JPH07110877B2 - Ｈｉｖ逆転写酵素に対する細胞毒性ｔ細胞免疫を刺激するペプチド - Google Patents

Ｈｉｖ逆転写酵素に対する細胞毒性ｔ細胞免疫を刺激するペプチド

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JPH07110877B2
JPH07110877B2 JP3506562A JP50656291A JPH07110877B2 JP H07110877 B2 JPH07110877 B2 JP H07110877B2 JP 3506562 A JP3506562 A JP 3506562A JP 50656291 A JP50656291 A JP 50656291A JP H07110877 B2 JPH07110877 B2 JP H07110877B2
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Description

【発明の詳細な説明】 Ｔ細胞媒介細胞毒性はヒト免疫不全ウイルス（HIV）に
よる感染のコントロールで重要な役割を果たす。ネズミ
及びヒト双方の細胞毒性Ｔ細胞により認識されるHIV−
１逆転写酵素（RT）の比較的保存されたエピトープが同
定及び特徴付けされた。本発明のペプチドは、HIVの逆
転写酵素を産生する細胞を殺す細胞毒性Ｔ細胞を誘導す
る。HIVの逆転写酵素は多くの他のHIVタンパク質よりも
なかりの程度保存されているため、このアプローチはHI
Vウイルスの変異にさほど影響されないワクチン成分を
提供する。すなわち、本発明のペプチドは広範囲のHIV
ウイルス株に対して免疫応答を生じる手段を提供する。
略号： ADCC,抗体依存性細胞毒性;CTL,細胞毒性Ｔリンパ球;EB
V,エプスタインーバールウイルス;HIV,ヒト免疫不全ウ
イルス;L−pol,HIV−1 RT遺伝子でトランスフェクトさ
れたDAP3繊維芽細胞クローン;MHC,主要組織適合複合体;
NK,ナチュラルキラー細胞,PBMC,末梢血単核細胞;RT,逆
転写酵素;v−pol,HIV−1 RT遺伝子含有組換えワクシニ
アウイルス;v−ctrl,陰性コントロール組換えワクシニ
アウイルス 発明の背景 細胞毒性Ｔリンパ球（CTL）は、レトロウイルスに起因
するものを含めた、あるウイルス性疾患に対する保護を
インビボで媒介することが見出されている（１−３）。
この防御メカニズムは、細胞−細胞接触で広がるため、
抗体中和をうけにくいHIVに対して特に有用である。実
際に、CD8＋細胞は感染患者又はサルの細胞においてHIV
又はSIVの増殖を阻害することが示されている（４、
５）。このため、努力はHIVの異なるタンパク質に対す
るCTL応答を研究することに向けられた。エンベロープ
糖タンパク質gp160に特異的なヒトCD3＋８＋CTLが確認
され（６−12）、免疫優性CTLエピトープがＨ−2dマウ
スにおいてエンベロープの高度可変領域、残基315−329
に位置決めされた（13）。しかしながら、全エンベロー
プタンパク質による免疫化はいくつかの理由から理想的
なアプローチではない。第一に、HIV血清陽性個体の新
鮮PBMCでインビトロ試験された細胞毒性応答の大部分
は、非MHC制限メカニズム（ADCC又はNK）で媒介される
らしい（14）。第二に、エンベロープは配列上高度に可
変性であり、CTLクローンはHIVの異なる単離物を識別で
きる（15、16）。第三に、HIV−１感染の抗体依存性増
強に関して抗エンベロープ抗体で媒介されるらしい証拠
が存在する（17、18）。第四に、HIVエンベロープに対
する免疫応答は免疫不全に関与することが示唆された:g
p120と結合する未感染CD4＋Ｔ細胞は抗エンベロープ抗
体（19）又はgp120に特異的なCD4＋CTL（20）により誘
発されるADCCで殺される。抗gp120抗体はCD4と結合する
gp120との結合で抗CD4抗体のようにCD4＋Ｔ細胞機能も
阻害できる（21）。しかもgp160はヒトクラス11MHC分子
と交差反応する自己抗体を誘導して、Ｔ細胞機能を阻害
できる（22）。最後に、gp120自体はＴ細胞機能を直接
阻害する（19）。
エンベロープ糖タンパク質とは逆に、HIVの内部タンパ
ク質は多く保存され、これらの有害な効果にさほど関与
しないらしい。更に、他のウイルスモデルにおいて、内
部タンパク質はCTL応答の主要なターゲットである（23
−28）。応答はHIV患者においてgag、pol、nef及びvif
遺伝子の産物に対してみられた（７、９、12、29、3
0）。その保存性及びウイルス機能に対する重要性のた
めに、逆転写酵素（RT）はこの点に関して特に興味深
い。我々はRTにおいて進化的に保存されたCTL決定基を
確認するためネズミモデルを用いる我々のアプローチ、
及び、この同定とヒト抗HIV細胞毒性応答との関連性に
ついてここに記載する。
図面の説明 図1.HIV−１逆転写酵素のＮ末端に関するCTL系Polａ特
異性。（Ａ）組換えワクシニアウイルスｖ−pol中に挿
入されかつ繊維芽細胞クローンＬ−pol中にトランスフ
ェクトされたpol遺伝子及びその断片。そのアミノ酸配
列はヌクレオチド配列から導かれる（32）。組換えウイ
ルスｖ−pol−100〜27は方法及び参考文献で記載された
ように３′−端部切形遺伝子断片を含んでいた（33）。
（Ｂ）ｖ−pol又は端部切形pol遺伝子組換えワクシニア
ウイルスで感染されたＬ−細胞、Ｌ−polにおけるpolａ
系特異的細胞毒性。○,L細胞；●,L細胞＋ｖ−pol;□,L
細胞＋ｖ−pol−100;■,L細胞＋ｖ−pol−80;◇,L細胞
＋ｖ−pol−67;◆,L細胞＋ｖ−pol−58;＋,L細胞＋ｖ−
pol−27;△,L細胞＋ｖ−ctrl;▲,L−pol 図2.ペプチドHP138に関するCTL系polａ特異性。Ｌ−細
胞は後記する方法で記載されたように濃度20μＭのペプ
チド及び51Crと共に一夜インキュベートし、しかる後異
なる数のpolａエフェクター細胞と共にターゲットとし
て用いた。ペプチドの配列は以下である:HP134:（175−
189）,HP135:（185−199）,HP136:（193−207）,HP137:
（199−213）,HP138:（205−219）,HP139:（215−22
9）,HP140:（299−244）,HP141:（238−252）,HP142:
（243−257）,HP144:（265−279）,HP145:（275−28
9）,HP146:（283−297）,HP147:（288−302）,HP148:
（300−314）,HP149:（311−325）,HP150:（315−32
9）,HP151:（324−339）,HP152:（329−343）,HP154:
（355−369）,HP143:（255−269）及びHP153:（344−35
9）はそれらが不溶性であるため試験できなかった。＋,
L−pol;○,L細胞；●,L細胞＋HP134＋HP146;□,L細胞＋
HP135＋HP147;■,L細胞＋HP137;△,L細胞＋HP137＋HP14
8;×,L細胞＋HP138;▲,L細胞＋HP139＋HP149;□,L細胞
＋HP140＋HP150;■,L細胞＋HP141＋HP151;△,L細胞＋HP
142＋HP152;▲,L細胞＋HP144＋HP154;◆,L細胞＋HP145
＋HP155 図3.pol199−223領域におけるCTLエピトープの位置決
定。○,205−−219;●,203−219;□,207−223,■,205−
223;△,199−223;▲,203−218。HP138の配列である205
−219はそのアナログと一緒に再合成された。
図4.HIV感染患者２例及び血清陰性コントロール２例か
らの末梢血細胞によるHIV−1 RTの免疫優性ネズミエピ
トープの認識。HIV感染ドナー又はHIVコントロールに由
来するEBV形質転換Ｂ細胞が後記する方法で記載された
ようにターゲットとして用いられた。各個体ターゲット
細胞の一部は濃度10μＭのペプチド203−219（□）、20
5−219（○）又は255−269（△）（図２で示されるよう
にネズミ試験でいかなる活性も有さずかつAMPHIアルゴ
リズムによりＴ細胞エピトープでないと予想されるコン
トロールペプチドHP145（43））と共に一夜インキュベ
ートされた。ターゲット細胞の他の一部はｖ−pol
（●）又はｖ−ctrl（■）で感染された。次いでターゲ
ットが６時間51Cr放出アッセイでエフェクターとして自
己PBMCと共に調べられた。誤差棒は３回の平均の標準誤
差（SEM）について示す。上部パネル，ペプチドと共に
プレインキュベートされたターゲット。下部パネル，ウ
イルスで感染されたターゲット。▲，培地中のみでプレ
インキュベートされたターゲット。
図5.自己PBMCによる205−219と共にインキュベートされ
たターゲット細胞の溶解。すべての血清陽性患者（HI
V+）及び血清陰性コントロール（HIV-）の比較。各点は
試験された最大E:T比（80又は40:1）において自己PBMC
の存在下で６時間アッセイ後におけるペプチド−インキ
ュベートされたターゲットの比51Cr放出率％を表す。各
HIV+ドナーの場合、コントロールターゲット細胞はペプ
チドなしのとき又はコントロールワクシニアウイルスと
一緒のときに溶解しなかった。11及び12％の比放出率％
を有する２例の患者は適した陰性コントロールが利用で
きなかったためこの図に含まれなかった。
発明の要旨 Ｔ細胞媒介細胞毒性はヒト免疫不全ウイルス（HIV）に
よる感染のコントロールで重要な役割を果たす。ネズミ
及びヒト双方の細胞毒性Ｔ細胞により認識されるHIV−
１逆転写酵素において比較的保存されたエピトープが発
見された。このエピトープはネズミ抗原特異性CD8＋ク
ラスI MHC分子制限細胞毒性Ｔ細胞（DTL）系、HIV−1 p
ol遺伝子を発現するトランスフェクトされた繊維芽細胞
系、pol遺伝子の異なる端部切形体を含む切換えワクシ
ニアウイルス及び重複合成ペプチドを用いて確認した。
最適の抗原部位は抗原断片の伸長又は端部切形ペプチド
アナログを合成することにより残基203−219として確認
された。次いで最適のペプチドは新鮮ヒト末梢血単核細
胞による殺傷に関する自己EBV形質転換Ｂ細胞ターゲッ
トの感作について試験された。そのペプチドは、血清陰
性ドナーではなく、数例のHIV血清陽性患者からのCTLに
より認識された。このため、このペプチドはエイズワク
チン含有用の良好な免疫原である。このデータは同様の
CTLエピトープがCD4＋ヘルパーＴ細胞で認識されるエピ
トープに関して既に証明されたようにネズミ及びヒトCD
8＋CTLでもみられることを明らかにし、ヒトで研究を行
う前にマウスで免疫優性CTLエピトープに関してスクリ
ーニングできるという有用性も示している。
両親媒体310ヘリックスと一致するが、これらのペプチ
ドはいずれの既知予想方法によっても強く予想されな
い。このため、そのペプチドは有望は候補Ｔ細胞エピト
ープペプチドとして当業者により選択されなかった。
物質及び方法 マウス.C3H/HeJ（Ｈ−2k）マウスをジャクソン・ラボラ
トリーズ（Jackson Laboratories）〔バーハーバー（Ba
r Harbor）,ME,USA〕から得た。
組換えワクシニアウイルス ｖ−pol（vCF−21、図１）（31）及びｖ−pol−100は最
後の22残基を除いてHTLVIIIサブクローンHXB.2のRT遺伝
子を含む組換えワクシニアウイルスである（インサート
に関するpol遺伝子誘導アミノ酸配列168−706、RTに関
する168−728）。端部切形pol遺伝子組換えワクシニア
ウイルス（vCF32、33、34、35及び37）（33）はｖ−pol
−100インサート鎖長の％としてそれらインサートの相
対的鎖長を示すため、この出願においてｖ−pol−100、
−80、−67、−58及び−27と改名されている（図１）。
これらのインサートはすべて原インサートの５′末端で
始まるが、これはアミノ酸配列の残基168及びプロセッ
シングされるタンパク質のＮ末端に相当する。ｖ−ctrl
（vSC−８）（34）はコントロールとして大腸菌lac−Ｚ
遺伝子を含む。
トランスフェクタント トランスフェクタントＬ−polはｖ−polと同様のRTコー
ドインサートを含むpcEXV−３ベクターを用いて得た。p
cEXV−３−polはCaPO4法（35）を用いてpSV2neoによりD
AP−3 L細胞中に同時トランスフェクトされ、クローン
はG418で選択後に単離された。RNAドット−ブロット分
析で高レベルのpol転写体を有する単一のクローン（RGT
1.10.7）が、これらの実験で使用のため選択された。コ
ントロールＬ細胞（L28）はpSV2neo単独で得た。
ネズミCTL系の産生 系Pol aは、（13）の場合のように（５×106脾臓細胞、
24ウェルプレートで５×105Ｌ−pol細胞／ウェル）、但
し補充培地、即ち10％コンカナバリンＡ刺激ラット脾臓
細胞培地含有の完全Ｔ細胞培地〔Ｔ細胞モノクローン，
コラボレーティブ・リサーチ社（Collaborative Resear
ch Inc.），ベッドフォード,MA〕の存在下でインビトロ
においてマイトマイシンＣ処理Ｌ−polトランスフェク
タントで再刺激されたｖ−pol免疫化（107PFU IV）C3H/
HeJ雌性マウス脾臓細胞から得た。その系は毎週の再刺
激（0.3×106系細胞、106Ｌ−pol細胞）と、補充培地で
隔週の栄養補給により現在１年以上維持されている。そ
れはＴ細胞モノクローン添加の３日目以後アッセイに用
いた。
CTLアッセイ ネズミCTLアッセイは下記の変更を加えて、参考文献（1
3）の場合と同様に行った：106Ｌ細胞が１時間にわたり
50の感染多重度で組換えワクシニアウイルスにより感染
され、その後洗浄され、51Crと共に一夜インキュベート
された；他の実験において、Ｌ細胞はペプチド及び51Cr
と共に一夜インキュベートされた（0.3×106細胞、24ウ
ェルプレートで0.05mCi（1.85MBQ）／ウェル）。次いで
ターゲット細胞は６時間アッセイで使用前に４回洗浄さ
れた（96丸底ウェルプレートで5000ターゲット細胞／ウ
ェル）。ヒットアッセイにおいて、エプスタインバール
ウイルス（EBV）形質転換によりドナーの末梢血単核細
胞（PBMC）から誘導された系は10 1.で一夜パルス化さ
れるか、又は、１時間にわたり（感染多重度＝100で）
組換えワクシニアウイルスで感染され、その後洗浄され
た。双方のケースにおいて、それらは0.3mCi（11.1MB
Q）で一夜かけて標識され、エフェクターと同様のドナ
ーからの末刺激低温保存PBMCと共に６時間51Cr放出アッ
セイにおいて翌日ターゲット（5000/ウェル）として用
いられた。比放出率は100×（実験51Cr放出−自発的放
出）／（最大放出−自発的放出）として計算した。
ペプチド合成 ウイルスｖ−pol−27で発現されるRT配列（HTLVIII/Bの
HXB.2サブクローン）（32）の分画をカバーする一連の1
5残基ペプチドが前記のように合成及び精製された（1
3、36）。それらのモル濃度はHPLC又は分光スペクトル
測定により調べた。ペプチドHP138の一連のアナログがA
BI自動シンセサイザーで合成され、低HF操作で開裂さ
れ、P4−バイオゲル又は逆相〔C18セプ−パック（C18 S
ep−Pak），ウォーターズ（Waters）〕クロマトグラフ
ィーのいずれかで脱塩され、必要時に単一HPLCピークま
で精製された（C18カラム，ウォーターズ）。アミノ酸
分析（アービン，カリフォルニア大学の0.Bates及びcol
l.により実施）により予想された配列を確認した。
患者源及び臨床評価 HIV+患者はTX,ラックランド空軍基地のウィルフォード
・ホール米空軍医療センター（Wilford Hall United St
ates Air Force Medical Center）から得た。個体は抗H
IV抗体がHIV酵素免疫アッセイ〔アボット・ラボラトリ
ーズ（Abbott Laboratories），アービング,TX〕で試験
された標本２列において証明されかつウェスタンブロッ
ト分析〔ロシュ・バイオメディカル・ラボラトリーズ
（Roche Biomedical Laboratories），バーリントン,N
C〕で確認された場合にHIV感染していると診断された。
患者はウォルター・リード・ステージング・システム
（Walter Reed Staging System）に従い分類した（3
7）。リンパ球数及びＴ細胞サブセットはレーザーベー
スフローサイトメトリー（laser−based flow cytometr
y）〔コールター。エピクス・プロフィール（Coulter E
pics Profile），コールター・エレクトロニクス社（Co
ulter Electronics,Inc.），ハイアレア,FL〕とOKT4A
（抗CD4）及びOKT8（抗CD8）モノクローナル抗体〔オル
トジアグノスティクス・システムズ（Orthodiagnostics
Systems），ラリタン,NJ〕を用いて調べた。
例１ HIV−１逆転写酵素のＮ末端に特異的なネズミCTL系（Po
l a）の産生:CTL系Pol ａは組換えワクシニアウイルス
ｖ−polで免疫されかつ同じHIV−1 pol遺伝子インサー
トでトランスフェクトされたＨ−2k繊維芽細胞系（Ｌ−
pol）でインビトロにおいて再刺激されたC3H/HeJマウス
の脾臓細胞から誘導した。このCTL系（図１）はＬ−pol
とｖ−polで感染された未トランスフェクトされたＨ−2
k繊維芽細胞系（Ｌ細胞）を特異的に溶解したが、但し
コントロールワクシニアウイルスｖ−ctrlで感染された
Ｌ細胞を溶解しなかった。したがって、HIV−1 pol遺伝
子断片はＨ−2k繊維芽細胞で認識される少なくとも１つ
のCTLエピトープを発現した。
エピトープを位置決めするため、Ｌ細胞を最初にpol遺
伝子の端部切形体（図１）を発現する組換えワクシニア
ウイルスで感染させ、これらの細胞をPol a CTL系と共
に細胞毒性アッセイでターゲットとして用いた。原イン
サートのＮ末端部分の100％〜わずか27％を含むウイル
スで感染されたターゲットはすべて比較しうる程度まで
溶解した（図１）。この実験では免疫優性エピトープが
最短polインサート（原インサートの27％、即ち残基168
−316）でコードされたタンパク質の一部に存在するこ
とが示された。この領域はRTのＮ末端に相当する。他の
エピトープもその配列の残部に存在していたかもしれな
いが、但しこの部分は単独で最大溶解を誘導することが
できた。
例２ 系pol ａで認識される免疫優性エピトープの確認：この
領域に含まれるエピトープを確認するため、我々は残基
168−316をカバーするHP134〜HP154で表示される21重複
15アミノ酸ペプチドを用いた。Ｌ細胞をペプチド20μＭ
と一緒に51Crと共に一夜インキュベートし、Pol aによ
る溶解に関して試験した。試験される異なるターゲット
の数を減らすため、我々は２ペプチドの混合物を同時に
分析したが、但し同じMHC結合部位を共有することで互
いに阻害しあう高リスクを有するかもしれない重複ペプ
チドの混合を避けた。予備実験はペプチドHP138が細胞
毒性活性のターゲット化に関与しうることを示唆したた
め、HP138を個別的に試験したところ、これはターゲッ
トを感作することがわかった（図２）。HP137及び139
（各々９及び５残基でHP138と重複する）を含めた他の
ペプチドは個別的に試験された場合（データ示さず）で
あってもいずれもターゲットを感作できなかった（図
２）。HP138（CTEMEKEGKISKIGP）はHTLV/IIIB株配列の
残基205−219に相当する（32）。そのペプチドはペプチ
ド単独の存在下における自発的溶解及び細胞回収率から
調べたところそれ自体無毒性である（データ示さず）。
系Pol ａは、それがHP138パルス化されたクラスIIMHC分
子陰性Ｈ−2kＬ細胞繊維芽細胞を殺したが、但し3T3繊
維芽細胞（Ｈ−2d）又はEL4胸腺腫細胞（Ｈ−2b）を殺
さなかったことからクラスIMHC制限された。それは抗CD
8又は抗CD4モノクローナル抗体及び補体との処理でCD4
−CD8＋であることが証明された（データ示さず）。
最適エピトープの限定化 HP138が高濃度（20μＭ）でターゲットを最も感作した
ため、一連のペプチドアナログをHP138の領域で合成及
び精製して、活性がいくつかの残基でペプチドを伸長又
は短縮することにより改善されるか否かについて調べ
た。その配列のＮ末端側における２アミノ酸の付加（ペ
プチド203−219）（図３）はより高い最大比放出（60％
以上vs40％）及び半最大活性を得るため300倍低い濃度
（約0.3μMvs10μＭ）の双方を誘導した。逆に、Ｎ末端
における残基205及び206の除去はすべての活性を消失さ
せた（ペプチド207−223を205−223と比較する）。この
結果は重要な決定基がHP138のＮ末端にあることを示唆
している。205−219のＣ末端におけるアミノ酸の付加
（ペプチド205−223）も活性を高めたが（60％で平坦
化、約１μＭで半最大溶解）、但し残基205及び206がペ
プチド207−223で欠失している場合に活性の喪失を回復
できなかった。ペプチド199−223は２つの残基203及び2
04と205−223において活性を高めたＣ末端の伸長を双方
とも含んでいたが、但し意外にもその活性は205−223の
場合より良くなく（同じ最大活性、約２μＭで半最大溶
解）、まるで配列199−202が認識を一部阻害しているよ
うであった。最後に、プロリン残基219の除去はペプチ
ド203−219の最大活性を変更しなかったが、但し半最大
溶解に必要な濃度をわずかに増加させた（20μM.ペプチ
ド203−218）。
ヒト細胞毒性細胞によるエピトープの認識 マウスモデルで確認されたCD8＋クラスI MHC制限CTLに
関するエピトープがHIV感染ヒトからの細胞で認識され
るか否かを調べるため、２例のHIV血清陽性及び２例のH
IV血清陰性個体からのPBMCをペプチド205−219と共に一
夜インキュベートされた自己EBV形質転換細胞の溶解に
関してインビトロで再刺激なしに試験した（図４、上部
パネル）。双方の患者からのPBMCは２種のペプチドと共
にプレインキュベートされたターゲットを特異的に殺す
ことができたが、但しコントロールペプチド又は培地の
みと共にプレインキュベートされたターゲットを殺せな
かった。逆に、双方の血清陰性ドナーからのPBMCはいず
れかのペプチドと共にインキュベートされたターゲット
を殺せなかったが、但しコントロールワクシニアウイル
スで感染された自己ターゲット細胞において一部殺傷を
示した（図４、下部パネル）。後者の細胞溶解活性はお
そらく以前の天然痘予防接種に起因する記憶応答であろ
う。健常コントロールではない２列の患者もpol−組換
えワクシニアウイルスで感染されたターゲットに対して
高い細胞毒性活性を示した（図４、下部パネル）。これ
らドナー２列のうち一方（患者２）において、エフェク
ター細胞の表現型を試験した。活性は抗CD4モノクロー
ナル抗体及び補体ではなく抗CD3及び抗CD8により阻止さ
れ、遺伝的に制限された（データ示さず）。このため、
これらの慣用的な抗原特異性MHCはCD8＋CTLを制限し
た。HIV血清陽性患者12例及びコントロール５例からの
細胞も試験した（図５）。HP138、ペプチド203−219又
は205−219と共にターゲット細胞のインキュベート後に
おける殺傷レベルは患者12例中５例で10％以上であった
が、一方それは血清陰性ドナーにおいて＜０〜3.2％の
範囲であった。
エピトープ203−219は他のウイルスの逆転写酵素遺伝子
において進化上高度に保存された領域中に存在する。こ
の理由から、それはRT活性にとり必須であるらしく、し
たがって免疫系からの回避に必要な置換を許容しないで
あろう。残基203−219及び205−219を比較した場合、２
残基（203及び204）は原ペプチドの活性を劇的に高めた
が、一方残基205及び206を欠くアナログは活性を全く有
しないことが示された。このため、配列203−206はその
ペプチドの至適活性にとり必須と思われる。Ｃ末端側に
おける原ペプチドの伸長により活性を高めることも可能
である。面白いことに、Ｎ及びＣ末端双方を伸長させた
更に長いアナログは最適エピトープ203−219と同様の活
性レベルに達しなかった。Ｎ末端側に含まれる追加残基
はクラスII制限エピトープでみられる場合と類似した障
害構造を有しているのかもしれない。
本発明のペプチドは少なくとも15のアミノ酸を含むこと
が好ましいが、但しそれは40のアミノ酸を含んでもよ
い。しかしながら、少なくとも12のアミノ酸は最も好ま
しい17のアミノ酸配列と相同性を示すべきである。いず
れのケースでも、Cys−Thrペプチドは保存されているべ
きである。好ましいペプチド Glu−Ile−Cys−Thr−Glu−Met−Glu−Lys−Glu−Gly−
Lys−Ile−Ser−Lys−Ile−Gly−Proのシステインアミ
ドが特に好ましい。
本発明のペプチドはミョウバン及びフロイントアジュバ
ントのようなアジュバントを含有した有用なキャリア中
にいれてもよい。好ましい組成物はペプチドを保護して
遅い放出デリバリーを示すエマルジョン中にペプチドを
含有している。
本発明の製剤は非経口投与できる。好ましい投与手段は
皮下、筋肉内又は静脈内経路である。好ましい投与方法
は静脈内経路による。インターロイキン２又は他の応答
増強剤もペプチド含有組成物の成分として又は別の注射
剤としていずれかにより同時投与してよい。このような
増強剤としては格別限定されず、インターロイキン４、
ムラミル−ジペプチド、ミョウバンもしくはフロイント
アジュバントのようなアジュバント又はミコバクテリウ
ムもしくはBCGのようなミコバクテリア産物がある。免
疫療法として用いられるペプチドは最初１〜３日間隔
で、その後Ｔ細胞活性の望ましいレベルが示されるまで
反復注射により静脈内投与される。次いで医者はキラー
Ｔ細胞活性をモニターし、キラーＴ細胞活性の減少が観
察されるときにそのプロトコールを繰返す。
本発明のペプチドはHIVウイルスに対する抗体を高めて
も又は高めなくてもよい。キラーＴ細胞は体内のいかな
る細胞中に存在するHIVウイルスの感染力にも影響を与
えることから、抗体を高めるためウイルスタンパク質と
の十分な接触前にHIVウイルスと接触した個体を治療す
ることが可能である。このため、その治療はこのような
個体が血清陽性になることを防止する。
抗体が測定しうる量で血中にみられる前にＴ細胞応答は
普通高まるため、本発明のペプチドはドナー細胞をペプ
チドと接触させてＴ細胞応答に関し試験することで潜伏
感染について試験するために使用できる。このため、そ
のペプチドは血清陰性血液ドナー又は他の個体をスクリ
ーニングするため診断キットの一部として有用である。
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───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 39/00 Ｇ Ｈ 39/21 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 33/569 Ｈ // Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 9282−4Ｂ Ｃ１２Ｑ 1/70 9453−4Ｂ 9281−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (72)発明者 ペンドルトン，チャールズ ディー. アメリカ合衆国メリーランド州、ベセス ダ、ナンバー、410、バッテリー、レーン、 4857 (72)発明者 モス，バーナード アメリカ合衆国メリーランド州、ベセス ダ、ディケンズ、アベニュ、10301 (72)発明者 シャーラー，ジーン マーティン アメリカ合衆国メリーランド州、ベセス ダ、グレンウッド、ロード、5512 (72)発明者 オスマラン，アン フランス国クルムラン―ビセトル、リュ、 ジャン、モネ、６ (72)発明者 クレリチ，マリオ アメリカ合衆国メリーランド州、ロックビ ル、グロスブナー、プレイス、10201、ア パートメント、108 (56)参考文献 特表 昭63−503513（ＪＰ，Ａ) 欧州特許出願公開293184（ＥＰ，Ａ２) 欧州特許出願公開185444（ＥＰ，Ａ２) 「ＡＩＤ ＲＥＳ ＨＵＭ ＲＥＴ」Ｖ ｏｌ．５，Ｎｏ．１，1989，Ｐ．61〜71

Claims (11)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】下記のアミノ酸配列： Cys-Thr-Glu-Met-Glu-Lys-Glu-Gly-Lys-Ile-Ser-Lys-Il
    e-Gly-Pro から本質的になる、ペプチド。
  2. 【請求項２】プチドが下記のアミノ酸配列： Glu-Ile-Cys-Thr-Glu-Met-Glu-Lys-Glu-Gly-Lys-Ile-Se
    r-Lys-Ile-Gly-Pro から本質的になる、請求項１に記載のペプチド。
  3. 【請求項３】請求項２に記載されたペプチドのシステイ
    ンアミド。
  4. 【請求項４】HIVに感染した末梢血単核細胞の同定法で
    あって、 （１）自己ターゲット細胞を、請求項１〜３いずれか一
    項記載のペプチド及びマーカーと共にインキュベートす
    る； （２）試験される末梢血単核細胞を、工程（１）からの
    インキュベートされた物質に加え、インキュベートす
    る；及び （３）Ｔ細胞応答を調べるため放出されたマーカーの量
    を測定する； 工程からなる方法。
  5. 【請求項５】マーカーが51Crである、請求項４に記載の
    方法。
  6. 【請求項６】自己ターゲット細胞がEBV形質転換された
    Ｂリンパ芽球様細胞である、請求項４に記載の方法。
  7. 【請求項７】請求項２に記載されたペプチド及び薬学上
    許容されるキャリアを含んでなる、ヒト免疫不全ウイル
    スに起因する感染の予防又は治療用医薬組成物。
  8. 【請求項８】キャリアがアジュバントを含む、請求項７
    に記載の組成物。
  9. 【請求項９】アジュバントがミョウバン又はフロイント
    アジュバントである、請求項８に記載の組成物。
  10. 【請求項１０】組成物が増強剤を更に含んでなる、請求
    項７に記載の組成物。
  11. 【請求項１１】増強剤がインターロイキン２、インター
    ロイキン４、ムラミル‐ジペプチド、ミョウバン、フロ
    イントアジュバント、ミコバクテリウム及びミコバクテ
    リア産物からなる群より選択される、請求項10に記載の
    組成物。
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