体を有効成分として含有することを特徴とする。 Namely, active oxygen inhibitor of the present invention is characterized by containing manganese (III)-2,6-pyridinedicarboxylate complex as an active ingredient. この錯体は、式: This complex has the formula:

【0007】 [0007]

【化1】 [Formula 1]

【0008】で表される化合物であって、例えば酢酸マンガン(III) に2,6−ピリジンジカルボン酸を反応させて得られる。 [0008] A compound represented by, for example obtained manganese acetate (III) with 2,6-pyridinedicarboxylic acid is reacted. この化合物は、好中球からの活性酸素の放出を抑制するか、あるいは放出された活性酸素種を除去する活性を有する。 This compound has an activity to remove inhibit the release of reactive oxygen or, alternatively released active oxygen species from neutrophils. 従って、生体内での過酸化脂質の生成を防止する作用ないしは過酸化脂質を低下させる作用を発揮する。 Therefore, it exerts the effect of lowering the activity or lipid peroxide prevents the formation of lipid peroxides in vivo. これによって、上記活性酸素種の過剰発生、過酸化脂質の生体内蓄積あるいはこれらに対する防御機構の欠損に起因する各種障害ないし疾患の予防および治療剤として有用である。 Thus, the active oxygen species excesses, is useful as a preventive and therapeutic agent for various disorders or diseases due to deficiency of defense mechanisms of lipid peroxide to these accumulation or organism. より具体的には、本発明の活性酸素抑制剤は、虚血および血液再開通に伴う障害から各種組織細胞を保護するような薬剤、例えば心筋梗塞や不整脈などの心臓虚血疾患に対する治療剤;移植・微少循環不全などによる障害に対する肝および腎機能改善剤;胃潰瘍などの消化器性潰瘍に対する治療剤;脳出血、脳梗塞、一過性脳虚血疾患に対する治療剤;または虚血以外の原因で異常に発生した活性酸素によると考えられる各種細胞障害を抑制するような薬剤、例えば皮膚脈管炎、乾癬、多形性紅疹、ベーチェット病、水痘性皮膚炎、セメント皮膚炎などの皮膚疾患;動脈硬化;糖尿病;未熟児網膜症、眼球鉄症、網膜炎、色素沈着症などの眼疾患;肺気腫;成人呼吸窮迫症候群;関節炎;悪性リウマチ;潰瘍性大腸炎;クローン氏病;レイノ More specifically, active oxygen inhibitor of the present invention, therapeutic agents for cardiac ischemic disease agents, such as myocardial infarction and arrhythmia as protecting various tissue cells from disturbances associated with ischemia and blood recanalization; liver and kidney function improving agents for disorders due to transplantation, microcirculation failure; therapeutic agent for digestive ulcer such as gastric ulcer; hemorrhage, cerebral infarction, therapeutic agent for transient cerebral ischemic disease; or for reasons other than ischemia such agents that inhibit various cytotoxic thought to be due to abnormally generated active oxygen, such as skin vasculitis, psoriasis, polymorphic erythema, Behcet's disease, varicella dermatitis, skin diseases such as cement dermatitis; arteriosclerosis; diabetes; retinopathy of prematurity, ocular iron disease, retinitis, an eye disease such as pigmentation diseases; emphysema; adult respiratory distress syndrome; arthritis; malignant arthritis, ulcerative colitis, Crohn's disease; Reino 氏病などのほか、しみ、そばかすや色素沈着防止、火傷、外傷、疲労などの治療薬として有用である。 In addition, such as Mr. disease, age spots, freckles and pigmentation prevention, burns, trauma, they are useful as therapeutic agents, such as fatigue.

【0009】また、本発明における前記錯体は、SOD [0009] The complexes of the present invention, SOD
によっては消去できない活性酸素、すなわちH 22を消去するCAT様活性を示すため、さらに効果が大きいという利点がある。 Active oxygen which can not be erased by, i.e. to indicate the CAT-like activity to erase the H 2 O 2, there is an advantage that further large effects. 本発明の活性酸素抑制剤は、通常、 Active oxygen inhibitor of the present invention, usually,
一般的な医薬製剤の形態で用いられる。 Used in the form of ordinary pharmaceutical preparation. 製剤は通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤などの稀釈剤あるいは賦形剤を用いて調製される。 Fillers formulations normally used, bulking agents, binder, humectant, disintegrator, surfactant, are prepared using diluents or excipients such as lubricants. この医薬製剤としては各種の形態が治療目的に応じて選択でき、その代表的なものとして錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、 As the pharmaceutical preparations can be selected according to various forms of therapeutic purposes, the tablets as a typical, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, capsules,
坐剤、注射剤(液剤、懸濁剤等)等のほか、ローション、クリーム、軟膏などの外用剤等でも使用可能である。 Suppositories, injections (solutions, suspensions, etc.) In addition to such, lotions, creams, may also be used in external preparations such as such as ointments. 錠剤の形態に成形するに際しては、担体として、この分野で従来より広く使用されているものがいずれも使用可能であり、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、 When forming into the form of tablets, as a carrier, which is widely used conventionally in this field may be used either, for example lactose, saccharose, sodium chloride, glucose, urea, starch, calcium carbonate, kaolin,
結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤、水、エタノール、 Crystalline cellulose, or silicic acid, water, ethanol,
プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、 Propanol, simple syrup, glucose solution, starch solution,
ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドンなどの結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン未、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖などの崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤、第四級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促進剤、グリセリン、デンプンなどの保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸などの吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコールなどの滑沢剤などが例示できる。 Gelatin solution, carboxymethylcellulose, shellac, methylcellulose, potassium phosphate, binders such as polyvinylpyrrolidone, dry starch, sodium alginate, agar Not, laminaran powder, sodium hydrogen carbonate, calcium carbonate, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, lauryl sulfate sodium, stearic acid monoglyceride, starch, disintegrating agents such as lactose, white sugar, stearin, cacao butter, disintegrating inhibitors such as hydrogenated oils, quaternary ammonium bases, absorption accelerators such as sodium lauryl sulfate, glycerin, such as starch humectants, starch, lactose, kaolin, bentonite, adsorbents such as colloidal silicic acid, purified talc, stearates, boric acid powder, such as lubricants such as polyethylene glycol can be exemplified. さらに錠剤は必要に応じて通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣剤、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フイルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。 Furthermore tablets may be optionally coated tablet ordinary capsule shell, for example dragees, gelatin-coated tablets, enteric coated tablets, film coated tablets, or double tablets and multilayer tablets.

【0010】丸剤の形態に成形するに際しては、担体として、この分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤、アラビアゴム末、 [0010] When forming into the form of pills, as the carrier, can be used widely known in the art, for example, glucose, lactose, starch, cacao butter, hardened vegetable oils, kaolin, excipients such as talc , gum arabic powder,
トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤、ラミナラン、カンテンなどの崩壊剤などが例示できる。 Tragacanth powder, gelatin, binding agents such as ethanol, laminaran, etc. disintegrators such as agar can be exemplified. また、坐剤の形態に成形するに際しては、担体として、従来公知のものを広く使用でき、例えば、ポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライドなどを挙げることができる。 Further, When forming into the form of suppositories, as the carrier, prior use widely known ones, for example, polyethylene glycol, cacao butter, higher alcohols, higher alcohol esters, gelatin, and the like semisynthetic glyceride can. さらに、注射剤として調製される場合には、液剤、乳剤および懸濁剤は殺菌され、かつ血液と等張であるのが好ましく、これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に成形するのに際しては、希釈剤としてこの分野において慣用されているものをすべて使用でき、例えば水、エチルアルコール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類などを挙げることができる。 Further, when it is prepared as injections, solutions, emulsions and suspensions are sterilized and are preferably isotonic with the blood, when for shaping into the form of these solutions, emulsions and suspensions , you can use all those conventionally used in this field as diluents, for example water, ethyl alcohol, propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxy isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters and the like it can. なお、この場合等張性の溶液を調製するに充分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを医薬製剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤などを、更に必要に応じて着色材、保存剤、香料、風味剤、 Incidentally, a sufficient amount of sodium chloride to prepare the case isotonic solution may be contained glucose or glycerin in the pharmaceutical formulation, and usually the solubilizer, buffer, soothing agent and the like, further colorant, if necessary, preservatives, perfumes, flavoring agents,
甘味剤などや他の医薬品を該治療剤に含有せしめてもよい。 Other medicines and the like sweetening agents may be contained in the therapeutic agent. ペースト、クリームおよびゲルの形態に成形するに際しては、希釈剤として例えば、白色ワセリン、パラフィン、グリセリン、セルロ−ス誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト等を使用できる。 Pastes, When forming into the form of creams and gels, for example, as a diluent, white vaseline, paraffin, glycerin, cellulose - scan derivatives, polyethylene glycol, silicon, bentonite and the like can be used.

【0011】本発明の活性酸素抑制剤に含有される前記錯体の量は、特に限定されず広範囲に選択されるが、通常全組成物中1〜70重量%とするのがよい。 [0011] The amount of the complex contained in the active oxygen inhibitor of the present invention is selected in a wide range is not restricted, and usually preferably set to 1 to 70 wt% in the total composition. 本発明の活性酸素抑制剤の投与方法は特に制限はなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度などに応じた方法で投与される。 Method of administering the active oxygen inhibitor of the present invention is not particularly limited, various preparation forms, patient age, sex and other conditions, are administered in a manner depending on, for example, the extent of the disease. 例えば錠剤、丸剤、液剤、 For example, tablets, pills, liquids,
懸濁剤、乳剤、顆粒剤およびカプセル剤の場合には経口投与される。 Suspensions, emulsions, granules and capsules are administered orally.

【0012】また注射剤の場合には単独であるいはブドウ糖、アミノ酸などの通常の補液と混合して静脈内投与され、さらには必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内投与される。 [0012] alone or glucose in the case of injections, mixed with conventional replacement fluid such as amino acids are administered intravenously, further alone intramuscularly as needed, intradermally, are administered subcutaneously or intraperitoneally that. 坐剤の場合には直腸内投与される。 Suppositories are administered intrarectally. さらに、ローション、クリーム、軟膏等の外用剤の場合には塗布投与される。 Furthermore, lotions, creams, in the case of external preparations of ointments applied administered. 上記医薬製剤の投与量は用法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度などにより適宜選択されるが、通常本発明化合物の量は一日当り体重1kg当り1〜10mg、好ましくは2〜5mgとするのがよく、1日に1〜2回に分けて投与することができる。 Dosage regimen of the pharmaceutical preparation, the patient's age, sex and other conditions, but is selected appropriately by including the extent of the disease, the amount of the normal present compound per day of body weight 1kg per 1-10 mg, preferably 2~5mg good to a, can be administered in once or twice a day.

【0013】 [0013]

【実施例】以下、参考例および実施例をあげて本発明の活性酸素抑制剤を説明する。 EXAMPLES The following Reference Examples and Examples illustrating the active oxygen inhibitor of the present invention. 参考例 (マンガン(III) −2,6−ピリジンジカルボキシレート錯体の製造)ナス形フラスコに酢酸5mlをとり、水浴中で70℃に加温しながら、酢酸マンガンMn(CH 3 Takes acetate 5ml Reference Example (manganese (III)-2,6-pyridinedicarboxylate prepared complexes) eggplant type flask, while heating at 70 ° C. in a water bath, manganese acetate Mn (CH 3
COO) 3・2H 2 Oの0.180gを加えた。 COO) was added 0.180g of 3 · 2H 2 O. 酢酸マンガンが完全に溶解したところで、2,6−ピリジンジカルボン酸0.200gを徐々に加えた。 When the manganese acetate was completely dissolved, it was slowly added 2,6-pyridinedicarboxylic acid 0.200 g. スターラーで攪拌しながら、引き続き水浴中で70℃で加温した。 While stirring with a stirrer, it was subsequently heated at 70 ° C. in a water bath. 約1時間反応させた後、室温で放置・冷却した。 After about 1 hour of reaction, it was allowed to stand and cool at room temperature. 生成物をろ過し、酢酸で充分に洗浄して目的化合物を得た。 The product was filtered to give the target compound washed well with acetic acid. (1) 電子スピン共鳴 得られた生成物の水溶液を、77Kで電子スピン共鳴にて測定した。 (1) an aqueous solution of electron spin resonance resulting product was measured by electron spin resonance at 77K. その結果、Mn 2+のシグナルは観測されなかったので、生成物中のマンガンはMn(III)として存在することを確認した。 As a result, since the signal of Mn 2+ was observed, manganese in the product was confirmed to be present as Mn (III). (2) 元素分析 Mn(III) ・〔C 53 N(COOH) 22・CH 3 (2) Elemental Analysis Mn (III) · [C 5 H 3 N (COOH) 2 ] 2 · CH 3
COO -・1/2 H 2 Oとして 計算値( %) C 42.22 H2.66 N6.15 実測値( %) C 42.07 H2.38 N5.85 (3) 赤外吸収スペクトル 錠剤(KBr)法にて赤外吸収スペクトルを測定した。 COO - · at 1/2 H 2 O Calculated (%) C 42.22 H2.66 N6.15 Found (%) C 42.07 H2.38 N5.85 ( 3) Infrared absorption spectrum tablets (KBr) Method It was measuring the infrared absorption spectrum.
その結果、3級アミン(−N=)およびカルボン酸(− As a result, tertiary amine (-N =) and carboxylic acid (-
CH 2 COOH)に起因するピークが1313cm -1および1690cm -1にそれぞれ現れた。 Peak due to CH 2 COOH) appeared respectively 1313Cm -1 and 1690 cm -1. (4) 質量分析(fast-atom-bombardment-mass spectrome (4) Mass spectrometry (fast-atom-bombardment-mass spectrome
try) JEOL JMS-D300 (日本電子株式会社製) 装置:FAB ガン・ハイ・ボルテージ(Gun High Voltage): 6kV フィラメント電流:1.5A エミッション電流:10mA ガス:Xe その結果を図1に示す。 try) JEOL JMS-D300 (manufactured by Nippon Electronics Co., Ltd.) devices: FAB gun High Voltage (Gun High Voltage): 6kV filament current: 1.5A emission current: 10mA gas: Xe and the results are shown in Figure 1. 製剤例1 1錠中に下記の組成を有する錠剤を常法に従って製造した。 Tablets having the following composition was prepared according to a conventional method in Formulation Example 1 one tablet.

【0014】 (成分) (配合量) マンガン(III) −2,6−ピリジン ジカルボキシレート錯体 5mg でんぷん 132mg マグネシウムステアレート 18mg 乳 糖 45mg合 計 200mg 製剤例2 (成分) (配合量) マンガン(III) −2,6−ピリジン ジカルボキシレート錯体 500mg ポリエチレングリコール(分子量4000) 300mg 塩化ナトリウム 900mg ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート 400mg メタ重亜硫酸ナトリウム 100mg メチルパラベン 180mg プロピルパラベン 20mg 注射用蒸留水 100ml上記パラベン類、メタ重亜硫酸ナトリウムおよび塩化ナトリウムを攪拌しながら、80℃で上記注射用蒸留水の一部に溶解させた。 [0014] (Components) (Amount) manganese (III)-2,6-pyridinedicarboxylate complex 5mg starch 132mg Magnesium stearate 18mg Lactose 45mg Total 200mg Formulation Example 2 (Components) (Amount) manganese (III ) -2,6-pyridinedicarboxylate complex 500mg polyethylene glycol (molecular weight 4000) 300 mg sodium chloride 900mg polyoxyethylene sorbitan monooleate 400mg sodium metabisulfite 100mg methylparaben 180mg propylparaben 20mg distilled water for injection 100ml above parabens, Metakasane stirring sodium sulfite and sodium chloride were dissolved in a portion of the water for injection at 80 ° C.. 得られた溶液を40℃まで冷却し、 The resulting solution was cooled to 40 ° C.,
マンガン(III) −2,6−ピリジンジカルボキシレート錯体、ポリエチレングリコールおよびポリオキシエチレンソルビタンモノオレートを順次溶解させた。 Manganese (III)-2,6-pyridinedicarboxylate complex were sequentially dissolved polyethylene glycol and polyoxyethylene sorbitan monooleate. ついで、 Then,
その溶液に残りの注射用蒸留水を加えて最終の容量に調整し、適当なフィルターペーパーを用いて滅菌ろ過して、アンプルに1mlずつ分注し、注射液を調製した。 To the solution was added the remaining distilled water for injection to adjust to the final volume, and sterile filtered using a suitable filter paper, ampoule dispensed at 1ml min, and the injection solution was prepared. 試験例1 (SOD様活性の測定) 1. Test Example 1 (measurement of the SOD-like activity) 1. 試薬の調製 ・溶液A(50mMリン酸緩衝液)NaHPO 4 8.9 Preparation of the reagent-solution A (50 mM phosphate buffer) NaHPO 4 8.9
5gの水溶液500mlに、KH 2 PO 4 0.68gの水溶液100mlを加えて、pHを7.80に調整した。 To 5g of an aqueous solution 500 ml, by adding an aqueous solution 100ml of KH 2 PO 4 0.68g, pH was adjusted to 7.80. ・溶液B(K 3 Fe(CN) 6で酸化した1mMシトクロムC溶液)シトクロムC30.96mgを前記溶液A - solution B (K 3 Fe (CN) 1mM cytochrome C solution was oxidized at 6) the cytochrome C30.96mg solution A
に溶解させて全量を2.5mlにした1mMのシトクロムC溶液に100mMのK 3 Fe(CN) 6水溶液59 Dissolved in with the total amount of 100mM cytochrome C solution of 1mM you 2.5ml K 3 Fe (CN) 6 solution 59
μlを加えて、1時間反応させた後、1日間精製水で透析を行った。 Adding [mu] l, After reacting for 1 hour, and dialyzed in 1 day purified water. ・溶液C(0.5mMキサンチンナトリウム溶液)キサンチンナトリウム1.74mgを溶液Aで全量20ml · Solution C total volume 20ml of (0.5 mM xanthine solution of sodium) xanthine Sodium 1.74mg with solution A
にした。 It was. ・溶液D(キサンチンオキシダーゼ溶液)キサンチンオキシダーゼ(5ユニット、0.3ml、41mg蛋白質/ml、0.42ユニット/mg蛋白質=17.22ユニット/mlまたは5ユニット、0.3ml、38mg · The solution D (xanthine oxidase solution) xanthine oxidase (5 units, 0.3 ml, 41 mg protein /ml,0.42 units / mg protein = 17.22 units / ml or 5 units, 0.3 ml, 38 mg
蛋白質/ml、0.47ユニット/mg蛋白質=17. Protein /ml,0.47 unit / mg protein = 17.
86ユニット/ml)を前記溶液Aで100倍に希釈して用いた。 With 86 units / ml) was diluted 100 times with the solution A. 2. 2. 測定機器 電子スペクトルとして25℃の条件でJASCO U best 50 JASCO U best 50 at 25 ° C. conditions as a measurement equipment Electronic spectrum
(日本分光株式会社製) を用いた。 It was used (JASCO Co., Ltd.). 3. 3. 測定方法 温度をすべて25℃に保って、以下の操作を行った。 Keeping the measuring method temperature in all 25 ° C., the following operation was performed.

【0015】(1) セル中に溶液A3mlおよび溶液B5 [0015] (1) a solution in the cell A3ml and the solution B5
0μlを入れてよく攪拌した。 And stirred well put 0μl. 得られた溶液の550n 550n of the resulting solution
mにおける吸光度A 1を測定した。 Absorbance was measured A 1 in m. この溶液にスパーテル一杯程度のNa 224 (還元剤)を加え、シトクロムCを還元して、溶液の550nmにおける吸光度A The solution fills approximately spatula Na 2 S 2 O 4 (reducing agent) was added, and reduced cytochrome C, the absorbance at 550nm of the solution of A
2を測定した。 2 was measured. 吸光度差ΔA(=A 2 −A 1 )が0.2 Absorbance difference ΔA (= A 2 -A 1) 0.2
1になるように溶液Bの添加量を調節した。 It was adjusted amount of solution B to be 1.

【0016】(2) セルに溶液A2.7ml、前記(1) で求めた量の溶液Bおよび溶液C300μlを入れた。 [0016] (2) a solution to the cell A2.7Ml, was charged with a solution B and solution C300μl amount which has been determined by the (1). これに、溶液Dを加えて反応を開始させ、活性酸素を発生させた。 Thereto, it was added to initiate the reaction solution D, was generated active oxygen. このとき、550nmでの吸光度増加が0.0 In this case, the increase in absorbance at 550 nm 0.0
250absorbance/ 分( ±10%)となるように溶液D 250Absorbance / min solution to a (± 10%) D
の添加量を調節した。 The amount was adjusted additives. (3) 前記(2) と同様に、セルに溶液A2.7ml、前記 (3) the same as (2), the solution in the cell A2.7Ml, wherein
(1) で求めた量の溶液Bおよび溶液C300μlを入れた後、マンガン(III) −2,6−ピリジンジカルボキシレート錯体を加えた。 After placing the amount of solution B and solution C300μl obtained in (1) was added manganese (III)-2,6-pyridinedicarboxylate complex. ついで、これに、前記(2) で求めた量の溶液Dを加えて550nmでの吸光度増加を測定し、活性酸素の発生を50%抑制した量をIC 50として求めた。 Then, this, the (2) was added an amount of solution D obtained by measuring the increase in absorbance at 550 nm, was determined amounts for 50% inhibition of generation of active oxygen as IC 50. 4. 4. 測定結果 前記(1) における溶液Bの添加量を45μlにした。 The amount of solution B in the measurement results of (1) was 45 [mu] l. このとき吸光度A 1 =0.295,A 2 =0.200となり、ΔA=0.200absorbanceであった。 At this time the absorbance A 1 = 0.295, A 2 = 0.200 was achieved, and ΔA = 0.200absorbance.

【0017】また、前記(2) における溶液Dの添加量を42μlにした。 Further, the amount added of a solution D in the (2) in 42 [mu] l. このときの吸光度増加は平均で0.0 Absorbance increase at this time is on average 0.0
2550absorbance/ 分であった。 It was 2550absorbance / min. マンガン(III) − Manganese (III) -
2,6−ピリジンジカルボキシレート錯体の濃度を変えて添加したときの吸光度増加と活性酸素発生抑制率を測定した。 The absorbance increase the active oxygen generator inhibition rate when added with varying concentrations of 2,6-pyridinedicarboxylate complex was measured. その結果を表1に示す。 The results are shown in Table 1.

【0018】 [0018]

【表1】 [Table 1]

【0019】表に示す結果から計算した、マンガン(II [0019] was calculated from the results shown in Table, manganese (II
I) −2,6−ピリジンジカルボキシレート錯体の添加によるIC 50は0.17μMであった。 IC 50 by addition of I)-2,6-pyridinedicarboxylate complex was 0.17MyuM. 同様の操作を全部で6回繰り返し、その平均値と標準偏差を求めた。 Repeated a total of 6 times the same operation, the average value was calculated and the standard deviation. その結果IC 50 (μM)は、0.16±0.067であった。 Consequently IC 50 (μM) was 0.16 ± 0.067. 試験例2 (CAT様活性の測定) 1. Test Example 2 (Measurement of CAT-like activity) 1. 測定原理 CATは臨床化学分析において重要なメタノールの酸化反応を触媒することが知られている。 Measurement principle CAT is known to catalyze the oxidation reaction of important methanol in clinical chemical analysis. その反応式を下記に示す。 Shows the reaction formula is shown below.

【0020】 [0020]

【化2】 ## STR2 ##

【0021】この反応で生成したホルムアルデヒドを定量することによって、錯体のCAT様活性を測定した。 [0021] By quantifying the formaldehyde produced in this reaction was measured CAT-like activity of the complex.
ホルムアルデヒドの定量は、ホルムアルデヒド・テスト試薬(和光純薬(株)製)を用いて行った。 Determination of formaldehyde, was carried out using formaldehyde test reagent (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). この方法は、テスト試薬である4−アミノ−3−ヒドラジノ−5 This method is a test reagent 4-amino-3-hydrazino -5
−メルカプト−1,2,4−トリアゾールがアルカリ性でホルムアルデヒドと結合し、さらに酸化を受けて、5 - mercapto-1,2,4-triazole is combined with formaldehyde in an alkaline, receiving further oxidized, 5
50nmに極大吸収をもつ赤紫色の6−メルカプト−S 50nm to purple-red with a maximum absorption 6-mercapto -S
−トリアゾロ〔4,3−b〕−S−テトラジンを生成することを利用したものであって、反応液の吸光度を55 - A utilizes the generating a triazolo [4,3-b] -S- tetrazine, the absorbance of the reaction solution 55
0nmで測定することによってホルムアルデヒドの量を測定することができる。 It can measure the amount of formaldehyde by measuring at 0 nm. 2. 2. 測定方法および測定結果 マンガン(III) −2,6−ピリジンジカルボキシレート錯体を蒸留水またはリン酸緩衝液(pH7.00)に溶解して、0.005Mの溶液を調製した。 Measurement methods and measurement results were dissolved manganese (III)-2,6-pyridinedicarboxylate complex of distilled water or phosphate buffer (pH 7.00), to prepare a solution of 0.005 M.

【0022】この溶液4mlを、メターノル2mlおよび過酸化水素(150μg/ml)0.5mlの混合溶液に加え、充分に振り混ぜた後、10分間放置した。 [0022] This solution 4 ml, was added to a mixed solution of Metanoru 2ml and hydrogen peroxide (150μg / ml) 0.5ml, After shaking sufficiently and allowed to stand for 10 minutes. 得られた反応液2mlにアルカリとして水酸化ナトリウム水溶液2ml、テスト試薬として4−アミノ−3ヒドラジノ−5−メルカプト−1,2,4−トリアゾールの水溶液2mlを加え、発泡が終了するまで振り混ぜた。 The resulting reaction solution 2ml aqueous solution of sodium hydroxide as an alkaline 2ml, an aqueous solution 2ml of 4-amino-3-hydrazino-5-mercapto-1,2,4-triazole as a test reagent was added, shaken until effervescence ends . ついで、550nmでの吸光度を測定した。 Then, the absorbance was measured at 550nm. 測定した吸光度は、あらかじめ求めておいたホルムアルデヒドの検量線(ホルムアルデヒドの濃度(ppm)と吸光度との関係を示すグラフ)によって、pH3.5のとき、マンガン錯体1mM当たりの生成ホルムアルデヒド量は0.0 Measured absorbance by the calibration curve of formaldehyde which had been obtained in advance (graph showing the relationship between the absorbance concentration of formaldehyde (ppm)), when the pH 3.5, generation amount of formaldehyde per manganese complexes 1mM 0.0
69μMであることが判明した。 It was found to be 69μM.

【0023】 [0023]

【発明の効果】以上のように本発明の活性酸素抑制剤は、高いSOD様活性およびCAT様活性を有するので、活性酸素に起因する各種障害ないし疾患の予防および治療薬として有用であるという効果がある。 Active oxygen inhibitor of the present invention as described above, according to the present invention is higher because it has a SOD-like activity and CAT-like activity, prevention of various disorders or diseases caused by active oxygen and the effect of being useful as therapeutic agents there is.

【図面の簡単な説明】 BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

【図1】図1は実施例で得たマンガン(III) −2,6− FIG. 1 is obtained in Example manganese (III)-2,6-
ピリジンジカルボキシレート錯体の質量分析結果を示すグラフである It is a graph showing the results of mass spectrometry of pyridine dicarboxylate complexes

Claims (1)

    【特許請求の範囲】 [The claims]
  1. 【請求項1】マンガン(III) −2,6−ピリジンジカルボキシレート錯体を有効成分として含有することを特徴とする活性酸素抑制剤。 1. A active oxygen suppressing agent characterized by containing manganese (III)-2,6-pyridinedicarboxylate complex as an active ingredient.
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6103906A (en) * 1997-03-12 2000-08-15 Lonza, Ltd. Process for the preparation of 2,6-pyridinedicarboxylic acid esters
WO2000029036A3 (en) * 1998-11-17 2000-11-16 Helmut Blum Colorants with transition metal complexes
JP2006520752A (en) * 2003-02-28 2006-09-14 メデシス・ファルマ・ソシエテ・アノニムMedesis Pharma S.A. Manganese-based organometallic complexes, pharmaceutical compositions and food products

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