JPH0676B2 - Production method of steroids - Google Patents
Production method of steroidsInfo
- Publication number
- JPH0676B2 JPH0676B2 JP24767785A JP24767785A JPH0676B2 JP H0676 B2 JPH0676 B2 JP H0676B2 JP 24767785 A JP24767785 A JP 24767785A JP 24767785 A JP24767785 A JP 24767785A JP H0676 B2 JPH0676 B2 JP H0676B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- medium
- present
- general formula
- steroids
- acyl group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 (産業上の利用分野) 本発明は、ステロイド類の製造法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for producing steroids.
(従来の技術) 従来、11β、17α、21−トリヒドロキシステロイ
ド類を得る方法としては、11位に水素原子を2個有す
るステロイド類を酸化する方法が種々検討されている。(Prior Art) Conventionally, as a method for obtaining 11β, 17α, 21-trihydroxysteroids, various methods of oxidizing a steroid having two hydrogen atoms at the 11-position have been studied.
たとえば、ハイドロコーチゾン製造の改良された方法と
して、17α、21−ジヒドロキシプレグン−4−エン
−3,20−ジオン(以下、「CS」という)の17α
−アセテートを用いることにより、14α−ヒドロキシ
化を抑制でき、収率の大幅な向上が達成されることが知
られている(特公昭47−13112号公報参照) (発明の解決しようとする問題点) しかしながら、この方法では基質濃度が低い(上記公報
では0.05%)という難点を有する。また、21−ア
セテート化物を原料とした場合には、反応速度だけが低
下し副生物の減少は起らないことが知られている(上記
公報参照)。For example, 17α of 21α, 21-dihydroxypregn-4-ene-3,20-dione (hereinafter referred to as “CS”) is an improved method for producing hydrocortisone.
-By using acetate, it is known that 14α-hydroxylation can be suppressed and a large improvement in yield can be achieved (see Japanese Patent Publication No. 47-13112). (Problems to be solved by the invention However, this method has a drawback that the substrate concentration is low (0.05% in the above publication). It is also known that when a 21-acetate is used as a raw material, only the reaction rate is reduced and by-products are not reduced (see the above publication).
さらに、ストレプトマイセス属に属する微生物を用いた
16α−ヒドロキシ化においては、CS誘導体に比べて
△′・CS誘導体は反応しにくく収率も低い(J.A.C.
S.,Vol79,4818,1957参照)。Furthermore, in 16α-hydroxylation using a microorganism belonging to the genus Streptomyces, the Δ ′ · CS derivative is less reactive and the yield is lower than that of the CS derivative (JAC
S., Vol 79, 4818, 1957).
そして、本発明者らの検討によれば、同様に、11β−
ヒドロキシ化において、CSよりも△′・CSの方が反
応速度が小さくなり、収率も低下することが確認されて
いる。Then, according to the study by the present inventors, similarly, 11β-
In the hydroxylation, it has been confirmed that Δ ′ · CS has a lower reaction rate and lower yield than CS.
(問題点を解決するための手段) 本発明者らは、プレドニソロン及びその誘導体の原料と
して有用な△′・CSを用い、その11β−ヒドロキシ
化について種々検討を行ない、反応速度を大きくし生産
性を向上させるステロイド類の製造法を見出し、本発明
に到達した。(Means for Solving Problems) The present inventors conducted various studies on its 11β-hydroxylation using Δ ′ · CS, which is useful as a raw material for prednisolone and its derivatives, and increased the reaction rate to improve productivity. The present invention has been accomplished by finding a method for producing steroids that improves
すなわち、本発明の要旨は、 下記一般式(I) (上記式中で、XおよびYは水素原子又はアシル基を示
し、XおよびYの少なくとも一方がアシル基である。)
で表わされるアシルオキシステロイド類を含む培地中
で、クルブラリア属に属し、11β位の水素原子をヒド
ロキシ化する能力を有する微生物を培養せしめるか、あ
るいは上記化合物(I)に上記微生物の生産する酸化酵
素を好気的に作用させることにより下記一般式(II) (上記式中で、XおよびYは上記一般式(I)における
と同義である。)で表わされる11β−ヒドロキシステ
ロイド類を得ることを特徴とするステロイド類の製造法
に存する。That is, the gist of the present invention is the following general formula (I) (In the above formula, X and Y represent a hydrogen atom or an acyl group, and at least one of X and Y is an acyl group.)
A microorganism belonging to the genus Curvularia and having the ability to hydroxylate the hydrogen atom at the 11β position can be cultured in a medium containing an acyloxysteroid represented by: By aerobically acting, the following general formula (II) (In the above formula, X and Y have the same meanings as in the above general formula (I).) The method for producing steroids is characterized by obtaining 11β-hydroxysteroids.
以下、本発明を詳細に説明する。Hereinafter, the present invention will be described in detail.
まず、本発明において用いられる原料ステロイド類とし
ては、下記一般式(I) で示されるアシルオキシステロイド類が挙げられる。First, the raw material steroids used in the present invention include the following general formula (I) The acyloxy steroids represented by
式中、XおよびYは水素原子又はアシル基を示し、Xお
よびYの少なくとも一方がアシル基であるが、Xおよび
Yがともにアシル基である場合が最適である。In the formula, X and Y each represent a hydrogen atom or an acyl group, and at least one of X and Y is an acyl group, but it is optimal that both X and Y are an acyl group.
アシル基としては、アセチル基、プロピオニル基、ブチ
リル基等の脂肪族基が一般的である。As the acyl group, an aliphatic group such as an acetyl group, a propionyl group, a butyryl group is generally used.
本発明方法においては、上記アシルオキシステロイド類
を含む培地中で、クルブラリア属に属し、11β位の水
素原子をヒドロキシ化する能力を有する微生物を培養す
る。このような微生物としては、クルブラリア・ルナー
タ(Curyularia lunate)ATCC 12017(=IFO6299)、13432、1
3633、14595及びクルブラリア・ブラキスポラ(C. brach
yspora)ATCC 12330、16643及びクルブラリア・パレセン
ス(C. pallescens)ATCC 12018等が挙げられる。In the method of the present invention, a microorganism belonging to the genus Curvularia and capable of hydroxylating the hydrogen atom at the 11β position is cultured in a medium containing the above-mentioned acyloxysteroids. Examples of such microorganisms include Curryularia lunate ATCC 12017 (= IFO6299), 13432, 1
3633, 14595 and C. brachspora (C. brach
yspora) ATCC 12330, 16643 and C. pallescens ATCC 12018.
また、本発明方法においては、増殖菌体、休止菌体、固
定化菌体又は菌体処理等物、上記微生物の生産する酸化
酵素を好気的に作用させることによつても、目的とする
ステロイド類を得ることができる。Further, in the method of the present invention, the objective is also to aerobically act on oxidative enzymes produced by the above-mentioned microorganisms, such as proliferating cells, resting cells, immobilized cells or cell-treated products. Steroids can be obtained.
上記培養は、通常20〜37℃程度、好ましくは24〜
30℃程度、pHは3〜8から選ばれ、培養時間は通常2
4時間〜14日間程度から選ばれる。The above-mentioned culture is usually about 20 to 37 ° C, preferably 24 to 37 ° C.
The pH is selected from 3 to 8 at about 30 ° C, and the culture time is usually 2
It is selected from about 4 hours to 14 days.
培地の組成は特に制限されない。すなわち、原料アシル
オキシステロイド類以外に、炭素源として種々の炭水化
物、有機酸等をさらに添加してもよく、窒素源として、
有機アンモニウム塩、無機アンモニウム塩、尿素等を用
いることができる。The composition of the medium is not particularly limited. That is, in addition to the raw material acyloxysteroids, various carbohydrates as a carbon source, organic acids, etc. may be further added, and as a nitrogen source,
Organic ammonium salts, inorganic ammonium salts, urea and the like can be used.
また、必要に応じ、無機物として各種リン酸塩、硫酸塩
等を使用することができ、必要に応じ各種有機栄養物を
添加することもできる。In addition, if necessary, various phosphates, sulfates and the like can be used as inorganic substances, and various organic nutrients can be added as necessary.
原料ステロイド類の濃度は、通常0.5〜10wt%程
度から選ばれる。The concentration of the raw material steroid is usually selected from about 0.5 to 10 wt%.
本発明方法においては、培地中にメタノールを存在させ
ることによりさらに良好な結果を得ることができる。In the method of the present invention, better results can be obtained by allowing the presence of methanol in the medium.
すなわち、メタノールを0.5〜10vol%程度、好ま
しくは3〜8vol%程度、培地中に存在させることによ
り収率を一層向上させうる。That is, the yield can be further improved by allowing methanol to exist in the medium in an amount of about 0.5 to 10 vol%, preferably about 3 to 8 vol%.
また、培地中に、非イオン活性剤、たとえばポリオキシ
エチレンソルビタン脂肪酸エステルを1〜10wt%存
在させることにより、収率を向上させることもできる。The yield can also be improved by allowing a nonionic activator such as polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester to be present in the medium in an amount of 1 to 10 wt%.
上記脂肪酸としては、ラウリン酸、パルミチン酸、ステ
アリン酸、オレイン酸等が挙げられる。Examples of the fatty acid include lauric acid, palmitic acid, stearic acid, oleic acid and the like.
培養により、上記一般式(II)で示される11β−ヒド
ロキシステロイド類が得られる。By culturing, the 11β-hydroxysteroids represented by the above general formula (II) can be obtained.
本発明においては、この11β−ヒドロキシステロイド
類を、アルカリ、たとえば炭酸カリウム等の弱アルカリ
を0.1〜5wt%程度添加し加水分解を行なうことに
より、プレドニソロンに誘導することができる。In the present invention, the 11β-hydroxysteroids can be induced into prednisolone by adding 0.1 to 5 wt% of an alkali, for example, a weak alkali such as potassium carbonate, and performing hydrolysis.
培養物からのステロイド類の抽出は、常法によることが
できる。Extraction of steroids from the culture can be performed by a conventional method.
たとえば、好適には、メタノールを添加し、除菌して濃
縮した後分離する方法、又はクロロホルム、酢酸エチル
等の有機溶媒で抽出する方法等が採用される。For example, preferably, a method of adding methanol, sterilizing and concentrating and then separating, or a method of extracting with an organic solvent such as chloroform or ethyl acetate is adopted.
(実施例) 以下、実施例によりさらに詳細に本発明を説明する。(Examples) Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples.
実施例1 クルブラリア・ルナタ(Curvlaria lunata)ATCC 12017
を下記組成の培地100mlの入つた500mlヘソ付き三
角フラスコを用いて27℃で24時間ロータリーシエー
カーにより種培養を行つた。Example 1 Curvlaria lunata ATCC 12017
Seed culture was carried out by a rotary shaker at 27 ° C. for 24 hours using a 500 ml Erlenmeyer flask equipped with a bellows containing 100 ml of a medium having the following composition.
培地 ブドウ糖 10g/100ml ペプトン 2 コーンステイープリカー 0.5 “ツイン80”(花王アトラス社製、 0.5 同社登録商標) (PH5.0)(ポリオキシエチレン ソルビタンモノオレート) 次にこの培養液2mlを種培養と同じ組成100mlに入つ
た500mlヘソ付き三角フラスコに添加し、27℃で同
様に培養した。Medium Glucose 10 g / 100 ml Peptone 2 Corn stay liquor 0.5 "Twin 80" (Kao Atlas Co., Ltd., 0.5 registered trademark) (PH5.0) (polyoxyethylene sorbitan monooleate) Next, 2 ml of this culture solution Was added to a 500 ml Erlenmeyer flask equipped with a belly in 100 ml of the same composition as the seed culture, and the same culture was carried out at 27 ° C.
培養1日後微粉未状の△1・CS−21アセテートを
0.58ミリモル加え、培養を続け反応させた。After 1 day of culture, 0.58 mmol of fine powdery Δ 1 .CS-21 acetate was added, and the culture was continued to react.
反応後メチルアルコールを400ml加え遠心分離により
菌を除いた。次に5%炭酸カリウムを30ml加え、残つ
ているエステルを加水分解してプレドニソロンを生成さ
せた。結果を表1に示す。After the reaction, 400 ml of methyl alcohol was added and the bacteria were removed by centrifugation. Then, 30 ml of 5% potassium carbonate was added, and the remaining ester was hydrolyzed to produce prednisolone. The results are shown in Table 1.
分析は高速液体クロマトグラフイーを用いて行つた。The analysis was performed using high performance liquid chromatography.
分析条件 カラム:“ウオタ-ズラジアルバツクG8” (ウオターズ社製、同社登録商
標) 溶出液:水/メチルアルコール=4/6 流 速:1ml/mm 検 出:UV 254nm 実施例2 反応基質を△1・CS−17αアセテートに変える以外
は実施例1と同様に培養し、反応させた。結果を表1に
示す。Analytical conditions Column: “Water-Radialback G8” (Waters Co., Ltd. registered trademark) Eluent: Water / methyl alcohol = 4/6 Flow rate: 1 ml / mm Detection: UV 254 nm Example 2 Culture and reaction were carried out in the same manner as in Example 1 except that 1 -CS-17α acetate was used. The results are shown in Table 1.
実施例3 反応基質を△1・CS−17α、21−ジアセテートに
変える以外は実施例1と同様に培養し、反応させた。結
果を表1に示す。Example 3 Incubation and reaction were carried out in the same manner as in Example 1 except that the reaction substrate was changed to Δ 1 · CS-17α, 21-diacetate. The results are shown in Table 1.
実施例4 反応基質△1・CS−21アセテートを添加する時5ml
のメチルアルコールに溶解して添加する以外は実施例1
と同様に培養し、反応させた。結果を表1に示す。5ml When adding Example 4 reaction substrate △ 1 · CS-21-acetate
Example 1 except that it is dissolved in the above methyl alcohol and added.
The cells were cultured and reacted in the same manner as in. The results are shown in Table 1.
実施例5 反応基質を△1・CS−17αアセテートに変える以外
は実施例4と同様に培養し、反応させた。結果を表1に
示す。Except for changing Example 5 reaction substrate △ to 1 · CS-17α-acetate was cultured in the same manner as in Example 4 was reacted. The results are shown in Table 1.
実施例6 反応基質を△1・CS−17α、21−ジアセテートに
変える以外は実施例4と同様に培養し、反応させた。結
果を表1に示す。Example 6 Incubation and reaction were carried out in the same manner as in Example 4 except that the reaction substrate was changed to Δ 1 · CS-17α, 21-diacetate. The results are shown in Table 1.
実施例7 培地より“ツイン80”を除く以外は実施例6と同様に
培養し、反応させた。結果を表1に示す。Example 7 Culture and reaction were performed in the same manner as in Example 6 except that "Twin 80" was removed from the medium. The results are shown in Table 1.
比較例1 反応基質を△1・CSに変える以外は実施例1と同様に
培養し、反応させた。結果を表1に示す。Comparative Example 1 Culture and reaction were carried out in the same manner as in Example 1 except that the reaction substrate was changed to Δ 1 · CS. The results are shown in Table 1.
比較例2 反応基質をそれぞれCS、CS−21−アセテート、C
S−17α−アセテート、CS−17α、21−ジアセ
テートに代える以外は実施例1と同様に培養し、反応さ
せた。それぞれの結果を表1に示す。Comparative Example 2 The reaction substrates were CS, CS-21-acetate, and C, respectively.
The cells were cultured and reacted in the same manner as in Example 1 except that S-17α-acetate and CS-17α, 21-diacetate were used instead. The respective results are shown in Table 1.
(発明の効果) 本発明方法によれば、プレドニソロン及びその誘導体の
原料として有用なステロイド類を収率よく製造すること
ができる。 (Effect of the Invention) According to the method of the present invention, steroids useful as raw materials for prednisolone and its derivatives can be produced in good yield.
Claims (4)
し、XおよびYの少なくとも一方が、アシル基であ
る。)で表わされるアシルオキシステロイド類を含む培
地中で、クルブラリア属に属し11β位の水素原子をヒ
ドロキシ化する能力を有する微生物を培養せしめるか、
あるいは上記化合物(I)に上記微生物の生産する酸化
酵素を好気的に作用させることにより下記一般式(II) (上記式中で、XおよびYは上記一般式(I)における
と同義である。)で表わされる11β−ヒドロキシステ
ロイド類を得ることを特徴とするステロイド類の製造
法。1. The following general formula (I): (In the above formula, X and Y each represent a hydrogen atom or an acyl group, and at least one of X and Y is an acyl group.) In a medium containing an acyloxysteroid represented by the genus Curvularia, the 11β-position Cultivate a microorganism having the ability to hydroxylate the hydrogen atoms of
Alternatively, a compound represented by the following general formula (II) can be prepared by aerobically reacting the compound (I) with an oxidase produced by the microorganism. (In the above formula, X and Y have the same meanings as in the above general formula (I).) A method for producing steroids, which comprises obtaining 11β-hydroxysteroids.
する特許請求の範囲第1項記載の製造法。2. The production method according to claim 1, wherein X and Y are sialic groups.
徴とする特許請求の範囲第1項又は第2項記載の製造
法。3. The method according to claim 1 or 2, characterized in that methanol is present in the medium.
を特徴とする特許請求の範囲第1項〜第3項のいずれか
に記載の製造法。4. The method according to any one of claims 1 to 3, wherein a nonionic activator is present in the medium.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP24767785A JPH0676B2 (en) | 1985-11-05 | 1985-11-05 | Production method of steroids |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP24767785A JPH0676B2 (en) | 1985-11-05 | 1985-11-05 | Production method of steroids |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62107797A JPS62107797A (en) | 1987-05-19 |
JPH0676B2 true JPH0676B2 (en) | 1994-01-05 |
Family
ID=17167005
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP24767785A Expired - Lifetime JPH0676B2 (en) | 1985-11-05 | 1985-11-05 | Production method of steroids |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0676B2 (en) |
-
1985
- 1985-11-05 JP JP24767785A patent/JPH0676B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPS62107797A (en) | 1987-05-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US3759791A (en) | Selective microbiological preparation of androst-4-ene-3,17-dione | |
EP0322081B1 (en) | Microbiological preparation of 9-alpha-hydroxy-17-keto steroids | |
IL27858A (en) | Microbiological process for the preparation of 11beta-hydroxysteroids | |
US4397947A (en) | Microbial process for 9α-hydroxylation of steroids | |
SE452777B (en) | PROCEDURE FOR INTENSIFYING THE MICROBIOLOGICAL CONVERSION OF STEROID SUBSTANCES | |
JPH0676B2 (en) | Production method of steroids | |
US4520102A (en) | Microbial process for producing 12α-hydroxypregna-1,4-dien-3-one-20α-carboxylic acid | |
US3676300A (en) | Method for producing monoacyl derivatives of antibiotic t-2636c | |
US4336332A (en) | Process for the manufacture of hydroxylated steroids | |
US3047470A (en) | Microbiological 11alpha-hydroxylation of 16alpha, 17alpha-epoxy pregnenes | |
US3481974A (en) | 3-alkoxy - 14-oxo-17beta-ol-8,14-secoestra-1,3,5(10),9(11) - tetraenes and ester derivatives | |
US4452897A (en) | Method of preparing optically active β-(S)-aminoglutaric acid monoalkyl esters | |
EP0154407B1 (en) | Methods of preparing 11 beta, 17 alpha, 20, 21-tetra-hydroxy steroids and corresponding 11 beta, 17 alpha, 21-trihydroxy-20-oxo steroids | |
US2950226A (en) | Method of producing 11alpha-hydroxysteroids with the genus fusarium | |
EP0786011B1 (en) | Microbiological process for the preparation of 1-unsaturated 17-beta-carboxysubstituted 3-oxo-4-azaandrostan-3-ones | |
US3801460A (en) | Simultaneous steroid oxygenation and 1-dehydrogenation with bacillus cereus | |
US3329579A (en) | Method of preparing 16-oxygenated derivatives of estr-4-en-3-one | |
US3086919A (en) | Dehydrogenation of steroids by microorganisms of the genus flavobacterium | |
JP3217301B2 (en) | Method for producing optically active glycidic acid ester and optically active glyceric acid ester | |
US2872380A (en) | Process for the production of 17-beta hydroxysteroids by neocosmospora | |
US3226404A (en) | Ester 4-en-3-one and 16-oxygenated derivatives thereof | |
US3631031A (en) | Intermediate useful in the synthesis of aldosterone | |
JPS63501922A (en) | Process for producing 4-androstene-3,17-dione or 1,4-androstadiene-3,17-dione | |
JPH0120878B2 (en) | ||
JPS62118897A (en) | Hydroxylation of 11beta-position of steroid |